[RU]

Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты, и соответствующим клеткам-хозяинам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяины, согласно заявленному изобретению.

(57) Реферат / Формула:

Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты, и соответствующим клеткам-хозяинам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяины, согласно заявленному изобретению.

---

Евразийское (21) 201691011 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.02.28
(22) Дата подачи заявки 2014.11.14
(51) Int. Cl.
C12N 9/36 (2006.01) C12N15/62 (2006.01) A61K38/00 (2006.01)
(54) ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ МОДИФИЦИРОВАННОГО ЭНДОЛИЗИНА EL188
(31) PCT/EP2013/073872
(32) 2013.11.14
(33) EP
(86) PCT/EP2014/074678
(87) WO 2015/071437 2015.05.21
(71) Заявитель: ЛИСАНДО АГ (LI)
(72) Изобретатель: Аносова Ирина (DE)
(74) Представитель:
Гончаров В.В. (BY)
(57) Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан гра-мотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно, заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты и соответствующим клеткам-хозяи-нам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяины, согласно заявленному изобретению.
International Patent Application PC17EP2014/074678 Applicant: Lysando AG
14November2014
Последовательность модифицированного эндолизина EL188
Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно, заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты и соответствующим клеткам-хозяинам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяины, согласно заявленному изобретению.
Огромный литический бактериофаг семейства Myoviridae EL(211215 bp) инфицирует Pseudomonas aeruginosa, важный условно-патогенный нозокомиальный патоген, устойчивый ко многим широко используемым антибиотикам, и, следовательно, являющийся причиной многих проблем внутрибольничной среды. В 2007 г., Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344) секвенировали геном упомянутого бактериофага и идентифицировали эндо лизин EL188, высоко литическую гидролазу пептидогликана. В WO 2010/149792, был предложен слитый белок, содержащий последовательность упомянутого эндолизина в качестве ферментативного элемента для расщепления клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
Помимо общего действия упомянутых эндолизина и слитых белков, оказалось, что по некоторым техническим причинам, эндолизиновый полипептид показывает субоптимальные свойства, в частности, что касается стабильности и процессинга. Таким образом, присутствовала необходимость разработки
дополнительного эндолизинового энзима (фермента) с предпочительным улучшением свойств по данным параметрам. Соответственно, задачей заявленного изобретения является обеспечение наличия такого полипептида, который достигается практическим воплощением сущности изобретения, выраженной в прилагаемой формуле.
Далее следует краткое описание прилагаемых фиг., которые предназначены для более подробного иллюстрирования заявленного изобретения. Тем не менее, данные фиг. не носят ограничительного характера относительно сущности заявленного изобретения.
Фиг.1: представляет: SEQIDNO: 1,
SEQ ID NO: 2 ELI88 эндолизин без N-терминального метионина, SEQ ID NO: 3 ELI88 эндолизин.
Фиг.2: представляет:
SEQ ID NO: 144 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 40), модифицированный ELI88 без N-терминального метионина и с S120G (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 20) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 145 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с А126Е и Т128К (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 21) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 146 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с W134I
(подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 22) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 147 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с без N-терминального метионина и с H138L (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 23) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 148 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с E171G (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 24) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 149 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с Y173T (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 25) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 150 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с А182Т (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 26) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 151 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с N187G (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID
NO: 27) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 152 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с D197S и Q198A (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 28) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 153 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с L204Y (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 29) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 154 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с F230L (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 30) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 155 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с H231Y (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 31) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 156 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный EL188 без N-терминального метионина и с S234A (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 32) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 157 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), модифицированный ELI88 без N-терминального метионина и с C135S (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 33) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID NO: 180 Слитый белок KRKKRKKRK (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:40), немодифицированный EL188 без N-терминального метионина (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 2) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID N0:158 Слитый белок SMAP29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:62), модифицированный EL188 с N-терминальным метионином и с А182Т (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 10) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией е, SEQ ID N0:143).
SEQ ID N0:159 Слитый белок SMAP29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:62), модифицированный EL188 с N-терминальным метионином и с N187G (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 11) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID N0:160 Слитый белок SMAP29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:62), модифицированный EL188 с N-терминальным метионином и с N187G и F230L (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID N0: 18) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143).
SEQ ID N0:161 Слитый белок SMAP29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID N0:62), модифицированный EL188 с
N-терминальным метионином и с А82Т, N187G и F230L (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 19) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией, SEQ ID N0:143). Фиг.З: а) иллюстрирует в белых столбиках муралитическую активность различных полипептидов согласно заявленному изобретению и немутированного контроля (SEQ ID N0: 180) (в дельта-значениях абсорбции при 600 нм в минуту на миллиграмм белка), определенные в тестах на муралитическую активность. В темных столбиках, представлены температуры (в °С) плавления соответствующих полипептидов, определенных при помощи спектроскопии кругового дихроизма, б) таблица с числовыми значениями для а).
В первом аспекте, заявленное изобретение относится к полипептиду, содержащему аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1, в которой SEQ ID NO: 1 характеризуется тем, что
XI может отсутствовать или любая аминокислота, в частности М,
XI20 любая аминокислота, в частности S или G XI26 любая аминокислота, в частности А или Е XI28 любая аминокислота, в частности Т или К XI34 любая аминокислота, в частности W или I XI35 любая аминокислота, предпочтительно S XI38 любая аминокислота, в частности Н или L Х171 любая аминокислота, в частности Е или G XI73 любая аминокислота, в частности Y или Т XI82 любая аминокислота, в частности А или Т XI87 любая аминокислота, в частности N или G XI97 любая аминокислота, в частности D или S XI98 любая аминокислота, в частности Q или А
Х204 любая аминокислота, в частности L или Y Х230 любая аминокислота, в частности F или L Х231 любая аминокислота, в частности Н или Y Х234 любая аминокислота, в частности S или А
и в которой полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 183, и в которой полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1.
Термин "полипептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится, в частности, к полимеру аминокислотных остатков, сшитых пептидными связями в специфичной последовательности. Аминокислотные белковые остатки могут быть модифицированы, например, ковалентными прикреплениями различных групп, как, например, углеводы и фосфаты. Прочие вещества могут быть более свободно ассоциированы с полипептидными цепочками, как, например, гемы или липиды, приводя к образованию конъюгированных полипептидов, которые также обозначают термином "полипептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения. Термин в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, также включает белки. Таким образом, термин "полипептид" также относится к комплексам из двух или более аминокислотных полимерных цепей. Термин "полипептид" не включает воплощения полипептидов с вариативными модификациями, часто встречающимися в технике, как, например, биотинилирование, ацетилирование, пегилирование, химические изменения амино-, SH- или карбоксигрупп (например, защитных групп) и т.д. Как будет представлено в описании далее по тексту, полипептид согласно заявленному изобретению может также представлять собой слитый белок, а именно, слияние как минимум двух последовательностей аминокислот, не встречающееся в такой комбинации в естественном состоянии в природе. Термин "полипептид", согласно данному описанию, не ограничен специфичной длиной аминокислотной полимерной цепи, но обычно имеет длину примерно более 50 аминокислот, примерно более
100 аминокислот или даже примерно более 150 аминокислот. Обычно, но не обязательно, типичный полипептид согласно заявленному изобретению не превышает примерно 750 аминокислот в длину.
В данном описании, термин "% идентичность последовательности", необходимо понимать следующим образом: две сравниваемые последовательности располагают на одной линии для максимальной корреляции между последовательностями. Данное действие может включать вставку "гэпов" в одной или обеих последовательностях, для повышения соосности. Затем можно определить % идентичности по всей длине каждой из сравниваемых последовательностей (т.н. (глобальное) совмещение по всей длине), что в особенности подходит для последовательностей одинаковой или схожей длины, или вдоль более коротких, определенных участков (т.н.. локальное совмещение), что более подходит для последовательностей различной длины. В контексте данного описания, аминокислотная последовательность, демонстрирующая "идентичность последовательности" как минимум, например, 95% в сравнении с запрашиваемой (искомой) аминокислотной последовательностью, означает то, что исследуемая аминокислотная последовательность идентична запрашиваемой последовательности, за исключением того, что исследуемая аминокислотная последовательность может включать до пяти аминокислотных сдвигов на каждые 100 аминокислот запрашиваемой аминокислотной последовательности. Иными словами, для получения аминокислотной последовательности с как минимум 95% идентичностью с запрашиваемой аминокислотной последовательностью, в исследуемой последовательности может возникнуть необходимость инсерции, делеции или замены до 5% (5 из 100) аминокислотных остатков другими аминокислотами. Методы сравнения идентичности и гомологичности двух или более последовательностей хорошо известны специалистам в данной области техники. Процент идентичности двух последовательностей можно, например, определить при помощи математического алгоритма. Предпочтительным, но не ограничивающим, примером используемого математического алгоритма может являться алгоритм Карлина - Karlinet а/. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877. Такой алгоритм
интегрирован в семейство программных продуктов BLAST, например, программа BLAST или NBLAST (см.также Altschul et al, 1990, J. Mol. Biol. 215, 403-410 или Altschul et al. (1 997), Nucleic Acids Res, 25:3389-3402), доступные с сайта NCBI по адресу ncbi.nlm.nih.gov) и FASTA (Pearson (1 990), Methods Enzymol. 83, 63-98; Pearson and Lipman (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 85, 2444-2448.). Последовательности, которые идентичны другим, могут быть до определенной степени идентифицированы данными программами. Помимо этого, доступны программы в Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 9.1 (Devereux et al, 1984, Nucleic Acids Res., 387-395), например, программы BESTFIT и GAP, могут применять для определения % идентичности между двумя полипептидными последовательностями. BESTFIT использует алгоритм "локальной гомологичности" (Smith and Waterman (1981 ), J. Mol. Biol. 147, 195197.) и находит самый точный единственный участок схожести между двумя последовательностями. Если в данном описании есть ссылка на аминокислотную последовательность, демонстрирующую определенную степень идентичности последовательности в сравнении со стандартной (эталонной) последовательностью, то упомянутое различие в последовательности имеет место предпочтительно вследствие консервативных аминокислотных замен. Предпочтительно, такая последовательность сохраняет активность стандартной последовательности, например, хотя, возможно, на более замедленном уровне. Кроме того, если в данном описании присутствует ссылка на последовательность, демонстрирующую, "как минимум", в определенном проценте, идентичность последовательности, то 100%-я идентичность последовательности предпочтительно не охвачена.
"Консервативные аминокислотные замены", как они трактуются в данном описании, могут произойти в пределах группы аминокислот, которые имеют достаточно схожие физико-химические свойства, с тем, чтобы замена между членами группы сохранила биологическую активность молекулы (см., например, Grantham, R. (1974), Science 185, 862-864). В частности, консервативные аминокислотные замены являются предпочтительно заменами, в которых аминокислоты происходят из того же самого класса аминокислот (например,
основные аминокислоты, кислые аминокислоты, полярные аминокислоты, аминокислоты с алифатическими боковыми цепями, аминокислоты с положительно или отрицательно заряженными боковыми цепями, аминокислоты с ароматическими радикалами в боковых цепях, аминокислоты, боковые цепи которых могут вступить в водородные связи, например, боковые цепи, у которых есть гидроксильная функция, и т.д.). Консервативные замены являются в данном случае, например, заменой основного аминокислотного остатка (Lys, Arg, His) другим основным аминокислотным остатком (Lys, Arg, His), заменой алифатического аминокислотного остатка (Gly, Ala, Val, Leu, lie) другим алифатическим аминокислотным остатком, заменой ароматического аминокислотного остатка (Phe, Туг, Тгр) другим ароматическим аминокислотным остатком, заменой треонина серином или лейцина изолейцином. Дополнительные консервативные аминокислотные замены известны специалистам в данной области техники.
Термин "делеция", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, преимущественно относится к отсутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков в производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью, либо интра-секвенциально, либо на N- или С-конце.
Термин "инсерция", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, преимущественно относится к дополнительному интра-секвенционному присутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков в производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью.
Термин "аддиция", в том смысле, в котором он используются в описании заявленного изобретения, преимущественно к дополнительному присутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков на N- и/или С-конце производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью.
Термин "замена", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к присутствию аминокислотного остатка, расположенного в определенной позиции производной последовательности, отличного от аминокислотного остатка, присутствующего или отсутствующего в соответствующей позиции в стартовой последовательности. Как упомянуто выше, данные замены предпочтительно являются консервативными.
Термин "клеточная стенка", используемый в описании заявленного изобретения, относится ко всем компонентам, образующим внешнюю оболочку клетки грамотрицательной бактерии, обеспечивая, таким образом, ее целостность. В частности, термин "клеточная стенка" в том значении, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к пептидогликану, внешней мембране грамотрицательной бактерии с липополисахаридом, клеточной мембране бактерии, а также к дополнительным слоям на пептидогликане, как, например, капсулы, внешние белковые слои или слаймы.
Термин "удлинение аминокислотной последовательности", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к определенному удлинению аминокислотной последовательности в аминокислотной последовательности полипептида согласно заявленному изобретению. Упомянутая последовательность относится к последовательности катионного пептида, поликатионного пептида, амфипатичного пептида, гидрофобного пептида, суши-пептида и/или антимикробного пептида. Термин не включает обычные метки, такие как His-метки, а именно His5-MeTKH, гЛвб-метки, His7-MeTKH, His8-MeTKH, His9-MeTKH, HislO-метки, Hisll-метки, His 12-метки, Hisl6-MeTKH и His20-MeTKH, Strep-метки, Avi-метки, Мус-метки, Gst-метки, JS-метки, цистеин-метки, FLAG-метки и прочие метки, известные в данной области техники, белки, связывающие тиоредоксин или мальтозу (МСБ). Предпочтительно, удлинение аминокислотной последовательности в данном описании имеет длину от примерно 6 до примерно 39 аминокислотных остатков.
В описании заявленного изобретения, термин "катионный пептид" преимущественно относится к пептиду с положительно заряженными аминокислотными остатками. Предпочтительно, катионный пептид имеет значение рКа (отрицательный десятичный логарифм константы диссоциации) равное 9,0 или выше. Как правило, по крайней мере, четыре аминокислотных остатка катионного пептида могут быть положительно заряженными, например, лизин или аргинин. Термин "положительно заряженные" относится к боковым цепочкам аминокислотных остатков, которые имеют чистый положительный заряд при примерно физических условиях. Термин "катионный пептид", используемый в заявленном изобретении, также относится к поликатионным пептидам, а также включает катионные пептиды, которые содержат, например, менее 20%, предпочтительно менее 10% положительно заряженных аминокислотных остатков.
Термин "поликатионный пептид", используемый в описании заявленного изобретения, предпочтительно относится к пептиду, состоящему из преимущественно положительно заряженных аминокислотных остатков, в частности, остатков лизина и/или аргинина. Пептид состоит из преимущественно положительно заряженных аминокислотных остатков, причем как минимум примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или около 100% аминокислотных остатков представляют собой положительно заряженные аминокислотные остатки, в частности остатки лизина и/или аргинина. Те из аминокислотных остатков, которые не являются положительно заряженными, могут представлять собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки и/или отрицательно заряженные аминокислотные остатки и/или гидрофобные аминокислотные остатки. Предпочтительно, те из аминокислотных остатков, которые не являются положительно заряженными, могут представлять собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, в частности серии и/или глицин.
Термин "антимикробные пептиды" (АМП), в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к любому
натуральному пептиду с микробицидной и/или микробиостатической функциями. Так, например, термин "антимикробный пептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится, в частности, к любому пептиду с антимикробной, антигрибковой, антимикотической, антипаразитарной, антипротозойной, антивирусной, антиинфекционной, антиконтагиозной и/или бактерицидной, альгицидной, амебоцидной, микробицидной, бактерицидной, фунгицидной, паразитицидной, протозоицидной функцией. Предпочтительными являются антимикробные пептиды. Антимикробный пептид может быть членом суперсемейства РНК-азы А, дефензином, кателицидином, гранулизином, гистатином, псориазином, дермицидином или гепсидином. Антимикробный пептид может встречаться в естественном виде у насекомых, рыб, растений, паукообразных насекомых, позвоночных животных или млекопитающих. Предпочтительно, антимикробный пептид может встречаться в естественном виде у насекомых, рыб, растений, паукообразных насекомых, позвоночных животных или млекопитающих. Предпочтительно, антимикробный пептид может встречаться в естественном виде в хрене, тутовом шелкопряде, тарантуле (паук-волк), лягушке, предпочтительно в Xenopuslaevis, лягушках Rana, более предпочтительно в Ranacatesbeiana, жабе, предпочтительно азиатской жабе Bufobufogargarizans, у мух, предпочтительно у дрозофилы, более предпочтительно у малой дрозофилы, melanogaster, в Aedesaegypti, у медоносной пчелы, полевого шмеля, предпочтительно в Bombuspascuorum, у мясной мухи, предпочтительно в серой мясной мухе Sarcophaga, у обыкновенного сокола, в скорпионе, мечехвосте, зубатке, предпочтительно в Parasilurusasotus, корове, овцах, свиньях, у жвачных животных, обезьян и человека. Как используется в данном описании, "антимикробный пептид" (АМП) может в частности быть пептидом, который не является катионным пептидом, поликатионным пептидом, амфипатичным пептидом, суши-пептидом, дефензинами и гидрофобным пептидом, но, тем не менее, показывает антимикробную активность.
Термин "суши-пептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к белкам комплементарного контроля (БКК)
с короткими повторениями транскрипции. Суши модуль суши-пептидов функционирует как домен взаимодействия "белок-белок" в различных белках. Доказано, что пептиды, содержащие Sushi домен, показывают антимикробную активность. Предпочтительно, суши-пептиды представляют собой натуральные пептиды.
Термин "амфипатичный пептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к пептидам, имеющим как гидрофильные, так и гидрофобные функциональные группы. Предпочтительно, в контексте описания заявленного изобретения, термин "амфипатичный пептид" относится к пептиду, имеющему определенное расположение гидрофильных и гидрофобных групп, например, амфипатичные пептиды могут являться альфа-спиральными, с превалирующими неполярными боковыми цепями вдоль одной стороны спирали и полярными остатками вдоль остальной части поверхности.
Термин "гидрофобная группа", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к химическим группам, как, например, аминокислотные боковые цепи, которые преимущественно водонерастворимы, но растворимы в масляной фазе, причем растворимость в масляной фазе выше, чем растворимость в воде или водной фазе. В воде, аминокислоты с гидрофобной боковой цепью, взаимодействуют друг с другом для получения неводной среды. Примерами аминокислотных остатков с гидрофобными боковыми цепями являются остатки валина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, цистеина, аланина, тирозина и пролина.
Термин "гидрофобный пептид", в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к гидрофобному пептиду, предпочтительно состоящему из преимущественно аминокислотных остатков с гидрофобными группами. Такой пептид предпочтительно состоит из преимущественно гидрофобных аминокислотных остатков, т.е., как минимум примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или как минимум примерно 100
% аминокислотных остатков, являющихся гидрофобными аминокислотными остатками. Те аминокислотные остатки, которые не являются гидрофобными, -предпочтительно нейтральные и предпочтительно не гидрофильные.
Термин "метка" ("маркер"), в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к аминокислотной последовательности, которая в традиционной области техники слита с или включена в другую аминокислотную последовательность с целью: а) улучшения экспрессии всей аминокислотной последовательности или полипептида, б) содействия очистке всей аминокислотной последовательности или полипептида, в) содействия иммобилизации всей аминокислотной последовательности или полипептида, и/или г) содействия детекции (обнаружения) всей аминокислотной последовательности или полипептида. Примерами меток являются His метки, например, His5-MeTKH, Швб-метки, His7-MeTKH, HisS-метки, His9-MeTKH, HislO-метки, Hisll-метки, His 12-метки, Hisl6-MeTKH и His20- метки, Strep-метки, Avi-метки, Мус-метки, GST-метки, JS-метки, цистеин-метки, FLAG-метки, НА- метки, тиоредоксин- или мальтоза-связывающие белки (МСБ), CAT, GFP, YFP, и т.д. Специалистам в данной области техники известно большое количество меток, приемлемых для различных практических применений. Метка, например, может придавать меченому полипептиду свойство связывания с антителом в различных форматах твердофазного иммуноферментного анализа или прочих промышленных применениях.
Термин "содержащий" ("включающий"), в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, не ограничивается понятием "состоящий из" (т.е. исключающий присутствие прочих дополнительных субстанций). Напротив, термин "содержащий" подразумевает возможное наличие дополнительного вещества. Термин "содержащий" охватывает преимущественно осуществимые варианты практического воплощения в объеме притязаний заявленного изобретения с формулировкой "состоящий из" (т.е. исключающий присутствие прочих дополнительных субстанций) и "содержащий, но не [исключительно] состоящий из" (т.е. требующий
присутствия прочих дополнительных субстанций), с предпочтением первому варианту.
Полипептид согласно заявленному изобретению может демонстрировать в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 как минимум один из следующего перечня: XI20 является G; XI26 является Е; Х128 является К; Х134 является I; Х135 не является С; Х138 является L; Х171 является G; Х173 является Т; Х182 является Т; Х187 является G; Х197 является S; Х198 является А; Х204 является Y; Х230 является L; Х231 является Y; и/или Х234 является А. Следует понимать, что номер, указывающий на позицию соответствующего аминокислотного остатка, представляет относительную позицию в последовательности согласно SEQ ID N0:1, а не всю полную аминокислотную последовательность полипептида согласно заявленному изобретению, которая может быть и более длинной.
Новаторский полипептид демонстрирует, как упомянуто выше, как минимум 90% идентичность последовательности. Такой полипептид может, вследствие этого, иметь более высокий уровень идентичности последовательности, например, может иметь как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 98,75%, как минимум примерно 99% (т.е., отклонение менее, чем на 3 аминокислоты), как минимум примерно 99,5% (т.е., отклонение менее, чем на 2 аминокислоты), или даже 100% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.
Новаторский полипептид, содержащий последовательность, разделяющую заданный уровень идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 (или ее прочие специфические последовательности, см.далее по тексту) может, например, отклоняться от эталонной последовательности при помощи аддиции, замены, вставки (инсерции) или делеции одного или более аминокислотных остатков и всех возможных их комбинаций. Только лишь для
ясности понимания, указано, что данные комбинации относятся к определенным позициям в последовательности. "Деления", сопровождаемая "аддицией", или "аддиция", сопровождаемая "делецией" одной или более аминокислот, в той же самой относительной позиции, не является комбинацией "аддиции" и "делеции" (или наоборот), но попадает в рамки термина "замена". Предпочтительно, отклонения в последовательности от последовательности SEQ ID NO: 1 (или ее прочих специфических последовательностей, см.далее по тексту) являются консервативными, т.е. консервативными заменами. Даже боле предпочтительно, отклонение в последовательности ограничивается теми позициями в SEQ ID NO: 1 (или ее прочих специфических последовательностях, см.далее по тексту), которые были определены как не критичные для ферментной активности, т.е. XI, Х120, Х126, Х128, Х134, Х135, Х138, Х171, Х173, Х182, Х187, Х197, Х198, Х204, Х230, Х231 и/или Х234.
Полипептид согласно заявленному изобретению не демонстрирует в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 остаток аналанина в позиции 155. Как показано в публикации Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344), мутация E155A привела к потере активности. Таким образом, несомненно предпочтительно, чтобы данная мутация отсутствовала в новаторском полипептиде. Прочие мутации Е155 могут допускаться, но, предпочтительно, упомянутый остаток является немутированным, т.е. Ев новаторском полипептиде.
В особенно предпочтительном варианте практического воплощения заявленного изобретения, полипептид согласно заявленному изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 1.
Авторы заявленного изобретения обнаружили, что остаток цистеина в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3(EL 188 последовательность эндолизина) не играют существенной роли в ферментной активности. Так, в последовательности согласно SEQ ID NO: 1 (консенсусная последовательность
согласно заявленному изобретению) новаторского полипептида (или как минимум 90% идентичности последовательности с ней), в некоторых воплощениях XI35 не является С. В принципе, данный аминокислотный остаток можно удалить или заменить любыми другими аминокислотами. Предпочтительна консервативная аминокислотная замена. Особенно предпочтительна замена остатком серина остатка цистеина. Таким образом, в особенно предпочтительных примерах согласно заявленному изобретению XI35 является S. Отсутствие данного остатка цистеина обладает преимуществом в том, что снижается риск агрегации (например, путем нежелательного образования дисульфидных мостиков) полипептида согласно заявленному изобретению.
Помимо необязательности наличия вышеупомянутых остатков цистеина, авторы заявленного изобретения также обнаружили, что прочие различные остатки в последовательности SEQ ID NO: 3 также не являются незаменимыми и, более того, могут быть заменены другими остатками, увеличивая таким образом, например, в некоторых случаях даже теплоустойчивость новаторского полипептида. Примерами таких замен являются X120G, Х126Е, Х128К, XI341, X138L, X171G, Х173Т, Х182Т, X187G, X197S, Х198А, X204Y, X230L, X231Y, Х234А, и/или Х241Н. Данные замены могут быть единичными или в любой комбинации. Типичной комбинацией является сочетание Х126Е и Х128К. Прочими неограничительными примерами комбинаций служат X197S и Х198А; X187G и X230L; и Х182Т и X187G и X230L. Естественно, данный второй тип аминокислотных модификаций можно комбинировать с вышеупомянутой заменой цистеина в любой возможной комбинации.
В SEQ ID NO: 1 (консенсусная последовательность согласно заявленному изобретению) первый аминокислотный остаток обозначен как либо отсутствующий, либо как любая аминокислота, в частности, М. Результаты проведенных исследований, авторами заявленного изобретения, и из предшествующего уровня техники (см. WO 2010/149792) показывают, что N-терминальный метионин EL188 является необязательным. Таким образом, в
некоторых воплощениях заявленного изобретения, позиция XI в последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1 в новаторском полипептиде не является М. Если полипептид согласно заявленному изобретению демонстрирует, например, на N-терминальном конце последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1, дополнительные элементы последовательности, таковые могут иметь полезные свойства, например, для повышения эффективности экспрессии в клетке-хозяине, в случае, если метионин в позиции 1 по SEQ ID NO: 1 удален или заменен на другую аминокислоту с целью избежать инициирующего кодона в соответствующей нуклеотидной последовательности, что может потенциально привести к одновременной экспрессии полипептида с отсутствующими дополнительными элементами последовательности, расположенными преимущественно на N-терминальном конце. С другой стороны, если отсутствуют дополнительные элементы последовательности на N-терминальном конце новаторского полипептида, XI, конечно, является предпочтительно метионином (например, для экспрессии). Однако, для ферментной активности, XI никогда не требуется.
Последовательности, попадающие в определение SEQ ID NO: 1, которые в особенности были протестированы авторами изобретения, представляют собой, например, SEQ ID NOs: 4-19 (и соответствующие последовательности без N-терминального метионина, SEQ ID NOs: 20-35).
Следует понимать, что все вышеописанное касательно исходной последовательности SEQ ID N0:1 относится в аналогичной степени и к более специфическим последовательностям. Так, исключительно для ясности понимания упомянуто, что полипептид согласно заявленному изобретению, содержащий последовательность, демонстрирующую как минимум 90% идентичность последовательности с исходной последовательностью SEQ ID NO: 1 как описано выше, может в предпочтительных вариантах практического воплощения несомненно демонстрировать аналогичным способом как минимум 90% идентичность последовательности с более специфическими последовательностями SEQ ID N0:1, изложенными или даже раскрытыми в
данном описании. Таким образом, в предпочтительных воплощениях заявленного изобретения, полипептид согласно заявленному изобретению может, например, содержать последовательность, демонстрирующую как минимум 90% идентичность последовательности с последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 4-35, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID N0:183, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1.
Полипептид согласно заявленному изобретению может содержать, помимо энзимной аминокислотной последовательности, например, последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 (или другими последовательностями, попадающими в данное определение), дополнительные удлинения аминокислотной последовательности, например, аналогичные раскрытым в WO 2010/149792. Полипептид согласно заявленному изобретению может, например, дополнительно содержать как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из амфипатичного пептида, катионного пептида, поликатионного пептида, гидрофобного пептида или натурального антимикробного пептида, как, например, суши-пептид и дефензин. Такие дополнительные удлинения аминокислотной последовательности могут улучшать антимикробные войства новаторского полипептида. В некоторых воплощениях, новаторский полипептид может содержать как минимум два различных удлинения аминокислотной последовательности, выбираемое из группы: амфипатичный пептид, катионный пептид, поликатионный пептид, гидрофобный пептид или натуральный антимикробный пептид, как, например, суши-пептид и дефензин.
Данные одно или более дополнительные удлинения аминокислотной последовательности могут присутствовать на N- или С-концах последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Они могут, например, присутствовать на N- или С-концах новаторского полипептида.
Предпочтительными примерами таких дополнительных удлинений аминокислотной последовательности (без ограничительного признака) являются последовательности KRK и SEQ ID NOs: 36-106, как описано подробно далее по тексту. Полипептид согласно заявленному изобретению может содержать как минимум одно дополнительное удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из данной группы. Для дополнительной информации, в особенности, что касается общих и специфических характеристик возможных дополнительных удлинений аминокислотной последовательности, см.также, например, WO 2010/023207, WO 2010/149792, WO 2010/149795 и WO 2012/085259.
Примеры удлинений катионной и поликатионной аминокислотных последовательностей приведены в нижеследующей таблице 1.
KRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRK
SEQ ID N0:59
KRKKRKKRKRS KRKKRKKRKRS KRKKRKKRKRS KRKKRKKRK
SEQ ID N0:60
Примеры антимикробных аминокислотных последовательностей, которые могут применять в практических воплощениях заявленного изобретения, приведены в нижеследующей таблице.
IKIAGC KIKGEC
Тахилепсин
RWCFRVCYRGICYRKCR
SEQ ГО N0: 87
Андроктонин
RSVCRQIKICRRRGGCYYKCTNRPY
SEQ ГО N0: 88
Альфа-дефензин
DCYCRIPACIAGERRYGTCIYQGRLWAFCC
SEQ ГО N0: 89
Бета-дефензин
NPVSCVRNKGICVPIRCPGSMKQIGTCVGRAVKC CRKK
SEQ ГО N0: 90
Тета-дефензин
GFCRCLCRRGVCRCICTR
SEQ ГО N0: 91
Дефензин (сапецин А)
ATCDLLSGTGINHSACAAHCLLRGNRGGYCNGK AVCVCRN
SEQ ГО N0: 92
Тионин (crambin)
TTCCPSIVARSNFNVCRIPGTPEAICATYTGCIIIPG ATCPGDYAN
SEQ ГО N0: 93
Дефензин из хрена
QKLCQRPSGTWSGVCGNNNACKNQCIRLEKARH GSCNYVFPAHCICYFPC
SEQ ГО N0: 94
Дрозомицин
DCLS GRYKGPC A VWDNETCRRVCKEEGRS S GHC SPSLKCWCEGC
SEQ ГО N0: 95
Гепсидин
DTHFPICIFCCGCCHRSKCGMCCKT
SEQ ГО N0: 96
Вас 5
RFRPPIRRPPIRPPFYPPFRPPIRPPIFPPIRPPFRPPL GRPFP
SEQ ГО N0: 97
PR-39
RRRPRPPYLPRPRPPPFFPPRLPPRIPPGFPPRFPPR FP
SEQ ГО N0: 98
Пиррокорицин
VDKGSYLPRPTPPRPIYNRN
SEQ ГО N0: 99
Гистатин 5
DS Н AKRHHG YKRKFHEKHHS HRG Y
SEQ ГО N0: 100
Как минимум одним дополнительным удлинением аминокислотной последовательности может являться суши-пептид, описанный Ding JL, Li Р, Но BCell Mol Life Sci. 2008 Apr;65(7-8):1202-19.The Sushi peptides: structural characterization and mode of action against Gram-negative bacteria. Особенно предпочтителен суши 1 пептид согласно SEQ ID NO: 101. Остальными предпочтительными суши-пептидами являются суши-пептиды S1 и S3 и их мультиплеты; FASEB J. 2000 Sep;14(12): 1801-13.
Предпочтительными гидрофобными пептидами являются Walmaghl с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID N0: 102 и гидрофобный пептид с аминокислотной последовательностью согласно Phe-Phe-Val-Ala-Pro (SEQ ID NO: 103).
Предпочтительными амфипатичными пептидами являются а4-спираль Т4 лизоцима согласно SEQ ID N0: 104 и WLBU2-BapnaHTy, имеющие
аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 105 и Walmagh 2 согласно SEQ ID NO: 106.
Как упомянуто выше, полипептид согласно заявленному изобретению может содержать как минимум одно дополнительное удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из: KRK и SEQ ID NOs: 36-106. Соответствующими примерами являются, например, полипептиды, содержащие последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 107-124 (и соответствующих последовательностей без N-терминального метионина, SEQ ID NOs: 125-142.
Полипептид согласно заявленному изобретению содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID N0:1, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 183, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1. Таким образом, полипептид согласно заявленному изобретению может содержать аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 107 - 142, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 183, ни SEQ ID NO: 4, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1.
Такой новаторский полипептид может, например, содержать последовательность, демонстрирующую более высокий уровень идентичности последовательности по сравнению с 91,5% аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 107 - 142, например, может демонстрировать как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,25% (например, отклонение менее 3 аминокислот) или как минимум примерно 99,5% (например, отклонение менее 2
аминокислот) идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 107 - 142.
В добавление, и вне зависимости от присутствия в новаторском полипептиде одного или более дополнительных удлинения аминокислотных последовательностей, упомянутых выше, полипептид может дополнительно содержать одну или более маркерных последовательностей. Такие маркерные последовательности могут присутствовать на N-терминальном или С-терминальном конце последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Они могут, например, быть расположены на N-терминальном или С-терминальном конце новаторского полипептида. В предпочтительном воплощении, одна или более маркерных последовательностей расположены на С-терминальном конце аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.
Одна или более маркерных последовательностей могут, например, быть сцеплены с аминокислотной последовательностью, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 напрямую или через короткий линкер из 1 до 10 аминокислотных остатков, предпочтительно из 1 до 5 аминокислотных остатков, более предпочтительно из 1 до 2 аминокислот. Линкерные последовательности предпочтительно являются лабильными (шарнирными) последовательностями, содержащими один или более остатков глицина. Неограничительные примеры последовательностей, которые могут содержаться в полипептиде согласно заявленному изобретению, с линкером Leu-Glu на С-терминальном конце, например, для слития с меткой или дополнительного секвенирования, приведены в SEQ ID NO: 184-251.
В технике известны многочисленные примеры меток, некоторые из которых были уже упомянуты выше. В контексте заявленного изобретения, особенно
предпочтительной маркерной последовательностью является His-метка, предпочтительно His-метка согласно SEQ ID NO: 143.
Длина полипептида согласно заявленному изобретению, в принципе, не ограничена, но предпочтительно не является избыточно большой. Предпочтительно, полипептид согласно заявленному изобретению имеет общую длину, не превышающую примерно 360 аминокислот, предпочтительно не превышающую примерно 340 аминокислот.
Специфические примеры полипептидов согласно заявленному изобретению можно выбрать из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 144-161 (и соответствующих последовательностей без N-терминального метионина, SEQ ID NOs: 162-179).
Полипептид согласно заявленному изобретению содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с SEQ ID N0:1, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID N0:183, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1. Таким образом, полипептид согласно заявленному изобретению может также содержать аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 144 - 179, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID N0:183, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1.
Такой новаторский полипептид может, например, содержать последовательность, демонстрирующую более высокий уровень идентичности последовательности с 91,5% идентичности аминокислотной последовательности, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 144 - 179, например, может демонстрировать как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как
минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,25% (например, отклонение менее 3 аминокислот), как минимум примерно 99,5% (например, отклонение менее 2 аминокислот), или даже 100% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 144 - 179. Отклонения от SEQ ID NOs: 144 - 179 могут в частности происходить в двух последовательностях, связывающих компоненты дополнительного аминокислотного удлинения (т.е. KRKKRKKRK, SEQ ID NO: 40, или пептида SMAP29; SEQ ID NO: 62), модифицированного ELI88 эндолизина и His-метки.
Полипептид согласно заявленному изобретению предпочтительно обладает способностью расщеплять пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. В частности, полипептид согласно заявленному изобретению предпочтительно обладает способностью расщеплять пептидогликан Pseudomonas aeroginosa, в частности Pseudomonas aeroginosa ПА01, Campylobacter jejuni и/или Campylobacter coli.
Пептидогликан-расщепляющую активность на грамотрицательных бактериях можно измерить при помощи хорошо известных в данной области техники анализов, например, при помощи муралитических тестов, в которых происходит проникновение через или удаление внешней мембраны грамотрицательных бактерий (например, с хлороформом) для обеспечения доступа предполагаемого энзима (фермента) к пептидогликанному слою. Если энзим активен, расщепление пептидогликанного слоя приведет к снижению опалесцентности (мутности), которое можно измерить фотометрией (см., например, Briers et al., J. Biochem. Biophys Methods 70: 531-533, (2007).
Дополнительно, заявленное изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид согласно заявленному изобретению. Специалист в данной области техники, опираясь на принцип вырожденности генетического кода, будет иметь представление, каким способом можно генерировать данную нуклеиновую кислоту.
Дополнительно, заявленное изобретение относится к вектору, например, экспрессионному или клонирующему векторам, включающему нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению.
Дополнительно, заявленное изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей полипептид согласно заявленному изобретению, нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению, и/или вектор согласно заявленному изобретению.
В дальнейшем аспекте, заявленное изобретение относится к композиции, содержащей полипептид согласно заявленному изобретению, нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению, вектор согласно заявленному изобретению, и/или клетку-хозяин согласно заявленному изобретению. Предпочтительно, упомянутая композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемые разбавитель, эксципиент или носитель.
Примеры
Далее по тексту, представлены специфические примеры, иллюстрирующие различные воплощения и аспекты заявленного изобретения. Тем не менее, не следует рассматривать данные воплощения как ограничивающие объем заявленного изобретения. Наоборот, различные модификации заявленного изобретения, в дополнение к приведенным в данном описании, сопроводительных чертежах и примерах, будут, как станет очевидно специалистам в данной области техники, находиться в границах объема прилагаемой формулы изобретения.
Пример 1: Идентификация допускаемых мутаций в EL188 энд о лизине
Для построения полипептидов согласно заявленному изобретению, использовали литический фермент (gpl88) фага EL Pseudomonas aeruginosa в качестве начальной точки (SEQ ID NO: 3. Данный эндолизин состоит из 292 аминокислот (молекулярная масса: 32 КДа).
В некоторых вариантах практического воплощения, в качестве сливающейся клетки, выбрали KRKKRKKRK (SEQ ID NO: 40).
В других воплощениях, в качестве сливающейся клетки выбрали SMAP-29. SMAP-29 был обнаружен в лейкоцитах овец и состоит из 29 аминокислот (RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG; молекулярная масса: 3.3 КДа: SEQ ID NO: 62).
Создали соответствующие слияния модифицированного EL188 с KRKKRKKRK (SEQ ID NOs: 144-157) и с SMAP-29 (SEQ ID NOs: 158-161). В качестве контроля, использовали слияния немодифицрованного EL188 3 с KRKKRKKRK (SEQ ID NO: 180) и с SMAP-29 (SEQ ID NOs: 181-182) .
Соответствующие конструкты нуклеиновых кислот были созданы с использованием стандартных методов клонирования, описанных, например Sambrook et al. 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual and quick change mutagenesis.
Мутации:
Построили следующие модифицированные ELI88 эндолизины: Таблица 3:
SEQ
NO:
Мутация*
180
144
S120G
145
A126E T128K
146
W134I
147
H138L
148
E171G
149
Y173T
150
A182T
151
N187G
152
D197S Q198A
153
L204Y
154
F230L
155
H231Y
156
S234A
157
C135S
Очистка
Рекомбинантную экспрессию слитых белков осуществили в клетках Е. coli BL21(DE3) pLysS (Novagen, Darmstadt, Germany). Клетки выращивали до достижения оптической плотности СЮбоонм = 0.5-0.8. Затем индуцировали экспрессию слитого белка с 0.5 мМ ИПТГ (изопропилтиогалактозида) и провели экспрессию при 16-18°С в течение ночи, как минимум в течение 12 часов.
Клетки собрали центрифугированием в течение 20 мин при бОООг и разрушили ультразвуком на льду. Растворимую и нерастворимую фракции сырого экстракта E.coli сепарировали центрифугированием (Sorvall, SS34, 30 мин, 15 000 оборотов в мин). Все белки подвергли очистке при помощи Ni2+ аффинной хроматографии (Akta FPLC, GE Healthcare), с использованием С-концевой His6-метки, кодированной вектором рЕТ21Ь. Образцы микрофильтрировали (0.2 мкм) перед каждым этапом хроматографии.
Ni2+ аффинную хроматографию провели в 4 последующих этапа, все при комнатной температуре:
1. Эквилибрация Histrap FF 5 мл колонки (GE Healthcare) с максимум 10 объемами колонки отмывочного буфера (20 мМ имидазола, 1 М NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при рН 7,4) при скорости потока 3-5 мл/мин.
2. Загрузка всего лизата с требуемым белком-мишенью в Histrap FF 5 мл колонку при скорости потока 3-5 мл/мин.
3. Отмывка колонки с максимум 10 объемами колонки отмывочного буфера для удаления несвязанного белка.
4. Элюирование связанного белка-мишени из колонки с увеличивающимся градиентным режимом с 15 объемами колонки элюирующего буфера (500 мМ имидазола, 1 М NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при рН 7,4) до 100% при скорости потока 3-5 мл/мин.
Хроматографию гидрофобного взаимодействия (ХГВ) осуществили в 5 последовательных этапов, все при комнатной температуре:
1. Эквилибрация HiScreen Phenyl HP 5 мл колонки (GE Healthcare) с максимум 5 объемами колонки отмывочного буфера (500 мМ сульфата аммония, 1 М NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при рН 7,4) при скорости потока 1-2 мл/мин.
2. Приготовление образца (5 мг на 1 мл колонки белкового пула из этапа аффинной очистки Ni2+) начинают с первого приготовления концентрации белка 0.5 мг/мл путем добавления заранее определенного объема отмывочного буфера из этапа аффинной очистки Ni2+. Затем регулируют концентрацию сульфата аммония путем поступенчатого добавления заранее определенного объема стокового раствора сульфата аммония (3.8 М) до окончательной концентрации примерно 500 мМ.
3. Загрузка подготовленного образца в колонку HiScreen Phenyl HP 5 мл при скорости потока 1-2 мл/мин.
4. Отмывка колонки с 5 объемами колонки отмывочного буфера для удаления несвязанного белка.
5. Элюирование белка-мишени из колонки с убывающим линейным градиентом 15 объемов колонки элюирующего буфера (500 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при рН 7,4) до 0% при скорости потока 1-2 мл/мин. Белок-мишень вымывается во втором максимуме вблизи конца убывающего градиента.
Замена буфера путем диализа мембраны:
Элюирующий пул этапа гидрофобной интерактивной хроматографии диализировали (мембрана: регенерированная целлюлоза с MWCO: 6000-8000 Д) в буфер хранения (750 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС; рН7.4) при 4°С. Фактор диализа 160 - 250.
Характеризация
Активность полипептидов согласно SEQ ID NOs: 144-161, а также контроль SEQ ID N0:180 определили при помощи анализа муралитической активности.
Muralytic Assay
Клетки Ps. aeruginosa приготоили из ночной культуры следующим образом:
1. Клетки Ps. aeruginosa вырастили до ОП600=0.5-0.8. в 50 мл среды Лурия-Бертани
2. Клетки осадили центрифугированием при 4°С в течение 5 мин, бОООг, удалили супернатант.
3. Сгусток промыли в 50 мл буфера ChC13 (одинаковый объем с жидкой культурой)
20 мМ ГЭПЭС, 150 мМ NaCl, насыщенный ChC13, рН=7.4 следующим образом: сгусток клеток ресуспендировали пипетированием вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 45 мин. После этого, клетки осадили центрифугированием при 4°С в течение 10 мин, ЗОООг, для удаления супернатанта.
4. Полученный сгусток снова промыли с 50 мл буфера для образца (одинаковый объем с жидкой культурой).
20 мМ ГЭПЭС, 150 мМ NaCl, рН=7.4 сгусток клеток ресуспендировали пипетированием вверх и вниз, после чего клетки снова осадили центрифугированием при 4°С в течение 10 мин, ЗОООг, для удаления супернатанта.
5. В последнем этапе, сгусток клеток ресуспендировали в X мл буфера для образца
20mM HEPES, 150тМ NaCl, рН=7.4. Объем X скорректировали таким образом, чтобы 1 мл суспензии имел ОП600- 1.
Клетки осадили центрифугированием при 4°С в течение 10 мин, ЗОООг, для удаления супернатанта, заморозили и хранили при -20°С.
Для измерения муралитической активности, использовали следующую методику:
1. Сгустки клеток ресуспендировали в 1 мл 20 мМ ГЭПЭС, рН 7,4 для получения ОП600 из примерно 1.0 и переместили в измерительную кювету.
2. Исследуемый полипептид добавили к клеточной суспензии в малом объеме и перемешали с клетками.
3. Уменьшение оптической плотности при 600 нм зафиксировали в течение 10 мин, с немедленным началом.
4. Муралитическую активность белка рассчитали как уменьшение оптической плотности при 600 нм, деленное на минуту и на мг добавленного полипептида (аабс/мин/мг).
Дополнительно, определили температуры плавления полипептидов согласно SEQ ID NOs: 144-161, а также контроль SEQ ID NOs: 180-182.
Температуру плавления белка определили путем кругового дихроизма (КД). Изменения эллиптичности белков зарегистрировали при 220 нм как функцию температуры с использованием спектрометра Jasco J-815 CD и обработали в простой сигмовидной "складчатой" модели при помощи аналитического программного обеспечения JASCO. Температуры плавления белка (Tmelt) определили как среднюю точку конформационного перехода с уничтожением складок. Спектры зарегистрировали при концентрации белков 5.0-5.8 мкм при скорости нагрева 1°С/мин и времени инкубации 3 сек в объеме 410 мкл в 1 мм
свеопоглощающей кварцевой кюветы Hellma. Измерения провели в 50 мМ буфера NaPh, 300 мМ NaCl при рН 7.4.
Для полипептидов SEQ ID NOs: 144 - 157 и контроля SEQ ID NO: 180 результаты приведены на Фиг.З. Для полипептидов SEQ ID NOs: 158 - 161 и контроля 181 и 182 результаты приведены в нижеследующей таблице:
Результаты показали, что введенные мутации не оказали негативного влияния на активность полипептида, а даже наоборот - повысили ее. Более того, некоторые полипептиды преимущественно увеличили температуру плавления эндолизина.
Пример 2: Теплоустойчивость полипептида согласно SEQ ID NO: 161
Для демонстрации того, что повышенная температура плавления на самом деле влияет на теплоустойчивость, изобретатели в качестве примера подвергли полипептид SEQ ID NO: 161 длительному прямому нагреванию при
температурах 51°С и 52°С. После этого, определили активность на штамме Pseudomonas aeruginosa в качестве модельной системы в адаптированных условиях.
Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК)
По аналогии с определением "минимальной ингибирующей концентрации (МИК)" для антибиотиков, МИК определили микроразбавлением.
Схема проведения эксперимента:
Соответствующую, полученную за ночь, культуру разбавили 1:10. Ps. aeruginosa инкубировали при 37°С до OD600=0.6 (примерно 109 клеток/мл). Бактериальную культуру разбавили до концентрации от 2x105 до 8x105 КОЕ на мл в среде Мюллера-Хинтона (с нестандартизированным содержанием катионов) и разделили на требуемое количество трубок.
Целевой полипептид добавили в различных концентрациях (определена как конечная концентрация мкг/мл в среде Мюллера-Хинтона). Добавили ЭДТК к конечной концентрации 2 мМ.
Смесь инкубировали на ночь при 37°С. Бактериальный рост был визуально определен по наличию опалесцентности (в сравнении с отрицательным контролем). МИК определили как концентрацию в трубке без бактериального роста. Положительный (без целевого пептида и/или ЭДТК) и отрицательный контроль (среда Мюллера-Хинтона без бактерий) включили в эксперимент.
Активность полипептида SEQ ID NO: 161, измеренная как минимальная ингибирующая концентрация (МИК), показывает, что SEQ ID NO: 161 охраняет 80% своей начальной активности даже после прямого нагревания при 51°С в течение 1 мин.
Таблица 5:
Нагревание
SEQ ID N0: 161 МИК мкм /мл
без нагревания
12,5
P.aeruginosa
1 мин51°С
ПА01
2мин51°С
> 20
2 мин 52°С
> 20
SEQUENCE LISTING
<110> Lysando AG
<120> Modified EL188 endolysin sequence
<130> LYS-022 PCT 1
<150> PCT/EP2013/073872
<151> 2013-11-14
<160> 251
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222>
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid or absent; in particular it can be methionine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (120)..(120)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular serine or glycine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (126)..(126)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular alanine or glutamic acid
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (128)..(128)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular threonine or lysine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (134)..(134)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular tryptophan or isoleucin
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (135)..(135)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular serine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (138)..(138)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular
histidine or leucine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (171)..(171)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular glutamic acid or glycine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (173)..(173)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular tyrosine or threonine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (182)..(182)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular alanine or threonine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (187)..(187)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular aspargine or glycine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (197)..(197)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular aspartic acid or serine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (198)..(198)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular glutamine acid or alanine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (204)..(204)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular leucine or tyrosine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (230)..(230)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular phenylalanine or leucine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (231)..(231)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular histidine or tyrosine
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (234)..(234)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; in particular serine or alanine
<400>
Xaa Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gin Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Xaa Gly Lys Val Ser Pro Xaa Phe Xaa
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Xaa Xaa Gly Val Xaa Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Xaa Ala Xaa Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Xaa Ala Asn Asp Leu Xaa Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Xaa Xaa Leu Thr Gln Leu Asp Xaa Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Xaa Xaa Pro Ala Xaa Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 2
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> EL188 endolysin without N-terminal methionine
<400> 2
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
292
<210> <211> <212> PRT <213> Unknown
<220>
<223> ELgp188 <400> 3
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 4
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G
<400> 4
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 5
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K
<400> 5
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
292
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I
<400> 6
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<223> Mutated EL188 with H138L
<400> 7
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 8
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G
<400> 8
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
292
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T
<400> 9
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 10
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T
<400> 10
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 11
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G
<400> 11
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 12
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A
<400> 12
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 13 <211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y
<400> 13
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 14
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L
<400> 14
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 15
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y
<400> 15
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 16
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A
<400> 16
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 17
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S
<400> 17
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 18
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L
<400> 18
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr 290
<210> 19
<211> 292
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L
<400> 19
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr
290
<210> 20
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G and without N-terminal methionine
<400> 20
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 21 <211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K and without N-terminal
methionine
<400> 21
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 22
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I and without N-terminal methionine
<400> 22
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195
200
205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 23
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L and without N-terminal methionine
<400> 23
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 24
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G and without N-terminal methionine
<400> 24
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275
280
285
Ile Ser Tyr 290
<210> 25
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T and without N-terminal methionine
<400> 25
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 26
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T and without N-terminal methionine
<400> 26
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100
105
110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 27
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and without N-terminal methionine
<400> 27
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A and without N-terminal
methionine <400> 28
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165
170
175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 29
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y and without N-terminal methionine
<400> 29
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 30
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L and without N-terminal methionine
<400> 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 31
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y and without N-terminal methionine
<400> 31
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 32
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A and without N-terminal methionine
<400> 32
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 33
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S and without N-terminal methionine
<400> 33
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 34
<211> 291 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L and without N-terminal methionine
<400> 34
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 35 <211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L and without N-terminal
methionine
<400> 35
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr 290
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
/01 Q\
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 36
Lys Arg Lys Lys Arg Lys 1 5
<210> 37 <211> 5 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synethtic sequence
<220>
<221> misc_feature
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 37
Lys Arg Xaa Lys Arg 1 5
<210> 38 <211> 5 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 38
Lys Arg Ser Lys Arg 1 5
39 5
PRT
<210> <211> <212>
? О 1 О ^
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 39
Lys Arg Gly Ser Gly 1 5
<210> <211> <212>
40 9
PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 40
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 1 5
<210> <211> <212>
PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 41
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5
<210> 42 <211> 8 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 42
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5
<210> 43 <211> 10 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 43
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10
<210> 44 <211> 12 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 44
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys
1 5 10
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
/01 Оч ~4-
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 45
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg
1 5 10
<210> 46
<211> 16
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 46
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5 10 15
<210> 47
<211> 18
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 47
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10 15
Arg Lys
<210> 48
<211> 19
<212> PRT
^ О 1 О ^ ~ 4-
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 48
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys
<210> 49
<211> 19
<212> PRT
/01 Оч ^~4-
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 49
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg
<210> 50
<211> 19
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 50
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5 10 15
Lys Lys Lys
<210> 51 <211> 20 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 51
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Lys Arg Lys
<210> 52
<211> 21
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 52
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Lys Arg Lys Lys
<210> 53
<211> 21
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 53
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Lys
<210> 54 <211> 22 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 54
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Lys Arg Lys
1 5 10 15
Lys Arg Lys Lys Arg Lys
<210> 55
<211> 24
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 55
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys
<210> 56 <211> 25
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence <400> 56
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
20 25
<210> 57
<211> 31
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 57
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys
20 25 30
<210> 58
<211> 38
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 58
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Gly Ser Gly Ser Gly Lys Arg Lys
20 25 30
Lys Arg Lys Lys Arg Lys
<210> 59
<211> 39
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 59
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg
20 25 30
Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys
<210> 60
<211> 42
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 60
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg
20 25 30
Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys
35 40
<210> 61
<211> 37
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 61
Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu
1 5 10 15
Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val
20 25 30
Pro Arg Thr Glu Ser 35
<210> 62
<211> 29
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> SMAP-29 sheep
<400> 62
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly 20 25
<210> 63
<211> 13
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Indolicidine bovine
<400> 63
Ile Leu Pro Trp Lys Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg
1 5 10
<210> 64
<211> 18
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Protegrin Porcine
<400> 64
Arg Gly Gly Arg Leu Cys Tyr Cys Arg Arg Arg Phe Cys Val Cys Val
1 5 10 15
Gly Arg
<210> 65
<211> 31
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Cecropin P1 Mammal (pig)
<400> 65
Ser Trp Leu Ser Lys Thr Ala Lys Lys Leu Glu Asn Ser Ala Lys Lys
1 5 10 15
Arg Ile Ser Glu Gly Ile Ala Ile Ala Ile Gln Gly Gly Pro Arg
20 25 30
<210> 66
<211> 23
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Magainin frog
<400> 66
Gly Ile Gly Lys Phe Leu His Ser Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Gly Glu Ile Met Asn Ser 20
<210> 67
<211> 25
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Pleurocidin fish
<400> 67
Gly Trp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Ala Ala His Val Gly Lys His Val
1 5 10 15
Gly Lys Ala Ala Leu Thr His Tyr Leu 20 25
<210> 68
<211> 36
<212> PRT
<213> Aedes aegypti
<400> 68
Gly Gly Leu Lys Lys Leu Gly Lys Lys Leu Glu Gly Ala Gly Lys Arg
1 5 10 15
Val Phe Asn Ala Ala Glu Lys Ala Leu Pro Val Val Ala Gly Ala Lys
20 25 30
Ala Leu Arg Lys
<210> 69
<211> 40
<212> PRT
<213> Drosophila melanogaster
<400> 69
Gly Trp Leu Lys Lys Ile Gly Lys Lys Ile Glu Arg Val Gly Gln His
1 5 10 15
Thr Arg Asp Ala Thr Ile Gln Gly Leu Gly Ile Pro Gln Gln Ala Ala
20 25 30
Asn Val Ala Ala Thr Ala Arg Gly 35 40
<210> 70
<211> 21
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Buforin II vertebrate
<400> 70
Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg Lys
<210> 71
<211> 39
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Sarcotoxin IA Fly
<400> 71
Gly Trp Leu Lys Lys Ile Gly Lys Lys Ile Glu Arg Val Gly Gln His
1 5 10 15
Thr Arg Asp Ala Thr Ile Gln Gly Leu Gly Ile Ala Gln Gln Ala Ala
20 25 30
Asn Val Ala Ala Thr Ala Arg 35
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> Apis mellifera
<400> 72
Ala Asn Arg Pro Val Tyr Ile Pro Pro Pro Arg Pro Pro His Pro Arg
1 5 10 15
Leu
<210> 73
<211> 24
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Ascaphine 5 Frog
<400> 73
Gly Ile Lys Asp Trp Ile Lys Gly Ala Ala Lys Lys Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Val Ala Ser His Ile Ala Asn Gln 20
<210> 74
<211> 22
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Nigrocine 2 Frog
<400> 74
Gly Leu Leu Ser Lys Val Leu Gly Val Gly Lys Lys Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Val Ser Gly Leu Val Cys 20
<210> 75
<211> 24
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Pseudin 1 Rana Frog
<400> 75
Gly Leu Asn Thr Leu Lys Lys Val Phe Gln Gly Leu His Glu Ala Ile
1 5 10 15
Lys Leu Ile Asn Asn His Val Gln
<210> 76
<211> 18
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Ranalexin Frog
<400> 76
Phe Leu Gly Gly Leu Ile Val Pro Ala Met Ile Cys Ala Val Thr Lys
1 5 10 15
Lys Cys
<210> 77
<211> 26
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Melittin bee
<400> 77
Gly Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala Leu
1 5 10 15
Ile Ser Trp Ile Lys Arg Lys Arg Gln Gln 20 25
<210> 78
<211> 25
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Lycotoxin 1 Spider
<400> 78
Ile Trp Leu Thr Ala Leu Lys Phe Leu Gly Lys His Ala Ala Lys Lys
1 5 10 15
Leu Ala Lys Gln Gln Leu Ser Lys Leu
20 25
<210> 79
<211> 19
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Parasin 1 Fish
<400> 79
Lys Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser
<210> 80
<211> 39
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Buforin I Toad
<400> 80
Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly 1 5
Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
<210> 81
<211> 34
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Dermaseptin 1 Frog
<400> 81
Ala Leu Trp Lys Thr Met Leu Lys Lys Leu Gly Thr Met Ala Leu His
1 5 10 15
Ala Gly Lys Ala Ala Leu Gly Ala Ala Ala Asp Thr Ile Ser Gln Gly
20 25 30
Thr Gln
<210> 82
<211> 12
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Bactenecin 1 Cow
<400> 82
Arg Leu Cys Arg Ile Val Val Ile Arg Val Cys Arg
1 5 10
<210> 83
<211> 21
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Thanatin Insect
<400> 83
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Arg Thr Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met 20
<210> 84
<211> 19
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Brevinin 1T Rana frogs
<400> 84
Val Asn Pro Ile Ile Leu Gly Val Leu Pro Lys Val Cys Leu Ile Thr
1 5 10 15
Lys Lys Cys
<210> 85
<211> 26
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Ranateurin 1 Rana frog
<400> 85
Ser Met Leu Ser Val Leu Lys Asn Leu Gly Lys Val Gly Leu Gly Phe
1 5 10 15
Val Ala Cys Lys Ile Asn Ile Lys Gln Cys
20 25
<210> 86
<211> 46
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Esculentin 1 Rana frogs
<400> 86
Gly Ile Phe Ser Lys Leu Gly Arg Lys Lys Ile Lys Asn Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Gly Leu Lys Asn Val Gly Lys Glu Val Gly Met Asp Val Val Arg
20 25 30
Thr Gly Ile Lys Ile Ala Gly Cys Lys Ile Lys Gly Glu Cys
35 40 45
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> Limulus polyphemus
<400> 87
Arg Trp Cys Phe Arg Val Cys Tyr Arg Gly Ile Cys Tyr Arg Lys Cys
1 5 10 15
Arg
<210> 88
<211> 25
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Androctonin Scorpion
<400> 88
Arg Ser Val Cys Arg Gln Ile Lys Ile Cys Arg Arg Arg Gly Gly Cys
1 5 10 15
Tyr Tyr Lys Cys Thr Asn Arg Pro Tyr
20 25
<210> 89
<211> 30
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 89
Asp Cys Tyr Cys Arg Ile Pro Ala Cys Ile Ala Gly Glu Arg Arg Tyr
1 5 10 15
Gly Thr Cys Ile Tyr Gln Gly Arg Leu Trp Ala Phe Cys Cys
20 25 30
<210> 90
<211> 38
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> beta-defensin cow
<400> 90
Asn Pro Val Ser Cys Val Arg Asn Lys Gly Ile Cys Val Pro Ile Arg
1 5 10 15
Cys Pro Gly Ser Met Lys Gln Ile Gly Thr Cys Val Gly Arg Ala Val
20 25 30
Lys Cys Cys Arg Lys Lys 35
91 18
<210> <211> <212> PRT <213> unknown
<220>
<223> theta-defensin monkey
<400> 91
Gly Phe Cys Arg Cys Leu Cys Arg Arg Gly Val Cys Arg Cys Ile Cys
1 5 10 15
Thr Arg
<210> 92
<211> 40
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> defensin (sapecin A) insect
<400> 92
Ala Thr Cys Asp Leu Leu Ser Gly Thr Gly Ile Asn His Ser Ala Cys
1 5 10 15
Ala Ala His Cys Leu Leu Arg Gly Asn Arg Gly Gly Tyr Cys Asn Gly
20 25 30
Lys Ala Val Cys Val Cys Arg Asn 35 40
<210> 93
<211> 46
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Thionin (crambin) plant
<400> 93
Thr Thr Cys Cys Pro Ser Ile Val Ala Arg Ser Asn Phe Asn Val Cys
1 5 10 15
Arg Ile Pro Gly Thr Pro Glu Ala Ile Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Cys
20 25 30
Ile Ile Ile Pro Gly Ala Thr Cys Pro Gly Asp Tyr Ala Asn
35 40 45
<210> 94
<211> 50
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> defensin from radish
<400> 94
Gln Lys Leu Cys Gln Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly
1 5 10 15
Asn Asn Asn Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Arg Leu Glu Lys Ala Arg
20 25 30
His Gly Ser Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Cys Ile Cys Tyr Phe
35 40 45
Pro Cys
<210> 95
<211> 44
<212> PRT
<213> Drosophila melanogaster
<400> 95
Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn
1 5 10 15
Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His
20 25 30
Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys
35 40
<210> 96
<211> 25
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 96
Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg
1 5 10 15
Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 20 25
<210> 97
<211> 44
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Bac 5 Cow
<400> 97
Arg Phe Arg Pro Pro Ile Arg Arg Pro Pro Ile Arg Pro Pro Phe Tyr
1 5 10 15
Pro Pro Phe Arg Pro Pro Ile Arg Pro Pro Ile Phe Pro Pro Ile Arg
20 25 30
Pro Pro Phe Arg Pro Pro Leu Gly Arg Pro Phe Pro
35 40
<210> 98
<211> 39
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> PR-39 Pig
<400> 98
Arg Arg Arg Pro Arg Pro Pro Tyr Leu Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro
1 5 10 15
Phe Phe Pro Pro Arg Leu Pro Pro Arg Ile Pro Pro Gly Phe Pro Pro
20 25 30
Arg Phe Pro Pro Arg Phe Pro
<210> 99
<211> 20
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> Pyrrhocoricin Insect
<400> 99
Val Asp Lys Gly Ser Tyr Leu Pro Arg Pro Thr Pro Pro Arg Pro Ile
1 5 10 15
Tyr Asn Arg Asn
<211> 24
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 100
Asp Ser His Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His Glu
1 5 10 15
Lys His His Ser His Arg Gly Tyr 20
<210> 101
<211> 34
<212> PRT
<213> Limulus polyphemus
<400> 101
Gly Phe Lys Leu Lys Gly Met Ala Arg Ile Ser Cys Leu Pro Asn Gly
1 5 10 15
Gln Trp Ser Asn Phe Pro Pro Lys Cys Ile Arg Glu Cys Ala Met Val
20 25 30
Ser Ser
<210> 102
<211> 18
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 102
Gly Phe Phe Ile Pro Ala Val Ile Leu Pro Ser Ile Ala Phe Leu Ile
1 5 10 15
Val Pro
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 103
Phe Phe Val Ala Pro 1 5
<210> 104
<211> 13
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> alpha4-helix of T4 lysozyme
<400> 104
Pro Asn Arg Ala Lys Arg Val Ile Thr Thr Phe Arg Thr
1 5 10
<210> 105
<211> 27
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 105
Lys Arg Trp Val Lys Arg Val Lys Arg Val Lys Arg Trp Val Lys Arg
1 5 10 15
Val Val Arg Val Val Lys Arg Trp Val Lys Arg 20 25
<210> 106
<211> 25 <212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> synthetic sequence
<400> 106
Gly Lys Pro Gly Trp Leu Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Lys Lys Leu
1 5 10 15
Ile Arg Arg Pro Leu Lys Arg Leu Ala
20 25
<210> 107
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 107
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 108
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide
<400> 108
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 109
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide
<400> 109
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 110
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide
<400> 110
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 111
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 111
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 112
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide
<400> 112
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 113
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide
<400> 113
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 114
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 114
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 115
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide
<400> 115
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 116
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide
<400> 116
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 117
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide
<400> 117
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 118
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide
<400> 118
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 119
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide
<400> 119
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 120
<211> 301
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide
<400> 120
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 121
<211> 324
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide
<400> 121
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr
<210> 122
<211> 324
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide
<400> 122
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr
<210> 123
<211> 324
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide
<400> 123
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr
<210> 124
<211> 324
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L plus SMAP peptide
<400> 124
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr
<210> 125 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 125
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 126
<211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide,
without N-terminal methionine
<400> 126
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 127 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 127
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 128 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 128
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 129
<211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 129
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 130
<211> 300 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 130
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 131
<211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 131
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 132
<211> 300 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 132
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 133
<211> 300 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 133
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 134 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 134
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 135 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 135
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195
200
205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 136 <211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 136
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 137
<211> 300
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 137
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 138
<211> 300 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 138
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr
290 295 300
<210> 139
<211> 323
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide, without N-terminal
methionine
<400> 139
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr
<210> 140
<211> 323 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide, without N-terminal methionine
<400> 140
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr
<210> 141 <211> 323
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide, without
N-terminal methionine
<400> 141
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr
<210> 142 <211> 323 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230 L plus SMAP peptide, without N-terminal methionine
<400> 142
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr
<210> <211> <212>
143 6
PRT
<213> artificial sequence
<220>
<223> His-Tag (6x)
<400> 143
His His His His His His 1 5
<210> 144
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 144
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 145 <211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide plus
HIS-tag <400> 145
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195
200
205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 146
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 146
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 147
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 147
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245
250
255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 148
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 148
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 149
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 149
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 150
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 150
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 151
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 151
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 152
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 152
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 153
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 153
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 154
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 154
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 155
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 155
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 156
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 156
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 157 <211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 157
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 158
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide plus HIS-tag
<400> 158
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His 325 330
<210> 159
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide plus HIS-tag
<400> 159
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His 325 330
<210> 160
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide plus HIS-tag
<400> 160
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His 325 330
<210> 161
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L plus SMAP peptide plus
HIS-tag
<400> 161
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His
325 330
<210> 162
<211> 308 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 162
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 163
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide plus
HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 163
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 164
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 164
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 165 <211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
without N-terminal methionine
<400> 165
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 166 <211> 308 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 166
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 167
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
without N-terminal methionine
<400> 167
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115
120
125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 168
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
without N-terminal methionine
<400> 168
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 169
<211> 308 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 169
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 170 <211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 170
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 171 <211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 171
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195
200
205
Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 172 <211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 172
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 173
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 173
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 174
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
without N-terminal methionine
<400> 174
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 175 <211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
without N-terminal methionine
<400> 175
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275
280
285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His
290 295 300
His His His His
305
<210> 176
<211> 331 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 176
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His 325 330
<210> 177 <211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide plus HIS-tag without
N-terminal methionine
<400> 177
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His
325 330
<210> 178
<211> 331 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide plus HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 178
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His 325 330
<210> 179
<211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L plus SMAP peptide plus
HIS-tag without N-terminal methionine
<400> 179
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305
310
315
320
Ile Ser Tyr Leu Glu His His His His His His
325 330
<210> 180
<211> 309
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EL188 plus KRKKRKKRK peptide plus HIS-tag
<400> 180
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His
290 295 300
His His His His His
305
<210> 181
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EL188 plus SMAP peptide plus HIS-tag without linker
<400> 181
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 182
<211> 339
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EL188 plus SMAP peptide plus HIS-tag with GAGAGAGA-linker
<400> 182
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr
35 40 45
Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln
50 55 60
Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu
65 70 75 80
Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly
85 90 95
Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu
100 105 110
Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly
115 120 125
Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val
130 135 140
Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly
145 150 155 160
Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val
165 170 175
His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala
180 185 190
Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly
195 200 205
Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp
210 215 220
Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln
225 230 235 240
Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys
245 250 255
Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala
260 265 270
Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys
275 280 285
Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile
290 295 300
Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly
305 310 315 320
Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu His His His
325 330 335
His His His
<210> 183
<211> 290
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EL188 with L99 deletion without N-terminal Met
<400> 183
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
Gly Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr
100 105 110
Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys
115 120 125
Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His
130 135 140
Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro
145 150 155 160
Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe
165 170 175
Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg
180 185 190
Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu
195 200 205
Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr
210 215 220
Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val
225 230 235 240
Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp
245 250 255
Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu
260 265 270
Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile
275 280 285
Ser Tyr 290
<210> 184
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G
<400> 184
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290
<210> 185
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K
<400> 185
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 186
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I
<400> 186
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 187
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L
<400> 187
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290
<210> 188
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G
<400> 188
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 189
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T
<400> 189
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 190
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T
<400> 190
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 191
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G
<400> 191
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145
150
155
160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 192
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A
<400> 192
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 193 <211> 294 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y
<400> 193
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225
230
235
240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290
<210> 194
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L
<400> 194
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 195
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y
<400> 195
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 196
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A
<400> 196
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 197
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S
<400> 197
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 198
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L
<400> 198
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 199
<211> 294
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L
<400> 199
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
1 5 10 15
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
20 25 30
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
35 40 45
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
50 55 60
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
100 105 110
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
115 120 125
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
130 135 140
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
165 170 175
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
180 185 190
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
195 200 205
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
210 215 220
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
245 250 255
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
260 265 270
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
275 280 285
Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290
<210> 200
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G and without N-terminal methionine
<400> 200
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 201 <211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K and without N-terminal
methionine
<400> 201
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 202
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I and without N-terminal methionine
<400> 202
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 203
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L and without N-terminal methionine
<400> 203
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 204
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G and without N-terminal methionine
<400> 204
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 205
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T and without N-terminal methionine
<400> 205
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 206
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T and without N-terminal methionine
<400> 206
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 207
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and without N-terminal methionine
<400> 207
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 208 <211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A and without N-terminal methionine
<400> 208
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180
185
190
Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 209
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y and without N-terminal methionine
<400> 209
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 210
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L and without N-terminal methionine
<400> 210
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 211
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y and without N-terminal methionine
<400> 211
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 212
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S234A and without N-terminal methionine
<400> 212
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 213
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S and without N-terminal methionine
<400> 213
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 214 <211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L and without N-terminal methionine
<400> 214
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 215
<211> 293
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L and without N-terminal
methionine
<400> 215
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
20 25 30
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
35 40 45
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
130 135 140
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
145 150 155 160
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
165 170 175
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
180 185 190
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
195 200 205
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
210 215 220
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
225 230 235 240
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
245 250 255
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
260 265 270
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
275 280 285
Ile Ser Tyr Leu Glu 290
<210> 216
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 216
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Gly Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 217
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide
<400> 217
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 218
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide
<400> 218
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 219 <211> 303 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide <400> 219
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 220
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 220
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 221
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide
<400> 221
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 222
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide
<400> 222
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 223
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide
<400> 223
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 224
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide
<400> 224
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 225
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide
<400> 225
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 226
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide
<400> 226
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 227
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide
<400> 227
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide
<400> 228
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
115 120 125
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
180
185
190
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
ion IQC; ion
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 229
<211> 303
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide
<400> 229
Met Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn
1 5 10 15
Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr
20 25 30
Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu
35 40 45
Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val
85 90 95
Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe
100 105 110
Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp
Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser
130 135 140
Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys
145 150 155 160
Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala
165 170 175
Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala
180 185 190
Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu
195 200 205
Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg
210 215 220
Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His
225 230 235 240
Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly
245 250 255
Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly
260 265 270
Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr
275 280 285
Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 230
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide
<400> 230
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 231
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide
<400> 231
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 232
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide
<400> 232
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
180 185 190
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu 325
Glu
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230L plus SMAP peptide <400> 233
Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys
1 5 10 15
Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser
20 25 30
Met Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val
35 40 45
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys
50 55 60
Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val
65 70 75 80
Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala
85 90 95
Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu
100 105 110
Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu
115 120 125
Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr
130 135 140
Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr
145 150 155 160
Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala
165 170 175
Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe
Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile
195 200 205
Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val
210 215 220
Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp
245 250 255
Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp
260 265 270
Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly
275 280 285
Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His
305 310 315 320
Val Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 234 <211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with S120G plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 234
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Gly
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 235 <211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A126E and T128K plus KRKKRKKRK peptide,
without N-terminal methionine <400> 235
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Glu Phe Lys Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 236
<211> 302 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with W134I plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 236
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Ile Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 237
<211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H138L plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 237
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val Leu Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with E171G plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 238
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
180
185
190
Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
ion 1 Q c; ion
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 239 <211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with Y173T plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 239
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Thr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 240
<211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 240
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 241
<211> 302 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 241
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 242 <211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with D197S and Q198A plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 242
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Ser Ala Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 243
<211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with L204Y plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 243
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Tyr Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 244
<211> 302 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with F230L plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 244
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 245
<211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with H231Y plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 245
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe Tyr Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 246
<211> 302
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Mutated EL188 with S234A plus KRKKRKKRK peptide, without N-terminal methionine
<400> 246
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ala Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 247
<211> 302 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with C135S plus KRKKRKKRK peptide, without
N-terminal methionine
<400> 247
Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly
20 25 30
Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile
50 55 60
Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp
85 90 95
Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu
100 105 110
Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser
115 120 125
Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala Lys Val Lys Asp Trp Ser Gly
130 135 140
Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro His Trp Leu Met Ala Cys Met
145 150 155 160
Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala
165 170 175
Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn
180 185 190
Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr
195 200 205
Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe Glu Met Trp Met Lys Arg Gly
210 215 220
Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser
245 250 255
Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys
260 265 270
Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys
275 280 285
Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val Ile Ser Tyr Leu Glu
290 295 300
<210> 248 <211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T plus SMAP peptide, without N-terminal
methionine
<400> 248
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Asn Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu
325
<210> 249
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G plus SMAP peptide, without N-terminal
methionine
<400> 249
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Phe His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 250 <211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with N187G and F230L plus SMAP peptide, without N-terminal methionine
<400> 250
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Ala Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu 325
<210> 251
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutated EL188 with A182T, N187G and F230 L plus SMAP peptide,
without N-terminal methionine
<400> 251
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Met
20 25 30
Asn Phe Arg Thr Lys Asn Gly Tyr Arg Asp Leu Gln Ala Leu Val Lys
35 40 45
Glu Leu Gly Leu Tyr Thr Gly Gln Ile Asp Gly Val Trp Gly Lys Gly
50 55 60
Thr Ser Ser Ser Thr Glu Thr Leu Leu Arg Gly Tyr Ala Glu Val Val
65 70 75 80
Gly Lys Asn Thr Gly Gly Ile Gly Leu Pro Thr Thr Ser Asp Ala Ser
85 90 95
Gly Tyr Asn Val Ile Thr Ala Leu Gln Arg Asn Leu Ala Phe Leu Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Thr Val Asp Gly Ile Trp Gly Asn Gly Thr Leu Ser
115 120 125
Gly Leu Asp Lys Ala Phe Glu Val Tyr Lys Glu Arg Tyr Arg Thr Pro
130 135 140
Thr Tyr Asp Ile Ala Trp Ser Gly Lys Val Ser Pro Ala Phe Thr Ala
145 150 155 160
Lys Val Lys Asp Trp Cys Gly Val His Val Pro Asn His Arg Ala Pro
165 170 175
His Trp Leu Met Ala Cys Met Ala Phe Glu Thr Gly Gln Thr Phe Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Lys Asn Ala Ala Gly Ser Glu Ala Tyr Gly Leu Ile Gln
195 200 205
Phe Met Ser Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Ile
210 215 220
Arg Ser Met Asp Gln Leu Thr Gln Leu Asp Leu Val Phe Lys Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Met Trp Met Lys Arg Gly Lys Arg Tyr Thr Gln Leu Glu Asp Phe
245 250 255
Tyr Leu Thr Ile Leu His Pro Ala Ser Val Gly Lys Lys Ala Asp Glu
260 265 270
Val Leu Phe Leu Gln Gly Ser Lys Ala Tyr Leu Gln Asn Lys Gly Phe
275 280 285
Asp Val Asp Lys Asp Gly Lys Ile Thr Leu Gly Glu Ile Ser Ser Thr
290 295 300
Leu Tyr Thr Thr Tyr Tyr Lys Gly Leu Leu Pro Glu Asn Arg His Val
305 310 315 320
Ile Ser Tyr Leu Glu 325
International Patent Application PCT/EP2014/074678 Applicant: Lysando AG
14November 2014
Формула изобретения (первоначально поданная)
1. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID N0:1, в которой SEQ ID NO: 1 отличается тем, что
XI может отсутствовать или являться любой аминокислотой, в частности М,
Х120
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности S или G
Х126
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности А или Е
Х128
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Т или К
Х134
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности W или I
Х135
может
являться
любой
аминокислотой,
предпочтительно S
Х138
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Н или L
Х171
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Е или G
Х173
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Y или Т
Х182
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности А или Т
Х187
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности N или G
Х197
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности D или S
Х198
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Q или А
Х204
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности L или Y
Х230
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности F или L
Х231
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности Н или Y
Х234
может
являться
любой
аминокислотой,
в частности S или А
и при этом полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID N0:183, и при этом полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции 155 в SEQ ID NO: 1.
2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что:
XI может отсутствовать или являться любой аминокислотой, в
частности М,
Х120
является S ли G
Х126
является А или Е
Х128
является Т или К
Х134
является W или I
Х135
может являться любой аминокислотой, предпочтительно S
Х138
является Н или L
Х171
является Е или G
Х173
является Y или Т
Х182
является А или Т
Х187
является N или G
Х197
является D или S
Х198
является Q или А
Х204
является L или Y
Х230
является F или L
Х231
является Н или Y, и/или
Х234
является S или А.
3. Полипептид по пп.1 или 2, отличающийся тем, что демонстрирует в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID N0:1 как минимум один из следующего перечня:
XI20 является G
XI26 является Е
XI28 является К
XI34 является I
XI35 не является С
XI38 является L
Х171 является G
Х173
является Т
Х182
является Т
Х187
является G
Х197
является S
Х198
является А
Х204
является Y
Х230
является L
Х231
является Y
Х234
является А.
4. Полипептид по по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что демонстрирует как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 98,75%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,5%, или даже 100% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.
5. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что демонстрирует в аминоксилотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90%, идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1, остаток глутаминовой кислоты в позиции 155.
6. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором последовательность, демонстрирующая как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID N0:1, отклоняется от последовательности SEQ ID N0:1 только в остатках XI, Х120, Х126, Х128, Х134, Х135, Х138, Х171, Х173, Х182, Х187Х197, Х198, Х204, Х230, Х231 и/или Х234.
7. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит последовательность SEQ ID NO: 1.
8. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI35 не является С.
9. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI35 является S.
10. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI20 является G.
11. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI26 является Е.
12. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI28 является К.
13. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х134 является I.
14. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI38 является L.
15. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х171 является G.
16. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х173 является Т.
17. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI82 является Т.
18. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI87 является G.
19. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI97 является S.
20. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х198 является А.
21. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х204 является Y.
22. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х230 является L.
23. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х231 является Y.
24. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором Х234 является А.
25. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI26 является Е и XI28 является К.
26. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором D197 является S и Q198 является А.
27. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI87 является G и Х230 является L.
28. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI82 является Т, XI87 является G и Х230 является L.
29. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором XI не является М.
30. Полипептид по любому из предшествующих пп., в котором SEQ ID NO: 1 является последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 4-35.
31. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 4-35.
32. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит дополнительно как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из амфипатичного пептида, катионного пептида, поликатионного пептида, гидрофобного пептида, натурального антимикробного пептида, суши-пептида и дефензина.
33. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит как минимум два различных удлинения аминокислотной
последовательности, выбираемых из группы: амфипатичный пептид, катионный пептид, поликатионный пептид, гидрофобный пептид, натуральный антимикробный пептид, суши-пептид и дефензин.
34. Полипептид по любому из пп.32-33, в котором как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности присутствует на N- или С-концах полипептида.
35. Полипептид по любому из пп.32-34, отличающийся тем, что содержит как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из: KRK и SEQ ID NOs: 36 - 106.
36. Полипептид по любому из пп.32-35, отличающийся тем, что содержит как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью SMAP-29, SEQ ID NO: 62 или с аминокислотной последовательностью KRKKRKKRK, SEQ ID NO: 40.
37. Полипептид по п.36, в котором последовательность SMAP-29, SEQ ID NO: 62, или аминокислотная последовательность KRKKRKKRK, SEQ ID NO: 40, расположена в полипептиде на N-терминальном конце последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.
38. Полипептид по любому из пп.32-37, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 107-142, и при этом не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 183, и при этом данный полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции, соответствующей позиции 155 в SEQ ID NO: 1, но предпочтительно демонстрирует остаток глутаминовой кислоты в упомянутой позиции.
34.
39. Полипептид по п.38, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,25%, или как минимум примерно 99,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 107-142.
40. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 107-142.
41. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит дополнительно маркерную последовательность.
42. Полипептид по п.41, в котором маркер расположен на С-терминальном конце аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум 90% идентичность последовательности с SEQ ID N0:1.
43. Полипептид по любому из пп.41-42, в котором маркер сцеплен с аминокислотной последовательностью, демонстрирующей как минимум 90% идентичность последовательности с SEQ ID N0:1 напрямую или через короткий линкер из 1 до 10 аминокислотных остатков, предпочтительно из 1 до 5 аминокислотных остатков, более предпочтительно из 1 до 2 аминокислот.
44. Полипептид по любому из пп.41-43, отличающийся тем, что содержит гистидиновый маркер His-метку, предпочтительно His-метку в соответствии с SEQ ID N0:143.
45. Полипептид по любому из пп.41-44, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 144-179, и при этом не содержит ни
34.
аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 183, и при этом данный полипептид не содержит мутацию Е155А в позиции, соответствующей позиции 155 в SEQ ID NO: 1, но предпочтительно демонстрирует остаток глутаминовой кислоты в упомянутой позиции.
46. Полипептид по п.45, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 95%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,25% или как минимум примерно 99,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 144-179.
47. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что имеет общую длину, не превышающую примерно 360 аминокислот, предпочтительно не превышающую примерно 340 аминокислот.
48. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 144-179.
49. Полипептид по любому из предшествующих пп., отличающийся тем, что расщепляет пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter.
50. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из пп.1-49.
51. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.50.
52. Клетка-хозяин, содержащая полипептид по любому из пп.1-49, нуклеиновую кислоту по п.50, и/или вектор по п.51.
46.
53. Композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-49, нуклеиновую кислоту по п.50, вектор по п.51 и/или клетку-хозяин по п.52.
54. Композиция по п.53, отличающаяся тем, что представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемые разбавитель, эксципиент или носитель.
46.
SEQ ID МО: 1
XNFRTKNGYRDLQALYKELGLYTGQIDGVWGKGTSSSTETLLRGYAEWGKNTGGIGLPT
TSDASGYN\1TALQRNLAFLGLYSLT\'DGRVGNGTLSGLDKAFE\'YKERYRTPTYDIAWX
GKVSPXFXAKVKDXXG\^\TNHRAPHmMACMAPETGQTFSPSQCI\"AAGSXAXGLIQFM
SPXAXDLX\TLS\'^SMXXLTQLDX\TKYFEMWMKRGKRYTQLEDFYLTrXXPAX\'GKK
ADE\'LFLQGSbCAYLQXKGFD\"DKDGKITLGEISSTLYTTYYKGLLPENRH\TSY
SEQ ID NO:2
KFRTKNGYRDLQ AL\'KELGL YTGQIDGVWGKGT S S STETLLRGYAE Y YGKHTGGIGLPTT S D AS GYXYIT AL QRNL AFLGL Y S L TYDGIWGXGTLS GLDKAF E Y YKERYRTPTYDIAWSG KY S P AFT AK YKD WC G YH YPNIIRAPHWLMAC MAFETGQTFS PS IKN AAGSE AY GLIQFMS PAANDLNYPL S YLRS MDQLTQLDL YFKYFE MUTvlKRGKRYTQLE DF YL TLFKP AS YGKKAD
E\XFLQGSKAYLQNKGFD\T3KDGKITLGEIS$TLYTTYYKGLLPENRH\7ISY
SEQ ID КО:3
M^RTKNGYRDLQAL\*KELGLYTGQIDGVWGKGTSS$TETLLRGYAEWGKNTGGIGLPT
TSDASGYN\'ITALQRNLAFLGLYSLTYDGm7GNGTLSGLDKAFEVYKERYRTPTYDIAWS
GKVSPAFTAK^DWCGVmTNHRAPHWLMACMAFETGQTFSPSIKKAAGSEAYGLIQFM
SPAAKDLN\TLSYIRSMDQLTQLDLVFKYFEM\\,MKRGKRYTQLEDFYLTIFHPASVGKKA
DEVLFLQGSKAYLQNKGFDYDKDGKITLGEISSTLYTTWKGLLPENRHVISY
Фиг.1
MEFJIKREKRKKFRYKKGYRDLQALYEE1GLYYGQIZ GY77GEGTS S2YE YLlRGYAEYYGFJs YGGI. G Ј^PAr]TAKVKr^G
SEQ ГО NO: 145
^FTYSYASG/Y^
JyyY г 9_L_rJ? r_:iLJiЈ 1 LLl^^l:^^AFi z L-A1! ? Jl-A z zTii? fAYA :5ГА:_5 У^/Л9^1^-zi-:^!?
G F E У D E Y G К F T L G EI с S Y L Y Y Y Y Г К G L1P E К В, H VIS Y Y E H H H H H H
SEQ ID КО: 146
HEREKFvIIEP.FJ\ FRYTJ\GYPJJ
AE12A:A-Јz^^
Ј_EAF Y Atr^EDjijg ^
GFEYDEYGKIYLGEIS S YLYYYYYKGLLPEKRHYI? YIEHHHHHE
SEQ ГО NO: 147
MKRKKREKRKEFRYKKGYRDLQALYEE1GLYYGQIZGV^GKGTSSЈYSYLLRGYAEWGKKYGGIG
Ai±-IYA5Y!LDii:^ A^Y.rIL^l^QA^^
GFEYDEYGKF YLGEI ? S YLYTYYYK SLYPE К RH YI ? YYEKFHFHH
Фиг.2а 2
SEOIDXO:14S
MKRKKRKERKKFR-^ &YF^LCA :%fI:YF2ii^*Y^
A^YYfYiLY^J^^
G FDVDK Y GKIT L GE I с S YLYY Y i YKGL1PEKRH~Y_" ? Y1EHHHHHH
SEQ ID HQ: 149
MKRKKRKKRKKFRYKKGYRDLQALVKElGLYYGQIYGV^GKGTgSFYEYLLRGYAEVVGKKYGGIS GFDYDEYGKIYLGEI?S TLYTYiYKGLYPEKRHYI? YLEHHHHHH
SEQ ID NO: 150
> lKRKKRK3^KKFRYjvKGYPJDLQA
ilY^rY^Yi^
GFDYDKYGK I YLGE I ? S YLYY YY YKGL YPEKRFY7I ? YYEHHHHHH
SEQ ID XO: 151
mkrkkrkkrkkfrykkgirdyqalvkelglyygqiigy?:gkgtsgЈyfyllrgyae"7vgkkygg:g
IYe:^AҐ1Y?Le5^ A^Y.=p;:l^:9J^^
GFEYDfYGGF.! YLGE I ? ? YL YY Y YYF.GL1 PEKRHYI ? YLEHHHHHH
Фиг.26 3
MKrjKKRJ^ERJQCFr
AiA"iЈL:A-§.!fY^^^^
j^ЈA,Ј,^AKVKp^
A-Yrf^ll^
SEQ ID NO: 153
MKRKKRrJ itF-MA^Y(tm)}^^^
JiSVI RSMDQ L_TQLDj^ ШТШIFJ1 PASҐjGKFADEV
GFDVDKDGKITLGEISSTLYTTYYKGLLPEHRHVISYLEНИКHHH
SEQ ID NO: 154
> IKRKKRF*KRKKFR.YKKGYRDLQALVF.ELGLYYGQII G\^'7GKGYS3Ј YFYLLRGYAEVyGKK YGGIG
:YYAFr5^?^
~±^?=^:1Е9А^9^
GFDYDKYGKIYLGEISSYLYYYYYKGLYPEKRHYISYLEHHHHHH
SEQ ID MO: 155
MKRKKRKKRKKFRYKKGYRDLQALVEELGLYYGQIYGV^GKGYSSSYEYLLRGYAETVGKKYGGIG ^ gl -g_- М'^АУ!7?. - A^Q^bAFLGLY g_L^YE^.I 'i^-^Tbg GLDKAFEVYKEPY'R Y FT Y DIAKoGKY
EJLY=IA^:9JkA9.^
GFEVDFYGKI YLGE I ? S YL YY Y YYKGLLPEKRHY7I ? "1 YE HHH HHH
Фиг.2в
SEP ID КО: 156
MKRKKRKKRKK fr тm g j ^l caiy^ee l ^^-rJfQ.1.1 YY^^YY1*!3 -_L Y!1. '^iY^YYi^Y GA= y ZL±Y^iЈZ^;LYi
^PARFJ^KVfUp4
Z~Yi:ЈLYyЈ9Z^1Y:A^
GFDVDKDGKITLGEISSTLYTTYYKGLLPENRHVISYLEHHHHHH
SEP ID NO: 157
MKRr'rURKKRrU'C FRT
:YLV1ЈYY^^
lj^/IRSYIDQ^^^^
JFE~/DEL GEIT L GEIS STLYT TYГК GL1PEКRHYIсYLEHHHHHH
SEP ID 'MO: ISO
merekrekrkkfryekgyrdlqalvee1gly ygqiz gv77gegts 3Ј yeyllrg". aewgkk yggig ZLAZЈYMZ0yYIZJI^
iYLYriTY^Yil^
AGY r Fi^iPPAY? r r AYi
GFEVDEYGEITLGEISSTLYTYYYKGLYPEKRHVISYLEHHHHHH
SEP ID NO: 158
MRGLRRLGF.KI AHGyTCKYGPTVLRI IRI AGGS're^
AA-SSEAYGL^^
ASV &KEADEVL^
Фиг.2г
MRGLRRLGKKIAHGYKCT
EL^FE2riKER^
SEQ ID NO: 160
MRGLRRLGRK1AHGVKP;YGGT""1RIIRIAGGSIIIKRRFKKGYRFLQALVP:ELGI-GGQIGG^GKGT RG-FEyY_KZ RY_R_YЈYY_:_; ^l^iYY-^bIJ^:TJi;l C= ZAYf YY^YYYf!ilYr Щ??}^1К^?^1Л IYL=_:1JJ
^Ј§'IiYY5kY^^^
ASVGKEADEV^
SEQ ID NO: 161
MRGLRRLGRKIAHGWT^GGTYIRIIR^ iL^§2pZPr?_Yr_Y-r
I1^EI:2YY^E1YYA^
aaisseaygl:^^
Фиг.2д
фиг. За
Фиг. 36
(19)
(19)
(19)
<220>
<220>
<220>
<220>
<220>
260
270
265
260
270
265
<220>
<220>
145
155
160
150
225
235
240
230
50 55 60
50 55 60
130 135 140
210 215 220
290
300
295
290
300
295
115
125
120
165 170 175
180
190
185
180
190
185
180
190
185
290
300
295
290
300
295
180
190
185
<220>
<220>
180
190
185
SEQ ГО NO: 144
SEQ ID NO: 152
SEQ ID NO: 152
SEQ Ш NO: 159
SEQ Ш NO: 159