(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к соединениям, обладающим агонистической активностью в отношении рецепторов глюкагона, GIP и GLP-1, и к их применению для лечения нарушений метаболизма.
Евразийское (21) 201690629 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07K14/575 (2006.01)
2016.10.31 C07K14/435 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2014.11.06
(54) СОЕДИНЕНИЯ, КОТОРЫЕ ПРЕДСТАВЛЯЮТ СОБОЙ ТРОЙНЫЕ АГОНИСТЫ, ГЛЮКАГОНА, GLP-1 И GIP
(31) (32) (33)
(86) (87) (71)
(72)
(74)
61/900,933
2013.11.06
PCT/EP2014/073971
WO 2015/067716 2015.05.14
Заявитель:
ЗИЛЭНД ФАРМА А/С (DK)
Изобретатель:
Юст Расмус, Рибер Дитте, Шелтон Анне Перниль Тофтенг (DK), Остерлунд Торбен (SE), Хансен Кейт, Йессен Лене (DK)
Представитель: Нилова М.И. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к соединениям, обладающим агонистической активностью в отношении рецепторов глюкагона, GIP и GLP-1, и к их применению для лечения нарушений метаболизма.
СОЕДИНЕНИЯ, КОТОРЫЕ ПРЕДСТАВЛЯЮТ СОБОЙ ТРОЙНЫЕ АГОНИСТЫ,
ГЛЮКАГОНА,СЬР-1 и GIP
Область техники
Настоящее изобретение относится к соединениям, обладающим агонистической активностью в отношении рецепторов глюкагона, GIP и GLP-1, и к их применению для лечения нарушений метаболизма.
Уровень техники
Диабет и ожирение - все более распространенные во всем мире проблемы со здоровьем, связанные с различными другими заболеваниями, в частности, с сердечнососудистыми заболеваниями (ССЗ), синдромом обструктивного апноэ во сне, инсультом, заболеванием периферических артерий, микрососудистыми осложнениями и остеоартритом. 246 миллионов человек в мире страдают диабетом, и к 2025 году согласно оценкам, 380 миллионов будут больны диабетом. Многие имеют дополнительные факторы риска в отношении сердечно-сосудистых заболеваний, включая высокие/аберрантные уровни липопротеинов низкой плотности (JlllHll) и триглицеридов, и низкий уровень липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). Сердечно-сосудистое заболевание приблизительно в 50% случаев является причиной смертности у людей, страдающих диабетом, и показатели заболеваемости и смертности, связанные с ожирением и диабетом, подчеркивают потребность медицины в разработке эффективных вариантов лечения.
Препроглюкагон представляет собой полипептид-предшественник из 158 аминокислот, который процессируется в разных тканях с образованием ряда различных пептидов, образующихся из проглюкагона, в том числе глюкагона, глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1 или GLP1), глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) и оксинтомодулина (ОХМ), которые вовлечены в широкий спектр физиологических функций, включая гомеостаз глюкозы, секрецию инсулина, опорожнение желудка и рост кишечника, а также регуляцию потребления пищи. Глюкагон представляет собой пептид из 29 аминокислот, соответствующий аминокислотам препроглюкагона с 33 по 61, тогда как GLP-1 образуется в виде пептида из 37 аминокислот, соответствующего аминокислотам препроглюкагона с 72 по 108.
Когда уровень глюкозы в крови начинает падать, глюкагон, гормон, вырабатываемый поджелудочной железой, посылает сигнал печени о необходимости расщепления гликогена и высвобождения глюкозы, в результате чего уровни глюкозы в крови повышаются до нормального уровня. В дополнение к контролю гомеостаза глюкозы, глюкагон снижает
массу тела, вероятно, путем подавления потребления пищи и стимуляции расхода энергии и/или липолиза. GLP-1 обладает другими видами биологической активности по сравнению с глюкагоном. Его действие включает стимуляцию синтеза и секреции инсулина, ингибирование секреции глюкагона и подавление потребления пищи. Было показано, что GLP-1 уменьшает гипергликемию (повышенные уровни глюкозы) у пациентов, страдающих диабетом. Эксендин-4, пептид из яда ящерицы, имеющий последовательность аминокислот, приблизительно на 50% идентичную последовательности аминокислот GLP-1, активирует рецептор GLP-1 и, как было показано, также уменьшает гипергликемию у пациентов, страдающих диабетом.
Глюкозозависимый инсулинотропный полипептид (GIP) представляет собой регуляторный пептид желудочно-кишечного тракта, состоящий из 42 аминокислот, который подобно GLP-1 стимулирует секрецию инсулина Р(бета) клетками поджелудочной железы в присутствии повышенных уровней глюкозы в крови. Он образуется в результате протеолитического процессинга из предшественника из 133 аминокислот, npenpoGIP.
Интересно, что новые агонисты, оказывающие двойное действие на рецепторы глюкагона и GLP-1, в настоящее время находятся на стадии доклинических исследований (см., например, WO2011/006497). По сравнению с аналогами GLP-1, двойные агонисты глюкагона-GLP-l, связаны с более значительной и устойчивой потерей массы тела в моделях у животных наряду с улучшением гликемического контроля. Таким образом, лекарственные средства на основе глюкагона могут быть перспективны для лечения сахарного диабета 2 типа и/или ожирения.
Инкретины представляют собой гормоны желудочно-кишечного тракта, которые регулируют уровень глюкозы в крови путем усиления секреции инсулина, стимулируемой глюкозой (Drucker, DJ and Nauck, MA, Lancet 368: 1696-705 (2006)). Два из пептидов, упомянутых выше, известны как инкретины: GLP-1 и GIP. Обнаружение инкретинов привело к разработке двух новых классов лекарственных средств для лечения сахарного диабета. Таким образом, в настоящее время на рынке присутствуют агонисты рецептора GLP-1 в форме для инъекций и соединения с малыми молекулами (ингибиторы DPP-4 для перорального введения), которые ингибируют ферментативную инактивацию как эндогенного GLP-1, так и GIP (агонисты рецептора GLP-1: Баета(tm), Бидуреон(tm), Ликсизенатид(tm) и Лираглутид(tm), и ингибиторы DPP-4: Янувия(tm), Галвус(tm), Онглиза(tm) и Тражента(tm)). Помимо сильного влияния GLP-1 и GIP на секрецию инсулина, указанные два пептида также оказывают долговременное действие. Данные, полученные из нескольких лабораторий, показывают, что агонисты рецептора GLP-1 (GLP-1 R) защищают Р-клетки поджелудочной железы путем ингибирования апоптоза и усиления пролиферации.
Например, исследование, проведенное Farilla et al, показало, что GLP-1 оказывал антиапоптические эффекты в островках у людей (Farilla, L, Endocrinology 144: 5149-58 (2003)). О таких эффектах GIP не сообщали до недавнего времени. В 2010 году Weidenmaier et al. сообщили, что DPP-4-резистентный аналог GIP оказывает антиапоптическиое действие (Weidenmaier, SD, PLOS One 5(3): е9590 (2010)). Интересно, что в модели диабета и ожирения у мышей комбинация агониста рецептора GLP-1 Лираглутида и ацилированного аналога GIP демонстрирует превосходный эффект по сравнению с лечением одним Лираглутидом или аналогом GIP (Gault, VA, Clinical Science 121: 107-117 (2011)).
Длительное лечение агонистами рецептора GLP-1 вызывает значительную потерю массы тела у людей, страдающих диабетом. Интересно, что длительное применение ингибиторов DPP-4 у аналогичных пациентов не вызывало соответственного изменения массы тела. Данные позволяют предположить (устное выступление Matthias Tschop в Американской диабетической ассоциации (ADA), 2011), что потеря массы тела, связанная с лечением агонистом GLP-1, усиливается при совместном введении GLP-1 и GIP. У грызунов совместное введение GLP-1 и GIP приводит к большей потере массы тела, чем лечение одним GLP-1 (Finan, Sci Transl Med. 2013; 5(209):209ral51. Irwin N et al, 2009, Regul Pept; 153: 70-76. Gault et al, 2011, Clin Sci; 121:107-117). Таким образом, в дополнение к улучшению уровня глюкозы в крови GIP может также усиливать GLP-1-опосредуемую потерю массы тела. На этом же выступлении было также показано, что комбинация агонистического действия в отношении рецепторов глюкагона, GLP-1 и GIP приводила к дополнительной потере массы тела у мышей DIO.
Путем комбинирования агонистического действия в отношении рецепторов глюкагона, GLP-1 и GIP в новых пептидах согласно настоящему изобретению, ожидают, что можно добиться лучшего гликемического контроля и достигать большей потери массы тела. Такие пептиды, вероятно, демонстрируют сильное действие инкретина и улучшенное сохранение Р-клеток благодаря GLP-1- и GIP-компонентам, а также увеличение потери массы тела благодаря всем трем компонентам за счет стимуляции расхода энергии, липолиза и снижения потребления пищи.
Краткое описание изобретения
В широком смысле настоящее изобретение относится к тройным агонистам глюкагона-GLP-l-GIP (называемым в настоящем описании "тройными агонистами"), которые содержат одну или более замен по сравнению с глюкагоном дикого типа и которые могут обладать свойством измененной, предпочтительно повышенной активности в отношении рецепторов GIP и GLP-1, например, оцененной в анализах эффективности in
vitro. Согласно настоящему изобретению было обнаружено, что агонисты рецепторов глюкагона-GLP-l-GIP тройного действия превосходят существующие продаваемые аналоги GLP-1, поскольку указанные тройные агонисты обеспечивают улучшенный гликемический контроль, возможное сохранение островков и Р-клеток, и усиленную потерю массы тела. Тройные агонисты, глюкагона-GLP-l-GIP можно применять в качестве лекарственных средств для лечения как сахарного диабета 2 типа, ожирения, так и связанных с ними нарушений.
Согласно настоящему изобретению предложен тройной агонист, имеющий общую Формулу I:
R^Tyr^-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-XlO-Ser-X^-Xn-Leu-XlS-Xie-Xn-Ala-XlQ-
X20-X21-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Yl-R2 (I),
где
R1 представляет собой Н- (т.е. водород), Ci-4 алкил, ацетил, формил, бензоил, трифторацетил или pGlu;
Х2 представляет собой Aib, Gly, Ala, D-Ala, Ser, N-Me-Ser, АсЗс, Ac4c или Ac5c;
XI0 представляет собой Туг или Leu;
Х12 представляет собой Lys, Не или *Р;
XI3 представляет собой Ala, Туг или Aib;
XI5 представляет собой Asp или Glu;
XI6 представляет собой Ser, Glu, Lys или *Р;
XI7 представляет собой Lys или *Р;
XI9 представляет собой Gin или Ala;
Х20 представляет собой Lys, His, Arg или *Р;
Х21 представляет собой Ala, Asp или Glu;
Х23 представляет собой Val или Не;
Х24 представляет собой Asn, Glu или *Р;
Х27 представляет собой Leu, Glu или Val;
Х28 представляет собой Ala, Ser, Arg или *Р;
Х29 представляет собой Aib, Ala, Gin или Lys;
ХЗО представляет собой Lys, Gly или отсутствует;
Y1 представляет собой Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser,Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser or Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser или отсутствует; *P представляет собой остаток Lys, Arg, Orn или Cys, в котором боковая цепь конъюгирована с липофильным заместителем;
R2 представляет собой -NH2 или -ОН;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения.
В некоторых вариантах реализации *F присутствует в одном из положений XI2, XI6
иХ17.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит только один остаток *F, который может присутствовать в любом из положений Х12, Х16, Х17, Х20, Х24 или Х28. Например, он может присутствовать в одном из XI2, Х16иХ17.
В некоторых вариантах реализации соединение может содержать один или более следующих наборов остатков:
К12 и Y13; 112 и Y13; К12 и А13; 112 и А13; или ?12 и Y13;
D15 и S16; D15 иЕ16;Е15 и К16; D15 H*F16;E15 И S16; илиЕ15 и ?16;
A19,H20HD21; А19, K20HD21; А19, R20HD21; Q19, К20иЕ21; А19, К20иЕ21; mniQ19,
R20 и А21; но особенно А19, Н20 и D21; А19, R20 и D21 или Q19, R20 и А21;
123 и Е24; V23 и Е24; или V23 и N24;
L27, R28 и А29; L27, S28 и А29; L27, А28 и Q29; Е27, S28 и А29; или V27 и А28, и Aib29;
Е15 иК17;
Е15 и ?17;
Е15 и ?17, HQ19;
Q19HE24;
Е16ИТ17, и019;и/или К16иТ17, HQ19.
Любой из данных наборов остатков или их комбинации можно комбинировать с: Aib2, Ser2 или Ас4с2, особенно Aib2; и/или ТугЮ или LeulO, особенно ТугЮ.
Положения с 1 по 29 могут иметь последовательность YSQGTFTSDYSKYLDSKAAHDFVEWLLRA; YSQGTFTSDYSKYLDYKAAHDFVEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDEKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEKKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLESKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDKKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE*FAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSYAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDSYAAHDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSKALDSKAAHDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSKYLESKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAKDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDEKAAKDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDSKAARDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEKKAQKEFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSKYLEKKAQKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEKKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSKALDEKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK*FAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE*FKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSYYLEKKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAHDFVNWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALEKYAQRAFVEWLLAQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDEYAAKDFIEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE*FAAKDFVEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE*FAAKDFIEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE*FAAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFT SD YSK YLD SKA AffDF VEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSYAAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK*FAQRAF VEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK*FAQRAFVNWLVA-Aib;
Y-Ac4 c-Q GTF T SD YSI YLDE*F A AKEFIEWLE S A; Y-Ac4c-QGTFT SDYSIALEK*FAQRAFVEWLLAQ; или Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK*FAQRAFVEWLLAQ.
В качестве альтернативы, до 4 положений, например, 1, 2, 3 или 4 положения, из положений с 1 по 29 могут отличаться от любой из конкретных последовательностей, представленных выше, в рамках Формулы I.
Например, в положениях с 1 по 29 могут отличаться до 4 положений, например, отличаться 1, 2, 3 или 4 положения от одной из следующих последовательностей: Y-Aib -Q GTF Т SD YSI YLEK*F A AKEF VEWLL S А; Y-Aib-QGTFТ SDYSIYLDE*FAAHDFVEWLLSА; или Y-Aib -Q GTF Т SD YS IALEK*F AQRAF VEWLL AQ.
Положения с 1 по 29 могут иметь последовательность: У80ОТРТ8ВУ8КУЬВ-К(Гексадеканоил-изоО1и)-КААНБРУЕ\?ЬЬКА;
У-А1Ь-дОТРТ8ВУ81УЬВЕ-К(Гексадеканоил-изо01и)-ААНБРУЕ\?ЬЬ8А; У-А1Ь-0ОТРТ8ВУ81УЬВ8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-ААНВРУЕ\?ЬЬ8А;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDS-K(reKcafleKaHOHfl-H3oGlu)-AAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGlTTSDYSIYLEK-K(reKcaAeKaHOHfl-H3oGlu)-AAKEFVEWLLSA;
У-А1Ь-0ОТРТ8ВУ81УЬЕ-К(Гексадеканоил-изоО1и)-КААКЕРУЕ\?ЬЬ8А;
У-А1Ь-0ОТРТ8ВУ8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-УЬЕККААКЕРУЕ\?ЬЬ8А;
Y-Aib-QGlTTSDYSIYLEK-K(reKcaAeKaHOM-H3oGlu)-AAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGlTTSDYSIYLEK-K(OKTafleKaHOM-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFVEWLLSA;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81УЬЕК-К([17-карбоксигептадеканоил]-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-
AAKEFVEWLLSA;
У-А1Ь-0ОТРТ8ВУ81УЬВК-К([17-карбоксигептадеканоил]-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-AQRAFVEWLLAQ;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81УЬВК-К([17-карбоксигептадеканоил]-изоО1и)-А0КАРУЕ\?ЬЬА0;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81УЬВК-К(Октадеканоил-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-А0КАТУЕ\?ЬЬА0;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81УЬВ-К(эйкозаноил-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-А0КАТУЕ\?ЬЬА0;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81АЬЕК-К([17-карбоксигептадеканоил]-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-
AQRAFVEWLLAQ;
У-А1Ь-0ОТТТ8ВУ81АЬЕК-К(Октадеканоил-изоО1и-Ре§3-Ре§3)-А0КАРУЕ\?ЬЬА0;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALE-K([19-Kap6oKCHHOHafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFVEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVAAib; Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-Dapa-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVA-Aib; Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K([19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib;
Y-Ac4c-QGTFT SD YSI YLDE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AAKEFIEWLESA;
Y-Ac4c-QGTFT SD YSI ALE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AQRAF VEWLL AQ; или
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK-K(19-кapбoкcигeптaдeкaнoил-изoGlu-PegЗ-Peg3) AQRAF VEWLLAQ.
Пептидный остов Формулы I может иметь последовательность: YSQGTFTSDYSKYLDSKAAHDFVEWLLRA; YSQGTFTSDYSKYLDYKAAHDFVEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF T SD YSIYLD SK A AHDF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SDYSIYLDEKAAHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLS AGP S S GAPPP S;
Y-Aib -Q GTF T SDYSIYLEKKAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS IYLE SK A AHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDKKAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDE*FAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD S*FAAHDF VEWLL S AGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDSYAAHDFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SD YSK ALD SK A AHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SDYSKYLESK A AHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SK A AKDF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDEKAAKDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SK A ARDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAQKEF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLEKK AQKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLLS A;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK ALDEK A AKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS IYLEKYAAKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS IYLEYKAAKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS*P YLEKK AAKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLL S AGP S S GAPPP S;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SK A AHDF VNWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDK*F AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S; Y-Aib -Q GTF T SDYS I ALERT AQRAF VEWLL AQK; Y-Aib -Q GTF T SDL SI ALERT AQRAF VEWLL AQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDEYAARDFIEWLESA; Y-Aib -Q GTF T SD YS EYEDEY A AKDF VEWLES A; Y-Aib -Q GTF T SD YS EYEDEY A AKDFIEWLE S A; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDEYAAREFIEWLESA;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SK AAHDF VEWLLR A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLR A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD S*F AAHDF VEWLLRA; Y-Aib -Q GTF T SDYS I YLEK*F AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I ALDK*F AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S;
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDEXPAAKEFIEWLESA; Y-Ac4c-QGTFTSDYSIALEK*PAQRAFVEWLLAQK; Y Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK*PAQRAFVEWLLAQGPSSGAPPPS; или
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK*P AQRAF VEWLLAQGPSSGAPPPS.
В качестве альтернативы, до 5 положений в последовательности пептидного остова могутт отличаться от одной из последовательностей, представленных выше, в рамках Формулы I. Во избежание неопределенности, последовательность, удовлетворяющая определению Y1, считается одним положением. Как правило, соединение отличается от эталонной последовательности только в 4 положениях в рамках Х1-Х29. Таким образом, если соединение отличается от эталонной последовательности в 5 положениях, одно из данных положений, как правило, представляет собой ХЗО или Y1.
В частности, до 5 положений в последовательности пептидного остова может отличаться от одной из последовательностей: Y-Aib -Q GTF Т SD YS IYLEKYAAKEF VEWLL S AGP S S GAPPP S; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDE*P AAHDF VEWLL S А; или Y-Aib -Q GTF T SDYS I ALERT AQRAF VEWLL AQK.
Пептидный остов Формулы I может иметь последовательность: YSQGTFTSDYSKYLD-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-KAAHDFVEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAHDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAHDFVEWLLSAGPSSGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDS-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAHDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAKEFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-KAAKEFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYS-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-YLEKKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKEFVEWLLSAGPSSGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLD-K(3ftK03aHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K([17-Kap6oKCHrenTafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALE-K([19-Kap6oKCHHOHafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFVEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVA-Aib-KPSSGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-Dapa-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVA-Aib-KPSSGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K([19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S;
Y- Ac4c-QGTFT SD YSI YLDE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AAKEFIEWLESA;
Y-Ac4c-QGTFT SD YSI ALE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AQRAFVEWLLAQK; или
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK-K(19-кapбoкcигeптaдeкaнoил-изoGlu-PegЗ-PegЗ)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S
Некоторые из групп Yl, когда присутствуют, могут обеспечивать повышенную стабильность in vivo, например, в сыворотке, и таким образом могут вносить вклад в период полувыведения аналога GIP. Без конкретного теоретического обоснования, полагают, что данные группы могут способствовать стабилизации трехмерной конформации молекулы и/или обеспечивать устойчивость к протеолитическому распаду.
Например, последовательности Yl: Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser, Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser и Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser обладают гомологией с С-концевой частью молекулы эксендина-4 и, по-видимому, вносят вклад в стабильность молекулы без сопутствующего обеспечения значительных уровней агонистической активности GLP-1.
Согласно настоящему изобретению также предложена нуклеиновая кислота, кодирующая пептид, имеющий последовательность Х1-Х30 Формулы I. Также предложена экспрессионная конструкция (также известная как вектор экспрессии), содержащая нуклеиновую кислоту согласно настоящему изобретению, функционально связанную с подходящими регуляторными элементами для направления экспрессии пептида, например, транскрипции и трансляции. Согласно настоящему изобретению также предложена клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту или конструкцию экспрессии и способная экспрессировать и возможно секретировать пептид.
Пептид может сам представлять собой соединение согласно настоящему изобретению, например, когда указанный пептид содержит только встречающиеся в
природе аминокислоты (т.е. протеиногенные аминокислоты), не содержит остатка *F, и в котором R1 и R2 представляют собой Н- и -ОН соответственно. В качестве альтернативы, пептид может представлять собой предшественник соединения согласно настоящему изобретению.
Согласно настоящему изобретению также предложена фармацевтическая композиция, содержащая тройной агонист, описанный в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват в смеси с носителем, предпочтительно с фармацевтически приемлемым носителем. Указанный тройной агонист может, например, представлять собой фармацевтически приемлемую соль присоединения кислоты.
Фармацевтическая композиция может быть представлена в виде жидкости, подходящей для введения путем инъекции или инфузии, или получена таким образом, чтобы вызывать медленное высвобождение указанного тройного агониста.
Согласно настоящему изобретению также предложен терапевтический набор, содержащий тройной агонист, описанный в настоящем документе, и устройство, содержащее тройной агонист, описанный в настоящем документе.
Согласно настоящему изобретению также предложен тройной агонист, описанный в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для применения в способе лечения, например, для применения для лечения и/или предотвращения нарушения метаболизма.
Согласно настоящему изобретению также предложено применение тройного агониста, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения нарушения метаболизма.
Согласно настоящему изобретению также предложен способ предотвращения и/или лечения нарушения метаболизма у субъекта, включающий введение тройного агониста, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанному субъекту.
Указанное нарушение метаболизма может представлять собой диабет или связанное с диабетом нарушение, или ожирение, или связанное с ожирением нарушение. Связь между ожирением и диабетом хорошо известна, поэтому данные состояния не обязательно являются отдельными или взаимоисключающими.
Связанные с диабетом нарушения включают резистентность к инсулину, нарушение толерантности к глюкозе, повышение уровня глюкозы натощак, преддиабет, диабет 1 типа, диабет 2 типа, гипертензию при гестационном диабете, дислипидемию, связанные с костями нарушения и их комбинации.
Связанные с диабетом нарушения также включают атеросклероз, артериосклероз, ишемическую болезнь сердца, заболевание периферических артерий и инсульт; или состояния, связанные с атерогенной дислипидемией, нарушения уровней жиров крови, повышенное кровяное давление, гипертензию, протромботическое состояние и провоспалительное состояние.
Связанные с костями нарушения включают, но не ограничиваются ими, остеопороз и повышенный риск перелома кости.
Нарушение уровней жиров крови может быть выбрано из высоких уровней триглицеридов, низкого уровня холестерина ЛПВП, высокого уровня холестерина ЛПНП и образования бляшек на стенках артерий или их комбинации.
Протромботическое состояние может быть выбрано из высоких уровней фибриногена в крови и высоких уровней ингибитора активатора плазминогена-1 в крови.
Провоспалительное состояние может представлять собой повышенный уровень С-реактивного белка в крови.
Связанные с ожирением нарушения включают воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и апноэ во сне, индуцированное ожирением, или могут быть связаны с состоянием, выбранным из атерогенной дислипидемии, нарушений уровней жиров крови, повышенного кровяного давления, гипертензии, протромботического состояния и провоспалительного состояния или их комбинации.
Подробное описание изобретения
Если в настоящем описании не определено иное, научные и технические термины, используемые в настоящей заявке, имеют значения, обычно понятные специалисту в данной области техники. Как правило, используемая терминология и методики химии, молекулярной биологии, биологии клетки и рака, иммунологии, микробиологии, фармакологии и химии белков и нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе, являются хорошо известными и обычно используемыми в данной области техники. Определения
Если не указано иное, для конкретных терминов, употребляемых в описании выше, приведены следующие определения.
На всем протяжении настоящего описания термин "содержать (включать)" или такие вариации, как "содержит (включает)" или "содержащий (включающий)" означает включение указанного целого числа (или компонентов) или группы целых чисел (или
компонентов), но не исключение какого-либо другого целого числа (или компонентов) или группы целых чисел (или компонентов).
Формы единственного числа включают множественное число, если в контексте явным образом не указано иное.
Термин "включая" означает "включая, но не ограничиваясь ими". Термины "включая" и "включая, но не ограничиваясь ими" являются взаимозаменяемыми.
Термины "пациент", "субъект" и "индивидуум" являются взаимозаменяемыми и относятся к животному, либо относящемуся к человеку, либо не относящемуся к человеку. Данные термины включают млекопитающих, таких как люди, приматы, сельскохозяйственные животные (например, коровы, свиньи), животные-компаньоны (например, собаки, кошки) и грызуны (например, мыши и крысы).
Термин "сольват" в контексте настоящего изобретения относится к комплексу определенной стехиометрии, образованному между растворенным веществом (в данном случае пептидным конъюгатом или его фармацевтически приемлемой солью согласно настоящему изобретению) и растворителем. В этой связи растворитель может, например, представлять собой воду, этанол или другие фармацевтически приемлемые, как правило, органические вещества с малыми молекулами, такие как, но не ограничиваясь ими, уксусная кислота или молочная кислота. Когда рассматриваемый растворитель представляет собой воду, такой сольват обычно называется гидратом.
Термин "агонист", употребляемый в контексте настоящего изобретения, относится к веществу (лиганду), которое активирует рассматриваемый тип рецепторов.
На всем протяжении настоящего описания и формулы изобретения используются традиционные однобуквенные и трехбуквенные обозначения для природных (или протеиногенных) аминокислот, а также общепринятые трехбуквенные обозначения для остальных (неприродных или "непротеиногенных") а-аминокислот, такие как Aib (а-аминоизомасляная кислота), Огп (орнитин) и D-Ala (D-аланин). Все аминокислотные остатки в пептидах согласно настоящему изобретению предпочтительно находятся в L-конфигурации за исключением случаев с точным указанием.
К числу последовательностей, описанных в настоящем документе, относятся последовательности, содержащие группу "Н-" на аминоконце (N-конце) последовательности, и либо группу "-ОН", либо группу "-ГчГШ" на карбоксиконце (С-конце) последовательности. В таких случаях и если не указано иное, группа "Н-" на N-конце рассматриваемой последовательности обозначает атом водорода (т.е. R1 = Н-), что соответствует наличию свободной первичной или вторичной аминогруппы на N-конце, в то время как группа "-ОН" или "-NH2" на С-конце последовательности (т.е. R2 = -ОН или -
МЪ) обозначает карбоксигруппу (-СООН) или амидогруппу (-CONH2) на С-конце соответственно.
На N-конце возможны другие группы R1, включая пироглутаминовую кислоту (pGlu; (8)-(-)-2-пирролидон-5-карбоновая кислота), С1-4 алкил, ацетил, формил, бензоил и трифторацетил.
Агонистическая активность в отношении рецепторов
Как упомянуто выше, соединения, описанные в настоящем документе, представляют собой тройные агонисты глюкагона-GIP-GLP 1. То есть они обладают агонистической активностью в отношении всех трех рецепторов: рецептора глюкагона, рецептора GIP и рецептора GLP-1.
В контексте настоящего изобретения термин "агонист" относится к веществу (лиганду), которое способно связываться с конкретным рецептором и активировать передачу сигнала данным рецептором. Таким образом, агонист рецептора GIP способен связываться с рецептором GIP (обозначаемым GIP-R) и активировать передачу сигнала данным рецептором, например, путем образования цАМФ или индукции высвобождения Са2+. Таким образом, агонистическая активность в отношении рецептора GIP может быть измерена путем оценки передачи сигнала рецептором GIP, которая может быть измерена, например, по образованию цАМФ или высвобождению Са2+.
Последовательность кДНК, кодирующая рецептор GIP человека, имеет номер доступа Genbank ВС101673.1 (GL75516688). Указанная кодируемая аминокислотная последовательность (включая сигнальный пептид) представляет собой: 1 MTTSPILQLL LRLSLCGLLL QRAETGSKGQ TAGELYQRWE RYRRECQETL AAAEPPSGLA
61 CNGSFDMYVC WDYAAPNATA RASCPWYLPW HHHVAAGFVL RQCGSDGQWG LWRDHTQCEN
121 PEKNEAFLDQ RLILERLQVM YTVGYSLSLA TLLLALLILS LFRRLHC TRN YIHINLFTSF
181 MLRAAAILSR DRLLPRPGPY LGDQALALWN QALAACRTAQ IVTQYCVGAN YTWLLVEGVY
241 LHSLLVLVGG SEEGHFRYYL LLGWGAPALF VIPWVIVRYL YENTQСWERN EVKAIWWIIR
301 TPILMTILIN FLIFIRILGI LLSKLRTRQM RCRDYRLRLA RSTLTLVPLL GVHEVVFAPV
361 TEEQARGALR FAKLGFEIFL SSFQGFLVSV LYCFINKEVQ SEIRRGWHHC RLRRSLGEEQ
421 RQLPERAFRA LPSGSGPGEV PTSRGLSSGT LPGPGNEASR ELESYC
(GenBank AAI01674.1 GL75516689). Ее можно использовать в любых анализах для
определения передачи сигнала GIP.
Подобным образом, соединения обладают агонистической активностью в отношении рецептора GLP-1 (GLP-1-R), т.е. они способны связываться с рецептором GLP-1 и активировать передачу сигнала данным рецептором, например, путем образования цАМФ или индукции высвобождения Са2+. Таким образом, агонистическая активность в отношении рецептора GLP-1 может быть измерена путем оценки передачи сигнала рецептором GLP-1, которая может быть измерена, например, по образованию цАМФ или высвобождению Са2+.
Рецептор GLP-1 может иметь последовательность рецептора глюкагоноподобного пептида 1 человека (GLP-1R), имеющую первичный номер доступа Р43220. Белок-предшественник (включая сигнальный пептид) имеет первичный номер доступа NP_002053.3; GI: 166795283 и имеет последовательность:
1 MAGAPGPLRL ALLLLGMVGR AGPRPQGATV SLWETVQKWR EYRRQCQRSL TEDPPPATDL
61 FCNRTFDEYA CWPDGEPGSF VNVSCPWYLP WASSVPQGHV YRFCTAEGLW LQKDNSSLPW
121 RDLSECEESK RGERSSPEEQ LLFLYIIYTV GYALSFSALV IASAILLGFR HLHCTRNYIH
181 LNLFASFILR ALSVFIKDAA LKWMYSTAAQ QHQWDGLLSY QDSLSCRLVF LLMQYCVAAN
241 YYWLLVEGVY LYTLLAFSVL SEQWIFRLYV SIGWGVPLLF VVPWGIVKYL YEDEGCWTRN
301 SNMNYWLIIR LPILFAIGVN FLIFVRVICI VVSKLKANLM CKTDIKCRLA KSTLTLIPLL
361 GTHEVIFAFV MDEHARGTLR FIKLFTELSF TSFQGLMVAI LYCFVNNEVQ LEFRKSWERW
421 RLEHLHIQRD SSMKPLKCPT SSLSSGATAG SSMYTATCQA SCS.
Подобным образом, соединения обладают агонистической активностью в отношении рецептора глюкагона (Glu-R), т.е. они способны связываться с рецептором глюкагона и активировать передачу сигнала данным рецептором, например, путем образования цАМФ или индукции высвобождения Са2+. Таким образом, агонистическая активность в отношении рецептора глюкагона может быть измерена путем оценки передачи
сигнала рецептором глюкагона, которая может быть измерена, например, по образованию цАМФ или высвобождению Са2+.
Рецептор глюкагона может иметь последовательность рецептора глюкагона человека (Glu-R), имеющую первичный номер доступа Р47871. Белок-предшественник (включая сигнальный пептид) имеет первичный номер доступа NP_000151.1; GL4503947 и имеет последовательность:
1 MPPCQPQRPL LLLLLLLACQ PQVPSAQVMD FLFEKWKLYG DQCHHNLSLL PPPTELVCNR
61 TFDKYSCWPD TPANTTANIS CPWYLPWHHK VQHRFVFKRC GPDGQWVRGP RGQPWRDASQ
121 CQMDGEEIEV QKEVAKMYSS FQVMYTVGYS LSLGALLLAL AILGGLSKLH CTRNAIHANL
181 FASFVLKASS VLVIDGLLRT RYSQKIGDDL SVSTWLSDGA VAGCRVAAVF MQYGIVANYC
241 WLLVEGLYLH NLLGLATLPE RSFFSLYLGI GWGAPMLFVV PWAVVKCLFE NVQCWTSNDN
301 MGFWWILRFP VFLAILINFF IFVRIVQLLV AKLRARQMHH TDYKFRLAKS TLTLIPLLGV
361 HEVVFAFVTD EHAQGTLRSA KLFFDLFLSS FQGLLVAVLY CFLNKEVQSE LRRRWHRWRL
421 GKVLWEERNT SNHRASSSPG HGPPSKELQF GRGGGSQDSS AETPLAGGLP RLAESPF
Во всех случаях, когда указаны последовательности белков-предшественников, конечно, следует понимать, что в анализах может быть использован зрелый белок, в котором отсутствует сигнальная последовательность.
Соединения согласно настоящему изобретению обладают биологической активностью по меньшей мере одного GIP, одного глюкагона и одного GLP-1, в частности, для лечения метаболических заболеваний, таких как диабет и ожирение. Ее можно оценить, например, в анализах in vivo, например, описанных в примерах, в которых уровень глюкозы в крови или другую биологическую активность определяют после лечения или подвергания тестируемого животного действию тройного агониста. В частности, соединения согласно настоящему изобретению могут быть способны улучшать гликемический контроль при введении субъекту, страдающему диабетом. В дополнение или в качестве альтернативы, они могут быть способны снижать массу тела при введении субъекту с избыточной массой тела или ожирением. В любом случае эффект может превосходить эффект, получаемый в
случае эквивалентного количества (по массе или молярному соотношению) GIP или GLP-1 человека дикого типа у сопоставимых субъектов при введении в соответствии с сопоставимым режимом дозирования.
Активность в анализах in vitro можно также использовать в качестве меры активности соединений. Как правило, соединения обладают активностью в отношении рецепторов глюкагона, GLP-1 и GIP (обозначаемых GCG-R, GLP-1-R и GIP-R соответственно). Значения ЕС50 можно использовать в качестве численной меры агонистической активности в отношении конкретного рецептора. Значение ЕС50 представляет собой меру концентрации соединения, необходимой для достижения половины максимальной активности данного соединения в конкретном анализе. Таким образом, например, можно считать, что соединение, демонстрирующее ЕС50 [GLP-1R] ниже ЕС50 [GLP-1R] нативного GIP в конкретном анализе, обладает более высокой активностью в отношении GLP-1R, чем GIP. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения ЕС50 GLP-1-R и/или ЕС50 GIP-R, и/или ЕС50 GCG-R ниже 1,0 нМ, ниже 0,9 нМ, ниже 0,8 нМ, ниже 0,7 нМ, ниже 0,6 нМ, ниже 0,5 нМ, ниже 0,4 нМ, ниже 0,3 нМ, ниже 0,2 нМ, ниже 0,1 нМ, ниже 0,09 нМ, ниже 0,08 нМ, ниже 0,07 нМ, ниже 0,06 нМ, ниже 0,05 нМ, ниже 0,04 нМ, ниже 0,03 нМ, ниже 0,02 нМ, ниже 0,01 нМ, ниже 0,009 нМ, ниже 0,008 нМ, ниже 0,007 нМ, ниже 0,006 нМ или ниже 0,005 нМ, например, при оценке с использованием анализа, описанного в примере 2. Липофильная группа
Соединение согласно настоящему изобретению может содержать остаток *Р, т.е. остаток, выбранный из Lys, Arg, Orn и Cys, в котором боковая цепь конъюгирована с липофильным заместителем.
Без конкретного теоретического обоснования, полагают, что указанный заместитель связывает белки плазмы (например, альбумин) в кровотоке, таким образом защищая соединения согласно настоящему изобретению от ферментативного расщепления и почечного клиренса, и тем самым увеличивая период полувыведения соединений. Он может также модулировать активность соединения, например, в отношении рецептора GIP, рецептора глюкагона и/или рецептора GLP-1.
Заместитель конъюгирован с функциональной группой на дальнем конце боковой цепи от альфа-углеродного атома. Таким образом, присутствие заместителя может снижать или полностью устранять обычную способность боковой цепи Lys, Arg, Orn или Cys участвовать во взаимодействиях, опосредуемых данной функциональной группой (например, внутри- и межмолекулярные взаимодействия). Таким образом, общие свойства соединения могут быть относительно нечувствительны к изменениям фактической
аминокислоты, присутствующей в виде остатка *F. Следовательно, полагают, что любой из остатков Lys, Arg, Orn и Cys может присутствовать в любом положении, где допускается *F. Однако в некоторых вариантах реализации может быть предпочтительным, чтобы аминокислотный компонент *F представлял собой Lys.
Таким образом, *F представляет собой остаток Lys, Arg, Orn или Cys, в котором боковая цепь конъюгирована с заместителем, имеющим формулу -Z1 или -Z2-Zl.
-Z1 представляет собой жирную цепь, содержащую на конце соединение -Х- с *F или
cZ2; где
-Х- представляет собой связь, -СО-, -SO- или -SO2-;
и возможно Z1 содержит полярную группу на конце цепи, дальнем от соединения -Х-; при этом указанная полярная группа содержит группу, представляющую собой карбоновую кислоту или биоизостер карбоновой кислоты, фосфоновую кислоту или сульфоновую кислоту;
и где -Z2-, если присутствует, представляет собой спейсер формулы:
-Y-V-X-
J п
соединяющий Z1 с *F; где:
каждый Y независимым образом представляет собой -NH, -NR, -S или -О, где R представляет собой алкил, защитную группу или образует связь с другой частью спейсера
Z2;
каждый X независимым образом представляет собой связь, СО-, SO- или SO2-;
при этом если Y представляет собой -S, X, с которым он связан, представляет собой связь;
каждый V независимым образом представляет собой двухвалентную органическую группу,
связывающую Y и X;
и п равен 1-10.
Группа Z1
Z1 представляет собой жирную цепь, содержащую соединение с *F или с Z2, обозначаемое в настоящем описании -Х-. -Х- может представлять собой, например, связь, ацил (-СО-), сульфинил (-SO-) или сульфонил (-SO2-). В случае, когда Z1 связан непосредственно с *F, т.е. когда Z2 не присутствует, предпочтительно -Х- представляет собой ацил (-СО-), сульфинил (-SO-) или сульфонил (-SO2-). Наиболее предпочтительно, -Х- представляет собой ацил (-СО-).
Z может дополнительно содержать полярную группу, при этом указанная полярная группа расположена на конце цепи, дальнем от соединения -Х-. Другими словами, указанное соединение расположено в со-положении по отношению к полярной группе. Полярная группа может быть связана непосредственно с концом жирной цепи или может быть связана через линкер.
Предпочтительно, полярная группа представляет собой кислотную или слабокислотную группу, например, карбоновую кислоту или биоизостер карбоновой кислоты, фосфонат или сульфонат. Полярная группа может иметь рКа от -2 до 12 в воде, более предпочтительно от 1 до 7, более предпочтительно от 3 до 6. Некоторые предпочтительные полярные группы имеют рКа от 4 до 5.
В качестве примера и без ограничения, полярная группа может содержать группу, представляющую собой карбоновую кислоту (-СООН) или биоизостер карбоновой кислоты, фосфоновую кислоту (-Р(0)(ОН)2) или сульфоновую кислоту (-SO2OH).
Предпочтительно, полярная группа, если присутствует, содержит карбоновую кислоту или биоизостер карбоновой кислоты. Подходящие биоизостеры карбоновых кислот известны в данной области техники. Предпочтительно, биоизостер содержит протон, имеющий рКа, аналогичный соответствующей карбоновой кислоте. Примеры подходящих биоизостеров могут включать, без ограничения, тетразол, ацилсульфомиды, ацилгидроксиламин и производные квадратной кислоты, представленные ниже (- показывает точку присоединения):
В настоящем описании термин "жирная цепь" относится к фрагменту, содержащему цепь атомов углерода, при этом указанные атомы углерода преимущественно содержат в качестве заместителей водород или водородоподобные атомы, например, углеводородную цепь. Такие жирные цепи часто называются липофильными, хотя очевидно, что замещение может изменять липофильные свойства молекулы в целом.
Жирная цепь может алифатической. Она может быть полностью насыщенной или может содержать одну или более двойных или тройных связей. Каждая двойная связь, если присутствует, может находиться в Е- или Z-конфигурации. Жирная цепь может также содержать одну или более циклоалкиленовых или гетероциклоалкиленовых групп по длине, и в дополнение или в качестве альтернативы, может содержать одну или более
ариленовых или гетероариленовых групп по длине. Например, жирная цепь может содержать фениленовую или пиперазиниленовую группу по длине, например, представленную ниже (где - показывает точки присоединения в цепи).
Жирная цепь может быть получена из жирной кислоты, например, она может быть получена из среднецепочечной жирной кислоты (MCFA) с алифатическим хвостом из 6-12 атомов углерода, длинноцепочечной жирной кислоты (LCFA) с алифатическим хвостом из 13-21 атомов углерода или жирной кислоты с очень длинной цепью (LCFA) с алифатическим хвостом из 22 атомов углерода или больше. Примеры линейных насыщенных жирных кислот, из которых могут быть получены подходящие жирные цепи, включают тридециловую (тридекановую) кислоту, миристиновую (тетрадекановую) кислоту, пентадециловую (пентадекановую) кислоту, пальмитиновую (гексадекановую) кислоту и маргариновую (гептадекановую) кислоту. Примеры линейных ненасыщенных жирных кислот, из которых могут быть получены подходящие жирные цепи, включают миристолеиновую кислоту, пальмитолеиновую кислоту, сапиеновую кислоту и олеиновую кислоту.
Жирная цепь может быть соединена с *F или с Z2 амидной связью, сульфинамидной связью, сульфонамидной связью или сложноэфирной связью, или эфирной, тиоэфирной или аминной связью. Соответственно, жирная цепь может содержать связь с *F или с Z2, или ацильную (-СО-), сульфинильную (-SO-) или сульфонильную (-SO2-) группу. Предпочтительно, жирная цепь имеет конец, содержащий ацильную (-СО-) группу, и соединена с *F или Z2 амидной или сложноэфирной связью.
В некоторых вариантах реализации Z1 представляет собой группу формулы:
A-B-Alk-X
где
А представляет собой водород или группу, представляющую собой карбоновую кислоту, биоизостер карбоновой кислоты, фосфоновую кислоту или сульфоновую кислоту; В представляет собой связь или линкер;
X представляет собой связь, ацил (-СО-), сульфинил (-SO-) или сульфонил (-SO2-); и Alk представляет собой жирную цепь, которая может содержать один или более заместителей. Указанная жирная цепь предпочтительно от 6 до 28 атомов углерода в длину (например, Сб-28алкилен), более предпочтительно от 12 до 26 атомов углерода в длину (например, Со-гбалкилен), более предпочтительно от 16 до 22 атомов углерода в длину
(например, С1б-22алкилен) и может быть насыщенной или ненасыщенной. Предпочтительно, Alk является насыщенной, т.е. предпочтительно Alk представляет собой алкилен.
Возможные заместители в жирной цепи могут быть независимым образом выбраны из фтора, Сь4алкила, предпочтительно метила; трифторметила, гидроксиметила, амино, гидроксила, Смалкокси, предпочтительно метокси; оксогруппы и карбоксила, и могут быть независимым образом расположены в любой точке вдоль цепи. В некоторых вариантах реализации каждый возможный заместитель выбран из фтора, метила и гидроксила. В случае, когда присутствует более одного заместителя, заместители могут быть одинаковыми или разными. Предпочтительно, количество заместителей составляет от 0 до 3; более предпочтительно жирная цепь не содержит заместителей.
В может представлять собой связь или линкер. Когда В представляет собой линкер, он может представлять собой циклоалкилен, гетероциклоалкилен, Сбарилен или С5-бгетероарилен, или Сбарилен-О-, или С5-бгетероарилен-0-
В случае, когда В представляет собой фенилен, он может быть выбран, например, из 1,2-фенилена, 1,3-фенилена, 1,4-фенилена, предпочтительно 1,4-фенилена (так что А-В-представляет собой заместитель, представляющий собой 4-бензойную кислоту, или биоизостер 4-бензойной кислоты). В случае, когда В представляет собой фенилен-О-, он может быть выбран, например, из 1,2-фенилен-О-, 1,3-фенилен-О-, 1,4-фенилен-О-, предпочтительно 1,4-фенилен-О. Каждый фенилен В может содержать один или более заместителей, выбранных из фтора, метила, трифторметила, амино, гидроксила и Сь4алкокси, предпочтительно метокси. Очевидно, что идентичность и положение заместителей могут быть выбраны для незначительного изменения рКа полярной группы. Подходящие электроноакцепторные или -донорные группы с индуктивным или мезомерным эффектом и их позиционные эффекты известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации В может представлять собой Cs-бгетероарилен, например, пиридинилен или тиофуранилен, и может содержать описанные заместители.
Например, в некоторых вариантах реализации А-В- может быть выбран из:
Предпочтительно, представляет собой Н- или НООС-, и В представляет собой связь.
Предполагается, что когда А представляет собой водород, В представляет собой связь, и Alk представляет собой не содержащий заместителей алкилен, A-B-Alk-представляет собой алкильную цепь формулы НзС-(СН2)п-
В некоторых вариантах реализации Z представляет собой ацильную группу формулы:
A-B-Alk-(CO)-или сульфонильную группу формулы:
A-B-Alk-(S02)-.
Предпочтительно, Z1 представляет собой ацильную группу формулы:
А-В-алкилен-(СО)-, где А и В являются такими, как определено выше.
В некоторых вариантах реализации А представляет собой -СООН, и В представляет собой связь. Соответственно, некоторые предпочтительные Z1 получены из длинноцепочечных насыщенных а,со-дикарбоновых кислот формулы НООС-(СНг) 12-22-СООН, предпочтительно длинноцепочечных насыщенных а,со-дикарбоновых кислот с четным числом атомов углерода в алифатической цепи. В некоторых других вариантах реализации А представляет собой Н, и В представляет собой связь. Соответственно, некоторые предпочтительные Z1 получены из длинноцепочечных насыщенных карбоновых кислот формулы НООС-(СН2)12-22-СНз, предпочтительно длинноцепочечных насыщенных карбоновых кислот с четным числом атомов углерода в алифатической цепи.
В качестве примера и без ограничения, Z1 может представлять собой: А-В-С1б-2оалкилен-(СО)-, где А представляет собой Н или -СООН, и В представляет собой связь, например:
17-карбоксигептад еканоил НООС-(СШ) i6-(CO)-; 19-карбоксинонадеканоил HOOC-(CH2)i8-(CO)-; Октадеканоил НзС-(СН2)1б-(СО)-; Эйкозаноил H3C-(CH2)i8-(CO)-;
Группа, представляющая собой карбоновую кислоту, если присутствует, может быть заменена на биоизостер, подробно описанный в настоящем документе. Группа Z2
Z2 представляет собой возможный спейсер, который соединяет Z1 с боковой цепью аминокислотного компонента *F. В наиболее общем виде, Z2, если присутствует, представляет собой спейсер, связанный на одном конце Y, который может представлять собой атом азота, кислорода или серы, а на другом конце X, который может представлять собой связь или ацил (-СО-), сульфинил (-SO-), сульфонил (-SO2-), или отсутствовать. Соответственно, Z2 может представлять собой спейсер формулы (- показывает точки присоединения):
I Y-V-X i
: L J n :
где:
Y может представлять собой -NH, -NR, -S или -О, где R может представлять собой алкил, защитную группу или может образовывать связь с другой частью спейсера, при этом оставшаяся валентность образует связь с Z1;
X может представлять собой связь, СО-, SO- или SO2-, при этом оставшаяся валентность образует связь с боковой цепью аминокислотного компонента *F;
V представляет собой двухвалентную органическую группу, связывающую Y и X;
и п может быть равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Когда п равен 2 или более, каждый Y, V и X не зависит от каждого другого Y, V и X.
Соответственно, Z2 может быть связан с каждой стороны амидными, сульфинамидными, сульфонамидными или сложноэфирными связями, или аминосвязями, эфирными или тиоэфирными связями в зависимости от природы Y и X, и соответствующих связывающих групп в Z1 и боковой цепи. Когда п равен 2 или более, каждый V может также быть связан с каждым смежным V описанными связями. Предпочтительно, связи представляют собой амиды, сложные эфиры или сульфонамиды, наиболее предпочтительно амиды. Соответственно, в некоторых вариантах реализации каждый Y представляет собой -NH или -NR, и каждый X представляет собой СО- или SO2. Наиболее предпочтительно, -Х- представляет собой ацил (-СО-).
В некоторых вариантах реализации Z2 представляет собой спейсер формулы -SA-, -SB- -SA-SB- ИЛИ -SB-SA-, где SA И SB ЯВЛЯЮТСЯ такими, как определено ниже.
В некоторых вариантах реализации Z2 выбран из -SA- ИЛИ -SB-SA-, т.е. [боковая 4enb]-Z2Zx представляет собой [боковая uenbJ-SA-Z1 или [боковая uenbJ-Se-SA-Z1. Группа Sa
SA может представлять собой один аминокислотный остаток или остаток производного аминокислоты, особенно остаток производного аминокислоты, содержащий сульфинил или сульфонил вместо карбоксигруппы на С-конце. В дополнение или в качестве альтернативы, указанный один аминокислотный остаток может содержать атом кислорода или серы вместо атома азота на N-конце. Предпочтительно, SA представляет собой один аминокислотный остаток.
В некоторых вариантах реализации аминокислота может быть выбрана из y-Glu, а-Glu, а-Asp, P-Asp, Ala, P-Ala (3-аминопропановая кислота), Dapa (2,3-диаминопропановая кислота), Dab (2,4-диаминобутановая кислота) и Gaba (4-аминобутановая кислота).
Предполагается, что в случае присутствия более одной группы, представляющей собой карбоновую кислоту, или аминогруппы соединение может находиться в любой группе по необходимости. Любые остатки карбоновой кислоты или аминокислоты, несвязанные в остатке, могут быть свободными, т.е. присутствовать в виде свободной карбоновой кислоты или первичного амина, или могут быть дериватизированы. Подходящая дериватизация известна в данной области техники. Например, группы, представляющие собой карбоновую кислоту, могут присутствовать в аминокислотных остатках SA В виде сложных эфиров, например, в виде сложных метиловых эфиров. Аминогруппы могут присутствовать в виде алкилированных аминов, например, метилированных, или могут быть защищены в виде амидных или карбаматных групп. Другие подходящие аминокислоты включают Р-А1а (3-аминопропановая кислота) и Gab а (4-аминобутановая кислота), и подобные го-аминокислоты.
Предполагается, что аминокислоты могут представлять собой D- или L-аминокислоты, или рацемическую, или энантиобогащенную смесь. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой L-аминокислоту. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой D-аминокислоту.
В некоторых предпочтительных вариантах реализации SA содержит заместитель, представляющий собой карбоновую кислоту, при этом его y-Glu, a-Glu, a-Asp и P-Asp, и сульфинильные и сульфонильные производные являются предпочтительными. Соответственно, в некоторых вариантах реализации аминокислотный остаток представляет собой:
где -Х- представляет собой -СО-, -SO-, -SO2-, предпочтительно -СО-, и а равен 1 или 2, предпочтительно 2. В некоторых вариантах реализации карбоновая кислота представляет собой сложный эфир, и аминокислотный остаток представляет собой:
где -Х- представляет собой -СО-, -SO-, -SO2-, предпочтительно -СО-, и а равен 1 или 2, предпочтительно 2, и R представляет собой Сь4алкил или Сварил. Предпочтительно, R представляет собой Смалкил, предпочтительно метил или этил, более предпочтительно этил.
Предпочтительная группа SA, содержащая карбоновую кислоту, представляет собой
y-Glu.
Предпочтительно, SA выбран из Dapa или y-Glu. Наиболее предпочтительно, SA представляет собой y-Glu. Группа Sb
SB может представлять собой линкер общей формулы:
J П
где Ри представляет собой полимерное звено, и п равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Один конец линкера SB представляет собой -NH, -NR, -S или -О, где R может представлять собой алкил, защитную группу или может образовывать связь с другой частью полимерного звена; тогда как другой конец представляет собой связь или СО-, SO- или SO2-. Соответственно, каждое полимерное звено Ри может быть связано с каждой стороны амидными, сульфинамидными, сульфонамидными или сложноэфирными связями, или аминосвязями, эфирными или тиоэфирными связями в зависимости от природы Y и X, и соответствующих связывающих групп в Z1, SA И Lys.
В некоторых вариантах реализации каждый Ри может независимым образом представлять собой звено формулы:
-Y-V-X-
где:
Y может представлять собой -NH, -NR, -S или -О, где R может представлять собой алкил, защитную группу или может образовывать связь с другой частью спейсера, при этом оставшаяся валентность образует связь с Z1;
X может представлять собой связь, СО-, SO- или SO2-, при этом оставшаяся валентность образует связь с боковой цепью *Р;
и V представляет собой двухвалентную органическую группу, связывающую Y и X.
В некоторых вариантах реализации V представляет собой а-углерод природной или неприродной аминокислоты, т.е. V представляет собой CHR^-, где RAA представляет
собой боковую цепь аминокислоты; или V представляет собой возможно содержащий заместители Ci-балкилен, или V представляет собой цепь, содержащую одну или более последовательных звеньев этиленгликоля, также известную как PEG-цепь, например, -СН2СН2-(ОСН2СН2)т-0-(СН2)р-, где т равен 0, 1, 2, 3, 4 или 5, и р равен 1, 2, 3, 4 или 5; когда X представляет собой СО-, р предпочтительно равен 1, 3, 4 или 5. Возможные заместители для алкилена включают фтор, метил, гидрокси, гидроксиметил и амино. Предпочтительные звенья Ри включают:
(i) . Одиночные аминокислотные остатки: Ри1;
(ii) . Дипептидные остатки: Ри11; и
(ш). Остатки амино-(РЕО) m-карбоновой кислоты: Ри111,
и могут присутствовать в любой комбинации или порядке. Например, SB может содержать один или более каждого из: Ри1, Ри11 и Ри111 в любом порядке, или может содержать одно или более звеньев только Ри1, Ри11 и Ри111, или одно или более звеньев, выбранных из Ри1 и Ри11, Ри1 и Риш или Ри11 и Риш.
(г). Одиночные аминокислотные остатки: Ри1
Каждый Ри1 может быть независимым образом выбран из любого природного или неприродного аминокислотного остатка и, например, может быть выбран из Gly, Pro, Ala, Val, Leu, He, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Gin, Asn, a-Glu, y-Glu, Asp, Ser Thr, Dapa, Gaba, Aib, P-Ala, 5-аминопентаноила, 6-аминогексаноила, 7-аминогептаноила, 8-аминооктаноила, 9-аминононаноила или 10-аминодеканоила. Предпочтительно, аминокислотные остатки Ри1 выбраны из Gly, Ser, Ala, Thr и Cys, более предпочтительно из Gly и Ser.
В некоторых вариантах реализации SB представляет собой -(Ри^п-, где п равен от 1 до 8, более предпочтительно от 5 до 7, наиболее предпочтительно 6. В некоторых предпочтительных вариантах реализации SB представляет собой -(Pu^n-, п равен 6, и каждый Ри1 независимым образом выбран из Gly или Ser, при этом предпочтительная последовательность представляет собой -Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly-. (И). Дипептидные остатки: Ри11
Каждый Ри11 может быть независимым образом выбран из любого дипептидного остатка, содержащего два природных или неприродных аминокислотных остатка, связанные амидной связью. Предпочтительные дипептидные остатки Ри11 включают Gly-Gly, Gly-Ser, Ser-Gly, Gly-Ala, Ala-Gly и Ala-Ala, более предпочтительно Gly-Ser и Gly-Gly.
В некоторых вариантах реализации SB представляет собой -(Puu)n- где п равен от 2 до 4, более предпочтительно 3, и каждый Ри11 независимым образом выбран из Gly-Ser и Gly-Gly. В некоторых предпочтительных вариантах реализации SB представляет собой
(Puu)n-, n равен 3, и каждый Ри11 независимым образом выбран из Gly-Ser и Gly-Gly, при этом предпочтительная последовательность представляет собой -(Gly-Ser)-(Gly-Ser)-(Gly-
Gly).
Аминокислоты, имеющие стереогенные центры, в пределах Ри1 и Ри11 могут быть рацемическими, энантиообогащенными или энантиочистыми. В некоторых вариантах реализации аминокислота или каждая аминокислота независимым образом представляет собой L-аминокислоту. В некоторых вариантах реализации аминокислота или каждая аминокислота независимым образом представляет собой D-аминокислоту. (Ш). Остатки амино-(РЕС) т-карбоновой кислоты: Ри111
Каждый Ри111 может независимым образом представлять собой остаток общей формулы:
где m равен 0, 1, 2, 3, 4 или 5, предпочтительно 1 или 2, и р представляет собой 1, 3, 4 или 5, предпочтительно 1.
В некоторых вариантах реализации m равен 1, и р равен 1, т.е. Ри111 представляет собой остаток 8-амино-3,6-диоксаоктановой кислоты (также известной как {2-[2-аминоэтокси]этокси}уксусная кислота и H2N-PEG3-COOH). В настоящем описании данный остаток обозначается -PEG3-.
Другие, более длинные PEG-цепи также известны в данной области техники. Например, 11-амино-3,6,9-триоксаундекановая кислота (также известная как H2N-PEG4-СООН или -PEG4-).
В некоторых вариантах реализации SB представляет собой -(Риш)п- где п равен от 1 до 3, более предпочтительно 2.
Наиболее предпочтительно, SB представляет собой -PEG3-PEG3-. Предпочтительные комбинации
Предполагается, что вышеуказанные предпочтения можно независимым образом комбинировать с получением предпочтительных групп -Z1 и -Z2-Zl.
Некоторые предпочтительные группы -Z1 и -Z2-Zl представлены ниже (в каждом случае - показывает точку присоединения к боковой цепи аминокислотного компонента
40:
(i) [17-карбоксигептадеканоил]-изоО!и-Ре§3-Ре§3
Специалисту хорошо известны подходящие методики получения соединений, используемые в контексте настоящего изобретения. Примеры подходящих химических взаимодействий см., например, в WO98/08871, WO00/55184, WO00/55119, Madsen et al. (J. Med. Chem. 2007, 50, 6126-32) и Knudsen et al. 2000 (J. MedChem. 43, 1664-1669). Клиническое применение
Соединения согласно настоящему изобретению могут обеспечивать перспективный вариант лечения метаболических заболеваний, включая ожирение и сахарный диабет (диабет). Диабет составляет группу метаболических заболеваний, характеризующихся гипергликемией вследствие дефектов секреции инсулина, действия инсулина или того и другого. Острые признаки диабета включают чрезмерную выработку мочи, возникающую в связи с этим компенсаторную жажду и увеличение потребления жидкости, нечеткое зрение, необъяснимую потерю массы тела, вялость и изменения энергетического метаболизма. Однако симптомы зачастую являются нетяжелыми или могут отсутствовать.
Хроническая гипергликемия при диабете связана с длительным повреждением, дисфункцией и недостаточностью различных органов, особенно глаз, почек, нервов, сердца и кровеносных сосудов. Диабет делится на диабет 1 типа, диабет 2 типа и гестационный диабет на основе патогенетических характеристик. Диабет 1 типа составляет 5-10% всех случаев диабета и вызывается аутоиммунным разрушением Р-клеток поджелудочной железы, секретирующих инсулин.
Диабет 2 типа составляет 90-95% случаев диабета и является результатом сложного набора нарушений метаболизма. Однако симптомы зачастую являются нетяжелыми или могут отсутствовать. Диабет 2 типа является следствием недостаточной эндогенной выработки инсулина для поддержания уровней глюкозы в плазме ниже диагностических порогов.
Гестационный диабет относится к любой степени нарушения толерантности к глюкозе, выявляемого во время беременности.
Преддиабет включает нарушение гликемии натощак и нарушение толерантности к глюкозе, и относится к тем состояниям, которые возникают, когда уровни глюкозы в крови повышены, но остаются ниже уровней, установленных для постановки клинического диагноза "диабет".
Большой процент людей с диабетом 2 типа и преддиабетом подвержены повышенному риску заболеваемости и смертности из-за высокой распространенности дополнительных метаболических факторов риска, включая абдоминальное ожирение (избыток жировой ткани вокруг внутренних органов брюшной полости), атерогенную дислипидемию (нарушения уровней жиров крови, включая высокие уровни триглицеридов, низкий уровень холестерина ЛПВП и/или высокий уровень холестерина ЛПНП, способствующий образованию бляшек на стенках артерий), повышенное кровяное давление (гипертензию), протромботическое состояние (например, высокий уровень фибриногена или ингибитора активатора плазминогена-1 в крови) и/или провоспалительное состояние (например, повышенный уровень С-реактивного белка в крови).
И наоборот, ожирение обеспечивает повышение риска развития преддиабета, диабета 2 типа, а также, например, некоторых видов рака, обструктивного апноэ сна и заболевания желчного пузыря. Дислипидемия связана с повышенным риском сердечнососудистого заболевания. Липопротеин высокой плотности (ЛПВП) имеет важное клиническое значение, поскольку существует обратная корреляция между концентрациями ЛПВП в плазме и риском развития атеросклеротического заболевания. Большая часть холестерина, откладываемого в атеросклеротических бляшках, поступает из ЛПНП и,
следовательно, повышенная концентрация липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) тесно связана с атеросклерозом. Соотношение ЛПВП/ЛПНП является клиническим показателем риска развития атеросклероза и, в частности, коронарного атеросклероза.
Соединения, применяемые в контексте настоящего изобретения, действуют как тройные агонисты глюкагона-GIP-GLPl. Тройной агонист может сочетать в себе действие глюкагона, например, на жировой метаболизм с действием GIP на улучшение гликемического контроля и действием GLP-1, например, на уровни глюкозы в крови и потребление пищи. Таким образом, указанные соединения могут действовать с ускорением устранения избытка жировой ткани, индуцированием устойчивой потери массы тела и улучшением гликемического контроля. Тройные агонисты рецепторов глюкагона-GIP-GLPl могут также действовать со снижением факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, таких как высокий уровень холестерина и таких как высокий уровень холестерина ЛПНП.
Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению, представляющие собой тройные агонисты, можно применять (отдельно или в комбинации) в качестве фармацевтических агентов для предотвращения увеличения массы тела, способствования потере массы тела, уменьшения избыточной массы тела или лечения ожирения (например, путем контроля аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии и липолиза), в том числе морбидного ожирения, а также связанных с ним заболеваний и состояний, включая, но не ограничиваясь ими, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и апноэ во сне, индуцированное ожирением. Указанные соединения можно также применять для лечения резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе, преддиабета, повышенного уровня глюкозы в крови натощак, диабета 2 типа, гипертензии, дислипидемии (или комбинации данных метаболических факторов риска), атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий и инсульта. Они все представляют собой состояния, которые могут быть связаны с ожирением. Однако влияние соединений, применяемых в контексте настоящего изобретения, на данные состояния может быть опосредовано, полностью или частично, влиянием на массу тела или может не зависеть от него.
Таким образом, соединения, представляющие собой тройные агонисты, можно применять (отдельно или в комбинации) для лечения и/или предотвращения любого из заболеваний, нарушений или состояний, описанных в настоящем документе, в том числе резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе, повышенного уровня глюкозы в крови натощак, преддиабета, диабета 1 типа, диабета 2 типа, гипертензии при гестационном диабете, дислипидемии или их комбинации. В некоторых вариантах
реализации связанное с диабетом нарушение выбрано из атеросклероза, артериосклероза, ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий и инсульта; или связано с состоянием, выбранным из атерогенной дислипидемии, нарушений уровней жиров крови, повышенного кровяного давления, гипертензии, протромботического состояния и провоспалительного состояния или их комбинации. В некоторых вариантах реализации нарушение уровней жиров крови выбрано из высоких уровней триглицеридов, низкого уровня холестерина ЛПВП, высокого уровня холестерина ЛПНП, образования бляшек на стенках артерий или их комбинации. В некоторых вариантах реализации протромботическое состояние выбрано из высоких уровней фибриногена в крови и высоких уровней ингибитора активатора плазминогена-1 в крови. В некоторых вариантах реализации провоспалительное состояние представляет собой повышенный уровень С-реактивного белка в крови. В некоторых вариантах реализации связанное с ожирением нарушение выбрано из воспаления, связанного с ожирением, заболевания желчного пузыря, связанного с ожирением, и апноэ во сне, индуцированного ожирением.
Соединения, представляющие собой тройные агонисты, можно также применять для лечения и/или предотвращения любого из заболеваний, нарушений или состояний, связанных с остеопорозом, связанным с диабетом, включая повышенный риск переломов костей. Наблюдаемое повышение риска переломов, вероятно, связано со снижением качества костей, а не минеральной плотности костей. Соответствующие механизмы по меньшей мере отчасти вследствие гипергликемии, нейропатии и более высокой частоты возникновения гиповитаминоза D еще не полностью поняты.
Согласно настоящему изобретению предложено применение описанного соединения, представляющего собой тройной агонист, для получения лекарственного средства для любого из видов клинического применения, описанных в настоящем документе. Ссылку на соединение для применения в любом таком способе следует рассматривать соответствующим образом.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения также предложен терапевтический набор, содержащий тройной агонист согласно настоящему изобретению, возможно в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено устройство, содержащее тройной агонист согласно настоящему изобретению, для доставки указанного тройного агониста субъекту. Фармацевтические композиции
Соединения согласно настоящему изобретению, представляющие собой тройные агонисты, или их соли, или сольваты могут быть представлены в виде фармацевтических
композиций, полученных для хранения или введения, которые, как правило, содержат терапевтически эффективное количество соединения, применяемого в контексте настоящего изобретения, или его соли, или сольвата в фармацевтически приемлемом носителе. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция представлена в виде жидкости, подходящей для введения путем инъекции или инфузии, или получена таким образом, чтобы вызывать медленное высвобождение соединения, представляющего собой тройной агонист.
Терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению будет зависеть, например, от пути введения, типа млекопитающего, которого лечат, и физических характеристик конкретного рассматриваемого млекопитающего. Эти факторы и их взаимосвязь для определения данного количества хорошо известны практикующему специалисту в области медицины. Данное количество и способ введения могут быть подобраны для достижения оптимальной эффективности, и могут зависеть от таких факторов, как масса тела, диета, сопутствующая лекарственная терапия, и других факторов, хорошо известных специалисту в области медицины. Величина дозы и режим дозирования, наиболее подходящие для применения у человека, могут быть определены на основе результатов, полученных согласно настоящему изобретению, и могут быть подтверждены в разработанных соответствующим образом клинических исследованиях.
Эффективная доза и протокол лечения могут быть определены традиционными способами, начиная с низкой дозы у лабораторных животных, а затем увеличивая дозу с одновременным мониторингом эффектов, а также путем систематического варьирования режима дозирования. При определении оптимальной дозы для конкретного субъекта клиницист может учитывать многочисленные факторы. Такие факторы, которые необходимо учитывать, известны специалисту. Термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает любой из стандартных фармацевтических носителей. Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического применения хорошо известны в области фармации и описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). Например, можно использовать стерильный физиологический раствор и фосфатный буферный раствор со слабокислым или физиологическим рН. Подходящие рН-буферные агенты могут представлять собой, например, фосфат, цитрат, ацетат, лактат, малеат, трис(гидроксиметил)аминометан (ТРИС), 7У-трис(гидроксиметил)метил-3-аминопропансульфоновую кислоту (TAPS), бикарбонат аммония, диэтаноламин, гистидин, который в некоторых вариантах реализации представляет собой предпочтительный буфер, аргинин, лизин или ацетат, или смеси
указанных веществ. Данный термин также включает любые агенты, перечисленные в Фармакопее США для применения у животных, включая людей.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к соли соединения. Соли включают фармацевтически приемлемые соли, такие как, например, соли присоединения кислоты и основные соли. Примеры солей присоединения кислоты включают гидрохлоридные соли, цитратные соли и ацетатные соли. Примеры основных солей включают соли, в которых катион выбран из щелочных металлов, таких как натрий и калий, щелочноземельных металлов, таких как кальций, и ионов аммония +N(R3)3(R4), где R3 и R4 независимо обозначают возможно содержащий заместители Ci-6-алкил, возможно содержащий заместители Сг-б-алкенил, возможно содержащий заместители арил или возможно содержащий заместители гетероарил. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences" ,17th edition. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 и в более поздних изданиях, а также в Энциклопедии фармацевтической технологии (Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology).
"Лечение" представляет собой подход для получения полезных или желаемых клинических результатов. Для целей настоящего изобретения полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (т.е. не ухудшение) течения заболевания, отсрочивание или замедление прогрессирования заболевания, уменьшение интенсивности или ослабление болезненного состояния и ремиссию (будь то частичная или полная), независимо от того, являются они детектируемыми или недетектируемыми. Термин "лечение" может также означать увеличение выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью в случае неполучения лечения. "Лечение" представляет собой вмешательство, осуществляемое с целью предотвращения развития или изменения патологии нарушения. Соответственно, в некоторых вариантах реализации термин "лечение" относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам. Те, кто нуждаются в лечении, включают тех, кто уже страдает нарушением, а также тех, у которых необходимо предотвратить указанное нарушение. Термин "лечение" означает ингибирование или ослабление увеличения патологии или симптомов (например, увеличение массы тела, гипергликемия) по сравнению с отсутствием лечения, и не обязательно подразумевает полную отмену соответствующего состояния.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть представлены в единичной лекарственной форме. В такой форме композиция разделена на единичные дозы, содержащие соответствующие количества активного компонента.
Единичная лекарственная форма может представлять собой препарат в упаковке, при этом указанная упаковка содержит дискретные количества препаратов, например, упакованные таблетки, капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Единичная лекарственная форма может также представлять собой капсулу, облатку или таблетку, или она может представлять собой подходящее количество любой из данных упакованных форм. Она может быть представлена в форме для инъекций, содержащей однократную дозу, например, в виде шприца-ручки. Композиции могут быть представлены в форме для любого подходящего пути и способа введения. Фармацевтически приемлемые носители или разбавители включают те, которые используют в составах, подходящих для перорального, ректального, назального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрикожное и трансдермальное) введения. Составы могут быть удобно представлены в единичной лекарственной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Для некоторых соединений, описанных в настоящем документе, могут особенно подходить подкожные или трансдермальные способы введения. Комбинированная терапия
В некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению можно вводить в рамках комбинированной терапии совместно по меньшей мере с одним другим агентом для лечения диабета, ожирения, дислипидемии или гипертензии.
В таких случаях два активных агента можно вводить вместе или по отдельности, и в составе одного фармацевтического состава или в виде отдельных составов. Таким образом, соединение (или его соль, или сольват), представляющее собой тройной агонист, можно применять в комбинации с противодиабетическим агентом, включая, но не ограничиваясь ими, метформин, сульфонилмочевину, глинид, ингибитор DPP-IV, глитазон или инсулин. В некоторых вариантах реализации соединение или его соль, или сольват применяют в комбинации с инсулином, ингибитором DPP-IV, сульфонилмочевиной или метформином, особенно с сульфонилмочевиной или метформином, для осуществления достаточного гликемического контроля. В некоторых предпочтительных вариантах реализации соединение или его соль, или сольват применяют в комбинации с инсулином или аналогом инсулина для осуществления достаточного гликемического контроля. Примеры аналогов инсулина включают, но не ограничиваются ими, Лантус(r), Новорапид(r), Хумалог(r), Новомикс(r), Актрафан НМ(r), Левемир(r) и Апидра(r).
В некоторых вариантах реализации соединение или его соль, или сольват, представляющий собой тройной агонист, можно также применять в комбинации с одним или более агентами против ожирения, включая, но не ограничиваясь ими, агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1, пептид YY или его аналог, антагонист каннабиноидного
рецептора 1, ингибитор липазы, агонист рецептора меланокортина 4 или антагонист рецептора меланиноконцентрирующего гормона 1.
В некоторых вариантах реализации соединение или его соль, или сольват, представляющий собой тройной агонист, можно применять в комбинации с антигипертензивным агентом, включая, но не ограничиваясь ими, ингибитор ангиотензинпревращающего фермента, блокатор рецепторов ангиотензина II, диуретические средства, бета-блокатор или блокатор кальциевых каналов.
В некоторых вариантах реализации соединение или его соль, представляющую собой тройной агонист, можно применять в комбинации с антидислипидемическим агентом, включая, но не ограничиваясь ими, статин, фибрат, ниацин и/или ингибитор абсорбции холестерина.
Нуклеиновые кислоты, векторы и клетки-хозяева
Согласно настоящему изобретению предложена нуклеиновая кислота, кодирующая пептид, имеющий последовательность Х1-Х30 Формулы I. Также предложена конструкция экспрессии (также известная как вектор экспрессии), содержащая нуклеиновую кислоту согласно настоящему изобретению, функционально связанную с подходящими регуляторными элементами для направления экспрессии пептида, например, транскрипции и трансляции. Согласно настоящему изобретению также предложена клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту или конструкцию экспрессии и способная экспрессировать и возможно секретировать пептид.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложен способ получения соединения согласно настоящему изобретению, при этом указанный способ включает культивацию клеток-хозяев, описанных выше, в условиях, подходящих для экспрессии указанного соединения, и очистку соединения, полученного таким образом.
Согласно настоящему изобретению также предложена молекула нуклеиновой кислоты, вектор экспрессии или клетка-хозяин, описанная выше, для применения в способе лечения и, в частности, для лечения нарушений метаболизма, рассмотренных в иных местах настоящего описания.
Синтез соединений согласно настоящему изобретению
Молекула нуклеиновой кислоты может кодировать соединение согласно настоящему изобретению, пептид, имеющий аминокислотную последовательность Х1-Х30 Формулы I, или пептид, который является предшественником соединения согласно настоящему изобретению.
Как правило, такие последовательности нуклеиновой кислоты будут получены в виде конструкций экспрессии, в которых кодирующая нуклеиновая кислота
функционально связана с соответствующими контрольными последовательностями для направления экспрессии. Указанная конструкция экспрессии может быть получена в случае клетки-хозяина, способной экспрессировать (и возможно также секретировать) предшественник, или в системе бесклеточной экспрессии.
Согласно настоящему изобретению предложен способ получения тройного агониста согласно настоящему изобретению, при этом указанный способ включает экспрессию аминокислотного предшественника тройного агониста и модификацию указанного предшественника с получением тройного агониста. Указанная модификация может включать химическую модификацию остатка Lys, Arg или Cys, присутствующего в положении *F, для введения липофильного фрагмента, модификацию N- или С-конца и/или модификацию любых других боковых цепей аминокислот в молекуле (например, для введения остатка не встречающейся в природе аминокислоты).
Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены стандартными способами синтеза пептидов, например, стандартным твердофазным или жидкофазным способом либо поэтапно, либо путем сборки фрагментов, с выделением и очисткой конечного продукта, представляющего собой пептидное соединение; или любыми комбинациями рекомбинантных способов и способов синтеза.
Может быть предпочтительным синтез пептидных соединений согласно настоящему изобретению посредством твердофазного или жидкофазного синтеза пептидов. В данном контексте можно упомянуть WO 98/11125 или, среди прочего, Fields, G.B. et al., "Principles and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis"; in: Synthetic Peptides, Gregory A. Grant (ed.), Oxford University Press (2nd edition, 2002) и примеры синтеза, приведенные в настоящем описании.
Примеры
Следующие примеры демонстрируют некоторые варианты реализации настоящего изобретения. Однако следует понимать, что данные примеры не подразумевают и не определяют полностью условия и объем настоящего изобретения. Данные примеры выполняли с использованием стандартных методик, хорошо известных и рутинных для специалиста в данной области техники, за исключением случаев, когда подробно описано иное. Следующие примеры представлены только в целях иллюстрации и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.
Содержание всех публикаций, патентов и заявок на патент, указанных в настоящем описании, полностью включено в настоящее описание посредством ссылки так же, как если
бы полное содержание каждой индивидуальной публикации, патента или заявки на патент было специально включено отдельно. Пример 1
Способы, применяемые согласно настоящему изобретению, описаны ниже за исключением случаев, когда явно указано иное. Общий синтез ацилированных тройных агонистов
Твердофазный синтез пептидов осуществляли на синтезаторе СЕМ Liberty Peptide Synthesizer с использованием стандартной Fmoc-химии. Смолу TentaGel S Ram (1 г; 0,25 ммоль/г) подвергали разбуханию в NMP (10 мл) перед применением и переносили из пробирки в реакционный сосуд с использованием ДХМ и NMP.
Реакция сочетания
Fmoc-аминокислоту в NMP/ДМФА/ДХМ (1:1:1; 0,2 М; 5 мл) добавляли к смоле в микроволновом блоке СЕМ Discover совместно с COMU/NMP (0,5 М; 2 мл) и DIPEA/ДМФА (2,0 М; 1 мл). Смесь для реакции сочетания нагревали до 75°С в течение 5 минут при одновременном барботировании смеси азотом. Затем смолу промывали ДМФА (4 х 10 мл).
Снятие защиты
К смоле добавляли пиперидин/NMP (20%; 10 мл) для первоначального снятия защиты и смесь нагревали с помощью микроволн (30 секунд; 40°С). Реакционный сосуд опустошали и добавляли вторую часть смеси пиперидин/ДМФА (20%; 10 мл), и снова нагревали (75°С; 3 минуты). Затем смолу промывали NMP (6 х 10 мл).
Ацилирование боковой цепи
В положение ацилирования вводили Fmoc-Lys(ivDde)-OH или, в качестве альтернативы, другую аминокислоту с ортогональной защитной группой боковой цепи. Затем проводили Вос-защиту N-конца пептидного остова с использованием Вос20 или, в качестве альтернативы, путем использования Вос-защищенной аминокислоты в последней реакции сочетания. В то время как пептид был еще связан со смолой, ортогональную защитную группу боковой цепи селективно отщепляли с использованием свежеприготовленного гидразина гидрата (2-4%) в NMP в течение 2 х 15 минут. Незащищенную боковую цепь лизина сначала подвергали реакции сочетания с Fmoc-Glu-OtBu или другой спейсерной аминокислотой, с которой снимали защиту пиперидином, и ацилировали липофильным фрагментом с использованием методики сочетания пептидов, описанной выше. Используемые сокращения являются следующими: COMU: 1-[(1-(циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)-диметиламино-морфолинометилен)]метанаминия гексафторфосфат
ivDde: 1 -(4,4-диметил-2,6-диоксоцикл огексилиден)-3 -метилбутил
Dde: 1 -(4,4-диметил-2,6-диоксоцикл огексилиден)-этил
ДХМ: дихлорметан
ДМФА: 7У,7У-диметилформамид
DTPEA: диизопропилэтиламин
EtOH: этанол
Et20: диэтиловый эфир
HATU: 7У-[(диметиламино)-1//-1,2,3-триазол[4,5-й]пиридин-1-илметилен]-7У-
метилметанаминий гексафторфосфат /У-оксид
MeCN: ацетонитрил
NMP: /У-метилпирролидон
ТФУ: трифторуксусная кислота
TIS: триизопропилсилан
Отщепление
Смолу промывали ЕЮН (3x10 мл) и Et20 (3x10 мл), и сушили до постоянной массы при комнатной температуре (r.t). Неочищенный пептид отщепляли от смолы путем обработки смесью ТФУ/ТК/вода (95/2,5/2,5; 40 мл; 2 часа; комнатная температура). Большую часть ТФУ удаляли при пониженном давлении, и неочищенный пептид осаждали и три раза промывали диэтиловым эфиром, и сушили до постоянной массы при комнатной температуре.
Очистка неочищенного пептида путем ВЭЖХ
Неочищенный пептид очищали до более 90% путем препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием PerSeptive Biosystems VISION Workstation, оснащенной колонкой С-18 (5 см; 10 мкм) и коллектором фракций, и пропускали со скоростью 35 мл/мин. с градиентом буфера А (0,1% ТФУ, водн.) и буфера В (0,1% ТФУ, 90% MeCN, водн.). Фракции анализировали путем аналитической ВЭЖХ и МС, и соответствующие фракции объединяли в пул и лиофилизировали. Конечный продукт характеризовали путем ВЭЖХ и МС.
Синтезированные соединения представлены в таблице 1:
H-Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLRA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLSA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLSAGPSSGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFVEWLESA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA-NH?
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(H3oGlu-reKcaAeKaHOHn)-AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQGPSSGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S -NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S -NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K(3ftK03aHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S -NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFVEWLLSAGPSSGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA-NH2
H- Y- Ac4c-QGTFT SD YS1YLDE-K([ 19-карбоксинонадеканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3)-AAKEFIEWLESA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S -NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K(OKTaAeKaHOHn-Dapa-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S -Mb
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K[19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVA-Aib-KPSSGAPPPS-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLAQK-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K[19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLAQK-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDLSIALEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK-NH2
H-Y-Ac4c-QGTFT SD YSIALEK-K([ 19-карбоксинонадеканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3)-AQRAF VEWLLAQK-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLRA-NH2
H-Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3 )-AQRAF VEWLLRA-NH2
H-Y-Ac4c-QGTFT SD YS1YLDK-K( 19-карбоксигептадеканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3)-AQRAFVEWLLAQGPSSGAPPPS-NH2
Пример 2
Анализ активности в отношении рецептора GIP (GIP-R), рецептора GLP-1 (GLP-1-R) и рецептора глюкагона (GCG-R) человека
Действие пептидных конъюгатов согласно настоящему изобретению in vitro оценивали путем измерения индукции цАМФ после стимуляции соответствующего рецептора глюкагоном, GIP, GLP1 или их аналогами, указанными в настоящем изобретении, с использованием набора для определения цАМФ AlphaSceen(r) от Perkin-Elmer в соответствии с инструкциями. Вкратце, клетки FIEK293, экспрессирующие GIP R, GLP-1 R или GCG R человека (стабильные линии клеток, полученные посредством трансфекции кДНК для GIP R, GLP-1 R или GCG R человека и отбора стабильных клонов), высевали в количестве 30000 клеток/лунка в 96-луночные микротитрационные планшеты, покрытые 0,01% поли-Ь-лизином, и выращивали в течение 1 дня в культуре в 200 мкл питательной среды (DMEM, 10% FCS, пенициллин (100 МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл)). В день проведения анализа питательную среду удаляли и клетки однократно
промывали 150 мкл буфера Тироде (соли Тироде (9,6 г/л), 10 мМ HEPES, рН 7,4). Затем клетки инкубировали в 100 мкл буфера для анализа (0,1% масс/об. обработанный щелочью казеин и 100 мкМ ШМХ в буфере Тироде), содержащего возрастающие концентрации контрольных и тестируемых соединений, в течение 15 минут при 37°С. Буфер для анализа удаляли и клетки лизировали в 80 мкл буфера для лизиса (0,1% масс/об. BSA, 5 мМ HEPES, 0,3% об./об. Твин-20) на лунку. Из каждой лунки 10 мкл лизированных клеток переносили в 384-луночный планшет и смешивали с 15 мкл смеси гранул (1 единица/15 мкл акцепторных гранул анти-цАМФ, 1 единица/15 мкл донорных гранул и 1 единица/15 мкл биотинилированного цАМФ в буфере для анализа). Планшеты перемешивали и инкубировали в темноте в течение одного часа при комнатной температуре перед измерением с использованием планшет-ридера Envision(tm) (Perkin-Elmer).
Результаты переводили в концентрации цАМФ с использованием стандартной кривой цАМФ, полученной в буфере KRBH, содержащем 0,1% (об./об.) ДМСО. Результирующие кривые цАМФ строили в виде зависимости абсолютных концентраций цАМФ (нМ) от log (концентрация тестируемого соединения) и анализировали с использованием программы подбора кривой XLfit.
Расчетные параметры для описания как эффективности, так и агонистической активности каждого тестируемого соединения в отношении рецепторов были следующими:
ЕС50, концентрация, вызывающая полумаксимальное повышение уровней цАМФ, отражающая активность тестируемого соединения. Результаты суммированы в таблице 2 и таблице 2Ь. Наиболее полные данные суммированы в таблице 2Ь.
0,24
0,012
0,10
0,28
0,020
0,11
0,084
0,012
0,076
0,083
0,0099
0,24
0,060
0,013
0,10
0,025
0,016
0,058
0,091
0,011
0,16
0,07
0,021
0,15
0,032
0,013
0,024
0,047
0,0094
0,057
0,18
0,014
0,10
0,18
0,028
0,76
0,13
0,11
0,14
0,10
0,091
0,28
0,25
0,28
0,30
0,070
0,030
0,040
0,12
0,16
0,070
0,054
0,058
0,16
0,060
0,050
0,15
0,15
0,022
0,024
0,087
0,013
0,011
0,044
0,015
0,15
0,010
0,24
0,24
0,013
0,014
0,058
0,058
0,013
0,16
0,16
0,021
0,15
0,15
0,013
0,024
0,024
0,009
0,057
0,057
0,015
0,03
0,76
0,76
0,11
0,14
0,14
0,10
0,091
0,28
0,25
0,28
0,30
0,03
0,04
0,04
0,16
0,07
0,07
0,058
0,16
0,16
0,05
0,15
0,15
0,022
0,024
0,024
0,013
0,011
0,011
0,015
0,15
0,15
0,009
0,114
0,58
0,007
0,0066
0,11
0,012
1,85
0,011
0,018
0,014
0,064
0,015
0,27
0,015
0,015
0,013
0,015
0,036
0,032
0,0098
0,014
0,036
0,011
0,16
0,13
0,013
0,013
0,19
0,033
0,026
1,4
0,007
0,007
0,114
NT: не тестировали
Ожидается, что приведенные в качестве примера соединения согласно настоящему изобретению будут демонстрировать активность в отношении GCG-R, близкую к активности нативного глюкагона. В то же время, ожидается, что указанные соединения будут демонстрировать сильную активацию GLP-1-R при ECso ниже 1 нМ. Аналогичным образом, ожидается, что данные пептиды будут также демонстрировать высокую активность в отношении GIP-R при ECso ниже или чуть выше 1 нМ. Пример 3
Фармакокинетика выбранных соединений у мышей Способ
Мышей C57BL/6J (самцы с массой тела приблизительно 25 г) подвергали однократному внутривенному (в/в) болюсному введению каждого тестируемого пептида.
После введения выбранных соединений (100 или 200 нмоль/кг) брали образцы крови через 0,08, 0,17, 0,5, 1, 4, 8, 16 и 24 часа после введения дозы. Образцы крови брали путем подъязычного кровопускания. Носитель представлял собой фосфатный буфер, содержащий маннитол (рН 7,5).
В каждый момент взятия образцов брали образцы у двух мышей, т.е. для каждого соединения включали 16 мышей. Мышей подвергали эвтаназии путем смещения шейных позвонков сразу после взятия образцов крови. Образцы плазмы анализировали после твердофазной экстракции (SPE) или осаждения путем жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС). Средние концентрации в плазме использовали для расчета фармакокинетических параметров с использованием некомпартментного подхода в Phoenix WinNonlin 6.3. Конечный элиминационный период полувыведения из плазмы (Т'/г) определяли как ln(2)/Xz, где Xz представляет собой величину наклона логарифмической регрессии log концентрации от времени во время конечной фазы. Результаты суммированы в таблице 3.
Таблица 3. Конечный элиминационный период полувыведения (ч) у мышей после внутривенного введения выбранных соединений
Соединение
ТУ2 (ч)
7,8
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Zealand Pharma A/S Just, Rasmus Riber, Ditte Shelton, Anne Osterland, Torben Hansen, Kate Jessen, Lene
<120> СОЕДИНЕНИЯ, КОТОРЫЕ ПРЕДСТАВЛЯЮТ СОБОЙ ТРОЙНЫЕ АГОНИСТЫ, rUIK)KArOHA,GLP-1 и GIP
<130> GRF/FP7076409 <140> PCT/EP2014/073971
<141> 2014-11-06
<150> US 61/900,933
<151> 2013-11-06 <160> 114
<170> PatentIn version 3.3
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<400> 1
Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 2
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 3
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 4
Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 5
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES <222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 5
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 6
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 6
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala Arg Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 7
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 8
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 8
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 9
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 9
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 10
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 10
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 11
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 12
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 12
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 13
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 13
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
14 29
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 14
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 15
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 15
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 16
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<223> Aib
<400> 16
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 17
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 17
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 18
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 18
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 19
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 19
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 20
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 20
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 21
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<400> 21
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 22
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 22
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
23 29
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 23
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 24
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223> Synthetic construct
(2)..(2)
Aib
<220>
<221> SITE
<222> (12)..(12)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 24
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 25
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 25
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 26
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 26
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 27
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 27
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 28
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 29
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 29
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
30 29
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 30
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Asp Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 31
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(isoGlu-Hexadecanoyl)
<400> 31
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
32 39
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 32
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 33
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu)
<400> 33
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 34
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 34
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 35
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(eicosanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 35
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 36
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 36
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 37
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 37
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 38
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 38
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 39
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223>
Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 39
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 40
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 41
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400> 41
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 42
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-Dapa-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400> 42
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser
20 25 30
<210> 43 <211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400> 43
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 44
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 45
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 46
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 46
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 47
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<222> (2)..(2) <223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 47
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 48
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 48
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 49
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 49
Туг Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
50 29
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 50
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 51
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 51
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 52
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Glucagon-GLP-1-GIP triple agonist compound -
General formula I of PCT/EP2014/073971
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Aib, Gly, Ala, D-Ala, Ser, N-Me-Ser, Ac3c, Ac4c or Ac5c
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is Tyr or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa is Lys, Ile or Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn
or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic
substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (13)..(13)
<223> Xaa is Ala, Tyr or Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)..(15)
<223> Xaa is Asp or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> Xaa is Ser, Glu, Lys or Psi, wherein Psi is a residue of Lys,
Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a
lipophilic substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Lys or Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or
Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic
substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (19)..(19)
<223> Xaa is Gln or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)..(20)
<223> Xaa is Lys, His, Arg or Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (21)..(21)
<223> Xaa is Ala, Asp or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (23)..(23)
<223> Xaa is Val or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> (24)..(24)
<223> Xaa is Asn, Glu or Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (27)..(27)
<223> Xaa is Leu, Glu or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (28)..(28)
<223> Xaa is Ala, Ser, Arg or Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<220>
<221> VARIANT
<222> (29)..(29)
<223> Xaa is Aib, Ala, Gln or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)..(30)
<223> May be present or absent. If present, Xaa is Lys or Gly
<220>
<221> VARIANT <222> (31)..(40)
<223> Y1, which may be present or absent. If present, up to 2 residues may be absent, and Y1 is SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, or SEQ ID NO: 58
<400> 52
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Leu Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
35 40
<210> 53
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52
<400> 53
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5 10
54 9
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52 <400> 54
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Ser 1 5
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52
<400> 55
Lys Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5 10
56 9
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52 <400> 56
Lys Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Ser 1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52
<400> 57
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct: Y1 of SEQ ID NO: 52 <400> 58
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Ser 1 5
<210> 59
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 59
Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 60
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 60
Туг Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 61
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 61
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Xaa Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 62
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 62
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Xaa Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 63
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 63
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 64
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 64
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Xaa
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 65 <211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 65
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Xaa Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 66
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 66
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 67
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223> Synthetic construct
(2)..(2)
Aib
<220>
<221> VARIANT <222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 67
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Asp Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 68
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 68
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 69
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT <222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 69
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Asp Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 70
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 70
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 71
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 71
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Xaa Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 72
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 72
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 73
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400>
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala 20 25
<210> 74
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 74
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Glu Ser Ala 20 25
<210> 75
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 75
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 76
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 76
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 77
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 77
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 78
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 78
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Xaa Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 79
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 79
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 80 <211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 80
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 81
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 81
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 82
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400> 82
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 83
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 83
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
20 25 30
<210> 84
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 84
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 85
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 85
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Lys Ala Ala His Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 86
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223>
Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 86
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 87
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala 20 25
<210> 88
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 88
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
89 29
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu)
<400> 89
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 90
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 90
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
91 28
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(eicosanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 91
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
92 29
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 92
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 93
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 93
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
94 28
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 94
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 95
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<223> Synthetic construct
(2)..(2)
Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 95
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 96
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 96
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 97
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys([17-carboxy-heptadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 97
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Arg Ala 20 25
<210> 98
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Aib
<400> 98
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala 20 25
99 28
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-Dapa-Peg3-Peg3)
<222> (28)..(28) <223> Aib
<400> 99
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala 20 25
<210> 100
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Aib
<400> 100
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala 20 25
<210> 101
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 101
Туг Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 102
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(19-carboxy-heptadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 102
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Lys Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 103
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Lys(Hexadecanoyl-isoGlu)
<400> 103
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Glu Trp Leu Leu Ser Ala Gly Pro Ser
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
<210> 104
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(eicosanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 104
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Gly Pro Ser Ser
20 25 30
Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 105
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 105
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys
<210> 106
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 106
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys 20 25
<210> 107
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-isoGlu-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Aib
<400> 107
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser Ser
20 25 30
Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 108
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys(Octadecanoyl-Dapa-Peg3-Peg3)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Aib
<400> 108
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Asn Trp Leu Val Ala Ala Lys Pro Ser Ser
20 25 30
Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 109
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is Ac4c
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Lys([19-carboxy-nonadecanoyl]-isoGlu-Peg3-Peg3)
<400> 109
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys 20 25
<210> 110
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa is Psi, wherein Psi is a residue of Lys, Arg, Orn or Cys in
which the side chain is conjugated to a lipophilic substituent
<400> 110
Tyr Ala Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Ala Leu Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Ala Gln Arg Ala Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln 20 25
<210> 111
<211> 466
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 111
Met Thr Thr Ser Pro Ile Leu Gln Leu Leu Leu Arg Leu Ser Leu Cys
1 5 10 15
Gly Leu Leu Leu Gln Arg Ala Glu Thr Gly Ser Lys Gly Gln Thr Ala
20 25 30
Gly Glu Leu Tyr Gln Arg Trp Glu Arg Tyr Arg Arg Glu Cys Gln Glu
35 40 45
Thr Leu Ala Ala Ala Glu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Cys Asn Gly Ser
50 55 60
Phe Asp Met Tyr Val Cys Trp Asp Tyr Ala Ala Pro Asn Ala Thr Ala
65 70 75 80
Arg Ala Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His His Val Ala Ala
85 90 95
Gly Phe Val Leu Arg Gln Cys Gly Ser Asp Gly Gln Trp Gly Leu Trp
100 105 110
Arg Asp His Thr Gln Cys Glu Asn Pro Glu Lys Asn Glu Ala Phe Leu
115 120 125
Asp Gln Arg Leu Ile Leu Glu Arg Leu Gln Val Met Tyr Thr Val Gly
130 135 140
Tyr Ser Leu Ser Leu Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ile Leu Ser
145 150 155 160
Leu Phe Arg Arg Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr Ile His Ile Asn Leu
165 170 175
Phe Thr Ser Phe Met Leu Arg Ala Ala Ala Ile Leu Ser Arg Asp Arg
180 185 190
Leu Leu Pro Arg Pro Gly Pro Tyr Leu Gly Asp Gln Ala Leu Ala Leu
195 200 205
Trp Asn Gln Ala Leu Ala Ala Cys Arg Thr Ala Gln Ile Val Thr Gln
210 215 220
Tyr Cys Val Gly Ala Asn Tyr Thr Trp Leu Leu Val Glu Gly Val Tyr
225 230 235 240
Leu His Ser Leu Leu Val Leu Val Gly Gly Ser Glu Glu Gly His Phe
245 250 255
Arg Tyr Tyr Leu Leu Leu Gly Trp Gly Ala Pro Ala Leu Phe Val Ile
260 265 270
Pro Trp Val Ile Val Arg Tyr Leu Tyr Glu Asn Thr Gln Cys Trp Glu
275 280 285
Arg Asn Glu Val Lys Ala Ile Trp Trp Ile Ile Arg Thr Pro Ile Leu
290 295 300
Met Thr Ile Leu Ile Asn Phe Leu Ile Phe Ile Arg Ile Leu Gly Ile
305 310 315 320
Leu Leu Ser Lys Leu Arg Thr Arg Gln Met Arg Cys Arg Asp Tyr Arg
325 330 335
Leu Arg Leu Ala Arg Ser Thr Leu Thr Leu Val Pro Leu Leu Gly Val
340 345 350
His Glu Val Val Phe Ala Pro Val Thr Glu Glu Gln Ala Arg Gly Ala
355 360 365
Leu Arg Phe Ala Lys Leu Gly Phe Glu Ile Phe Leu Ser Ser Phe Gln
370 375 380
Gly Phe Leu Val Ser Val Leu Tyr Cys Phe Ile Asn Lys Glu Val Gln
385 390 395 400
Ser Glu Ile Arg Arg Gly Trp His His Cys Arg Leu Arg Arg Ser Leu
405 410 415
Gly Glu Glu Gln Arg Gln Leu Pro Glu Arg Ala Phe Arg Ala Leu Pro
420 425 430
Ser Gly Ser Gly Pro Gly Glu Val Pro Thr Ser Arg Gly Leu Ser Ser
435 440 445
Gly Thr Leu Pro Gly Pro Gly Asn Glu Ala Ser Arg Glu Leu Glu Ser
450 455 460
Tyr Cys 465
<210> 112
<211> 463
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 112
Met Ala Gly Ala Pro Gly Pro Leu Arg Leu Ala Leu Leu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Met Val Gly Arg Ala Gly Pro Arg Pro Gln Gly Ala Thr Val Ser Leu
20 25 30
Trp Glu Thr Val Gln Lys Trp Arg Glu Tyr Arg Arg Gln Cys Gln Arg
35 40 45
Ser Leu Thr Glu Asp Pro Pro Pro Ala Thr Asp Leu Phe Cys Asn Arg
50 55 60
Thr Phe Asp Glu Tyr Ala Cys Trp Pro Asp Gly Glu Pro Gly Ser Phe
65 70 75 80
Val Asn Val Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Ala Ser Ser Val Pro
85 90 95
Gln Gly His Val Tyr Arg Phe Cys Thr Ala Glu Gly Leu Trp Leu Gln
100 105 110
Lys Asp Asn Ser Ser Leu Pro Trp Arg Asp Leu Ser Glu Cys Glu Glu
115 120 125
Ser Lys Arg Gly Glu Arg Ser Ser Pro Glu Glu Gln Leu Leu Phe Leu
130 135 140
Tyr Ile Ile Tyr Thr Val Gly Tyr Ala Leu Ser Phe Ser Ala Leu Val
145 150 155 160
Ile Ala Ser Ala Ile Leu Leu Gly Phe Arg His Leu His Cys Thr Arg
165 170 175
Asn Tyr Ile His Leu Asn Leu Phe Ala Ser Phe Ile Leu Arg Ala Leu
180 185 190
Ser Val Phe Ile Lys Asp Ala Ala Leu Lys Trp Met Tyr Ser Thr Ala
195 200 205
Ala Gln Gln His Gln Trp Asp Gly Leu Leu Ser Tyr Gln Asp Ser Leu
210 215 220
Ser Cys Arg Leu Val Phe Leu Leu Met Gln Tyr Cys Val Ala Ala Asn
225 230 235 240
Tyr Tyr Trp Leu Leu Val Glu Gly Val Tyr Leu Tyr Thr Leu Leu Ala
245 250 255
Phe Ser Val Leu Ser Glu Gln Trp Ile Phe Arg Leu Tyr Val Ser Ile
260 265 270
Gly Trp Gly Val Pro Leu Leu Phe Val Val Pro Trp Gly Ile Val Lys
275 280 285
Tyr Leu Tyr Glu Asp Glu Gly Cys Trp Thr Arg Asn Ser Asn Met Asn
290 295 300
Tyr Trp Leu Ile Ile Arg Leu Pro Ile Leu Phe Ala Ile Gly Val Asn
305 310 315 320
Phe Leu Ile Phe Val Arg Val Ile Cys Ile Val Val Ser Lys Leu Lys
325 330 335
Ala Asn Leu Met Cys Lys Thr Asp Ile Lys Cys Arg Leu Ala Lys Ser
340 345 350
Thr Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Thr His Glu Val Ile Phe Ala
355 360 365
Phe Val Met Asp Glu His Ala Arg Gly Thr Leu Arg Phe Ile Lys Leu
370 375 380
Phe Thr Glu Leu Ser Phe Thr Ser Phe Gln Gly Leu Met Val Ala Ile
385 390 395 400
Leu Tyr Cys Phe Val Asn Asn Glu Val Gln Leu Glu Phe Arg Lys Ser
405 410 415
Trp Glu Arg Trp Arg Leu Glu His Leu His Ile Gln Arg Asp Ser Ser
420 425 430
Met Lys Pro Leu Lys Cys Pro Thr Ser Ser Leu Ser Ser Gly Ala Thr
435 440 445
Ala Gly Ser Ser Met Tyr Thr Ala Thr Cys Gln Ala Ser Cys Ser
450 455 460
<210> 113
<211> 477
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 113
Met Pro Pro Cys Gln Pro Gln Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ala Cys Gln Pro Gln Val Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu
20 25 30
Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Gly Asp Gln Cys His His Asn Leu Ser
35 40 45
Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp Lys
50 55 60
Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser
65 70 75 80
Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val
85 90 95
Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly
100 105 110
Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys Gln Met Asp Gly Glu Glu Ile
115
120
125
Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Phe Gln Val Met
130 135 140
Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu
145 150 155 160
Ala Ile Leu Gly Gly Leu Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile
165 170 175
His Ala Asn Leu Phe Ala Ser Phe Val Leu Lys Ala Ser Ser Val Leu
180 185 190
Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly Asp
195 200 205
Asp Leu Ser Val Ser Thr Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys
210 215 220
Arg Val Ala Ala Val Phe Met Gln Tyr Gly Ile Val Ala Asn Tyr Cys
225 230 235 240
Trp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala
245 250 255
Thr Leu Pro Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly Trp
260 265 270
Gly Ala Pro Met Leu Phe Val Val Pro Trp Ala Val Val Lys Cys Leu
275 280 285
Phe Glu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp
290 295 300
Trp Ile Leu Arg Phe Pro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe
305 310 315 320
Ile Phe Val Arg Ile Val Gln Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala Arg
325 330 335
Gln Met His His Thr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu
340 345 350
Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe Val
355 360 365
Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Ala Lys Leu Phe Phe
370
375
380
Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu Tyr
385 390 395 400
Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu Arg Arg Arg Trp His
405 410 415
Arg Trp Arg Leu Gly Lys Val Leu Trp Glu Glu Arg Asn Thr Ser Asn
420 425 430
His Arg Ala Ser Ser Ser Pro Gly His Gly Pro Pro Ser Lys Glu Leu
435 440 445
Gln Phe Gly Arg Gly Gly Gly Ser Gln Asp Ser Ser Ala Glu Thr Pro
450 455 460
Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala Glu Ser Pro Phe
465 470 475
114 6
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic linker
<400> 114
Gly Ser Gly Ser Gly Gly
1 5
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, представляющее собой тройной агонист глюкагона-GLP-l-GIP, имеющее общую Формулу I:
R^Tyr^-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-XlO-Ser-Xn-XlS-Leu-XlS-Xie-Xn-Ala-Xig-X20-X21-Phe-X23-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-Yl-R2 (I), где
R1 представляет собой Н-, Ci-4 алкил, ацетил, формил, бензоил, трифторацетил или pGlu;
Х2 представляет собой Aib, Gly, Ala, D-Ala, Ser, N-Me-Ser, АсЗс, Ac4c или Ac5c;
XI0 представляет собой Туг или Leu;
Х12 представляет собой Lys, Не или *Р;
XI3 представляет собой Ala, Туг или Aib;
XI5 представляет собой Asp или Glu;
XI6 представляет собой Ser, Glu, Lys или *Р;
XI7 представляет собой Lys или *Р;
XI9 представляет собой Gln или Ala;
Х20 представляет собой Lys, His, Arg или *Р;
Х21 представляет собой Ala, Asp или Glu;
Х23 представляет собой Val или Не;
Х24 представляет собой Asn, Glu или *Р;
Х27 представляет собой Leu, Glu или Val;
Х28 представляет собой Ala, Ser, Arg или *Р;
Х29 представляет собой Aib, Ala, Gln или Lys;
ХЗО представляет собой Lys, Gly или отсутствует;
Y1 представляет собой Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser, Lys-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser,Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser или Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser, или отсутствует;
*P представляет собой остаток Lys, Arg, Orn или Cys, в котором боковая цепь конъюгирована
с липофильным заместителем;
R2 представляет собой -NH2 или -ОН;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения.
2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что *F присутствует в одном из положений Х12, Х16илиХ17.
3. Соединение по п. 1 или п. 2, отличающееся тем, что указанное соединение содержит только один остаток *F.
4. Соединение по любому из пп. 1-3, отличающееся тем, что указанное соединение содержит один или более следующих наборов остатков:
К12 и К12 и Y13; 112 и Y13; К12 и А13; 112 и А13; или ?12 и Y13; D15 и S16; D15 иЕ16;Е15 иК16; D15 и ?16; Е15 и S16; илиЕ15 и ?16; A19,H20HD21; А19, K20HD21; А19, R20HD21; Q19, К20иЕ21; А19, К20иЕ21; mniQ19, R20H А21;
123 и Е24; V23 и Е24; или V23 и N24;
L27, R28 и А29; L27, S28 и А29; L27, А28 и Q29; Е27, S28 и А29; или V27, А28 и Aib29;
Е15 иК17;
Е15 и ?17;
Е15, ?17 HQ19;
Q19HE24;
Е16, ?17 HQ19; ИЛИ
К16, WHQW.
5. Соединение по п. 4, дополнительно содержащее: Aib2, Ser2 или Ас4с2; и/или
ТугЮ; или LeulO.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что положения с 1 по 29 имеют последовательность:
YSQGTFTSDYSKYLDSKAAHDFVEWLLRA; YSQGTFTSDYSKYLDYKAAHDFVEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF Т SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDEKAAHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YS IYLE SK AAHDF VEWLL S A;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDKKAAHDFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDE*}'A AHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD S^AAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD S ? A AHDF VEWLL S A; Y-Aib-QGTFTSDYSKALDSKAAHDFVEWLLSA; Y-Aib-QGTFTSDYSKYLESKAAHDFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAKDFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDEKAAKDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SK A ARDF VEWLL S A;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEKKAQKEFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLEKKAQKEF VEWLL S A;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEKKAAKEFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SD YSK ALDEK A AKEF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEK*FAAKEF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLE*FKAAKEF VEWLL S A; Y-Aib-QGTFTSDYSYYLEKKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDSKAAHDFVNWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALEK^ AQRAF VEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE^AAKDFIEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE^FAAKDFVEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE^FAAKDFIEWLESA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE^AAKEFIEWLESA;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SK AAHDF VEWLLR A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLR A; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS^AAHDFVEWLLRA; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEK^ AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF T SD YS IALDKY AQRAF VNWL V A-Aib;
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDEXFAAKEFIEWLESA; Y-Ac4c-QGTFTSDYSIALEK*FAQRAFVEWLLAQ; или Y-Ac4 c-Q GTF T SDYS IYLDKY AQRAF VEWLL AQ.
7. Соединение по п. 1, которое отличается от любой из последовательностей, перечисленных по п. 6 не более чем в четырёх положениях.
8. Соединение по п. 7, которое не более чем в четырёх положениях отличается от одной из последовательностей:
Y-Aib -Q GTF Т SD YS I YLEK*F A AKEF VEWLL S A; Y-Aib-QGTFT SDYSIYLDE*FAAHDFVEWLLSА; и Y-Aib -Q GTF T SDYS I ALERT AQRAF VEWLL AQ.
9. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что пептидный остов Формулы I имеет последовательность:
YSQGTFTSDYSKYLDSKAAHDFVEWLLRA; YSQGTFTSDYSKYLDYKAAHDFVEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF Т SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLS A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDEKAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLS AGP S S GAPPP S;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS FYLE SK A AHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDKKAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDE^PAAHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD S*PAAHDF VEWLL S AGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDSYAAHDFVEWLLSA; Y-Aib -Q GTF T SD YSK ALD SK A AHDF VEWLL S A; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLESK A AHDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SK A AKDF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDEKAAKDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SKAARDF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAQKEF VEWLLS A; Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLEKK AQKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLLS A;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK ALDEK A AKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLEKK A AKEF VEWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKKAAKEF VEWLL S AGP S S GAPPP S;
Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SK A AHDF VNWLL S A;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLDKK AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S; Y-Aib -Q GTF T SDYS IALEKK AQRAF VEWLL AQK; Y-Aib -Q GTF T SDL SI ALEKK AQRAF VEWLL AQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDEKAAKDFIEWLESA; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLDEK A AKDF VEWLES A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLDEK A AKDFIEWLE S A; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDEKAAKEFIEWLESA;
Y-Aib -Q GTF T SD YSK YLD SK AAHDF VEWLLR A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SKA AHDF VEWLLR A; Y-Aib -Q GTF T SD YS I YLD SK AAHDF VEWLLRA; Y-Aib -Q GTF T SDYS IYLEKK AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib -Q GTF T SDYS IALDKK AQRAF VNWLV A-Aib -KP S S GAPPP S;
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDEKAAKEFIEWLESA; Y-Ac4c-QGTFTSDYSIALEKKAQRAFVEWLLAQK; или Y-Ac4 c-Q GTF T SDYS IYLDKK AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S.
10. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что пептидный остов Формулы I имеет последовательность, которая отличается не более чем в пяти положениях от одной из последовательностей, представленных в п. 10.
11. Соединение по п. 10, которое отличается не более чем в пяти положениях от одной из последовательностей:
Y-Aib -Q GTF Т SD YS I YLEKK A AKEF VEWLL S AGP S S GAPPP S; Y-Aib -Q GTF T SD YS FYLDEK AAHDF VEWLL S А; или Y-Aib -Q GTF T SDYS IALEKK AQRAF VEWLL AQK.
12. Соединение по любому из пп. 1-11, отличающееся тем, что К представляет собой остаток Lys, в котором боковая цепь конъюгирована с липофильным заместителем.
13. Соединение по любому из пп. 1-12, отличающееся тем, что указанный липофильный заместитель имеет формулу -Z1 или -Z2-Zx, где:
-Z1 представляет собой жирную цепь, содержащую на конце соединение -Х- с К или
cZ2; где
-Х- представляет собой связь, -СО-, -SO- или -SO2-;
и необязательно Z1 имеет полярную группу на конце цепи, дальнем от соединения -Х-; указанная полярная группа содержит группу, представляющую собой карбоновую кислоту или биоизостер карбоновой кислоты, фосфоновую кислоту или сульфоновую кислоту;
и где -Z2-, если присутствует, представляет собой спейсер формулы:
-Y-V-X-
соединяющий Z1 с К; где:
каждый Y независимым образом представляет собой -NH, -NR, -S или -О, где R представляет собой алкил, защитную группу или образует связь с другой частью спейсера
Z2;
каждый X независимым образом представляет собой связь, СО-, SO- или SO2-;
при условии, что Y представляет собой -S, X, с которым он связан, представляет собой
связь;
каждый V независимым образом представляет собой двухвалентную органическую группу, связывающую Y и X; и п равен 1-10.
14. Соединение по п. 13, отличающееся тем, что указанный липофильный заместитель имеет формулу -Z2-Zl.
15. Соединение по п. 12 или п. 14, отличающееся тем, что Z1 представляет собой А-В-алкилен-СО-, где А представляет собой Н или -СООН, и В представляет собой связь.
16. Соединение по п. 15, отличающееся тем, что Z1 представляет собой A-B-Ci6-2оалкилен-(СО)-.
17. Соединение по любому из пп. 13-16, отличающееся тем, что Z1 представляет собой: гексадеканоил; 17-карбоксигептадеканоил [HOOC-(CH2)i6-(CO)-];
(ii) [ 17-карбоксигептадеканоил]-изоС1и
19-карбоксинонадеканоил [HOOC-(CH2)i8-(CO)-]; Октадеканоил [НзС-(СНг)1б-(СО)-]; или Эйкозаноил [H3C-(CH2)i8-(CO)-].
18. Соединение по любому из пп. 13-17, отличающееся тем, что Z2 содержит остаток, выбранный из rooGlu или Dapa.
19. Соединение по п. 13, отличающееся тем, что -Z1 или -Z2-Zl представляет собой: (i) [17-карбоксигептадеканоил]-изо01и-Ре§3-Ре§3
18.
(v) [19-карбоксинонадеканоил]-H3oGlu-Peg3-Peg3
20. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что положения с 1 по 29 имеют последовательность: ?80ОТРТ8Б?8КУЬВ-К(Гексадеканоил-изоО1и)-КААНВРУЕ\?ЬЬКА;
?-А1Ь-0ОТРТ8Б?81УЬВЕ-К(Гексадеканоил-изоО1и)-ААНВРУЕ\?ЬЬ8А; ?-А1Ь-0ОТРТ8В?81УЬВ8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-ААНВРУЕ\?ЬЬ8А;
?-А1Ь-0СТРТ8В?8К?ЬВ8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-ААНВРУЕ\?ЬЬ8А; ?-А1Ь-0ОТРТ8В?81УЬЕК-К(Гексадеканоил-изоО1и)-ААКЕРУЕ\?ЬЬ8А; ?-А1Ь-0ОТЕТ8В?81УЬЕ-К(Гексадеканоил-изоО1и)-КААКЕЕУЕ\?ЬЬ8А; ?-А1Ь-0ОТЕТ8В?8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-УЬЕККААКЕЕУЕ\?ЬЬ8А;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKEF VEWLLS А;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLD-K(3ftK03aHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K([17-Kap6oKCHrenrafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALE-K([19-Kap6oKCHHOHafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFVEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-Dapa-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K([19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib;
Y- Ac4c-QGTFT SD YSI YLDE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3)-AAKEFIEWLESA;
Y-Ac4c-QGTFT SD YSI ALE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AQRAF VEWLL AQ; или
Y-Ac4c-QGTFTSDYSrYLDK-K(19-Kap6oKCHrenrafleKaHOHfl-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQ.
21. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что пептидный остов Формулы I имеет последовательность: YSQGTFTSDYSKYLD-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-KAAI^DFVEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAI^DFVEWLLSA;
У-А1Ь-0ОТРТ8ОУ81УЕО8-К(Гексадеканоил-изоО1и)-
А AHDF VEWLL SAGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDS-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAI^DFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-AAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-KAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYS-K(Гeкcaдeкaнoил-изoGlu)-YLEKKAAKEFVEWLLSA;
Y-Aib-QGTFTSDYSrYLEK-K(TeKcaAeKaHOHfl-H3oGlu)-
AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS;
У-А1Ь-0ОТРТ8ОУ81УЕЕК-К(Октадеканоил-изоО1и^З^З)-AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLEK-K([17-кapбoкcигeптaдeкaнoил]-изoGlu-PegЗ-PegЗ)-AAKEFVEWLLS AGPS SGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLD-K(3ftK03aHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLL AQGP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALEK-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALE-K([19-Kap6oKCHHOHafleKaHOHfl]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDLSIALE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAFVEWLLAQK;
Y-Aib-QGTFTSDYSKYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFVEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAKDFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-
AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AAKEFIEWLESA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLDS-K(reKcaAeKaHOHn-H3oGlu)-AAHDFVEWLLRA; Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIYLE-K([17-Kap6oKCHrenTaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VEWLLRA;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALD-K(OKTaAeKaHOHn-Dapa-Peg3-Peg3)-AQRAFVNWLVA-Aib-KPSSGAPPPS;
Y-Aib-QGTFTSDYSIALDK-K([19-Kap6oKCHHOHaAeKaHOHn]-H3oGlu-Peg3-Peg3)-AQRAF VNWL V A-Aib -KP S S GAPPP S;
Y- Ac4c-QGTFT SD YSI YLDE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AAKEFIEWLESA;
Y-Ac4c-QGTFT SD YSI ALE-K([ 19-карбоксинонад еканоил] -rooGlu-Peg3 -Peg3 )-AQRAFVEWLLAQK; или
Y-Ac4c-QGTFTSDYSIYLDK-K(19-кapбoкcигeптaдeкaнoил-изoGlu-PegЗ-PegЗ)-AQRAF VEWLL AQ GP S S GAPPP S
22. Нуклеиновая кислота, кодирующая пептид, имеющий последовательность Формулы I.
23. Экспрессионная конструкция, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 22.
24. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 22 или экспрессионную конструкцию экспрессии по п. 23 и способная экспрессировать и необязательно секретировать указанный пептид.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, представляющее собой тройной агонист, по любому из пп. 1-21 или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват в смеси с носителем.
26. Фармацевтическая композиция по п. 25, приготовленная в виде жидкости, подходящей для введения путем инъекции или инфузии, или полученная таким образом, чтобы вызывать медленное высвобождение указанного соединения-тройного агониста.
27. Соединение, представляющее собой тройной агонист, по любому из пп. 1-21 или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват для применения в способе лечения.
28. Соединение, представляющее собой тройной агонист, по любому из пп. 1-21 или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват для применения в способе лечения и/или предотвращения нарушения метаболизма.
22.
29. Соединение, -представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 28, отличающееся тем, что указанное нарушение метаболизма представляет собой диабет или связанное с диабетом нарушение, или ожирение, или связанное с ожирением нарушение.
30. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 29, отличающееся тем, что указанное связанное с диабетом нарушение представляет собой резистентность к инсулину, нарушение толерантности к глюкозе, повышение уровня глюкозы натощак, преддиабет, диабет 1 типа, диабет 2 типа, гипертензию при гестационном диабете, дислипидемию, связанное с костями нарушение и их комбинацию.
31. Аналог GIP или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват для применения по п. 30, отличающийся тем, что указанное связанное с диабетом нарушение представляет собой остеопороз, включая повышенный риск перелома кости.
32. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 29, отличающееся тем, что указанное связанное с диабетом нарушение представляет собой атеросклероз, артериосклероз, ишемическую болезнь сердца, заболевание периферических артерий, инсульт; или представляет собой состояние, связанное с атерогенной дислипидемией, нарушением уровней жиров крови, повышенным кровяным давлением, гипертензией, протромботическим состоянием или провоспалительным состоянием.
33. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 32, отличающееся тем, что указанное нарушение уровней жиров крови представляет собой высокий уровень триглицеридов, низкий уровень холестерина ЛПВП, высокий уровень холестерина ЛПНП, образование бляшек на стенках артерий или их комбинацию.
34. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 32, отличающееся тем, что указанное протромботическое состояние включает высокие уровни фибриногена в крови или высокие уровни ингибитора активатора плазминогена-1 в крови.
35. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 32, отличающееся тем, что указанное провоспалительное состояние включает повышенный уровень С-реактивного белка в крови.
22.
36. Соединение, представляющее собой тройной агонист, для применения по п. 32, отличающееся тем, что указанное связанное с ожирением нарушение представляет собой воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, или апноэ во сне, индуцированное ожирением, или может быть связано с состоянием, выбранным из атерогенной дислипидемии, нарушений уровней жиров крови, повышенного кровяного давления, гипертензии, протромботического состояния и провоспалительного состояния или их комбинации.
(19)
(19)
(19)
<220>
<220>
<210> 11
<210> 11
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 45
<210> 45
<220>
<220>
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<220>
<220>
<220>
