|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Настоящее изобретение относится к растениям, содержащим ферменты ППО (протопорфириноген оксидазы) дикого типа или мутированной ППО Alopecurus (лисохвоста), а также к способам получения таких растений. Настоящее изобретение также относится к способу борьбы с сорняками в месте выращивания растений, при этом данный способ включает этапы получения в указанном месте растения, которое содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую ППО дикого типа или мутированную ППО Alopecurus, которая является стойкой или устойчивой к гербициду-ингибитору ППО, путем внесения в указанное место эффективного количества указанного гербицида.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к растениям, содержащим ферменты ППО (протопорфириноген оксидазы) дикого типа или мутированной ППО Alopecurus (лисохвоста), а также к способам получения таких растений. Настоящее изобретение также относится к способу борьбы с сорняками в месте выращивания растений, при этом данный способ включает этапы получения в указанном месте растения, которое содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую ППО дикого типа или мутированную ППО Alopecurus, которая является стойкой или устойчивой к гербициду-ингибитору ППО, путем внесения в указанное место эффективного количества указанного гербицида.
Растения с повышенной устойчивостью к гербицидам (ППО)
Настоящая заявка направлена на получение приоритета в отношении предварительных заявок на патенты США номер US 61/864671 и US 61/864672, которые обе были поданы 12 августа 2014 г., а также US 61/866067, поданную 15 августа 2014 г., а содержание данных заявок включено в настоящий документ посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится в целом к способам, позволяющим повысить устойчивость сельскохозяйственных культур к гербициду. В частности, изобретение относится к растениям с повышенной устойчивостью к гербицидам-ингибиторам 11110. В частности, настоящее изобретение относится к способам и растениям, полученным мутагенезом, кроссбридингом и трансформацией, что повысило устойчивость к гербицидам-ингибиторам ППО.
ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Гербициды, которые подавляют протопорфириноген оксидазу (здесь и далее - Protox или ППО; ЕС:1.3.3.4), главный фермент в биосинтезе протопорфирина IX, использовали для селективной борьбы с сорняками с 1960-х годов. ППО катализирует конечную общую стадию биосинтеза гема и хлорофилла, которая представляет собой окисление протопорфириногена IX в протопорфирин IX. (Matringe et al. 1989. Biochem. 1. 260: 231). Гербициды-ингибиторы 11110 включают множество различных структурных классов молекул (Duke et al. 1991 Weed Sci. 39: 465; Nandihalli et al. 1992. Pesticide Biochem. Physiol. 43: 193; Matringe et al. 1989. FEBS Lett. 245: 35; Yanase and Andoh. 1989. Pesticide Biochem. Physiol. 35: 70). Данные гербицидные соединения включают дифенилэфиры {например, лактофен, (+-)-2-этокси-1-метил-2-оксоэтил 5-{2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси}-2-нитробензоат; ацифлуорфен, 5-{2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси}-2-нитробензойную кислоту; ее метилэфир; или оксифлуорфен, 2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторбензол)}, оксидазолы, (например, оксидиазон, 3-{2,4-дихлоро-5-(1-метилэтокси)фенил}-5-(1,1-диметилэтил)-1,3,4-оксадиазол-2-(ЗН)-он), циклические имиды (например, S
23142, К-(4-хлоро-2-фтор-5-пропаргилоксифенил)-3,4,5,6-тетрагидрофталимид; хлорофталим, К-(4-хлорфенил)-3,4,5,6-тетрагидрофталимид), фенилпиразолы (например, TNPP-этил, этил 2-{ 1-(2,3,4-трихлорфенил)-4-нитропиразолил-5-окси}пропионат; М &В 39279), производыне пиридина(например, LS 82-556), а также фенопилат и его О-фенилпирролидино- и пиперидинокарбаматовые аналоги. Многие из этих соединений конкурентно ингибируют обычную реакцию, катализируемую ферментом, выступая в качестве аналогов субстрата.
Применение гербицидов-ингибиторов 11110 приводит к накоплению протопорфириногена IX в хлоропласте и митохондриях, причем, считается, что он затем попадает в цитиозоль, где он окисляется пероксидазой. Когда на него воздействуют светом, протопорфирин IX приводит к образованию в цитозоле синглетного кислорода, а также к образованию других активных форм кислорода, что может вызвать перекисное окисление липидов и разрушение мембраны, и это может привести к быстрой смерти клеток (Lee et al. 1993. Plant Physiol. 102: 881).
He все ферменты 11110 являются чувствительными к гербицидам, ингибирующим растительные ферменты 11110. Ферменты 11110 Escherichia coli и Bacillus subtilis (Sasarmen et al. 1993. Can. J. Microbiol. 39: 1155; Dailey et al. 1994. J. Biol. Chem. 269: 813) являются устойчивыми к этим ингибиторам-гербицидам. Также из литературы известны мутанты одноклеточной водоросли Chlamydomonas reinhardtii, устойчивые к такому гербициду фенилимиду S-23142 (Kataoka et al. 1990. J. Pesticide Sci. 15: 449; Shibata et al. 1992. In Research in Photosynthesis, том III, N. Murata, ed. KluwenNetherlands. стр. 567-70). По-видимому, по меньшей мере, один из этих мутантов обладает измененной активностью 11110, с устойчивостью не только к гербицидному ингибитору, в отношении которого производилась селекция этого мутанта, но также к другим классам ингибиторов протопорфириноген оксидазы (Oshio et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 339; Sato et al. 1994. In ACS Symposium on Porphyric Pesticides, S. Duke, ed. ACS Press: Washington, D.C.). Также из литературы известна линия клеток-мутантов табака, устойчивая к ингибитору S-21432 (Che et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 350). Ауксотрофные мутанты E. coli mutants используют для того, чтобы придать ферментам 11110 клонированного растения устойчивость к гербицидам-ингибиторам 11110.
Существуют три основные стратегии повышения устойчивости растений к гербицидам, а именно: (1) детоксификация гербицида ферментами, которые трансформируют гербицид или его активный метаболит в нетоксичные продукты, такими, как, например, ферменты для повышения устойчивости к бромоксинилу или баста (ЕР242236, ЕР337899); (2) мутация целевого фермента в функциональный фермент, который будет менее чувствителен к гербицидам или его активному метаболиту, например, ферменты для повышения устойчивости к глифосату (ЕР293356, Padgette S. R. et al., J.Biol. Chem., 266, 33, 1991); или (3) сверхэкспрессия чувствительного фермента для получения достаточного количества целевого фермента в растении относительно гербицида с точки зрения кинетических констант этого фермента, чтобы получить достаточное количество функционального фермента, несмотря на присутствие его ингибитора. Сообщается о положительных результатах третьей стратегии, в результате которой были получены растения с устойчивостью к ингибиторам ППО (W096/38567). (см., например, патент США US5,767,373 или US5,939,602, и другие патенты-аналоги). Кроме того, в патентах US 2010/0100988 и WO 2007/024739 описываются нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности с ферментной активностью, которая приводит к устойчивости аминокислотных последовательностей к гербицидным химикатам, ингибиторам НПО, в частности, НПО-мутанты, специфические к ингибиторам группы 3-фенилурацила.
Патент WO 2012/080975 относится к растениям, чья устойчивость к гербициду-ингибитору 11110, известному как гербицид, "производный бензоксазинона" ((1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион; "BAS 850Н") была увеличена посредством трансформации указанных растений при помощи нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты мутированной ППО (мутированную НПО). В частности, в WO 2012/080975 раскрывается информация о том, что введение нуклеиновых кислот, кодирующих мутированную НПО щирицы 11110 типа II, в которой аргинин в позиции 128 был замещен лейцином, аланином или валином, а также фенилаланин в позиции 420 был замещен метионином, цистеином, изолейцином, лейцином или треонином, придает повышенную устойчивость/стойкость к гербициду, производному бензоксазинона. Авторами
настоящего изобретения неожиданно было установлено, что данные типы соединений с двойной мутацией в 11110 типа I или типа II лисохвоста мышехвостниковидного и, более того, новые замещения R128 и F420, которые не входят в область действия патента W0 2012/080975, придают повышенную устойчивость/стойкость к большому количеству ингибиторов 11110. Кроме того, авторами настоящего изобретения неожиданно было установлено, что дикая последовательность 11110 типа II лисохвоста мышехвостниковидного, а также введенные в нее одиночные мутиции придают повышенную устойчивость/стойкость к большому количеству ингибиторов 11110. Таким образом, на сегодняшний день в известном уровне техники не описываются растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, содержащие ППО нуклеиновую кислоту в соответствии с настоящим изобретением, которая устойчива к широкому спектру ингибиторов ППО. В связи с этим для научных целей необходимы сельскохозяйственные культуры и сельскохозяйственные культуры с повышенной устойчивостью к гербицидам, таким как гербициды-ингибиторы ППО, и гербициды, содержащие, по меньшей мере, одну ППО нуклеиновую кислоту дикого типа и/или мутировавшую ППО нуклеиновую кислоту в соответствии с настоящим изобретением. Также необходимы способы контроля за ростом сорняков среди сельскохозяйственных культур или сельскохозяйственные культуры. Данные композиции и способы позволят использовать опрыскивание вместо техники при применении гербицидов на территории, где растут сельскохозяйственные культуры, или к самим сельскохозяйственным культурам.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соответственно, в одном из вариантов осуществления изобретения настоящее изобретение предусматривает способ создания растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с с соответствующим диким растением, в результате чего способ включает, по меньшей мере, следующие этапы: увеличение или создание в растении активности трансгенного дикого типа или полипептида лисохвоста мышехвостниковидного с мутировавшей 11110 или его гомолога.
Соответственно, изобретение предусматривает трансгенное растение, которое сверхэкспрессирует изолированный полинуклеотид 11110 согласно определению в настоящем документе или его гомолог в субклеточном компартменте, а также в ткани, как показано в указано документе. Трансгенное растение по изобретению демонстрирует улучшенную и повышенную стойкость и устойчивость к гербицидам по сравнению с растением дикого типа.
Соответственно, изобретение предусматривает способ создания растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим растением дикого типа, включающий, по меньшей мере, один из этапов, выбранных из группы, которая состоит из следующего: (Г) увеличение или создание активности полипептида с 11110, содержащего последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог; или (И) увеличение или создание активности продукта экспрессии одного или нескольких изолированных полинуклеотидов, содержащих один или несколько полинуклеотидов, содержащих последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
Изобретение также предусматривает изолированную и/или рекомбинантную и/или синтетическую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
(a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с 11110, и содержащей последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог.
(b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог,
(c) молекулы нуклеиновой кислоты, которая, в результате дегенерации генетического кода может передаваться из последовательности полипептида с 11110 SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(d) молекулы нуклеиновой кислоты с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с последовательностью
(a)
молекулы нуклеиновой кислоты полинуклеотида, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(e) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с аминокислотной последовательностью полипептида с 11110 последовательности SEQ ID NO: 2 или 4, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(f) молекулы нуклеиновой кислоты, которая гибридизирует с молекулой нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с), (d) или (е) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
Изобретение также предусматривает способ увеличения устойчивости или стойкости к гербицидам сельскохозяйственной культуры, способ, включающий следующие этапы: (Г) увеличение или создание экспрессии, по меньшей мере, одного полинуклеотида; и/или (И) увеличение или создание экспрессии продукта экспрессии, кодированного, по меньшей мере, одним полинуклеотидом; и/или (iii) увеличение или создание одной или нескольких активностей продукта экспрессии, кодированного, по меньшей мере, одним полинуклеотидом, отличающийся тем, что полинуклеотид выбран из группы, содержащей следующее:
(a) изолиронный полинуклеотид, кодирующий полипептид с 11110, и содержащей последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
(b) изолиронный полинуклеотид, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(a)
(c) изолиронный полинуклеотид, который, в результате дегенерации генетического кода, может быть выведен из полипептида с 11110, и содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(d) изолированный полинуклеотид с идентичностью 30% или более,
предпочтительно 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%,
99%, 97%, 98% или 99% (процентов) или более с
последовательностью полинуклеотида, содержащего
последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает
повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по
сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной
клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его
частью;
(e) изолированный полинуклеотид, кодирующий полипептид с идентичностью 30% или более, например, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 97%, 98% или 99% (процентов) или более с аминокислотной последовательностью полипептида, кодированного изолированным полинуклеотидом этапов (а) - (с) и придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(f) изолированный полинуклеотид, который гибридизирует с изолированным полинуклеотидом этапов (а) - (с) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Кроме того, изобретение относится к способу получения трансгенного растения, обладающего повышенной устойчивостью или стойкостью к
гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, содержащей трансформирующую клетку растения или ядро клетки растения или ткань растения для создания такого растения, с изолированным полинуклеотидом, выбранным из группы, включающей:
(a) изолиронный полинуклеотид, кодирующий полипептид с 11110, содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог;
(b) изолиронный полинуклеотид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(c) изолиронный полинуклеотид, который, в результате дегенерации генетического кода, может быть выведен из полипептида с 11110, содержащего последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, и придающего повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(d) изолированный полинуклеотид с идентичностью 30% или более,
предпочтительно 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%,
99%, 97%, 98% или 99% (процентов) или более с
последовательностью полинуклеотида, содержащего
последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает
повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по
сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной
клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его
частью;
(e) изолированный полинуклеотид, кодирующий полипептид с идентичностью 30% или более, например, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 97%, 98% или 99% (процентов) или более с аминокислотной последовательностью полипептида с 11110, кодированного изолированным полинуклеотидом этапов (а) - (с) и придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(a)
(f) изолированный полинуклеотид, который гибридизирует с изолированным полинуклеотидом этапов (а) - (с) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
Кроме того, изобретение относится к способу борьбы с нежелательной растительностью в месте выращивания растений. Этот способ включает следующие этапы:
a) получение в указанном месте растения, содержащего, по меньшей мере, одну нуклеиновую кислоту, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид с 11110, содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, который является устойчивым или стойким к гербицидам-ингибиторам 11110 и/или
b) внесение в указанный участок эффективного количества данного гербицида.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к способу выращивания растения в соответствии с изобретением наряду с борьбой с ростом сорняков вблизи указанного растения, причем указанный способ включает следующие этапы:
a) выращивание указанного растения; и
b) нанесение гербицидной композиции, содержащей гербицид-ингибитор 11110, на растение и сорняки, при этом гербицид обычно ингибирует протопорфириноген оксидазу на уровне гербицида, который препятствовал бы росту соответствующего растения дикого типа.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) полинуклеотид, кодирующий полипептид дикого типа или полипептид с мутированной 11110 по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать
растению устойчивость к гербициду-ингибитору 11110; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к способу получения комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, который включает (а) использование полинуклеотида, кодирующего полипептид дикого типа или полипептид с мутированной ППО по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) использование гербицид а-ингибитора ППО.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный этап использования полинуклеотида включает использование растения, содержащего данный полинуклеотид.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный этап использования полинуклеотида включает использование семян, содержащих данный полинуклеотид.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный способ также включает дополнительный этап применения гербицида-ингибитора ППО на семена.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к использованию комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) полинуклеотид, кодирующий полипептид дикого типа или полипептид с мутированной ППО по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО, для контроля за контром сорняков в месте выращивания растения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигуре 1 показан выравнивание аминокислотной последовательности последовательностей 11110 Amaranthus tuberculatus (A.tuberculatus) при помощи последовательности Alopecurus myosuroides настоящего изобретения.
На Фигуре 2 показаны трансгенные растения Arabidopsis, трансформированные при помощи нуклеиновых кислот, кодирующих мутированную 111102 Alopecurus (ALOMY), содержащую двойную мутиацию Ат_111102_R 137M_F438V, которая обрабатывается различными концентрация BAS 850Н (1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион); А, В, С, D, Е, представляют собой различные линии; 2-8 представляет собой различные концентрации для обработки. 1 представляет собой контроль с ложной обработкой. 1 = DMSO, 2 = 1.00Е-09М; 3 = 6.00Е-09М; 4 = 1.00Е-08М; 5 = 2.50Е-08М; 6 = 5.00Е-08М; 7 = 1.00Е-07М; 8 = 3.00Е-07М;
На Фигуре 3 показаны растения Tl Arabidopsis (1 на горшочек), трансфорированные при помощи нуклеиновых кислот, кодирующих мутиро ванную! 11101 Alopecurus (ALOMY), содержащую (1) Ат_1Ш01 T299L_Y420M; или (2) Am_nnOl_T299L_S300G_Y420V. Для сравнения растения дикого типа (по 3 на горшочек) всегда размещаются в нижней части каждой из Фигур.
На Фигуре 4 показаны клоны растений сои, трансформированной при помощи ТО, после 7 дней обработки указанным гербицидом + 1% (объемное содержание) MSO. Растения опылили на этапе V2; 1 = дикий тип; 2 = AlomyPP02_R137L_F438M; 3 = AlomyPP02_F438M; 4 AlomyPP02_R137L_F438V; 5 = AlomyPP02_R137L_F438L; 6 AlomyPP02_R137M_F438M; 7 = AlomyPP02_R137A_F438M; 8 AlomyPPOl_R138A_Y420V; 9 = AlomyPPOl_R138L_Y420V; 10 AlomyPPOl_R138L_Y420M; концентрации BAS800H (Сафлуфенацил) и BAS 850H (1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион) приведены в граммах активного ингредиента на гектар. Концентрации конструктов 1, 2, 3, 4, 5, и 6 составляют 0, 100, 200, (BAS800H; Сафлуфенацил); и 25, 50, 75 В AS 850Н (1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион) граммов активного ингредиента на гектар. Концентрации конструктов 8, 9 и 10 составляют 0, 25, 50, 100 (BAS800H; Сафлуфенацил); и 50, 75 В AS 850Н (1,5-диметил-6-тиоксо-3
(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион) граммов активного ингредиента на гектар.
На Фигуре 5 показана кукуруза, трансформированная при помощи ТО, после 3 дней обработки. Растения опылили на этапе V2-V3.
1 = дикий тип;
2 = tp-SorbiirnO2_AlomyPPO2_R130L_F431M (SEQ ID NO: 22);
3 = tp-ZeamannO2_AlomyPPO2_R130L (SEQ ID NO: 14);
4 = tp-ZeamannO2_AlomyPPO2_R130L_F431M (SEQ ID NO: 17);
5 = tp-ZeamannO2_AlomyPPO2_R130M_F431M (SEQ ID NO: 19)
КЛЮЧ К ПЕРЕЧНЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Аминокислота с ППО
Zea mays
Тразитный пептид сПП02
Аминокислота с ППО
Sorghum bicolor
Тразитный пептид сПП02
Аминокислота с ППО
Amaranthus
ПП02
WC_HS
Аминокислота с ППО
Amaranthus
ПП02
AC_HS
Аминокислота с ППО
Amaranthus
ПП02
CC_HR
Аминокислота с ППО
Amaranthus
ПП02
AC_HR
Аминокислота с ППО
Amaranthus
ПП01
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно данному изобретению "устойчивость к гербицидам или активность, повышающая устойчивость" относится к активности 11110 из Alopecurus myosuroides, содержащей последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог. Полипептид, придающий устойчивость к гербицидам или активность, повышающая устойчивость, может быть кодирована нуклеотидной последовательностью, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и/или содержит или состоит из полипептида, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
При использовании в тексте настоящего документа термин трансгенное растение относится к растению, которое содержит инородную нуклеотидную последовательность, которая вставлена в ее ядерный геном или в геном органеллы. Оно также охватывает поколения потомства, то есть Т1-, Т2- и последовательные поколения или ВС1-, ВС2- и последовательное поколение, а также их гибриды с нетрансгенными или другими трансгенными растениями.
Изменение, то есть увеличение, может быть вызвано эндогенными или экзогенными факторами. Например, увеличение активности в организме или в его
части может быть вызвано добавлением генного продукта или прекурсора или активатора или агониста к средам или питательным веществам или может быть вызвано введением указанных субъектов в организм, переходный или устойчивый. Кроме того, такое увеличение может быть достигнуто за счет введения нуклеотидной последовательности по изобретению или кодированного белка в правильном клеточном компартменте, например, в ядро или соответственно в цитоплазматическую часть или в пластиды, или посредством трансформации и/или нацеливания.
Для целей описания настоящего изобретения термины "цитоплазматический" и "ненацеленный" указывают на то, что нуклеиновая кислота по изобретению экспрессирована без добавления ненатуральной последовательности, кодирующей транзитный пептид. Последовательность, кодирующая ненатуральный транзитный пептид - это последовательность, которая не является природной частью нуклеиновой кислоты по изобретению, например, нуклеиновые кислоты, показанные в SEQ ID NO: 1 или 3 или их гомологи, а, скорее, добавляется посредством этапов молекулярной манипуляции, которые хорошо известны специалистам по отрасли или, например, описаны ниже в настоящем документе. Соответственно, термины "цитоплазматический" и "ненацеленный" не исключают нацеленную локализацию на какой-либо клеточный компартмент для продуктов нуклеотидных последовательностей по изобретению посредством их природных свойств последовательности в рамках трансгенного организма. Субклеточное местоположение зрелого полипептида, полученного из конечных последовательностей, может быть предсказано специалистом в отношении организма (растения) посредством использования инструментальных программ, таких как TargetP (Emanuelsson et al., (2000), которые предсказывают субклеточное местоположение белков на основании их N-концевой аминокислотной последовательности. J.Mol. Biol. 300, 1005-1016), ChloroP (Emanuelsson et al. (1999), ChloroP, метод предсказания транзитных пептидов хлоропласта и областей их расщепления, основанный на нейронной сети. Protein Science, 8: 978-984) или иных предсказательных инструментальных программ (Emanuelsson et al. (2007),выявляя местоположение белков в клетке при помощи TargetP, SignalP и связанных с ними инструментов (Nature Protocols 2, 953-971).
Термин "органелла" согласно данному изобретению означает, например, "митохондрия", "пластид" эндоплазматический ретикулум (ЭР). Термин "пластид" согласно данному изобретению включает различные формы пластидов, включая пропластиды, хлоропласты, хромопласты, геронтопласты, лейкопласты, амилопласты, элайопласт и этиопласты, предпочтительно хлоропласты. У всех у них в качестве общего предка выступают вышеупомянутые хлоропласты.
Термин "вводится" в контексте настоящего описания означает введение нуклеотидной последовательности в организм посредством "трансфекции", "трансдукции" или предпочтительно посредством "трансформации".
Пластид, такой как хлоропласт "трансформирован" с использованием экзогенной (предпочтительно инородной) нуклеотидной последовательности, если нуклеотидная последовательность была введена в пластид, что указывает на то, что данная последовательность пересекла мембрану или мембраны пластида. Инородная ДНК может быть встроена (соединена ковалентной связью) в ДНК пластида, создавая при это геном пластида, или же она может оставаться невстроенной (например, посредством включения репликации источника происхождения хлоропласта). Последовательности со "стабильно" встроенной ДНК - это такое последовательности, которые унаследовали свойства от репликации пластида, тем самым передавая новые пластиды со свойствами последовательности со встроенной ДНК своему потомку.
При использовании по тексту настоящего документа термин "растение" включает не только все растение, но также и его часть, то есть одну или несколько клеток, а также ткани, включая, например, листья, стебли, побеги, корни, цветки, плоды и семена.
Под термином "устойчивость или стойкими к гербициду" подразумевается то, что растение устойчиво или стойко, по меньшей мере, к одному гербициду, который в данном количестве обычно уничтожает обычные или дикие растения или препятствует их росту.
Любое увеличение устойчивости или стойкости к гербицидам рассматривается как улучшенная устойчивость или стойкость к гербицидам согласно данному изобретению. Например, улучшение устойчивости или
стойкости к гербицидам может включать увеличение в 1.5х, 2х, 2.5х, Зх, 5х, 10х, 20х, ЗОх, 40х, 50х, 75х, 100х, 150х, 200х или более раз по любому измеряемому параметру.
Если не указано иное, термины "полинуклеотиды", "нуклеиновая кислота" и "молекула нуклеиновой кислоты" в данном контексте являются взаимозаменяемыми. Если не указано иное, термины "пептид", "полипептид" и "пептид" в данном контексте являются взаимозаменяемыми. Понятие "последовательность" может относиться к полинуклеотидам, нуклеиновым кислотам, молекулам нуклеиновых кислот, пептидам, полипептидам и белкам в зависимости от контекст, в котором используется термин "последовательность". Понятие "ген(ы)", "полинуклеотид", "нуклеиновая кислота", "нуклеотидная последовательность" или "молекула(ы) нуклеиновой кислоты" при использовании в настоящем документе обозначают полимерную форму нуклеотидов любой длины, будь то рибонуклеотиды или деоксирибонуклеотиды. Понятия "ген(ы)", "полинуклеотид", "нуклеиновая кислота", "нуклеотидная последовательность" или "молекула(ы) нуклеиновой кислоты" при использовании в настоящем документе включают известные виды модификаци, например, метилирование, "кэпы", замещения одного или нескольких встречающихся в природе нуклеотидов на их аналог. Предпочтительно, последовательность ДНК или РНК содержит кодирующую последовательность, которая кодирует полипептиды, определение которых приводится в настоящем документе.
При использовании в настоящем документе термины "нуклеиновая кислота" и "молекула нуклеиновой кислоты" также включают молекулы ДНК (например, кДНК или геномную ДНК) и молекулы РНК (например, мРНК) и аналоги ДНК или РНК, созданные с использованием аналогов нуклеотидов. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двуцепочечной.
"Изолированная" молекула нуклеиновой кислоты - это молекула, которая в существенной степени отделена от остальных молекул нуклеиновой кислоты, которые присутствуют в природном источнике нуклеиновой кислоты. Это означает, что молекулы других нуклеиновых кислот присутствуют в количестве менее 5% по массовому содержанию количества желательной нуклеиновой
кислоты, предпочтительно менее 2 мас.%, более предпочтительно менее 1 мас.%, наиболее предпочтительно менее 0,5 мас.%. Предпочтительно "изолированная" нуклеиновая кислота свободна от любых последовательностей, которые обычно примыкают к данной нуклеиновой кислоте (то есть, последовательности, расположенные на концах 5' и 3' нуклеиновой кислоты) в геномной ДНК организма, из которого даная нуклеиновая кислота была получена. Например, в различных вариантах осуществления изобретения пептид, придающий стойкость и/или устойчивость к гербициду, и кодирующий молекулу нуклеиновой кислоты, может содержать менее чем примерно 5 т.н. 4 т.н. 3 т.н. 2 т.н. 1 т.н. 0,5 т.н. или 0,1 т.н. нуклеотидных последовательностей, которые обычно примыкают к молекуле нуклеиновой кислоты в геномной ДНК клетки, из которой данная нуклеиновая кислота была получена. Более того, молекула "изолированной" нуклеиновой кислоты, такая как молекула кДНК, может быть свободна от другого клеточного материала, с которым она обычно связана, или от среды для культуры, если она получена рекомбинантным методом, или химических предшественников или других химических веществ, когда химически синтезируется.
"Кодирующая последовательность" - это нуклеотидная последовательность, которая транскрибируется в РНК, например, в регуляторную РНКи, рибозиму и так далее или в мРНК, которая транслируется в полипептид при размещении под контролем соответствующих регуляторных последовательностей. Границы кодирующей последовательности определяются начальным кодоном транслирования на 5'-конце и терминирующим кодоном транслирования на З'-конце. Кодирующая последовательность может включать, помимо прочего, мРНК, кДНК, рекомбинантную нуклеотидную последовательность или геномную ДНК, тогда как при определенных обстоятельствах также могут присутствовать интроны.
При использовании в данном контексте молекула нуклеиновой кислоты также может включать нетранслированную последовательность, расположенную на 3' и на 5' концах кодирующей области гена, например, 2000, предпочтительно меньше, например, 500, предпочтительно 200, особенно предпочтительно 100, нуклеотиды последовательности, расположенные до 5' конца кодирующей области и, например, 300, предпочтительно меньше, например, 100,
предпочтительно 50, особенно предпочтительно 20, нуклеотиды последовательности, расположенные после 3' конца кодирующей области гена.
"Полипептид" означает полимер аминокислоты (аминокислотной последовательности) и не относится к конкретной длине молекулы. Таким образом, пептиды и олигопептиды включены в определение полипептида. Данное понятие также относится или включает посттрансляционной модификации полипептида, например, продукты гликозилирования, ацетилирования, фосфорилирования и аналогичные продукты. В определение включены, например, полипептиды, содержащие один или несколько аналогов аминокислоты (включая, например, искуственные аминокислоты и др.), полипептиды с замещенными связями, а также иные известные в науке модификации, как природные, так и искуственные. "Изолированный" полинуклеотид или молекула нуклеиновой кислоты - это молекула, которая в существенной степени отделена от остальных полинуклеотидов или молекул нуклеиновой кислоты, которые присутствуют в природном источнике молекулы нуклеиновой кислоты. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты может быть представлена хромосомным фрагментом нескольких т.н. или предпочтительно, молекулой, содержащей только кодирующую область гена. Соответственно, изолированная молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать хромосомные области, которые расположены по соседству с 5' и 3' или далее по соседству с хромосомными областями, но предпочтительно не содержит таких последовательностей, которые в естественных условиях примыкают к последовательности молекулы нуклеиновой кислоты в геномном или хромосомном контексте в организме, из которого произошла данная молекула нуклеиновой кислоты (например, последовательности, которые граничат с областями, кодирующими НТО 5'- и 3' молекулы нуклеиновой кислоты). "Изолированный" или "очищенный" полипептид или его биологически активная часть свободна от клеточного материала, когда получена методом, связанным с рекомбинантной ДНК, или химических предшественников или других химических веществ, когда химически синтезируется. Формулировка "в основном свободный от клеточного материала" включает приготовление композиции белка, в которой полипептид отделяют от некоторых клеточных компонентов клеток, в которых он получен естественным или рекомбинантным путем.
Термины "содержать" и "содержащий", а также их грамматические варианты при использовании в настоящем описании указывают на присутствие заявленных свойств, целых чисел, этапов и компонентов или их групп, однако не препятствуют присутствию или дополнительному наличию одного или нескольких других свойств, целых чисел, этапов, компонентов или их групп.
Согласно данному изобретению белок или полипептид имеет "активность" белка с ППО, если активность в начальных условиях или его увеличенная экспрессия прямо или косвенно влечет за собой или придает увеличенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным растением дикого типа, и белок демонстрирует упомянутую выше ППО-активность.
По всему тексту описания активность или предпочтительно биологическая активность такого белка или полипептида или молекулы нуклеиновой кислоты или последовательности, кодирующей такой белок или полипептид, является идентичной или схожей, если он по-прежнему демонстрирует биологическую или ферментную активность белка, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог или которая имеет, по меньшей мере, 10% или более от первоначальной ферментной активности, предпочтительно 20%, 30%, 40%, 50%, особенно предпочтительно 60%, 70%, 80%, еще более особенно предпочтительно 90%, 95%, 98%, 99% или более по сравнению с белком, содержащим последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения биологическая или ферментная активность белка, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, имеет 100% или более от первоначальной ферментной активности, предпочтительно 110%, 120%, 130%, 150%, особенно предпочтительно 150%, 200%, 300%, или более по сравнению с белком, содержащим последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
Термины "увеличенный", "поднятый", "расширенный", "улучшенный", "усовершенствованный" или "усиленный" относятся к соответствующему изменению свойства в растении, организме, части организма, такой как ткань, семя, корень, лист, цветок и др. или в клетке, и являются взаимозаменяемыми.
Предпочтительно общая активность в определенном объеме увеличивается или улучшается в случаях, когда увеличение или улучшение относится к увеличению или улучшению активности генного продукта независимо от того, увеличивались ли или улучшались ли количество генного продукта или конкретная активность генного продукта или и то и другое, а также от того, увеличивалась ли или улучшалась ли эффективность транслирования, количество, стабильность нуклеотидная последовательность или гена, кодирующего данный генный продукт.
Термин "увеличение" включает изменение указанного свойства только частях предмета настоящего изобретения, например, модификацию можно встретить в компартменте клетки, такой как органелла, или в части растения, как ткань, семя, корень, лист, цветок и др., однако при этом ее невозможно обнаружить, если проверять весь объект, то есть всю клетку или все растение. Соответственно термин "увеличение" означает, что конкретная активность фермента, а также количество соединения или метаболита, например, полипептида, молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению или кодирующей мРНК или ДНК, может быть увеличено в определенном объеме. Термин "увеличивать" включает то, что соединение или активность, особенно активность, вводится в клетку, цитоплазму или в субклеточный компартмент или органеллу в начальных условиях, или что соединение или активность, особенно активность, ранее не обнаруживалась, иными словами "сгенерирована". Соответственно, далее термин "увеличение" также включает термин "генерирование" или "стимулирование". Увеличенная активность проявляет себя в повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Под термином "изменение свойства" следует понимать то, что активность, уровень экспрессии или количество генного продукта или содержание метаболита изменяются в конкретном объеме по отношению к соответствующему объему контрольного, справочного или дикого типа, включая создание в начальных условиях активности или экспрессии.
Под "количеством белка или мРНК" следует понимать количство молекул полипептидов или мРНК в организме, особенно в растении, ткани, клетке или в клеточном компартменте. "Увеличение" количества белка оначает количественного увеличение количества молекул указанного белка в организме, особенно в растении, ткани, клетке, клеточном компартменте, как в органелле, такой как пластид или митохондрия или ее часть - например, с использованием одного из описанных ниже способов - по сравнению с контрольным, справочным или диким типом.
Увеличение количества молекул составляет предпочтительно 1% или более, предпочтительно 10% или более, более предпочтительно 30% или более, особенно более предпочтительно 50%, 70% или более, крайне предпочтительно 100%, наиболее предпочтительно 500% или более. Однако при этом экспрессия в начальных условиях также рассматривается как предмет настоящего изобретения.
Термины объект "дикого типа", "контрольный" или "справочный" объект являются взаимозаменяемыми и могут быть представлены клеткой или частью организмов, таких как органелла, как хлоропласт или ткань, или организмом, в частности растение, который не был модифицирован или обработан в соответствии с описанным в данном документе способом в соответствии с изобретением. Соответственно, клетка или часть организмов, таких как органелла, как хлоропласт или ткань, или организм, в частности растение, которые используются как дикий тип, контрольные или справочные, в максимально возможном объеме и по любым другим свойствам соответствуют клетке, организму, растению, но в результате способа по настоящему изобретению являются настолько идентичными предмету изобретения, насколько это возможно. Таким образом, дикий тип, контрольные или справочные рассматриваются идентичными, как можно более идентичными, с оговоркой лишь о том, что только условия или свойства могут отличаться, что не влияет на качестве тестируемого свойства.
Предпочтительно любое сравнение выполняется в аналогичных условиях. Термин "аналогичные условия" означает, что все условия, такие как, например, условия культивации или роста, почва, содержание питательных веществ и воды в почве, температура, влажность или окружающий воздух или почвы, условия
проведения анализа (такие как буферная композиция, температура, субстраты, патогенная цепочка, концентрации и аналогичные условия) сохраняются идентичными при проведении сравниваемых экспериментов.
Термины "справочный", "контрольный" объект или объект "дикого типа" предпочтительно указывают на объект, например органелла, клетка, ткань, организм, в частности растение, который не был модифицирован или обработан в соответствии с описанным в данном документе способом в соответствии с изобретением и по любым другим свойствам настолько схож с предметом изобретения, насколько это возможно. Справочный, контрольный объект или объект дикого типа по своему геному, транскриптому, протеому или метоболому настолько схожи с предметом настоящего изобретения, насколько это возможно. Предпочтительно термин "справочный", "контрольный" или "дикий тип" в отношении органеллы, клетки, ткани или организма, в частности растения, относится к органелле, клетке, ткани или организму, в частности, растению, которое практически на генетическом уровне идентично органелле, клетке, ткани или организму, в частности, растению по настоящему изобретению или его части, предпочтительно на 90% или более, например, на 95%, более предпочтительно на 98%, еще более предпочтительно на 99,0%, в частности на 99,10%, 99,30%, 99,50%, 99,70%, 99,90%, 99,99%, 99,999% или более. В наиболее предпочтительном варианте "справочный", "контрольный" объект или объект "дикого типа" - это объект, например, органелла, клетка, ткань, организм, в частности, растение, которое на генетическом уровне идентично организму, в частности, растению, клетке, ткани или органелле, которая используется в соответствии со способом, который предусмотрен изобретением, за исключением того, что ответственные или передающие активность молекулы нуклеиновой кислоты или генный продукт, кодированный ими, изменяются, регулируются, заменяются или вводятся в соответствии со способом по изобретению. В случае если справочный, контрольный объект или объект дикого типа, отличающийся от предмета настоящего изобретения только в силу того, что он не является объектом выполнения способа по изобретению, предоставить невозможно, в качестве справочного, контрольного или дикого типа может использоваться организм, в котором причина модуляции активности, придающей улучшенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с с соответствующей,
например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа или экспрессией молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению согласно описанию в настоящем документе, была возвращена в исходное состояние или отключена, например, посредством подавления экспрессии ответственного генного продукта, например, при помощи антисмыслового ингибирования или ингибирования РНКи или миРНК, посредством деактивации активатора или агониста, активации ингибитора или антагониста, ингибирования посредством добавления ингибирующих антител, добавления активных соединений, как например, гормоны, посредством введения отрицательных доминантных мутантов и т.д. Производство генов можно подавить, например, за счет введения активирующих точечных мутаций, которые приведут к ингибированию ферментной активности или к дестабилизации или ингибированию способности связывать кофакторы и др. Соответственно, предпочтительным справочным объектом является начальный объект данного способ по изобретению. Предпочтительно, справочный объект или предмет изобретения сравниваются после стандартизации и нормализации, например, по совокупному количеству РНК, ДНК или белка или по активности или экспрессии справочных генов, как гены "домашнего хозяйства", такие как убиквитин, актин или рибосомные белки.
Под термином "экспрессия" следует понимать транскрипцию и/или трансляцию кодогенного фрагмента гена или самого гена. Как правило, в результате получается мРНК или белок.
Увеличение или модуляция в соответствии с с изобретением могут быть конститутивными, например, в благодаря стабильной постоянной трансгенной экспрессии или стабильной мутации в соответствующем эндогенном гене, кодирующем молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, или благодаря модуляции экспрессии или поведения гена, создающего экспрессию полипептида по изобретению, или временными, например, благодаря временной трансформации или временному добавлению модулятора, такого как агонист или антагонист, или индуцируемыми, например, после трансформации с применением индуцируемого конструкта, переносящего молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению под контролем индуцируемого промотора, а также после добавления
индуктора, например, тетрациклина или согласно описанию далее в настоящем документе.
Под меньшим воздействием на регулирование гена или генного продукта следует понимать пониженное регулирование ферментной активности, которое приводит к повышенной удельной или клеточной активности гена или его продукта. Под увеличением ферментной активности следует понимать ферментную активность, которая увеличена на 10% или более, предпочтительно на 20%, 30% или 40% или более, особенно предпочтительно на 50%, 60% или 70% ил более по сравнению с исходным организмом. Это приводит к повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным, растением дикого типа или его частью.
Увеличение активности количества полипептидов в клетке, ткани, органелле, органе или организме, предпочтительно в растении или в его части, предпочтительно до 5% или более, более предпочтительно до 20% или 50%, особенно предпочтительно до 70%, 80%, 90% или более, еще более предпочтительно до 100%, 150 % или 200%, и наиболее предпочтительно до 250% или более по сравнению с контрольным или справочным объектом или объектом дикого типа. В одном из вариантов осуществления изобретения термин увеличение означает увеличение количества по отношению к весу организма или его части (в весовом отношении).
Под термином "вектор" следует понимать, за исключением плазмидов, все остальные векторы, которые известны специалистам в данной области, такие как, например, фаги, вирусы, такие как SV40, CMV, бакуловирусы, аденовирусы, транспозоны, IS-элементы, фазмиды, фагемиды, космиды, линейные и циклические ДНК. Эти векторы могут автономно воспроизводиться в организме-хозяине или воспроизводиться хромосомным способом, при этом предпочтительным является хромосомное воспроизведение. В данном контексте, понятие "вектор" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной переносить другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Одним из видов вектора является "плазмида", которая относится к сегментам двухцепочечной петли ДНК, которые можно лигировать в вирусный геном. Еще одним видом вектора является вирусный вектор, отличающийся тем, что дополнительные
сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Определенные векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они были внесены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальное происхождение репликации, и эписомные векторы, относящиеся к млекопитающим). Другие векторы (например, не эписомные векторы, относящиеся к млекопитающим) интегрируются в геном клетки-хозяина или органеллы при внесении в клетку-хозяина или реплицируются вместе с геномом-хозяином геномом органеллы. Более того, определенные векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы, в данном контексте, называются "экспрессионными векторами". Обычно, используемые экспрессионные векторы в методах, связанных с рекомбинантной ДНК, принимают форму плазмид. В настоящем описании изобретения, понятие "плазмида" и "вектор" являются взаимозаменяемыми, так как плазмида чаще всего используется в форме вектора. Тем не менее, изобретение включает и другие формы экспрессионных векторов, такие как вирусные векторы (например, ретровирус с дефективной репликацией, аденовирусы и вирусы, связанные с адено), выполняющих те же функции.
При использовании по тексту настоящего документа выражение "функционально связанный" означает, что рассматриваема последовательность нуклеотида привязана к регуляторной(ым) последовательности(ям) таким образом, который допускает экспрессию нуклеотидной последовательности (например, в системе транскрипции/трансляции в искусственных условиях или в клетке-хозяине, когда в данную клетку вводится вектор). Термин "регуляторная последовательность" включает промоторы, усилители и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования). Такие регуляторные последовательности описаны, например, в Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990), и Gruber and Crosby, в: Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, изд. Glick and Thompson, Глава 7, 89-108, CRC Press; Boca Raton, Florida, включая ссылки в данных документах. Регуляторные последовательности включают последовательности, которые направляют конститутивную экспрессию нуклеотидной последовательности во многих видах клеток хозяина и последовательности, которые направляют конститутивную экспрессию
нуклеотидной последовательности только в определенных клетках хозяина или при определенных условиях.
"Трансформация" по тексту настоящего документа понимается, как процесс введения гетерологичных ДНК в клетку растения, ткань растения или растение. В природных или искуственных условиях она может произойти при использовании различных способов, хорошо известных специалистам в данной области. Трансформация может быть основана на любом известном способе введения инородных нуклеотидных последовательностей в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяин. Данный способ выбран на основании того, что клетка-хозяин трансформируется и может включать, помимо прочего, вирусные инфекции, электропорацию, липофекцию и обстрел частиц. Такие "трансформированные" клетки включают стабильно трансформируемые клетки, в которых введенная ДНК способна воспроизводиться как автономно воспроизводящаяся плазмида или как часть хромосомы-хозяина. Также они включают клетки, которые временно экспрессируют введенную ДНК или РНК на протяжении ограниченных периодов времени. Предполагается, что трансформированные клетки растений, ткани растений или растения включают не только конечный продукт процесса трансформации, но и его трансгенный потомок.
Термин "трансформированный", "трансгенный" и "рекомбинантный" относятся к организмам-хозяевам, таким как бактерия или растение, в которые была введена гетерологичная молекула нуклеиновой кислоты. Молекула нуклеиновой кислоты может стабильно интегрироваться в геном хозяина или же молекула нуклеиновой кислоты также может присутствовать в качестве экстрахромосомной молекулы. Такая экстра-хромосомная молекула может автоматически воспроизводиться. Предполагается, что трансформированные клетки, ткани или растения включают не только конечный продукт процесса трансформации, но и его трансгенный потомок. Термин "нетрансформированный", "нетрансгенный" ли "нерекомбинантный" хозяин относится к организму дикого типа, например, бактерия или растение, который не содержит гетерологичной молекулы нуклеиновой кислоты.
Понятие "организм-хозяин", "клетка-хозяин", "рекомбинантный организм-хозяин" и "рекомбинантная клетка-хозяин" в настоящем документе являются взаимозаменяемыми. Очевидно, что данные термины относятся не только к конкретным организмам-хозяевам или к конкретной клетке-мишени, но также и к потомкам или потенциальным потомкам данных организмов или клеток. Поскольку в связи с мутацией и эффектами воздействия окружающей среды модификации могут возникать в последующих поколениях, данные потомки не обязательно должны быть идентичным родительским клеткам, однако так или иначе они все равно охвачены данным термином при использовании в настоящем документе.
Для целей настоящего изобретения, "трансгенный", "трансген" или "рекомбинантный" означает в отношении, например, последовательности нуклеиновой кислоты, экспрессионную кассету (генный конструкт, конструкт нуклеиновой кислоты) или вектор, включающий последовательность нуклеиновой кислоты, или организм, трансформированный указанными последовательностями нуклеиновой кислоты, экспрессионной кассетой или вектором согласно настоящему изобретению, все эти конструкции, полученные методами генной инженерии, в которых
(a) нуклеотидная последовательность, содержащая последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или ее производное или ее часть; или
(b) генетическая контрольная последовательность(и), которая функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты этапа (а), например, генетическая контрольная последовательность 3'- и/или 5'-, такая как промотор или терминатор, или
(c) а) и Ь);
не встречаются в их естественной генетической среде или были изменены методами генной инженерии, при которых модификация может иметь форму, например, замены, добавления, делеции, инверсии или вставки одного или более нуклеотидных остатков.
Под "естественной генетической средой" понимают естественный геномный или хромосомный локус в исходном организме или внутри организма
хозяина или нахождение в геномной библиотеке. В случае геномной библиотеки, естественная генетическая среда последовательности нуклеиновой кислоты предпочтительно сохраняется, по меньшей мере, частично. Среда граничит с последовательностью нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, с одной стороны и имеет последовательность длиной, по меньшей мере, 50 п.о., предпочтительно, по меньшей мере, 500 п.о., особенно предпочтительно, по меньшей мере, 1000 п.о. и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 5000 п.о. Природная кассета экспрессии - например, природная комбинация природного промотора нуклеотидной последовательности по изобретению с соответствующим геном -превращается в трансгенную экспрессионную кассету, когда последняя модифицируется с использованием неприродных синтетических (искуственных) способов, таких как, например, мутагенизация. Подходящие методы описаны, например, в US 5,565,350 или WO 00/15815.
Термин "трансгенные растения" при использовании в соответствии с изобретением также относится к потомку трансгенного растения, например, Ть Т2, Т3 и последующие поколения растений или BCi, ВС2, ВС3 и последующие поколения растений. Таким образом, трансгенные растения по настоящему изобретению могут выращиваться, самостоятельно оплодотворяться или смешиваться с другими отдельными экземплярами с целью получения дальнейших трансгенных растений по настоящему изобретению. Трансгенные растения также могут быть получены посредством вегетативного размножения клеток трансгенного растения. Настоящее изобретение также относится к материалу трансгенного растения, который может быть получен из популяции трансгенного растения по настоящему изобретению. Такой материал включает клетки и определённые ткани, органы и части растений во всех их проявлениях, таких как семена, листья, пыльники, волокна, клубни, корни, коневые волоски, стебли, зародыши, каллюсы, котелидоны, черешки, собранный материал, ткань растения, репродуктивная ткань и клеточные культуры, полученные из реального трансгенного растения и/или может использоваться для создания транс генного растения. Любое трансформированное растение, полученное по настоящему изобретению, может быть использовано в обычной схеме селекции или при размножении растения в искусственных условиях для получения более трансформированных растений с теми же характеристиками и/или может
использоваться для введения других характеристик в другие разновидности одного и того же или родственных видов. Такие растения также входят в область данного изобретения. Семена, полученные от генетически трансформированных растений, также имеют те же характеристики и входят в область данного изобретения. Как указывалось выше, настоящее изобретение в принципе применимо к любым растениям и культурам, которые могут быть трансформированы с использованием любого из способов трансформации, которые известны специалистам.
Термин "гомология" означает, что соответствующие молекулы нуклеиновой кислоты или кодированные белки функционально и/или структурно эквивалентны. Молекулы нуклеиновой кислоты, которые являются гомологичными по отношению к описанным выше молекулам нуклеиновой кислоты, а также являются производными указанных молекул нуклеиновой кислоты, представляющие собой модификации с аналогичной биологической функцией, в частности, кодирующие белки с аналогичной или в существенной степени аналогичной биологической функцией. Они могут быть представлены встречающимися в природных условиях вариантами, такими как последовательности из других вариантов или видов или мутации. Данные мутации могут происходить в естественных условиях или же могут быть получены с применением методов мутагенеза. Аллельные варианты могут быть представлены встречающимися в естественной среде аллельными вариантами, а также вариантами, полученными синтетически или с применением генной инженерии. Структуры эквиваленты можно выявить, например, за счет тестирования связи указанного полипептида с антителами или на основании данных компьютерного прогнозирования. Структурные эквиваленты имеют схожие иммунологические характеристики, например, содержат схожие эпитопы.
При использовании по тексту настоящего документа термины "ген" и "рекомбинантный ген" относятся к молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим открытую рамку считывания, кодирующую полипептид по изобретению или содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, или же кодирующую полипептид, который используется в способе по настоящему изобретению. Такие структурные варианты, как правило, могут привести к
изменению нуклеотидной последовательности гена на 1 - 5 %. Любые такие варианты нуклеотидов и получающиеся аминокислотные полиморфизмы в генах, кодирующих полипептид по изобретению или содержащих молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, которые получаются в результате естественного изменения и не изменяют функциональную описанную активность, входят в область настоящего изобретения.
Особые варианты осуществления изобретения
Соответственно, настоящее изобретение предусматривает меры и способы получения растение с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам.
Соответственно, настоящее изобретение предусматривает трансгенные растение, демонстрирующие повышенную устойчивость или стойкость к одному или нескольким гербицидам по сравнению с соответствующим начальным растением или растением дикого типа, а также способы получения таких трансгенных растений с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам. Один или несколько фенотипов, связанных с повышенной устойчивостью к гербицидам, увеличены в соответствии с изобретением посредством увеличения или создания активности фермента 11110 из лисохвоста мышехвостниковидного.
Молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или используемая в соответствии с настоящим изобретением, кодирует белок, придающий фермента ППОиз лисохвоста мышехвостниковидного.
Соответственно, в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид с активностью, повышающей устойчивость или стойкость к гербицидам, который кодируется нуклеотидной последовательностью, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и/или является белком, который содержит или состоит из полипептида, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения гомолог относится к ферменту с мутированной 11110 из лисохвоста
мышехвостниковидного, содержащему последовательность SEQ ID NO: 2 или 4, и в котором аминокислота дикого типа в положении 137, или соответствующая данному положению SEQ ID NO: 2, и/или аминокислота дикого типа в положении 415, или соответствующая данному положению SEQ ID NO: 2, и/или аминокислота дикого типа в положении 438, или соответствующая данному положению SEQ ID NO: 2 замещается еще одной аминокислотой, что более подробно описано далее по тексту документа.
Увеличение или создание указанной "активности", например, обеспечивается за счет увеличения в клетке или в ее части активности или количества одного или нескольких экспрессирующих продуктов молекулы указанной нуклеиновой кислоты, например, белков, или за счет экспрессии в начальных условиях, то есть посредством создания указанной "активности" в растении.
Согласно данному изобретению указанная "активность, повышающая устойчивость или стойкость к гербицидам" увеличивается за счет увеличения количества и/или удельной активности белка 11110, содержащего последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог.
Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения увеличенная устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответственно немодифицированным, например, нетрансформированным растением дикого типа передается по способу настоящего изобретения посредством увеличения или создания активности полипептида, включающего последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, и/или кодированную молекулу нуклеиновой кислоты (или геном), последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или гомолог молекулы указанной нуклеиновой кислоты или полипептид.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает способ получения растения, демонстрирующего увеличенную или улучшенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующим начальным растением или растением дикого типа за счет увеличения или создания активности фермента 11110, например, которая передается одним или несколькими полинуклеотидами, содержащими
последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или одним или несколькими белками, каждый из которых содержит полипептид, кодированный одной или несколькими нуклеотидными последовательностями, содержащими последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или одним или несколькими белками, каждый из которых содержит полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, и (Ь) в некоторых случаях, за счет выращивания клетки растения, растения или его части в условиях, которые допускают развитие клетки растения, растения или его части, а также (с) за счет регенерации растения с увеличенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным растением, растением дикого типа или его частью.
Соответственно, в еще одном варианте осуществления изобретения указанный способ получения растения или его части для регенерации указанного растения, или растения, демонстрирующего увеличенную устойчивость или стойкость к гербицидам, включает (i) выращивание растения или его части совместно с, например, нетрансформированным растением дикого типа в условиях гербицидной обработки; а также (ii) выбор растения с увеличенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным растением дикого типа, например, после того, как нетрансформированное растение дикого типа продемонстрировало визуальные признаки недостаточности и/или смерти.
Также, настоящее изобретение относится к способу получения растения с увеличенной устойчивость или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим начальным растением или растением дикого типа, например, трансгенного растения, который включает: (а) увеличение или создание в ядре клетки растения, в клетке растения, в растении или в его части активности полипептида 11110 по настоящему изобретению, например, с использованием указанных в настоящем документе способов; и (Ь) культивацию или выращивание клетки растения, растения или его части в условиях, которые допускают развитие клетки растения, растения или его части; а также (с) восстановление растения из указанного ядра клетки растения, указанной клетки растения или указанной части растения, которое демонстрирует увеличенную устойчивость или стойкость к
гербицидам по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным растением, начальным растением или растением дикого типа; а также (d) в некоторых случаях, селекция растения или его части, которая демонстрирует увеличенную устойчивость или стой к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, клеткой растения дикого типа, например, которая демонстрирует симптомы недостаточности и/или смерти.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу выявления растения с увеличенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам, включающему скриннинг популяции одного или нескольких ядер клетки растения, одной или нескольких клеток растения, тканей растения или одного или нескольких растений или их частей в отношении указанной "активности" со сравнением уровня активности с уровнем активности в справочном объекте; с выявлением одного или нескольких ядер клетки растения, одной или нескольких клеток растения, тканей растения или одного или нескольких растений или их частей с активностью, которая является повышенной по сравнению со сравнительным объектом, и в некоторых случаях с получением растения из выявленных ядер клетки растения, клетки или ткани.
В еще одном варианте осуществления изобретения настоящее изобретение также относится к способу выявления растения с увеличенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам, включающему скриннинг популяции одного или нескольких ядер клетки растения, одной или нескольких клеток растения, тканей растения или одного или нескольких растений или их частей в отношении уровня экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, передающий указанную активность, со сравнением уровня экспрессии со справочным объектом; с выявлением одного или нескольких ядер клетки растения, одной или нескольких клеток растения, тканей растения или одного или нескольких растений или их частей с уровнем экспрессии, которая является повышенной по сравнению со сравнительным объектом, и в некоторых случаях с получением растения из выявленных ядер клетки растения, клетки или ткани.
Соответственно, в предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает способ получения трансгенной клетки для
регенерации или получения растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа за счет увеличения или создания активности полипептида 11110 по настоящему изобретению. Такая клетка может быть представлена, например, клеткой-хозяином, например, трансгенной клеткой-хозяином. Клетка-хозяин может быть представлена, например, микроорганизмом, например, производным от грибов или бактерий или клетки растения, в частности, применимой для трансформации.
Таким образом, настоящее изобретение удовлетворяет потребность в выявлении новых уникальных генов, которые способны придавать растениям повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам при экспрессии или гиперэкспрессии экзогенных генов. Соответственно, настоящее изобретение предусматривает новые ППО-ферменты, содержащие последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог.
В одном из вариантов осуществления увеличение активности количества полипептида в органелле, такой как пластида. В еще одном из вариантов осуществления увеличение активности количества полипептида в цитоплазме.
Специфическую активность полипептида, кодированного молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или полипептида по настоящему изобретение можно проверить согласно описанию в приведенных примерах. В частности, экспрессия рассматриваемого белка в клетке, например, в клетке растения по сравнению с контрольным объектом - это простой тест, который можно выполнить с использованием методов, описанных в научных работах.
Соответственно, в одном варианте осуществления способ по настоящему изобретению для получения растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам включает увеличение или создание активности генного продукта, передающего активность ППО-фермента из лисохвоста мышехвостниковидного или его функционального эквивалента или гомолога, например, увеличение
(b) генного продукта гена, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или же ее функциональный эквивалент или гомолог; или
(Ь) полипептида, содержащего полипептид, консенсусную последовательность или мотив полипептида, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или же ее функциональный эквивалент или гомолог.
Соответственно, активность ГШО-полипептида из лисохвоста мышехвостниковидного увеличивается в одном или нескольких конкретных компартментах или органеллах клетки или растения и придает указанную повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам. Например, указанная активность может быть увеличена в пластидах или митохондриях клетки растения, тем самым увеличивая устойчивость или стойкость к гербицидам в соответствующем растении.
В одном из вариантов осуществления активность, придаваемая экспрессией гена, описание которого приводится в настоящем документе, или его экспрессирующего продукта, то есть, посредством ППО-полипептида по настоящему изобретению, увеличивается или создается в пластиде.
В одном из вариантов осуществления активность, придаваемая экспрессией гена, описание которого приводится в настоящем документе, или его экспрессирующего продукта, то есть, посредством ППО-полипептида по настоящему изобретению, увеличивается или создается в митохондрии.
В одном из вариантов осуществления активность, придаваемая экспрессией гена, описание которого приводится в настоящем документе, или его экспрессирующего продукта, то есть, посредством ППО-полипептида по настоящему изобретению, увеличивается или создается в цитоплазме.
В одном из вариантов осуществления активность, придаваемая экспрессией гена, описание которого приводится в настоящем документе, или его экспрессирующего продукта, то есть, посредством ППО-полипептида по настоящему изобретению, увеличивается или создается в эндоплазматическом ретикулуме.
Термины "цитоплазматический" и "ненацеленный" не исключают нацеленную локализацию на какой-либо клеточный компартмент для продуктов нуклеотидных последовательностей по изобретению посредством их природных свойств последовательности в рамках трансгенного организма, в одном варианте осуществления изобретения активность, описанная в данном документе активность, передаваемая полипептидом, показанным в SEQ ID NO: 2 или 4 или в ее гомологе, увеличивается или создается без нацеливания. Для целей описания настоящего изобретения термин "цитоплазматический" указывают на то, что нуклеиновая кислота по изобретению экспрессирована без добавления ненатуральной последовательности, кодирующей транзитный пептид. Последовательность, кодирующая ненатуральный транзитный пептид - это последовательность, которая не является природной частью нуклеиновой кислоты по изобретению, а скорее добавлена в ходе молекулярной манипуляции, которая хорошо известна специалистам в данной области. Соответственно, термин "цитоплазматический" не исключают нацеленную локализацию на какой-либо клеточный компартмент для продуктов нуклеотидных последовательностей по изобретению посредством их природных свойств последовательности.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения, например, трансгенного растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам или его части по сравнению с соответствующим, например, нетрансформированным растением дикого типа, который включает
(al) увеличение или создание активности в ППО-полипептиде, например, активности указанного гена или генного продукта в органелле или клетке растения, или
(а2) увеличение или создание активности белка, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, или кодированную нуклеотидными последовательностями, содержащими последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или которая присоединяется к нуклеотидной последовательности, кодирующей транзитный пептид в клетке растения; или
(аЗ) увеличение или создание активности белка, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, или
кодированную нуклеотидными последовательностями, содержащими последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или которая присоединяется к нуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность локализации органеллы, особенно последовательность локализации хлоропласта в клетке растения; или (а4) увеличение или создание активности белка, содержащего последовательность SEQ ID N0:2 или 4 или ее гомолог, или кодированную нуклеотидными последовательностями, содержащими последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или которая присоединяется к нуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность локализации митохондрии в клетке растения,
(b) регенерацию растения из указанной клетки растения;
(c) выращивание растения в условиях, которые допускают развитие
растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам
по сравнению с соответствующим, например,
нетрансформированным, растением дикого типа.
Специалист в данной области может привязать нуклеотидную последовательность транзитного пептида к нуклеотидным последовательностям, содержащим последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
Любой транзитный пептид можно использовать в соответствии с различными вариант осуществления настоящего изобретения. Например, особые нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитные пептиды, описаны в работе von Heijne et al. (Plant Molecular Biology Reporter, 9 (2), 104, (1991)) или же другие транзитные пептиды с описанием в работе by Schmidt et al. (J. Biol. Chem. 268 (36), 27447 (1993)), Della-Cioppa et al. (Plant. Physiol. 84, 965 (1987)), de Castro Silva Filho et al. (Plant Mol. Biol. 30, 769 (1996)), Zhao et al. (J. Biol. Chem. 270 (11), 6081(1995)), Romer et al. (Biochem. Biophys. Res. Commun. 196 (3), 1414 (1993)), Keegstra et al. (Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 40, 471(1989)), Lubben et al. (Photosynthesis Res. 17, 173 (1988)) и Lawrence et al. (J. Biol. Chem. 272 (33), 20357 (1997)), которые включены в настоящий документ в отсылочном порядке. Общий обзор по вопросам нацеливания представил Алиссон Р.Кермод в журнале
"Критическое обозрение науки о растениях" 15 (4), 285 (1996) в статье под названием "Механизмы внутримолекулярного транспорта белков и нацеливания в клетках растений".
Дополнительные нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитный пептид, могут быть изолированы от любых организмов, таких как микроорганизмы, водоросли или растения, содержащие пластиды, предпочтительно содержие хлоропласты. "Транзитный пептид" - это аминокислотная последовательность, чья кодирующая нуклеотидная последовательность транслируется вместе с соответствующим структурным геном. Это означает, что транзитный пептид является неотъемлемой частью транслируемого белка и образует аминотерминальную достройку белка. Оба они транслируются в виде так называемого "белка-предшественника". В целом транзитный пептид отщепляется от белка-предшественника во время или сразу после переноса белка в нужную органеллу клетки, такую как пластида, с получением зрелого белка. Транзитный пептид обеспечивает правильную локализацию зрелого белка за счет содействия в транспорте белков черех межклеточные мембраны.
Например, такие транзитные пептиды, которые с пользой применяются в способ по изобретению, являются производными от нуклеотидной последовательности, кодирующей белок, выбраннйы из группы, состоящей из рибулозобисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы, 5-энопирувил-шикимат-З-фосфатсинтазы, рибосомного белка хлоропласта CS17, белка Cs, ферредоксина, пластоцианина, активазы рибулозобисфосфаткарбоксилазы, триптофансинтазы, балка-переносчика ацила, шаперонина-60 пластиды, цитохрома C552, белка теплового шока 22-kDA, ЗЗ-kDa белка-усилителя выделения кислорода 1, субъединицы у АТФ-синтазы, субъединицы 8 АТФ-синтазы, связывающего белка II-1 хлорофилла а/Ь, белка-усилителя выделения кислорода 2, белка-усилителя выделения кислорода 3, фотосистемы I: Р21, фотосистемы I: Р28, фотосистемы I: РЗО, фотосистемы I: Р35, фотосистемы I: Р37, глицерин-3-фосфатацилтрансферазы, связывающего белка хлорофилла а/Ь, белка САВ2, гидроксиметилбилансинтазы, пируватортофосфатдикиназы, белка САВЗ, ферритна пластиды, ферритина, раннего светоиндуцируемого белка, глютамат-1
полуальдегидаминотрансферазы, протохлорофиллидредуктазы, амилазосинтазы со связанным крахмальным зерном, светособирающий связывающий белок хлорофилла а/Ь фотосистемы II, крупного аллергена пыльцы Lol р 5а, пластиды ClpB АТФ-зависимой протеазы, надперекиси дисмутазы, ферриксидин-НАДФ-оксидоредуктазы, рибонуклеопротеина 28-kDa, рибонуклеопротеина 31-kDa, рибонуклеопротеина ЗЗ-kDa, ацетолактатсинтазы, субъединицы 1 АТФ-синтазы CFo, субъединицы 2 АТФ-синтазы CFo, субъединицы 3 АТФ-синтазы, субъединицы 4 АТФ-синтазы, цитохрома f, АДФ-глюкозопирофосфорилазы, глютаминсинтазы, глютаминсинтазы 2, карбоангидразы, белка GapA, белка теплового шока hsp21, фосфат транслокатора, АТФ-зависимой протеазы пластиды ClpA, рибосомного белка пластиды CL24, рибосомного белка пластиды CL9, рибосомного белка пластиды PsCL18, рибосомного белка пластиды PsCL25, ДАГФ-синтазы, фосфорилазы крахмала, белка-переносчика корневого ацила II, бетаин-ал ьдегиддегидрогеназы, балка GapB, глютаминсинтетазы 2, фосфорибулокиназы, нитритредуктазы, рибосомного белка L12, рибосомного белка L13, рибосомного белка L21, рибосомного белка L35, рибосомного белка L40, триозафосфат-3-фосфоглицератфосфат транслокатора, ферредоксин-зависимой глютаматсинтазы, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы и НАДФ-малатдегидрогеназы, рибосомного белка PSrp-1 хлоропласта 30S, и аналогичных компонентов.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения целевая последовательность включает в себя нуклеотидную последовательность, кодирующую транзитный пептид, включающий в себя аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, 8 или 9. Предпочтительно, чтобы транзитный пептид, кодирующий нуклеиновую кислоту, был функционально связан таким образом, чтобы транзитный пептид был объединен с валином в положении 55 в SEQ ID NO: 2 или с аланином в положении 47 в SEQ ID NO: 4.
В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения нуклеотидные последовательности по настоящему изобретению связаны с нуклеиновой кислотой, кодирующей так называемый "пептид сигнальной последовательности". Для целей настоящего изобретения "пептид сигнальной последовательности" относится к аминокислотным последовательностям длиной
приблизительно от 15 до приблизительно 50 аминокислот, о которых специалистам в данной области известно, что они располагаются на N-конце белка, и которые способны нацеливать указанные белки на эндоплазматический ретикулум. Ядро сигнального пептида содержит длинный фрагмент гидрофобных аминокислот, которые склонны формировать единую альфа-спираль. Кроме того, многие сигнальные пептиды начинаются с короткого положительно заряженного фрагмента аминокислот, который может помочь обеспечить необходимую топологию полипептида во время транслокации посредством метода, который известен, как правило, positive-inside. На конце сигнального пептида, как правило, имеется фрагмент аминокислот, который распознается и расщепляется сигнальной пептидазой. Однако данная область расщепления отсутствует в трансмембранных доменах, которые служат в качестве сигнальных пептидов, и иногда называются сигнальными последовательностями якоря. Сигнальная пептидаза может расщепляться во время или после завершения транслокации с созданием свободного сигнального пептида и зрелого белка. Затем свободные сигнальные пептиды расщепляются конкретными видами протеазы. Специалисты в данной области могут подтвердить, что известно множество пептидов сигнальной последовательности (van Heijne, G., J. Mol. Biol. 184: 99-105 (1985)) и что данные пептидные последовательности или их аналоги могут свободно замещаться, пока они соответствуют требованиям к сигнальному пептиду в соответствии с описанием выше.
Специалисты согласятся с тем, что различные другие нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитные пептиды или пептиды сигнальной последовательности могут свободно изолироваться от белков, находящихся в пластидах, митохондриях или эндоплазматическом ретикулуме, которые экспрессируются из ядерных генов в качестве прекурсоров, а затем нацеливаются на пластиды, митохондрии и эндоплазматический ретикулум. Нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности, могут быть изолированы от нацеленных на органеллу белков из любого организма. Предпочтительно транзитная или сигнальная пептидная последовательность изолирована от организма, выбранного из группы, состоящей из родов Acetabularia, Arabidopsis, Brassica, Capsicum, Chlamydomonas, Cururbita, Dunaliella, Euglena, Flaveria, Glycine, Helianthus, Hordeum, Lemna, Lolium,
Lycopersion, Malus, Medicago, Mesembryanthemum, Nicotiana, Oenotherea, Oryzci, Petunia, Phaseolus, Physcomitrella, Pinus, Pisum, Raphanus, Silene, Sinapis, Solanum, Spinacea, Stevia, Synechococcus, Synechocystis, Triticum и Zea. Наиболее предпочтительно нуклеотидная последовательность, кодирующая транзитную или сигнальную пептидную последовательность, изолирована от организма, выбранного из группы, состоящей из видов Acetabularia mediterranea, Arabidopsis thaliana, Brassica campestris, Brassica napus, Capsicum annuum, Chlamydomonas reinhardtii, Cururbita moschata, Dunaliella salina, Dunaliella tertiolecta, Euglena gracilis, Flaveria trinervia, Glycine max, Helianthus annuus, Hordeum vulgare, Lemna gibba, Lolium perenne, Lycopersion esculentum, Malus domestica, Medicago falcata, Medicago sativa, Mesembryanthemum crystallinum, Nicotiana plumbaginifolia, Nicotiana sylvestris, Nicotiana tabacum, Oenotherea hookeri, Oryza sativa, Petunia hybrida, Phaseolus vulgaris, Physcomitrella patens, Pinus tunbergii, Pisum sativum, Raphanus sativus, Silene pratensis, Sinapis alba, Solanum tuberosum, Spinacea oleracea, Stevia rebaudiana, Synechococcus, Synechocystis, Triticum aestivum и Zea mays. В качестве альтернативы, нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитные пептиды или пептиды сигнальной последовательности, могут полностью или частично синтезироваться химическим путем в соответствии со структурой последовательностей транзитных пептидов, которые известны в науке на сегодняшний день.
Такие последовательности, кодирующие транзитные пептиды или пептиды сигнальной последовательности, могут использоваться для построения других экспрессирующих конструктов. Транзитные пептиды или пептид сигнальной последовательности, которые предпочтительно использованы в способе по изобретению и которые являются частью нуклеотидных последовательностей и белков по изобретению, как правило, длиной в 20 - 120 аминокислот, предпочтительно 25 - 110, 30 - 100, 35 - 90 аминокислот, более предпочтительно 40 - 85 аминокислот и наиболее предпочтительно 45 - 80 аминокислот для транзитных пептидов или приблизительно 15-50 аминокислот для пептидов сигнальной последовательности, и действуют посттрансляционно, направляя белок в пластиду, предпочтительно в хлоропласт, митохондрию или эндоплазматический ретикулум. Нуклеотидные последовательности, кодирующие такой транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности,
расположены в цепочке до нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый белок. Для правильного соединения молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности, и нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, на который будет производиться нацеливание, иногда в позиции, где происходит соединение, нужно ввести дополнительные пары оснований, которые образуют последовательности, распознающие рестриктивный фермент, применимые для соединения разных молекул нуклеиновых кислот. В результате данной процедуры может получиться крайне небольшое количество дополнительных аминокислот на N-конце зрелого импортированного белка, которые обычно и предпочтительно не препятствуют выполнению белковой функции. В любом случае дополнительные пары оснований в позиции соединения, которые образуют последовательность, распознающую рестриктивные ферменты, необходимо выбирать с осторожностью во избежание образования терминирующих кодонов или кодонов, кодирующих аминокислоты с мощным воздействием относительно сворачивания белка, как например, пролин. Предпочтительно, чтобы такие дополнительные кодоны кодировали небольшие структурно гибкие аминокислоты, такие как глицин или аланин.
Как указывалось ранее, нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, может быть присоединена к нуклеотидной последовательности, кодирующей транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности. Нуклеотидная последовательность гена, который должен экспрессироваться, и нуклеотидная последовательность, кодирующая транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности, функционально связаны между собой. Поэтому транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности вплавляется в рамке в нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
Белки, транслируемые из указанных нуклеотидных последовательностей по изобретению, являются своего рода гибридными белками. Это означает, что нуклеотидные последовательности, кодирующие транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности присоединены к гену, например, нуклеотидные
последовательности, содержащие последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные гибридные белки относится к полипептидам с мутированной ППО, содержащим последовательность SEQ ID NO: 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26.
Специалисты в данной области подтвердят, что при замещении природного транзитного пептида 111102 лисохвоста, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2, на гетерологичный транзитный пептид индийской кукурузы (SEQ ID NO: 8) или сорго двухцветного (SEQ ID NO: 9), природный N-терминальный конец SEQ ID NO: 2 укорачивается на 7 аминокислот. Поэтому предпочтительные участки мутации в позициях R137 или F438 или соответствующие данным позициям на SEQ ID NO: 2, согласно более подробному описанию далее по тексту настоящего документа, являются идентичными позициям R130 или F431 в указанных гибридных белках.
Специалисты в данной области могут соединить указанные последовательности функционально. Предпочтительно транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности отщепляется от части белка во время транспорта, предпочтительно в эндоплазматическом ретикулуме или в пластидах. Специалистам в данной области известно, что другие короткие последовательности также применимы при экспрессии генов ППО по настоящему изобретению. Кроме того, специалистам известно о том, что нет никакой необходимости в такого рода коротких последовательностях при экспрессии генов.
В качестве альтернативы нацеливанию гена, например, белки с последовательностями, содержащими последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, нуклеиновые кислоты по изобретению могут напрямую вводиться в геном пластиды.
Трансформируя пластиды, специфический внутривидовой трансгенный поток блокируется, поскольку многие виды, такие как кукуруза, хлопок и рис, обладают строгой материнской наследственностью в отношении пластид. При
помещении гена, например, гены, содержащие последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или их активные фрагменты в пластидах растения, данные гены будут отсутствовать в пыльце указанных растений.
В еще одном варианте осуществления изобретения ген, например, молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, которые используются в способе по изобретению, трансформируют в митохондрии, которые являются метаболически активными.
Для обеспечения хорошей экспрессии в пластидах ген, например, нуклеотидные последовательности, содержащие последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, вводится в кассету экспрессии с использованием предпочтительно промотора и терминатора, которые активны в пластидах, предпочтительно промотор хлоропласта. Среди примеров таких промоторов промотор psbA из гена шпината или гороха, промотор rbcL, и промотор atpB из кукурузы.
В одном из вариантов осуществления способ по настоящему изобретению включает один или несколько следующих этапов:
(a) стабилизация белка, придающего улучшенную экспрессию белку, кодированному молекулой нуклеиновой кислоты по изобретению, или полипептиду по изобретению, обладающему указанной в настоящем документе активностью 11110 и придающему повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(b) стабилизация мРНК, придающей повышенную экспрессию полинуклеотиду, кодирующему полипептид этапа (а);
(c) увеличение специфической активности белка, придающего повышенную экспрессию полипептиду этапа (а);
(d) создание или увеличение экспрессии эндогенного или искусственного фактора транскрипции, являющегося посредником экспрессии белка, придающего повышенную экспрессию полипептиду этапа(а);
(a)
(e) стимулирование активности белка, придающего повышенную экспрессию полипептиду, как указано в пункте (а), посредством добавления одного или нескольких экзогенных индуцирующих факторов;
(f) экспрессирование трансгенного гена, кодирующего белок, придающий повышенную экспрессию полипептиду этапа (а); и/или
(g) увеличение числа копий гена, придающего повышенную экспрессию молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид этапа (а);
(h) увеличение экспрессии эндогенного гена, кодирующего полипептид этапа (а) посредством добавления элементов положительной экспрессии или удаления элементов отрицательной экспрессии, например, для введения положительных элементов регулирования, таких как те, что используются для растений с введением усилителя 35S в промотор, или для удаления элементов репрессора, формирующих регуляторные области, может использоваться гомологическая рекомбинация. Также для блокирования элементов репрессора или для увеличения активности положительных элементов могут использоваться способы конверсии генов. Положительные элементы могут вводиться в растения случайным образом через Т-ДНК или мутагенез транспозонов. При этом могут выявляться линии, в которых положительные элементы были введены рядом с геном по изобретению, экспрессия которого увеличивается с применением данного способа; и/или
(Г) модуляция условий роста растения, при которых увеличивается экспрессия или активность гена, кодирующего полипептид, как указано в пункте (а) или сам белок;
(j) селекция организмов с особенно высокой активностью полипептида, как указано в пункте (а) из природных или прошедших мутацию источников и их разведение до целевых организмов, например, элитных культур.
Предпочтительно указанная мРНК кодируется молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и/или белком, придающим повышенную экспрессию белку, кодированному молекулой кислоты по настоящему
изобретению в отдельном виде или в связи с транзитной нуклеотидной последовательности или с транзитным пептидом, кодирующим нуклеотидную последовательность или полипептид, в котором имеется указанная в настоящем документе активность, например, придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа после увеличения экспрессии или активности кодированного полипептида, или в котором имеется активность полипептида, обладающего активностью, как белок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
В целом, количество мРНК или полипептида в клетке или компартменте организма соответствует количеству кодированного белка, и таким образом общей активности кодированного белка в указанном объеме. Указанное соответствие не всегда является линейным, активность в определенном объеме зависит от стабильности молекул или присутствия активирующих или ингибирующих факторов. Активность вышеупомянутых белков и/или полипептидов, кодированных молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть увеличена различными способами. Например, активность в организме или в его части, такой как клетка, увеличивается посредством увеличения количества генных продуктов, например, за счет увеличения скорости экспрессии, как введение более мощного промотора, или за счет повышения стабильности экспрессированной мРНК, за счет чего увеличивается скорость транслирования и/или повышается стабильность генного продукта, и тем самым уменьшается количество разрушенных белков. Кроме того, на активность или оборот ферментов можно повлиять таким образом, что будет достигнуто сокращение или увеличение скорости реакций или модификации (сокращения или увеличения) сродства с результатами субстрата. Мутация в каталитическом центре полипептида по изобретению, например, фермента, может модулировать скорость оборота фермента, например, отделение существенной аминокислоты может привести к сокращению или полному подавление активности фермента, или же удаление или мутация связывающих регуляторы сайтов может привести к уменьшению отрицательного регулирования, такого как ингибирование по типу обратной связи (или ингибирование субстрата, если уровень субстрата также увеличивается).
Специфическая активность фермента по настоящему изобретению может быть увеличена таким образом, что произойдет увеличение скорости оборота или улучшение связи кофактора. Повышение стабильности кодирующей мРНК или белка также может привести к повышению активности генного продукта. Стимулирование активности также входит в область определения термина "повышенная активность".
Более того, регулирование вышеупомянутых нуклеотидных последовательностей можно модифицировать так, что будет увеличена экспрессия гена. Этого можно достигнуть предпочтительно за счет гетерологичных регуляторных последовательностей или посредством модификация, например, мутации присутствующих природных регуляторных последовательностей. Преимущественные способы также можно комбинировать друг с другом.
В целом, активность генного продукта в организме или в его части, в частности, в клетке растения или в органелле клетки растения, в растении или ткани растения или в его части или в микроорганизме, может быть увеличена за счет увеличения количества конкретной кодирующей мРНК или соответствующего белка в указанном организме или его части.
Изменение, то есть увеличение, может быть вызвано эндогенными или экзогенными факторами. Например, увеличение активности в организме или в его части может быть вызвано добавлением генного продукта или прекурсора или активатора или агониста к средам или питательным веществам или может быть вызвано введением указанных субъектов в организм, переходный или устойчивый. Кроме того, такое увеличение может быть достигнуто за счет введения нуклеотидной последовательности по изобретению или кодированного белка в правильном клеточном компартменте, например, в ядро или соответственно в цитоплазму или в пластиды, или посредством трансформации и/или нацеливания.
В одном варианте осуществления способа по настоящему изобретению используются организмы, в которых один из вышеупомянутых генов или одна из вышеупомянутых нуклеиновых кислот подвергается мутации таким образом, что
клеточные факторы оказывают меньшее воздействие или вообще не оказывают никакого воздействия на активность кодированных генных продуктов по сравнению с не подвергнутыми мутации белками. Например, хорошо известен механизм регулирования активности фермента, который представлен механизмами ингибирования субстрата или регулирования по типу обратной связи. Способы и методы введения размещения, удалений и добавлений одного или нескольких оснований, нуклеотидов или аминокислот соответствующей последовательности описаны ниже по тексту документа в соответствующих пунктах и в указанной в них справочной литературе, например, в работе Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbour, NY, 1989. Специалисты в данной области смогут определить регулирующие домены и участки связывания регуляторов посредством сравнения последовательности молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или ее продуктов экспрессии с применением современным компьютерных программ, которые включают алгоритмы определения участков связывания и регулирующих доменов или посредством систематического введения в молекулу нуклеиновой кислоты или в белок мутаций и анализа данных мутаций, что приведет к увеличению удельной активности или к повышенной активности на конкретный объем, в частности на клетку.
Мутация вводится таким образом, что она не оказывает негативного влияния на повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам.
Поэтому полезной может быть экспрессия в организм молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению или полипептида по изобретению, полученного из эволюционно удаленных организмов, как например, использование гена прокариота в эукариоте-хозяине, поскольку в данных случаях механизм регулирования клетки-хозяина не может ослабить активность (клеточную или удельную) гена или его продукта экспрессии.
Область применения изобретения не ограничена конкретными нуклеиновыми кислотами, конкретными полипептидами, конкретными видами клеток, конкретными клетками-хозяевами, конкретными условиями или конкретными способами и т.д., а может относиться к различным ситуациям, а многочисленные модификации и изменения будут очевидным для специалистов в
данной области. Также необходимо понимать, что терминология изобретения используется только для описания частных примеров осуществления изобретения и не предусматривает никаких ограничений.
Также "белки обычно состоят из одного или нескольких участков, которые обычно называют доменами. Различные комбинации доменов приводят к тому, что в природе встречается огромное количество белков. Поэтому по результатам определения доменов, которые имеются в белках, можно получить представление об их функции. База данных Pfam-A - это высококачественная подобная вручную база семейств. База данных Pfam содержит большую коллекцию белкой семейств, каждое из которых представлено большим количеством выравниваний последовательности и скрытых марковских моделей (СММ)". (см.: База данных белковых семейств Pfam: R.D. Finn, et al., Nucleic Acids Research (2010), Database Issue 38:D211-222). База данных белковых семейств Pfam - это огромная коллекция, включающая более десяти тысяч белковых семейств, которая представлена на сайте по адресу http://pfam.sanger.ac.uk/. Профили скрытых марковских моделей (СММ) - это гибкие вероятностные модели, которые могут использоваться для описания консенсусных схем, которые совместно используются разными наборами гомологичных белков / последовательностями доменов. СММ в базе данных Pfam создаются из выравнивания репрезентативного набора последовательностей по каждому белковому домену, которое называется исходным выравниванием.
Соответственно, настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, который имеет 50% или более, предпочтительно 60%, 70%, или 75%, более предпочтительно 80%, 85%, 90% или 95%, еще более предпочтительно 96%, 97%, 98%, 99% и более и наиболее предпочтительно 100% идентичности к полипептидом SEQ ID NO: 2 или 4, и обеспечивающей увеличение устойчивости или стойкости к гербицидам в растении согласно описанию в настоящем документе. Настоящее изобретение также относится к полипептиду, кодированному указанным полинуклеотидом.
Настоящее изобретение также относится к изолированным нуклеиновым кислотам, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
(a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, и содержащей последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог,
(b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог,
(c) молекулы нуклеиновой кислоты, которая, в результате дегенерации генетического кода может передаваться из последовательности полипептида SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(d) молекулы нуклеиновой кислоты с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с последовательностью молекулы нуклеиновой кислоты полинуклеотида, содержащего молекулу нуклеиновой KHGjiOTbiSEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(e) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с аминокислотной последовательностью полипептида, кодированного молекулой нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с) или (d) и обладающего активностью, которая представлена молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(f) молекулы нуклеиновой кислоты, которая гибридизирует с молекулой нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с), (d) или (е) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например,
(a)
нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(g) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, который может быть изолирован при помощи моноклональных или поликлональных антител, созданных для полипептида, кодированного одной из молекул нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с), (d), (е) или (f) и обладающего активностью, которая представлена молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(h) молекулы нуклеиновой кислоты, которую можно получить посредством отбора из соответствующей библиотеки нуклеиновых кислот, особенно библиотеки кДНК и/или библиотеки геномов, в жестких условиях гибридизации с зондом, содержащим комплементарную последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по пунктам (а) или (Ь) или с ее фрагментом, в которую входит 15, предпочтительно 20, 30, 50, 100, 200, 500, 750 или 1000 нуклеотидов или более молекулы нуклеиновой кислоты, которая является комплементарной для последовательности молекул нуклеиновой кислоты, охарактеризованной в пункта (а) - (е) и кодирующей полипептид, обладающий активностью, которая представлена белком, содержаим полипептид SEQ ID NO: 7 или 9 или ее гомолог.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к гомологам вышеуказанных последовательностей, которые могут быть предпочтительно изолированы от дрожжей, грибков, вирусов, водорослей, бактерий, таких как Acetobacter (subgen. Acetobacter) aceti; Acidithiobacillus ferrooxidans; Acinetobacter sp.; Actinobacillus sp; Aeromonas salmonicida; Agrobacterium tumefaciens; Aquifex aeolicus; Arcanobacterium pyogenes; Aster yellows phytoplasma; Bacillus sp.; Bifidobacterium sp.; Borrelia burgdorferi; Brevibacterium linens; Brucella melitensis; Buchnera sp.; Butyrivibrio fibrisolvens; Campylobacter jejuni; Caulobacter crescentus; Chlamydia sp.; Chlamydophila sp.; Chlorobium limicola; Citrobacter rodentium; Clostridium sp.; Comamonas testosteroni; Corynebacterium sp.; Coxiella burnetii; Deinococcus radiodurans; Dichelobacter nodosus; Edwardsiella ictaluri; Enterobacter
sp.; Erysipelothrix rhusiopathiae; E. coli; Flavobacterium sp.; Francisella tularensis; Frankia sp. Cpll; Fusobacterium nucleatum; Geobacillus stearothermophilus; Gluconobacter oxydans; Haemophilus sp.; Helicobacter pylori; Klebsiella pneumoniae; Lactobacillus sp.; Lactococcus lactis; Listeria sp.; Mannheimia haemolytica; Mesorhizobium loti; Methylophaga thalassica; Microcystis aeruginosa; Microscilla sp. PRE1; Moraxella sp. TA144; Mycobacterium sp.; Mycoplasma sp.; Neisseria sp.; Nitrosomonas sp.; Nostoc sp. PCC 7120; Novosphingobium aromaticivorans; Oenococcus oeni; Pantoea citrea; Pasteurella multocida; Pediococcus pentosaceus; Phormidium foveolarum; Phytoplasma sp.; Plectonema boryanum; Prevotella ruminicola; Propionibacterium sp.; Proteus vulgaris; Pseudomonas sp.; Ralstonia sp.; Rhizobium sp.; Rhodococcus equi; Rhodothermus marinus; Rickettsia sp.; Riemerella anatipestifer; Ruminococcus flavefaciens; Salmonella sp.; Selenomonas ruminantium; Serratia entomophila; Shigella sp.; Sinorhizobium meliloti; Staphylococcus sp.; Streptococcus sp.; Streptomyces sp.; Synechococcus sp.; Synechocystis sp. PCC 6803; Thermotoga maritima; Treponema sp.; Ureaplasma urealyticum; Vibrio cholerae; Vibrio parahaemolyticus; Xylella fastidiosa; Yersinia sp.; Zymomonas mobilis, предпочтительно Salmonella sp. или E. coli или растений, предпочтительно от дрожжей, таких как роды Saccharomyces, Pichia, Candida, Hansenula, Torulopsis или Schizosaccharomyces или от таких растений, как A. thaliana, маис, пшеница, рожь, овес, тритикале, рис, ячмень, соя, арахис, хлопок, бурачник, подсолнечник, льняное семя, примула, семена рапса, канола и репа масличная, маниок съедобный, перец, подсолнечник, бархатцы, растение семейства паслёновых, такое как картофель, табак, баклажан томат, викоые виды, горох, люцерна, кустовые растения, такие как кофе, какао, чай, виды семейства ивовых, деревья, такая как масличная пальма, кокос, многолетние травы, такие как плевел и овсяница, а также фуражные культуры, такие как люцерна и клевер, а также, например, из ели, сосны и пихты.
Белки по настоящему изобретению предпочтительно создаваться с применением метода рекомбинантных ДНК. Например, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок, клонируется в вектор экспресии, например, в бинарный вектор, вектор экспрессии вводится в клетку-хозяин, например, в А. thaliana дикого типа NASC N906 или в любую другую клетку растения согласно описанию в представленных далее примерах, а белок экспрессируется в
указанную клетку-хозяин. Примеры бинарных векторов: pBIN19, pBHOl, pBinAR (Hofgen and Willmitzer, Plant Science 66, 221 (1990)), pGPTV, pCAMBIA, pBIB-HYG, pBecks, pGreen или pPZP (Hajukiewicz, P. et al., Plant Mol. Biol. 25, 989 (1994), и Hellens et al, Trends in Plant Science 5, 446 (2000)).
В одном из вариантов осуществления, который более подробно описывался выше по тексту, белок по настоящему изобретению предпочтительно нацеливается на компартмент клетки, например, на эндоплазматический ретикулум или на пластиды. Способы введения нуклеиновых кислот в эндоплазматический ретикулум или пластиды, а также производства белков в данном компартменте известны специалистам и также описывались в рамках данного применения. В одном из вариантов осуществления полипептид по изобретению представлен белком, локализованным после экспрессии, например, ненацеленным белком митохондрии или пластиды, например, он вплавляется в транзитный пептид или пептид сигнальной последовательности согласно описанию выше для локализации в пластиде или в эндоплазматическом ретикулуме. В еще одном варианте осуществления белок по настоящему изобретению производится без дальнейшего сигнала нацеливания (например, как указано выше), например, в цитоплазме клетки. Способы производства белков в цитоплазме хорошо известны специалистам в данной области. Способы производства белков без искусственного нацеливания хорошо известны специалистам в данной области.
Предпочтительно нуклеотидные последовательности по настоящему изобретению или генетический конструкт вместе с, по меньшей мере, одним геном-репортером клонируются в экспрессионную кассету, которая вводится в организм при помощи вектора или напрямую в геном. Данный ген-репортер должен обеспечивать возможность свободного обнаружения посредством анализа роста, флуоресценции, химической биолюминесценции или посредством фотометрических измерений. В качестве примера генов-репортеров можно привести гены, устойчивые к антибиотикам или гербицидам, гены гидролазы, гены флуоресценции белков, гены биолюминесценции, метаболические или биосинтетические гены сахара или нуклеотидов, такие как ген Ura3, ген IIv2, ген люциферазы, ген Р-галактозидазы, ген gfp, ген 2-дезоксиглюкоза-6
фосфатфосфатазы, ген Р-глюкуронидазы, ген Р-лактамазы, ген неомицин фосфотрансферазы, ген гигромицин фосфотрансферазы, мутированный ген синтетаза ацетогидроксикислот (AHAS) (также известный как ген ацетолактатсинтазы (ALS)), ген для метаболизирующего фермента D-аминокислоты или ген BASTA (= устойчивость к глюфосинату). Данные гены обеспечивают возможность легко измерить и рассчитать количество транскрипционной активности, а соответственно и экспрессии генов. Таким образом можно определить позиции генома, которые проявляют разную производительность. Относительно экспрессии специалистам в данной области известны способы введения нуклеотидных последовательностей в различные органеллы, такие как предпочтительные пластиды. Данные способы описаны, например, в Maiga P. (Annu. Rev. Plant Biol. 55, 289 (2004)). (WO 2004/040973), McBride K.E.et al. (US 5,455,818), Daniell H. et al. (US 5,932,479 и US 5,693,507) и Straub J.M. et al. (US 6,781,033). Предпочтительным способом является трансформация гипокотиля или ткани семядоли (которая является зеленой ил поэтому содержит большое количество пластид) или ткани листа, а затем регенерации побегов из материала указанного трансформированного растения в среде селекции. В качестве способов трансформации специалистам в данной области хорошо известны такие процессы, как обстрел материала растения или использование независимо воспроизводящихся челночных векторов. Однако при этом трансформация пластид при посредничестве PEG или трансформация Agrobacterium с бинарными векторами является возможной. Для трансформации пластид можно использовать селективные маркеры, например, гены, устойчивые к хлорамфениколу, стрептомицину, канамицину, неомицину, амикамицину, спектиномицину, триазину и/или линкомицину. В качестве дополнительных маркеров, которые в литературе зачастую называют вторичными маркерами для дальнейшей селекции могут применяться гены, кодирующие для придания устойчивости к таким гербицидам, как фосфинотрицин (= глюфосинат, BASTA(tm), Liberty(tm), кодированные геном bar), глифосат (= гЧ-(фосфонометил)глицин, Roundup(tm), кодированный геном 5-энолпирувилшикимат-З-фосфат синтазы = epsps), сульфонилмочевина (как Staple(tm), кодированная геном ацетолактатсинтазы (ALS)), имидазолиноны [= IMI, как имазетапир, имазамокс, Clearfield(tm), кодированный геном синтазы ацетогидроксикислоты (AHAS), также известным как ген ацетолактатсинтазы (ALS)] или бромоксинил (= Buctril(tm), кодированный
геном окси) или гены, кодирующие от антибиотиков, таких как гигромицин или G418. Такие вторичные маркеры могут использоваться, когда большинство копий геномов являются трансформированными. Кроме того, маркеры негативной селекции, такие как бактериальная цитозиндезаминаза (кодируемая геном codA), также могут использоваться для трансформации пластид.
Для повышения вероятности выявления трансформантов также желательно использовать другие гены-репортеры, кроме указанных выше генов устойчивости, или в дополнение к указанным генам. Гены-репортеры могут быть представлены, например, генами Р-галактозидазы, Р-глюкуронидазы (GUS), щелочной фосфатазы и/или зеленого флуоресцентного белка (ЗФП).
В предпочтительном варианте осуществления изобретения конструкт нуклеиновой кислоты, например, экспрессионная кассета, содержит в начале цепочки, то есть на конце 5' кодирующей последовательности, промотор, а в конечной части цепочки, то есть на конце 3', сигнал полиаденилирования, а также в некоторых случаях иные регуляторные элементы, которые функционально связаны с промежуточной кодирующей последовательностью с одной из нуклеиновых кислот SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Под функциональной связью следует понимать последовательную организацию промотора, кодирующего последовательность, терминатора или в некоторых случаях других регуляторных элементов, при которой каждый из регуляторных элементов может надлежащим образом выполнять свою функцию в экспрессии кодирующей последовательности. В одном из вариантов осуществления последовательности, являющиеся предпочтительными для функциональной связи, нацеливаются на последовательности для обеспечения субклеточной локализации в пластидах. Тем не менее, нацеливание последовательностей для обеспечения субклеточной локализации в митохондрии, в эндоплазматическом ретикулуме (= ЭР), в ядре, в масляных корпускулах или в других компартментах, может использоваться так же, как и транслирование промоторов, таких как ведущая последовательность с началом в 5' в вирусе табачной мозаики (Gallie et al., Nucl. Acids Res. 15, 8693 (1987).
Конструкт нуклеиновой кислоты, например, экспрессионная кассета, может, например, содержать конститутивный промотор или промотор конкретной ткани (предпочтительно промотор USP или напина), ген, который должен быть
экспрессирован, и сигнал удержания ЭР. Касательно сигнала удержания ЭР предпочтительно применяется аминокислотная последовательность KDEL (лизин, аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота, лейцин) или аминокислотной последовательность ККХ (лизин-лизин-Х-стоп, где X обозначает любую известную аминокислоту).
Касательно экспресии в организме-хозяине, например, в растении, экспрессионная кассета предпочтительно вставляется в вектор, как, например, с использованием плазмиды, фага или другой ДНК, что позволяет добиться оптимальной экспрессии генов в организме-хозяине. В качестве примеров подходящих плазмидов можно привести следующие: в Е. coli pLG338, pACYC184, pBR сериях, таких как, например, pBR322, серия pUC, как pUC18 или pUC19, серия МПЗтр, рКСЗО, pRep4, pHSl, pHS2, pPLc236, pMBL24, pLG200, pUR290, pIN-III113-B1, Xgtll или pBdCI; в Streptomyces pIJlOl, pIJ364, pIJ702 или pIJ361; в Bacillus pUBllO, pC194 или pBD214; в Corynebacterium pSA77 или pAJ667; в грибках pALSl, pIL2 или рВВПб; другие благоприятные грибковые переносчики описаны в pa6oTaxRomanos М.А. et al., Yeast 8, 423 (1992) и van den Hondel, C.A.M.J.J. et al. [(1991) "Heterologous gene expression in filamentous fungi"], а также в "More Gene Manipulations" в "Fungi" в Bennet J.W. & Lasure L.L., изд., стр. 396-428, Academic Press, San Diego, и в "Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi" [van den Hondel, C.A.M.J.J. & Punt, P.J. (1991) в: Applied Molecular Genetics of Fungi, Peberdy, J.F. et al., изд., стр. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge]. Примерами предпочтительных промоторов дрожжей являются 2дМ, pAG-1, YEp6, YEpl3 или pEMBLYe23. Примерами промоторов водорослей и растений являются pLGV23, pGHlac+, pBIN19, рАК2004, pVKH или pDH51 (смотрите Schmidt, R. and Willmitzer, L., Plant Cell Rep. 7, 583 (1988)). Указанные выше векторы или их производные представляют собой небольшой набор возможных плазмид. Другие плазмиды хорошо известны специалистам в данной области и представлены в работах, например, в "Cloning Vectors" (Изд. Pouwels Р.Н. et al. Elsevier, Amsterdam-Hbra-HopK-Oxford, 1985, ISBN 0 444 904018). Подходящие векторы растений описаны, помимо прочих работ, в "Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology" (CRC Press, Ch. 6/7, стр. 71-119). Предпочтительные векторы известны как челночные векторы или бинарные векторы, которые воспроизводятся в кишечной палочке и в агробактериях.
В еще одном вариант осуществления изобретения вектор экспрессионной кассеты согласно данному изобретению может также предпочтительно вводиться в организмы в форме линейной ДНК или включаться в геном организма-хозяина посредством гетерологичной или гомологической рекомбинации. Данная линейная ДНК может быть составлена из линеаризованной плазмиды или только из экспрессионной кассеты в качестве вектора или нуклеотидных последовательностей согласно данному изобретению.
Нуклеотидная последовательность также может вводиться в организм самостоятельно.
Если помимо нуклеотидной последовательности согласно данному изобретению также в организм вводятся и дополнительные гены, то вместе с геном-репортером в отдельном векторе или каждый отдельный ген с геном-репортером в векторе в каждом случае могут вводиться в организм, при этом одновременно или последовательно могут вводиться различные векторы.
Вектор предпочтительно содержит, по меньшей мере, одну копию нуклеотидной последовательности согласно данному изобретению и/или экспрессионную кассету (= генетический конструкт) согласно данному изобретению.
Изобретение также предусматривает изолированный рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, причем экспрессия вектора в клетке-хозяине приводит к повышению устойчивости или стойкости к гербициду по сравнению с клеткой-хозяином дикого типа.
Рекомбинантные экспрессионные векторы изобретения включают нуклеиновую кислоту изобретения в форме, подходящей для экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине, что означает, что рекомбинантные экспрессионные векторы включают одну или несколько регуляторных последовательностей, выбранных на основе клеток хозяина, которые должны использоваться в экспрессии, которая функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты для экспрессии. Специалисты в данной области обнаружат, что вид экспрессионного вектора может зависеть от
таких факторов, как выбор клетки-хозяина для трансформации, уровень экспрессии желаемого полипептида и т.д. Векторы экспрессии по изобретению могут быть введены в клетки-хозяева для производства таким способом полипептидов или пептидов, включая полипептиды или пептиды слияния, закодированных нуклеиновыми кислотами, согласно настоящему документу.
Рекомбинантные векторы экспрессии по изобретению могут разрабатываться для экспрессии полипептида по изобретению в клетки растений. Например, молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут экспрессироваться в клетки растения (see Schmidt R., and Willmitzer L., Plant Cell Rep. 7 (1988); Plant Molecular Biology and Biotechnology, С Press, Boca Raton, Florida, Глава 6/7, стр. 71-119 (1993); White F.F., Jenes B. et al., Techniques for Gene Transfer, в: Transgenic Plants, том 1, Engineering and Utilization, изд. Kung und Wu R., 128-43, Academic Press: 1993; Potrykus, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42, 205 (1991) and references cited therein). Подходящие клетки-хозяева бсуждаются далее в Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press: San Diego, CA (1990). В качестве примера кассета экспрессии растения может быть встроена в вектор трансформации pRT ((a) Toepfer et al., Methods Enzymol. 217, 66 (1993), (b) Toepfer et al., Nucl. Acids. Res. 15, 5890 (1987)). В качестве альтернативы рекомбинантный вектор (= вектор экспрессии) также может транскрибироваться в искусственных условиях, например, с использованием промотора Т7 и полимеразы РНК Т7.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению экспрессируются в растения и в клетки растений, такие как одноклеточные растительные клетки (например, водоросли) (см. Falciatore et al., Marine Biotechnology 1(3), 239 (1999) и ссылки в указанном документе) и клетки из высших растений (например, сперматофитов, таких как сельскохозяйственные культуры), например, для регенерации растений из клеток растений. Молекулу нуклеиновой кислоты, показанную в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, можно "ввести" в клетку растения любым из способов, включающих трансфекцию, трансформацию или трансдукцию, электропорацию, бомбардировку частицами, агроинфекцию и т.п. Одним из методов трансформации, известным специалистам, является погружение цветущего
растения в раствор Agrobacteria, причем Agrobacteria содержат нуклеиновую кислоту по изобретению, а затем размножение трансформированных гамет. Другие подходящие методы для трансформации или трансфекции клеток-хозяев, включая растительные клетки, можно найти в работах Sambrook et al. выше, а также в других лабораторных инструкциях, таких как Methods in Molecular Biology 1995, том 44, протоколы работы с агробактериями, ред.: Гартланд и Дэйви, Humana Press, Totowa, Нью-Джерси.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения трансфекция молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, в растение достигается за счет передачи гена в среде агробактерий. Трансформацию растения с помощью Agrobacterium можно осуществить, используя, например, GV3101(pMP90) (Koncz and Schell, Mol. Gen. Genet. 204:383-396) или LBA4404 (Clontech), штаммы Agrobacterium tumefaciens. Трансформацию можно осуществить с помощью стандартных методов трансформации и регенерации (Deblaere et al., Nucl. Acids Res. 13, 4777 (1994), Gelvin, Stanton B. and Schilperoort Robert A, Plant Molecular Biology Manual, 2nd Ed. - Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick Bernard R., Thompson John E., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton: CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-51642).Например, семена рапса можно трансформировать с помощью трансформации котиледона или гипокотиля (Moloney et al., Plant Cell Report 8, 238 (1989); De Block et al., Plant Physiol. 91, 694 (1989)).Использование антибиотиков для Agrobacterium и отбор растений зависит от бинарного вектора и штамма Agrobacterium, использованного для трансформации. При отборе семян рапса обычно используют канамицин в качестве селектируемого растительного маркера. Генный трансфер с помощью Agrobacterium в лен можно осуществить с помощью, например, метода, описанного Mlynarova et al., Plant Cell Report 13, 282 (1994).Дополнительно, трансформацию сои можно осуществить с помощью, например, метода, описанного в Европейском Патенте № 424 424 047, Патенте США № 5,322,783, Европейском Патенте № 397 397 687, Патенте США № 5,376,543, или Патенте США № 5,169,770. Трансформацию кукурузы можно осуществить с помощью бомбардировки частицами, поглощения ДНК
посредством полиэтилен гликоля или метода, использующего карбидно-кремниевое волокно, (смотрите, например, Freeling and Walbot "The maize handbook" Springer Verlag: Нью-Йорк (1993) ISBN 3-540-97826-7). Конкретный пример трансформации кукурузы описан в заявке на Патент США № 5,990,387, а конкретный пример трансформации пшеницы - в Международной заявке согласно РСТ № WO 93/07256.
В соответствии с настоящим изобретением вводимая молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептиды, показанные в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, может оставаться в клетке растения неизменным, если он включен в нехромосомный автономный репликон или интегрирован в растительные хромосомы или в геном органеллы. В качестве альтернативы, введенная молекула нуклеиновой кислоты может присутствовать на внехромосомном нерепликационном векторе и может временно экспрессироваться или быть временно активной.
В одном из вариантов осуществления изобретения, может быть создан гомологический рекомбинантный микроорганизм, в котором молекула нуклеиновой кислоты интегрирована в хромосому, создается вектор, содержащий, по меньшей мере, часть молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, показанный в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, в который введено удаление, добавление или замещение с целью тем самым изменить, например, функционально нарушить, ген. Например, данный ген является геном дрожжей, таким как ген S. cerevisiae, или ген Synechocystis или бактериальный ген, такой как ген Е. coli, однако при этом он может быть гомологом связанного растения или даже источника млекопитающих или насекомых. Вектор может создаваться так, что при гомологической рекомбинации эндогенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок, показанный в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, мутируется или изменяется иным образом, однако при этом по-прежнему кодирует функциональный полипептид (например, регуляторная область в начале цепочки может изменения, чтобы тем самым изменить экспрессию эндогенной молекулы нуклеиновой кислоты). В предпочтительном варианте осуществления изобретения биологическая активность белка по изобретению увеличивается при гомологической рекомбинации. Для создания точечной мутации посредством
гомологической рекомбинации гибриды ДНК-РНК могут использоваться в методе, известном как химерапластика (Cole-Strauss et al., Nucleic Acids Research 27 (5), 1323 (1999) и Kmiec, Gene Therapy American Scientist. 87 (3), 240 (1999)). Процедуры гомологической рекомбинации в виде Physcomitrella patens также известны специалистам и рассматриваются в настоящем документе с точки зрения использов ания.
Наряду с тем, что в векторе гомологической рекомбинации измененная часть молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, показанный в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, примыкает к 5' и 3'-концу дополнительной молекулой нуклеиновой кислоты гена, что делает возможным гомологическую рекомбинацию между экзогенным геном, который несет вектор, и эндогенным геном, в микроорганизме или растении. Дополнительная примыкающая молекула нуклеиновой кислоты имеет достаточную длину для успешной гомологической рекомбинации с эндогенным геном. Как правило, от нескольких сотен пар оснований до 1000 гетероциклических оснований примыкающей ДНК (на 5' и 3'-концах) включены в вектор. Смотрите, например, Thomas K.R., and Capecchi M.R., Cell 51, 503 (1987) для описания векторов гомологической рекомбинации или Strepp et al., PNAS, 95 (8), 4368 (1998) для получения информации по рекомбинации в Physcomitrella patens на основе кДНК. Вектор вводится в микроорганизм или клетку растения (например, проникновение ДНК с использованием полиэтиленгликоля), и клетки, в которых введенный ген гомологически рекомбинирован с эндогенным геном, отбирают с помощью известных методов.
Независимо от того, присутствует ли она в экстра-хромосомном невоспроизводящемся векторе или в векторе, который интегрирован в хромосому, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулы аминокислоты, показанные в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, предпочтительно находится в экспрессионной кассете растения. Экспрессионная кассета растения, предпочтительно содержит регуляторные последовательности, которые способны стимулировать экспрессию гена в клетках растения, которые функционально связаны так, что каждая последовательность может выполнять свои функции, например, такие как прекращение транскрипции посредством сигналов
полиаденилирования. Предпочтительными сигналами полиаденилирования являются сигналы, происходящие из т-ДНК Agrobacterium tumefaciens, таких как ген 3, известный как октопин синтаза Ti-плазмиды pTiACH5 (Gielen et al., EMBO J. 3, 835 (1984)) или его функциональных эквивалентов, однако при этом подходят и все остальные терминаторы, которые функционально активны в растениях. Поскольку экспрессия гена растения часто не ограничена транскрипционными уровнями, экспрессионная кассета растения, предпочтительно, содержит другие функционально связанные последовательности, такие как усилители трансляции, такие как ускоренная последовательность, которая содержит 5' нетранслируемую лидерную последовательность вируса табачной мозаики, который увеличивает значение количества полипептидов на РНК (Gallie et al., Nucl. Acids Research 15, 8693 (1987)). Примеры векторов экспрессии растений включают те, что подробно описаны в: Becker D. et al., Plant Mol. Biol. 20, 1195 (1992); and Bevan M.W., Nucl. Acid. Res. 12, 8711 (1984); and "Vectors for Gene Transfer in Higher Plants" in: Transgenic Plants, том 1, Engineering and Utilization, изд. Kung and Wu R., Academic Press, 1993, стр. 15-38.
Организм-хозяин (= трансгенный организм) предпочтительно содержит, по меньшей мере, одну копию нуклеиновой кислоты согласно данному изобретению и/или конструкта нуклеиновой кислоты согласно данному изобретению.
В принципе, все растения могут использоваться в качестве организма-хозяина. Предпочтительные трансгенными растениями являются, например, растения, выбранные из семейств Aceraceae, Anacardiaceae, Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Cactaceae, Cucurbitaceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, Malvaceae, Nymphaeaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Salicaceae, Solanaceae, Arecaceae, Bromeliaceae, Cyperaceae, Iridaceae, Liliaceae, Orchidaceae, Gentianaceae, Labiaceae, Magnoliaceae, Ranunculaceae, Carifolaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae, Caryophyllaceae, Ericaceae, Polygonaceae, Violaceae, Juncaceae или Poaceae и предпочтительно из растений, выбранных из группы семейств Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Cucurbitaceae, Fabaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Solanaceae, Liliaceae или Poaceae. Предпочтительными являются сельскохозяйственные культуры, такие как растения, предпочтительно выбранные из группы родов арахис, масличный рапс, канола, подсолнечник, сафлор, олива,
кунжут, фундук, миндаль, авокадо, лавр, тыква/кабачок, льняное семя, соя, фисташка, огуречник аптечный, маис, пшеница, рожь, овёс, сорго и просо, тритикале, рис, ячмень, маниока, картофель, сахарная свекла, баклажан, люцерна и многолетние травы, а также кормовые растения, масличная пальма, овощи (капуста декоративная, корнеплоды, клубнеплодов, овощи с плодами в виде стручков, плодовые овощи, овощи с луковицами, листовые овощи и стеблевые овощи), гречиха, топинамбур, кормовые бобы, горошек, чечевица, фасоль, люпин, клевер и люцерна, при этом упомянуты только некоторые из них.
В одном из вариантов осуществления изобретения трансгенные растения выбираются из группы, включающей сою, рапсовое семя (включая рапс, особенно канола и зимний рапс), хлопок, сахарный тростник, сахарная свекла и картофель, в частности, кукурузу, сою, рапсовое семя (включая рапс, в частности, канола и зимний рапс), хлопок, пшеницу и рис.
В еще одном варианте осуществления изобретения трансгенное растение представлено голосемянным растением, в частности, елью, сосной или пихтой.
В одном из вариантов осуществления растение-хозяин выбирается из семейств Aceraceae, Anacardiaceae, Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Cactaceae, Cucurbitaceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, Malvaceae, Nymphaeaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Salicaceae, Solanaceae, Arecaceae, Bromeliaceae, Cyperaceae, Iridaceae, Liliaceae, Orchidaceae, Gentianaceae, Labiaceae, Magnoliaceae, Ranunculaceae, Carifolaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae, Caryophyllaceae, Ericaceae, Polygonaceae, Violaceae, Juncaceae или Poaceae и предпочтительно из растений, выбранных из группы семейства Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Cucurbitaceae, Fabaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Solanaceae, Liliaceae или Poaceae. Предпочтительными являются сельскохозяйственные культуры и в особенности растения, упомянутые выше в качестве растений-хозяев, такие как семейства и рода, упомянутые выше в качестве примеров предпочтительных видов Anacardium occidentale, Calendula officinalis, Carthamus tinctorius, Cichorium intybus, Cynara scolymus, Helianthus annus, Tagetes lucida, Tagetes erecta, Tagetes tenuifolia; Daucus carota; Corylus avellana, Corylus colurna, Borago officinalis; Brassica napus, Brassica rapa ssp., Sinapis arvensis Brassica juncea, Brassica juncea var. juncea, Brassica juncea var. crispifolia, Brassica juncea var. foliosa, Brassica nigra, Brassica sinapioides,
Melanosinapis communis, Brassica oleracea, Arabidopsis thaliana, Anana comosus, Ananas ananas, Bromelia comosa, Carica papaya, Cannabis sative, Ipomoea batatus, Ipomoea pandurata, Convolvulus batatas, Convolvulus tiliaceus, Ipomoea fastigiata, Ipomoea tiliacea, Ipomoea triloba, Convolvulus panduratus, Beta vulgaris, Beta vulgaris var. altissima, Beta vulgaris var. vulgaris, Beta maritima, Beta vulgaris var. perennis, Beta vulgaris var. conditiva, Beta vulgaris var. esculenta, Cucurbita maxima, Cucurbita mixta, Cucurbita pepo, Cucurbita moschata, Olea europaea, Manihot utilissima, Janipha manihot, Jatropha manihot., Manihot aipil, Manihot dulcis, Manihot manihot, Manihot melanobasis, Manihot esculenta, Ricinus communis, Pisum sativum, Pisum arvense, Pisum humile, Medicago sativa, Medicago falcata, Medicago varia, Glycine max Dolichos soja, Glycine gracilis, Glycine hispida, Phaseolus max, Soja hispida, Soja max, Cocos nucifera, Pelargonium grossularioides, Oleum cocoas, Laurus nobilis, Persea americana, Arachis hypogaea, Linum usitatissimum, Linum humile, Linum austriacum, Linum bienne, Linum angustifolium, Linum catharticum, Linum flavum, Linum grandiflorum, Adenolinum grandiflorum, Linum lewisii, Linum narbonense, Linum perenne, Linum perenne var. lewisii, Linum pratense, Linum trigynum, Punica granatum, Gossypium hirsutum, Gossypium arboreum, Gossypium barbadense, Gossypium herbaceum, Gossypium thurberi, Musa nana, Musa acuminata, Musa paradisiaca, Musa spp., Elaeis guineensis, Papaver orientale, Papaver rhoeas, Papaver dubium, Sesamum indicum, Piper aduncum, Piper amalago, Piper angustifolium, Piper auritum, Piper betel, Piper cubeba, Piper longum, Piper nigrum, Piper retrofractum, Artanthe adunca, Artanthe elongata, Peperomia elongata, Piper elongatum, Steffensia elongata, Hordeum vulgare, Hordeum jubatum, Hordeum murinum, Hordeum secalinum, Hordeum distichon Hordeum aegiceras, Hordeum hexastichon., Hordeum hexastichum, Hordeum irregulare, Hordeum sativum, Hordeum secalinum, Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida, Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Sorghum saccharatum, Sorghum vulgare, Andropogon drummondii, Holcus bicolor, Holcus sorghum, Sorghum aethiopicum, Sorghum arundinaceum, Sorghum caffrorum, Sorghum cernuum, Sorghum dochna, Sorghum drummondii, Sorghum durra, Sorghum guineense, Sorghum lanceolatum, Sorghum nervosum, Sorghum saccharatum, Sorghum subglabrescens, Sorghum verticilliflorum, Sorghum vulgare, Holcus halepensis, Sorghum miliaceum millet, Panicum militaceum, Zea mays, Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum или Triticum vulgare,
Cofea spp., Coffea arabica, Coffea canephora, Coffea liberica, Capsicum annuum, Capsicum annuum var. glabriusculum, Capsicum frutescens, Capsicum annuum, Nicotiana tabacum, Solanum tuberosum, Solanum melongena, Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum., Lycopersicon pyriforme, Solanum integrifolium, Solanum lycopersicum Theobroma cacao или Camellia sinensis.
Анакардиевые, такие как роды Pistacia, Mangifera, Anacardium, например, виды Pistacia vera [фисташник, Pistazie], Mangifer indica [Манго] или Anacardium occidentale [Кешью]; Asteraceae, такие как роды Calendula, Carthamus, Centaurea, Cichorium, Cynara, Helianthus, Lactuca, Locusta, Tagetes, Valeriana, например, виды Calendula officinalis [Бархатец], Carthamus tinctorius [сафлор], Centaurea cyanus [василёк], Cichorium intybus [цикорий обыкновенный], Cynara scolymus [Артишок], Helianthus annus [подсолнечник], Lactuca sativa, Lactuca crispa, Lactuca esculenta, Lactuca scariola L. ssp. sativa, Lactuca scariola L. var. integrata, Lactuca scariola L. var. integrifolia, Lactuca sativa subsp. romana, Locusta communis, Valeriana locusta [латук], Tagetes lucida, Tagetes erecta или Tagetes tenuifolia [Бархатец]; Apiaceae, такие как роды Daucus, например, виды Daucus carota [морковь]; Betulaceae, такие как роды Corylus, например, виды Corylus avellana или Corylus colurna [фундук]; Boraginaceae, такие как роды Borago, например, виды Borago officinalis [огуречник аптечный]; Brassicaceae, такие как роды Brassica, Melanosinapis, Sinapis, Arabadopsis, например, виды Brassica napus, Brassica rapa ssp. [канола, масличный рапс, репа масленичная], Sinapis arvensis Brassica juncea, Brassica juncea var. juncea, Brassica juncea var. crispifolia, Brassica juncea var. foliosa, Brassica nigra, Brassica sinapioides, Melanosinapis communis [горчица], Brassica oleracea [кормовая свёкла] или Arabidopsis thaliana; Bromeliaceae, такие как роды Anana, Bromelia, например, виды Anana comosus, Ananas ananas или Bromelia comosa [ананас]; Caricaceae, такие как роды Carica, например, виды Carica papaya [папайя]; Cannabaceae, такие как роды Cannabis, например, виды Cannabis sative [конопля], Convolvulaceae, такие как роды Ipomea, Convolvulus, например, виды Ipomoea batatus, Ipomoea pandurata, Convolvulus batatas, Convolvulus tiliaceus, Ipomoea fastigiata, Ipomoea tiliacea, Ipomoea triloba или Convolvulus panduratus [батат, вьюнок скрипковидный, талинум клинолистный], Chenopodiaceae, такие как роды Beta, то есть виды Beta vulgaris, Beta vulgaris var. altissima, Beta vulgaris var. Vulgaris, Beta maritima, Beta vulgaris
var. perennis, Beta vulgaris var. conditiva или Beta vulgaris var. esculenta [сахарная свёкла]; Cucurbitaceae, такие как роды Cucubita, например, виды Cucurbita maxima, Cucurbita mixta, Cucurbita реро или Cucurbita moschata [тыква, кабачок]; Elaeagnaceae, такие как роды Elaeagnus, например, виды Olea europaea [олива]; Ericaceae, такие как роды Kalmia, например, виды Kalmia latifolia, Kalmia angustifolia, Kalmia microphylla, Kalmia polifolia, Kalmia occidentalis, Cistus chamaerhodendros или Kalmia lucida [кальмия широколистная, кальмия узколистная, кальмия мелколистая, кальмия многолистная, кальмия западная, ладанник узколистый, лавр альпийский, лавр болотный, лавр болотный западный, лавр болотный]; Euphorbiaceae, такие как роды Manihot, Janipha, Jatropha, Ricinus, например, виды Manihot utilissima, Janipha manihot, Jatropha manihot., Manihot aipil, Manihot dulcis, Manihot manihot, Manihot melanobasis, Manihot esculenta [маниок съедобный, маранта, тапиока, маниот] или Ricinus communis [плод клещевины, куст клещевины, клещевина]; Fabaceae, такие как роды Pisum, Albizia, Cathormion, Feuillea, Inga, Pithecolobium, Acacia, Mimosa, Medicajo, Glycine, Dolichos, Phaseolus, Soja, например, виды Pisum sativum, Pisum arvense, Pisum humile [горох], Albizia berteriana, Albizia julibrissin, Albizia lebbeck, Acacia berteriana, Acacia littoralis, Albizia berteriana, Albizzia berteriana, Cathormion berteriana, Feuillea berteriana, Inga fragrans, Pithecellobium berterianum, Pithecellobium fragrans, Pithecolobium berterianum, Pseudalbizzia berteriana, Acacia julibrissin, Acacia nemu, Albizia nemu, Feuilleea julibrissin, Mimosa julibrissin, Mimosa speciosa, Sericanrda julibrissin, Acacia lebbeck, Acacia macrophylla, Albizia lebbek, Feuilleea lebbeck, Mimosa lebbeck, Mimosa speciosa [кампешевое дерево, шёлковая акация, альбиция Лебекка], Medicago sativa, Medicago falcata, Medicago varia [люцерна] Glycine max Dolichos soja, Glycine gracilis, Glycine hispida, Phaseolus max, Soja hispida или Soja max [соевый боб]; Geraniaceae, такие как роды Pelargonium, Cocos, Oleum, например, видыСосо* nucifera, Pelargonium grossularioides или Oleum cocois [кокос]; Gramineae, такие как роды Saccharum, например, виды Saccharum ojficinarum; Juglandaceae, такие как роды Juglans, Wallia, например, виды Juglans regia, Juglans ailanthifolia, Juglans sieboldiana, Juglans cinerea, Wallia cinerea, Juglans bixbyi, Juglans californica, Juglans hindsii, Juglans intermedia, Juglans jamaicensis, Juglans major, Juglans microcarpa, Juglans nigra или Wallia nigra [грецкий орех, орех чёрный, орех обыкновенный, персидский орех, серый орех, орех серый калифорнийский]; Lauraceae, такие как
роды Persea, Laurus например, виды Laurus nobilis [лавр, лавр благородный, магнолия виргинская], Persea americana Persea americana, Persea gratissima или Persea persea [авокадо]; Leguminosae, такие как роды Arachis, например, виды Arachis hypogaea [арахис]; Linaceae, такие как роды Linum, Adenolinum, например, виды Linum usitatissimum, Linum humile, Linum austriacum, Linum bienne, Linum angustifolium, Linum catharticum, Linum flavum, Linum grandiflorum, Adenolinum grandiflorum, Linum lewisii, Linum narbonense, Linum perenne, Linum perenne var. lewisii, Linum pratense или Linum trigynum [лен, льняное семя]; Lythrarieae, такие как роды Punica, например, виды Punica granatum [гранат]; Malvaceae, такие как роды Gossypium, например, виды Gossypium hirsutum, Gossypium arboreum, Gossypium barbadense, Gossypium herbaceum или Gossypium thurberi [хлопок]; Musaceae, такие как роды Musa, например, виды Musa nana, Musa acuminata, Musa paradisiaca, Musa spp. [банан]; Onagraceae, такие как роды Camissonia, Oenothera, например, виды Oenothera biennis или Camissonia brevipes [примула, энотера]; Palmae, такие как роды Elacis, например, виды Elaeis guineensis [масличная пальма]; Papaveraceae такие как роды Papaver, например, виды Papaver orientale, Papaver rhoeas, Papaver dubium [мак, мак восточный, мак-самосейка, мачок, мак полевой сорта "Ширли", мак остроголовый]; Pedaliaceae такие как роды Sesamum, например, виды Sesamum indicum [кунжут]; Piperaceae, такие как роды Piper, Artanthe, Peperomia, Steffensia, например, виды Piper aduncum, Piper amalago, Piper angustifolium, Piper auritum, Piper betel, Piper cubeba, Piper longum, Piper nigrum, Piper retrofractum, Artanthe adunca, Artanthe elongata, Peperomia elongata, Piper elongatum, Steffensia elongata. [перец кайенский красный, волчье лыко]; Poaceae, такие как роды Hordeum, Secale, Avena, Sorghum, Andropogon, Holcus, Panicum, Oryza, Zea, Triticum, например, виды Hordeum vulgare, Hordeum jubatum, Hordeum murinum, Hordeum secalinum, Hordeum distichon Hordeum aegiceras, Hordeum hexastichon., Hordeum hexastichum, Hordeum irregulare, Hordeum sativum, Hordeum secalinum [ячмень, перловая крупа, ячмень гривастый, ячмень заячий, ячмень луговой], Secale cereale [рожь], Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida [овес], Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Sorghum saccharatum, Sorghum vulgare, Andropogon drummondii, Holcus bicolor, Holcus sorghum, Sorghum aethiopicum, Sorghum arundinaceum, Sorghum caffrorum, Sorghum cernuum, Sorghum dochna, Sorghum drummondii, Sorghum durra, Sorghum guineense, Sorghum lanceolatum, Sorghum
nervosum, Sorghum saccharatum, Sorghum subglabrescens, Sorghum verticilliflorum, Sorghum vulgare, Holcus halepensis, Sorghum miliaceum millet, Panicum militaceum [Sorghum, millet], Oryza sativa, Oryza latifolia [рис], Zea mays [кукуруза, маис] Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum или Triticum vulgare [пшеница, пшеница мягкая, пшеница обыкновенная], Proteaceae, такие как роды Macadamia, например, виды Macadamia intergrifolia [макадамия]; Rubiaceae, такие как роды Coffea, например, виды Cofea spp., Coffea arabica, Coffea canephora или Coffea liberica [кофе]; Scrophulariaceae, такие как роды Verbascum, например, виды Verbascum blattaria, Verbascum chaixii, Verbascum densiflorum, Verbascum lagurus, Verbascum longifolium, Verbascum lychnitis, Verbascum nigrum, Verbascum olympicum, Verbascum phlomoides, Verbascum phoenicum, Verbascum pulverulentum или Verbascum thapsus [коровяк, коровяк белый, колокольчик крапиволистный, коровяк густоцветковый, коровяк серебрянный, коровяк длиннолистовой, коровяк клинолистный, коровяк чёрный, коровяк греческий, коровяк лекарственный, коровяк фиолетовый, коровяк мохнатый, медвежье ухо]; Solanaceae, такие как роды Capsicum, Nicotiana, Solanum, Lycopersicon, например, виды Capsicum annuum, Capsicum annuum var. glabriusculum, Capsicum frutescens [перец], Capsicum annuum [паприка], Nicotiana tabacum, Nicotiana alata, Nicotiana attenuata, Nicotiana glauca, Nicotiana langsdorjfii, Nicotiana obtusifolia, Nicotiana quadrivalvis, Nicotiana repanda, Nicotiana rustica, Nicotiana sylvestris [табак], Solanum tuberosum [картофель], Solanum melongena [баклажан] {Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum., Lycopersicon pyriforme, Solanum integrifolium или Solanum lycopersicum [помидор]; Sterculiaceae, такие как роды Theobroma, например, виды Theobroma cacao [какао]; Theaceae, такие как роды Camellia, например, виды Camellia sinensis) [чай].
Введение нуклеиновых кислот по настоящему изобретению, экспрессионной кассеты или вектора в организмы, растения, например, в принципе можно осуществлять всеми способам, известными на сегодняшний день специалистам. Введение нуклеотидных последовательностей приводит к получению рекомбинантных или трансгенных организмов.
Перенос инородных генов в геном растения называется трансформацией. При выполнении данных действий описанные способы трансформации и регенерации растений из тканей и клеток растения используются для переходной или устойчивой трансформации. Подходящими способами являются трансформация протопластов посредством поглощения ДНК, введенного при помощи поли(этиленгликоля), "биолистический" способ с использованием генной пушки - что относится к методу обстрела частицами, электропорации, инкубации сухих эмбрионов в растрове ДНК, микроинъекции и переноса генов в среде Agrobacterium. Указанные методы описаны например, в Jenes В. et al., Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, том 1, Engineering and Utilization, изд. Kung S.D and Wu R., Academic Press (1993) 128-143 и в Potrykus, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42, 205 (1991). Нуклеиновые кислоты или конструкт, подлежащий экспрессии, предпочтительно клонируется в вектор, который подходит для трансформации Agrobacterium tumefaciens, например, pBinl9 (Bevan et al., Nucl. Acids Res. 12, 8711 (1984)). Агробактерии, трансформированные таким вектором, могут затем использоваться известным способом для трансформации растений, в частности, сельскохозяйственных культур, таких как, к примеру, табак, путем, например, погружения дробленных или рубленых листьев в агробактериальные растворы и затем культивирования их в подходящей среде. Трансформация растений посредством Agrobacterium tumefaciens описана, например, Хефгеном и Вилмитцером в работе Nucl. Acid Res. 16, 9877 (1988) или известна, помимо прочего, из работы White F.F., Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants, том 1, Engineering and Utilization, изд. Kung S.D. and Wu R., Academic Press, 1993, стр. 15-38.
Агробактерии, трансформированные вектором экспрессии по настоящему изобретению, могут аналогичным образом использоваться с применением известных способов для трансформации растений, таких как испытуемые растения, как Arabidopsis или сельскохозяйственные культуры, такие как зерновые культура, кукуруза, овес, рожь, ячмень, пшеница, соя, рис, хлопок, сахарная свекла, канола, подсолнечник, лен, конопля, картофель, табак, томаты, морковь, паприка, масличный рапс, тапиока, кассава, маранта, архатцы, люцерна, салат-латук и различные виды деревьев, орехов и винограда, в частности, сельскохозяйственные культуры с содержанием масла, такие как соя, арахис,
клещевина, подсолнечник, кукуруза, хлопок, лен, масличный рапс, кокос, масличная пальма, сафлор (Carthamus tinctorius) или бобы какао, например, посредством погружения дробленных или рубленых листьев в агробактериальные растворы и затем культивирования их в подходящей среде.
Генетически модифицированные клетки растений могут регенерироваться с применением всех способов, известных специалистам в данной области. Подходящие способы можно найти в перечисленных выше публикациях Kung S.D. and Wu R., Potrykus или Hofgen and Willmitzer.
Соответственно, еще один аспект изобретения относится к трансгенным организмам, трансформированным, по меньшей мере, одной нуклеотидной последовательностью, экспрессионной кассетой или вектором по настоящему изобретению, а также к клеткам, клеточным культурам, тканям, частям - таким как, например, листья, корни и др. если это организмы растений - или к репродуктивному материалу, полученному из таких организмов.
В одном из вариантов осуществления изобретения растения-хозяева в отношении нуклеиновой кислоты, экспрессионной кассеты или вектора по настоящему изобретению выбираются из группы, включающей кукурузу, сою, масличный рапс рапсовое семя (включая канола и зимний рапс), хлопок, пшеницу и рис.
В еще одном варианте осуществления изобретение относится к использованию конструкта нуклеиновой кислоты, например, экспрессионной кассеты, содержащего одну или несколько последовательностей ДНК, кодирующих один или несколько полипептидов, показанных в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, или содержащего одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или кодирующих или гибридизирующих последовательности ДНК с ней для трансформации клеток растения, тканей или частей растений.
При этом в зависимости от выбора промотора молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут экспрессироваться конкретно в листья, в семена, в наросты, в корни, в стебель или в другие части растения. Данные трансгенные растения, перепроизводящие последовательности, например,
показанные в SEQ ID NO: 1 или 3 или гомолог, из репродуктивный материал вместе с клетками растений, их тканями или частями также являются объектом настоящего изобретения.
Экспрессионная кассета или нуклеотидные последовательности или конструкт по настоящему изобретению, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты или последовательности, показанные в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, могут также использоваться для трансформации организмов, выявленных посредством вышеуказанного примера, таких как бактерии, дрожжи, мицелиальные грибы и растения.
В рамках настоящего изобретения повышенная устойчивость или стойкость к гербицидам относится, например, к искуственно полученный свойствам повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с генетически немодифицированным первоначальным растениям, например, свойство, полученное в результате генетической модификации целевого организма, а также благодаря функциональной гиперэкспрессии одного или нескольких полипептидов (последовательностей) SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, например, кодированных соответствующими молекулами нуклеиновой кислоты, показанными в SEQ ID NO: 1 или 3 и/или гомологи, в организмах по настоящему изобретению, предпочтительно в трансгенном растении по настоящему изобретению или полученному по способу, предусмотренному изобретением, по меньшей мере, на протяжении, по меньшей мере, одного поколения растений.
Конститутивная экспрессия последовательностей полипептидов SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, кодированных соответствующей молекулой нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, является еще более предпочтительной. Однако, с другой стороны, индуцируемая экспрессия также может представляться желательной. Экспрессия последовательностей полипептидов по изобретению может направляться в цитоплазму или в органеллы, предпочтительно в пластиды клетки-хозяина, предпочтительно клетки растения.
Активность белка, кодированного последовательностями SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, кодированными соответствующей молекулой нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, может быть определена, например, в искусственных условиях согласно описанию в Примерах. Кроме того, функциональная экспрессия последовательностей SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, кодированных соответствующей молекулой нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 и/или ее гомологи, модифицированной по своей природе и уровню, а также ее влияние на устойчивость или стойкость к гербицидам, но при этом только на эффективность метаболических путей, может проверяться на испытуемых растениях при проведении вегетационных опытов (см. ПРИМЕРЫ).
Дополнительный объект изобретения включает трансгенные организмы, такие как трансгенные растения, трансформированные экспрессионной кассетой, содержащей последовательности, показанные в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, по настоящему изобретению или последовательности ДНК, которые гибридизируются с ними, а также трансгенные клетки, ткани, части или репродуктивный материал таких растений. Особое предпочтение отдается в данном случае трансгенным сельскохозяйственным культурам, таким как, например, ячмень, пшеница, рожь, овес, кукуруза, соя, рис, хлопок, сахарная свекла, масличный рапс и канола, подсолнечник, лен, конопля, чертополох, картофель, табак, томаты, тапиока, кассава, маранта, люцерна, салат-латук и различные виды деревьев, орехов и винограда.
В одном из вариантов осуществления изобретения трансгенные растения, трансформированные экспрессионной кассетой или содержащие или включающие молекулы нуклеиновой кислоты или последовательности, показанные в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, по настоящему изобретению или последовательности ДНК, гибридизирующиеся с ними, выбираются из группы, включающей кукурузу, сою, масличный рапс рапсовое семя (включая канола и зимний рапс), хлопок, пшеницу и рис.
Для целей изобретения растения представлены одно- и двудольными растениями, мхами или водорослям, в частности, растениями, например, в одном из вариантов осуществления изобретения однодольными растениями или,
например, в еще одной варианте осуществления изобретения двудольными растениями. Дальнейшее уточнение по настоящему изобретению представляет собой трансгенные растения в соответствии с описанием выше, которые содержат нуклеотидную последовательность или конструкт по настоящему изобретению или экспрессионную кассету по настоящему изобретению.
Тем не менее, трансгенный означает также, что, нуклеиновые кислоты согласно изобретению находятся в природной позиции в геноме организма, но при этом последовательность, например, кодирующая последовательность или регуляторная последовательность, например, последовательность промотора, была изменена по сравнению с природной последовательностью. Предпочтительно, термины "трансгенный/рекомбинантный" следует понимать, что транскрипция одной или нескольких нуклеиновых кислот или молекул по изобретению, что показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, находится в геноме в неприродной позиции. В одном из вариантов экспрессия нуклеиновых кислот или молекул является гомологичной. В еще одном из вариантов экспрессия нуклеиновых кислот или молекул является гетерологичной. Данная экспрессия может быть кратковременно или в случае последовательности стабильно вводиться в геном.
Предпочтительно индуцируемые промоторы растений представлены, например, промотором PRP1 (Ward et al., Plant.Mol. Biol. 22361 (1993)), промотором, индуцируемым при помощи бензолсульфонамида (ЕР 388 186), промотором, индуцируемым тетрациклина(Оа1г et al., Plant J. 2, 397 (1992)), промотором, индуцируемым при помощи салициловой кислоты (WO 95/19443), промотором, индуцируемым при помощи абсцизовой кислоты (ЕР 335 528) и промотором, индуцируемым при помощи этанола или циклогексанона (WO 93/21334).В других примерах промоторы растений, которые могут использоваться в предпочтительном порядке, представлены промотором цитоплазмы FBPase из картофеля, промотором ST-LSI из картофеля (Stockhaus et al., EMBO J. 8, 2445 (1989)), промотором фосфорибосил пирофосфат амидотрансферазы из Glycine max (смотрите также номер доступа банка генов U87999) или нодиен-специфическим промотором согласно описанию в ЕР 249 676.
Такие промоторы известны специалистам в данной области или могут быть изолированы из генов, которые индуцируются на указанных выше условиях. В одном из вариантов осуществления промоторы семян могут использоваться с односемядольными или двусемядольными растениями.
В принципе, все природные промоторы со своими регуляторными последовательностями могут использоваться как и указанные выше для экспрессионной кассеты по настоящему изобретению и для способа согласно данному изобретению. К тому же предпочтительно могут использоваться синтетические промоторы. При получении экспрессионной кассеты можно использовать различные фрагменты ДНК, чтобы получить нуклеотидную последовательность, которая считывается в правильном порядке по настоящему изобретению и имеет правильную рамку считывания. Для соединения фрагментов ДНК (= нуклеиновых кислот по настоящему изобретению) между собой возможно добавление к фрагментам адаптеров или линкеров. Области промотора и терминатора могут быть предусмотрены по настоящему изобретению в направлении транскрипции с линкером или полилинкером, содержащим одну или несколько контрольных точек для введения данной последовательности. В целом линкер имеет от 1 до 10, в основном от 1 до 8, предпочтительно от 2 до 6 контрольных точек. В целом размер линкера внутри регуляторной области составляет менее 100 п.о., заще менее 60 п.о., но при этом, по меньшей мере, 5 п.о. Промотор может быть природным или гомологичным, а также инородным или гетерологичным по отношению к организму-хозяину, например, по отношению к растению-хозяину. В направлении транскрипции 5'-3' экспрессионная кассета содержит промотор, последовательность ДНК которого показана в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, а также область для терминации транскрипции. Различные области терминации можно заменять друг на друга любым желаемым способом.
Молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, например, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, который придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам, в растениях может быть изолирована с использованием стандартных методов молекулярном биологии и информации о последовательности, которая приводится в настоящем документе. Например, кДНК по настоящему изобретению, кодирующая микробный
полипептид, может быть изолирована от библиотеки микробных кДНК с использованием всей или части одной из последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Более того, молекула нуклеиновой кислоты, включающая всю или часть одной из последовательностей SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, может быть изолирована при помощи цепной реакции полимеразы с использованием олигонуклеотидных праймеров, составленных на основании данной последовательности. Например, мРНК можно изолировать от клетки растения (например, при помощи процедуры извлечения гуанидиний-тиоцианата согласно Chirgwin et al., Biochemistry 18, 5294 (1979)), а кДНК можно получить с использованием обратной транскриптазы (например, обратная транскирптаза вируса лейкоза Молони, которая имеется в Gibco/BRL, Bethesda, MD; или обратная транскирптаза вируса миелобластоза птиц, которая имеется в Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL). Синтетические олигонуклеотидные праймеры для усиления цепной реакции полимеразы можно получить на основании одной из последовательностей нуклеотидов, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть усилена с использованием кДНК или, в качестве альтернативы, геномной ДНК в качестве шаблона и подходящих олигонуклеотидных праймеров согласно стандартным методам усиления цепной реакции полимеразы. Усиленную таким образом молекулу нуклеиновой кислоты можно клонировать в соответствующий вектор и охарактеризовать с использованием анализа последовательности ДНК. Кроме того, гены, которые используются в настоящем изобретении, можно получить стандартными методами синтезирования, например, с использованием коммерчески доступного автоматизированного синтезатора ДНК.
В одном варианте осуществления изолированная молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит одну из последовательностей нуклеотидов или молекулы, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Кроме того, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать только часть кодирующей области одной из последовательностей или молекул нуклеиновой кислоты, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, например, фрагмент, который может использоваться в качестве зонда или праймера, или фрагмент, кодирующий биологически активную часть полипептида по изобретению.
Части белков, кодированные полипептидом согласно данному изобретению, или кодирующие полипептид молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению предпочтительно должны быть биологически активными частями, описанными в настоящем документе. При использовании по тексту настоящего документа термин "биологически активная часть" полипептида включает часть, например, домен/мотив повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам в растении. Для определения того, приведет ли использование полипептида согласно данному изобретению или его биологически активной части к повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам, можно выполнить анализ растения, содержащего полипептид. Данный анализ представляет собой способ, хорошо известный специалистам в данной области, подробное описание которого приводится в Примерах. Конкретнее, биологически активные части полипептида, кодирующие фрагменты нуклеиновой кислоты, можно получить при помощи изоляции части одной из последовательностей молекул нуклеиновой кислоты, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, экспрессирующих кодированную часть полипептида или его пептида (например, посредством рекомбинантной экспрессии в искусственных условиях) и оценки активности кодированной части.
Биологически активные части полипептида по изобретению входят в область действия настоящего изобретения и включают пептиды, содержащие аминокислотные последовательности, полученные из аминокислотной последовательности гена, кодирующего полипептид, или из аминокислотной последовательности белка, гомологичного полипептиду по данному изобретению, которые включают меньше аминокислот чем полипептид полной длины по настоящему изобретению или белок полной длины, являющийся гомологичным полипептиду по настоящему изобретению, и демонстрирует, по меньшей мере, некоторую ферментную или биологическую активность полипептида по настоящему изобретению. Как правило, биологически активные части (например, пептиды, которые по длине включают, например, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50, 100 или более аминокислот) содержат домен или мотив с, по меньшей мере, одной активностью полипептида по настоящему изобретению. Кроме того, другие биологически активные части, в которых удалены другие области белка, могут получаться с использованием рекомбинантных методов и оцениваться на
предмет наличия в них одного или нескольких описанных выше видов активности. Предпочтительно биологически активные части полипептида по настоящему изобретению включают один или несколько выбранных доменов/мотивов или их частей, обладающих биологической активностью.
Термин "биологически активная часть" или "биологическая активность" указывает на полипептид согласно описанию в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, или часть указанного полипептида, в котором по-прежнему имеется, по меньшей мере, 10 % или 20 %, предпочтительно 30 %, 40 %, 50 % или 60 %, в частности, предпочтительно 70 %, 75 %, 80 %, 90 % или 95 % ферментной или биологической активности природного или исходного фермента или белка.
В рамках способа по настоящему изобретению могут использоваться последовательности или молекулы нуклеиновой кислоты, которые, если они подходят, содержат синтетические, неприродные или модифицированные основания нуклеотидов, которые могут быть включены в ДНК или РНК. Указанные синтетические, неприродные или модифицированные основания могут, например, увеличить стабильность молекулы нуклеиновой кислоты внутри или вне клетки. Молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению могут содержать такие же модификации, как указаны выше.
При использовании в данном контексте термин "молекула нуклеиновой кислоты" также может включать нетранслированную последовательность или последовательность, расположенную на 3' и на 5' концах кодирующей области гена, например, по меньшей мере, 500, предпочтительно, 200, в частности, предпочтительно 100, нуклеотиды последовательности, расположенные до 5' конца кодирующей области и, по меньшей мере, 100, предпочтительно, 50, в частности, предпочтительно 20, нуклеотиды последовательности, расположенные после 3' конца кодирующей области гена. Зачастую предпочтительно только выбирать кодирующую область для целей клонирования и экспрессии.
Предпочтительно, молекула нуклеиновой кислоты, которая используется в способе по изобретению или молекула нуклеиновой кислоты по изобретению является изолированной молекулой нуклеиновой кислоты. В одном из вариантов осуществления изобретения молекула нуклеиновой кислоты по изобретению
представлена молекулой нуклеиновой кислоты, которая используется в способе по изобретению.
В различных вариантах осуществления изобретения изолированная молекула нуклеиновой кислоты, которая используется в рамках способа по настоящему изобретению, может содержать, например, менее чем примерно 5 т.н. 4 т.н. 3 т.н. 2 т.н. 1 т.н. 0,5 т.н. или 0,1 т.н. нуклеотидных последовательностей, которые в природных условиях примыкают к молекуле нуклеиновой кислоты в геномной ДНК клетки, из которой данная молекула нуклеиновой кислоты была получена.
Молекулы нуклеиновой кислоты, используемые в рамках способа, например, полинуклеотид по изобретению или его часть, могут быть изолированы с использованием стандартных методов молекулярной биологии и информации о последовательности, представленной в настоящем документе. Также, например, области гомологичной или гомологичной консервативной последовательности на уровне ДНК или аминокислоты могут быть выявлены при помощи сравнительных алгоритмов. Первые могут использоваться в качестве зондов гибридизации при стандартных методах гибридизации (например, которые описаны в Sambrook et al. выше) для изоляции других нуклеотидных последовательностей, применимых в рамках данного способа.
Молекула нуклеиновой кислоты, включающая полную последовательность молекул нуклеиновой кислоты, используемые в рамках способа, например, полинуклеотид по изобретению или его часть, может дополнительно быть изолирована при помощи цепной реакции полимеразы, олигонуклеотидных праймер, основанных на данной последовательности, или на ее используемых частях. Например, молекула нуклеиновой кислоты, содержащая полную последовательность или ее часть, может быть изолирована при помощи цепной реакции полимеразы с использованием олигонуклеотидных праймеров, которые были получены на основании этой самой последовательности. Например, мРНК можно изолировать от клеток (например, при помощи метода извлечения гуанидиний-тиоцианата согласно Chirgwin et al., Biochemistry 18, 5294(1979)), a кДНК можно получить с использованием обратной транскриптазы (например, обратная транскирптаза вируса лейкоза Молони, которая имеется в Gibco/BRL,
Bethesda, MD; или обратная транскирптаза вируса миелобластоза птиц, которая имеется в Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL).
Синтетические олигонуклеотидные праймеры для амплификации при помощи цепной реакции полимеразы можно получить на основании показанной в настоящем документе последовательности с использованием известных способов.
Кроме того, есть возможность выявить консервативный белок посредством выравнивания последовательности белка с полипептидом, кодированным молекулами нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, в частности с последовательностью, кодированной молекулой нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, из которой можно получить консервативные области и, в свою очередь, вырожденные праймеры. Консервативными являются области, демонстрирующие крайне небольшие изменения в аминокислоте в одной конкретной позиции нескольких гомологов из другой области. Кроме того, есть возможность выявить консервативные области из разных организмов посредством выравнивания последовательности белка с полипептидом, кодированным нуклеиновой кислотой по настоящему изобретению, в частности, с последовательностями молекулы полипептида, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, из которой можно получить консервативные области и, в свою очередь, вырожденные праймеры.
Консервативные домены могут быть выявлены во всех последовательностях и описаны с использованием подмножества номенклатуры Prosite, например, паттерн Y-x(21,23)-[FW] означает, что консервативный тирозин отделен минимум 21 и максимум 23 аминокислотными радикалами из фениланина или триптофана. Паттерны могут совпадать с исследуемыми белками, по меньшей мере, на 80%. Консервативные паттерны можно выявить при помощи инструментальной программы МЕМЕ версии 3.5.1 или вручную. Программа МЕМЕ описана Тимоти Л Бэйли и Чарльзон Элканом (Proceedings of the Second International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology, стр. 28-36, AAAI Press, Menlo Park, Калифорния, 1994). Исходный код для автономной программы можно свободно получить в центре суперкомьютеров Сан-Диего. Паттерн Prosite консервативных доменов можно использова для поиска белковых последовательностей, совпадающих с данным паттерном. В различных хорошо
известных биоинформационных центрах предоставляется открытый доступ к интернет-порталам для использования данных паттернов при поиске по базам данных (например, PIR (Информационный ресурс по поиску белков, размещенный в Медицинском центре университета в Джоджтаун) или ExPASy (Система экспертного анализа белков)). В качестве альтернативы автономное ПО предоставляется как программа Fuzzpro, которая является частью программного пакета EMBOSS. Например, программа Fuzzpro не только позволяет выполнять поиск точных совпадений паттернов с белками, но также еще и предоставляет возможность настраивать различные расхождения при выполнении поиска.
Затем вырожденные праймеры могут использоваться в цепной реакции полимеразы для амплификации фрагментов новых белков, демонстрирующих вышеуказанную активность, например, придающих повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа после увеличения экспрессии или активности, или демонстрирующих активность белка, как показано в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, или других функциональных гомологов полипептида по изобретению из других организмов.
Затем данные фрагменты могут использоваться в качестве зондов гибридизации для изоляции полной последовательности гена. В качестве альтернативы недостающие последовательности 5' и 3' могут быть изолированы при помощи цепной реакции полимеразы быстрой амплификации концов кДНК. Молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть усилена с использованием кДНК или, в качестве альтернативы, геномной ДНК в качестве шаблона и подходящих олигонуклеотидных праймеров согласно стандартным методам усиления цепной реакции полимеразы. Усиленную таким образом молекулу нуклеиновой кислоты можно клонировать в соответствующий вектор и охарактеризовать с использованием анализа последовательности ДНК. Олигонуклеотиды, которые соответствуют одной из молекул нуклеиновой кислоты, используемых в способе, могут получаться стандартным синтезом, которые представляет собой способ, например использующий автоматический синтезатор ДНК.
Молекулы нуклеиновой кислоты, которые предпочтительны для способа по настоящему изобретению, могут быть изолированы на основании их гомологии по отношению к молекулам нуклеиновой кислоты, описанным в настоящем документе, с использованием последовательностей или их части для получения зонда гибридизации, а также согласно стандартным методам гибридизации в жестких условиях гибридизации. В данной ситуации имеется возможность использовать, например, одну или несколько изолированных молекул нуклеиновой кислоты длинной, по меньшей мере, в 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60 или более нуклеотидов, предпочтительно, по меньшей мере, 15, 20 или 25 нуклеотидов, которые гибридизируются в жестких условиях с описанными выше молекулами нуклеиновой кислоты, в частности, с теми, которые включают нуклеотидную последовательность молекулы нуклеиновой кислоты, используемой в способе по изобретению или кодирующей белок, используемый в изобретении, или молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению. Также могут использоваться молекулы нуклеиновой кислоты с 30, 50, 100, 250 или более нуклеотидов.
Под термином "гибридизирующиеся" следует понимать то, что такие молекулы нуклеиновой кислоты гибридизируются в стандартных условиях гибридизации, предпочтительно в жестких условиях, такие как описаны, например, в Sambrook (Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 2-ое Издание, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)) или в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6.
Согласно данному изобретению молекулы ДНК, а также РНК нуклеиновой кислоты по изобретению могут использоваться в качестве зондов. Кроме того, в качестве шаблона для выявления функциональных гомологов может выполняться Нозерн-блоттинг или Саузерн-Блоттинг. Нозерн-блоттинг предпочтительно предоставляет дополнительную информацию об экспрессированном генном продукте: например, паттерн экспрессии, наличие этапов обработки, таких как сплайсинг и кэппирование и др. Саузерн-Блоттинг предоставляет дополнительную информацию о хромосомной локализации и организации гена, кодирующего молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению.
Предпочтительным неограничивающим примером строгих условий гибридизации являются варианты гибридизации в 6 натрий хлорид/цитрат натрия (SSC) при примерно 45°С, с последующим одним или несколькими этапами промывки в 0,2 SSC, 0,1% SDS при температуре от 50 до 65°С, например, при 50°С, 55°С или 60°С. Специалистам известно, что данные условия гибридизации различаются в зависимости от типа нуклеиновой кислоты и, например, если присутствуют органические растворители, с учётом температуры и концентрации буферного раствора. Температура в "стандартных условиях гибридизации" отличается в зависимости от типа нуклеиновой кислоты между 42°С и 58°С, предпочтительно при 45°С и 50°С в водном буферном растворе с концентрацией 0.1 х, 0.5 х, 1 х, 2 х, 3 х, 4 х или 5 х SSC (рН 7.2). При присутствии органического(-их) растворителя(-ей) в вышуказанном буфере, например, 50% формамид, температура при стандартных условиях составляет приблизительно 40°С, 42°С или 45°С. Условиями гибридизации для ДНК: ДНК гибридов предпочтительно являются, например, 0.1 х SSC and 20°С, 25°С, 30°С, 35°С, 40°С или 45°С, предпочтительно между 30°С и 45°С. Условиями гибридизации для ДШСРНК гибридов предпочтительно являются, например, 0.1 х SSC и 30°С, 35°С, 40°С, 45°С, 50°С или 55°С, предпочтительно между 45°С и 55°С. Вышеуказанные температуры гибридизации определяются, например, для нуклеиновой кислоты с приблизительно 100 п.о. (пар оснований) в длину и G + С содержание в 50% при отсутствии формамида. Специалистам известно, как определять необходимые условия гибридизации при помощи учебных пособий, например, тех, что указаны выше, или при помощи следующих пособий: Sambrook et al., "Molecular Cloning", Cold Spring Harbor Laboratory, 1989; Hames and Higgins (Ed.) 1985, "Nucleic Acids Hybridization: A Practical Approach", IRL Press at Oxford University Press, Oxford; Brown (Ed.) 1991, "Essential Molecular Biology: A Practical Approach", IRL Press at Oxford University Press, Oxford.
Еще одним примером таких строгих условий гибридизации является гибридизация при 4 х SSC при температуре 65°С, после чего следует промывка в 0,1 х SSC при 65°С в течение одного часа. В качестве альтернативы примером строгих условий гибридизации является 50% формамид, 4 х SSC при 42°С. Далее условия во время этапа промывки можно выбрать из большого количества вариантов условий, разграниченных условиями низкой строгости
(приблизительно 2 х SSC при 50°С) и условиями высокой строгости (приблизительно 0,2 х SSC при 50°С, предпочтительно при 65°С) (20 х SSC : 0,3 М цитрата натрия, 3 М NaCl, рН 7,0). Кроме того, температуру во время этапа промывки можно поднимать начиная с условий низкой строгости при комнатной температуре приблизительно в 22°С до условий более высокой строгости при приблизительно 65 °С. Оба параметра, а именно концентрация соли и температура, можно изменять одновременно, или же один из двух параметров может оставаться неизменным, и только второй будет изменяться. При проведении гибридизации также могут использоваться денатурирующие агенты, например, формамид или SDS. В присутствии 50% формамида гибридизация предпочтительно проводится при 42°С. Имеющие значение факторы, такие как 1) продолжительность обработки, 2) солевые условия, 3) условия относительно детергента, 4) конкурирующие ДНК, 5) температура и 6) выбор зонда, можно комбинировать в каждом конкретном случае, и поэтому в рамках данного документа упомянуть все возможные варианты возможным не представляется.
Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления изобретения продукты Нозерн-блоттинга предварительно гибридизируются с буфером Rothi-Hybri-Quick (Рот, Карлсруэ) при 68°С в течение 2 часов. Гибридизация с радиоактивным маркированным зондом производится в течение ночи при 68°С. Последующие этапы промывки выполняются при температуре 68°С с использованием 1 х SSC. При Саузерн-блоттинге мембрана предварительно гибридизируется с буфером Rothi-Hybri-Quick (Рот, Карлсруэ) при 68°С в течение 2 часов. Гибридизация с радиоактивным маркированным зондом производится в течение ночи при 68°С. Впоследствии буфер гибридизации выводят, а фильтр быстро промывают с использованием 2 х SSC; 0,1% SDS. После вывода буфера промывки добавляют новый буфер 2 х SSC; 0,1% SDS, затем выполняют инкубирование при 68°С в течение 15 минут. Данный этап промывки выполняется дважды, после чего проводится дополнительная промывка с использованием 1 х SSC; 0,1% SDS при 68°С в течение 10 мин.
Некоторые примеры условий гибридизации ДНК (Саузерн-блоттинг) и этапа промывки показаны ниже:
(1) Условия гибридизации могут быть выбраны, например, из
следующих условий:
(a) 4 х SSC при температуре 65°С,
(b) 6 х SSC при температуре 45°С,
(c) 6 SSC, 100 мг/мл денатурированной фрагментированной ДНК рыбьей спермы при 68°С,
(d) 6 SSC, 0,5 мг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося при 68°С,
(e) 6 SSC, 0,5 мг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, 50% формамид при 42°С,
(f) 50% формамид, 4 х SSC при температуре 42°С,
(g) 50% (объемное содержание) формамид, 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,1% фиколл, 0,1% поливинилпирролидин, 50 мМ буффера из фосфата натрия рН 6,5, 750 мМ NaCl, 75 мМ цитрата натрия при 42°С,
(h) 2 х или 4 х SSC при 50°С (условия пониженной строгости), или
(Г) 30%-40% формамид, 2 х или 4 х SSC при температуре 42°С
(условия пониженной строгости). (2) Этапы промывки могут быть выбраны, например, из следующих условий:
(a) 0,015 М NaCl/0,0015 М цитрата натрия/0,1% SDS при 50°С.
(b) 0,1 xSSC при65°С.
(c) 0,1 х SSC, 0,5 % SDS при 68°С.
(d) 0,1 х SSC, 0,5% SDS, 50% формамид при 42°С.
(e) 0,2 х SSC, 0?1% SDS при 42°С.
(f) 2 х SSC при 65°С (условия пониженной строгости).
Полипептид, демонстрирующий вышеуказанную активность, то есть придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, полученный из других организмов, может кодироваться другими последовательностями ДНК, которые гибридизируются с последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, в ослабленных условиях гибридизации, и которые кодируют экспрессию пептидов, придающих повышенную устойчивость или стойкость к
гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Также, некоторые варианты осуществления были выполнены в условиях пониженной строгости без каких-либо последствий относительно специфичности гибридизации. Например, при Саузерн-блоттинге вся ДНК может зондироваться молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и промываться в условиях пониженной строгости (55°С в 2 х SSPE, 0,1% SDS). Анализ гибридизации может выявить простой паттерн только с генами, кодирующими полипептид по настоящему изобретению или используемыми в способе по изобретению, то есть обладающие указанной в настоящем документе активностью по стимулированию повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа. Еще одним примером таких условий гибридизации пониженной строгости является гибридизация при 4 х SSC при температуре 50°С или гибридизация с 30-40% формамидом при 42°С. Среди таких молекул те, что являются фрагментами, аналогами или производными полипептида по изобретению или используются в способе по изобретению и отличаются, например, в силу аминокислотных и/или нуклеотидных делений, вставок, замещений, добавлений и/или рекомбинаций или любых других известных специалистам модификаций, как самостоятельно, так и в сочетании с описанными выше аминокислотными последовательностями или их базовыми нуклеотидными последовательностями. Однако при этом предпочтительно использовать условия гибридизации повышенной строгости.
Гибридизация должна предпочтительно проводиться с фрагментами, по меньшей мере, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 или 40 bp, предпочтительно, по меньшей мере, 50, 60, 70 или 80 п.о., предпочтительно, по меньшей мере, 90, 100 или 110 п.о. Наиболее предпочтительными являются фрагменты, имеющие, по меньшей мере, 15, 20, 25 или 30 п.о. Предпочтительными также являются варианты гибридизации длиной, по меньшей мере, 100 или 200 п.о., крайне предпочтительно, по меньшей мере, 400 п.о. В особо предпочтительном варианте осуществления изобретения гибридизация должна проводиться со всей нуклеотидной последовательностью в описанных выше условиях.
Термины "фрагмент", "фрагмент последовательности" или "часть последовательности" относятся к укороченной последовательности от указанной изначальной последовательности. Укороченная последовательность (последовательность нуклеиновой кислоты или белка может существенно отличаться по длине; при этом минимальным является размер последовательности, которая является достаточной по размеру, для обеспечения последовательности с, по меньшей мере, сопоставимой функций и/или активностью с исходной последовательностью или молекулой, которая указанна или гибридизируется с молекулой нуклеиновой кислоты по изобретению или используется в способе по изобретению в строгих условиях, тогда как максимальный размер не имеет значения. В некоторых случаях максимальный размер обычно не на много больше того, который требуется для обеспечения желательной активности и/или функции(ий) исходной последовательности.
Как правило, укороченная аминокислотная последовательность или молекула по длине могут состоять из аминокислот в количестве от 5 до 310. Однако более привычно, когда последовательность будет длиной амксимум 250 аминокислот, предпочтительно максимум около 200 или 100 аминокислот. Обычно желательно выбирать последовательности длиной, по меньшей мере, 10, 12 или 15 аминокислот максимум до примерно 20 или 25 аминокислот.
Термин "эпитоп" относится к специфическим иммунореактивным областям в пределах антигена, также известным как антигенные детерминанты. Эпитопы могут быть представлены линейной группой мономеров в составе полимера - такие как аминокислоты в белке - или же состоять из более сложной вторичной или третичной структуры или содержать такую структуру. Специалисты в данной области подтвердят, что иммуногены (такие как вещества, способные проявить иммунную реакцию) являются антигенами; однако при этом некоторые антигены, такие как гаптены, иммуногенами не являются, но могут быть превращены в иммуногены посредством присоединения к молекуле-носителю. Термин "антиген" включает ссылки на вещество, в отношении которого антиген может быть создан и/или в отношении которого антитело обладает специфической иммунореактивностью.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к эпитопу полипептида по настоящему изобретению или используемого в способе по настоящему изобретению, который придает повышенную устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Термин "одна или несколько аминокислот" относится к, по меньшей мере, одной аминокислоте, но при этом количество аминокислот не может быть больше того, в результате которого получился бы гомолог с идентичностью менее 50%. Предпочтительно, идентичность должна составлять более 70% или 80%, более предпочтительно 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% или 95%, еще более предпочтительно 96%, 97%, 98% или 99%.
Также молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит молекулу нуклеиновой кислоты, которая является дополнением к одной из последовательностей нуклеотидов вышеупомянутых молекул нуклеиновой кислоты или ее частью. Молекула нуклеиновой кислоты или ее последовательность, которая является комплементарной к одной из молекул нуклеотидов или последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, является молекулой, которая в достаточной степени комплементарна к одной из молекул нуклеотидов или последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, так что она может гибридизироваться с одной из молекул нуклеотидов, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, тем самым образуя стойкую двойную спираль. Предпочтительно, чтобы гибридизация проходила в жестких условиях гибридизации. Тем не менее дополнение к одной из описанных в настоящем документе последовательностей предпочтительно является комплементарной последовательностью к ней в соответствии со спариванием оснований молекул нуклеиновой кислоты, которое известно специалистам в данной области. Например, основания А и G подвергаются спариванию с основаниями, соответственно, Т и U или С, и наоборот. Изменения оснований могут повлиять на основание-партнера по паре.
Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит последовательность нуклеотидов, которая гомологичная, по меньшей мере, на
30%, 35%, 40% или 45%, предпочтительно, по меньшей мере, на 50%, 55%, 60% или 65%, более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно на 70%, 80% или 90%, и еще более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно на 95%, 97%, 98%, 99% или более гомологична последовательности нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или ее части и предпочтительно обладает вышеупомянутой активностью, в частности, обладает активностью, повышающую устойчивость или стойкость к гербицидам после увеличения активности, или активность гена, показанного в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или генного продукта за счет, например, экспрессии в цитозоле или цитоплазме или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах.
В одном из вариантов осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или генные продукты, кодированные указанными молекулами нуклеиновой кислоты, экспрессируются в сочетании с нацеливающим сигналом согласно описанию в настоящем документе.
Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит нуклеотидную последовательность или молекулу, которая гибридизируется, предпочтительно гибридизируется в строгих условиях согласно определению в настоящем документе, с одной из последовательностей нуклеотидов или молекулой, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или ее частью, и кодирует белок, обладающий вышеупомянутой активностью, например, придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, за счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах, а также в некоторых случаях обладающий активностью ГШО-фермента.
Кроме того, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать только часть кодирующей области одной из последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, например, фрагмент, который может использоваться как зонд или праймер, или фрагмент, кодирующий
биологически активную часть полипептида по настоящему изобретению или полипептида, который используется в способе по настоящему изобретению, то есть обладающего вышеупомянутой активностью, например, придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, за счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах. Последовательности нуклеотидов, определенные за счет клонирования гена, кодирующего белок по настоящему изобретению, позволяют получить зонды и праймеры, предназначенные для использования при выявлении и/или клонировании его гомологов в других видах клеток и организмов. Зонд/праймер, как правило, содержит в существенной степени очищенный олигонуклеотид. Олигонуклеотид, как правило, содержит область нуклеотидной последовательности, которая гибридизируется в строгих условиях до, по меньшей мере, 12, 15, предпочтительно приблизительно 20 или 25, более предпочтительно приблизительно 40, 50 или 75 последовательных нуклеотидов смысловой цепочки одной из последовательностей, указанных, например, в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, антисмысловой последовательности одной из последовательностей, указанных например, в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или ее мутантов, встречающихся в естественной среде. Праймеры, основанные на нуклеотиде по изобретению, могут использоваться в цепных реакциях полимеразы для клонирования гомологов полипептида по изобретению или полипептида, используемого в способе по изобретению, например, праймеры, описанные в примерах к настоящему изобретению, например, как показано в примерах. Цепная реакция полимеразы с праймерами, основанными на SEQ ID NO: 1 или 3, приведет к получению фрагмента генного продукта, как показано в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе.
Наборы праймеров являются взаимозаменяемыми. Специалистам в данной области известно, как комбинировать указанные праймеры, чтобы получился необходимый продукт, например, клон полной длины или частичная последовательность. Зонды, основанные на последовательностях молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению или используемой в способе по изобретению, могут применяться для обнаружения транскриптов или геномных
последовательностей, кодирующих те же или гомологичные белки. Зонд также может содержать присоединенную к нему помеченную группу, например, помеченная группа может быть представлена радиоизотопом, флуоресцентным соединением, ферментом или ферментным кофактором. Такие зонды могут использоваться, как часть испытательного набора геномного маркера для выявления клеток, которые экспрессируют полипептид по изобретении или используются в способе по настоящему изобретению, таком как измерение уровня молекулы нуклеиновой кислоты в образце клеток, например, выявление уровней мРНК или определение того, был ли мутирован или удален геномный ген, содержащий последовательность полинуклеотида по изобретению или используемого в способах настоящего изобретения.
Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению кодирует полипептид или часть такого полипептида, который включает аминокислотную последовательность, которая является в достаточной степени гомологичной по отношению к аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, такую что белок или его часть сохраняет способность участвовать в увеличении устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, в частности в увеличении активности, упомянутой выше или описанной в примерах в растениях.
При использовании по тексту настоящего документа фраза "достаточно гомологичный" относится к белкам или их частям, которые имеют аминокислотные последовательности, включающие минимальное количество аминокислотных радикалов (например, аминокислотный радикал, который имеет схожую боковую цепочку, как и у аминокислотного радикала в одной из последовательностей полипептида по настоящему изобретению), идентичных или эквивалентных аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, такую, что белок или его часть может участвовать в увеличении устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
В одном из вариантов осуществления изобретения молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит нуклеиновую кислоту, которая кодирует часть белка по настоящему изобретению. Белок гомологичен, по меньшей мере, на 30%, 35%, 40%, 45% или 50%, предпочтительно, по меньшей мере, на 55%, 60%, 65% или 70%, более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% или 94%, и еще более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно на 95%, 97%, 98%, 99% или более целой аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, обладающей вышеупомянутой активностью, например, придающей повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, за счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах.
Части белков, кодированные молекулой нуклеиновой кислоты по изобретению, предпочтительно биологически активные, предпочтительно обладающие вышеупомянутой активностью, например, придающей повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа после увеличения активности.
Как указано в настоящем документе, термин "биологически активная часть" включает часть, например, домен/мотив, который придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам, например, повышенную свойство, связанное с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, или обладает такой иммунологической активностью, что связывается с антителом, которое соединяется в связь конкретно с полипептидом по настоящему изобретению или используемого в способе по настоящему изобретению для повышения устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые отличаются от одной из последовательностей нуклеотидов, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог (ее части) в связи с дегенерацией генетического кода, и таким образом кодируют полипептид по настоящему изобретению, в частности, полипептид, обладающий вышеуказанной активностью, например, как у полипептидов, показанных последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее функциональные гомологи. Предпочтительно, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит, или в другом варианте осуществления изобретения имеет, последовательность нуклеотидов, кодирующую белок, содержащий, или в другом варианте осуществления изобретения имеющий, аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее функциональные гомологи. В еще одном варианте осуществления изобретения молекула нуклеиновой кислоты по изобретению кодирует белок полной длины, который является в существенной степени гомологичным по отношению к аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее функциональные гомологи.
Кроме того, специалисты в данной области оценят, что в рамках популяции могут существовать полиморфизмы последовательности ДНК, которые влекут за собой изменения в аминокислотных последовательностях. Такой генетический полиморфизм в гене, кодирующем полипептид по изобретению или содержащем молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, может существовать среди отдельных особей популяции в связи с природными вариациями.
Молекулы нуклеиновой кислоты, соответствующие природным вариантам гомологов молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению, которые также могут быть представлены кДНК, могут быть изолированы на основании их гомологии по отношению к молекулам нуклеиновой кислоты, описанным в настоящем документе с использованием молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению или ее части в качестве зонда гибридизации согласно стандартным методам гибридизации в жестких условиях гибридизации.
Соответственно, в еще одном варианте осуществления изобретения молекула нуклеиновой кислоты по изобретению имеет длину в 15, 20, 25 или 30 нуклеотидов. Предпочтительно она гибридизируется в строгих условиях с
молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или используемой в способе по изобретению, например, содержащей последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Молекула нуклеиновой кислоты по длине предпочтительно содержит, по меньшей мере, 20, 30, 50, 100, 250 или более нуклеотидов.
Определение термина "гибридизируется в строгих условиях" приводилось выше. В одном из вариантов осуществления термин "гибридизируется в строгих условиях" описывает условия для гибридизации и промывки, в которых последовательности нуклеотидов, которые имеют, по меньшей мере, 30 %, 40 %, 50% или 65% идентичности со всеми остальными последовательностями, как правило, остаются гибридизированными друг с другом. Предпочтительно, это условия, в которых последовательности, которые имеют, по меньшей мере, 70%, более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно 75% или 80%, и еще более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно 85%, 90% или 95 идентичности друг с другом, как правило, остаются гибридизированными друг с другом.
Предпочтительно молекула нуклеиновой кислота по изобретению, которая гибридизируется в строгих условиях с последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, соответствует встречающейся в природе молекуле нуклеиновой кислоты по изобретению. При использовании по тексту настоящего документа термин "встречающаяся в природе" молекула нуклеиновой кислоты относится к молекуле РНК или ДНК, которая имеет нуклеотидную последовательность, встречающуюся в природе (например, кодирует природный белок). Предпочтительно молекула нуклеиновой кислоты кодирует природный белок, обладающий вышеупомянутой активностью, например, придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам, после увеличения его экспрессии или активности или активностью белка по изобретению или используемого в способе по изобретению, за счет, например, экспрессии нуклеотидной последовательности генного продукта в цитозоле и/или органелле, такой как пластида или митохондрия, предпочтительно в пластидах.
Помимо встречающихся в природе вариантов последовательностей полипептидов или молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению, а также полипептидов или молекулы нуклеиновой кислоты, которые используются в способе по изобретению, которые могут существовать в рамках популяции, специалисты в данной области также оценят тот факт, что изменения могут вводиться посредством мутации в последовательность нуклеотидов по изобретению или используемую в способе по настоящему изобретению, что ведет к изменениям в аминокислотной последовательности указанного кодированного полипептида без изменения функциональной способности полипептида, предпочтительно без снижения указанной активности.
Например, замещения нуклеотидов, которые приводят к замещениям аминокислот в "заменимых" аминокислотных радикалах, могут быть выполнены в последовательности молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или используемой в способе по изобретению, например показанную в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
"Заменимый" аминокислотный радикал - это радикал, который можно изменять из последовательности дикого типа без изменения активности указанного полипептида, тогда как "незаменимый" аминокислотный радикал необходим для указанной выше активности, например, он приводит к повышению устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа в организме после увеличения активности полипептида. Однако при этом другие аминокислотные радикалы (например, те, которые не являются консервативными или только лишь полуконсервативны в домене с указанной активностью) не могут быть незаменимыми для активности и поэтому, скорее всего, могут заменяться посредством изменения, не изменяя при этом указанную активность.
Также специалистам известно, что использование кодонов между организмами может в разных случаях отличаться. Поэтому, специалист может адаптировать использование кодона в молекуле нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению для использования организмом или клеточным компартментом, например, пластидой или митохондрией, в которой и экспрессируется полинуклеотид или полипептид. В одном из частных
предпочтительных вариантов осуществления изобретения молекулы нуклеиновой кислоты с адаптированным кодоном по настоящему изобретению содержат последовательность SEQ ID NO: 6 или 7, что представляет собой молекулы нуклеиновой кислоты с адаптированным кодоном, соответствующие SEQ ID NO: 1 или 3.
Соответственно, изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептид, которые обладают вышеупомянутой активностью в организме или его частяхза счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах, которые содержат изменения в аминокислотных радикалах, не являющихся незаменимыми для указанной активности. Такие полипептиды в аминокислотной последовательности отличаются от последовательности, содержащейся в последовательностях, показанных в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, но при этом сохраняют описанную активность. Молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеотидов, кодирующую полипептид, отличающуюся тем, что полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, приблизительно на 50% идентичная аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, и способная участвовать в повышении устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, после увеличения ее активности, например ее экспрессии, за счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах. Предпочтительно, белок, кодированный молекулой нуклеиновой кислоты, имеет, по меньшей мере, 60% идентичности с последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, более предпочтительно, по меньшей мере, 70% идентичности с одной из последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 80%, 90%, 95% идентичности с одной из последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 96%, 97%, 98% или 98% идентичности с одной из последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе.
Для определения процента гомологии (= идентичность, по тексту данного документа используются взаимозаменяемо) двух аминокислотных последовательностей последовательности записываются одна под другой для оптимального сравнения (например, в последовательность белка или нуклеиновой кислоты можно вставить гэпы, чтобы получить оптимальное соответствие другому белку или другой нуклеиновой кислоте).
Тогда сравниваются аминокислотные радикалы или молекулы нуклеиновой кислоты в соответствующих аминокислотных позициях или позициях в нуклеотиде. Если позиция в одной из последовательностей занята тем же аминокислотным радикалом или той же молекулой нуклеиновой кислоты, что и соответствующая позиция в другой последовательности, то молекулы в данной позиции являются гомологичными (то есть, "гомология" аминокислоты или нуклеиновой кислоты в тексте данного документа соответствует "идентичности" аминокислоты или нуклеиновой кислоты). Процент гомологии между двумя последовательностями выражается функцией количества идентичных позиций в этих последовательностях (то есть % гомологии = количество идентичных позиций / общее количество позиций х 100). Термины "гомология" и "идентичность", таким образом, необходимо рассматривать как синонимы.
Для определения процента гомологии (= идентичности) двух или более аминокислот или двух или более последовательностей нуклеотидов были разработаны различных компьютерные программы. Гомологию двух или более последовательностей можно рассчитать, например, при помощи программы fasta, которая в здесь использовалась в своей версии fasta 3 (W. R. Pearson and D. J. Lipman, PNAS 85, 2444(1988); W. R. Pearson, Methods in Enzymology 183, 63 (1990); W. R. Pearson and D. J. Lipman, PNAS 85, 2444 (1988); W. R. Pearson, Enzymology 183, 63 (1990)). Еще одна программа, применимая для расчета гомологий разных последовательностей - это стандартная программа BLAST, которая включена в пакет ПО Biomax pedant (Biomax, Мюнхен, Федеральная Республика Беларусь). К сожалению, иногда это приводит к неоптимальным результатам, поскольку blast не всегда включает полные последовательности объекта и поискового запроса. Так или иначе, поскольку данная программа является крайне эффективной, она может использоваться для сравнения большого
количества последовательностей. Для такого сравнения последовательностей обычно используются следующие настройки: -р Название программы [String]; -d база данных [String]; умолчание = nr; -i файл запроса [File In]; умолчание = stdin; -е ожидаемой значение (Е) [Real]; умолчание = 10,0; -т опции вида выравнивания: 0 = по парам; 1 = с привязкой к запросу, показ идентичностей; 2 = с привязкой к запросу, без идентичностей; 3 = плоская привязка к запросу, показ идентичностей; 4 = плоская привязка к запросу, без идентичностей; 5 = привязка к запросу, без идентичностей и тупых концов; 6 = плоская привязка к запросу, без идентичностей и тупых концов; 7 = вывод программы Blast в XML; 8 = таблица; 9 таблица со строками комментариев [Integer]; умолчание = 0; -о файл вывода отчета BLAST [File Out] опция; умолчание = stdout; -F фильтр по последовательности запроса (DUST с blastn, SEG с другими) [String]; умолчание = Т; -G стоимость открытия гэпа (ноль вызывает действия по умолчанию) [Integer]; умолчание = 0; -Е стоимость расширения гэпа (ноль вызывает действия по умолчанию) [Integer]; умолчание = 0; -X X вывод значения сравнения по гэпам (в битах) (ноль вызывает действия по умолчанию); blastn 30, megablast 20, tblastx 0, все остальные 15 [Integer]; умолчание = 0; -I показать GI в заданных строках [T/F]; умолчание = F; -q штраф за несовпадение нуклеотида (только blastn) [Integer]; умолчание = -3; -г премия за совпадение нуклеотида (только blastn) [Integer]; умолчание = 1; -v Количество последовательностей в базе данных, для которых будут показываться описания в одну строку (V) [Integer]; умолчание = 500; -Ь Количество последовательностей в базе данных, для которых будут показываться сравнения (В) [Integer]; умолчание = 250; -f Предел расширения совпадений, выставляет на умолчание при нуле ; blastp 11, blastn 0, blastx 12, tblastn 13; tblastx 13, megablast 0 [Integer]; умолчание = 0; -g Выполнить сравнение по гэпам (отсутствует в tblastx) [T/F]; умолчание = Т; -Q генетический код запроса, который будет использоваться [Integer]; умолчание = 1; -D Генетический код БД (только для tblast[nx]) [Integer]; умолчание = 1; -а Количество процессоров, которые будут использоваться [Integer]; умолчание = 1; файл -О SeqAlign [File Out] Опция; -J Верить строке с запросом [T/F]; умолчание = F; -М Матрица [String]; умолчание = BLOSUM62; -W Длина слова, выставляется в умолчание, если равна нулю (blastn 11, megablast 28, все остальные 3) [Integer]; умолчание= 0; -z Эффективная длина базы данных (использовать ноль для реального размера) [Real]; умолчание= 0; -К Количество лучших совпадений из области, которые нужно
сохранить (по умолчанию выкл., при использовании рекомендуется применять значение 100) [Integer]; умолчание = 0; -Р 0 для многочисленных совпадений, 1 для одного совпадения [Integer]; умолчание = 0; -Y Эффективная длина области поиска (использовать ноль для реального размера) [Real]; умолчание = 0; -S нити запроса, по которым нужно искать в базе данных (для blast[nx], и tblastx); 3 - это оба, 1 - это верх, 2 - это низ [Integer]; умолчание = 3; -Т Вывести HTML-код [T/F]; умолчание = F; -1 Ограничить поиск по базе данных в пределах списка GI [String] Опция; -U использовать фильтрация последовательности FASTA по нижнему регистру [T/F] Опция; умолчание = F; -у X вывод значения для расширений без гэпов в битах (при 0,0 выполняются действия по умолчанию); blastn 20, megablast 10, все остальные 7 [Real]; умолчание = 0.0; -Z X вывод значения окончательного сравнения по гэпам в битах (при 0,0 выполняются действия по умолчанию); blastn/megablast 50, tblastx 0, все остальные 25 [Integer]; умолчание = 0; -R файл контрольной точки PSI-TBLASTN [File In] Опция; -п Поиск по MegaBlast [T/F]; умолчание = F; -L Местоположение в последовательности запроса [String] Опция; -А Размер окна вывода многочисленных совпадений, по умолчанию ноль (blastn/megablast 0, все остальные 40 [Integer]; умолчание= 0; -w Штраф за смещение рамки (алгоритм OOF для blastx) [Integer]; умолчание = 0; -t Длина самого крупного интрона, которая допускается в tblastn для связи HSP (0 отключает связь) [Integer]; умолчание= 0.
Высококачественные результаты получаются при использовании алгоритмов Нидльмана и Вунша или Смита и Ватермана. Поэтому предпочтительно использовать программы, основанные на указанных алгоритмах. Предпочтительно сравнение последовательностей может выполняться с использованием программы PileUp (J. Mol. Evolution., 25, 351 (1987), Higgins et al., CABIOS 5, 151 (1989)) или же еще более предпочтительно могут использоваться программы "Gap" и "Needle", обе из которых основаны на алгоритмах Нидльмана и Вунша (J. Mol. Biol. 48; 443 (1970)), и "BestFit", которая основана на алгоритме Смита и Ватермана (Adv. Appl. Math. 2; 482 (1981)). "Gap" и "BestFit", которая является частью пакета программного обеспечения GCG (Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, США 53711 (1991); Altschul et al., (Nucleic Acids Res. 25, 3389 (1997)), "Needle" является частью Европейского пакета открытого программного обеспечения по молекулярной биологии (The European Molecular Biology Open Software Suite (EMBOSS)) (Trends in Genetics 16
(6), 276 (2000)). Поэтому предпочтительно расчеты для определения процентов гомологии последовательностей выполняются в программах "Gap" или "Needle" на всем диапазоне последовательностей. Для программы "Needle" в целях сравнения нуклеотидных последовательностей были выполнены следующие стандартные корректировки: матрица: EDNAFULL, Gap_penalty: 10.0, Extend_penalty: 0,5 Для программы "Gap" в целях сравнения нуклеотидных последовательностей были выполнены следующие стандартные корректировки: штраф за открытие гэпа: 50, Длина веса: 3, среднее совпадение: 10,000, среднее несоответствие: 0,000.
Например, под последовательностью, которая на 80% гомологична с последовательностью SEQ ID NO: 1 на уровне нуклеиновой кислоты, понимается последовательность, которая при сравнении с последовательностью SEQ ID NO: 1 с применением вышеуказанной программы "Needle" с приведенным выше набором параметров, имеет гомологию 80%.
Под гомологией между двумя полипептидами понимается идентичность аминокислотной последовательности в каждом из случаев по всей длине последовательности, которая рассчитывается при помощи сравнения с применением указанной выше программы "Needle" с применением матрицы: EBLOSUM62, Gap_penalty: 8.0, Extend_penalty: 2,0.
Например, под последовательностью, которая на 80% гомологична с последовательностью SEQ ID NO: 2 на уровне белка, понимается последовательность, которая при сравнении с последовательностью SEQ ID NO: 2 с применением вышеуказанной программы "Needle" с приведенным выше набором параметров, имеет гомологию 80%.
Функциональные эквиваленты, полученные из нуклеотидной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, по настоящему изобретению посредством замещения, вставки или удаления, имеют, по меньшей мере, 30%, 35%, 40%, 45% или 50%, предпочтительно, по меньшей мере, 55%, 60%, 65% или 70% предпочтительно, по меньшей мере, 80%, особенно предпочтительно 85% или 90%, 91%, 92%, 93% или 94%, крайне предпочтительно, по меньшей мере, 95%, 97%, 98% или 99% гомологии с одним из полипептидов, показанным в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, по настоящему изобретению,
и кодируют полипептиды, имеющие в значительной степени аналогичные свойства, как и полипептид, показанный в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе.
Функциональные эквиваленты, полученные из одного из полипептидов, показанного в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, по настоящему изобретению посредством замещения, вставки или удаления, имеют, по меньшей мере, 30%, 35%, 40%, 45% или 50%, предпочтительно, по меньшей мере, 55%, 60%, 65% или 70% предпочтительно, по меньшей мере, 80%, особенно предпочтительно 85% или 90%, 91%, 92%, 93% или 94%, крайне предпочтительно, по меньшей мере, 95%, 97%, 98% или 99% гомологии с одним из полипептидов, показанным в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, по настоящему изобретению, и имеющие в значительной степени аналогичные свойства, как и полипептид, показанный в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе.
Под выражением "в существенной степени аналогичные свойства" функционального эквивалента в первую очередь следует понимать, что функциональный эквивалент обладает вышеупомянутой активностью за счет, например, экспрессии в цитозоле или в органелле, такой как пластида или митохондрия или и то и другое, предпочтительно в пластидах, при этом увеличивая количество белка, активность или функцию указанного функционального эквивалента в организме, например, в микроорганизме, растении или ткани растения или ткани животного, в клетках растения или животного или в их частях.
Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гомологичную белку последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, можно получить путем введения одного или нескольких нуклеотидных замещений, добавлений или удалений в нуклеотидную последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, в частности SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, так что одно или несколько аминокислотных замещений, добавлений или удалений будут выполнены в кодированном белке. Мутации можно вводить в кодирующие последовательности SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, с применением стандартных методов, таких как сайт-специфический и ПЦР-опосредованный мутагенез.
Предпочтительно, консервативные аминокислотные замещения выполняются в одном или нескольких прогнозируемо заменимых аминокислотных радикалах. Под "консервативным аминокислотным замещением" понимается замещение, в котором аминокислотный радикал заменяется на аминокислотный радикал, имеющий схожую боковую цепочку. Семейства аминокислотных радикалов, имеющих схожие боковые цепочки, были описаны в литературе по данной теме. Данные семейства включают аминокислоты с боковыми цепочками оснований (например, лизин, аргинин, гистидин), боковыми цепочками кислот (например, аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота), незаряженные полярные боковые цепочки (например, глицин, аспарагин, глютамин, серии, треонин, тирозин, цистин), неполярные боковые цепочки (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленные боковые цепочки (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматические боковые цепочки (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин).
Таким образом, прогнозируемое заменимый аминокислотный радикал в полипептиде по изобретению или в полипептиде, используемом в способе по изобретению, предпочтительно замещается другим аминокислотным радикалом из того же семейства. В качестве альтернативы, в еще одном варианте осуществления изобретения мутации могут вводиться случайным образом по всей или части кодирующей последовательности молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению или используемой в способе по изобретению, а полученные в результате этого мутанты могут проверяться на предмет наличия описанной в настоящем документе активности с целью выявления мутантов, которые сохраняют или даже имеют повышенную вышеуказанную активность, например, придают повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
Авторы настоящего изобретения неожиданно установили, что при экспрессии в растение нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеотидов, которая содержит последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее вариант или производное, устойчивость или стойкость указанного растения к
конкретным гербицидам-ингибиторам 11110 может быть значительно повышена по сравнению с контрольным растением или растением дикого типа, у которого отсутствуют характеристики устойчивости к гербицидам и/или по сравнению с конкретным ГШО-полинуклеотидом по изобретению.
Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что, замещая один или несколько ключевых аминокислотных радикалов с применением для этого одного из описанных выше способов мутации кодирующих нуклеиновая кислот, можно еще больше повысить устойчивость или стойкость к гербицидам-ингибиторам 11110 по сравнению с активностью ферментов 11110 дикого типа с SEQ ID N0: 2 или 4. Предпочтительными замещениями такой мутированной ППО являются те, которые повышают устойчивость растения к гербицидам, но существенно не влияют на биологическую активность оксидазы.
Термин "нуклеиновая кислота с мутированной ППО" относится к 11110 нуклеиновой кислоте, которая имеет последовательность, мутировавшую из ППО нуклеиновой кислоты дикого типа SEQ ID NO: 1 или 3, и которая придает повышенную устойчивость к гербицидам-ингибиторам ППО растения, в которых она экспрессируется. Кроме того, понятие "мутированная протопорфириноген оксидаза (мутированная ППО)" подразумевает замещение аминокислоты первичных последовательностей дикого типа SEQ ID N0: 2 или 4, или их вариант, производная, гомолог, ортолог или паралог, другой аминокислотой. Выражение "мутированная аминокислота" будет использоваться ниже для определения аминокислоты, которая заменяется другой аминокислотой, обозначая тем самым место мутации в первичной последовательности белка.
Соответственно, согласно еще одной цели настоящего изобретения ключевые аминокислотные остатки ППО фермента, его варианта, производного, ортолога, паралога или гомолога замещаются любой другой аминокислотой.
В одном из вариантов осуществления изобретения, ключевые аминокислотные остатки ППО фермента, его варианта, производного, ортолога, паралога или гомолога замещаются консервативной аминокислотой, что показано в Таблице 2.
Для специалистов будет понятно, что аминокислоты, расположенные близко к позициям указанных далее аминокислот, также могут быть замещены. Таким образом, в другом варианте осуществления изобретения вариант SEQ ID NO: 2 или 4, его вариант, производная, ортолог, паралог или гомолог включают мутированную НПО, причем +3, +2 или +1 аминокислотные позиции из ключевой аминокислоты замещается любой другой аминокислотой.
С помощью методов, хорошо известных специалистам, можно создать очень характерный паттерн последовательности, с помощью которого можно осуществлять поиск других вариантов мутированных ППО с желаемой активностью.
Поиск других вариантов мутированной ППО с помощью соответствующего паттерна последовательности также охватывается настоящим изобретением. Для специалиста будет очевидно, что данный образец последовательности не ограничивается точным расстоянием между двумя смежными аминокислотными радикалами этого образца. Каждое расстояние между двумя соседними радикалами в упомянутом образце может, например, варьироваться независимо друг от друга и составлять до +10, + 5, +3, +2 или +1 аминокислотных позиций, что не влияет существенно на желаемую активность.
Кроме того, при применении метода направленного мутагенеза, в частности насыщающего мутагенеза (см., например, Schenk et al., Biospektrum 03/2006, стр. 277-279), авторы настоящего изобретения выявили и создали особые аминокислотные замещения и их комбинации, которые, при их введении в растение посредством трансформации и экспрессирования соответствующей мутированной ППО, кодирующей нуклеиновую кислоту, придают указанному растению повышенную стойкость или устойчивость к гербицидам-ингибиторам ППО.
Следует понимать, что любая аминокислота, кроме указанных в настоящем документе, может использоваться в качестве заместителя. Образцы для тестирования функциональности таких мутантов имеются среди технологий и, соответственно, описаны в разделе Примеры настоящего изобретения.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО относится к полипептиду, содержащему последовательность SEQ ID NO: 2 или 4, отличающемуся тем, что аминокислотная последовательность отлична от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или 4, в позиции 137, 415 и/или в позиции 438 SEQ ID NO: 2.
Примеры различий в данных позициях аминокислот включают, помимо прочего, один или несколько из следующих:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 отлична от аргинина; аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 отлична от лейцина аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 отлична от фениланина.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, фермент с мутированной ППО SEQ ID NO: 2 содержит один или несколько следующих элементов:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, Ala, Val, Не, Met, Туг, Gly, Asn, Cys, Phe, Ser, Thr, Gin, или His; аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, Arg, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr или Trp
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, Tyr или Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr или Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, Туг или Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr или Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, Arg, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Туг или Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, Arg, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr или Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, Туг или Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Leu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 представляет собой Trp.
В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 4, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 299 отлична от Thr, и предпочтительно представляет собой Leu, Ala, Pro, Lys, Arg, Val, He, Met, Tyr, Trp, Gly, Asn, Asp, Cys, Phe, Ser, Gin, Glu или His; и/или
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 300 отлична от Ser, и предпочтительно представляет собой Leu, Ala, Arg, Val, He, Met, His, Lys, Asp, Glu, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Phe, Туг или Trp и/или
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 420 отлична от Туг и предпочтительно представляет собой Ala, Leu, Val, Не, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, Phe или Trp.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 4, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 299 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 420 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 4, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 299 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 300 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 420 представляет собой Val.
Специалистам в данной области известно, как определить консервативные участки и мотивы, общие для гомологов, ортологов и паралогов, кодируемых SEQ ID NO: 1 или 3, которые отображены в Таблице 1. После определения таких консервативных участков, которые могут представлять собой подходящие связывающие мотивы, можно выбрать аминокислоты, соответствующие аминокислотам в предпочтительных перечисленных выше позициях, которые можно заменить любой другой аминокислотой, например, консервативными аминокислотами, указанными в Таблице 2, предпочтительно аминокислотами перечисленными выше.
Кроме того, такие консервативные области и мотивы могут быть выявлены с применением так называемых матриц замещения аминокислот, которые хорошо известны специалистам в данной области. См., например, матрицы РАМ (Dayhoff et al., 1978) и матрицы BLOSUM (Henikoff and Henikoff, 1992.) Оба семейства матриц замещения параметризуются несоответствием последовательностей. Матрицы РАМ основаны на формальной модели Маркова относительно эволюции последовательности. Матрицы BLOSUM используют специальный метод. Оба семейства были получены в соответствии со следующим общим подходом, хотя при этом подробности каждого отдельного этапа по этим двум методам отличаются. 1. Использовать набор "доверенных" сложно структурированных
выравниваний последовательностей (без гэпов) для вывода параметров модели; 2. Подсчитать замеченные пары аминокислот в доверенных выравниваниях с коррекцией на деформацию выборки; 3. Оценить частоту замещения на основании зафиксированного числа аминокислотных пар; 4. Составить матрицу замен по логарифму отношения шансов исходя из частоты замещений.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения используется так называемая Позиционная весовая матрица (ПВМ) (Stormo, et al. (1982) Nucleic Acids Research 10 (9): 2997-3011). При расчете элементов ПВМ с использованием логарифмического правдоподобия набранный показатель последовательности с учетом конкретной ПВМ можно рассчитать посредством сложения (а не умножения) соответствующих значений в каждой из позиций в ПВМ. Набранный показатель последовательности дает представление о том, насколько данная последовательность отлична от случайной. Значение показателя равно 0, если последовательность обладает одинаковой вероятностью того, что она является функциональной областью и одновременно случайной областью. Значение показателя будет больше 0, если, вероятность того, что последовательность является функциональной областью, больше, чем того, что это случайная область. Значение меньше 0 указывает на то, что скорее это случайная, а не функциональная область.-^Guigo, Roderic. "An Introduction to Position Specific Scoring Matrices". http.V/bioinformatica. upf. edu). Значение показателя последовательности также может интерпретироваться в рамках физической структуры, как энергия связи для данной последовательности.
Значения, которые обеспечивают совпадение показателя, рассчитываются как натуральный логарифм вероятности того, что аминокислота встретится в данной позиции в мотиве, деленный на фоновую вероятность такого нахождения в этой позиции, исходя из допущения о равномерном распределении. Следовательно, значение 0,42 относительно появления А в позиции 126 рассчитывается, как In (0,076 / 0,05), указывая на то, что вероятность нахождения А в данной позиции с 7,6% встречается чаще, чем ожидаемое случайное нахождение в позиции с 5%.
Таким образом, в еще одном варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид, содержащий мотив, соответствующий позиции 126, 127, 128, 129 и 130 SEQ ID: 27 с совпадающим значением показателя больше 0 или 0.5, или 1.0, или 1.5, или 2.0, или 2.5, или 3.0, или 3.5, или 4, или 4.5, или 5; который расчитывается как сумма аминокислот, соответствующих позиции 126, а также аминокислоты, соответствующей позиции
127, а также аминокислоты, соответствующей позиции 128, а также аминокислоты, соответствующей позиции 129, а также аминокислоты, соответствующей позиции 130. Предпочтительно значение показателя должно быть в диапазоне между 1,69 и 4,61.
Таким образом, в еще однов варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид, содержащий мотив, соответствующий позиции 395, 396, 397, 398 и 399 SEQ ID: 27 с совпадающим значением показателя больше 0 или 0.5, или 1.0, или 1.5, или 2.0, или 2.5, или 3.0, или 4.5, или 5, или 5.5, или 6; который расчитывается как сумма аминокислот,
соответствующих позиции 395, а также аминокислоты, соответствующей позиции 396, а также аминокислоты, соответствующей позиции 397, а также аминокислоты, соответствующей позиции 398, а также аминокислоты, соответствующей позиции 399. Предпочтительно значение показателя должно быть в диапазоне между 2,31 и 5,56.
Таким образом, в еще однов варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид, содержащий мотив, соответствующий позиции 418, 419, 420, 421, 422, and 423 of SEQ ID:27 с совпадающим значением показателя больше 0 или 0.5, или 1.0, или 1.5, или 2.0,
или 2.5, или 3.0, или 4.5, или 5, или 5.5, или 6, или 6.5, или 7; который расчитывается как сумма аминокислот, соответствующих позиции 418, а также аминокислоты, соответствующей позиции 419, а также аминокислоты, соответствующей позиции 420, а также аминокислоты, соответствующей позиции 421, а также аминокислоты, соответствующей позиции 422. Предпочтительно значение показателя должно быть в диапазоне между 3,68 и 6,73.
В Таблице 2Ь представлен обзор предпочтительных сайтов мутации, которые совместно используются гомологами, ортологами и паралогами, представленными в Таблице 1.
SEQ
Поз 20
Поз 21
Поз 22
Поз 23
Поз 24
Поз 25
Поз 26
Поз 27
Поз 28
Поз 29
Поз 30
Поз 31
Поз 32
Поз 33
Поз 34
Поз 35
Поз 36
Поз 37
L228
1230
R231
Н232
N239
S246
А258
G271
R272
N273
L307
S308
С313
D320
S341
S352
G363
F366
L220
М222
R223
А224
R231
S238
К250
А264
Р265
К266
Т299
S300
Е305
Q307
S321
Р332
L343
D346
L216
М218
Н219
Н220
N227
S234
S246
К259
Р260
R261
L295
S296
Q301
G308
S324
R335
G346
F349
L216
М218
Н219
Н220
N227
S234
S246
К259
Р260
R261
L295
S296
Q301
G308
S324
R335
G346
F349
L215
М217
Y218
Н219
N226
S233
S245
К258
Р259
R260
L294
S295
Q300
G307
S323
R334
G345
F348
L215
М217
Н218
Н219
N226
S233
S245
К258
Р259
R260
L294
S295
Q300
G307
S323
R334
G345
F348
L239
М241
К242
А243
Т250
S257
R269
К283
Р284
К285
S318
N319
L324
G326
S340
Р351
L362
V365
SEQ
Поз 56
Поз 57
Поз 58
Поз 59
Поз 60
G500
Y511
К516
D533
К544
К484
L497
V502
S519
D482
Y493
К498
Е515
К528
D482
Y493
К498
Е515
К528
D481
Y492
К497
Е514
К527
D481
Y492
К497
Е514
К527
К503
L516
V521
S538
После мутагенеза одной из последовательностей, показанных в настоящем документе, кодированный белок может быть экспрессирован рекомбинантным образом, а активность данного белка может определяться с использованием, например, описанного в настоящем документе анализа.
Самая большая гомология молекулы нуклеиновой кислоты, которая используется в способе по изобретению, была выявлена в отношении следующих записей из базы данных, полученных в результате исследования Gap.
Гомологи используемых нуклеотидных последовательностей с последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, содержат аллельные варианты, обладающие гомологией, по меньшей мере, приблизительно30%, 35%, 40% или 45%, предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно50%, 60% или 70%, более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно 90%, 91%, 92%, 93%, 94% или 95% и еще более предпочтительно, по меньшей мере, приблизительно 96%, 97%, 98%, 99% или более с одной из показанных нуклеотидных последовательностей или упомянутых выше полученных нуклеотидных последовательностей или их гомологов, производных или аналогов или их частей. Аллельные варианты включают, в частности, функциональные варианты, которые могут быть получены посредством деления, вставки или замещения нуклеотидов из показанных последовательностей, предпочтительно из SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или из выведенных нуклеотидных последовательностей, однако при этом цель заключается в том, чтобы активность фермента или биологическая активность получившихся синтезированных белков предпочтительно сохранялась или увеличивалась.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению или используемая в способе по изобретению, например, содержит последовательности, показанные в любой из SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. Предпочтительно, чтобы молекула нуклеиновой кислоты содержала как можно меньше других нуклеотидов, не показанных ни в одной из SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог. В одном из вариантов осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит менее чем 500, 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60, 50 или 40 дополнительных нуклеотидов. В
еще одном из вариантов осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит менее чем 30, 20 или 10 дополнительных нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления молекула нуклеиновой кислоты, используемая в способе по изобретению, является идентичной последовательностям, показанным в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
Также предпочтительно, чтобы молекула нуклеиновой кислоты, используемая в способе по изобретению, кодировала полипептид, содержащий последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе. В одном из вариантов осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодируется менее чем 150, 130, 100, 80, 60, 50, 40 или 30 дополнительных аминокислот. В еще одном из вариантов осуществления кодированный полипептид содержит менее чем 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 дополнительных аминокислот. В одном из вариантов осуществления в способе по изобретению кодированный полипептид является идентичным последовательностям, показанным в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе.
В одном из вариантов осуществления, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению или используемая в способе по изобретению, кодирует полипептид, содержащий последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, и содержит менее 100 дополнительны нуклеотидлв. В еще одном из вариантов осуществления указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит менее чем 30 дополнительных нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления молекула нуклеиновой кислоты, используемая в способе по изобретению, является идентичной кодирующей последовательности последовательностей, показанных в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог.
Полипептиды (= белки), которые по-прежнему обладают значительной биологической или ферментной активностью полипептида по настоящему изобретению, придающего устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа, то есть чья активность в существенной степени не уменьшена, являются полипептидами, обладающими, по меньшей мере, 10% или 20%, предпочтительно 30% или 40%, особенно предпочтительно 50% или 60%, крайне предпочтительно 80% или 90% или более
биологической или ферментной активности дикого типа, предпочтительно, активность в существенной степени не уменьшена по сравнению с активностью полипептида, показанного в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, который экспрессируется в идентичных условиях.
Гомологи SEQ ID NO: 1 или 3 или производных последовательностей SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, также являются укороченными последовательностями, кДНК, одноцепочечными ДНК или РНК кодирующей или некодирующей последовательности ДНК. Под гомологами указанных последовательностей также следует понимать производные, которые содержат некодирующие области, такие как, например, НТО, терминаторы, усилители или варианты промоторов. Промоторы, которые находятся вверх по цепочке от указанных нуклеотидных последовательностей, могут быть модифицированы одним или несколькими нуклеотидными замещениями, вставками и/или делециями, не влияя при этом на функциональность или активность промоторов, открытой рамки считывания (= ОРС) или З'-регулятивной области, такой как терминаторы или другие З'-регулятивные области, расположенные далеке от ОРС. Активность промоторов можно увеличить путем модификации их последовательности или путем полной их замены более активными промоторами, даже промоторами из гетерологичных организмов. Подходящие промоторы известны специалистам в данной области и указаны ниже по тексту настоящего документа.
Также один из вариантов осуществления изобретения касается векторов экспрессии, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
(a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, и содержащей последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
(b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог,
(c) молекулы нуклеиновой кислоты, которая, в результате дегенерации генетического кода может передаваться из последовательности полипептида SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по
(a)
сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа; молекулы нуклеиновой кислоты с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с последовательностью молекулы нуклеиновой кислоты полинуклеотида, содержащего молекулу нуклеиновой кислотыБЕС) ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа; молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, или более с аминокислотной последовательностью полипептида, кодированного молекулой нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с) или (d) и обладающего активностью, которая представлена молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
молекулы нуклеиновой кислоты, которая гибридизирует с молекулой нуклеиновой кислоты по пунктам (а), (Ь), (с), (d) или (е) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, который может быть изолирован при помощи моноклональных или поликлональных антител, созданных для полипептида, кодированного одной из молекул нуклеиновой кислоты по пунктам of (а), (Ь), (с), (d), (е) или (f) и обладающего активностью, которая представлена молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(h) молекулы нуклеиновой кислоты, которую можно получить посредством отбора из соответствующей библиотеки нуклеиновых кислот, в частности, библиотеки кДНК и/или библиотеки геномов, в жестких условиях гибридизации с зондом, содержащим комплементарную последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по пунктам (а) или (Ь) или с ее фрагментом, в которую входит 15, предпочтительно 20, 30, 50, 100, 200, 500, 750 или 1000 нуклеотидов или более молекулы нуклеиновой кислоты, которая является комплементарной для последовательности молекул нуклеиновой кислоты, охарактеризованной в пункта (а) - (е) и кодирующей полипептид, обладающий активностью, которая представлена белком, содержаим полипептид SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог.
Изобретение также предусматривает изолированный вектор рекомбинантной экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислотой по изобретению, отличающийся тем, что экспрессия вектора или, соответственно, молекула нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине приводит к повышению устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, трансформированной клеткой-хозяином дикого типа.
Экспрессионная кассета растения, предпочтительно содержит регуляторные последовательности, которые способны стимулировать экспрессию гена в клетках растения и функционально связаны так, что каждая последовательность может выполнять свои функции, например, такие как прекращение транскрипции посредством сигналов полиаденилирования. Предпочтительными сигналами полиаденилированияявляются сигналы, происходящие из т-ДНК Agrobacterium tumefaciens, таких как ген 3, известный как октопин синтаза Ti-плазмиды pTiACH5 (Gielen et al., EMBO J. 3, 835 (1984)) или его функциональных эквивалентов, однако при этом подходят и все остальные терминаторы, которые функционально активны в растениях. Поскольку экспрессия гена растения часто не ограничена транскрипционными уровнями, экспрессионная кассета растения, предпочтительно, содержит другие функционально связанные последовательности, такие как усилители трансляции,
такие как ускоренная последовательность, которая содержит 5' нетранслируемую лидерную последовательность вируса табачной мозаики, который увеличивает значение количества белков на РНК (Gallie et al., Nucl. Acids Research 15, 8693 (1987)).
Экспрессия гена растения должна быть функционально связана с соответствующим промотором, передающим экспрессию гена в подходящий для конкретной клетки или ткани момент. Предпочтительными являются промоторы, которые порождают конститутивную экспрессию (Benfey et al., EMBO J. 8, 2195
(1989) ), как те, что получены из вирусов растений, такие как 35S CaMV (Franck et al., Cell 21, 285 (1980)), 19S CaMV (смотрите также Патент США № 5,352,605 и Международную заявку согласно РСТ № WO 84/02913) или промоторы растений, такие как из малой субъединицы Rubisco, описание которой приводится в Патент США № 4,962,028. Другие промоторы, например, суперпромотор (Ni et al., Plant Journal 7, 661 (1995)), Промотор убиквитина (Callis et al., J. Biol. Chem., 265, 12486
(1990) ; US 5,510,474; US 6,020,190; Kawalleck et al., Plant. Molecular Biology, 21, 673 (1993)) или промотор 34S (номер Доступа Банка Генов М59930 и Х16673) были аналогично применимы для настоящего изобретения и известны специалистам в данной области. Промоторы, являющиеся предпочтительными на этапе развития, предпочтительно экспрессируются на определенных этапах развития. Ткань и орган предпочтительных промоторов включают те, которые предпочтительно экспрессируются в некоторых тканях и органах, таких как листья, корни, семена и ксилема. В качестве примеров предпочтительных для тканей и предпочтительных для органов промоторов можно привести, помимо прочего, промоторы, предпочтительные для фруктов, предпочтительные для семяпочек, предпочтительные для ткани особи мужского пола, предпочтительные для семян, предпочтительные для покрова семяпочки, предпочтительные для клубней, предпочтительные для стеблей, предпочтительные для околоплодников, предпочтительные для листьев, предпочтительные для рыльца, предпочтительные для пыльцы, предпочтительные для пыльников, предпочтительные для лепестков, предпочтительные для чашелистиков, предпочтительные для цветоножки, предпочтительные для стручков, предпочтительные для стеблей, предпочтительные для корней и аналогичные. Предпочтительные для семян промоторы предпочтительно экспрессируются во время развития и/или
(1989)
прорастания семян. Например, предпочтительные для семян промоторы могут быть предпочтительными для зародышей, эндоспермов и семенной оболочки. Смотрите Thompson et al., BioEssays 10, 108 (1989). В качестве примеров предпочтительных для семян промоторов, помимо прочего, можно привести целлюлозосинтазу, (celA), Ciml, гамма-зеин, глобулин-1, маис 19 kD зеин (cZ19Bl) и аналогичные.
Среди других промоторов, применимых в экспрессионной кассете по изобретению, помимо прочих, основной промотор белка, связывающего хлорофилл а/Ь, промоторы гистона, промотор АрЗ, промотор Р-конглицина, промотор напина, промотор лектина сои, промотор зеина 15 кД маиса, промотор зеина 22 кД маиса, промотор зеина 27 кД маиса, промотор g-зеина, восковые, shrunken 1, shrunken 2 и бронзовые промоторы, промотор Zml3 (Патент США № 5,086,169), промоторы полигалактуроназы (ПГ) маиса (Патенты США №№ 5,412,085 и 5,545,546), и промотор SGB6 (Патент США № 5,470,359), а также синтетические или другие природные промоторы.
Дополнительными предпочтительными регуляторными
последовательностями являются, например, последовательности, включенные в промоторы растений, такие как промоторы CaMV/35S (Franck et al., Cell 21 285 (1980)), PRP1 (Ward et al., Plant. Mol. Biol. 22, 361 (1993)), SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, LEB4, nos, промоторы убиквитина, напина или фазеолина. Также предпочтительными в данной связи являются индуцируемые промоторы, такие как промоторы, описанные в ЕР 388 186 (индуцируемые бензилсульфонамидом), Gatz et al., Plant J. 2, 397 (1992) (индуцируемые тетрациклином), EP-A-0 335 528 (индуцируемые абсцизовой кислотой) или WO 93/21334 (индуцируемые этанолом или циклогексенолом). Дополнительными применимыми промоторами растений являются цитоплазматический промотор FBPase или промотор ST-LSI картофеля (Stockhaus et al., EMBO J. 8, 2445 (1989)), промотор фосфорибосил фирофосфат амидотрансферазы Glycine max (№ доступа библиотеки генов U87999) или промотор нодена, описанный в ЕР-А-0 249 676. Дополнительными особенно предпочтительными промоторами являются промоторы семян, которые могут использоваться для двудольных или однодольных растений и описаны в US 5,608,152 (промотор напина из семян рапса) WO 98/45461 (промотор фазеолина из
Arabidopsis), US 5,504,200 (промотор фазеолина из Phaseolus vulgaris), WO 91/13980 (промотор Bce4 из Brassica) и Baeumlein et al., Plant J., 2 (2), 233 (1992) (промотор LEB4 из leguminosa). Указанные промоторы применимы в двудольных растениях. Следующие промоторы применимы, например, в промоторе lpt-2- или lpt-1- однодольных из ячменя (WO 95/15389 и WO 95/23230) или в промоторе гордеина из ячменя. Другие применимые промоторы описаны в WO 99/16890. В принципе можно использовать все природные промоторы с их регуляторными последовательностями, как те, что указывались выше для способа по изобретению. Также в дополнение возможным и преимущественным будет использование синтетических промоторов.
Генетический конструкт также может содержать и другие гены, которые вставляются в организмы, и которые, например, участвуют в повышении устойчивости или стойкости к гербицидам. Возможным и преимущественным яляется вставка и экспрессирование в организмы-хозяева регуляторных генов для стимуляторов, репрессоров или ферментов, которые посредством своей ферментной активности вмешиваются в регуляторные процессы, или же один или несколько или все гены биосинтетического метаболического пути. Данные гены по своему происхождению могут быть гетерологичным или гомологичными. Вставленные гены могут иметь свои собственные промоторы или же быть под контролем того же промотора, что и последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 или 3, или их гомологи.
Генетический конструкт предпочтительно для экспрессии других присутствующих генов содержит дополнительно 3' и/или 5' терминальные регуляторные последовательности для усиления экспрессии, которые выбираются для оптимальной экспрессии в зависимости от выбранного организма-хозяина и гена или генов.
Данные регуляторные последовательности предназначены для выполнения специфической экспрессии генов и возможной экспрессии белка, как указывалось выше. В зависимости от организма-хозяина это может означать, например, что ген экспрессируется или подвергается сверхэкспрессии только после индуцирования, или что он экспрессируется или подвергается сверхэкспрессии немедленно.
Регуляторные последовательности или факторы могут еще более предпочтительно оказывать положительное влияние на экспрессию вводимых генов и тем самым увеличивать ее. Таким образом, регуляторные элементы могут предпочтительно усиливаться на уровне транскрипции за счет использования мощных сигналов транскрипции, таких как промоторы и/или усилители. Однако также есть возможность усилить трансляцию за счет, например, повышения стабильности мРНК.
Другие предпочитаемые последовательности для использования кассетах экспрессии генов растения - это нацеливающие последовательности, необходимые для нацеливания генного продукта в соответствующий клеточный компартмент (подробнее описано в Kermode, Crit. Rev. Plant Sci. 15 (4), 285 (1996) и ссылки, указанные в данном документе), например, в вакуоль, ядро, все виды пластидов, такие как амилопласты, хлоропласты, хромопласты, внеклеточное пространство, митохондрии, эндоплазматический ретикулюм, консистентность масла, пероксисомы и другие составляющие клеток растения.
Экспрессия генов растения также может быть обеспечена за счет индуцируемого промотора (более подробно описано в Gatz, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48, 89 (1997)). Химически индуцируемые промоторы особенно хорошо подходят, если экспрессия гена должна происходить в определенный момент времени.
В таблице хх представлено несколько примеров промоторов, которые могут использоваться для регулирования транскрипции последовательностей, кодирующих нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению.
238, 17 (1993)
Cor 15А - Холод, дегидратация, АБК
Baker et al., Plant Mol. Biol. 24, 701 (1994)
GH3- Индуцируется ауксином
Liu et al., Plant Cell 6, 645 (1994)
ARSK1 - Индуцируется в корень, солью
Hwang and Goodman, Plant J. 8, 37 (1995)
PtxA - Индуцируется в корень, соль
GenBank accession X67427
SbHRGP3 - Для корня
Ahn et al., Plant Cell 8, 1477 (1998).
KST1 - Для замыкающей клетки
Plesch et al., Plant Journal. 28(4), 455- (2001)
КАТ 1 - Для замыкающей клетки
Plesch et al., Gene 249, 83 (2000),
Nakamura et al., Plant Physiol. 109, 371 (1995)
индуцируемый салициловой кислотой
Международная заявка согласно PCT № WO 95/19443
индуциру емый окситетрациклином
Gatz et al., Plant J. 2, 397 (1992)
Индуцируемый этанолом
Международная заявка согласно PCT № WO 93/21334
PRP1- Индуцируется патогеном
Ward et al., Plant. Mol. Biol. 22, 361 -(1993)
Hsp80 - индуцируется теплом
Патент США № 5,187,267
Альфа-амилаза -индуцируемая холодом
Международная заявка согласно PCT № WO 96/12814
Pinll - индуцируемый раной
Европейский патент № 375 091
RD29A - Индуцируется солью
Yamaguchi-Shinozalei et al. Mol. Gen. Genet. 236, 331 (1993)
Полимераза вирусной РНК для пластид
Международная заявка согласно PCT № WO 95/16783, Международная заявка согласно PCT WO 97/06250
Дополнительную гибкость в вопросах контроля экспресии гетерологичных генов в растениях можно обеспечить за счет использования связывающих ДНК
доменов и ответных элементов из гетерологичных источников (то есть, связывающие ДНК домены из не связанных с растениями источников). В качестве примера такого гетерологичного связывающего ДНК домена можно привести связывающий ДНК домен LexA (Brent and Ptashne, Cell 43, 729 (1985)).
В одном из вариантов осуществления изобретения, формулировка "в основном свободный от клеточного материала" включает препараты из белка с менее чем 30% (сухого веса) загрязняющего материала (также называемый в настоящем документе как "загрязняющий полипептид"), более предпочтительно менее чем 20% загрязняющего материала, также более предпочтительно менее чем 10% загрязняющего материала и наиболее предпочтительно менее чем 5% загрязняющего материала.
Молекулы нуклеиновой кислоты, полипептиды, гомологи полипептидов, фьюжн-полипептиды, праймеры, векторы и клеткм-хозяева, описанные в настоящем документе, могут использоваться для осуществления одного или нескольких следующих способов: выявление S. cerevisiae, E.coli или Brassica napus, Glycine max, Zea mays или Oryza sativa и связанных с ними организмов; картирование геномов организмов, связанных с S. cerevisiae, E.coli; выявление и локализация искомых последовательностей S. cerevisiae, E.coli или Brassica napus, Glycine max, Zea mays или Oryza sativa; эволюционные исследования; определение областей полипептида, необходимых для функции; модуляция активности полипептида; модуляция трансмембранного переноса одного или нескольких соединений; модуляция устойчивости или стойкости к гербицидам, модуляция экспрессии нуклеиновых кислот полипептида.
Молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению также могут использоваться в эволюционных исследованиях и в исследованиях структуры полипептидов. Метаболические и транспортные процессы, в рамках которых молекулы, используемые в рамках изобретения, применяются разнообразными клетками прокариотов и эукарйотов; посредством сравнения последовательностей молекул нуклеиновой кислоты по настоящему изобретениею с последовательностями, кодирующими схожие ферменты из других организмов, можно оценить эволюционную связанность организмов. Аналогичным образом такое сравнение позволяет оценить, какие области последовательности
консервируются, а какие нет, что может помочь в определении тех областей полипептида, которые имеют важное значение для функционирования фермента. Данный вид определения важен для исследований в области инженерии полипептидов и может предоставить информацию о том, какой полипептид может обладать устойчивостью в части мутагенеза без потери функции.
Существует большое количество механизмов, при помощи которых изменение полипептида по изобретению может оказать прямое влияние на устойчивость или стойкость к гербицидам.
Эффект генетической модификации в растениях относительно устойчивости или стойкости к гербицидам можно оценить при воздействии на модифицированное растение соответствующим гербицидом, как, например, описано в разделе ПРИМЕРЫ, а затем проанализировать характеристики роста и/или метаболизм растения в сравнении с немодифицированными растениями. Данные методы анализа хорошо известны специалистам в данной области и включают оценку фенотипа растения, сухого веса, веса сырой ткани, синтеза полипептида, углеводного синтеза и/или урожайности, цветения репродуктивной способности, завязывания семян, роста корней, интенсивности дыхания, интенсивности фотосинтеза и др. (Применение ВЭЖХ в биохимии в: Лабораторные методы биохимии и Molecular Biology, том 17; Rehm et al., 1993 Biotechnology, том 3, Глава III: Product recovery and purification, стр. 469-714, VCH: Weinheim; Belter P.A. et al., 1988, Биоразделение: технология производства и выделения целевого продукта для биотехнологии, John Wiley and Sons; Kennedy J.F., and Cabral J.M.S., 1992, Процессы восстановления биологических материалов, John Wiley and Sons; Shaeiwitz J.A. and Henry J.D., 1988, Биохимическое разделение, в Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, том ВЗ, Глава 11, стр. 1-27, VCH: Weinheim; и Dechow F.J., 1989, Методы разделения и очистки в биотехнологии, No yes Publications).
Например, векторы экспрессии растений, содержащие нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению или их фрагменты, могут быть построены или трансформированы в соответствующую клетку растения, такого как рапс, маис, хлопок, рис, пшеница, сахарный тростник, сахарная свекла, соя, Arabidopsis thaliana, картофель, Medicago truncatula и др. с использованием стандартных
В настоящем изобретению также предусмотрены антитела, которые специфически связывают полипептиды по настоящему изобретению или их части, которые кодированы описанной в настоящем документе нуклеиновой кислотой. Антитела могут быть получены с использованием множества хорошо известных способов (смотрите, например, Harlow and Lane, "Antibodies; A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Нью-Йорк, (1988)).Вкратце, очищенный антиген может вводиться в животное в количестве и через интервалы, которые необходимы для получения иммунной реакции. Антитела могут очищаться напрямую или же из животного могут быть получены клетки селезёнки. Данные клетки затем можно подвергнуть слиянию с бессмертной линией клеток и произвести с ними скрининг на предмет секреции антител. Данные антитела могут использоваться для выполнения скриннинга библиотек клонов нуклеиновых кислот в отношении клеток, которые выделяют антиген. Затем положительные клоны можно включить в последовательность. Смотрите, например, Kelly et al., Bio/Technology 10, 163 (1992); Bebbington et al., Bio/Technology 10, 169 (1992).
Экспрессия генов в растениях регулируется посредством взаимодействия факторов транскрипции белка с конкретными последовательностями нуклеотидов в рамках регуляторной области гена. Одним из примеров факторов транскрипции являются полипептиды, содержащие мотивы цинковых пальцев (ЦП). Каждый отдельный модуль ЦП имеет длину приблизительно 30 аминокислот, закрученных вокруг иона цинка. Домен распознавания ДНК из белка ЦП представляет собой а-гелиевую структуру, которая вставляется в основную бороздка двойной спирали ДНК. Данный модуль содержит три аминокислоты, которые связывают ДНК с каждой из аминокислот, содержащих одну пару оснований в целевой последовательности ДНК. Мотивы ЦП организуются по модульной повторяющейся схеме и образуют набор пальцев, которые распознают смежную последовательность ДНК. Например, мотив ЦП с тремя пальцами будет распознавать 9 п.о. ДНК. Было показано, что сотни белков содержат мотивы ЦП
между модулями ЦП 2 и 37 в каждом из белков (Isalan М. et al., Biochemistry 37 (35), 12026 (1998); Moore M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98 (4), 1432 (2001) и Moore M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98 (4), 1437 (2001); Патент CIIIAs US 6,007,988 и US 6,013,453).
Регуляторная область гена растения содержит множество последовательностей ДНК (цис-действующих элементов), которые служат в качестве доменов распознавания факторов транскрипции, включая белки с ЦП. Аналогичные домены распознавания в различных генах позволяют координировать экспрессию в различных генах, кодирующих ферменты в рамках метаболического пути по общим факторам транскрипции. Расхождения по доменам распознавания среди членов семейства генов обеспечивает различия в экспрессии генов в рамках одного семейства генов, например, между тканями и этапами развития, а также в качестве реакции на условия окружающей среды.
Типичные белки с ЦП содержат не только домен распознавания ДНК, но и функциональный домен, который обеспечивает возможность белку с ЦП активировать или подавить транскрипцию конкретного гена. В качестве эксперимента домен активации использовали для активации транскрипции целевого гена (Патент США 5,789,538 и заявка на выдачу патента WO 95/19431), однако при этом также имеется возможность привязать домен-репрессор транскрипции к ЦП и тем самым ингибировать транскрипцию (заявки на выдачу патента WO 00/47754 and WO 01/002019). В литературе имеются сведения о том, что ферментная функция, такая как расщепление нуклеиновой кислоты, может быть привязана к ЦП (заявка на выдачу патента WO 00/20622).
Изобретение предусматривает способ, позволяющий специалисту в данной области изолировать регуляторную область одного или нескольких генов по настоящему изобретению, кодирующих полипептиды, из генома клетки растения и создать факторы транскрипции цинковых пальцев, привязанные к функциональному домену, который будет взаимодействовать с регуляторной областью гена. Взаимодействие белка "цинковые пальцы" с геном растения может быть спланировано таким образом, чтобы изменить экспрессию гена и предпочтительно тем самым обеспечить повышение устойчивости или стойкости к гербицидам.
В частности, изобретение предусматривает способ создания трансгенного растения с кодирующей нуклеиновой кислотой, отличающееся тем, что экспрессия нуклеиновой(ых) кислот(ы) в растении приводит к повышению устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с растением дикого типа, включая: (а) трансформацию клетки растения с вектором экспрессии, содержащим кодирующую нуклеиновую кислоту, и (Ь) создание из клетки растения трансгенного растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с растением дикого типа. Для трансформации такого растения можно использовать такие бинарные векторы, как pBinAR (Hofgen and Willmitzer, Plant Science 66, 221 (1990)). Кроме того, подходящими бинарными векторами являются, например, pBIN19, pBHOl, pGPTV или pPZP (Hajukiewicz P. et al., Plant Mol. Biol., 25, 989 (1994)).
Среди альтернативных способов трансфекции прямой перенос ДНК в развивающиеся цветки при помощи электропорации или переноса гена посредством агробакетий. Трансформацию растения с помощью аргобактерий можно осуществить, используя, например, GV3101 (рМР90) (Koncz and Schell, Mol. Gen. Genet. 204, 383 (1986)) или LBA4404 (Ooms et al., Plasmid, 7, 15 (1982); Hoekema et al., Nature, 303, 179 (1983)) штамм Agrobacterium tumefaciens. Трансформацию можно осуществить с помощью стандартных методов трансформации и регенерации (Deblaere et al., Nucl. Acids. Res. 13, 4777 (1994); Gelvin and Schilperoort, Plant Molecular Biology Manual, 2-ое Изд. - Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 07923-2731-4; Glick B.R. and Thompson J.E., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton : CRC Press, 1993. - 360 S., ISBN 0-8493-51642).Например, семена рапса можно трансформировать с помощью трансформации котиледона или гипокотиля (Moloney et al., 1989, Plant Cell Reports 8:238-242; De Block et al., 1989, Plant Physiol. 91, 694 (1989)). Использование антибиотиков для Agrobacterium и отбор растений зависит от бинарного вектора и штамма Agrobacterium, использованного для трансформации. При отборе семян рапса обычно используют канамицин в качестве селектируемого растительного маркера. Генный трансфер с помощью Agrobacterium в лен можно осуществить с помощью, например, метода, описанного в Mlynarova et al., Plant Cell Report 13, 282 (1994)). Дополнительно, трансформацию сои можно осуществить с помощью,
например, метода, описанного в Европейском Патенте № 424 424 047, Патенте США № 5,322,783, Европейском Патенте № 397 397 687, Патенте США № 5,376,543, или Патенте США № 5,169,770. Трансформацию кукурузы можно осуществить с помощью бомбардировки частицами, поглощения ДНК посредством полиэтилен гликоля или метода, использующего карбидно-кремниевое волокно (смотрите, например, Freeling and Walbot "The maize handbook" Springer Verlag: Нью-Йорк (1993) ISBN 3-540-97826-7). Конкретный пример трансформации кукурузы описан в заявке на Патент США № 5,990,387, а конкретный пример трансформации пшеницы - в Международной заявке согласно PCT № WO 93/07256.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу выявления генного продукта, придающего повышенную устойчивости или стойкости к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа в клетке организма, например, растения, включающий следующие действия:
(a) контактирование, например, гибридизация, некоторых или всех молекул нуклеиновой кислоты образца, например, клеток, тканей, растений или микроорганизмов или библиотеки нуклеиновых кислот, которая может содержать возможный вариант гена, кодирующего генный продукт, придающий повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам с молекулой нуклеиновой кислоты, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее функциональный гомолог;
(b) выявление молекул нуклеиновой кислоты, которые гибридизирются в ослабленных или строгих условиях с указанной молекулой нуклеиновой кислоты, в частности, с последовательностью молекулы нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и в некоторых случаях изолирование клона кДНК полной длины или полного геномного клона;
(c) выявление кандидатов молекул нуклеиновой кислоты или их фрагментов в клетках-хозяевах, предпочтительно в клетке растения;
(d) увеличение экспрессии выявленных молекул нуклеиновой кислоты в клетках-хозяевах, в которых желательно получить повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам;
(a)
(e) анализ уровня повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам клеток-хозяев; а также
(f) выявление молекулы нуклеиновой кислоты и ее генного продукта, который придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам в клетке-хозяине по сравнению с клеткой дикого типа.
Ослабленными считаются следующие условия гибридизации: После стандартных мероприятий по гибридизации этапы промывки можно выполнять в условиях пониженной или средней строгости, обычно в условиях промывки при температуре 40°-55°С и в солевых условиях между 2 х SSC и 0,2 х SSC при 0,1% SDS по сравнению со строгими условиями промывки, такими как, например, 60° -68°С при 0,1% SDS. Дополнительные примеры строгих условий гибридизации можно найти в указанной выше литературе. Обычно этапы гибридизации повторяют с увеличение строгости и длины до тех пор, пока не будет выявлено необходимое отношение сигнала к шуму. При этом данные действия зависят от множества факторов, таких как цель, например, ее чистота, содержание ГХ, размер и т.д., зонд, например, его длина, является ли он зондом РНК или ДНК, солевые условия, температура промывки или гибридизации, время промывки или гибридизации и др.
В еще одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу выявления генного продукта, экспрессия которого придает повышенную устойчивости или стойкости к гербицидам, в клетке, причем такой способ включает следующие этапы:
(а) выявление молекулы нуклеиновой кислоты в организме, который, по меньшей мере, 20%, предпочтительно 25%, более предпочтительно 30%, еще более предпочтительно 35%, 40% или 50%, даже более предпочтительно 60%, 70% или 80%, наиболее предпочтительно 90% или 95% или более является гомологом молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий молекулу полипептида, как показано в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, которая кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, согласно описанию в настоящем документе, например, посредством
(c) анализ уровня улучшения свойств относительно повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам в клетке-хозяине; а также
(d) выявление клетки-хозяина, в которой улучшенная экспрессия придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам в клетке-хозяине по сравнению с клеткой дикого типа.
Кроме того, молекула нуклеиновой кислоты, описанная в настоящем документе, в частности, молекула нуклеиновой кислоты, показанная в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть достаточно гомологичной с последовательностями связанных видов, так что данные молекулы нуклеиновой кислоты могут выступать в качестве маркеров для построения геномной карты в связанном организме или для ассоциативного картирования. Кроме того, природный вариант в геномных областях, соответствующий нуклеиновым кислотам, описанным в настоящем документе, в частности, молекуле нуклеиновой кислоты, показанной в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, может привести к изменению активности белков по настоящему документу, в частности, белков, содержащих полипептиды, как показано в SEQ ID NO: 2 или 4 и в гомологах, и в результате к природному изменению увеличенной устойчивости или стойкости к гербицидам.
В результате этого природное изменение в конечном счёте также существует в виде более активных аллельных вариантов, которые и так обеспечивают относительное повышение устойчивости или стойкости к гербицидам. Различные варианты молекул нуклеиновых кислот, описанной в настоящем документе, в частности, нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, что соответствует различным уровням повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам, могут быть выявлены и использованы для выведения экземпляров с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам при помощи маркера,
Соответственно, настоящее изобретение относится к способу выведения растений с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам, который включает
(a) селекцию первого варианта растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам на основании усиленной экспрессии нуклеиновой кислоты по изобретению согласно описанию в настоящем документе, в частности молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, как показано в SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, или полипептид, содержащий полипептид, как показано в SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомологе, или гомолог согласно описанию в настоящем документе;
(b) ассоциацию уровня повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам с уровнем экспрессии или с геномной структурой гена, кодирующего указанный полипептид или указанную молекулу нуклеиновой кислоты;
(c) скрещивание первого варианта растения со вторым вариантом, который существенно отличается по своему уровню повышенной устойчивости или стойкости к гербицидам; а также
(d) выявление того, какой именно из вариантов потомков обладает повышенным уровнем устойчивости или стойкости к гербицидам,
Согласно описанию выше по тексту настоящее изобретение предусматривает растения, ткани растений, клетки растения и клетки-хозяева, которые устойчивы или стоки, по меньшей мере, к одному гербициду-ингибитору 11110. В некоторых вариантах осуществления изобретения растения, ткани растений, клетки растений и клетки-хозяева демонстрируют повышенную устойчивость или стойкость, по меньшей мере, к одному гербициду-ингибитору 11110. Термин "повышенная" относится у увеличению количественной меры устойчивости или стойкости выше ожидаемого уровня. Предпочтительным количеством или концентрацией гербицида является "эффективное количество" или "эффективная концентрация". Под "эффективным количеством" или "эффективной концентрацией" подразумевается количество или концентрация, соответственно, достаточные для уничтожения или препятствования росту подобного, дикого типа, растения, микроспоры, ткани растения, клетки растения или клетки-хозяина, но это количество не уничтожает или не препятствует таким же образом росту растений, микроспор, тканей растения, клеток растения и клетки-хозяина, стойких к гербицидам, которые описаны в настоящем
изобретении. Также эффективное количество гербицида - это количество, которое обычно используется в системах сельскохозяйственного производства для уничтожения интересующих сорняков. Специалистам хорошо известно такое количество, или же его можно легко определить, используя известные методы. Кроме того, признается, что эффективное количество гербицида в рамках системы производства сельскохозяйственной продукции может существенно отличаться от эффективного количества гербицида для культуры растения, такой как, например, культура микроспор.
Ферменты 11110 по настоящему изобретению и растения по изобретению, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, могут применяться в способах борьбы с сорняками.
Таким образом, настоящее изобретение также предусматривает способ борьбы с нежелательной растительностью а месте выращивания растения вблизи растения, устойчивого к гербицидам, такого как растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты с РР по изобретению, то есть последовательность нуклеотидов, кодирующую полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2 или 4 или ее гомолог. Данный способ включает нанесение эффективного количества гербицида-ингибитора ППО на сорняки и растения, стойкие к гербицидам, и отличается тем, что растение имеет стойкость к, по меньшей мере, одному гербициду-ингибитору ППО в сравнении с растением дикого типа.
Кроме того изобретение также предусматривает способ выращивания растения в соответствии с изобретением наряду с контролем роста сорняков неподалеку от указанного растения, включающий следующие этапы:
с) выращивание указанного растения; и нанесение гербицидной композиции, содержащей гербицид-ингибитор ППО, на растение и сорняки, при этом гербицид обычно ингибирует протопорфириноген оксидазу на уровне гербицида, который препятствовал бы росту соответствующего растения дикого типа.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) полинуклеотид, кодирующий полипептид дикого типа или полипептид с
мутированной ППО по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к способу получения комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, который включает (а) использование полинуклеотида, кодирующего полипептид дикого типа или полипептид с мутированной ППО по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) использование гербицида-ингибитора ППО.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный этап использования полинуклеотида включает использование растения, содержащего данный полинуклеотид.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный этап использования полинуклеотида включает использование семян, содержащих данный полинуклеотид.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный способ также включает дополнительный этап применения гербицида-ингибитора ППО на семена.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к использованию комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) полинуклеотид, кодирующий полипептид дикого типа или полипептид с мутированной ППО по настоящему изобретению, при этом данный полинуклеотид может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО, для контроля за контром сорняков в месте выращивания растения.
Понятие "борьба с нежелательной растительностью" подразумевает контроль, в частности уничтожение сорняков и/или замедление или препятствование их нормальному росту. Сорняки, в широком смысле, понимают
как все растения, растущие там, где это нежелательно, например, на участке культивации растений. Сорняки настоящего изобретения включают, например, двудольные и однодольные сорняки. Двудольные сорняки включают, но не ограничиваются ими, сорняки следующих сортов: Sinapis, Lepidium, Galium, Stellaria, Matricaria, Anthemis, Galinsoga, Chenopodium, Urtica, Senecio, Amaranthus, Portulaca, Xanthium, Convolvulus, Ipomoea, Polygonum, Sesbania, Ambrosia, Cirsium, Carduus, Sonchus, Solanum, Rorippa, Rotala, Lindernia, Lamium, Veronica, Abutilon, Emex, Datura, Viola, Galeopsis, Papaver, Centaurea, Trifolium, Ranunculus, and Taraxacum. Однодольные сорняки включают, но не ограничиваются ими, сорняки следующих сортов: Echinochloa, Setaria, Panicum, Digitaria, Phleum, Poa, Festuca, Eleusine, Brachiaria, Lolium, Bromus, Avena, Cyperus, Sorghum, Agropyron, Cynodon, Monochoria, Fimbristyslis, Sagittaria, Eleocharis, Scirpus, Paspalum, Ischaemum, Sphenoclea, Dactyloctenium, Agrostis, Alopecurus, and Apera. В дополнение, сорняки настоящего изобретения могут включать, например, сельскохозяйственные культуры, растущие на нежелательном участке. Например, произвольно растущая кукуруза на поле, где главным образом растет соя, может считаться сорняком, если она там нежелательна.
В целом, под понятием "гербицид" в настоящем изобретении подразумевается ингредиент, который уничтожает, контролирует или каким либо способом препятствует росту растения. Предпочтительным количеством или концентрацией гербицида является "эффективное количество" или "эффективная концентрация". Под "эффективным количеством" или "эффективной концентрацией" подразумевается количество или концентрация, соответственно, достаточные для уничтожения или препятствования росту подобного, дикого типа, растения, ткани растения, клетки растения или клетки-хозяина, но это количество не уничтожает или не препятствует таким же образом росту растений, тканей растения, клеток растения и клетки-хозяина, стойких к гербицидам, которые описаны в настоящем изобретении. Также эффективное количество гербицида- это количество, которое обычно используется в системах сельскохозяйственного производства для уничтожения интересующих сорняков. Специалистам хорошо известно такое количество. Гербициды, применимые по настоящему изобретению, проявляют свою активность при непосредственном нанесении на растение или на место произрастания растения на любом этапе
роста или до его насаждения или прорастания. Эффект зависит от вида растения, этапа роста, применяемые параметры раствора и размер капель при опрыскивании, размера частиц твердых компонентов, внешних условий во время использования, использованного специфического состава, вспомогательных средств и носителей, типа почвы и т.п., а также количества используемых химических веществ. Эти и другие факторы можно регулировать способом, известным специалистам, чтобы вызвать селективную или неселективную активность гербицидов. В целом, предпочтительно для получения максимального контроля над сорняками использовать гербицид, после того, как нежелательные растения только что взошли.
Применимыми по настоящему изобретению являются гербициды, которые вмешиваются в активность ППО-фермента, в результате чего данная активность снижается в присутствии такого гербицида. Такие гербициды также в тексте настоящего изобретения могут называться "гербицидами-ингибиторами ППО" или просто "ППО-ингибиторами". При использовании по тексту настоящего документа термин "гербицид-ингибитор ППО" или "ППО-ингибитор" не ограничивается по своему значению одним гербицидом, который вмешивается в активность ППО-фермента. Таким образом, если иное не указано в тексте или очевидным образом не вытекает из контекста, гербицид-ингибитор ППО или ППО-ингибитор может быть представлен одним гербицидом или смесью двух, трех, четырех или более гербицидов, каждый из которых вмешивается в активность ППО-фермента. Гербицид-ингибитор ППО, который применим для использования в предусмотренных настоящим изобретением способах, может применяться с использованием любого известного специалистам метода, включая, помимо прочего, обработку семян, почвы и листьев.
Под растениями, "устойчивыми к гербициду" или "стойкими к гербициду", подразумевается то, что эти растения устойчивы или стойки, по меньшей мере, к одному гербициду, который в данном количестве обычно уничтожает обычные или дикие растения или препятствует их росту. Под "белком с мутированной ППО или дикого типа, устойчивым к гербициду" или "белком с мутированной ППО или дикого типа, стойким к гербициду" подразумевается такой ППО белок, который проявляет большую ППО-активность по сравнению с
ГШО-активностью 11110 белка дикого типа в присутствии, по меньшей мере, одного гербицида, который обычно влияет на активность ППО, и при концентрации или уровне гербицида, которые обычно препятствуют 11110-активности ППО белка дикого типа. Более того, активность ППО такого белка с мутированной ППО, устойчивого или стойкого к гербициду, можно назвать активностью ППО, "устойчивой к гербициду" или "стойкой к гербициду".
В целом, если гербициды-ингибитора ППО (которые также обозначены как
соединения А) и/или гербицидные соединения В согласно описанию в настоящем
документе, которые могут упоминаться в настоящем изобретении, способны
образовывать геометрические изомеры, например E/Z изомеры, в композициях по
изобретению допустимо использование как чистых изомеров, так и их смесей. В
случае если гербициды-ингибиторы ППО и/или гербицидные соединения В в
соответствии с определением, приведенным в настоящем документе, имеют один
или несколько хиральных центров и, как следствие, присутствуют в виде
энантиомеров или диастереоизомеров, в композициях по изобретению допустимо
использование как чистых энантиомеров и диастереоизомеров, так и их смесей.
Если гербициды-ингибиторы ППО А и/или гербицидные соединения В согласно
описанию в настоящем документе имеют в своем составе ионизируемые
функциональные группы, то они также могут применяться в виде своих солей,
которые приемлемы для сельскохозяйственных целей. В целом здесь подходят
соли тех катионов и кислотно-аддитивные соли тех кислот, чьи катионы и
соответственно анионы не оказывают негативного влияния на активность
активных соединений. Предпочтительными катионами являются ионы щелочных
металлов, предпочтительно лития, натрия и калия, щёлочноземельных металлов,
предпочтительно кальция и магния, а также переходных металлов,
предпочтительно марганца, меди, цинка и железа, более предпочтительно
аммоний и замещенный аммоний, в которых от одного до четырех атомов
водорода замещены на СгС^-алкил, гидрокси-СгС^-алкил, СгС^-алкокси-СгСф-
алкил, гидрокси-СгС-ф-алкокси-СгС-ф-алкил, фенил или бензил, предпочтительно
аммоний, метиламмоний, изопропиламмоний, диметиламмоний,
диизопропиламмоний, триметиламмоний, гептиламмоний, додециламмоний,
тетрадециламмоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний,
тетрабутиламмоний, 2-гидроксиламмоний (оламиновая соль), 2-(2-гидроксиэт-1
окси)эт-1-ил аммоний(д игл икол аминов ая соль), ди(2-гидроксиэт- 1-ил)аммоний (диоламиновая соль), трис(2-гидроксиэтил)аммоний (троламиновая соль), трис(2-гидроксипропил)аммоний, бензилтриметиламмоний, ензилтриэтиламмоний, N,N,N-TpHMerajiOHaMMOHmi (холиновая соль), более предпочтительно ионы фосфония, ионы сульфония, предпочтительно три(С1-С4-алкил)сульфониум, такой как три(С1-С4-алкил)сульфоксониум, и наконец соли многоосновных аминов, таких как г> Г,гЧ-бис-(3-аминопропил)метиламин и диэтилентриамин. Анионы пригодных солей присоединения кислоты включают, в основном, хлорид, бромид, фторид, йодид, гидрогенсульфат, метилсульфат, сульфат, дигидрогенфосфат, гидрогенфосфат, нитрат, бикарбонат, карбонат, гексафторсиликат, гексафторфосфат, бензоат, а также анионы СгС^-алкановых кислот, предпочтительно, формат, ацетат, пропионат и бутират.
Гербициды-ингибиторы 11110 типа А и/или гербицидные соединения типа В согласно описанию в настоящем документе, в составе которых имеется карбоксильная группа, могут применяться в виде кислоты, в виде подходящей для сельскохозяйственных целей соли, как указано выше, или в виде приемлемого с сельскохозяйственной точки зрения производного соединения, например, в виде амидов, таких как моно- и ди-СгСб-алкиламиды или ариламиды, такие как сложные эфиры, например, как сложные эфиры аллилового спирта, пропаргиловые эфиры, Ci-Сю-алкилэфиры, алкоксиэфиры, тефурил((тетра-гидрофуран-2-ил)метил) эфиры, а также тиоэфиры, как например Ci-Сю-алкилтиоэфиры. Предпочтительно моно- и ди-СгСб-алкиламиды представлены метил и диметиламидами. Предпочтительно ариламиды представлены, например, анилидами и 2-хлоранилидами. Предпочтительными алкилэфирами являются, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил, мексил (1-метилгексил), мептил (1-метилгептил), гептил, октил или изооктил (2-этилгексил) эфиры. Предпочтительными СгСф-алкокси-СгС^-алкил эфирами являются неразветвленные или разветвленные СгС^-алкокси этилэфиры, например, 2-метоксиэтил, 2-этоксиэтил, 2-бутоксиэтил (бутотил), 2-бутоксипропил или 3-бутоксипропилэфир. Примером неразветвленного или разветвленного Ci-Сю-алкилтиоэфира является этилтоиэфир.
В качестве примеров гербицидов-ингибиторов 11110, которые могут использоваться по настоящему изобретению, можно привести ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, аклонифен, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бифенокс, бутафенацил, карфентразон, карфентразон-этил, хлометоксифен, цинидон-этил, флуазолат, флуфенпир, флуфенпир-этил, флумиклорац, флумиклорац-пентил, флумиоксазин, флуорогликофен, флуорогликофен-этил, флутиацет, флутиацет-метил, фомесафен, галосафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, профлуазол, пираклонил, пирафлуфен, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сулфентразон, тидиазимин, тиафенацил, хлорнитрофен, флумипропин, фторнитрофен, флупропацил, фурилоксифен, нитрофлирен, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 35329231-6; S-3100), К-этил-3-2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9), гЧ-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 915396-43-9), К-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7), г\|-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 45210003-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион (CAS 451484-50-7), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион (CAS 1300118-96-0), 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион, метил (Е)-4-[2-хлоро-5-[4-хлоро-5-(дифторметокси)-1Я-метил-пиразол-3-ил]-4-фтор-фенокси]-3-метокси-бут-2-еноат [CAS 948893-00-3/, 3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4), и
где
R30 и R31 независимо друг от друга представляют собой F, С1 или CN;
R32 представляет собой О или S;
R33 представляет собой Н, F, О, СН3 или ОСН3;
R34 представляет собой СН или N;
R представляет собой О или S;
R36 представляет собой Н, CN, СН3, CF3, ОСН3, ОС2Н5, SCH3, SC2H5, (СО)ОС2Н5 или CH2R38,
где R38 представляет собой F, CI, ОСН3, SCH3, SC2H5, CH2F, CH2Br или CH2OH;
R37 представляет собой (С1-Сб-алкил)амино, (С1-Сб-диалкил)амино, (NH)OR39, ОН, OR40 или SR40
где R39 представляет собой СН3, C2Hs или фенил; а также
R40 представляет собой независимо друг от друга Ci-Сб-алкил, С2-Сб-алкенил, С3-Сб-алкинил, Ci-Сб-галоалкил, Ci-Сб-алкокси-С 1 -Сб-алкил, С i -Сб-алкокси-С i -Сб-алкокси-С i -Сб-алкил, С2-Сб-цианоалкил, С i -С^-алкокси-карбонил-С i -С4-алкилС i -С4-алкил-карбонил-амино, Сi-Сб-алкилсульфинил-Ci-Сб-алкил, Ci-Сб-алкил-сульфонил-Ci-Сб-алкил, СгСб-диалкокси-СгСб-алкил, С1 -Сб-алкил-карбонилокси-Сi-Сб-алкил, фенил-карбонил-Сi-Сб-алкил, три(С1-С3-алкил)-силил-С1-Сб-алкил, три(С1-С3-алкил)-силил-С 1 -Сб-алкенил, три(С i -С3-алкил)-силил-С i -Сб-алкинил, три(С 1 -С3-алкил)-силил-С 1 -Сб-алкокси-С i-Сб-алкил, диметиламино, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил-СгСз-алкил, фенил-СгСб-алкокси-СгСб-алкил, фенил-СгСз-алкил, пиридил-СгСз-алкил, пиридил, фенил,
при этом данные пиридилы и фенилы независимо друг от
друга замещаются заместителями в количестве от одного
до пяти, выбранными из группы, состоящей из галогена,
Ci-Сз-алкила или СгСг-галоалкила;
Сз-Сб-циклоалкила или Сз-Сб-циклоалкила-С1-С4-алкила, при этом данные циклоалкилы независимо друг от друга не замещены или замещены заместителями в количестве от одного до пяти, выбранными из группы, состоящей из галогена, Ci-Сз-алкила и С1 -Сг-галоалкила;
включая их агрономически приемлемые соли щелочных металлов или амониевые соли.
Далее приведены предпочтительные гербициды-ингибиторы 11110, которые могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением:
ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бутафенацил, карфентразон-этил, цинидон-этил, флуфенпир-этил, флумиклорац-пентил, флумиоксазин, флуорогликофен-этил, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пир ид илокси] ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), г\|-этил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9), К-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 915396-43-9), г\|-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7), К-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452100-03-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион (CAS 451484-50-7), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион (CAS 1300118-96-0);1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 1304113-05-0), 3-[7
урацилы формулы III. 1 (соответствующие урацилам формулы III, где R30
31 32 33
представляет собой F, R представляет собой CI, R представляет собой О; R представляет собой Н; R34 представляет собой СН; R35 представляет собой О, и R представляет собой OR40)
N1.1,
где
R36 представляет собой ОСН3, ОС2Н5, SCH3 или SC2H5; и
R40 представляет собой Ci-Сб-алкил, Сг-Сб-алкенил, Сз-Сб-алкинил, Ci-Сб-галоалкил, Сi-Сб-алкокси-Сi-Сб-алкил, Сi-Сб-алкокси-Сi-Сб-алкокси-Ci-Сб-алкил, Ci-Сз-цианоалкил, фенил-СгСз-алкил, пиридил-СгСз-алкил, Сз-Сб-циклоалкил или Сз-Сб-циклоалкил-С1-С4-алкил,
при этом данные циклоалкилы не замещены или замещены заместителями в количестве от одного до пяти, выбранными из группы, состоящей из галогена, Ci-Сз-алкила и СгСг-галоалкила;
урацилы формулы III.2 (соответствующие урацилам формулы III, где R30
31 32 33
представляет собой F; R представляет собой CI; R представляет собой О; R
34 35 37
представляет собой Н; R представляет собой N; R представляет собой О, и R представляет собой OR40, где R40 представляет собой С i-Сб-алкил)
Далее приведены особенно предпочтительные гербициды-ингибиторы ППО, которые могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением:
ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, карфентразон-этил, цинидон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[ 1,4]оксазин-6-ил] -1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион (CAS 451484-50-7), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), и 2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион (CAS 1300118-96-0), 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 1304113-05-0),
урацилы формулы III. 1.1 (соответствующие урацилам формулы III, где R30
31 32 33
представляет собой F, R представляет собой CI, R представляет собой О; R
34 35 36
представляет собой Н; R представляет собой СН; R представляет собой О, R представляет собой ОСНз, и R представляет собой OR40)
III.1.1,
где
R40 представляет собой Ci-Сб-алкил, Сг-Сб-алкенил, Сз-Сб-алкинил, Ci-Сб-галоалкил, Сi-Сб-алкокси-Сi-Сб-алкил, Сi-Сб-алкокси-Сi-Сб-алкокси-Ci-Сб-алкил, Ci-Сз-цианоалкил, фенил-СгСз-алкил, пиридил-СгСз-алкил, Сз-Сб-циклоалкил или Сз-Сб-циклоалкил-СгС^-алкил,
при этом данные циклоалкилы не замещены или замещены заместителями в количестве от одного до пяти, выбранными из группы, состоящей из галогена, Ci-Сз-алкила и СгСг-галоалкила;
урацилы формулы III.2.1 (соответствующие урацилам формулы III, где RJ°
31 32 33
представляет собой F; R представляет собой CI; R представляет собой О; R
34 35 37
представляет собой Н; R представляет собой N; R представляет собой О и R представляет собой OR40, и R40 представляет собой СН3)
урацилы формулы III.2.2 (соответствующие урацилам формулы III, где R30 представляет собой F; Rjl представляет собой CI; R2 представляет собой О; R3 представляет собой Н; R4 представляет собой N; R5 представляет собой О и R7 представляет собой OR40, и R40 представляет собой С2Н5)
Особенно предпочтительными гербицидами-ингибиторами 11110 являются гербициды-ингибиторы 11110 с 1 по А14, которые указаны ниже в таблице А:
А.7
фомесафен
А.8
лактофен
А.9
оксадиаргил
АЛО
оксифлуорфен
АЛ 1
сафлуфенацил
АЛ2
сулфентразон
АЛЗ
этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6)
АЛ4
1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4)
Гербициды-ингибиторы 11110 настоящего изобретения согласно описанию выше обычно лучше всего используются в сочетании с одним или несколькими другими гербицидами для борьбы с большим количеством видов нежелательной растительности. Например, гербициды-ингибиторы ППО могут также использоваться в соединении с дополнительными гербицидами, к которым злаковая культура обычно устойчива или стойка в результате экспрессии одного или более дополнительных трансгенов, например, тех, которые более подробно описаны выше, или к которым она устойчива посредством мутагенеза и выведения биологическими методами согласно описанию в далее настоящем документе.
При использовании в сочетании с другими целевыми гербицидами, гербициды-ингибиторы ППО, к которым у растения по настоящему изобретению была выработана стойкость или устойчивость, могут быть использованы в одной препаративной форме с другим гербицидом или гербицидами, смешаны в емкости с другим гербицидом или гербицидами или использованы последовательно с другим гербицидом или гербицидами.
В) гербициды класса Ы) - Ь15):
Ы) ингибиторы биосинтеза липидов;
Ь2) ингибиторы ацетолактат синтазы (ингибиторы ALS);
ЬЗ) ингибиторы фотосинтеза;
Ь4) ингибиторы протопорфириноген-IX оксидазы,
Ь5) отбеливающие гербициды;
Ь6) ингибиторы энолпирувилшикимат 3-фосфат-синтазы (ингибиторы EPSP);
Ь7) ингибиторы глутаминсинтетазы;
Ь8) ингибиторы 7,8-дигидроптероатсинтазы (ингибиторы DHP); Ь9) ингибиторы митоза;
ЫО) ингибиторы синтеза очень длинноцепочных жирных кислот (VLCFA
ингибиторы); Ы1) ингибиторы биосинтеза целлюлозы; Ь12) разобщающие гербициды; ЫЗ) ауксиновые гербициды; Ь14) ингибиторы транспорта ауксинов; и
Ь15) другие гербициды, выбранные из группы, включающей бромобутид, хлорфлуренол, хлорфлуренол-метил, цинметилин, кумилурон, далапон, дазомет, дифензокват, дифензокват-метилсульфат, диметипин, DSMA (ДНАМ, двунатриевый арсенат метила), димрон, эндотал и его соли, этобензанид, флампроп, флампроп-изопропил, флампроп-метил, флампроп-М-изопропил, флампроп-М-метил, флуренол, флуренол-бутил, флурпримидол, фосамин, фосамин-аммоний, инданофан, индазифлам, гидразид малеиновой кислоты, мефлуидид, метам, метиозолин (С AS 403640-27-7) метилазид, метилбромид, метил-димрон, метилйодид, MSMA (ММНА), олеиновую кислоту, оксазикломефон, пеларгоновую кислоту, пирибутикарб, хинокламин, триазифлам, тридифан и 6-хлор-3-(2-циклопропил-6-метилфенокси)-4-пиридазинол (CAS 499223-49-3) и его соли и эфиры;
Ы) из группы ингибиторов биосинтеза липидов:
АСС-гербициды, такие как аллоксидим, аллоксидим-натрий, бутроксидим, клетодим, клодинафоп, клодинафоп-пропаргил, циклоксидим, цигалофоп, цигалофоп-бутил, диклофоп, диклофоп-метил, феноксапроп, феноксапроп-этил, феноксапроп-Р, феноксапроп-Р-этил, флуазифоп, флуазифоп-бутил, флуазифоп-Р, флуазифоп-Р-бутил, галоксифоп, галоксифоп-метил, галоксифоп-Р, галоксифоп-Р-метил, метамифоп, пиноксаден, профоксидим, пропаквизафоп, квизалофоп, квизалофоп-этил, квизалофоп-тефурил, квизалофоп-Р, квизалофоп-Р-этил, квизалофоп-Р-тефурил, сетоксидим, тепралоксидим и тралкоксидим,
4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-дихлоро-4-циклопропил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3,5(4Н,6Н)-дион (CAS 1312340-84-3); 5-(Ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312337-486); 5-(Ацетилокси)-4-(2',4'-дихлоро-4-циклопропил- [1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он; 5-(Ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312340-82-1); 5-(Ацетилокси)-4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-Дихлоро -4-циклопропил- [1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты; 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метиловый эфир карбоновой кислоты (CAS 1033760-58-5); и не-АСС гербициды такие как
Ь2) из группы ингибиторов ALS:
Сульфонилмочевины, такие как амидосульфурон, азимсульфурон, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, хлоримурон, хлоримурон-этил, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этаметсульфурон-метил, этоксисульфурон, флазасульфурон, флуцетосульфурон, флупирсульфурон, флупирсульфурон-метил-натрий, форамсульфурон, галосульфурон, галосульфурон-метил, имазосульфурон, иодосульфурон, иодосульфурон-метил-натрий, мезосульфурон, метазосульфурон, метсульфурон, метсульфурон-метил, никосульфурон, ортосульфамурон, оксасульфурон, примисульфурон, примисульфурон-метил, пропирисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон, пиразосульфурон-этил, римсульфурон, сульфометурон, сульфометурон-метил, сульфосульфурон, тифенсульфурон, тифенсульфурон-метил, триасульфурон, трибенурон, трибенурон-метил, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон, трифлусульфурон-метил и тритосульфурон,
имидазолиноны, такие как имазаметабенз, имазаметабенз-метил, имазамокс, имазапик, имазапир, имазахин и имазетапир, гербициды группы триазолопиримидина и сульфонанилиды, такие как хлорансулам, хлорансулам-метил, диклосулам, флуметсулам, флорасулам, метосулам, пеноксулам, пиримисульфан и пироксулам,
пиримидинилбензоаты, такие как биспирибак, биспирибак-натрий, пирибензоксим, пирифталид, пириминобак, пириминобак-метил, пиритиобак, пиритиобак-натрий, 4- [ [ [2- [(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси] фенил] метил] -амино]-бензойная кислота-1-метилэтилэфир (CAS 420138-41-6), 4-[[[2-[(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси]фенил]метил]амино]-пропилэфир бензойной кислоты (CAS 420138-40-5), г\Г-(4-бромфенил)-2-[(4,6-диметокси-2-пиримидинил)окси]бензолметанамин (CAS 420138-01-8),
гербициды группы сульфониламинокарбонил-триазолинона, такие как флукарбазон, флукарбазон-натрий, пропоксикарбазон, пропоксикарбазон-натрий, тиенкарбазон и тиенкарбазон-метил; а также триафамон;
в том числе, предпочтительный вариант осуществления изобретения
относится к таким композициям, содержащим, по меньшей мере, один гербицид из группы имидазолинонов;
ЬЗ) из группы ингибиторов фотосинтеза:
амикарбазон, ингибиторы фотосистемы II, например, гербициды группы триазинов, включая хлортриазин, триазиноны, триазиндионы, метилтиотриазины и пиридазиноны, такие как аметрин, атразин, хлоридазон, цианазин, десметрин, диметаметрин, гексазинон, метрибузин, прометон, прометрин, пропазин, симазин, симетрин, тербуметон, тербутилазин, тербутрин и триэтазин, арилмочевины, такие как хлорбромурон, хлортолурон, хлорксурон, димефурон, диурон, флуометурон, изопротурон, изоурон, линурон, метамитрон, метабензтиазурон, метобензурон, метоксурон, монолинурон, небурон, сидурон, тебутиурон и тиадиазурон, фенилкарбаматы, такие как десмедифам, карбутилат, фенмедифам, фенмедифам-этил, нитриловые гербициды, такие как бромфеноксим, бромоксинил и его соли и сложные эфиры, иоксинил и его соли и сложные эфиры, урацилы, такие как бромацил, ленацил и тербацил, и бентазон и бентазон-натрий, пиридат, пиридафол, пентанохлор и пропанил и ингибиторы фотосистемы I такие как дикват, дикват-дибромид, паракват, паракват-дихлорид и паракват-диметилсульфат. В том числе, предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к таким композициям, содержащим, по меньшей мере, один гербицид, производное арилмочевины; В том числе, таким же образом, предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к таким композициям, содержащим, по меньшей мере, один гербицид группы триазинов; В том числе, таким же образом, предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к таким композициям, содержащим, по меньшей мере, один гербицид группы нитрилов;
Ь4) из группы ингибиторов протопорфириноген-IX оксидазы: ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бифенокс, бутафенацил, карфентразон, карфентразон-этил, хлометоксифен, цинидон-этил, флуазолат, флуфенпир, флуфенпир-этил, флумиклорац, флумиклорац-пентил, флумиоксазин, флуорогликофен, флуорогликофен-этил, флутиацет, флутиацет-метил, фомесафен, галосафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, профлуазол,
пираклонил, пирафлуфен, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сулфентразон, тидиазимин, тиафенацил, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-
2.4- диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100, гЧ-этил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9), N-тетрагидрофурфурил-З-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил- 1Я-пиразол-1-карбоксамид (СAS 915396-43-9), К-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7), г\|-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 45210003-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-
1.4- диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион, 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 1304113-05-0), метил (?)-4-[2-хлоро-5-[4-хлоро-5-(дифторметокси)-1Я-метил-ругаго1-3-ил]-4-фтор-фенокси]-З-метокси-бут-2-еноат [CAS 948893-00-37, and 3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)- Ш-бензимидазол-4-ил]- 1-метил-6-(трифторметил)- Ш-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4);
Ь5) из группы отбеливающих гербицидов:
ингибиторы фитоен десатуразы (PDS): бефлубутамид, дифлуфеникан, флуридон, фторхлоридон, флуртамон, норфлуразон, пиколинафен и 4-(3-трифторметилфенокси)-2-(4-трифторметилфенил)пиримидин (CAS 180608-33-7), ингибиторы HPPD: бензобициклон, бензофенап, кломазон, изоксафлутол, мезотрион, пирасульфотол, пиразолинат, пиразоксифен, сулькотрион, тефурилтрион, темботрион, топрамезони бициклопирон, гербицид-отбеливатель, целевой фермент неизвестен: аклонифен, амитрол, и флуметурон;
Ь6) из группы ингибиторов EPSP синтазы:
глифосат, глифосат-изопропиламмоний, глифосат-калий и Глифосат-тримесиум (сульфосат);
Ь8) из группы ингибиторов DHP синтазы: асулам;
Ь9) из группы ингибиторов митоза:
соединения группы К1: динитроанилины, такие как бенфлуралин, бутралин, динитрамин, эталфлуралин, флухлоралин, оризалин, пендиметалин, продиамин и трифлуралин, фосфорамидаты, такие как амипрофос, амипрофос-метил и бутамифос, гербициды, производные бензойной кислоты, такие как хлортал, хлортал-диметил, пиридины, такие как дитиопир и тиазопир, бензамиды, такие как пропизамид и тебутам; соединения группы К2: хлорпрофам, профам и карбетамид, в том числе, соединения группы К1, в частности, динитроанилины являются предпочтительными;
ЫО) из группы ингибиторов синтеза очень длинноцепочных жирных кислот (VLCFA ингибиторов):
хлорацетамиды, такие как ацетохлор, алахлор, бутахлор, диметахлор, диметенамид, диметенамид-Р, метазахлор, метолахлор, метолахлор-S, пентоксамид, претилахлор, пропахлор, пропизохлор и тенихлор, оксиацетанилиды, такие как флуфенацет и мефенацет, ацетанилиды, такие как дифенамид, напроанилид и напроамид, тетразолины, такие как фентразамид и другие гербициды, такие как анилофос, кафенстрол, феноксасульфон, ипфенкарбазон, пиперофос, пироксасульфон соединения по формулам II.1, П.2, П.З, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 и II.9
соединения изоксазолина формулы (1)1 известны специалистам, например, из документов WO 2006/024820, WO 2006/037945, WO 2007/071900 и WO 2007/096576;
среди VLCFA ингибиторов, особенное предпочтение отдается хлорацетамидам и оксиацетамидам;
bll) из группы ингибиторов биосинтеза целлюлозы:
хлортиамид, дихлобелин, флупоксам, идазифлам, триазифлам, изоксабен и 1-циклогексил-5-пентафторфенилокси-14-[1,2,4,6]тиатриазин-3-иламин;
Ь12) из группы разобщающих гербицидов:
диносеб, динотерб и динитро-о-крезол (DNOC) и его соли;
ЫЗ) из группы ауксиновых гербицидов:
2,4-D и его соли и сложные эфиры, такие как клацифос, 2,4-DB и его соли и сложные эфиры, аминоциклопирахлор и его смоли и сложные эфиры, аминопиралид и его соли, такие как аминопиралид-трис(2-гидроксипропил)аммоний и его сложные эфиры, беназолин, беназолин-этил,
хлорамбен и его соли и сложные эфиры, кломепроп, клопиралид и его соли и сложные эфиры, дикамба и его соли и сложные эфиры, дихлорпроп и его соли и сложные эфиры, дихлорпроп-Р и его соли и сложные эфиры, флуроксипир, флуроксипир-бутометил, флуроксипир-мептил, галауксифен и его соли и сложные эфиры (CAS 943832-60-8); МСРА (2-метил-4-хлорфеноксиуксусная кислота) и ее соли и сложные эфиры, МСРА-тиоэтил, МСРВ (2-метил-4-хлорфенокси-изобутановая кислота) и ее соли и сложные эфиры, мекопрок и его соли и сложные эфиры, мекопрок-Р и его соли и сложные эфиры, пиклорам и его соли и сложные эфиры, квинклорак, квинмерак, трибутиламин (ТБА) (2,3,6) и его соли и сложные эфиры, триклопир и его соли и сложные эфиры;
Ь14) из группы ингибиторов транспорта ауксинов: дифлуфензопир, дифлуфензопир-натрий, напталам и напталам-натрий;
Ь15) из группы других гербицидов: бромобутид, хлорфлуренол, хлорфлуренол-метил, цинметилин, кумилурон, циклопириморат (CAS 499223-493) и его соли и сложные эфиры далапон, дазомет, дифензокват, дифензокват-метилсульфат, диметипин, DSMA (ДНАМ, двунатриевый арсенат метила), димрон, эндотал и его соли, этобензанид, флампроп, флампроп-изопропил, флампроп-метил, флампроп-М-изопропил, флампроп-М-метил, флуренол, флуренол-бутил, флурпримидол, фосамин, фосамин-аммоний, инданофан, индазифлам, гидразид малеиновой кислоты, мефлуидид, метам, метиозолин (CAS 403640-27-7) метилазид, метилбромид, метил-димрон, метилйодид, MSMA (ММНА), олеиновую кислоту, оксазикломефон, пеларгоновую кислоту, пирибутикарб, хинокламин, триазифлам, тридифан.
Далее приведены предпочтительные гербициды В, которые могут использоваться в сочетании с гербицидами-ингибиторами 11110 в соответствии с настоящим изобретением:
Ы) из группы ингибиторов биосинтеза липидов:
клетодим, клодинафоп-пропаргил, циклоксидим, цихалофоп-бутил, диклофоп-метил, феноксапроп-Р-этил, флуазифоп-Р-бутил, галоксифоп-Р-метил, метамифоп, пиноксаден, профоксидим, пропаквизафоп, квизалофоп-Р-этил, квизалофоп-P-ntaehbk, сетоксидим, тепралоксидим, тралкоксидим, 4-(4'-хлоро-4
циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-дихлоро-4-циклопропил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 131233745-3); 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3,5(4Н,6Н)-дион (CAS 1312340-843); 5-(Ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312337-48-6); 5-(Ацетилокси)-4-(2\А'-дихлоро-4-цикло пропил- [1,1 '-бифенил] -3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он; 5-(Ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312340-821); 5-(Ацетилокси)-4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метиловый эфир карбоновой кислоты (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-Дихлоро -4-циклопропил-[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метиловый эфир карбоновой кислоты; 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фтор[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метиловый эфир карбоновой кислоты (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1033760-58-5); бенфурезат, димепиперат, ЕРТС, эспрокарб, этофумезат, молинат, орбенкарб, просульфокарб, тиобенкарб и триаллат;
Ь2) из группы ингибиторов ALS:
амидосульфурон, азимсульфурон, бенсульфурон-метил, биспирибак-
натрий, хлоримурон-этил, хлорсульфурон, клорансулам-метил,
циклосульфамурон, диклосулам, этаметсульфурон-метил, этоксисульфурон, флазасульфурон, флорасулам, флукарбазон-натрий, флуцетосульфурон, флуметсулам, флупирсульфурон-метил-натрий, форамсульфурон, галосульфурон-метил, имазаметабенз-метил, имазамокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир, имазосульфурон, иодосульфурон, иодосульфурон-метил-натрий, месосульфурон, метосулам, метсульфурон-метил, никосульфурон, ортосульфамурон, оксасульфурон, пенокссулам, примисульфурон-метил,
пропоксикарбазон-натрий, пропирисульфорон, просульфурон, пиразосульфурон-этил, пирибензоксим, пиримисульфан, пирифталид, пириминобак-метил, пиритиобак-натрий, пирокссулам, римсульфурон, сульфаметурон-метил, сульфосульфурон, тиенкарбазон-метил, тифенсульфурон-метил, триасульфурон, трибенурон-метил, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон-метил и тритосульфурон и триафамон;
ЬЗ) из группы ингибиторов фотосинтеза:
аметрин, амикарбазон, атразин, бентазон, бентазон-натрий, бромоксинил и его соли и сложные эфиры, хлоридазон, хлоротолурон, цианазин, десмедифам, дикват-дибромид, диурон, флуометурон, гексазинон, иоксинил и его соли и сложные эфиры, изопротурон, ленацил, линурон, метамитрон, метабензтиазурон, метрибузин, паракват, паракват-дихлорид, фенмедифам, пропанил, пиридат, симазин, тебутиурон, тербутилазин и тидиазурон;
Ь4) из группы ингибиторов протопорфириноген-IX оксидазы: ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бутафенацил, карфентразон-этил, цинидон-этил, флуфенпир-этил, флумиклорац-пентил, флумиоксазин, флуорогликофен-этил, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокс и] ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), г\|-этил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9), К-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 915396-43-9), г\|-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил- 1Я-пиразол-1 -карбоксамид (С AS 452099-05-7), К-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452100-03-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион; 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-
Ь5) из группы отбеливающих гербицидов:
аклонифен, бефлубутамид, бензобициклон, кломазон, дифлуфеникан, флурохлоридин, флуртамон, изоксафлутол, мезотрион, норфлуразон, пиколинафен, пирасульфотол, пиразолинат, сулкотрион, тефурилтрион, темботрион, топрамезон, бициклопирон, 4-(3-трифторметилфенокси)-2-(4-трифторметилфенил)пиримидин (CAS 180608-33-7), амитрол и флуметурон;
Ь6) из группы ингибиторов EPSP синтазы:
глифосат, глифосат-изопропиламмоний, глифосат-калий и Глифосат-тримесиум (сульфосат);
Ь7) из группы ингибиторов глутамин-синтазы: глюфосинат, глюфосинат-Р, глюфосинат-аммоний;
Ь8) из группы ингибиторов DHP синтазы: асулам;
Ь9) из группы ингибиторов митоза:
бенфуралин, дитиопир, эталфлуразин, оризалин, пендиметалин, тиазопир и трифлуралин;
ЫО) из группы ингибиторов синтеза очень длинноцепочных жирных кислот (VLCFA ингибиторов):
соединения веществ ацетохлор, алахлор, анилофос, бутахлор, кафенстрол, диметенамид, диметенамид-Р, фентразамид, флуфенацет, мефенацет, метазахлор, метолахлор, S-метолахлор, напроанилид, напропамид, претилахлор, феноксасульфон, ипфенкарбазон, пироксасульфон тенихлор и изоксазолин по формулам II. 1,11.2,11.3,11.4,11.5,11.6, П.7, П.8 и П.9, как указано выше;
bll) из группы ингибиторов биосинтеза целлюлозы: дихлобенил, флупоксам, изоксабен и 1-циклогексил-5-пентафторфенилокси-14-[ 1,2,4,6]тиатриазин-3 -иламин;
ЫЗ) из группы ауксиновых гербицидов:
2,4-D и его соли и сложные эфиры, такие как клацифос, аминоциклопирахлор и его соли и сложные эфиры, аминопиралид и его соли, такие как аминопиралид-трис(2-гидроксипропил)аммоний и его сложные эфиры, клопиралид и его соли и сложные эфиры, дикамба и его соли и сложные эфиры, дихлорпроп-Р и его соли и сложные эфиры, флуроксипир-метил, галауксифен и его соли и сложные эфиры (CAS 943832-60-8); МСРА и ее соли и сложные эфиры, МСРА-тиоэтил, мекопроп-Р и его соли и сложные эфиры, пиклорам и его соли и сложные эфиры, квинклорак, квинмерак и триклопир и его соли и сложные эфиры;
Ь14) из группы ингибиторов транспорта ауксинов: дифлуфензопир, дифлуфензопир-натрий;
Ь15) из группы других гербицидов: бромобутид, цинметилин, кумилурон, циклопириморат (CAS 499223-49-3) и его соли и сложные эфиры далапон, дифензокват, дифензокват-метилсульфат, DSMA (ДНАМ, двунатриевый арсенат метила), димрон (= даимурон), флампроп, флампроп-изопропил, флампроп-метил, флампроп-М-изопропил, флампроп-М-метил, инданофан, индазифлам, метам, метилбромид, MSMA (ММНА), оксазикломефон, пирибутикарб, хинокламин, триазифлам и тридифан.
В частности, далее приведены предпочтительные гербициды В, которые могут использоваться в сочетании с гербицидами-ингибиторами 11110 в соответствии с настоящим изобретением:
Ы) из группы ингибиторов биосинтеза липида: клодинафоп-пропаргил, циклоксидим, цигалофоп-бутил, феноксапроп-Р-этил, пиноксаден, профоксидим, тепралоксидим, тралкоксидим, 4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-дихлоро-4-циклопропил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-5-гидрокси-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3(6Н)-он (CAS 103375793-5); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3,5(4Н,6Н)-дион (CAS 1312340-84-3); 5-(ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-циклопропил
2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312337-48-6); 5-(ацетилокси)-4-(2',4"-дихлоро-4-циклопропил- [1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он; 5-(ацетилокси)-4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1312340-82-1); 5-(ацетилокси)-4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-3,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-2Н-пиран-3-он (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-хлоро-4-циклопропил-2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-дихлоро-4-циклопропил-[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты; 4-(4'-хлоро-4-этил-2'-фторо[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-дихлоро-4-этил[1,Г-бифенил]-3-ил)-5,6-дигидро-2,2,6,6-тетраметил-5-оксо-2Н-пиран-3-ил метилэфир угольной кислоты (CAS 1033760-58-5); эспрокарб, просульфокарб, тиобенкарб, и триаллат;
Ь2) из группы ингибиторов ALS: бенфульфурон-метил, биспирибак-натрий, циклосульфамурон, диклосулам, флуметсулам, флупирсульфорон-метил-натрий, форамсульфорон, имазомокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир, имазосульфорон, йодосульфорон, йодосульфорон-метил-натрий, иофенсульфорон, иофенсульфорон-натрий, мезосульфорон, метасульфорон, никосульфорон, пеноксулам, пропоксикарбазон-натрий, пропирисульфорон, пиразосульфорон-этил, пирокссулам, римсульфорон, сульфосульфорон, тиенкарбазон-метил, тритосульфорон и трифамон;
ЬЗ) из группы ингибиторов фотосинтеза: аметрин, атразин, диурон, флуометурон, гексазинон, изопротурон, линурон, метрибузин, паракват, паракват-дихлорид, пропанил, тербутрин и тербутилазин;
Ь4) из группы ингибиторов протопорфириноген-IX оксидазы: ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З - ил)фенокси] -2-пиридилокс и] ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-
инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[ 1,4]оксазин-6-ил] -1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), and 2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион, и 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион;
Ь5) из группы отбеливающих гербицидов: кломазон, дифлуденикан, флурохлоридон, изоксафлутол, мезотрион, пиколинафен, сулкотрион, тефурилтрион, темботрион, топрамезон, бициклопирон, амитрол и флуметрон;
Ь6) из группы ингибиторов EPSP синтазы: глифосат, глифосат-изопропиламмоний и глифосат-тримезиум (сульфосат);
Ь7) из группы ингибиторов глутамин-синтазы: глюфосинат, глюфосинат-Р и глюфосинат-аммоний;
Ь9) из группы ингибиторов митоза: пендиметалин и трифлуралин;
ЫО) из группы ингибиторов VLCFA: соединения веществ ацетохлор, кафенстрол, диметенамид-Р, фентразамид, флуфенацет, мефенацет, метазахлор, метолахлор, S-метолахлор, феноксасульфон, ипфенкарбазон и пироксасульфон; аналогичным образом предпочтение отдается соединениям изоксазолина по формулам II. 1,11.2,11.3,11.4,11.5,11.6, П.7, П.8 и П.9, как указано выше;
bll) из группы ингибиторов биосинтеза целлюлозы: изоксабен;
ЫЗ) из группы ауксиновых гербицидов: 2,4-D и его соли и сложные эфиры, такие как клацифос, и аминоциклопирахлор и его соли и сложные эфиры, аминопиралид и его соли и сложные эфиры, клопиралид и его соли и сложные эфиры, дикамба и его соли и сложные эфиры, флуроксипир-мептил, хинклорак и хинмерак;
Более того, гербициды-ингибиторы 11110 можно эффективно использовать в комбинации соединением В согласно описанию выше по тексту, в комбинации с антидотами. Антидоты это химические соединения, предотвращающие или уменьшающие повреждения эффективных растений, при этом не оказывая значительного влияния на гербицидное действие гербицидов на нежелательные растения. Они могут применяться либо перед засевом (например, при обработке семян, побегов или сеянцев) или в предвсходовый или послевсходовый период эффективных растений.
Кроме того, антидоты С, гербициды-ингибиторы ППО и/или гербициды В могут использоваться одновременно или по очереди.
Подходящим антидотам относятся, например, (хинолин-8-окси)уксусные
кислоты, 1-фенил-5-галогеналкил-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоновые кислоты, 1-
фенил-4,5-дигидро-5-алкил-1Н-пиразол-3,5-дикарбоновые кислоты, 4,5-дигидро-
5,5-диарил-З-изоксазол карбоновые кислоты, дихлорацетамиды, альфа-
оксиминофенилацетонитрилы, ацетофеноноксимы, 4,6-дигалоген-2-
фенилпиримидины, К-[[4-(аминокарбонил)фенил]сульфонил]-2-бензойные амиды, 1,8-нафтойный ангидрид, 2-гало-4-(галогеналкил)-5-тиазолкарбоновые кислоты, фосфотиоаты и N-алкил-О-фенилкарбаматы, их агрономически приемлемые соли, а также их агрономически приемлемые производные, такие как амиды, эфиры, тиоэфиры при наличии кислотной группы.
Примерами предпочтительных антидотов С являются беноксакор, клоквинтоцет, циометринил, ципросульфамид, дихлормид, дициклонон, диэтолат, фенхлоразол, фенклорим, флуразол, флуксофеним, фурилазол, изоксадифен, мефенпир, мефенат, нафтойный ангидрид, оксабетринил, 4-(дихлорацетил)-1-окса-4-азаспиро[4.5]декан (MON4660, С AS 71526-07-3) и 2,2,5-триметил-З-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, С AS 52836-31-4).
Особенно предпочтительными антидотами С являются беноксакор, клоквинтоцет, ципросульфамид, дихлормид, фенхлоразол, фенклорим, флуразол, флуксофеним, фурилазол, изоксадифен, мефенпир, нафтойный ангидрид, оксабетринил, 4-(дихлорацетил)-1-окса-4-азаспиро[4.5]декан (MON4660, CAS
Особенно предпочтительными антидотами С являются беноксакор, клоквинтоцет, ципросульфамид, дихлормид, фенхлоразол, фенклорим, фурилазол, изоксадифен, мефенпир, нафтойный ангидрид, 4-(дихлорацетил)-1-окса-4-азаспиро[4.5]декан (MON4660, С AS 71526-07-3) и 2,2,5-триметил-З-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, С AS 52836-31-4).
Также предпочтительными антидотами С являются беноксакор, клоквинтоцет, ципросульфамид, дихлормид, фенхлоразол, фенклорим, фурилазол, изоксадифен, мефенпир, 4-(дихлорацетил)- 1-окса-4-азаспиро[4.5] декан (MON4660, CAS 71526-07-3) и 2,2,5-триметил-3-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, CAS 52836-31-4).
Особенно предпочтительными антидотами С, которые входят в состав композиции по изобретению, в качестве компонента С, являются антидоты С, в соответствии с определением выше; в частности, антидоты С.1 - С. 12, перечень которых приведен ниже в таблице С:
Гербициды-ингибиторы 11110 (соединения типа А) и активные соединения В групп Ы) - Ь15) и активные соединения С являются известными гербицидами и антидотами, см., например, The Compendium of Pesticide Common Names (http://www.alanwood.net/pesticides/); Farm Chemicals Handbook 2000 том 86, Meister Publishing Company, 2000; B. Hock, C. Fedtke, R. R. Schmidt, Herbizide [Herbicides], Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1995; W. H. Ahrens, Herbicide Handbook, 7oe издание, Weed Science Society of America, 1994; и К. К. Hatzios, Herbicide Handbook, Дополнение к 7му изданию, Weed Science Society of America, 1998. 2,2,5-триметил-3-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин [CAS № 52836-31-4] также известен как R-29148. 4-(Дихлорацетил)-1-окса-4-азаспиро[4.5]декан [CAS No. 71526-07-3] также известен как AD-67 и MON 4660.
Передача активных соединений соответствующим механизмам действия основана на современном уровне знаний. При применимости нескольких механизмов действия к одному активному соединению данное вещество передавалось только одному механизму действия.
Активные соединения типа В и С, в составе которых имеется карбоксильная группа, могут применяться в виде кислоты, в виде подходящей для сельскохозяйственных целей соли, как указано выше, или в виде агрономически допустимого производного соединения в композициях по изобретению.
В случае с веществом дикамба, подходящие соли включают те, в которых противоион является агрономически приемлемым катионом. Например, подходящими солями дикамба являются дикамба-натрий, дикамба-калий, дикамба-метиламмоний, дикамба-диметиламмоний, дикамба-изопропиламмоний, дикамба-дигликольамин, дикамба-оламин, дикамба-диоламин, дикамба-троламин, дикамба-^^бис-(3-аминопропил)метиламин и дикамба-диэтилентриамин. Примеры подходящих сложных эфиров включают дикамба-метил и дикамба-бутотил.
Среди подходящих солей 2,4-D следующие: 2,4-0-аммоний, 2,4-D-
диметиламмоний, 2,4-0-диэтиламмоний, 2,4-0-диэтаноламмоний (2,4-D-
диоламин), 2,4-0-тританоламмоний, 2,4-0-изопропиламмоний, 2,4-D-
триизопропиламмоний, 2,4-0-гептиламмоний, 2,4-0-додециламмоний, 2,4-D-
тетрадециламмоний, 2,4-0-триэтиламмоний, 2,4-D-Tpnc(2-
гидроксипропил)аммоний, 2,4-0-трис(изопропил)аммоний, 2,4-0-троламин, 2,4-D-литий, 2,4-О-натрий. Среди примеров подходящих сложных эфиров 2,4-D следующие: 2,4-0-бутотил, 2,4-0-2-бутоксипропил, 2,4-0-3-бутоксипропил, 2,4-D-бутил, 2,4-О-этил, 2,4-0-этилгексил, 2,4-0-изобутил, 2,4-0-изооктил, 2,4-D-изопропил, 2,4-О-мептил, 2,4-О-метил, 2,4-0-октил, 2,4-0-пентил, 2,4-0-пропил, 2,4-О-тефурил и слацифос.
Подходящими солями 2,4-DB являются, например, 2,4-ОВ-натрий, 2,4-DB-калий и 2,4-ОВ-диметил. Подходящими сложными эфирами 2,4-DB являются, например, 2,4-ОВ-бутил и 2,4-ОВ-изоктил.
Подходящими солями дихлорпропа являются, например, дихлорпроп-натрий, дихлорпроп-калий и дихлорпроп-диметиламмоний. Среди примеров подходящих сложных эфиров дихлорпропа можно привести дихлорпроп-бутотил и дихлорпроп-изоктил.
Подходящие соли и сложные эфиры МХФУ включают МХФУ-бутотил, МХФУ-бутил, МХФУ-диметил, МХФУ-диоламин, МХФУ-этил, МХФУ-тиоэтил, МХФУ-2-этилгексил, МХФУ-изобутил, МХФУ-изоктил, МХФУ-изопропил, МХФУ-изопропил, МХФУ-метил, МХФУ-оламин, МХФУ-калий, МХФУ-натрий и МХФУ-троламин.
Подходящей солью МХФБ является МХФБ натрий. Подходящим сложным эфиром МХФБ является МХФБ-этил.
Подходящие соли клопиралида - это клопиралид-калий, клопиралид-оламин and клопиралид-трис-(2-гидроксипропил)аммоний. Среди примеров подходящих сложных эфиров клопиралида можно привести клопиралид-метил.
Примерами подходящего сложного эфира флуроксипира являются флуроксипир-мептил и флуроксипир-2-бутокси-1-метилэтил, при этом предпочтение отдается флуроксипир-мептилу.
Подходящими солями пиклорама являются пиклорам-диметиламмоний,
пиклорам-калий, пиклорам-триизопропаноламмоний, пиклорам-
триизопропиламмоний и пиклорам-троламин. Подходящим сложным эфиром пиклорама является пиклорам-изоктил.
Подходящими солями и сложными эфирами хлорамбена являются хлорамбен-аммоний, хлорамбен-диоламин, хлорамбен-метил, хлорамбен-метиламмоний и хлорамбен-натрий. Подходящие соли и сложные эфиры 2,3,6-ТБА включают 2,3,6-ТБА-диметиламмоний, 2,3,6-ТБА-литий, 2,3,6-ТБА-калий и 2,3,6-ТБ А-натрий.
Подходящие соли и сложные эфиры аминопиралида включают амипиралид-калий и аминопиралид-трис(2-гиброксипропил)аммоний.
Подходящие соли глифосата включают, например, глифосат-аммоний, глифосат-диаммоний, глифосат-диметиламмоний, глифосат-изопропиламмоний, глифосат-калий, глифосат-натрий, глифосат-тримезиум, а также соли этаноламина и диэтаноламина, предпочтительно глифосат-диаммоний, глифосат-изопропиламмоний и глифосат-тримезиум (сульфосат).
Подходящей солью глюфосината является, например, глюфосинат-аммоний.
Подходящей солью глюфосината-Р является, например, глюфосинат-Р-аммоний.
Подходящие соли и сложные эфиры бромоксинила включают, например, бромоксинил-бутират, бромоксинил-гептаноат, бромоксинил-октаноат, бромоксинил-калий и бромоксинил-натрий.
Подходящие соли и сложные эфиры иоксинила включают, например, иоксинил-октаноат, иоксинил-калий и иоксинил-натрий.
Подходящие соли и сложные эфиры мекопропа включают мекопроп-бутотил, мекопроп-диметиламмоний, мекопроп-диоламин, мекопроп-этадил, мекопроп-2-этилгексил, мекопроп-изоктил, мекопроп-метил, мекопроп-калий, мекопроп-натрий и мекопроп-троламин.
Подходящей солью дифлуфензопира является, например, дифлуфензопир-натрий.
Подходящей солью напталама является, например, напталам-натрий.
Подходящие соли и сложные эфиры аминоциклопирахлора включают, например, аминоциклопирахлор-диметиламмоний, аминоциклопирахлор-метил, аминоциклопирахлор-триизопропаноламмоний, аминоциклопирахлор-натрий и аминоциклопирахлор-калий.
Подходящей солью хинклорака является, например, хинклорак-диметиламмоний.
Подходящей солью хинмерака является, например, хинмерак-диметиламмоний.
Подходящей солью имазамокса является, например, имазамокс-аммоний.
Подходящими солями имазапика являются, например, имазапик-аммоний и имазапик -изопропиламмоний.
Подходящими солями имазапира являются, например, имазапир-аммоний и имазапир -изопропиламмоний.
Подходящей солью имазаквина является, например, имазаквин-аммоний.
Подходящими солями имазетапира являются, например, имазетапир-аммоний и имазетапир-изопропиламмоний.
Подходящей солью топрамозона является, например, топрамозон-натрий.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит минимум два, предпочтительно именно два отличных друг от друга гербицида В.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит минимум три, предпочтительно именно три отличных друг от друга гербицида В.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит в качестве компонента А, по меньшей мере, один, предпочтительно точно один ППО-ингибирующий гербицид, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100;, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), и в качестве компонента В, по меньшей мере, один, предпочтительно точно один гербицид В.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит в качестве компонента А, по меньшей мере, один, предпочтительно точно один ППО-ингибирующий гербицид, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6
тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4] -оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), и, по меньшей мере, два, предпочтительно точно два, гербицида В, отличных друг от друга.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит в качестве компонента А, по меньшей мере, один, предпочтительно точно один ППО-ингибирующий гербицид, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]-оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4) и, по меньшей мере, три, предпочтительно точно три, гербицида В, отличных друг от друга.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ПЛО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и, в частности,
точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ы), в частности выбранные из группы, содержащей клетодим, клодинафоп-пропаргил, циклоксидим, цихалофоп-бутил, фенаксопроп-Р-этил, флуазифоп, пиноксаден, профоксидим, квизалофоп, сетоксидим, тепралоксидим, тралкоксидим, эспрокарб, просульфоркб, тиобенкарб и триаллат.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4) особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь2), в частности, выбранное из группы, включающей бенсульфурон-метил, биспирибак-натрий, клорансулам-метил, циклосульфамурон, диклосулам, флуметсулам, флупирсульфорон-метил-натрий, форамсульфорон, налосульфорон-метил, имазамокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир, имазосульфорон, йодосульфорон, йодосульфорон-метил-натрий, мезосульфорон-метил, метасульфорон, никосульфорон, пенокссулам, пропоксикарбазон-натрий, пиразосульфорон-этил, пиритиобак-натрий, пирокссулам, римсульфорон, сульфосульфорон, тиенкарбазон-метил, тифенсульфорон-метил, трифлоксисульфорон и тритосульфурон.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ППО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро
пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы ЬЗ), в частности, выбранное из группы, включающей аметрин, атразин, бентазон, бромоксинил, диурон, флуметурон, гексазинон, изопротурон, линурон, метрибузин, паракват, паракват-дихлорид, прометрин, пропанил, тербутрин и тербутилазин.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3 -оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь4), в частности, выбранное из группы, включающей ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, азафенидин, бенкарбазон, бензфендизон, бифенокс, бутафенацил, карфентразон, карфентразон-этил, хлометоксифен, цинидон-этил, флуазолат, флуфенпир, флуфенпир-этил, флумиклорац, флумиклорац-пентил, флумиоксазин, флуорогликофен, флуорогликофен-этил, флутиацет, флутиацет-метил, фомесафен, галосафен, лактофен, оксадиаргил, оксадиазон, оксифлуорфен, пентоксазон, профлуазол, пираклонил, пирафлуфен, пирафлуфен-этил, сафлуфенацил, сулфентразон, тидиазимин, тиафенацил, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), г\|-этил-3-(2,6
дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 452098-92-9), К-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 915396-43-9), г\|-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7), К-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-1Я-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452100-03-7), 3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион, 1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион, метил (Е)-4-[2-хлоро-5-[4-хлоро-5-(дифторметокси)-1Я-метил-пиразол-3-ил]-4-фтор-фенокси]-3-метокси-бут-2-еноат [CAS 948893-00-37, 3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)- Ш-бензимидазол-4-ил]- 1-метил-6-(трифторметил)- Ш-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4).
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь5), в частности, выбранное из группы, включающей кломазон, дифлуфеникан, флорохлоридин, изоксафлутол, мезотрион, пиколинафен, сулькотрион, тефурилтрион, темботрион, топрамезон, бициклопирон, амитрол и флуметурон.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь6), в частности, выбранное из группы, включающей глифосат, глифосат-изопропиламмоний и глифосат-тримезиум (сульфосат).
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3 -оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь7), в частности, выбранное из группы, включающей глюфосинат, глюфосинат-Р and глюфосинат-аммоний.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ППО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил,
цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4) особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь9), в частности, выбранное из группы, включающей пендиметалин и трифлуралин.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3 -оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы ЫО), в частности, выбранное из группы, включающей ацетохлор, кафенстрол, диметенамид-Р, фентразамид, флуфенацет, мефенацет, метазахлор, метолахлор, S-метолахлор, феноксасульфон и пироксасульфон. Подобным образом предпочтение отдается композициям, содержащим в дополнение к гербицидам-ингибиторам ППО, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-З - ил)фенокси] -2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7
трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4] оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы ЫО), в частности, выбранное из группы, включающей соединения изоксазолина по формулам II. 1, П.2, П.З, П.4, П.5, П.6, П.7, П.8 и П.9 согласно определению выше.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы ЫЗ), в частности, выбранное из группы, включающей 2,4-D и его соли и сложные эфиры, аминоциклопирахлор его соли и сложные эфиры, аминопиралид и его соли, такие как аминопиралид-трис(2-гиброксипропил)аммоний и его соли и сложные эфиры, клопиралид его соли и сложные эфиры, дикамба и его соли и сложные эфиры, флуроксипир-мептил, хинклорак и хинмерак.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро
пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь14), в частности, выбранное из группы, включающей дифлуфензопир и дифлуфензопир-натрий.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция содержит, в дополнение к ГШО-ингибирующему гербициду, предпочтительно ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий, бутафенацил, цинидон-этил, карфентразон-этил, флумиоксазин, флутиацет-метил, фомесафен, лактофен, оксадиаргил, оксифлуорфен, сафлуфенацил, сулфентразон, этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), особенно предпочтительно сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), по меньшей мере, одно и особенно точно одно гербицидно-активное соединение из группы Ь15), в частности, выбранное из группы, включающей димрон (= даимурон), инданофан, индазифлам, оксазикломефон и триазифлам.
Здесь и далее по тексту термин "двухкомпонентные композиции" включает композиции, содержащие одно или несколько, например, 1, 2 или 3 активных соединений гербицида-ингибитора ППО и одного или нескольких, например, 1, 2 или 3 гербицидов В.
В двухкомпонентных композициях, содержащих, по меньшей мере, один гербицид-ингибитор ППО в качестве компонента А или, по меньшей мере, один гербицид В, весовое соотношение активных соединений А:В обычно находится в диапазоне от 1:1000 до 1000:1, предпочтительно в диапазоне от 1:500 до 500:1, особенно в диапазоне от 1:250 до 250:1, и особенно предпочтительно в диапазоне
Особенно предпочтительными гербицидами В являются гербициды В в
соответствии с определением выше; в частности гербициды В.1 - В.229,
указанные ниже в таблице В:
Таблица В:
Гербицид В
B.l
клетодим
B.2
клодинафоп-пропаргил
В.З
циклоксидим
B.4
цихалофоп-бутил
B.5
феноксапроп-этил
B.6
феноксапроп-Р-этил
B.7
флуазифоп
В.8
метамифоп
В.9
пиноксаден
В.10
профоксидим
В.11
квизалофоп
В.12
сетоксидим
В.13
тепралоксидим
В.14
тралкоксидим
В.15
эспрокарб
В.16
этофумезат
В.17
молинат
В.18
просульфокарб
В.19
тиобенкарб
В.20
триаллат
В.21
бенсульфурон-метил
В.22
биспирибак-натрий
В.23
хлорансулам-метил
В.24
хлорсульфурон
В.25
хлоримурон
В.26
циклосульфамурон
В.27
диклосулам
В.28
флорасулам
В.29
флуметсулам
В.ЗО
флупирсульфурон-метил-натрий
В.31
форамсульфурон
Гербицид В
В.32
галосульфурон-метил
В.ЗЗ
имазамокс
В.34
имазамокс-аммоний
В.35
имазапик
В.36
имазапик-аммоний
В.37
имазапик-изопропиламмоний
В.38
имазапир
В.39
имазапир-аммоний
В.40
имазапир-изопропиламмоний
В.41
имазаквин
В.42
имазаквин-аммоний
В.43
имазетапир
В.44
имазапир-аммоний
В.45
имазапир-изопропиламмоний
В.46
имазосульфурон
В.47
йодосульфурон-метил-натрий
В.48
иофенсульфурон
В.49
иофенсульфурон-натрий
В.50
мезосульфурон-метил
В.51
метазосульфурон
В.52
метсульфурон-метил
В.53
метосулам
В.54
никосульфурон
В.55
пеноксулам
В.56
пропоксикарбазон-натрий
В.57
пиразосульфурон-этил
В.58
пирибензоксим
В.59
пирифталид
В.60
пиритиобак-натрий
В.61
пироксулам
В.62
пропирисульфурон
В.63
римсульфурон
Гербицид В
В.64
сульфосульфурон
В.65
тиенкарбазон-метил
В.66
тифенсульфурон-метил
В.67
трибенурон-метил
В.68
трифлоксисульфурон
В.69
тритосульфурон
В.70
триафамон
В.71
аметрин
В.72
атразин
В.73
бентазон
В.74
бромоксинил
В.75
бромоксинил-октаноат
В.76
бромоксинил-гептаноат
В.77
бромоксинил-калий
В.78
диурон
В.79
флуометурон
В.80
гексазинон
В.81
изопротурон
В.82
линурон
В.83
метамитрон
В.84
метрибузин
В.85
прометрин
В.86
пропанил
В.87
симазин
В.88
тербутилазин
В.89
тербутрин
В.90
паракват-дихлорид
В.91
ацифлуорфен
В.92
ацифлуорфен-натрий
В.93
азафенидин
В.94
бенкарбазон
В.95
бензфендизон
Гербицид В
В.96
бифенокс
В.97
бутафенацил
В.98
карфентразон
В.99
карфентразон-этил
В. 100
хлометоксифен
В.101
цинидон-этил
В. 102
флуазолат
В.103
флуфенпир
В. 104
флуфенпир-этил
В.105
флумиклорац
В.106
флумиклорац-пентил
В. 107
флумиоксазин
В.108
флуорогликофен
В.109
флуорогликофен-этил
В.ПО
флутиацет
В.111
флутиацет-метил
В.112
фомесафен
В.113
галосафен
В.114
лактофен
В.115
оксадиаргил
В.116
оксадиазон
В.117
оксифлуорфен
В.118
пентоксазон
В.119
профлуазол
В. 120
пираклонил
В.121
пирафлуфен
В. 122
пирафлуфен-этил
В.123
сафлуфенацил
В. 124
сулфентразон
В.125
тидиазимин
В.126
тиафенацил
Гербицид В
В. 127
этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-
метил-6-трифторметил-2,4-
диоксо-1,2,3,4-
тетрагидропиримидин-3-
ил)фенокси]-2-
пиридилокси]ацетат (CAS
353292-31-6)
В.128
1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4)
В. 129
г\|-этил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 452098-92-9)
В.130
гЧ-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-
трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 915396-43-9)
В.131
г\[-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 452099-05-7)
В.132
г\|-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол-1 -карбоксамид (CAS 452100-03-7)
Гербицид В
В.133
3-[7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-
инил)-3,4-дигидро-2Н-
бензо[1,4]оксазин-6-ил]-1,5-
диметил- 6-тиоксо-
[ 1,3,5]триазинан-2,4-дион
В.134
2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион
В.135
1- метил-6-трифторметил-3-
(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-
2- инил-3,4-дигидро-2Н-
бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-
пиримидин-2,4-дион
В.136
метил (?')-4-[2-хлоро-5-[4-хлоро-5-(дифторметокси)- Ш-метил-pyrazo 1- 3 - ил ] -4- фтор -фенокси]-3-метокси-бут-2-еноат [CAS 948893-00-3]
В.137
3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-Ш-бензимидазол-4-ил] -1 -метил-6-(трифторметил)-Ш-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
В.138
бензобициклон
В.139
кломазон
В.140
дифлуфеникан
В.141
флурохлоридон
В.142
изоксафлютол
В.143
мезотрион
Гербицид В
В.144
норфлуразон
В.145
пиколинафен
В.146
сулькотрион
В.147
тефурилтрион
В.148
темботрион
В.149
топрамезон
В.150
топрамезон-натрий
В.151
бициклопирон
В.152
амитрол
В.153
флуометурон
В.154
глифосат
В.155
глифосат-аммоний
В.156
глифосат-диметиламмоний
В.157
глифосат-изопропиламмоний
В.158
глифосат-тримезиум (сульфосат)
В.159
глифосат-калий
В.160
глюфосинат
В.161
глюфосинат-аммоний
В.162
глюфосинат-Р
В.163
глюфосинат-Р-аммоний
В.164
пендиметалин
В.165
трифлуралин
В.166
ацетохлор
В.167
бутахлор
В.168
кафенстрол
В.169
диметенамид-Р
В.170
фентразамид
В.171
флуфенацет
В.172
мефенацет
В.173
метазахлор
В.174
метолахлор
Гербицид В
В.175
S-метолахлор
В.176
претилахлор
В.177
феноксасульфон
В.178
изоксабен
В.179
ипфенкарбазон
В.180
пироксасульфон
В.181
2,4-D
В.182
2,4-D-изобутил
В.183
2,4-D-диметиламмоний
В.184
2,4-D-N,N,N-триметиленоаммоний
В.185
аминопиралид
В.186
аминопир ал ид-мети л
В.187
аминопиралид-трис(2-гиброксипропил)аммоний
В.188
клопиралид
В.189
клопиралид-метил
В.190
клопиралид-оламин
В.191
дикамба
В.192
дикамба-бутотил
В.193
дикамба-дигликоамин
В.194
дикамба-диметиламмоний
В.195
дикамба-диоламин
В.196
дикамба-изопропиламмоний
В.197
дикамба-калий
В.198
дикамба-натрий
В.199
дикамба-троламин
В.200
дикамба-гЧ,гЧ-бис-(3-аминопропил)метиламин
В.201
дикамба-диэтилентриамин
В.202
флуроксипир
В.203
флоксипир-мептил
Гербицид В
В.204
МХФУ
В.205
МХФУ-2-этилгексил
В.206
МХФУ-диметиламмоний
В.207
хинклорак
В.208
хинклор ак-диметиламмоний
В.209
хинмерак
В.210
хинмерак-диметил аммоний
В.211
аминоциклопирахлор
В.212
аминоциклопирахлор-калий
В.213
аминоциклопирахлор-метил
В.214
дифлуфензопир
В.215
дифлуфензопир-натрий
В.216
димрон
В.217
инданофан
В.218
индазифлам
В.219
оксазикломефон
В.220
триазифлам
В.221
II.1
В.222
II.2
В.223
П.З
В.224
II.4
В.225
II.5
В.226
II.6
В.227
II.7
В.228
П. 8
В.229
II.9
Таблица В-1 (композиции 1.1 - 1.229):
комп. №
герби цид В
1.1
В.1
1.2
В.2
1.3
В.З
1.4
В.4
1.5
В.5
1.6
В.6
1.7
В.7
1.8
В.8
1.9
В.9
1.10
В.10
1.11
В.11
1.12
В.12
1.13
В.13
1.14
В.14
1.15
В.15
1.16
В.16
1.17
В.17
1.18
В.18
1.19
В.19
1.20
В.20
1.21
В.21
1.22
В.22
1.23
В.23
1.24
В.24
1.25
В.25
1.26
В.26
1.27
В.27
1.28
В.28
1.29
В.29
1.30
В.ЗО
1.31
В.31
комп. №
герби цид В
1.32
В.32
1.33
В.ЗЗ
1.34
В.34
1.35
В.35
1.36
В.36
1.37
В.37
1.38
В.38
1.39
В.39
1.40
В.40
1.41
В.41
1.42
В.42
1.43
В.43
1.44
В.44
1.45
В.45
1.46
В.46
1.47
В.47
1.48
В.48
1.49
В.49
1.50
В.50
1.51
В.51
1.52
В.52
1.53
В.53
1.54
В.54
1.55
В.55
1.56
В.56
1.57
В.57
1.58
В.58.
1.59
В.59
1.60
В.60
1.61
В.61
1.62
В.62
комп. №
герби цид В
1.63
В.63
1.64
В.64
1.65
В.65
1.66
В.66
1.67
В.67
1.68
В.68
1.69
В.69
1.70
В.70
1.71
В.71
1.72
В.72
1.73
В.73
1.74
В.74
1.75
В.75
1.76
В.76
1.77
В.77
1.78
В.78
1.79
В.79
1.80
В.80
1.81
В.81
1.82
В.82
1.83
В.83
1.84
В.84
1.85
В.85
1.86
В.86
1.87
В.87
1.88
В.88
1.89
В.89
1.90
В.90
1.91
В.91
1.92
В.92
1.93
В.93
комп. №
герби цид В
1.94
В.94
1.95
В.95
1.96
В.96
1.97
В.97
1.98
В.98
1.99
В.99
1.100
В. 100
1.101
В.101
1.102
В. 102
1.103
В.103
1.104
В. 104
1.105
В.105
1.106
В.106
1.107
В. 107
1.108
В.108
1.109
В.109
1.110
В.ПО
1.111
В.111
1.112
В.112
1.113
В.113
1.114
В.114
1.115
В.115
1.116
В.116
1.117
В.117
1.118
В.118
1.119
В.119
1.120
В. 120
1.121
В.121
1.122
В. 122
1.123
В.123
1.124
В. 124
комп. №
герби цид В
1.125
В.125
1.126
В.126
1.127
В. 127
1.128
В.128
1.129
В.129
1.130
В.130
1.131
В.131
1.132
В.132
1.133
В.133
1.134
В.134
1.135
В.135
1.136
В.136
1.137
В.137
1.138
В.138
1.139
В.139
1.140
В.140
1.141
В.141
1.142
В.142
1.143
В.143
1.144
В.144
1.145
В.145
1.146
В.146
1.147
В.147
1.148
В.148
1.149
В.149
1.150
В.150
1.151
В.151
1.152
В.152
1.153
В.153
1.154
В.154
1.155
В.155
комп. №
герби цид В
1.156
В.156
1.157
В.157
1.158
В.158
1.159
В.159
1.160
В.160
1.161
В.161
1.162
В.162
1.163
В.163
1.164
В.164
1.165
В.165
1.166
В.166
1.167
В.167
1.168
В.168
1.169
В.169
1.170
В.170
1.171
В.171
1.172
В.172
1.173
В.173
1.174
В.174
1.175
В.175
1.176
В.176
1.177
В.177
1.178
В.178
1.179
В.179
1.180
В.180
1.181
В.181
1.182
В.182
1.183
В.183
1.184
В.184
1.185
В.185
1.186
В.186
комп. №
герби цид В
1.187
В.187
1.188
В.188
1.189
В.189
1.190
В.190
1.191
В.191
1.192
В.192
1.193
В.193
1.194
В.194
1.195
В.195
1.196
В.196
1.197
В.197
1.198
В.198
1.199
В.199
1.200
В.200
1.201
В.201
1.202
В.202
1.203
В.203
1.204
В.204
1.205
В.205
1.206
В.206
1.207
В.207
1.208
В.208
1.209
В.209
1.210
В.210
1.211
В.211
1.212
В.212
1.213
В.213
1.214
В.214
1.215
В.215
1.216
В.216
1.217
В.217
комп. №
герби цид В
1.218
В.218
1.219
В.219
1.220
В.220
1.221
В.221
1.222
В.222
1.223
В.223
1.224
В.224
1.225
В.225
1.226
В.226
1.227
В.227
1.228
В.228
1.229
В.229
Также особенно предпочтительными являются композиции 3.1. - 3.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А азафенидин.
Также особенно предпочтительными являются композиции 4.1. - 4.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А бенкарбазон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 5.1. - 5.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А бензфендизон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 6.1. - 6.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А бифенокс.
Также особенно предпочтительными являются композиции 7.1. - 7.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.227 только тем, что они содержат в качестве компонента А бутафенацил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 8.1. - 8.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А карфентразон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 9.1. - 9.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1. 229 только тем, что они содержат в качестве компонента А карфентразон-этил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 10.1. - 10.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента Ахлометоксифен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 12.1. - 12.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флуазолат.
Также особенно предпочтительными являются композиции 13.1. - 13.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флуфенпир.
Также особенно предпочтительными являются композиции 14.1. - 14.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флуфенпир-этил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 15.1. - 15.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флумиклорац.
Также особенно предпочтительными являются композиции 16.1. - 16.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флумиклорац-пентил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 17.1. - 17.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флумиоксазин.
Также особенно предпочтительными являются композиции 18.1. - 18.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флуорогликофен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 19.1. - 19.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флуорогликофен-этил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 21.1. - 21.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флутиацет-метил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 22.1. - 22.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А фомесафен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 23.1. - 23.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А галосафен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 24.1. - 24.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А лактофен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 25.1. - 25.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А оксадиаргил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 26.1. - 26.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А оксадиазон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 27.1. - 27.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А оксифлуорфен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 28.1. - 28.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А пентоксазон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 30.1. - 30.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А пираклонил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 31.1. - 31.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А пирафлуфен.
Также особенно предпочтительными являются композиции 32.1. - 32.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А пирафлуфен-этил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 33.1. - 33.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А сафлуфенацил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 34.1. - 34.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А сулфентразон.
Также особенно предпочтительными являются композиции 35.1. - 35.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А тидиазимин.
Также особенно предпочтительными являются композиции 36.1. - 36.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А тиафенацил.
Также особенно предпочтительными являются композиции 37.1. - 37.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А этил [3-[2-хлоро-4-фтор-5-(1-метил-6-трифторметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-3-ил)фенокси]-2-пиридилокси]ацетат (CAS 353292-31-6; S-3100).
Также особенно предпочтительными являются композиции 38.1. - 38.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-
2.4- дион (CAS 1258836-72-4)
Также особенно предпочтительными являются композиции 39.1. - 39.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
К-этил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-Ш-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452098-92-9).
Также особенно предпочтительными являются композиции 40.1. - 40.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А М-тетрагидрофурфурил-3-(2,6-дихлоро-4-трифторметилфенокси)-5-метил-Ш-пиразол-1-карбоксамид (CAS 915396-43-9).
Также особенно предпочтительными являются композиции 41.1. - 41.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
К-этил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил-Ш-пиразол-1-карбоксамид (CAS 452099-05-7).
Также особенно предпочтительными являются композиции 42.1. - 42.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А гЧ-тетрагидрофурфурил-3-(2-хлоро-6-фтор-4-трифторметилфенокси)-5-метил- Ш-пиразол- 1-карбоксамид (CAS 45210003-7).
Также особенно предпочтительными являются композиции 43.1. - 43.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
3- [7-фтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[ 1,4]оксазин-6-ил] -
1.5- диметил-6-тиоксо-[1,3,5]триазинан-2,4-дион.
1.5-
Также особенно предпочтительными являются композиции 44.1. - 44.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А метил (?')-4-[2-хлоро-5-[4-хлоро-5-(дифторметокси)-1Н-метил-ругаго1-3-ил]-4-фтор-фенокси]-3-метокси-бут-2-еноат (CAS 948893-00-3).
Также особенно предпочтительными являются композиции 45.1. - 45.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4).
Также особенно предпочтительными являются композиции 46.1. - 46.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
2-(2,2,7-Трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-изоиндол-1,3-дион.
Также особенно предпочтительными являются композиции 47.1. - 47.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А
1-метил-6-трифторметил-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион
Также особенно предпочтительными являются композиции 48.1. - 48.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат беноксакор в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 49.1. - 49.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат клоквинтоцет в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 52.1. - 52.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат фенхлоразол в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 53.1. - 53.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат фенклорим в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 54.1. - 54.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат фурилазол в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 55.1. - 55.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат изоксадифен в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 56.1. - 56.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат мефенпир в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 57.1. - 57.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат 4-(дихлорацетил)-1-окса-4-азаспиро[4.5]декан (MON4660, С AS 71526-07-3) в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 58.1. - 58.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат 2,2,5-триметил-3-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, С AS 52836-31-4) в качестве антидота С.
Как указывалось выше, гербициды-ингибиторы ППО обычно лучше всего используются в сочетании с одним или несколькими другими гербицидами для борьбы с большим количеством видов нежелательной растительности. В целом
предпочтительно использовать соединения, в частности гербициды-ингибиторы 11110 и комбинации, описанные выше, которые применимы для изобретения в комбинации с гербицидами, которые являются селективными для интересующих культур и которые дополняют спектр сорняков, с которыми борются эти соединения при данной норме введения. Также в целом предпочтительно применять соединения изобретения и другие дополнительные гербициды одновременно в виде комбинированного состава или баковой смеси.
Вследствие этого в некоторых вариантах осуществления изобретения, нуклеиновые кислоты с ППО настоящего изобретения можно сгруппировать с помощью любой комбинации интересующих полинуклеотидных последовательностей для создания растений с желаемым фенотипом. Например, нуклеиновые кислоты с НПО настоящего изобретения можно сгруппировать с помощью любых других полинуклеотидов, кодирующих полипептиды с пестицидной и/или инсектицидной активностью, таких, как, например, токсиновые белки Bacillus thuringiensis (описано в Патентах США №№ 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; и Geiser et al (1986) Gene 48: 109). Полученные комбинации могут также включать множественные копии любого из интересующих полинуклеотидов.
В качестве примера, полинуклеотиды, которые можно сгруппировать с нуклеиновыми кислотами настоящего изобретения, включают нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды, придающие стойкость к вредителям/патогенам, таким как вирусы, нематоды, насекомые или грибы и др. Примеры полинуклеотидов, которые можно сгруппировать с нуклеиновыми кислотами настоящего изобретения, включают полинуклеотиды, кодирующие: полипептиды с пестицидной и/или инсектицидной активностью, таких, как, токсиновые белки Bacillus thuringiensis (описано в Патентах США № 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; и в Гайсер и др. (1986) Ген 48: 48:109), лектины(Ван Дам и др. (1994) Plant Mol. Biol. 24:825, пентин (описано в Патентах США № 5,981,722), и аналогичное; свойства, желательные для устойчивости к заболеваниям или гербицидам (например, гены детоксикация фумонизина (Патенты США № 5,792,931); гены авирулентности и устойчивости к заболеваниям (Jones et al. (1994) Science 266:789; Martin et al., (1993) Science
262:1432; Mindrinos et al. (1994) Клетка 78:1089); ацетолактат синтаза (ALS) мутанты, которые обеспечивают устойчивость к гербицидам, такие как S4 и/или мутации Нга; устойчивость к глифосату (например, ген 5-энол-пировил-шикамат-3-фосфат-синтазы (ЭГГШФС), описан в патентах США № 4 940 935 и 5 188 642; или ген глифосат гЧ-ацетилтрансфазз (ГAT), описан в Castle и др. (2004) Science, 304:1151-1154; и в Заявках на патенты США Pub. № 20070004912, 20050246798, и 20050060767)); устойчивость к глюфосинату (например, ген фосфинотрицин ацетил трансферазы PAT и BAR, описан в Патентах США № 5 561 236 и 5 276 268); устойчивость к гербицидам включая сульфонилмочевина, DHT (2,4D), и ППО-гербицид (например, глифосат ацетил трансфераза, арилокси алканоат диоксигеназа, ацетолактат синтаза 4-гидроксифенилпуриват диоксигеназа (ГФПД) и свойства, необходимые для переработки продуктов способа, такие как большое содержание масла (например, Патент США № 6,232,529); модифицированные масла (например, гены десатуразы жирных кислот (Патент США № 5 952 544; WO 94/11516)); модифицированные крахмалы (например, ADPG пирофосфорилазы (AGPase), синтазы крахмала (SS), ветвящие ферменты крахмала (SBE), и деветвящие ферменты крахмала (SDBE)); а также полимеры или биопластики (например, Патент США № 5,602,321; бета-кетотиолаза, полигидроксибутират синтаза и ацетоацетил-СоА редуктаза (Schubert et al. (1988) J. Bacteriol. 170:5837-5847) способствуют экспресии полигидроксиалканоатов (РНА)); информация о которых включена в настоящий документ в отсылочном порядке.
В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения, растение включает, по меньшей мере, одну дополнительную гетерологичную нуклеиновую кислоту, включая нуклеотидную последовательность, кодирующую фермент, устойчивый к гербициду, выбранный, например, из группы, состоящей из 5-энолпирувилшикимат-З-фосфат синтазы (ЭПШФС), Глифосат ацетил трансферазы (ГAT), Цитохром Р450, фосфинотрицин ацетилтрансфазы (ФАТ), Ацетогидроксиацид синтазы (АТАС; ЕС 4.1.3.18, также известной, как ацетолактат синтаза или АЛС), 4-гидроксифенилпуриват диоксигеназы, Фитоин десатуразы (ФД) и ухудшающие свойства дикамбы ферменты, как описано в WO 02/068607.
В других аспектах к растениям настоящего изобретения относятся растения, котрые, помимо наличия у них устойчивости к гербицидам-ингибиторам ППО, были подвержены дальнейшим генетическим модификациям путем разведения, мутагенеза или генной инженерии, например, получили устойчивость к другим специфичным классам гербицидов, таким как ингибиторы AHAS, ауксиновые гербициды, отбеливающие гербициды, такие как ингибиторы гидроксифенилпируватдиоксигеназы (ГФПДГ) или фитоин десатуразы (PDS); ингибиторы EPSPS, такие как глифосат; ингибиторы глутаминсинтетазы (GS), такие как глюфосинат; ингибиторы биосинтеза липидов, такие как ацетил-СоА-карбоксилаза (ACCase); или оксинил-гербициды (т.е. бромоксинил или иоксинил) в результате применения обычных способов разведения или генной инженерии. Таким образом, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО растения по изобретению можно сделать устойчивыми к различным классам гербицидов с помощью многократных генетических модификаций, таких как устойчивость к глифосату и одновременно к глюфосинату, или к глифосату и одновременно к гербициду другого класса, как ингибиторы ГФПДГ, ингибиторы AHAS или ингибиторы ACCase. Данные технологии формирования устойчивости к гербицидам описаны, например, в "Наука о борьбе с вредителями" (том, год, стр.): 61, 2005, 246; 61, 2005, 258; 61, 2005, 277; 61, 2005, 269; 61, 2005, 286; 64, 2008, 326; 64, 2008, 332; Weed Science 57, 2009, 108; Australian Journal of Agricultural Research 58, 2007, 708; Science 316, 2007, 1185; и в материалах, на которые в настоящем документе имеются ссылки. Например, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО растения по настоящему изобретению а некоторых вариантах осуществления изобретения могут быть устойчивыми к ингибиторам ACCase, таким как "dims" (например, циклоксидим, сетоксидим, клетодим или тепралоксидим), "fops" (например, клодинафоп, диклофоп, флуазифоп, галоксифоп или хизалофоп) и "dens" (например, пиноксаден); к ауксиновым гербицидам, таким как дикамба, к ингибиторам ЭПШФС, таким как глифосат; к другим ингибиторам ППО, а также к ингибиторам GS, таким как глюфосинат.
В дополнение к данным классам ингибиторов, растения настоящего изобретения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, могут также быть устойчивыми к гербицидам с другими способами действия, например, к
Подобные характеристики устойчивости могут выражаться, например, в качестве мутантных белков или белков с ППО дикого типа, мутантных белков AHASL, мутантных белков ACCase, мутантных белков EPSPS или белков мутантной глутаминсинтетазы; либо в качестве родной, выведенной путем родственного скрещивания или трансгенной арилоксиалканоат диоксигеназы (AAD или DHT), галоарилнитрилов (BXN), 2,2-дихлорпропионовой кислоты дегалогеназы (DEH), глифосат-гЧ-ацетилтрансферазы (GAT), глифосат декарбоксилазы (GDC), глифосатоксидоредуктазы (GOX), глутатион-S-трансферазы (GST), фосфинотрицин ацетилтрансфазы (PAT или бар) или белки CYP450, имеющие гербицидопонижающую активность.
Растения по настоящему изобретению, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, можно также сочетать с другими характеристиками, включая, в том числе, пестицидные черты, такие как Bt Cry и другие белки с пестицидной активностью к жесткокрылым насекомым, чешуйчатокрылым, нематодам и другим вредителям; питательные или нутрицевтические характеристики, такие как изменённое содержание масла и другие известные в данной области знаний.
Более того, в других вариантах осуществления изобретения устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО растения также включены в область изобретения посредством использования технологий рекомбинантных ДНК и/или селекции и/или отбираются иным образом по данным характеристикам, которые способны синтезировать один или более инсектицидный белок, особенно белки из бактериального вида Bacillus, в частности Bacillus thuringiensis, такие как [дельта]-эндотоксины, например CrylA(b), CrylA(c), Cry IF, CryIF(a2), CryllA(b), CrylllA, CrylllB(bl) или Cry9c; растительные инсектицидные белки (VIP), например VIP1, VIP2, VIP3 или VIP3A; инсектицидные белки колонизирующих бактерии нематодов, например Photorhabdus spp. или Xenorhabdus spp.; токсины, вырабатываемые животными, такие как токсины скорпиона, токсины паукообразных, токсины ос, либо другие специфические нейротоксины насекомых; токсины, вырабатываемые грибами, такие как токсины
стрептомицетов; растительные лектины, такие как лектины гороха или ячменя; агглютинин; ингибиторы протеиназы, такие как трипсин ингибиторы, серин-протеаза ингбиторы, пататин, цистатин или папаин ингибиторы; белки, инактивирующие рибосому (RIP), такие как рицин, кукуруза-RIP, абрин, луффин, сапорин или бриодин; ферменты метаболизма стероидов, такие как 3-гедрокси-стероид оксидаза, экдистероиды-IDP- гликозил- трансфераза, холестеролоксидаза, ингибиторы экдиозоны или HMG-CoA- редуктаза; ингибиторы ионных каналов, такие как ингибиторы каналов натрия или кальция; ювенильный гормон эстераза; диуретические рецепторы гормона (спирально кининовой рецепторы); стильбена синтазы, бибензил синтазы, хитиназа или гликаназы. В контексте настоящего изобретения, под данными инсектицидными белками или токсинами должны пониматься также претоксины, гибридные белки, укороченные или модифицированные другим способом белки. Гибридные белки характеризуются новыми комбинациями белковых доменом (смотрите, например, WO 02/015701). Примеры подобных токсинов или генетически модифицированных растений, способных синтезировать такие токсины, описаны, например, в ЕР-А 374 753, WO 93/007278, WO 95/34656, ЕР-А 427 529, ЕР-А 451 878, WO 03/18810 и WO 03/52073. Способы производства подобных генетически модифицированных растений известны специалистам данной области и описаны, например, в вышеуказанных публикациях. Данные инсектицидные белки, которые содержаться в генетически модифицированных растениях, придают растениям, производящим данные белки, устойчивость к вредителям всех таксономических групп членистоногих, в особенности жукам (Coeloptera), двукрылым насекомым (Diptera), мотылькам (Lepidoptera) и круглым червям (Nematoda).
В некоторых вариантах осуществления изобретения экспрессия одного или нескольких белковых токсинов (например, инсектицидных белков) в растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, является эффективным средством контроля организмов, включающих, например, представителей классов и порядков: Жесткокрылые, такие как американская фасолевая зерновка Acanthoscelides obtectus; листоед Agelastica alni; жуки-щелкуны (Agriotes lineatus, Agriotes obscurus, Agriotes bicolor); точильщик хлебный Ahasverus advena; хрущ июньский Amphimallon solstitialis; точильщик Anobium punctatum; Anthonomus
spp. (долгоносики); крошка свекловичная Atomaria linearis; кожееды (Anthrenus spp., Attagenus spp.); зерновка четырёхпятнистая Callosobruchus maculates; блестянка полужесткокрылая Carpophilus hemipterus; рапсовый семенной скрытохоботник Ceutorhynchus assimilis; скрытнохоботник рапсовый стеблевой зимний Ceutorhynchus picitarsis; проволочники Conoderus vespertinus и Conoderus falli; слоник банановый Cosmopolites sordidus; новозеландский травяной жук Costelytra zealandica; хрущ блестящий зеленый Cotinis nitida; скрытнохоботник стеблевой подсолнечниковый Cylindrocopturus adspersus; ветчинный кожеед Dermestes lardarius; злаковые корневые черви Diabrotica virgifera, Diabrotica virgifera virgifera и Diabrotica barberi; мексиканская зерновка бобовая Epilachna varivestis; дровосек домовый Hylotropes bajulus; долгоносик листовой люцерновый Hypera postica; притворяшка блестящая Gibbium psylloides; табачный жук Lasioderma serricorne; колорадский жук Leptinotarsa decemlineata; древогрызы Lyctus spp., рапсовый цветоед Meligethes aeneus; майский хрущ западный Melolontha melolontha; противоряшка американский Mezium americanum; притворяшка шелковистый Niptus hololeucs; точильщики хлебные Oryzaephilus surinamensis и Oryzaephilus Mercator; скосарь бороздчатый Otiorhynchus sulcatus; листоед хреновый Phaedon cochleariae, блошка крестоцветная Phyllotreta cruciferae; блошка полосатая Phyllotreta striolata; блошка рапсовая Psylliodes chrysocephala; Ptinus spp. (противоряшки); точильщик зерновой Rhizopertha dominica; долгоносик полосатый Sitona lineatus; долгоносики рисовые и амбарные Sitophilus oryzae и Sitophilus; красный долгоносик подсолнечника Smicronyx fulvus; точильщик хлебный Stegobium paniceum; хрущак мучной большой Tenebrio molitor, хрущаки малые мучные (Tribolium confusum) Tribolium castaneum и Tribolium confusum; трогодермы (Trogoderma spp.); совка подсолнечниковая восклицательная Zygogramma exclamationis; кожи сто крылые (уховёртки), такие как уховёртка обыкновенная Forficula auricularia и уховёртка прибрежная Labidura riparia; тараканообразные, такие как таракан чёрный Blatta orientalis; многоножка тепличная Oxidus gracilis; муха свекловичная Pegomyia betae; мушка шведская Oscinella frit; плодовые мушки (Dacus spp., Drosophila spp.); белые муравьи (термиты), включая виды, представляющие семейства термитов-жнецов, древоядных термитов, Дарвиновы термиты, носатые термиты, крылатые термиты, Termitidae, Termopsidae; клоп травяной Lygus lineolaris; тля свекловичная Aphis fabae; тля бахчевая и хлопковая Aphis gossypii; тля яблоневая
зелёная Aphis pomi; белокрылка цитрусовая (Dialeurodes citri) Aleurocanthus spiniferus; табачная белокрылка Bemesia tabaci; капустная тля Brevicoryne brassicae; медяница грушева Cacopsylla pyricola; тля смородинная Cryptomyzus ribis; филлоксера виноградная листовая Daktulosphaira vitifoliae; листоблошка цитрусовая Diaphorina citri; цикадка картофельная Empoasca fabae; цикадка бобовая Empoasca Solana; цикадка виноградная Empoasca vitis; пушистая тля Eriosoma lanigerum; щитовка устрицевидная Eulecanium corni; тля сливовая опылённая Hyalopterus arundinis; тёмная цикадка Laodelphax striatellus; тля картофельная листовая Macrosiphum euphorbiae; тля персиковая зелёная Myzus persicae; цикадка рисовая зеленая Nephotettix cinticeps; цикадка коричневая Nilaparvata lugens; тля хмелевая Phorodon humuli; тля черёмуховая обыкновенная Rhopalosiphum padi; тля большая злаковая Sitobion avenae; чешуекрылые, такие как Adoxophyes orana (листовёртка сетчатая); Archips podana (листовёртка всеядная); Bucculatrix pyrivorella (минер грушевый); Bucculatrix thurberiella (моль кривоусая хлопковая); Bupalus piniarius (пяденица сосновая); Carpocapsa pomonella (яблонная плодожорка); Chilo suppressalis (огнёвка азиатская стеблевая); Choristoneura fumiferana (еловая листовёртка-почкоед); Cochylis hospes (шерстолапка подсолнечниковая); Diatraea grandiosella (огнёвка кукурузная юго-западная); Eupoecilia ambiguella (гроздевая листовёртка); Helicoverpa armigera (коробочный червь); Helicoverpa zea (коробочный червь); Heliothis vires cens (листовёртка-почкоед табачная), Homeosoma electellum (огнёвка подсолнечниковая); Но mona magnanima (листовёртка чайная западная); Lithocolletis blancardella (плодовая нижнеминирующая моль-пестрянка); Lymantria dispar (шелкопряд непарный); Malacosoma neustria (коконопряд); Mamestra brassicae (совка капустная); Mamestra configurata (совка латуковая); Operophtera brumata (пяденица зимняя); Ostrinia nubilalis (мотылёк кукурузный), Panolis flammea (совка сосновая), Phyllocnistis citrella (минер листовой цитрусовый); Pieris brassicae (белянка капустная); Rachiplusia ni (совка соевая); Spodoptera exigua (совка малая); Spodoptera littoralis (гусеница хлопковая); Sylepta derogata (листовёртка хлопковая); Trichoplusia ni (совка капустная); прямокрылые, такие как сверчек обыкновенный Acheta domesticus, саранча египетская (Anacridium spp.), саранча перелётная Locusta migratoria, кобылка двухполосая Melanoplus bivittatus, кобылка отличительная Melanoplus differ entialis, кобылка краснобедрая Melanoplus femurrubrum, кобылка перелетная Melanoplus sanguinipes, медведка
десятипалая Neocurtilla hexadectyla, саранча Nomadacris septemfasciata, медведка короткокрылая Scapteriscus abbreviatus, медведка южная Scapteriscus borellii, медведка рыжевато-бурая Scapteriscus vicinus, и саранча пустынная Schistocerca gregaria; симфилы, такие как многоножка садовая Scutigerella irnmaculata; бахромчатокрылые, такие как трипе табачный Frankliniella fusca, трипе обыкновенный Frankliniella intonsa, трипе западный цветочный Frankliniella occidentalism, трипе хлопковый Frankliniella schultzei, трипе декоративный Hercinothrips femoralis, трипе соевый Neohydatothrips variabilis, трипе цитрусовый Pezothrips kellyanus, трипе авокадо Scirtothrips perseae, трипе дыневый Thrips palmi, и трипе луковый Thrips tabaci; и аналогичные организмы, а также их комбинации, включающие один или несколько указанных организмов.
В некоторых вариантах осуществления изобретения экспрессия одного или нескольких белковых токсинов (например, инсектицидных белков) в растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, является эффективным средством контроля листогрызов, то есть представителей подсемейства листогрызов семейства листоедов, предпочтительно Phyllotreta spp., таких как Phyllotreta cruciferae и/или Phyllotreta triolata. В других вариантах осуществления изобретения экспрессия одного или нескольких белковых токсинов (например, инсектицидных белков) в растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, является эффективным средством контроля рапсового семенного скрытохоботника, совки латуковая, слепняков или моли капустной.
Более того, в одном варианте осуществления изобретения растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, также входят в область изобретения, например, с помощью технологий рекомбинантных ДНК и/или селекции и/или отбираются иным образом по данным характеристикам, которые способны синтезировать один или более белок для повышения устойчивости или стойкости данных растений к бактериальным, вирусным или грибковым патогенам. Способы производства подобных генетически модифицированных растений известны специалистам данной области.
Более того, в еще одном варианте осуществления изобретения растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО, также входят в область изобретения, например, с помощью технологий рекомбинантных ДНК и/или
селекции и/или отбираются иным образом по данным характеристикам, которые способны синтезировать один или более белок для повышения продуктивности (то есть содержания масел), устойчивости к засухе, солености или к иным факторам окружающей среды, ограничивающим рост, или устойчивость к вредителям, а также к бактериальным, вирусным или грибковым патогенам данных растений.
Более того, в других вариантах осуществления изобретения растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО также входят в область изобретения, например, с помощью технологий рекомбинантных ДНК и/или селекции и/или отбираются иным образом по данным характеристикам, которые изменяются, в результате чего они содержат измененное количество одного или нескольких веществ или новых веществ, например, для улучшения питание людей и животных, например, масличные культуры, которые производят улучшающие здоровье омега-3 жирные кислоты с длинной цепью или ненасыщенные омега-9 жирные кислоты (например, Nexera(r) rape, Dow Agro Sciences, Canada).
Более того, в некоторых вариантах осуществления изобретения растения, устойчивые к гербицидам-ингибиторам НПО, также входят в область изобретения, например, с помощью технологий рекомбинантных ДНК и/или селекции и/или отбираются иным образом по данным характеристикам, которые изменяются, в результате чего они содержат увеличенные количества витаминов и/или минералов и/или имеют улучшенные профили нутрицевтических соединений.
В одном из вариантов осуществления растения по настоящему изобретению, устойчивые к гербицидам-ингибиторам ППО по сравнению с растениями дикого типа, содержат увеличенное количество и улучшенный профиль соединения, выбранного из группы, содержащей: глюкозинолаты (например, глюкорафанин (4-метилсульфинилбутил-глюкозинолат), сульфорафан, З-индолилметил-глюкосинат(глюкобрассицин), 1-метокси-З-индолилметил-глюкосинат (неоглюкобрассицин)); фенольные смолы (например, флавоноиды (например, кверцетин, кемпферол), производные гидроксициннамоила (например, 1,2,2'- тризинапоилгентиобиоза, 1,2-диферулоилгентиобиоза, 1,2"-дисинапоил-2-ферулоилгентиобиоза, 3-0- каффеоил-хинная (неохлорогеновая кислота)); а также
В еще одном варианте осуществления изобретения растения по настоящему изобретению, устойчивые к гербицидам-ингибиторам 11110 по сравнению с растениями дикого типа, содержат увеличенное количество и улучшенный профиль соединения, выбранного из группы, содержащей: прогоитрин; изотиоцианаты; индолы (продукты гидролиза глюкозинолат); глютатион; каротеноиды, такие как бета-каротин, ликопен и ксантофилл каротиноиды, такие как лютеин и зеаксантин; фенольные смолы, содержащие флавоноиды, такие как флавонолы (например, кверцетин, рутин), флаваны/таннины (такие как процианидины, содержащие кумарин, проантоцианидины, катехины и антоцианины); флавоны; фитоэстрогены, такие как куместаны, лигнаны, ресвератрол, изофлавоны, например, генистеин, даидзеин и глицитеин; лактоны резорциловой кислоты; органические соединения серы; фитостеролы; терпеноиды, такие как карназол, розмариновая кислота, глицирризины и сапонины; хлорофилл, хлорофиллин, сахары, антоцианин и ваниль. Другие варианты осуществления изобретения растения, демонстрирующие устойчивость к гербицидам-ингибиторам 11110, по сравнению с растениями дикого вида, предусматривают большее количества или улучшенный профиль соединения, выбранного из группы, в состав которой входят винкристин, винбластин, таксаны (например, таксол (паклитаксел), баккатин III, 10-деацетил баккатин III, 10-деацетил таксол, ксилосил таксол, 7-эпитаксол, 7-эпибаккатин III, 10-деацетил цефаломанин, 7-эпицефаломанин, таксотер, цефаломанин, ксилосил цефаломанин, таксагифин, 8-бензилокси таксагифин, 9-ацетилокси таксусин, 9-гидрокси таксусин, тайванксам, таксан 1а, таксан lb, таксан 1с, таксан Id, GMP паклитаксел, 9-дигидро 13-ацетилбаккатин III, 10-деацетил-7-эпитаксол, тетрагидроканнабинол (ТГК), каннабидиол (КБД), генистеин, диадзеин, кодеин, морфин, хинин, шиконин, аймалазин, серпентин и тому подобные.
Как описано выше, настоящее изобретение предоставляет информацию о композициях и способах повышения устойчивости сельскохозяйственного
растения или семян к ингибиторам ППО по сравнению с растением или семенем дикого типа. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, устойчивость сельскохозяйственного растения или семян к ингибиторам ППО повысилась так, что растение или семя может противостоять применению гербицида-ингибитора ППО в количестве предпочтительно 1-1000 г аи/га"1, более предпочтительно 5-150 г аи/га"1 и наиболее предпочтительно 10-100 г аи/га"1. При использовании по тексту настоящего документа, "устойчивость" к гербициду-ингибитору ППО означает, что растение либо не гибнет, либо либо лишь частично повреждается в результате такого применения. Специалисту в данной области известно, что дозировки могут варьироваться в зависимости от условий окружающей среды, таких как температура и влажность, а также в зависимости от выбранного типа гербицида (активный ингредиент аи).
Кроме того, настоящее изобретение предоставляет способы, которые включают использование, по меньшей мере, одного гербицида-ингибитора ППО, в некоторых случаях с одним или несколькими гербицидными соединениями В, и в некоторых случаях антидотом С в соответствии с определением выше.
В этих методах гербицид-ингибитор ППО может применяться любым методом, известным специалистам, включая, помимо прочего, обработку семян, почвы и листьев. До применения гербицид-ингибитор ППО можно преобразовать в стандартные препаративные формы, например, растворы, эмульсии, суспензии, пылевидные составы, порошки, пасты и гранулы. Выбор формы состава зависит от конкретной цели; в любом случае, она должна обеспечивать качественное и ровное распределение соединения в соответствии с изобретением.
До применения гербицид-ингибитор ППО можно преобразовать в стандартные препаративные формы, например, растворы, эмульсии, суспензии, пылевидные составы, порошки, пасты и гранулы. Выбор формы состава зависит от конкретной цели; в любом случае, она должна обеспечивать качественное и ровное распределение соединения в соответствии с изобретением.
Получив растения с повышенной устойчивостью к гербициду-ингибитору ППО можно использовать большое разнообразие соединений для защиты растений от сорняков, чтобы таким образом улучшить рост растений и уменьшить
борьбу за питательные вещества. Гербицид-ингибитор 11110 может использоваться для контроля над сорняками до всхода, после всхода, до посева и во время выращивания сельскохозяйственных культур, описанных в настоящем документе, в районах их произрастания, или могут использоваться препараты, содержащие гербицид-ингибитор ППО и другие добавки. Гербициды-ингибиторы ППО могут также использоваться для обработки семян. Добавки в гербицидах-ингибиторах ППО включают другие гербициды, детергенты, адъюванты, лиофилизирующие агенты, склеивающие агенты, стабилизирующие агенты и другие, подобные вещества. Препаративные формы гербицида-ингибитора ППО могут представлять собой влажные или сухие препараты и включать, помимо прочего, сыпучие порошки, концентраты эмульсии и жидкие концентраты. Гербицид-ингибитор ППО и гербицидные препараты можно применять в соответствии со стандартными методами, например, путем обрызгивания, орошения, опыления или другими подобными методами.
Препаративные формы можно приготовить известным способом (для жидких концентратов), Browning, "Agglomeration", Chemical Engineering, Dec. 4, 1967, 147-48, Perry's Chemical Engineer's Handbook, 4-ое изд., McGraw-Hill, Нью-Йорк, 1963, стр. 8-57 и послед. WO 91/13546, US 4,172,714, US 4,144,050, US 3,920,442, US 5,180,587, US 5,232,701, US 5,208,030, GB 2,095,558, US 3,299,566, Klingman, Weed Control as a Science, John Wiley and Sons, Inc., Нью-Йорк, 1961, Hance et al., Weed Control Handbook, 8-ое изд., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989 и Mollet, H., Grubemann, A., Formulation technology, Wiley VCH Verlag GmbH, Weinheim (Germany), 2001, 2. D. A. Knowles, Chemistry and Technology of Agrochemical Formulations, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 1998 (ISBN 0-7514-0443-8), например, за счет растягивания активного соединения при помощи вспомогательных веществ, которые подходят для препаративной формы агрохимикатов, таких как растворители и/или носители, при желании, эмульгаторы, поверхностные-активные вещества и диспергаторы, консерванты, противовспенивающие вещества, антифризы, для препаративной формы обработки семян также в некоторых случаях красители и/или связывающие вещества и/или гелеобразующие агенты.
Обычно, составы содержат от 0,01 до 95 мас.%, предпочтительно от 0,1% до 90 мас.% гербицида-ингибитора ППО. В этом случае гербициды-ингибиторы ППО используются при чистоте от 90 до 100%, предпочтительно, от 95 до 100 мас.% (согласно спектру ЯМР). Для целей обработки семян соответствующие препаративные формы могут быть разбавлены на 2-10 частей, в результате чего получаются концентрации в готовых для использования препаративных формах от 0,01 до 60 мас.% активного соединения, предпочтительно от 0,1 до 40 мас.%. Гербицид-ингибитор ППО может использоваться в качестве такового в виде их препаративных форм или приготовленных на их основании форм для использования, например, в форме прямо распыляемого раствора, порошков, суспензий или дисперсий, эмульсий или масляных дисперсий, паст, пылеобразных продуктов, материалов для рассеяния или гранул посредством распыления, тонкого измельченного распыления, разбрасывания, рассеяния или полива. Выбор форм полностью зависит от целевого назначения. Они предназначены для обеспечения максимально возможного распределения гербицида-ингибитора ППО по изобретению в каждом конкретном случае. Водные формы можно получить из концентратов эмульсии, суспензий, паст, смачиваемых порошков (распыляемых порошков, масляных дисперсий) при добавлении воды. Для получения эмульсий, паст или масляных дисперсий, вещества, сами по себе, либо растворенные в масле или растворителе, могут гомогенезироваться в воде посредством смачивающего агента, или агента, придающего липкость, диспергатора или эмульгатора. Тем не менее, также существует возможность получения концентратов, включающих активное соединение, смачивающий агент, агент, придающий липкость, диспергатор или эмульгатор, при необходимости растворитель или масло, ричем такие концентраты подходят для разбавления в воде. Концентрации активного соединения в готовых препаративных формах могут отличаться в пределах относительно больших диапазонов. Обычно, это диапазоны от 0,0001 до 10%, предпочтительно от 0,01 до 1 мас.%. Гербицид-ингибитор ППО также может успешно использоваться в способе со сверхмалым объемом, при этом существует возможность применять препаративные формы, содержащие более 95 мас.% активного соединения или даже использовать активное соединение без добавок.
В других аспектах предусмотрен способ обработки растения по настоящему изобретению.
При некоторых вариантах осуществления изобретения данный способ предусматривает нанесение на растения композиции, которая является приемлимой с сельскохозяйственной точки зрения, как описано выше.
В еще одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способ подготовки семян для получения потомства. Способ предусматривает посадку семян растения или позволяет получить растение по настоящему изобретению. В одном из вариантов осуществления способ также предусматривает выращивание растения-потомка из семян, а также сбор семян растения-потомка. При других вариантах осуществления изобретения способ также предусматривает нанесение гирбицидной композиции гербицидов-ингибиторов НПО на растение.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к пригодным для заготовок частям трансгенного растения по настоящему изобретению. Предпочтительно, чтобы пригодные для заготовок части содержали нуклеиновую кислоту с ППО или белок с ППО по настоящему изобретению. Пригодным для заготовоки частями могут являться семена, корни, листья и/или цветки, содержащие нуклеиновую кислоту с ППО или белок с ППО или их части. Предпочтительными частями сои являются соевые бобы, содержащие нуклеиновую кислоту с ППО или белок с ППО.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение относится к продукции, получаемой из трансгенного растения по настоящему изобретению, его частей или пригодных для заготовок частей такого растения. Предпочтительным продуктом является мука крупного помола или масло, предпочтительно соевая мука или соевое масло. Предпочтительно, чтобы соевая мука и/или масло содержали нуклеиновую кислоту с ППО или белок с ППО.
В еще одном варианте осуществления изобретения, изобретение относится к способу получения продукта, который включает:
a) выращивание растений, предусмотренных изобретением или получение их способами, предусмотренными изобретением, а также
b) производство указанного продукта из растений по изобретению или с использованием растений по изобретению, либо частей указанных растений, например, их семян.
Еще в одном варианте осуществления изобретения способ предусматривает следущие шаги:
a) выращивание растений, предусмотренных изобретением,
b) удаление пригодных для заготовок частей растений, описание которых приведено выше, а также
Ь) производство указанного продукта из растений с использованием пригодных для заготовок частей растений по изобретению.
Данные продукты могут производится в месте выращивания растений, либо для производства данных продуктов указанные растения и/или их части могут быть перенесены с места выращивания. Обычно, растение выращивается, и требующиеся части, пригодные для заготовки, извлекаются из растения (если это целесообразно, в ходе повторяющихся технологических циклов), после чего продукт рпоизводится из частей растения, пригодных для заготовки. При применении способов по изобретению этап выращивания растения может производится только один раз, а этап производства продукта может происходить в ходе повторяющихся технологических циклов, например, может циклически повторяться этап удаления частей растения, пригодных для заготовки, по изобретению и, при необходимости, этап дальнейшей обработки этих частей растений для получения продукта. Также возможно, что этап выращивания растений по изобретению повторяется, и растения или части растений, пригодные для заготовки, хранятся до этапа производства продукта из накопленного запаса растений или частей растений. Также, этапы выращивания растений и производства продукта могут происходить одновременно, частично или полностью. Обычно растения выращиваются в течение определенного времени до этапа производства продукта.
В одном из вариантов осуществления изобретения продукты, полученные указанными способами по изобретению являются растительными продуктами,
такими как, помимо прочего, продукты питания, продукты, используемые для кормления животных, пищевые добавки, кормовые добавки, волокна, используемые в производстве косметической и/или фармацевтической продукции. К пищевым продуктам относится все, используемое для питания и/или для снабжения питательными веществами. В частности вещества и продукты, используемые для питания животных, также относятся к пищевым продуктам.
В другом случае осуществления изобретения способы по изобретению используются для получения сельскохозяйственных продуктов, таких как, помимо прочего, экстракты из растений, белки, аминокислоты, углеводы, жиры, масла, полимеры, витамины и другие, подобные продукты.
Возможно, что растительный продукт в значительной степени состоит из одного и более сельскохозяйственных продуктов.
Следует обратить внимание на то, что следующая информация относится к вариантам осуществления настоящего изобретения и многочисленные изменения могут быть внесены без отклонения от цели изобретения. Далее изобретение поясняется примерами, которые не должны подразумеваться как ограничивающие цель изобретения. В противном случае, следует понимать, что возможно прибегнуть к другим различным вариантам осуществления изобретения, модификациям и их эквивалентам, которые после прочтения могут пожелать использовать специалисты без отклонения от общего смысла настоящего изобретения и/или цели прилагаемых формул.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1: Сайт-направленный мутагенез ППО-Alopecurus
Все кодирующие последовательности нуклеиновых кислот, а также все одинарные и двойные мутанты на основе SEQ ID NO: 1 или 3 были синтезированы и клонированы компанией Geneart (Geneart AG, Регенсбург, Германия). Рациональные мутанты были синтезированы компанией Geneart. Синтез случайных библиотек гена ППО был выполнен компанией Geneart. Плазмиды выделяли из Е. coli ТОРЮ путем минивыделения плазмиды и подтверждали правильность структуры путем секвенирования ДНК.
ПРИМЕР 2:Экспрессия и очистка рекомбинантных ППО дикого типа и мутантных ППО Alopecurus
(Взято из: Franck Е. Dayan, Pankaj R. Daga, Stephen О. Duke, Ryan M. Lee, Patrick J. Tranel, Robert J. Doerksen. Biochemical and structural consequences of a glycine deletion in the a-8 helix of protoporphyrinogen oxidase. Biochimica et Biophysica Acta 1804 (2010), 1548-56) Клоны в векторе pRSET были трансформированы в штамм BL21(DE3)-pLysS Е. coli. Клетки выращивали в 250 мл LB с 100 дг мл~1 карбенициллина, при встряхивании в течение ночи при температуре 37 °С. Культуры разбавили в 1 л LB с антибиотиком и выращивали при температуре 37 °С при встряхивании в течение 2 ч., индуцировали 1 ммоль IPTG и выращивали при температуре 25 °С при встряхивании в течение еще 5 часов. Сбор клеток производился с помощью центрифугирования при 1600xg, их промыли 0,09% NaCl, и выдерживали при температуре -80 °С. Лизис клеток осуществлялся с использованием френч-пресса при 140 МПа в 50 ммоль фосфата натрия рН 7.5, 1 моль NaCl, 5 ммоль имидазола, 5% глицерина и 1 цг мл~1 лейпептина. После лизиса, добавили 0,5 ед. бензоназы (Novagen, EMD Chemicals, Inc., Гиббстаун, Нью-Джерси) и PMSF (конечная концентрация 1 ммоль). Клеточный дебрис удалили центрифугированием при 3000xg. His-меченые белки ППО очистили на активированной никелем колонке Hitrap Chelating HP (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Пискатауэй, Нью-Джерси), уравновешенной 20 ммоль фосфата натрия рН 8.0, 50 ммоль NaCl, 5 ммоль имидазола, 5 ммоль MgC12, 0,1 ммоль EDTA и 17% глицерина. НПО элюировали 250 ммоль имидазола. Активный белок обессолили на колонке PD-10 (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Пискатауэй, Нью-Джерси), уравновешенной 20 ммоль натрий-фосфатного буфера, рН 7.5, 5 ммоль MgC12, 1 ммоль EDTA и 17% глицерина. Из каждого литра культуры было получено приблизительно 10 мг чистой НПО, которую хранили при температуре -20 °С до использования в анализах.
ПРИМЕР 3:Ферментный анализ ППО (не рекомбинантный)
Белок ППО (ЕС 1.3.3.4) экстрагировали из колеоптилей или ростков (150 г сырого веса) выращенной в темноте кукурузы, паслена черного, утреннего сияния и сеянцев канатника Теофраста в соответствии с описанием приведенным ранее (Гроссман и др., 2010). Перед сбором сеянцы оставили для позеленения в течение 2 часов на свету для того, чтобы достичь наиболее высокого уровня
специфической ферментативной активности в тилакоидных фракциях при низких концентрациях хлорофилла. При высоких концентрациях хлорофилла происходит значительное тушение флуоресценции, которое ограничивает количество зеленых тилакоидов, которые могут использоваться в тестировании. Раститительные материалы гомогенизировали в холоде с помощью блендера Braun с использованием отношения свежего веса к объему 1:4. В состав буфера для гомогенизации входил трис(гидроксиметил)аминометан (трис)-НО (50 ммоль; рН 7.3), сахароза (0,5 моль), хлорид магния (1 тМ), этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) (1 ммоль) и бычий сывороточный альбумин (2 г л"1). После фильтрации через четыре слоя Miracloth, были получены неочищенные пластидные препараты после центрифугирования при 10 ООО х g в течение 5 мин. и ресуспендирования в буфере для гомогенизации перед центрифугировании при 150 х g в течение 2 мин. для удаления неочищенного клеточного дебриса. Супернатант центрифугировали при 4000 х g в течение 15 мин., осадочную фракцию ресуспендировали в 1 мл буфера, содержащего трис-НС1 (50 ммоль; рН 7.3), EDTA (2 ммоль), лейпептин (2 мкмоль), пепстатин (2 мкмоль) и глицерин (200 мл л"1), и хранили при температуре -80°С до использования. Содержание белка в ферментных экстрактах определяли используя бычий сывороточный альбумин как стандарт. Активность ППО анализировалась способом флуориметрии путем мониторинга скорости формирования протопорфирина из химически восстановленного протопорфириногена IX при условиях начальной скорости. В состав смеси для анализа входил Трис-НС1 (100 ммоль; рН 7.3), EDTA (1 ммоль), дитиотреитол (5 ммоль), Tween 80 (0,085%), протопорфириноген IX (2 мкмоль) и 40 мкг экстрагированого белка в общем общеме 200 мкл. Реакцию инициировали путем добавления субстата протопорфириногена IX при температуре 22°С. сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля приготовили в растворе диметилсульфоксида (DMSO) (концентрация DMSO в смеси для анализа - 0,1 ммоль), затем добавили в смесь для анализа в концентрациях 0,005 мкМ - 5 мкМ перед инкубированием. Мониторинг флуоресценции осуществлялся непосредственно из смеси для анализа с использованием POLARstar Optima / Galaxy (BMG) при возбуждении на длине
волны 405 нм и мониторингом излучения на длине волны 630 нм. Неферментативная активность в присутствии экстракта, инактивированного нагреванием, была пренебрежимо мала. Степень ингибирования ферментативной активности, индуцицированного гербицидом, выражалась в виде процентного отношения степени ингибирования по сравнению с необработанной контрольной группой. Молярные концентрации соединения, при которой активность фермента составляет 50% от исходной (значения IC50), рассчитывались путем подставления значений в уравнение "доза - эффект" с использованием нелинейного регрессионного анализа.
ПРИМЕР 4:Ферментный анализ ППО (рекомбинантный)
Использовался протопорфирин (Proto) приобретенный у Sigma-Aldrich (Milwaukee, WI). Подготовка протогена осуществлялась по методу Джейкобса и Джейкобса (N.J. Jacobs, J.M. Jacobs, Assay for enzymatic protoporphyrinogen oxidation, a late step in heme synthesis, Enzyme 28 (1982) 206-219). Анализы проводились в 100 ммоль фосфата натрия рН 7.4 с 0,1 ммоль EDTA, 0,1% Tween 20, 5 мкмоль FAD и 500 ммоль имидазола. Кривые доза-эффект при применении ингибиторов НПО сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля и МС-15608 были получены в присутствии 150 ммоль протогена. Значения доза-эффект замерялись в диапазоне концентрации ингибитора от 1,00Е-05 моль - 1,00Е-12 моль. Ширина спектра возбуждения и ширина спектра излучения были установлены на 1,5 и 30 нм, соответственно. Все анализы производились в двух или трех параллельных испытаниях, измерения производились с использованием POLARstar Optima / Galaxy (BMG) при возбуждении на длине волны 405 нм и мониторингом излучения на длине волны 630 нм. Молярные концентрации соединения, при которой активность фермента составляет 50% от исходной (значения IC50), рассчитывались путем подставления значений в уравнение "доза - эффект" с использованием нелинейного регрессионного анализа. Значения измерялись по Alopecurus дикого типа и мутированной НПО (ALOMY) в сравнении с Amaranthus дикого типа и мутированной ППО (AMARE): Результаты представлены в следующей Таблице 3:
Аминокислотное замещение
SEQ. ID NO.
Виды
Относительная активность фермента (ЕФ/мин.)
Сафлуфенацил
1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-З-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо [b] [ 1,4] оксазин-
6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион
IC50 (М)
ПП02,
чувствительный к гербициду ППО
ALOMY
530
2Д1Е-07
3,64Е-11
ПП02 WC, чувствительный к гербициду ППО
AMARE
1000
1.86Е-09
5Д7Е-10
ПП02 АС, чувствительный к гербициду ППО
AMARE
800
1.78Е-10
5.96Е-11
dG210
AMARE
1.60Е-06
2Д2Е-09
R137I
ALOMY
780
1.81Е-06
1.30Е-09
R128I
AMARE
250
3,65Е-07
R137V
ALOMY
1060
1.93Е-06
5,99Е-10
R128V
AMARE
600
2,49Е-07
R137A
ALOMY
700
2,08Е-06
4.01Е-11
R128A
AMARE
730
1.29Е-07
1.40Е-10
R137L
ALOMY
420
6,73Е-06
3,56Е-09
R128L
AMARE
700
2,22Е-07
7,73Е-10
R137M
ALOMY
1200
"0,00001
8,25Е-10
R128M
AMARE
200
6,97Е-07
F438L
ALOMY
905
> 0,00001
8J1E-08
F420L
AMARE
200
7Д0Е-06
9,93Е-10
F438V
ALOMY
1300
> 0,00001
3,64Е-08
F420V
AMARE
200
1,59Е-06
1,61Е-09
F438M
ALOMY
460
> 0,00001
2ДЗЕ-09
F420M
AMARE
350
6J7E-07
2J5E-10
R137A, F438M
ALOMY
405
"0,00001
9,44Е-08
R128A, F420M
AMARE
400
> 0,00001
6Д4Е-09
R137A, F438V
ALOMY
220
"0,00001
5,37Е-07
R128A, F420V
AMARE
510
> 0,00001
2,50Е-08
F438I
ALOMY
910
"0,00001
6,01Е-08
F420I
AMARE
200
9Д9Е-07
4,95Е-10
F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
R137A, F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128A, F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
R137L, F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128L, F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
R137L, F438L
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128L, F420L
AMARE
300
> 0,00001
1J1E-06
R137L, F438V
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128L, F420V
AMARE
300
> 0,00001
1,51Е-06
R137L, F438M
ALOMY
230
не определено
2,83Е-06
R128L, F420M
AMARE
400
> 0,00001
2,46Е-07
R137L F438L
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128I, F420L
AMARE
200
> 0,00001
4,66Е-07
R137L F438V
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128I, F420V
AMARE
470
> 0,00001
4Д4Е-07
R137L F438M
ALOMY
322
не определено
3,42Е-06
R128I, F420M
AMARE
500
> 0,00001
2,46Е-07
R137V, F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128V, F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
R137V, F438L
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128V, F420L
AMARE
370
> 0,00001
4,41Е-07
R137V, F438V
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128V, F420V
AMARE
300
> 0,00001
4,47Е-07
R137M, F438L
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128M, F420L
AMARE
300
> 0,00001
6,95Е-07
R137M, F438M
ALOMY
220
не определено
1,09Е-06
R128M, F420M
AMARE
480
> 0,00001
7,05Е-08
R137A, F438L
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128A, F420L
AMARE
300
> 0,00001
1,62Е-08
R137M, F438I
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128M, F420I
AMARE
350
> 0,00001
4,45Е-07
R137L, F438I
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128L, F420I
AMARE
450
> 0,00001
1,23Е-06
R137M, F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128M, F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
R137V, F438I
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128V, F420I
AMARE
300
> 0,00001
2.23Е-07
R137A, F438I
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128A, F420I
AMARE
330
> 0,00001
2,46Е-08
R137V, F438M
ALOMY
582
не определено
1.62Е-06
R128V, F420M
AMARE
460
> 0,00001
4.27Е-08
R137I, F438I
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128I, F420I
AMARE
100
> 0,00001
4,ЗЗЕ-07
R137M, F438V
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128M, F420V
AMARE
270
> 0,00001
7,04Е-07
R137I, F438A
ALOMY
не определено
не определено
не определено
R128I, F420A
AMARE
не определено
не определено
не определено
Общее
наименование
Название
ПОСЛ.
Мутация
ЕФ/мин. (скорость)
IC50 (М)
ингибирование,
при 1x10-5 моль
ФОМЕСАФЕН
830
9,03Е-08
ФОМЕСАФЕН
R137V, F438M
634
> 1.00Е-05
ФОМЕСАФЕН
R137C
103
1.03Е-05
ФОМЕСАФЕН
R137N
> 1.00Е-05
ФОМЕСАФЕН
R137Y, F438M
129
> 1.00Е-05
ФОМЕСАФЕН
L415M, F438M
105
3,54Е-06
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-нитро-бензоат
830
1.87Е-08
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-нитро-бензоат
R137V, F438M
634
> 1,00Е-05
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-нитро-бензоат
R137C
103
4.22Е-07
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-
R137N
8,54Е-08
нитро-бензоат
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-нитро-бензоат
R137Y, F438M
129
> 1.00Е-05
ЛАКТОФЕН
(2-этокси- 1-метил-2-оксо-этил) 5-[2-хлоро-4-(трифторметил)фенокси]-2-нитро-бензоат
L415M, F438M
105
5,62Е-07
БУТАФЕНАЦИЛ
830
1.31Е-11
БУТАФЕНАЦИЛ
R137V, F438M
634
3,00Е-07
БУТАФЕНАЦИЛ
R137C
103
4Д9Е-10
БУТАФЕНАЦИЛ
R137N
8,32Е-10
БУТАФЕНАЦИЛ
R137Y, F438M
129
1.25Е-06
БУТАФЕНАЦИЛ
L415M, F438M
105
1.58Е-09
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
830
1.47Е-09
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
R137V, F438M
634
5.27Е-08
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
R137C
103
2,38Е-10
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
R137N
5,62Е-10
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
R137Y, F438M
129
5,63Е-07
КАРФЕНТРАЗОН-ЭТИЛ
L415M, F438M
105
2,80Е-07
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
830
1Д4Е-06
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
R137V, F438M
634
> 1,00Е-05
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
R137C
103
> 1,00Е-05
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
R137N
> 1,00Е-05
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
R137Y, F438M
129
> 1,00Е-05
АЦИФЛУОРФЕН
5-(2-хлоро-4-трифторметил-фенокси)-2-нитро-бензойная кислота
L415M, F438M
105
> 1,00Е-05
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
830
1,44Е-10
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-
R137V, F438M
634
> 1,00Е-05
тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137C
103
3,09Е-08
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137N
5Д1Е-10
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137Y, F438M
129
> 1,00Е-05
ФЛУМИОКСАЗИН
2-(7-фтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
L415M, F438M
105
2,29Е-06
ЦИНИДОН-ЭТИЛ
ethyl (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-
диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
ил)фенил]проп-2-еноат
830
8Д2Е-08
ЦИНИДОН-ЭТИЛ
этил (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-
диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
ил)фенил]проп-2-еноат
R137V, F438M
634
9,48Е-06
ЦИНИДОН-ЭТИЛ
этил (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
R137C
103
7,84Е-08
ил)фенил]проп-2-еноат
ЩШИДОН-ЭТИЛ
этил (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-
диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
ил)фенил]проп-2-еноат
R137N
2,88Е-07
ЩШИДОН-ЭТИЛ
этил (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-
диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
ил)фенил]проп-2-еноат
R137Y, F438M
129
> 1.00Е-05
ЩШИДОН-ЭТИЛ
этил (2)-2-хлоро-3-[2-хлоро-5-(1,3-
диоксо-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол-2-
ил)фенил]проп-2-еноат
L415M, F438M
105
> 1.00Е-05
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторметил)бензол
830
8.24Е-09
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторметил)бензол
R137V, F438M
635
> 1,00Е-05
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторметил)бензол
R137C
2J9E-07
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторметил)бензол
R137N
2,57Е-06
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-(трифторметил)бензол
R137Y, F438M
132
> 1,00Е-05
ОКСИФЛУОРФЕН
2-хлоро-1-(3-этокси-4-нитрофенокси)-4-
L415M, F438M
7,03Е-08
(трифторметил)бензол
ОКСАДИАРГИЛ
830
1Д7Е-09
ОКСАДИАРГИЛ
R137V, F438M
635
1.78Е-08
ОКСАДИАРГИЛ
R137C
7Д1Е-10
ОКСАДИАРГИЛ
R137N
3,48Е-09
ОКСАДИАРГИЛ
R137Y, F438M
132
1.46Е-08
ОКСАДИАРГИЛ
L415M, F438M
1.02Е-08
S-3100
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
830
6.45Е-11
S-3100
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
R137V, F438M
635
9,50Е-07
S-3101
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
R137C
5,52Е-10
S-3102
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
R137N
2,37Е-09
S-3103
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
R137Y, F438M
132
9,92Е-07
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
S-3104
этил 2-[[3-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]-2-пиридил]окси]ацетат
L415M, F438M
1,21Е-08
BAS 850H
1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4)
830
3.64Е-11
BAS 850H
См. выше
R137I, F438M
286
6,43Е-07
BAS 850H
См. выше
R137V, F438M
634
7,77Е-07
BAS 850H
См. выше
R137V, F438M
635
8,30Е-07
BAS 850H
См. выше
R137V, F438M
467
5,96Е-07
BAS 850H
См. выше
R137C
103
6.93Е-11
BAS 850H
См. выше
R137C
1Д8Е-10
BAS 850H
См. выше
R137C
1.07Е-10
BAS 850H
См. выше
R137G
409
2,90Е-10
BAS 850H
См. выше
R137N
9.37Е-11
BAS 850H
См. выше
R137N
9.42Е-11
BAS 850H
См. выше
R137F
489
1.46Е-09
BAS 850H
См. выше
R137S
481
9.24Е-11
BAS 850H
См. выше
R137T
683
5,78Е-10
BAS 850H
См. выше
R137H
240
1Д7Е-10
BAS 850H
См. выше
R137Q
1145
6Д0Е-10
BAS 850H
См. выше
R137Y, F438M
129
1,34Е-06
BAS 850H
См. выше
R137Y, F438M
132
6,05Е-07
BAS 850H
См. выше
R137Y, F438M
107
5Д2Е-07
BAS 850H
См. выше
R137F, F438M
123
2,22Е-06
BAS 850H
См. выше
L415M, F438M
105
2,79Е-09
BAS 850H
См. выше
L415M, F438M
4,44Е-09
BAS 850H
См. выше
L415M, F438M
4,08Е-09
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
830
2,43Е-10
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137V, F438M
635
> 1,00Е-05
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137C
9,29Е-10
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137N
7,45Е-09
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
R137Y, F438M
132
> 1.00Е-05
850 analogon
2-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)-4,5,6,7-тетрагидроизоиндол- 1,3-дион
L415M, F438M
9Д1Е-08
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
830
1.89Е-10
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
R137V, F438M
635
ЗД2Е-06
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
R137C
4,79Е-10
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
R137N
1.60Е-09
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
R137Y, F438M
132
ЗД2Е-06
850 analogon
1-метил-6-(трифторметил)-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-проп-2-инил-1,4-бензоксазин-6-ил)пиримидин-2,4-дион
L415M, F438M
1Д2Е-09
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
830
1,94Е-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137L F438M
286
1,43Е-07
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137V, F438M
467
1,51Е-07
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137G
409
5,00Е-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
R137F
489
6,94Е-10
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137S
481
3,ЗОЕ-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137T
683
3,36Е-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137H
240
2,83Е-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-
R137Q
1145
6.78Е-10
ацетат
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137Y, F438M
107
8,26Е-07
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137F, F438M
123
3.78Е-07
метил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-
2,6-диоксо-4-(трифторметил)пиримидин-
1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
L415M, F438M
2,62Е-07
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
830
8Д6Е-10
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137L F438M
286
1.60Е-07
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137V, F438M
467
2,36Е-07
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-
метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-
пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-
R137C
8,47Е-10
метокси-ацетат
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137G
409
8.78Е-10
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137Y, F438M
107
2,44Е-06
2-этоксиэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
L415M, F438M
1.09Е-07
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
830
2,99Е-09
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137L F438M
286
3,00Е-07
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137V, F438M
467
3,42Е-07
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137G
409
9,84Е-10
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137F
489
8,93Е-09
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137S
481
7,90Е-10
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137T
683
6,62Е-09
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-
R137H
240
9,90Е-09
метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-
пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-
метокси-ацетат
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137Q
1145
3,31Е-09
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137Y, F438M
107
5,57Е-06
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137F, F438M
123
5,58Е-06
циклогексил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
L415M, F438M
1Д4Е-06
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-
830
6,71Е-10
пиримидин- 1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137L F438M
286
1.82Е-07
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137V, F438M
467
2,03Е-07
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137C
3,86Е-09
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137G
409
1.25Е-09
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-
[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-
пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-
R137Y, F438M
107
5,38Е-06
метокси-ацетат
4-пиридилметил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
L415M, F438M
2,54Е-07
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
830
7,51Е-10
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
R137L F438M
286
2,04Е-07
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
R137V, F438M
467
2,00Е-07
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
R137C
9Д5Е-10
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
R137G
409
1.93Е-09
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
R137Y, F438M
107
2,66Е-06
(1 -метилциклопропил)метил 2-[2-[2-
хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-
(трифторметил)пиримидин-1-
ил] фенокси] фенокси] -2-метокси-ацетат
L415M, F438M
8,04Е-07
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
830
3,35Е-10
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137I, F438M
286
3,36Е-07
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-
R137V, F438M
467
7,50Е-07
[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-
пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-
метокси-ацетат
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137C
1.95Е-10
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137G
409
1.23Е-09
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
R137Y, F438M
107
1.45Е-06
2,2-дифторэтил 2-[2-[2-хлоро-4-фтор-5-[3-метил-2,6-диоксо-4-(трифторметил)-пиримидин-1-ил]фенокси]фенокси]-2-метокси-ацетат
L415M, F438M
1.51Е-07
IC50 (М): Концентрация ингибитора, необходимая для ингибирования 50% активности ферментов; > 1,00Е-5: указывает на очень высокое значение IC50 относительно границ замеров, что указывает на очень высокую устойчивость in vitro.
ПРИМЕР 5:Создание растений с устойчивостью к PRO-производным гербицидам с последовательностями ППО дикого типа или мутировавшими последовательностями ППО.
Сою (Glycine max), устойчивую к PRO-производным гербицидам, кукурузу
(Zea mays) и канолу (Brassica napus unuBrassica Rapa var. или Brassica campestris
L.) получают по методу, описанному Ольхофтом и др. (Патент США
2009/0049567). При трансформации сои или Arabidopsis thaliana 11110-
последовательности дикого типа или с мутированной ППО, основанные на
следующих последовательностях SEQ ID NO: 1 или 3, клонируют с
использованием стандартных техник клонирования, как описано у Sambrook et al.
(Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press) в бинарный вектор,
содержащий кассету маркерного гена устойчивости (AHAS) и мутировавшую
последовательность НПО (маркированную как GOI) между убиквитиновым
промотором (PcUbi) и терминаторной последовательностью нопалин синтазы
(NOS). В случае с трансформацией кукурузы мутировавшие последовательности
ППО или последовательности дикого типа клонируют с использованием
стандартных техник клонирования, как описано в работах Сэмбрук и др.
(Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press) в бинарный вектор,
содержащий кассету маркерного гена устойчивости (AHAS) и мутировавшую
последовательность НПО (маркированную как GOI) между убиквитиновым
промотором (ZmUbi) и терминаторной последовательностью нопалин синтазы
(NOS). Для трансформации растения бинарные плазмиды интродуцируют в
Agrobacterium tumefaciens. Плазмидные конструкты интродуцируют в пазушные
меристемные клетки сои в первичном узле ростковых эксплантатов с
использованием агробактериальной трансформации (трансформация посредством
Agrobacterium). После инокуляции и совместной культивации с Agrobacteria
эксплантаты переносят в среду интродукции ростков без селекции на одну
неделю. Эксплантаты впоследствии были перенесены в среду для индукции
ростков с 1-3 мкмоль имазапира (Arsenal) на 3 недели для селекции
трансформированных клеток. Эксплантаты со здоровыми
каллюсными/ростковыми подушками в первичном узле затем переносят в среду для элонгации побегов, содержащую 1-3 мкмоль имазапира до тех пор, пока корни не удлиняться или эксплантат не погибнет. Трансгенные ростки укореняют, подвергают анализу TaqMan на присутствие трансгена, переносят в почву и
выращивают в теплице до зрелости. Трансформация растений кукурузы осуществляется с помощью метода, описанного McElver and Singh (WO 2008/124495). Векторные конструкты трансформации растения, содержащие мутировавшие последовательности ППО, интродуцируют в незрелые зародыши кукурузы с помощью трансформации посредством Agrobacterium.
Трансформированные клетки были выбраны в среде селекции, в которую добавляют 0.5-1.5 мкмоль имазетапира, на 3-4 недели. Трансгенные ростки были регенерированы в среде регенерации растений и впоследствии пускают корни. Трансгенные ростки подвергают анализу TaqMan на присутствие трансгена до трансплантации в герметизирующую смесь и выращивают до спелости в теплице. Arabidopsis thaliana трансформируют последовательностями мутированной ППО или дикого типа способом "цветочного погружения", как описано McElver and Singh (WO 2008/124495). Трансгенные растения семейства Arabidopsis были подвергнуты анализу TaqMan для определения количества локусов интеграции. Трансформацию Oryza sativa (риса) осуществляют путем трансформации протопластов, как описано в работах Peng et al. (патент США 6653529) ТО или Т1 трансгенное растение сои, кукурузы и риса, содержащее мутировавшие последовательности ППО, тестируют на улучшение устойчивости к PRO-производным гербицидам в вегетационных испытаний и испытаний в рамках мини участков: сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля.
ПРИМЕР 6:Условия культуры ткани.
Разработан анализ мутагенеза в культуре ткани in vitro для выделения и определения характеристик ткани растения (например, ткани кукурузы или риса), обладающей устойчивостью к гербицидам-ингибиторам протопорфириноген оксидазы (сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного
контроля). В этом анализе используется сомаклональный вариант, который находится в культуре ткани in vitro. Спонтанные мутации, полученные из сомаклонального варианта, могут быть усилены с помощью химического мутагенеза и последующей селекции, поэтапно, или путем повышения концентраций гербицида.
Настоящее изобретение предоставляет условия культуры ткани для стимулирования роста мягкого эмбриогенного каллуса кукурузы или риса, имеющего способность регенерации. Каллюсы были получены из 4 различных сортов кукурузы или риса, включая Zea mays, сорта Japonica (Taipei 309, NiiniOnbare, Koshihikari) и Indica (Indica 1), соответственно. Семена прошли поверхностную стерилизацию в 70% растворе этанола в течение приблизительно 1 мин., а затем в течение 20 мин. - в 20% коммерчески доступном отбеливающем растворе Clorox. Семена был промыты стерилизованной водой и высеяны в среду для индукции каллюсов. Было выполнено тестирование различных сред для индукции каллюсов. Перечни ингредиентов тестировавшихся сред представлены в Таблице 4.
Ингредиент
Поставщи к
R001M
R025M
R026M
R327M
R008M
MS711R
Никотиновая кислота
Sigma
0,5 мг/л
Пиридоксин НС1
Sigma
0,5 мг/л
Тиамин НС1
Sigma
1,0 мг/л
Мио-инозитол
Sigma
100 мг/л
MES
Sigma
500
мг/л
500 мг/л
500 мг/л
500 мг/л
500 мг/л
500 мг/л
Мальтоза
VWR
30 г/л
30 г/л
30 г/л
30 г/л
Сорбит
Duchefa
30 г/л
Сахароза
VWR
10 г/л
30 г/л
NAA
Duchefa
50 дг/л
2,4-D
Sigma
2,0 мг/л
1,0 мг/л
MgCi2-6H20
VWR
750 мг/л
-рН
5,8
5,8
5,8
5,8
5,8
5,7
Гельрит (Gelrite)
Duchefa
4,0 г/л
2,5 г/л
Агароза, тип 1
Sigma
7,0 г/л
10 г/л
10 г/л
-> Автоклав
15 мин.
15 мин.
15 мин.
15 мин.
15 мин.
20 мин.
Кинетин
Sigma
2,0 мг/л
2,0 мг/л
NAA
Duchefa
1,0 мг/л
1,0 мг/л
ABA
Sigma
5,0 мг/л
Цефотаксим
Duchefa
0,1 г/л
0,1 г/л
0,1 г/л
Ванкомицин
Duchefa
0,1 г/л
0,1 г/л
0,1 г/л
Дисульфат G418
Sigma
20 мг/л
20 мг/л
20 мг/л
После тестирования нескольких вариантов была выбрана R001M среда для индукции каллюсов. Культуры выдерживались в темноте при температуре 30°С. Через 10-14 дней эмбриогенные каллюсы были иннокулированы в свежую среду.
ПРИМЕР 7: Селекция каллюсов, устойчивых к гербициду.
После того, как были определены условия культуры ткани, были установлены дальнейшие условия отбора путем анализа выживания ткани с
использованием кривых поражения с сафлуфенацилом, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дионом (CAS 1258836-72-4), флумиоксазином, бутафенацилом, ацифлуорфеном, лактофеном, бифеноксом, сулфентразоном, и ингибитором фотосинтеза диуроном в качестве негативного контроля. Было выполнено тщательное изучение накопления гербицида в ткани, а также сохранения его эффекта и стойкости в клетках и культуральной среде. Путем этих опытов была определена сублетальная доза для предварительной селекции мутировавшего материала. После определения начальной дозы сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазина, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитора фотосинтеза диурона в качестве негативного контроля в селекционной среде, была выполнена поэтапная селекция тканей путем повышения концентрации ингибитора ППО с каждым переносом до тех пор пока не будут получены клетки, активный рост которых происходит в присутствии токсичных доз. Полученные каллюсы затем инокулировались каждые 3-4 недели в R001M с селективным агентом. Селекции подверглись свыше 26 ООО каллюсов с 4-5 пересевами до тех пор, пока селективное давление не превысило токсические уровни в соответствии с кривыми поражения и наблюдениями за продолжаемой культурой. В качестве альтернативы, жидкие культуры инициировали из каллюсов в MS711R при медленном встряхивании и при еженедельных пересевах. После того, как жидкие культуры были созданы, селекционный агент был добавлен непосредственно в колбу при каждом пересеве. Через 2-4 цикла селекции жидких культур, культуры были перенесены на фильтры на твердой R001M среде для дальнейшего роста.
ПРИМЕР 8: Регенерация растений.
Устойчивая ткань была регенерирована и охарактеризована молекулярно для поиска мутаций генных последовательностей ППО и/или биохимически для поиска измененной активности ППО в присутствии селекционного агента. В дополнение, гены, участвующие прямо и/или косвенно в тетрапиррольном биосинтезе и/или в метаболических путях также были подвержены секвенированию для характеризации мутаций. В заключение, ферменты,
влияющие на основные процессы (такие, например, как метаболизм, транслокация, транспорт), также были подвержены секвенированию для характеризации мутаций. После гербицидной селекции, каллюсы были регенерированы с использованием режима среды R025M в течение 10 - 14 дней, R026M в течение около 2 недель, R327M до тех пор, пока не развились хорошо сформированные побеги, и R008S до тех пор, пока побеги не укоренились для переноса в теплицу. Регенерация производилась на свету. При регенерации селекционный агент не использовался. После того, как образовались сильные корни, МО регенеранты были перенесены в теплицу в квадратных или круглых вегетационных сосудах. Пока пересаженные растения не адаптировались к условиям в теплице, они находились под прозрачным пластиковым стаканом. В теплице установили цикл дня и ночи при температуре 27°С/21°С (80°F770°F) с натриевыми лампами высокого давления, мощностью 600 Вт, для освещения, чтобы поддерживать долготу дня 14 часов. Полив растений осуществлялся по мере необходимости, в зависимости от погоды. Растения удобрялись ежедневно.
ПРИМЕР 9: Анализ последовательностей.
Ткань листьев собрали из клонированных растений, разделили для трансплантирования и анализировали по отдельности. Геномную ДНК экстрагируют с использованием набора Wizard(r) 96 Magnetic DNA Plant System (Promega, Патент США Nos. 6,027,945 & 6,368,800) в соответствии с инструкциями производителя. Выделенную ДНК амплифицировали путем ПНР с использованием соответствующего прямого и обратного праймера.
ПНР амплификацию выполнили с использованием Hotstar Taq DNA Polymerase (Qiagen) с использованием тачдаун программы для термоциклирования в следующем порядке: 96°С в течение 15 мин., после чего следует 35 циклов (96°С, 30 сек.; 58°С - 0,2 °С на один цикл, 30 сек.; 72°С, 3 мин. и 30 сек.), в течение 10 мин. при 72°С. ПНР продукты верифицировали в отношении концентрации и размера фрагментов путем электрофореза в агарозном геле. Дефосфорилированные ПНР продукты анализировали прямым секвенированием с использованием ПЦР праймеров (DNA Landmarks или Entelechon). Файлы хроматографии (.scf) анализировали на мутацию, относительно гена дикого типа с использованием Vector NTI Advance 10(tm)
(Invitrogen). На основании данных секвенирования в нескольких отдельных растениях идентифицировали мутации. Анализ последовательностей был выполнен с использованием репрезентативных хроматограмм и с использованием соответствующего программного обеспечения для выравнивания последовательностей AlignX с установками параметров по умолчанию, результаты прошли корректировку для того, чтобы определить вторичные пики.
ПРИМЕР 10: Демонстрация устойчивости к гербицидам.
Трансгенное растение ТО или Т1 сои, кукурузы и риса, содержащее последовательности 111101 и 111102, тестируют на улучшение устойчивости к гербицидам в рамках вегетационных испытаний и испытаний в рамках мини участков со следующими гербицидами: сафлуфенацил, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля. Для обработки до всхода растений, гербициды применяют непосредственно после посева подводящими соплами. Контейнеры орошают осторожно, чтобы обеспечить прорастание и рост и затем покрывают прозрачными пластиковыми навесами до тех пор, пока не появятся корни. Навес обеспечивает одинаковое прорастание испытуемых растений до тех пор, пока не будут использованы гербициды. Для обработки после всхода растений, испытуемые растения сначала выращивают до высоты от 3 до 15 см, в зависимости от характера растения, и только затем обрабатывают гербицидами. Для этой цели испытуемые растения либо засеивают непосредственно в контейнеры и там же их выращивают, либо сначала их выращивают отдельно и трансплантируют в испытуемые контейнеры за несколько дней до обработки.
Для испытания ТО растений можно использовать отростки. В случае с соей, оптимальная длина отростка составляет от около 7,5 до 10 см с, по меньшей мере, двумя имеющимися узлами. Каждый отросток берут от исходного трансформанта (материнское растение) и погружают в порошок с гормоном, способствующим появлению корней (индол-3-масляная кислота, ИМК). Затем отросток помещают в Oasis Wedges внутри купола. Также одновременно берут отростки дикого типа, которые будут контрольными образцами. Отростки хранят в биокуполе 5-7 дней и
затем трансплантируют в горшки и затем акклимируют в камеру роста на еще 2 дня. Впоследствии, отростки переносят в теплицу, акклимируют около 4 дней и затем подвергают испытанию опрыскиванием согласно показаниям. В зависимости от вида растения хранят при 10-25°С или 20-35°С. Период испытаний составляет 3 недели. В это время за растениями ухаживают и оценивают их реакцию на индивидуальную обработку. Оценка нанесения вреда гербицидами проводится спустя 2 и 3 недели после обработки. Нанесение вреда растению оценивается по шкале от 0% до 100%, где 0 означает отсутствие вреда, а 100% - полное уничтожение.
Трансгенные растения семейства Arabidopsis thaliana анализировались на предмет более высокой устойчивости к сафлуфенацилу, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазину, бутафенацилу, ацифлуорфену, лактофену, бифеноксу, сулфентразону, и ингибитору фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля в 48-луночных планшетах. Таким образом, семена Т2 простерилизованы на поверхности путем перемешивания на протяжении 5 минут в растворе этанол - вода (70+30 по объему), однократно промыты раствором этанол - вода (70+30 по объему) и дважды стерилизованной деионизированной водой. Семена повторно помещены в 0,1% агар, растворенный в воде (масса/объем). От четырех до пяти семян помещены в твердую питательную среду, состоящую из полуконцетрированного питательного раствора Мурасиге-Скуга, рН 5,8 (Murashige and Skoog (1962) Physiologia Plantarum 15: 473-497). Соединения растворены в диметилсульфоксиде (ДМСО) и добавлены к среде до момента затвердевания (конечная концентрация ДМСО 0,1%). Ининкубирование на многолуночных планшетах осуществляется в камере роста при температуре 22°С, относительной влажносьти 75% и 110 мкмоль Phot * m" * s"1 при 14: 10 часовой фотопериоде темнота/свет. Задержка роста составляет от семи до десяти дней после посева по сравнению с растениями дикого типа. Результаты представлены в Таблице 5 и на Фигуре 2.
Дополнительно трансгенные растения Т1 семейства Arabidopsis тестировались на улучшение устойчивости к гербицидам в рамках вегетационных испытаниий с использованием следующих гербицидов: сафлуфенацил, 1,5
диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (BAS 850Н; CAS 1258836-724), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля. Результаты представлены в Таблице 3
Am_nn02_R137L
3300
Ш50
Am_nn02_R137M
3300
Ш50
Am_nn02_F438V
1560
Ш50
Am_nn02_F438I
3300
Ш50
Am_nn02_F438L
1700
Ш50
Am_nn02_F438M
2500
Ш50
Am_nn02_R 137 A_F43 8V
2500
Ш50
Am_nn02_R 137 A_F43 81
950
Ш50
Am_nn02_R 137 A_F43 8L
2300
Ш50
Am_nn02_R 137 A_F43 8M
2500
Ш50
Am_nn02_R 137L_F43 81
2700
Ш50
Am_nn02_R 137L_F43 8L
2700
Ш50
Am_nn02_R 137L_F43 8M
3100
Ш50
Am_nn02_R 137M_F43 8V
1900
Ш50
Am_rm02_R 137M_F43 81
1740
Ш50
Am_rm02_R 137M_F43 8L
1340
Ш50
Am_nn02_R 137M_F43 8M
1700
Ш50
ПРИМЕР 11: Гербицидная селекция с использованием культуры
ткани.
Выбор используемой среды, а также построение кривых поражения осуществлялись в соответствии с определением, приведенным выше. Для селекции использовались различные техники. Применялась либо поэтапная селекция, либо сразу же применялся летальный уровень гербицида. В любом случае все каллюсы были перенесены для каждого нового цикла селекции. Селекция осуществлялась в ходе 4-5 циклов культивирования, при этом каждый
цикл длился 3-5 недель. Каллюсы были помещены на нейлоновые мембраны для того, чтобы упростить перенос (листы с порами 200 мкм, Biodesign, Сако, Мэн). Мембраны вырезались таким образом, чтобы соответствовать чашкам Петри 100x20 мм, и подвергались паровой стерилизации перед использованием с 25-35 каллюсами (средний вес/каллюс - 22 мг) на каждой чашке. В дополнение, один набор каллюсов подвергали селекции в жидкой культуральной среде с еженедельным пересевом, после чего следовала дальнейшая селекция на полутвердой среде. Линии мутантов отбирались с использованием сафлуфенацила, 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь] [ 1,4] оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (CAS 1258836-72-4), флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон, и ингибитора фотосинтеза диурона в качестве негативного контроля. Эффективность получения мутантов - высокая, на основании процентного отношения каллюсов, давших регенерируемую мутантную линию, или количества линий в соответствии с определением по грамму использованной ткани.
ПРИМЕР 12: Трансформация целых растений кукурузы и проверка на устойчивость к ингибиторам ППО.
Незрелые зародыши трансформировались в соответствии с процедурой, описанной в работе Пенга и др. (WO2006/136596). Растения тестировались на наличие Т-ДНК путем проведения анализа Taqman, при котором целью являлся nos-терминатор, присутствующий во всех конструктах. Растения без признаков поражения были отправлены в теплицу для закаливания и испытания обрызгиванием. Растения были по-отдельности пересажены в почву MetroMix 360 в 4-дюймовые горшки. После помещения в теплицу (цикл день/ночь - 27°С /21°С, продолжительность дня 14 часов, которая обеспечивалась за счет использования 600 Вт натриевых ламп высокого давления) они прорастали на протяжении 14 дней. Затем проводилась обработка в форме обрызгивания 25 - 200 г ав/га сафлуфенацилом + 1,0% объемное содержание (ММС) и/или 25 - 200 г ав/га 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (ВAS 850Н; CAS 1258836-724) плюс 1% ММС. Другие гербициды-ингибиторы НПО также тестировались аналогичным образом с целью подтверждения перекрестной стойкости:
флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля. Оценка поражения, вызванного гербицидами, проводилась на 7, 14 и 21 день после обработки. Оценка поражения, вызванного гербицидами, проводилась на 2, 7, 14 и 21 день после обрызгивания с тем, чтобы выявить новые точки роста и определить общее состояние здоровья растения. Наиболее здоровые растения переносились в горшки объемом один галлон, наполненные почвой MetroMix 360 для получения семян. Результаты представлены в Таблице 6 и на Фигуре 5. Специалисты в данной области подтвердят, что при замещении природного транзитного пептида 111102 лисохвоста, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2, на гетерологичный транзитный пептид индийской кукурузы (SEQ ID NO: 8) или сорго двухцветного (SEQ ID NO: 9), природный N-терминальный конец SEQ ID NO: 2 укорачивается на 7 аминокислот. Поэтому предпочтительные участки мутации в позициях R137 или F438 или соответствующие, например, данным позициям на SEQ ID NO: 2, согласно более подробному описанию далее по тексту настоящего документа, являются идентичными позициям R130 или F431 в указанных гибридных белках. См., например, конструкт под именем tp-ZeamannO2::AlomyPPO2_R130A_F431V в Таблице 6.
нетрансформированная
ЦИКИЙ
тип
AlomyPP01_R138A
AlomyPPOl_Y420V
AlomyPPOl_Y420M
AlomyPPO 1_R138A_Y420V
AlomyPPOl_R138A_Y420M
tp-Zeamairn02:: AlomyPP02
tp-
Zeamairn02:: AlomyPP02_R 130A
tp-
Zeamairn02:: AlomyPP02_F 431V
tp-
Zeamairn02:: AlomyPP02_R 130A_F431V
tp-Sorbinn02:: AlomyPP02
tp-
Sorbinn02:: AlomyPP02_Rl 30A
tp-
Sorbinn02:: AlomyPP02_F4 31V
tp-
Sorbinn02:: AlomyPP02_Rl 30A_F431V
tp-Zeamairn02::c-AlomyPPO2_R130L
tp-ZeamairfI02::c-AlomyPPO2_R130A_F431M
tp-ZeamairfI02::c-AlomyPPO2_R130L_F43 IV
tp-ZeamairfI02::c-AlomyPPO2_R130L_F431M
tp-ZeamairfI02::c-AlomyPPO2_R130M_F43 IV
tp-Zeamann02::c-AlomyPPO2_R130M_F431M
tp-Sorbinn02::c-
AlomyPPO2_R130A_F431M
tp-Sorbinn02::c-AlomyPPO2_R130L_F43 IV
tp-Sorbinn02::c-AlomyPPO2_R130L_F431M
AlomyPP02
AlomyPP02_R137A
AlomyPP02_R137L
AlomyPP02_R137I
AlomyPP02_R137M
AlomyPP02_F438V
AlomyPP02_F438L
AlomyPP02_F438I
AlomyPP02_F438M
AlomyPP02_Rl 37 A_F43 8V
AlomyPP02_Rl 37A_F43 81
AlomyPP02_Rl 37A_F43 8M
AlomyPP02_Rl 37M_F43 81
Конструкт
SEQ ID NO
Линия
дпо
Дпо
ДПО
ДПО
RTP11168-1
AlomyPPOl
RTP11168-1
RTP11168-1
RTP11170-1
AlomyPPOl_Y420V
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11170-1
RTP11171-1
AlomyPPOl_Y420M
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11171-1
RTP11172-3
AlomyPPO 1_R13 8 A_Y420V
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11172-3
RTP11173-1
AlomyPPO 1_R13 8 A_Y420M
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11173-1
RTP11180-1
tp-Sorbinn02::AlomyPP02_F43 IV
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11180-1
RTP11181-1
tp-
SorbinnO2::AlomyPPO2_R130A_F43 IV
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
RTP11181-1
ПРИМЕР 13: Трансформация сои и проверка на устойчивость к ингибиторам ППО
Соя сорта Jake была трансформирована как ранее было описано в работах Шиминьского и др. Фитохимия, ред. 5:445-458 (2006). После регенерации трансформанты трансплантировались в почву в маленьких горшочках, помещены в камеры роста (16 ч днем/ 8 ч ночью; 25°С днем/ 23°С ночью; 65% относительной влажности; 130-150 гпЕ m-2 s-1) и далее тестировались на присутствие Т-ДНК с помощью анализа Taqman. Спустя несколько недель, здоровые, трансгенные положительные, с единичной копией линии трансплантировались в более крупные горшки и выращивались в камере роста. Оптимальная длина побега для срезания составляет порядка 3-4 см с, по меньшей мере, двумя имеющимися узлами. Каждый отросток брался от исходного трансформанта (материнское растение) и погружался в порошок с гормоном, способствующим появлению корней (индол-3-масляная кислота, ИМК). Затем отросток помещался в Oasis Wedges внутри купола. Материнскому растению давали достигнуть зрелости и использовали для получения семян. Также одновременно брались отростки дикого типа, которые служили для целей негативного контроля. Отростки хранились в биокуполе 5-7 дней и затем трансплантировались в горшки и затем акклимировались в камеру роста еще на два дня. Одновременно с этим отростки переносились в теплицу, акклимировались на протяжении 4 дней, а затем подвергались обработке обрызгиванием в объеме 0 - 200 г ав/га сафлуфенацилом (ВAS 800Н) плюс 1% ММС и/или 25 - 200 г ав/га 1,5-диметил-6-тиоксо-3-(2,2,7-трифтор-3-оксо-4-(проп-2-инил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]оксазин-6-ил)-1,3,5-триазинан-2,4-дион (ВAS 850Н; CAS 1258836-72-4) плюс 1% ММС. Другие гербициды-ингибиторы ППО также тестировались аналогичным образом с целью подтверждения перекрестной стойкости: флумиоксазин, бутафенацил, ацифлуорфен, лактофен, бифенокс, сулфентразон и ингибитор фотосинтеза диурон в качестве негативного контроля. Оценка поражения, вызванного гербицидами, проводилась на 2, 7, 14 и 21 день после обработки. Результаты представлены в Таблице 7 и на Фигуре 4.
BAS 850Н г
BAS 800H г активного
активного
вещества/га
вещества/га
Номер
SEQ ID NO.
линии
100
200
Дикого типа
А1отуРР02
AlomyPP02_R137A
AlomyPP02_R137V
AlomyPP02_R137I
AlomyPP02_R137L
AlomyPP02_R137M
AlomyPP02_F438V
AlomyPP02_F438I
AlomyPP02_F438L
AlomyPP02_F438M
AlomyPP02_Rl 37 A_F43 8V
AlomyPP02_Rl 37A_F43 81
AlomyPP02_R137A_F438L 1
AlomyPP02_R137A_F438M 1
AlomyPP02_R137L_F438V 1
AlomyPP02_R137L_F438I 1
AlomyPP02_R137L_F438L 1
AlomyPP02_R137L_F438M 1
AlomyPP02_R137M_F438V 1
AlomyPP02_R137M_F438I 1
AlomyPP02_R137M_F438L 1
AlomyPP02_R137M_F438M 1
AlomyPPO 1_R138 A 1
AlomyPPO 1_R138L 1
AlomyPPO 1_Y420V 1
AlomyPPO 1_Y420M 1
AlomyPPO 1_R138A_Y420V 1
AlomyPPOl_R138A_Y420M 1
AlomyPPOl_R138L_Y420V 1
AlomyPPO 1_R138L_Y420M 1
Ниже приведено определение оценок степеней повреждения, порядок
определения которых указан выше: Оценка Описание поражения
0 отсутствие поражения
1 Минимальная степень поражения, лишь несколько участков поражения листьев или хлороза.
2 Минимальная степень поражения с незначительно более интенсивным хлорозом. Общие точки роста неповреждены.
3 Незначительно более выраженная степень повреждения вторичной листовой ткани, при этом основные листья и точки роста неповреждены.
4 Общая морфология растений незначительно отличается, присутствует хлороз и некроз вторичных точек роста и листовой ткани. Стебли неповреждены. Возобновление роста вероятно произойдет в течение 1 недели.
5 Общая морфология растений совершенно очевидно отличается, присутствует хлороз и некроз нескольких листьев и точек роста, при этом основные точки роста неповреждены. Стеблевая ткань по-прежнему зеленая. Возобновление роста вероятно произойдет в течение 1 недели.
6 Новые листья имеют видимые следы сильного поражения. Высокая вероятность того, что растение выживет исключительно в результате возобновления роста в различных точках роста. Большинство листьев поражены хлорозом/некрозом, но стеблевая ткань по-прежнему зеленая. Возможно возобновление роста, но при этом с видимыми следами поражения.
7 Большинство активных точек роста поражены некрозом. Может присутствовать единственная точка роста, благодаря которой растение выживет, и наблюдаться частичное поражение хлорозом,
либо может быть зеленой с частичным поражением некрозом. Два листа могут иметь признаки поражения хлорозом, при этом некоторые участки могут быть зелеными; остальная часть растения, включая стебель, поражена некрозом.
8 Растение вероятно погибнет, все точки роста поражены некрозом. Один лист может по-прежнему иметь признаки поражения хлорозом, при этом некоторые участки могут быть зелеными. Остальная часть растения поражена некрозом.
9 Растение погибло.
* Испытания не проводились
ПРИМЕР 14: Секвенирование и сборка генов ППО Alopecurus полной
длины
Изоляция РНК и синтезирование кДНК
Ткань листьев Alopecurus myosuroides была отобрана, заморожена и погружена в жидкий азот, а вся РНК была извлечена с использованием комплекта Ambion RNAqueous-Midi (АМ1911, Ambion) с комплектом изолирования РНК растений (АМ9690, Ambion) согласно рекомендациям изготовителя. Последнее элюирование выполнялось с использованием 10 мкл раствора для элюирования. Для подтверждения качества извлеченной РНК, 1 мкл конечного продукта пропустили через биоанализатор Bioanalyzer 2100 с применением комплекта RNA 6000 Nano по методу Plant RNA Nano. Получившийся раствор с содержанием РНК поместили на хранение при температуре -80° С до подготовки библиотеки.
Для сборки генов НПО Alopecurus myosuroides был выполнен эксперимент по секвенированию РНК. Библиотеки секвенирования РНК были составлены с использованием комплектов для подготовки образцов РНК TruSeq V2 (RS-122-2001) из Illumina в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, 1 мкг от всей РНК дважды очистили в колонне poly-dT. В ходе второго этапа элюирования РНК была разбита на фрагменты и использована для синтезирования кДНК. Данный материал был подвергнут обратной транскрипции, РНК удалили, и получили вторую нить. После притупления концов фрагмента концы 3' были подвергнуты аденилированию, а на помеченный адаптеры для конкрентной операции секвенирования нанесли лигатуру с обеих концов фрагмента. Фрагменты ДНК, имеющие по обоим концам адаптеры, были обогащены с
использованием ПЦР амплификациия в 15 циклов. Перед началом операции секвенирования библиотеки объединяют вместе. Объединенные библиотеки сначала поместили на проточную кювету с использованием комплекта TruSeq РЕ Cluster V3 (РЕ-401-3001) на cBot, а кластеры амплифицировали на устройстве. После этого проточную кювету перенесли на машину Illumina Hiseq, а материал на проточной кювете затем подвергли секвенированию с использованием комплекта Illumina TruSeq SBS Kit V3 (FC-401-3001) согласно рекомендациям изготовителя.
Полученные секвенатором Illumina Hiseq данные сначала были обработаны на обоих концах с использованием порога качества 15 при помощи FASTQC Quality Trimmer (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/). Далее последовательности были проанализированы для удаления любых последовательностей адаптера Illumina с применением CutAdapt (http://code.google.eom/p/cutadapt/). Ряды последовательностей были собраны с использованием алгоритма CLC bio (версия 4.01). Последовательности генов НПО полной длины (SEQUENCE ID 1, 3) выявлялись посредством выполнения поиска BLAST по запросу последовательности ППО Arabidopsis thaliana и с использованием в качестве базы данных сборки Alopecurus myosuroides CLC bio.
ПРИМЕР 15: Демонстрация гербицидной устойчивости в системе временной экспрессии табака
Временная экспрессия генов ППО Alopecurus myosuroides (SEQUENCE ID 1 или 3) выполняется согласно описанию, приведенному ранее (Voinnet О., et al., 2003, The Plant Journal 33, 949-956). Вкратце, клонирование бинарного вектора с генами ППО Alopecurus myosuroides выполняется согласно описанию в ПРИМЕРЕ 5, и трансформируется в Agrobacterium tumefaciens (штамм: pGV 2260). Молодые листья Nicotiana benthamiana подвергают инфильтрации при помощи трансгенного Agrobacterium suspension (OD600 of 1.0), который несет в себе конструкты бинарных векторов в гене ППО Alopecurus myosuroides. Через два-три дня после этого пуансоны инфильтрации дисков листьев (0,75 см в диаметре) переносятся на 6-луночную чашку с средой, содержащей изучаемый гербицид в различных концентрациях. Ининкубирование на многолуночных планшетах осуществляется в камере роста при температуре 22°С, относительной влажносьти 75% и ПО мкмоль Phot * m"2 * s"1 при 14: 10 часовой фотопериоде темнота/свет.
Гербицидное действие контролируется визуальным осмотром и с использованием анализа продуктивности фотосинтеза посредством сбора изображений РАМ (Вальц, Эффельтрих, Германия) через 24, 48 и 96 часов после обработки. Факторы устойчивости рассчитываются на основании значений IC50 по PSII снижения урожайности трансформированных дисков листьев по сравнению с нетрансформированными.
1. Способ получения трансгенного растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим нетрансформированным растением дикого типа, включающий трансформацию клетки растения или ядра клетки растения или ткани растения с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из:
(a) изолиронного полинуклеотида, кодирующего полипептид с 11110, содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог;
(b) изолиронного полинуклеотида, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(c) изолиронного полинуклеотида, который, в результате дегенерации генетического кода, может быть выведен из полипептида с 11110, содержащего последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог, и придающего повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(d) изолированного полинуклеотида с идентичностью 30% или более, например, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% или 99% (процентов) или более с последовательностью полинуклеотида, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придающего повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
(e) изолированного полинуклеотида, который гибридизирует с изолированным полинуклеотидом пунктов (а) - (с) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения дикого типа, трансгенным растением или его частью;
и регенерацию трансгенного растения из ядра клетки данного трансформированного растения, из клетки растения или ткани растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам.
(a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с 11110, содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог;
(b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог;
(c) молекулы нуклеиновой кислоты, которая, в результате дегенерации генетического кода может быть выведена из последовательности полипептида с 11110 SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолога, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(d) молекулы нуклеиновой кислоты с идентичностью 30% или более, предпочтительно 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или более с последовательностью молекулы нуклеиновой кислоты полинуклеотида, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 или 3 или ее гомолог, и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(e) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с 11110, с идентичностью 30% или более, предпочтительно, по меньшей мере, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или более с аминокислотной последовательностью полипептидной последовательности SEQ ID NO: 2 или 4, и придающей повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например, нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа;
(f) молекулы нуклеиновой кислоты, которая гибридизирует с молекулой нуклеиновой кислоты пунктов (а), (Ь), (с), (d) или (е) в жестких условиях гибридизации и придает повышенную устойчивость или стойкость к гербицидам по сравнению с соответствующей, например,
(a)
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, отличающаяся тем, что
гомолог пункта (а) или (с) относится к полипептиду с мутированной 11110, содержащему последовательность SEQ ID N0: 2 или 4, в которой аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 SEQ ID N0: 2 и/или аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 SEQ ID N0: 2, и/или аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 SEQ ID N0: 2 замещена другой аминокислотой.
4. Конструкт нуклеиновой кислоты, который содержит и придает экспрессию указанной молекуле нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, содержащий один или более регуляторных элементов.
5. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, или конструкт нуклеиновой кислоты по п. 4.
6. Полипептид с ППО, кодированный молекулой нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, или полипептид, содержащий последовательность SEQ ID N0: 2 или 4 или ее гомолог.
7. Полипептид по п. 6, отличающийся тем, что гомолог относится к полипептиду с мутированной ППО, содержащему последовательность SEQ ID N0: 2 или 4, в которой аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 SEQ ID N0: 2 и/или аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 SEQ ID N0: 2, и/или аминокислота в позиции или соответствующая позиции 438 SEQ ID N0: 2 замещена другой аминокислотой.
8. Ядро клетки растения, клетка растения, ткань растения, материал для размножения, пыльца, потомство, собранный материал или растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3.
9. Ядро клетки растения, клетка растения, ткань растения, материал для размножения, семена, пыльца, потомство или часть растения, приводящие после регенерации к получению растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам; или его часть; с указанной устойчивостью или стойкостью к
4.
гербицидам, увеличенной по сравнению с соответствующим растением дикого типа, полученным способом по п. 1, или трансформируемые с помощью молекулы нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, или конструкта нуклеиновой кислоты по п. 4.
10. Ядро клетки трансгенного растения, клетка трансгенного растения, трансгенное растение или его часть по п. 8 или 9, выведенные из однодольного растения.
11. Ядро клетки трансгенного растения, клетка трансгенного растения, трансгенное растение или его часть по п. 8 или 9, выведенные из двудольного растения.
12. Ядро клетки трансгенного растения, клетка трансгенного растения, трансгенное растение или его часть по п. 8 или 9, отличающиеся тем, что соответствующее растение выбрано из группы, включающей кукурузу (маис), пшеницу, рожь, овес, тритикале, рис, ячмень, соевые бобы, арахис, хлопок, рапс, включая канолу и зимний рапс, маниок, перец, подсолнечник, сахарный тростник, сахарную свеклу, лен, огуречник аптечный, сафлор, льняное семя, примулу, семена рапса, репу масличную, бархатцы, пасленовые растения, включая картофель, табак, баклажан, томаты; виковые виды, горох, люцерну, кофе, какао, чай, ивовые виды, масличную пальму, кокос, многолетние травы, фуражные культуры и Arabidopsis thaliana.
13. Способ борьбы с нежелательной растительностью в месте выращивания растений, включающий следующие этапы:
a) получение в указанном месте растения, которое содержит, по меньшей мере, одну молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, которое является устойчивым или стойким к гербицидам-ингибиторам 11110 и/или
b) внесение в указанное место эффективного количества указаного гербицида.
14. Применение нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3 для получения растения с повышенной устойчивостью или стойкостью к гербицидам по сравнению с соответствующим нетрансформированным растением дикого типа.
14.
a) выращивание указанного растения; и
b) нанесение гербицидной композиции, содержащей гербицид-ингибитор 11110, на растение и сорняки, при этом гербицид обычно ингибирует протопорфириноген оксидазу на уровне гербицида, который препятствовал бы росту соответствующего растения дикого типа.
16. Комбинация, используемая для борьбы с сорняками, содержащая (а) молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, полинуклеотид которой может быть экспрессирован в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО.
17. Способ приготовления комбинации, испоьзуемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) получение молекулы нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, при этом данная молекула нуклеиновой кислоты может быть экспрессирована в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) получение гербицида-ингибитора ППО.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что указанный этап получения молекулы нуклеиновой кислоты включает получение растения, содержащего указанную молекулу нуклеиновой кислоты.
19. Способ по п. 17, отличающийся тем, что указанный этап получения молекулы нуклеиновой кислоты включает получение семян, содержащих указанную молекулу нуклеиновой кислоты.
20. Способ по п. 19, дополнительно включающий этап нанесения гербицида-ингибитора ППО на семена.
21. Применение комбинации, используемой для борьбы с сорняками, содержащей (а) молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2 или 3, при этом данная молекула нуклеиновой кислоты может быть экспрессирована в растении, чтобы тем самым придать растению устойчивость к гербициду-ингибитору ППО; и (Ь) гербицид-ингибитор ППО, для борьбы с сорняками в месте выращивания растений.
16.
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
MVIQSITHLSPNLALPSPLSVSTKNYP VAVMGN 1SEREEPTSAKRVAWG
MVIQSITHLSPNLALPSPLSVSTKNYP VAVMGN 1 SEREEPTSAKRVAWG
MVIQSITHLSPNLALPSPLSVSTKNYP VAVMGN 1 SEREEPTSAKRVAWG
MVIQSITHLSPNLALPSPLSVSTKNYP VAVMGN 1 SEREEPTSAKRVAWG
MLTSATTPSSSSASSRASTRFASSSRPRRTAYARGRRLRPVLAMAASDDPR-ARSVAWG
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
AGVSGLAAAYKLKSHGLSVTLFEADSRAGGKLKTVKKDGFIWDEGANTMTESEAEVSSLI AGVSGLAAAYKLKSHGLSVTLFEADSRAGGKLKTVKKDGFIWDEGANTMTESEAEVSSLI AGVSGLAAAYKLKSHGLSVTLFEADSRAGGKLKTVKKDGFIWDEGANTMTESEAEVSSLI AGVSGLAAAYKLKSHGLSVTLFEANSRAGGKLKTVKKDGFIWDEGANTMTESEAEVSSLI AGISGLVAAYRLSKSGVRVTVFEADDRAGGKIRTNSDSGFLWDEGANTMTESALEASRLI
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
DDLGLREKQQLPISQNKRYIARDGLPVLLPSNPAALLTSNILSAKSKLQIMLEPFLWRKH DDLGLREKQQLPISQNKRYIARAGLPVLLPSNPAALLTSNILSAKSKLQIMLEPFLWRKH DDLGLREKQQLPISQNKRYIARDGLPVLLPSNPAALLTSNILSAKSKLQIMLEPFLWRKH DDLGLREKQQLPISQNKRYIARDGLPVLLPSNPAALLTSNILSAKSKLQIMLEPFLWRKH DDLGLEDRLQYPNSQHKRYTVKDGAPALIPSDPIALMKSSLLSTKSKFKLFLEPFLYDKS
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
N ATELSDEHVQESVGEFFERHFGKEFVDYVIDPFVAGTCGGDPQSLSMHHTFPEVWN
N ATELSDEHVQESVGEFFERHFGKEFVDYVIDPFVAGTCGGDPQSLSMHHTFPEVWN
N ATELSDEHVQESVGEFFERHFGKEFVDYVIDPFVAGTCG-DPQSLSMHHTFPEVWN
N ATELSDEHVQESVGEFFERHFGKEFVDYVIDPFVAGTCG-DPQSLSMYHTFPEVWN
STKSSKKVSDEHISESVGSFFERHFGKEWDYLIDPFVAGTSAGDPESLSIRHAFPGLWN
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
IEKRFGSVFAGLIQSTLLSKKEKGGENASIKKPRVRGSFSFQGGMQTLVDTMCKQLGEDE IEKRFGSVFAGLIQSTLLSKKEKGGENASIKKPRVRGSFSFQGGMQTLVDTMCKQLGEDE IEKRFGSVFAGLIQSTLLSKKEKGGENASIKKPRVRGSFSFQGGMQTLVDTMCKQLGEDE IEKRFGSVFAGLIQSTLLSKKEKGGENASIKKPRVRGSFSFQGGMQTLVDTMCKQLGEDE LEKKYGSIIVGAIMSKLTAKGDKKGSAVSGKGRNKRASFSFHGGMQTLVDALHKEVGDGN
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
LKLQCEVLSLSYNQKGIPSLGNWSVSSMSNNTS EDQS YDAVWTAPIRNVKEMKI
LKLQCEVLSLSYNQKGIPSLGNWSVSSMSNNTS EDQS YDAVWTAPIRNVKEMKI
LKLQCEVLSLSYNQKGIPSLGNWSVSSMSNNTS EDQS YDAVWTAPIRNVKEMKI
LKLQCEVLSLSYNQKGIPSLGNWSVSSMSNNTS EDQS YDAVWTAPIRNVKEMKI
VKLGAQVLSLACICDGLSASDGWSISVDSKDASNKELTKNHSFDAVIMTAPLSNVQRMKF
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
MKFGNPFSLDFIPEVTYVPLSVMITAFKKDKVKRPLEGFGVLIPSKEQ-HNGLKTLGTLF MKFGNPFSLDFIPEVTYVPLSVMITAFKKDKVKRPLEGFGVLIPSKEQ-HNGLKTLGTLF MKFGNPFSLDFIPEVTYVPLSVMITAFKKDKVKRPLEGFGVLIPSKEQ-HNGLKTLGTLF MKFGNPFSLDFIPEVTYVPLSVMITAFKKDKVKRPLEGFGVLIPSKEQ-HNGLKTLGTLF TKGGAPFVLDFLPKVDYLPLSLMVTAFKKEDVKRPLEGFGVLIPYKEQQKHGLKTLGTLF
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
SSMMFPDRAPSDMCLFTTFVGGSRNRKLANASTDELKQIVSSDLQQLLGTEDEPSFWHL SSMMFPDRAPSDMCLFTTFVGGSRNRKLANASTDELKQIVSSDLQQLLGTEDEPSFWHL SSMMFPDRAPSDMCLFTTFVGGSRNRKLANASTDELKQIVSSDLQQLLGTEDEPSFWHL SSMMFPDRAPSDMCLFTTFVGGSRNRKLANASTDELKQIVSSDLQQLLGTEDEPSFWHL SSMMFPDRAPNDQHLFTTFVGGSHNRDLAGAPTSILKQLVTSDLGKLLGVEGQPTFVKHI
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
FWSNAFPLYGHNYDSVLRAIDKMEKDLPGFFYAGNHKGGLSVGKAMASGCKAAELVISYL FWSNAFPLYGHNYDSVLRAIDKMEKDLPGFFYAGNHKGGLSVGKAMASGCKAAELVISYL FWSNAFPLYGHNYDCVLRAIDKMEKDLPGFFYAGNHKGGLSVGKAMASGCKAAELVISYL FWSNAFPLYGHNYDSVLRAIDKMEKDLPGFFYAGNHKGGLSVGKAMASGCKAAELVISYL HWRNAFPLYGHDYDSALEAIGKMESDLPGFFYAGNNKDGLAVGNVIASGSKTADLVISYL
AMARE_WC_herb_sus AMARE_AC_herb_sus AMARE_AC_herb_re sis AMARE_CC_herb_re sis SEQ_ID_NO_002_ALOMY
DSHIYVKMDEKTA
DSHIYVKMDEKTA
DSHIYVKMDEKTA
DSHIYVKMDEKTA
ESG-IKQDN
Фигура 1a
PP01_AL0MY MVGATMAIATVTAALPLRVRVPGRSRR GQAR CAVA S DATE АР AAPS
PP01_AMARE MSAMALSSSILQCPPHSDISFRFFAHTRTQPPIFFGRPRKLSYIHCSTSSSSTANYQNTI
PP01_AL0MY ARLS ADCVIVGGGISGLCTAQALATKYGVS-DLLVTEARARPGGNITTVERPDE
PP01_AMARE TSQGEGDKVLDCVIVGAGISGLCIAQALSTKHIQSNLNFIVTEAKHRVGGNITTME-SD
PP01_AL0MY GYLWEEGPNSFQPSDPVLTMAVDSGLKDELVFGDPNAPRFVLWEGKLRPVPSKPGDLPFF
PP01_AMARE GYIWEEGPNSFQPSDPVLTMAVDSGLKDDLVLGDPNAPRFVLWNGKLRPVPSKPTDLPFF
PP01_AL0MY PP01 AMARE
DLMSIPGKLRAGLGALGIRPPPPGREESVEEFVRRNLGAEVFERLIEPFCSGVYAGDPSK DLMSFPGKIRAGLGALGLRPPPPSYEESVEEFVRRNLGDEVFERLIEPFCSGVYAGDPAK
PP01_ALOMY LSMRAAFGKVWRLEENGGSIIGGTIKAIQDKGKNPKPPRDPRLPAPKGQTVASFRKGLAM
PP01_AMARE LSMKAAFGKVWTLEQKGGSIIAGTLKTIQERKNNPPPPRDPRLPKPKGQTVGSFRKGLIM
PP01_ALOMY LPNAIASRLGSKVKLSWKLTSITKSENQGYVLGYETPEGWSVQAKSVIMTIPSYIASDI
PP01_AMARE LPTAIAARLGSKVKLSWTLSNIDKSLNGEYNLTYQTPDGPVSVRTKAWMTVPSYIASSL
PP01_ALOMY LRPLSSDAADGLSKFYYPPVAAVTVSYPKEAIRKECLIDGELQGFGQLHPRSQGVETLGT
PP01_AMARE LRPLSDVAADSLSKFYYPPVAAVSLSYPKEAIRPECLIDGELKGFGQLHPRSQGVETLGT
PP01_ALOMY IYSSSLFPNRAPAGRVLLLNYIGGATNTGIVSKTESDLVEAVDRDLRKMLINPRAADPLA
PP01_AMARE IYSSSLFPGRAPPGRTLILSYIGGATNLGILQKSEDELAETVDKDLRKILINPNAKGSRV
PP01_ALOMY LGVRVWPQAIPQFLIGHLDRLDAAKSALVRSGCSGLFLGGNYVAGVALGRCIEGAYDSAS
PP01_AMARE LGVRVWPKAIPQFLVGHFDVLDAAKAGLANAGQKGLFLGGNYVSGVALGRCIEGAYDSAS
PP01_ALOMY PPOl AMARE
EVSDFLNKYAYK EWDFLSQYKDK
Фигура 1 b
1 2 3 4 5 6 7 8
wt > ** * , >
А ' ^ -* у ¦* А *
Фигура 2
С ^ *к 4* ** ?
необработанные
10 г/га
Сафлуфенацил 50 г/га
150 г/га
Фигура 4
Фигура 5
109
112
112
177
177
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
178
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
178
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
179
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
179
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
180
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
180
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
181
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
181
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ala, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
182
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
182
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
183
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
183
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
184
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
184
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
185
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
185
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Leu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
186
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
186
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
187
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
187
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
188
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
188
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
189
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
189
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Val, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
190
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
190
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
191
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
191
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
192
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
192
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
193
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
193
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Не, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
194
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
194
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
195
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
195
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
196
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
196
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Met, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
197
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
197
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
198
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
198
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
199
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
199
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
200
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
200
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой His, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
201
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
201
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
202
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
202
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
203
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
203
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная 11110 содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
204
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
204
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Lys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
205
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
205
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
206
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
206
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
207
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
207
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
208
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
208
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
209
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
209
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
210
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
210
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
211
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
211
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
212
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
212
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Glu, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
213
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
213
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
214
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
214
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
215
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
215
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Ser, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
216
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
216
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
217
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
217
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
218
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
218
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
219
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
219
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Thr, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
220
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
220
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
221
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
221
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
222
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
222
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
223
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
223
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Asn, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
224
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
224
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
225
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
225
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
226
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
226
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
227
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
227
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gin, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
228
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
228
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
229
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
229
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
230
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
230
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
231
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
231
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Cys, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
232
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
232
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Met.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
233
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
233
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ser.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
234
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
234
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Gly, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gly.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
235
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
235
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Ala.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
236
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
236
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой His.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
237
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
237
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Thr.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
238
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
238
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Pro, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Pro.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
239
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
239
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Arg.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
240
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
240
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Lys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID N0: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
241
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
241
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asn.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
242
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
242
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Phe, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Phe.
243
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
243
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Val.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
244
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
244
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Asp.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
245
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
245
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Gin.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
246
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
246
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Туг, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Туг.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
247
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
247
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Не.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
248
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
248
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Glu.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
249
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
249
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Cys.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения мутированная ППО содержит последовательность SEQ ID NO: 2, ее вариант, производное, ортолог, паралог или гомолог, в которых:
250
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
250
аминокислота в позиции или соответствующая позиции 137 представляет собой Trp, и аминокислота в позиции или соответствующая позиции 415 представляет собой Trp.
251
251
324
325
В качестве примера, значения логарифма отношения шансов для позиций 128, 397 и 420 SEQ ID NO: 27 (Amaranthus ГГП02), которая используется как справочная последовательность, представлены ниже.
327
327
328
328
330
331
331
334
334
335
335
342
343
протоколов. Выведенные из них трансгенные клетки и/или растения, затем могут быть подвергнуты анализу на предмет создания и изменения их устойчивости или стойкости к гербицидам.
345
345
348
поиска гомологии по банку данных;
(b) увеличение экспрессии выявленных молекул нуклеиновой кислоты в
клетках-хозяевах;
347
350
350
356
355
урацилы формулы (III)
358
359
хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
358
359
хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
358
359
хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
360
359
хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
360
359
хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4)
361
предпочтительно СН3, СН2СН2ОС2Н5, CH2CHF2, циклогексил (1-метилциклопропил)метил или СН2(пиридин-4-ил);
361
предпочтительно СН3, СН2СН2ОС2Н5, CH2CHF2, циклогексил (1-метилциклопропил)метил или СН2(пиридин-4-ил);
362
362
Соответствующие компоненты смесей выбираются, например, из гербицидов класса Ы) - Ь15)
Соответствующие компоненты смесей выбираются, например, из гербицидов класса Ы) - Ь15)
363
363
включая их агрономически приемлемые соли или производные соединения.
включая их агрономически приемлемые соли или производные соединения.
364
Далее приведены примеры гербицидов В, которые могут использоваться в сочетании с гербицидами-ингибиторами 11110 в соответствии с настоящим изобретением:
364
Далее приведены примеры гербицидов В, которые могут использоваться в сочетании с гербицидами-ингибиторами 11110 в соответствии с настоящим изобретением:
365
бенфурезат, бутилат, циклоат, далапон, димепиперат, ЕРТС, эспрокарб, этофумезат, флупропанат, молинат, орбенкарб, пебулат, просульфокарб, трехосновная карбоновая кислота, тиобенкарб, тиокарбазил, триаллат и вернолат;
365
бенфурезат, бутилат, циклоат, далапон, димепиперат, ЕРТС, эспрокарб, этофумезат, флупропанат, молинат, орбенкарб, пебулат, просульфокарб, трехосновная карбоновая кислота, тиобенкарб, тиокарбазил, триаллат и вернолат;
366
366
368
Ь7) из группы ингибиторов глутамин-синтазы:
биланафос (биалафос), биланафос-натрий, глюфосинат, глюфосинат-Р и глуфосинат-аммоний;
367
370
370
372
373
3-оксо-4-проп-2-инил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин-6-ил)-1Н-пиримидин-2,4-дион, and 3-[7-хлоро-5-фтор-2-(трифторметил)-1Н-бензимидазол-4-ил]-1-метил-6-(трифторметил)-1Н-пиримидин-2,4-дион (CAS 212754-02-4);
375
375
376
376
Ь14) из группы ингибиторов транспорта ауксинов: дифлуфензопир, дифлуфензопир-натрий,
Ь14) из группы ингибиторов транспорта ауксинов: дифлуфензопир, дифлуфензопир-натрий,
377
Ь15) из группы других гербицидов: димрон (= диамурон), инданофан, индазифлам, оксазикломефон и триазифлам.
377
Ь15) из группы других гербицидов: димрон (= диамурон), инданофан, индазифлам, оксазикломефон и триазифлам.
378
71526-07-3) и 2,2,5-триметил-3-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, CAS 52836-31-4).
378
71526-07-3) и 2,2,5-триметил-3-(дихлорацетил)-1,3-оксазолидин (R-29148, CAS 52836-31-4).
379
379
381
Подходящей солью триклопира является триклопир-триэтиламмоний. Подходящими сложными эфирами триклопира являются, например, триклопир-этил и триклопир-бутотил.
381
Подходящей солью триклопира является триклопир-триэтиламмоний. Подходящими сложными эфирами триклопира являются, например, триклопир-этил и триклопир-бутотил.
382
Подходящие соли мекопропа-Р включают, например, мекопроп-Р-бутотил, мекопроп-Р-диметиламмоний, мекопроп-Р-2-этилгексил, мекопроп-Р-изобутил, мекопроп-Р-калий и мекопроп-Р-натрий.
382
Подходящие соли мекопропа-Р включают, например, мекопроп-Р-бутотил, мекопроп-Р-диметиламмоний, мекопроп-Р-2-этилгексил, мекопроп-Р-изобутил, мекопроп-Р-калий и мекопроп-Р-натрий.
Предпочтительные варианты осуществления изобретения, указанные ниже по тексту данного документа, необходимо понимать, как предпочтительные либо независимо друг от друга, либо в сочетании друг с другом.
Предпочтительные варианты осуществления изобретения, указанные ниже по тексту данного документа, необходимо понимать, как предпочтительные либо независимо друг от друга, либо в сочетании друг с другом.
383
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция в качестве компонента В содержит минимум один, предпочтительно именно один гербицид В.
383
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения композиция в качестве компонента В содержит минимум один, предпочтительно именно один гербицид В.
384
384
392
от 1:75 до 75:1.
392
от 1:75 до 75:1.
394
394
398
Особенно предпочтительными являются композиции 1.1 - 1.229, содержащие ацифлуорфен и вещество(-а), заданные в соответствующей строке таблице В-1:
397
398
Особенно предпочтительными являются композиции 1.1 - 1.229, содержащие ацифлуорфен и вещество(-а), заданные в соответствующей строке таблице В-1:
397
400
400
401
401
402
Также особенно предпочтительными являются композиции 2.1. - 2.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А ацифлуорфен-натрий.
402
Также особенно предпочтительными являются композиции 2.1. - 2.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А ацифлуорфен-натрий.
403
Также особенно предпочтительными являются композиции 11.1. - 11.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А цинидон-этил.
403
Также особенно предпочтительными являются композиции 11.1. - 11.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А цинидон-этил.
404
Также особенно предпочтительными являются композиции 20.1. - 20.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флутиацет.
404
Также особенно предпочтительными являются композиции 20.1. - 20.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А флутиацет.
405
Также особенно предпочтительными являются композиции 29.1. - 29.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А профлуазол.
405
Также особенно предпочтительными являются композиции 29.1. - 29.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они содержат в качестве компонента А профлуазол.
406
406
407
407
Также особенно предпочтительными являются композиции 50.1. - 50.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат ципросульфамид в качестве антидота С.
Также особенно предпочтительными являются композиции 50.1. - 50.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат ципросульфамид в качестве антидота С.
408
Также особенно предпочтительными являются композиции 51.1. - 51.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат дихлормид в качестве антидота С.
408
Также особенно предпочтительными являются композиции 51.1. - 51.229, которые отличаются от соответствующих композиций 1.1 - 1.229 только тем, что они дополнительно содержат дихлормид в качестве антидота С.
409
409
412
хлорофиллам/каротеноидам, разрушителям клеточной оболочки, ингибиторам фотосинтеза, ингибиторам деления клетки, корневым ингибиторам, ингибиторам побегов и их комбинациям.
411
414
414
418
витамины и минералы (например, витамин С, витамин Е, каротин, фолиевая кислота, ниацин, рибофлавин, тиамин, кальций, железо, магний, калий, селен и цинк).
417
420
420
422
Подходящие соединения подробно описаны в РСТ/ЕР2009/063387 и РСТ/ЕР2009/063386, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки.
421
424
424
428
Таблица За:
427
428
Таблица За:
427
430
431
Таблица 3 b
430
431
Таблица 3 b
433
433
459
459
461
461
472
472
473
473
482
Таблица 7 гербицидное поражение трансгенных отростков, взятых из растений ТО. Опыление проходило на этапе V2, а оценка гербицидного поражения была проведена через неделю после обработки.
481
482
Таблица 7 гербицидное поражение трансгенных отростков, взятых из растений ТО. Опыление проходило на этапе V2, а оценка гербицидного поражения была проведена через неделю после обработки.
481
484
484
489
489
Формула изобретения
Формула изобретения
2. Изолированная и/или рекомбинантная и/или синтетическая молекула нуклеиновой кислоты, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
2. Изолированная и/или рекомбинантная и/или синтетическая молекула нуклеиновой кислоты, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
нетрансформированной клеткой растения, растением или частью растения дикого типа.
15. Способ выращивания растения по п. 8 или 9 при борьбе с сорняками
вблизи указанного растения, включающий следующие этапы:
15. Способ выращивания растения по п. 8 или 9 при борьбе с сорняками
вблизи указанного растения, включающий следующие этапы:
страница 1/6
страница 1/6
страница 1/6
страница 1/6
страница 1/6
страница 1/6
страница 2/6
страница 2/6
страница 2/6
страница 2/6
страница 2/6
страница 2/6
страница 3/6
страница 3/6
страница 3/6
страница 5/6
страница 6/6
страница 6/6
|
