(57) Реферат / Формула:
Предложены композиции и способы, связанные с мутациями генов и/или белков в растениях. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к мутациям в гене алленоксидсинтазы 2 (т.е. AOS2). Некоторые варианты реализации изобретения относятся к растениям, которые устойчивы к патогену.
МУТИРОВАННЫЕ ГЕНЫ АЛЛЕНОКСИДСИНТАЗЫ 2 (AOS2)
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США 61/785059, поданной 14 марта 2013 года, содержание которой включено в 5 настоящее описание посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ [0002] Настоящее изобретение относится отчасти к мутациям генов и/или белков в растениях.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ [0003] Нижеследующее рассмотрение уровня техники приведено исключительно для облегчения понимания настоящего изобретения и не описывает и не составляет известный уровень техники.
[0004] Phytophthora infestans (Pi) представляет собой организм, который принадлежит к типу Oomycota и может вызывать разрушительное заболевание у картофеля (Solarium tuberosum), также известное как фитофтороз. Род Phytophthora вызывает заболевание у других видов растений, таких как томат, соя, перец и табак. С Pi справлялись путем применения химикатов, таких как метилбромид и металаксил.
[0005] Существуют данные о связи между геном алленоксидсинтазы Solarium tuberosum (StAOS2) и устойчивостью к фитофторозу. В Pajerowska-Mukhtar et al., Planta 228:293 (2008) описано, что "[естественная изменчивость алленоксидсинтазы 2 картофеля является причиной различных уровней жасмонатов и устойчивости к патогенам у Arabidopsis." В Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009) описано, что "[основная] взаимосвязь была обнаружена в локусе StAOS2, кодирующем алленоксидсинтазу 2, ключевой фермент в биосинтезе жасмонатов..." и "[д]ва SNP в локусе StAOS2 были связаны с наибольшим влиянием на устойчивость. StAOS2_snp691 и StAOS2_snp692 . . . ."
30 КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Настоящее изобретение относится отчасти к способам и композициям, связанным с мутациями генов и белков в растениях. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам для получения устойчивых к патогену растений. Некоторые аспекты и варианты
35 реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам
для получения трансгенного или нетрансгенного растения с нормальной или измененной оценкой зрелости. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам для получения трансгенного или нетрансгенного растения с повышенными уровнями жасмоновой кислоты. Настоящее 5 изобретение также относится, по меньшей мере отчасти, к композициям и способам, связанным с мутациями в гене (генах)/аллеле (аллелях) алленоксидсинтазы (AOS2). [0007] В соответствии с одним из аспектов предложено растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах
10 реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может быть устойчивым к патогену; например, устойчивым к патогену растений, такому как Phytophthora infestans (Pi). В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может иметь измененную оценку зрелости. В некоторых вариантах реализации растение,
15 содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может содержать повышенные уровни жасмоновой кислоты.
[0008] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может относиться к любому виду двудольного, однодольного или голосеменного
20 растения, включая любой вид древесных растений, который растет в виде дерева или кустарника, любой вид травянистых растений или любой вид, который дает съедобные плоды, семена или овощи, или любой вид, который дает яркие или ароматические цветы. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из вида растения, выбранного из группы, состоящей из картофеля, подсолнечника, сахарной свеклы,
25 кукурузы, хлопчатника, сои, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, табака, баклажана, ячменя, boxthane, сорго, томата, физалиса клейкоплодного, тамарилло, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, плодов годжи, паслена черного, физалиса пушистого, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и
30 кормовых трав, тыквы, льна, масличной культуры, огурца, тыквы крупноплодной столовой, тыквы обыкновенной, арбуза, дыни мускусной, ипомеи, бальзамина, перца, сладкого перца, перца красного стручкового, перца чили, паприки, перца гвоздичного, хабанеро, перца кайенского, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи, в той мере, в какой
относиться к виду, выбранному из группы, состоящей из Arabidopsis thaliana, Solanum tuberosum, Solanum phureja, Oryza sativa, Amaranthus tuberculatus и Zea mays. В различных вариантах реализации растения, описанные в настоящем документе, могут относиться к любому виду семейства Solanaceae. 5 [0009] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может представлять собой картофель любого коммерческого сорта. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из сорта картофеля, выбранного из группы, состоящей из Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje,
10 Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka,
15 Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, B53 (Roslin Eburu), Kiraya, Kenya Akiba, 9, Original, Gituma, Mukorino, Amin, Pimpernel, Anett, B, Gituru, Feldeslohn, C, Kigeni, Romano, Kenya Ruaka, Purplu, Njae, Suzanna, Cardinal, Kathama, Kinare-Mwene, Kibururu, Karoa-Igura, Muturu, Faraja, Kiamucove, Michiri, Rugano, Njine Giathireko, Meru Mix, Blue Baranja, Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Mirka и Roslin
20 Sasamua.
[0010] В настоящем описании термин "ген AOS2" относится к последовательности ДНК, которая способна генерировать полипептид, представляющий собой алленоксидсинтазу 2 (AOS2), который обладает гомологией и/или аминокислотной идентичностью аминокислотной последовательности SEQ Ш NO: 1, и/или кодирует
25 белок, который демонстрирует активность AOS2. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 на 70%; 75%; 80%; 85%; 90%; 95%; 96%; 97%; 98%; 99%; или 100% идентичен конкретному гену AOS2; например, гену AOS2 Solanum tuberosum, например, StAOS2. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 на 60%; 70%; 75%; 80%; 85%; 90%; 95%; 96%; 97%; 98%; 99%; или 100% идентичен последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 2, 4,
30 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и 50.
[ООН] В настоящем описании термин "устойчивость к патогену" относится к признакам растений, которые уменьшают рост патогена после того, как произошло инфицирование патогенным изолятом.
[0012] В настоящем описании термин "толерантность к патогену" относится к 35 способности растения уменьшать влияние инфекции на приспособляемость растения. В
некоторых вариантах реализации устойчивое к патогену растение может демонстрировать некротические поражения, которые ограничены и/или не распространяются неопределенным образом. В некоторых вариантах толерантного к патогену растения наблюдают незначительный некроз или отсутствие некроза, но могут быть насыщенные 5 водой поражения. В некоторых вариантах реализации толерантное к патогену растение может пережить инфекцию с минимальным повреждением или малым снижением собираемого урожая товарной продукции.
[0013] В настоящем описании термин "мутация" относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты и/или изменению по
10 меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно обычной последовательности или последовательности дикого типа, или эталонной последовательности, например, SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации термин "мутация" относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты и/или изменению по меньшей
15 мере одной аминокислоты в полипептиде относительно нуклеотидной или аминокислотной последовательности белка AOS2, которая не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутация может включать замену, делецию, инверсию или встраивание. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может
20 включать изменение более одного нуклеотида. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 нуклеотидов. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменение положений 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислот. Термин "нуклеиновая
25 кислота" или "последовательность нуклеиновой кислоты" относится к олигонуклеотиду, нуклеотиду или полинуклеотиду и их фрагментам или частям, которые могут быть одно-или двухцепочечными и представлять собой смысловую или антисмысловую цепь. Нуклеиновая кислота может включать ДНК или РНК и может быть природного или синтетического происхождения. Например, нуклеиновая кислота может включать мРНК
30 или кДНК, или геномную ДНК. Нуклеиновая кислота может включать нуклеиновую кислоту, которая была амплифицирована (например, с использованием полимеразной цепной реакции). Обозначение "НТдт ### НТмут" используется для указания на мутацию, приводящую к замене нуклеотида дикого типа НТдт в положении ### в нуклеиновой кислоте на мутантный НТмут. Однобуквенное обозначение нуклеотидов является таким,
35 как описано в руководстве Патентного ведомства США по процедуре патентной
экспертизы, раздел 2422, таблица 1. В этом отношении обозначение нуклеотида "R" означает пурин, такой как гуанин или аденин, "Y" означает пиримидин, такой как цитозин или тимин (урацил в случае РНК); "М" означает аденин или цитозин; "К" означает гуанин или тимин; и "W" означает аденин или тимин. 5 [0014] В настоящем описании термин "мутированный ген AOS2" относится к гену алленоксидсинтазы 2 (AOS2), содержащему одну или более мутаций в положениях нуклеотидов относительно эталонной последовательности нуклеиновой кислоты AOS2 (например, SEQ ID N0: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и/или 50). В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2
10 содержит одну или более мутаций относительно соответствующей последовательности AOS2 дикого типа. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующей последовательности AOS2, кодирующей белок AOS2, который не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутированный ген
15 AOS2 содержит одну или более мутаций относительно, например, SEQ ID NO: 2, в гомологичных положениях его паралогов. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере одной мутации. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двух мутаций. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере
20 трех мутаций. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует один или более мутированных белков AOS2, таких как описаны в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллели AOS2 Solanum tuberosum; например, StAOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный
25 ген/аллель AOS2 Desiree. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллель AOS2 Bintje. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллель AOS2 Fontana. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллели AOS2 Innovator.
30 [0015] В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ГО NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении,
вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит Т в положении, соответствующем положению 681 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит С в положении, соответствующем положению 727 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых 5 вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит А в положении, соответствующем положению 744 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит С в положении, соответствующем положению 774 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит А в положении,
10 соответствующем положению 879 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит А в положении, соответствующем положению 900 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит С в положении, соответствующем положению 954 последовательности SEQ ID N0: 2.
15 [0016] В настоящем описании термин "белок AOS2" относится к белку, который обладает гомологией и/или аминокислотной идентичностью белку AOS2 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49, и/или демонстрирует активность AOS2. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 на 70%; 75%; 80%; 85%; 90%; 95%; 96%; 97%; 98%;
20 99%; или 100% идентичен конкретному белку AOS2 (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49), такому как, например, белок AOS2 Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Desiree. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой
25 мутированный белок AOS2 Bintje. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Fontana. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Innovator. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 на 70%; 75%; 80%; 85%; 90%; 95%; 96%; 97%; 98%; 99%; или 100% идентичен последовательности,
30 выбранной из последовательностей на фиг.1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
[0017] В настоящем описании термин "мутированный белок AOS2" относится к белку AOS2, содержащему одну или более мутаций в положениях аминокислот относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2 или в гомологичных положениях 35 его паралогов. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит
одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, например, эталонной аминокислотной последовательности AOS2 с SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или ее частей. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или 5 более мутаций относительно соответствующего белка AOS2 дикого типа. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности
10 SEQ Ш NO: 1. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 6. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной
15 последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит R в положении аминокислоты 12. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Р в положении
20 аминокислоты 12. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении 30. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно
25 эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении 37. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении
30 аминокислоты 46. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 46. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций
35 относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная 5 последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2
10 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 51. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
15 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит N в положении аминокислоты 76. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 76. В некоторых
20 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении 113. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом
25 указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении 113. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 145. В некоторых вариантах реализации мутированный белок
30 AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 187. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
аминокислоты 197. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Е в положении аминокислоты 197. В некоторых 5 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит К в положении аминокислоты 200. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной
10 последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении аминокислоты 227. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении
15 аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций
20 относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная
25 последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 256. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 256. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2
30 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении аминокислоты 264. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
аминокислоты 270. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 282. В некоторых 5 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 282. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной
10 последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит N в положении
15 аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций
20 относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 292. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная
25 последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 309. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 309. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2
30 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 320. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
аминокислоты 320. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 328. В некоторых 5 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 328. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной
10 последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 328. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении
15 аминокислоты 337. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Е в положении аминокислоты 337. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций
20 относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 338. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная
25 последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 338. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 357. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2
30 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 357. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
аминокислоты 381. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Р в положении аминокислоты 381. В некоторых 5 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 394. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной
10 последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит С в положении аминокислоты 407. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении
15 аминокислоты 407. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 423. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций
20 относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 430. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная
25 последовательность AOS2 содержит Е в положении 439. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 467. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более
30 мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 467. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная
вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 494. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 5 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 494. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная
10 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 495. В другом варианте реализации мутированный белок AOS2 может состоять из любой комбинации мутаций аминокислот в любых положениях в указанном белке относительно эталонной последовательности (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49). В некоторых
15 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующего белка AOS2, который обеспечивает менее чем приемлемую устойчивость и/или толерантность к патогену (например, устойчивый к Phytophthora infestans). В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью одной или более мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2
20 модифицирован с помощью по меньшей мере одной мутации. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двух мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере трех мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере четырех мутаций. В некоторых вариантах реализации белок
25 AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере пяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере шести мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере семи мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере восьми мутаций. В некоторых вариантах
30 реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере девяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере десяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере одиннадцати мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двенадцати мутаций. В
35 некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой один
или более белков AOS2 Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации термин "мутированный белок AOS2" относится к белку AOS2, который обеспечивает повышенную устойчивость и/или толерантность к одному или более патогенам по сравнению с эталонным белком. 5 [0018] В настоящем описании термин "ниже чем приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену" означает, что чувствительность растения или сельскохозяйственной культуры к патогену снижает или губит коммерческую рентабельность указанного растения или сельскохозяйственной культуры. В некоторых вариантах реализации ниже чем приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности
10 к патогену снижает рентабельность растения или сельскохозяйственной культуры по меньшей мере на 10%; или по меньшей мере на 25%; или по меньшей мере на 50%; или по меньшей мере на 75%; или по меньшей мере на 100% по сравнению с аналогичным растением или сельскохозяйственной культурой, которая является устойчивой и/или толерантной к патогену. Рентабельность сельскохозяйственной культуры или растения с
15 "приемлемым уровнем устойчивости и/или толерантности" к патогену, напротив, по существу не снижается или не губится вследствие воздействия патогена. В некоторых вариантах реализации рентабельность растения или сельскохозяйственной культуры снижается менее чем на 20%; или менее чем на 15%, или менее чем на 10% в результате воздействия патогена. Рентабельность сельскохозяйственной культуры или растения с
20 "уровнем устойчивости и/или толерантности к патогену выше приемлемого" снижается менее чем на 10%; или менее чем на 5%, или менее чем на 2% в результате воздействия патогена.
[0019] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, термин "мутация" относится к изменению
25 по меньшей мере одного нуклеотида в гене AOS2 или изменению по меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно аминокислотной последовательности гена/белка AOS2, которое обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену. В некоторых вариантах реализации термин "мутация" относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в гене AOS2 или изменению по меньшей мере одной
30 аминокислоты в полипептиде относительно аминокислотной последовательности белка AOS2, которая не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутация может включать замену, делецию, инверсию или встраивание в одном или более положениях в гене и/или белке. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может
включать изменение в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 положениях аминокислот. [0020] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном 5 белке AOS2 включает одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать
10 одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более, двадцать шесть или более, двадцать семь или более, двадцать восемь или более, двадцать девять или более, тридцать или более, тридцать одну или более, тридцать две или более, тридцать три или более, тридцать четыре или более, тридцать пять или более, тридцать шесть или более, тридцать семь или более мутаций в
15 положениях, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
20 [0021] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более,
25 четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций в положениях, выбранных из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197,
30 Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292,1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407,1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
[0022] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит G в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1, и V в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1. [0001] 5 В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более мутаций, две или более мутаций, три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более мутаций, восемь или более мутаций, девять или более мутаций, или десять или более,
10 одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из F6S, R12P, P12R, A30V, I37T,
15 L46F, F46L, V48T, V48I, T48I, I48T, M51I, D76N, N76D, G113D, D113G, F145Y, L187F, D197E, E197D, К200Т, А227Т, 1231Т, 1231G, G231T, T231G, F256V, V256F, А264Т, L270F, F282S, S282F, V289N, V289S, S289N, N289S, V292A, L309I, I309L, M320L, L320M, M328L, M328V, L328V, V328L, E337D, D337E, V338L, L338V, I357M, M357I, P381L, L381P, Т394К, G407C, C407G, F423I, L430F, Е439А, G467S, S467G, V480T, G494D, D494G
20 и Т495К. В некоторых вариантах реализации одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более мутаций, две или более мутаций, три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более мутаций, восемь или более мутаций, девять или более мутаций, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более,
25 четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в
30 положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в
35 положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении,
соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая 5 кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая
10 кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231,
15 глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии -
20 фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в
25 положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении,
30 соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем
метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем 5 положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем
10 положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и
15 мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
[0023] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит SEQ 20 ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит SEQ ID NO: 3.
[0024] В соответствии с другим аспектом предложен способ получения растительной клетки. В некоторых вариантах реализации указанная растительная клетка содержит
25 мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации растительная клетка могут быть частью устойчивого к патогену растения. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с
30 изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. В некоторых вариантах реализации растительная клетка, полученная указанным способом, может содержать ген AOS2, способный экспрессировать мутированный белок AOS2. Способ может дополнительно включать идентификацию растительной клетки или растения, содержащего растительную клетку, которая (1) содержит мутированный ген AOS2 и/или
A0S2, повышенную стабильность фермента AOS2, способность передавать сигнал, и/или (3) демонстрирует более высокую устойчивость и/или толерантность к патогену по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Устойчивое к патогену растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, 5 может быть идентифицировано в присутствии патогена. В некоторых вариантах реализации растительная клетка является трансгенной. В некоторых вариантах реализации растительная клетка является нетрансгенной. Растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, может представлять собой нетрансгенное устойчивое/толерантное к патогену растение; например, растение и/или растительная
10 клетка может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, описанную в настоящем документе, может быть получено бесполым способом; например, из одной или более растительных клеток или из растительной ткани, состоящей из одной или более
15 растительных клеток; например, из клубня или части клубня картофеля, имеющего по меньшей мере один или два глазка (спящие почки), часто называемого семенным картофелем. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, может быть получено половым способом с получением настоящего генетического семени.
20 [0025] В соответствии с другим аспектом предложен способ получения устойчивого и/или толерантного к патогену растения. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную
25 клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост, каталитическую активность белка AOS2, стабильность фермента AOS2 и/или способность передавать сигнал по сравнению с соответствующей растительной клеткой
30 дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогенов. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может
35 представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение
может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает повышенную устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с измененной оценкой зрелости. В некоторых вариантах 5 реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.
[0026] В соответствии с другим аспектом предложен способ получения растения с оценкой ранней, средней, среднеранней или поздней зрелости. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов
10 (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растительной клетки,
15 демонстрирующей нормальный рост и/или каталитическую активность по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. Растение может представлять собой нетрансгенное растение с
20 оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. Растение может представлять собой нетрансгенное
25 растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену.
[0027] В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения уровней 30 жасмоновой кислоты в растении. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может 35 экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно
включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост, каталитическую активность белка AOS2, стабильность фермента AOS2 и/или способность передавать сигнал по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию растения с 5 повышенными уровнями жасмоновой кислоты из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогенов. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2,
10 который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с повышенными уровнями жасмоновой кислоты. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное
15 устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с повышенными уровнями жасмоновой кислоты.
20 [0028] В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения устойчивости и/или толерантности растения к патогену. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную
25 клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост и/или каталитическую активность белка AOS2, и/или стабильность белка AOS2 по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ
30 может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогена. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение
35 может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или
толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с 5 оценкой поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может 10 содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.
[0029] В соответствии с другим аспектом предложено растение или растительная 15 клетка, содержащая мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Bintje. В некоторых вариантах реализации растение 20 или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fontana. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Innovator. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации растение 25 или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.
[0030] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, композиции и способы могут включать растение или растительную клетку, содержащую множественные гены AOS2, при этом
30 каждый ген имеет два аллеля, в двух или более наборах хромосом. Например, тетраплоидное растение может содержать один, два, три или четыре мутированных аллеля AOS2. В некоторых вариантах реализации множественные гены AOS2 могут содержать одинаковую мутацию или разные мутации. В некоторых вариантах реализации множественные гены AOS2 могут содержать любую комбинацию или перестановку
35 мутаций, например, мутаций AOS2, описанных в настоящем документе.
[0031] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может содержать мутации в гене/аллеле/локусе AOS2 в одной или более хромосомах. Растение или растительная клетка может включать растение с различными кратными числами 5 хромосом; например, по меньшей мере одним набором хромосом, по меньшей мере двумя наборами хромосом, по меньшей мере тремя наборами хромосом, по меньшей мере четырьмя наборами хромосом, по меньшей мере пятью наборами хромосом, по меньшей мере шестью наборами хромосом, по меньшей мере семью наборами хромосом, по меньшей мере восьмью наборами хромосом, по меньшей мере девятью наборами 10 хромосом, по меньшей мере десятью наборами хромосом, по меньшей мере одиннадцатью наборами хромосом и по меньшей мере двенадцатью наборами хромосом. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка включает растение с четырьмя наборами хромосом.
[0032] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и 15 способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, или по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, 20 что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку поздней зрелости.
[0033] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и 25 способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, 30 что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. [0034] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и 35 способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по
меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку ранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, 5 что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку ранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку ранней зрелости.
[0035] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и 10 способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку средней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, 15 что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку средней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку средней зрелости.
[0036] В соответствии с другим аспектом предложено семя, содержащее мутированный 20 ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанное семя содержит мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный белок AOS2 может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации семя является устойчивым и/или толерантным к 25 патогену. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить устойчивое и/или толерантное к патогену растение. В некоторых вариантах реализации семя является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации семя является трансгенным. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой 30 среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.
[0037] В соответствии с другим аспектом предложен вегетативный растительный материал, который позволяет получить новое растение, включая, но не ограничиваясь 35 ими, клубни или их части, имеющие по меньшей мере один глазок, выращенные in vitro
побеги, побеги с корнями или полученный из протопластов каллюс, содержащий по меньшей мере один мутированный аллель AOS2. В некоторых вариантах реализации такой вегетативно размноженный материал содержит мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует 5 мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный белок AOS2 может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить устойчивое и/или толерантное к
10 патогену растение. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является трансгенным. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может
15 содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.
[0038] В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения устойчивости и/или толерантности растения к патогену путем: (а) скрещивания первого растения со вторым растением, при котором первое растение содержит мутированный ген AOS2, при
20 этом указанный ген кодирует мутированный белок AOS2; (Ь) скрининга популяции, полученной в результате скрещивания, на предмет повышенной устойчивости и/или толерантности к патогену; (с) отбора элемента, полученного в результате скрещивания, обладающего повышенной устойчивостью и/или толерантностью к патогену; и (d) получения семян в результате скрещивания. В некоторых вариантах реализации
25 гибридное семя получают любым из вышеуказанных способов. В некоторых вариантах реализации растения выращивают из семян, полученных любым из вышеуказанных способов. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена являются нетрансгенными. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена являются трансгенными. В некоторых вариантах реализации первое и второе растения
30 представляют собой растения Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена имеют оценку ранней, среднеранней, средней или поздней зрелости.
[0039] В соответствии с другим аспектом предложена выделенная нуклеиновая кислота мутированного гена AOS2. В некоторых вариантах реализации выделенная нуклеиновая 35 кислота кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации
выделенная нуклеиновая кислота кодирует мутированный белок AOS2, который является устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации выделенная нуклеиновая кислота кодирует мутированный белок AOS2, который позволяет получить растение с оценкой ранней, средней, среднеранней или поздней 5 зрелости.
[0040] В соответствии с другим аспектом предложен вектор экспрессии, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту мутированного гена AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный вектор экспрессии содержит выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую белок AOS2.
10 [0041] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, способы и композиции, описанные в настоящем документе, включают один или более мутированных генов AOS2, которые кодируют один или более белков AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный хлоропластный целевой ген AOS2. В некоторых
15 вариантах реализации способы и композиции включают мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный ген AOS2 Solanum tuberosum; например StAOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-l гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-6
20 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-12 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-7 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-8 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают
25 мутированный аллель StAOS2 СВ1 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ2 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВЗ гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ4 гена AOS2. В некоторых вариантах
30 реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ5 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ6 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ7 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель
35 StAOS2 СВ8 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции
включают мутированный аллель StAOS2 СВ9 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ10 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ11 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации 5 способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ12 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ13 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ14 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ15 гена
10 AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ16 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ17 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ18 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции
15 включают мутированный аллель StAOS2 СВ19 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 СВ20 гена AOS2.
[0042] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная
20 клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по
25 меньшей мере три гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка
30 представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
[0043] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или 5 растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере три гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2,
10 содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах
15 реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. [0044] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная
20 клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая
25 мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере три гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В
30 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ Ш NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16,
35 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.
[0045] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка демонстрирует полиплоидию. В 5 некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 полиплоидного растения содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в
10 положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере пять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере шесть мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного
15 растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере семь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере восемь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере девять мутированных
20 генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере десять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID
25 NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. [0046] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель или клетка картофеля содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2
30 картофеля или клетки картофеля содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре
35 мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в
положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. 5 [0047] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Desiree или клетка картофеля Desiree содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержит А в положении 691. В
10 некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля
15 AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.
20 [0048] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Bintje или клетка картофеля Bintje содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержит А в положении 691. В некоторых
25 вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки
30 картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. [0049] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации,
35 композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная
клетка содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка демонстрирует полиплоидию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 полиплоидного растения содержит С в положении 692. В некоторых вариантах 5 реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В
10 некоторых вариантах реализации по меньшей мере пять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере шесть мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере семь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в
15 положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере восемь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере девять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере десять мутированных генов/аллелей AOS2
20 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. [0050] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации,
25 композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель или клетка картофеля содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля или клетки картофеля содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки
30 картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели)
35 не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген
A0S2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.
[0051] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Desiree или клетка 5 картофеля Desiree содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В
10 некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет
15 собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.
[0052] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Bintje или клетка
20 картофеля Bintje содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах
25 реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В
30 некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. [0053] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка является тетраплоидной. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное
A0S2, которые образуют генотип АААА/СССС, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях 5 нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка
10 содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692
15 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене
20 (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В
25 некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые
30 образуют генотип AAAG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах
(генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AGGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/GGGG, в 5 положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или
10 растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип GGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.
15 [0054] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка представляет собой картофель или клетку картофеля. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип АААА/СССС, в
20 положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение,
25 представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые
30 образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых
35 вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля
содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, 5 которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых
10 вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2,
15 которые образуют генотип AAAG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AAGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых
20 вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AGGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2,
25 которые образуют генотип AAGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип AGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых
30 вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) A0S2, которые образуют генотип GGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID N0: 2. В некоторых вариантах реализации картофель представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации картофель представляет собой
35 картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка
является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.
[0055] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная 5 клетка представляет собой картофель или клетку картофеля Solanum tuberosum.
[0056] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может иметь оценку ранней, средней среднеранней или поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение или
10 растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию в кодирующей последовательности гена AOS2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию в некодирующей последовательности гена AOS2. В некоторых
15 вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию, расположенную выше кодирующей последовательности гена AOS2.
[0057] В настоящем описании термин "ген" относится к последовательности ДНК, которая включает контрольную и кодирующую последовательности, необходимые для образования РНК, которая может выполнять некодирующую функцию (например,
20 рибосомная или транспортная РНК) или которая может включать полипептид или предшественник полипептида. РНК или полипептид может кодироваться полноразмерной кодирующей последовательностью или любой частью указанной кодирующей последовательности, если сохраняется желаемая активность или функция. Термин "ген" также относится и включает соответствующие аллели культурного сорта растения или
25 линии растения.
[0058] Аллель представляет собой одну из нескольких альтернативных форм гена или нуклеотидной последовательности в конкретной вариации в конкретном положении в образце нуклеиновой кислоты. Аллель может быть представлен одним или более изменениями оснований в конкретном локусе (например, SNP). Например, в каждом 30 аутосомном локусе диплоидный индивидуум имеет 2 аллеля: один наследованный по материнской линии, другой - по отцовской.
[0059] В настоящем описании термин "патоген" относится к инфекционному агенту, который вызывает заболевание у хозяина. В некоторых вариантах реализации патоген представляет собой Phytophthora infestans.
[0060] В настоящем описании термин "кодирующая последовательность" относится к последовательности нуклеиновой кислоты или ее комплементарной последовательности, или ее части, которая может транскрибироваться и/или транслироваться с образованием мРНК и/или полипептида, или его фрагмента. Кодирующие последовательности 5 включают экзоны в геномной ДНК или незрелых первичных РНК-транскриптах, которые соединены друг с другом с помощью биохимических механизмов клетки с образованием зрелой мРНК. Антисмысловая цепь комплементарна такой нуклеиновой кислоте, и из нее может быть выведена кодирующая последовательность.
[0061] В настоящем описании термин "некодирующая последовательность" относится 10 к последовательности нуклеиновой кислоты или ее комплементарной последовательности, или ее части, которая не транскрибируется в аминокислоту in vivo, или те области, в которых тРНК не вступает во взаимодействие для переноса или попытки переноса аминокислоты. Некодирующие последовательности включают как последовательности интронов в геномной ДНК или незрелых первичных РНК-15 транскриптах, так и ген-ассоциированные последовательности, такие как промоторы, энхансеры, сайленсеры и т.д.
[0062] Нуклеооснование представляет собой основание, которое в некоторых предпочтительных вариантах реализации представляет собой пурин, пиримидин или их производное, или аналог. Нуклеозиды представляют собой нуклеооснования, которые
20 содержат пентозафуранозильную группу, например, возможно содержащий заместители рибозид или 2'-дезксирибозид. Нуклеозиды могут быть связаны одним из нескольких связывающих фрагментов, которые могут содержать или могут не содержать фосфор. Нуклеозиды, которые связаны не содержащими заместители фосфодиэфирными связями, называются нуклеотидами. В настоящем описании термин "нуклеооснование" включает
25 пептидные нуклеооснования, субъединицы пептидных нуклеиновых кислот и морфолиновые нуклеооснования, а также нуклеозиды и нуклеотиды.
[0063] Олигонуклеооснование представляет собой полимер, содержащий нуклеооснования; предпочтительно по меньшей мере часть которого может гибридизоваться путем спаривания оснований по Уотсону-Крику с ДНК, имеющей
30 комплементарную последовательность. Цепь олигонуклеооснования может иметь один 5'-и 3'-конец, которые представляют собой крайние нуклеооснования полимера. Конкретная цепь олигонуклеооснования может содержать нуклеооснования всех типов. Олигонуклеооснование представляет собой соединение, содержащее одну или более цепей олигонуклеооснований, которые могут быть комплементарными и гибридизоваться
35 путем спаривания оснований по Уотсону-Крику. Нуклеооснования рибо-типа включают
нуклеооснования, содержащие пентозафуранозил, где 2' углерод представляет собой метилен, содержащий в качестве заместителей гидроксил, алкилокси или галоген. Нуклеооснования дезоксирибо-типа представляют собой нуклеооснования, отличные от нуклеооснований рибо-типа, и включают все нуклеооснования, которые не содержат 5 пентозафуранозильную группу.
[0064] В некоторых вариантах реализации нить олигонуклеооснования может включать как цепи олигонуклеооснований, так и сегменты или области цепей олигонуклеооснований. Нить олигонуклеооснования может иметь 3'-конец и 5'-конец, и когда нить олигонуклеооснования и цепь одинаковы по протяженности, 3'- и 5'-концы
10 нити являются также 3'- и 5'-концами цепи.
[0065] В настоящем описании термин "олигонуклеооснование репарации генов" или "GRON" относится к олигонуклеооснованиям, включающим смешанные дуплексные олигонуклеотиды, молекулы, содержащие ненуклеотиды, одноцепочечные олигодезоксинуклеотиды и другие молекулы репарации генов.
15 [0066] В настоящем описании термин "выделенный" применительно к нуклеиновой кислоте (например, олигонуклеотиду, такому как РНК, ДНК или смешанный полимер) относится к нуклеиновой кислоте, которая отделена от значительной части генома, в котором она встречается в природе, и/или по существу отделена от других клеточных компонентов, которые сопровождают такую нуклеиновую кислоту в природе. Например,
20 любая нуклеиновая кислота, которая была получена путем синтеза (например, путем последовательной конденсации оснований), считается выделенной. Подобным образом, нуклеиновые кислоты, рекомбинантно экспрессированные, клонированные, полученные путем реакции удлинения праймера (например, ПЦР) или иным образом вырезанные из генома, также считаются выделенными.
25 [0067] В настоящем описании термин "аминокислотная последовательность" относится к полипептидной или белковой последовательности. Обозначение "АКдт###АКмут" используется для указания на мутацию, приводящую к замене к замене аминокислоты дикого типа АКдт в положении ### в полипептиде на мутантную АКмут. [0068] В настоящем описании термин "комплементарная последовательность"
30 относится к последовательности, комплементарной нуклеиновой кислоте согласно стандартным правилам спаривания по Уотсону/Крику. Комплементарная последовательность может также представлять собой последовательность РНК, комплементарную последовательности ДНК или ее комплементарной последовательности, и может также представлять собой кДНК.
[0069] В настоящем описании термин "по существу комплементарный" относится к двум последовательностям, которые гибридизуются в условиях гибридизации, близких к жестким. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что по существу комплементарные последовательности не обязательно гибридизуются по всей длине. 5 [0070] В настоящем описании термин "кодон" относится к последовательности из трех соседних нуклеотидов (либо РНК, либо ДНК), составляющей генетический код, который определяет присоединение конкретной аминокислоты в полипептидной цепи во время синтеза белка или сигнал остановки синтеза белка. Термин "кодон" также относится к соответствующим (и комплементарным) последовательностям из трех нуклеотидов в
10 матричной РНК, в которую транскрибируется исходная ДНК.
[0071] В настоящем описании термин "дикий тип" относится к гену или генному продукту, который обладает характеристиками данного гена или генного продукта, когда он выделен из встречающегося в природе источника. Ген дикого типа представляет собой ген, который чаще всего наблюдается в популяции и, таким образом, произвольно
15 называется "нормальной" формой гена или формой гена "дикого типа". Термин "дикий тип" может также относиться к последовательности в конкретном положении или положениях нуклеотидов, или к последовательности в конкретном положении или положениях кодонов, или к последовательности в конкретном положении или положениях аминокислот.
20 [0072] В настоящем описании термин "мутантный" или "модифицированный" относится к нуклеиновой кислоте или белку, демонстрирующему модификации последовательности и/или функциональных свойств (т.е. измененные характеристики) по сравнению с геном или генным продуктом дикого типа. Термин "мутантный" или "модифицированный" также относится к последовательности в конкретном положении
25 или положениях нуклеотидов, или к последовательности в конкретном положении или положениях кодонов, или к последовательности в конкретном положении или положениях аминокислот, демонстрирующей модификации последовательности и/или функциональных свойств (т.е. измененные характеристики) по сравнению с геном или генным продуктом дикого типа.
30 [0073] В настоящем описании термин "гомология" относится к сходству последовательностей среди белков и ДНК. Термин "гомология" или "гомологичный" относится к степени идентичности. Гомология может быть частичной или полной. Частично гомологичная последовательность представляет собой последовательность, которая обладает менее чем 100% идентичностью последовательности при сравнении с
[0074] В настоящем описании термин "гетерозиготный" относится к наличию разных аллелей в одном или более генетических локусах в гомологичных сегментах хромосом. В настоящем описании термин "гетерозиготный" может также относиться к образцу, клетке, клеточной популяции или организму, в котором могут быть обнаружены разные аллели в 5 одном или более генетических локусах. Гетерозиготные образцы могут быть также определены с помощью способов, известных в данной области техники, таких как, например, секвенирование нуклеиновых кислот. Например, если электрофореграмма секвенирования демонстрирует два пика в одном локусе, и оба пика приблизительно одинакового размера, образец может быть охарактеризован как гетерозиготный. Или, если
10 один пик меньше другого, но составляет по меньшей мере примерно 25% от размера более крупного пика, образец может быть охарактеризован как гетерозиготный. В некоторых вариантах реализации меньший пик составляет по меньшей мере примерно 15% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации меньший пик составляет по меньшей мере примерно 10% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации меньший
15 пик составляет по меньшей мере примерно 5% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации обнаруживают минимальную величину меньшего пика. [0075] В настоящем описании термин "гомозиготный" относится к наличию идентичных аллелей в одном или более генетических локусах в гомологичных сегментах хромосом. Термин "гомозиготный" может также относиться к образцу, клетке, клеточной
20 популяции или организму, в котором могут быть обнаружены одинаковые аллели в одном или более генетических локусах. Гомозиготные образцы могут быть определены с помощью способов, известных в данной области техники, таких как, например, секвенирование нуклеиновых кислот. Например, если электрофореграмма секвенирования демонстрирует один пик в конкретном локусе, образец может называться "гомозиготным"
25 в отношении данного локуса.
[0076] Термин "гемизиготный" относится к гену или сегменту гена, присутствующему только один раз в генотипе клетки или организма, поскольку второй аллель подвергнут делеции. В настоящем описании термин "гемизиготный" может также относиться к образцу, клетке, клеточной популяции или организму, в котором аллель в одном или
30 более генетических локусах может быть обнаружен только один раз в генотипе.
[0077] В настоящем описании термин "состояние зиготности" относится к образцу, клеточной популяции или организму, оказывающемуся гетерозиготным, гомозиготным или гемизиготным по результатам способов тестирования, известных в данной области техники и описанных в настоящем документе. Термин "состояние зиготности
кислоты гетерозиготным, гомозиготным или гемизиготным. Термин "состояние зиготности" может относиться к отличиям одного нуклеотида в последовательности. В некоторых способах состояние зиготности образца по отношению к одной мутации может быть отнесено к категории: гомозиготный дикого типа, гетерозиготный (т.е. один аллель 5 дикого типа и один мутантный аллель), гомозиготный мутантный или гемизиготный (т.е. одна копия либо аллеля дикого типа, либо мутантного аллеля).
[0078] В настоящем описании термин "примерно" означает в количественном выражении плюс или минус 10%. Например, термин "примерно 3%" будет включать 2,73,3%, и термин "примерно 10%" будет включать 9-11%. Более того, если термин 10 "примерно" употребляется в настоящем описании в сочетании с количественным выражением, очевидно, что в дополнение к значению плюс или минус 10% также предполагается и описывается точное значение указанного количественного выражения. Например, термин "примерно 3%" явным образом предполагает, описывает и включает точно 3%.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР [0079] Фиг.1 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 1 (SEQ ID NO: 1).
[0080] Фиг.2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 20 Solanum tuberosum, аллель 1 (SEQ ID NO: 2).
[0081] Фиг.З представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 6 (SEQ ID NO: 3).
[0082] Фиг.4 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 6 (SEQ ID NO: 4). 25 [0083] Фиг.5 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 7 (SEQ ID NO: 5).
[0084] Фиг.6 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 7 (SEQ ID NO: 6).
[0085] Фиг.7 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 30 Solanum tuberosum, аллель 8 (SEQ ID NO: 7).
[0086] Фиг.8 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 8 (SEQ ID NO: 8).
[0087] Фиг.9 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 12 (SEQ ID NO: 9).
[0088] Фиг. 10 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 12 (SEQ ID NO: 10).
[0089] Фиг. 11 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ1 (SEQ ID NO: 11). 5 [0090] Фиг. 12 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ1 (SEQ ID NO: 12).
[0091] Фиг. 13 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ2 (SEQ ID NO: 13).
[0092] Фиг. 14 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена 10 AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ2 (SEQ ID NO: 14).
[0093] Фиг. 15 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВЗ (SEQ ID NO: 15).
[0094] Фиг. 16 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВЗ (SEQ ID NO: 16). 15 [0095] Фиг. 17 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ4 (SEQ ID NO: 17).
[0096] Фиг. 18 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ4 (SEQ ID NO: 18).
[0097] Фиг. 19 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 20 Solanum tuberosum, аллель СВ5 (SEQ ID NO: 19).
[0098] Фиг.20 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ5 (SEQ ID NO: 20).
[0099] Фиг.21 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ6 (SEQ ID NO: 21). 25 [00100] Фиг.22 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ6 (SEQ ID NO: 22).
[00101] Фиг.23 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ7 (SEQ ID NO: 23).
[00102] Фиг.24 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена 30 AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ7 (SEQ ID NO: 24).
[00103] Фиг.25 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ8 (SEQ ID NO: 25).
[00104] Фиг.26 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ8 (SEQ ID NO: 26).
[00105] Фиг.27 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ9 (SEQ ID NO: 27).
[00106] Фиг.28 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ9 (SEQ ID NO: 28). 5 [00107] Фиг.29 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ10 (SEQ ID NO: 29).
[00108] Фиг.30 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ10 (SEQ ID NO: 30).
[00109] Фиг.31 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 10 Solanum tuberosum, аллель СВ11 (SEQ ID NO: 31).
[00110] Фиг.32 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ11 (SEQ ID NO: 32).
[00111] Фиг.ЗЗ представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ12 (SEQ ID NO: 33). 15 [00112] Фиг.34 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ12 (SEQ ID NO: 34).
[00113] Фиг.35 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ13 (SEQ ID NO: 35).
[00114] Фиг.36 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена 20 AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ13 (SEQ ID NO: 36).
[00115] Фиг.37 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ14 (SEQ ID NO: 37).
[00116] Фиг.38 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ14 (SEQ ID NO: 38). 25 [00117] Фиг.39 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ15 (SEQ ID NO: 39).
[00118] Фиг.40 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ15 (SEQ ID NO: 40).
[00119] Фиг.41 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 30 Solanum tuberosum, аллель СВ16 (SEQ ID NO: 41).
[00120] Фиг.42 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ16 (SEQ ID NO: 42).
[00121] Фиг.43 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ17 (SEQ ID NO: 43).
[00122] Фиг.44 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ17 (SEQ ID NO: 44).
[00123] Фиг.45 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ18 (SEQ ID NO: 45). 5 [00124] Фиг.46 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ18 (SEQ ID NO: 46).
[00125] Фиг.47 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ19 (SEQ ID NO: 47).
[00126] Фиг.48 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена 10 AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ19 (SEQ ID NO: 48).
[00127] Фиг.49 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ20 (SEQ ID NO: 49).
[00128] Фиг.50 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ20 (SEQ ID NO: 50).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ [00129] Белки, представляющие собой алленоксидсинтазу
[00130] Белки, представляющие собой алленоксидсинтазу 2 (AOS2), принадлежат к суперсемейству цитохрома Р450 и включают группу CYP74, "специализирующуюся" на
20 метаболизме гидропероксидов. Данные белки играют роль в пути биосинтеза оксилипинов растений, который имеет важное значение для образования веществ, играющих важную роль в различных стрессовых процессах и в процессах развития растений, включая атаку патогенов/насекомых, а также фертильность растений. Hughes et al., Chembiochem 10:1122 (2009). Данные ферменты кодируются тремя различными
25 генами AOS1, 2 и 3, которые катализируют соответствующее образование альдегидов С6, жасмоновой кислоты (ЖК) и альдегидов С9. AOS1 и AOS2 представляют собой ферменты, локализованные в хлоропластах, тогда как существуют данные о том, что экспрессия AOS3 ограничивается подземными органами картофеля. Stumpe et al., Plant J 47: 883 (2006). Все три фермента представляют собой необычные белки цитохрома Р450,
30 которые не связывают молекулярный кислород, но используют уже окисленные субстраты, представляющие собой гидропероксиды жирных кислот, в качестве донора кислорода. Schaller and Stintzi, Phytochemistry 70:1532 (2009). Белок AOS2 катализирует окончательный этап образования жасмоновой кислоты (ЖК) в растениях. Жасмоновая кислота хорошо известна своей важной ролью в индукции защиты растения в ответ на
[00131] Аллели алленоксидсинтазы 2 (AOS2) и SNP, связанные с устойчивостью и/или толерантностью к патогену
[00132] Генный продукт AOS2 известен как алленоксидсинтаза 2 и катализирует превращение гидропероксидов в алленоксид, стадию активации в биосинтезе жасмоновой 5 кислоты (ЖК). Жасмоновая кислота и ее производные, известные под общим названием "жасмонаты", представляют собой ключевые сигнальные молекулы, вовлеченные в индукцию защитных реакций растения в ответ на атаку патогена или повреждение. Снижение выработки ЖК или чувствительности к ней приводит к увеличению подверженности растений к заболеваниям - например, мутанты Arabidopsis coil (Feys et
10 al., Plant Cell. 6(5):751-759 (1994)). В картофеле использование ЖК ингибирует прорастание спорангиев и мицелиальный рост Phytophthora infestans (Pi). Ген AOS2 Solanum tuberosum (StAOS2) локализуется в локусе количественной устойчивости (QRL) в хромосоме XI картофеля, которая содержит ген устойчивости R3a, который играет роль в расоспецифической устойчивости к заболеванию Pi. Pajerowska et al., Planta 228:293
15 (2008). Кроме того, сайленсинг гена AOS2 в картофеле приводил к сильному снижению уровней жасмоновой кислоты в поврежденных растениях и увеличению развития поражения при инфицировании Pi. (Pajerowska-Mukhtar et al., 2008, Planta 228:293 (2008). Ген SYAOS2 дополнял линию Arabidopsis thaliana с нокаутом гена AOS2, в которой отсутствовала ЖК, и данная дополненная линия растений по сравнению с линией с
20 делецией указанного гена демонстрировала повышенную устойчивость к бактериальному патогену Arabidopsis. (Pajerowska-Mukhtar et al., 2008).
[00133] Известны последовательности пяти аллелей AOS2, происходящих из диплоидного картофеля, используемого в популяциях предварительного отбора. Pajerowska et al., (2008); Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009). Данные пять
25 различных аллелей распределены по трем группам: "устойчивые" (SYAOS2-1, SYAOS2-6), "нейтральные" (SYAOS2-12) и "чувствительные" (SYAOS2-7, S?AOS2-8). В вышеупомянутых опубликованных исследованиях две популяции потомств F1 гетерозиготных родительских линий были отнесены к категориям: количественные устойчивые, количественные нейтральные и количественные чувствительные в
30 зависимости от развития фитофтороза. Позже данные категории были связаны с конкретными аллелями гена SYAOS2, перечисленными выше. Комплементационные анализы ЖК-дефицитного мутанта Arabidopsis с помощью аллелей SYAOS2 приводили к восстановлению выработки ЖК (и 12-оксофитодиеноат (ОРОА)-редуктазы, промежуточного соединения в биосинтезе ЖК). Кроме того, комплементация
35 "устойчивыми" аллелями приводила к 10-кратному увеличению выработки ЖК по
сравнению с уровнями, которые давали "чувствительные" аллели. "Нейтральный" аллель демонстрировал промежуточные уровни ЖК и OPDA. Кроме того, анализ данных дополненных линий Arabidopsis на предмет патогена с использованием Erwinia carotovora ssp. carotovora подтвердил характеристики выработки ЖК, продемонстрировав в 10 раз 5 больший рост бактерий в растениях, дополненных "чувствительными" аллелями, чем в случае "устойчивых" аллелей.
[00134] Сравнение аминокислотной последовательности пяти разных аллелей выявило наличие нескольких отличий аминокислот на протяжении высококонсервативной в остальном последовательности аллелей гена AOS2. Двадцать пять изменений
10 аминокислот и один полиморфизм по типу встраивание/делеция (InDel) присутствуют в пяти аллелях, при этом пять аминокислот (N76D, V289S, V292A, M328L и Т495К) и InDel характерны исключительно для "устойчивых" аллелей на основе нумерации чувствительного аллеля StAOS2-7 (SEQ ID NO: 5). Изменение аминокислот не было характерно исключительно для "чувствительных" аллелей. Три замены (Y145F, T231I7G и
15 К394Т) встречались в нейтральном аллеле. Pajerowska et al., Planta 228:293 (2008).
[00135] Замены аминокислот Т495К и N76D расположены в непосредственной близости от активного сайта. Полиморфизм F256V между StAOS2-l и StAOS2-6 выдвигается в качестве объяснения несколько меньшей эффективности StAOS2-6 на основе его локализации относительно субстрат-связывающего кармана. Кроме того, Y145F
20 нейтрального аллеля может вносить вклад в промежуточные характеристики активности, поскольку данный остаток расположен рядом с активным сайтом. Pajerowska-Mukhtar et al., Planta 228:293 (2008).
[00136] Оценка полевой устойчивости культурных сортов картофеля к Pi показала, что ген AOS2 представляет собой имеющий важное значение локус, который определяет
25 фенотип устойчивости некоторых культурных сортов. Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009). Два SNP, S?AOS2_SNP691(A) и S?AOS2_SNP692(C) коррелируют с полевой устойчивостью (значение rAUDPC 0,15, которое указывает на очень низкое развитие заболевания). В данном исследовании наиболее устойчивым к фитофторозу генотипом был гомозиготный генотип АААА/СССС, и наблюдали положительную
30 корреляцию со степенью отклонения от него и тяжестью развития фитофтороза. Также существуют данные о том, что эти SNP связаны со зрелостью растений (РМ). В целом, существует положительная корреляция между оценкой зрелости картофеля (культурные сорта с ранней зрелостью относительно культурных сортов с поздней зрелостью) и устойчивостью к Pi. Wastie RL, Adv Plant Pathology 7: 193 (1999). Однако гомозиготные по
35 аллелям А и С индивидуумы относятся к классу среднеранней зрелости, что таким
образом отделяет их от крайне нежелательного фенотипа поздней зрелости. Pajerowska-Mukhtar et al, Genetics 181:1115 (2009).
[00137] Solanum tuberosum представляет собой полностью гетерозиготный тетраплоид, что затрудняет передачу желаемых признаков между культурными сортами для 5 экспрессии в потомстве. Кроме того, некоторые виды Solanum с природной устойчивостью к насекомым-вредителям и заболеваниям, такие как некоторые, встречающиеся в Перу и Центральной Америке, являются диплоидными и не легко разводятся с тетраплоидным Solanum tuberosum. Аутотетраплоидный геном и бесполое размножение, используемое для разведения картофеля, создает проблемы в разработке
10 новых культурных сортов с желаемыми признаками. Признаки устойчивости, продемонстрированные у диплоидных видов, например, Solanum bulbocastanum, недоступны для передачи, поскольку указанный вид имеет балансовое число эндосперма, равное 1, по сравнению с S. Tuberosum, имеющим балансовое число эндосперма, равное 4. [00138] Применение системы быстрой доставки признака (Rapid Trait Development
15 System, RTDS(tm)) в картофеле обладает некоторыми преимуществами трансгенной генетической инженерии перед традиционным разведением. RTDS(tm) позволяет осуществлять манипуляцию с эндогенными генами AOS2, устраняя необходимость в обратном скрещивании, которое требуется для удаления нежелательных признаков при традиционном разведении. RTDS(tm) позволяет вводить мутации в генах, обеспечивающие
20 устойчивость и/или толерантность, демонстрируемую другими видами, которые не обладают плоидностью, совместимой с S. tuberosum. Кроме того, RTDS обладает преимуществами перед трансгеннои генетической инженерией. RTDS способна осуществлять манипуляции с эндогенными генами в противоположность введению чужеродного трансгена.
25 [00139] Система быстрой доставки признака (RTDS(tm))
[00140] В соответствии с любым из различных аспектов и вариантов композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутации в генах и белках можно осуществлять с применением, например, технологии на основе системы быстрой доставки признака (RTDS(tm)), разработанной Cibus. В комбинации или отдельно, растения,
30 содержащие любую из мутаций, описанных в настоящем документе, могут служить основой для новых устойчивых и/или толерантных к патогену продуктов. Также предложены семена/растительный материал, полученный из мутированных растений, в котором гены AOS2 являются либо гомозиготными, либо гетерозиготными в отношении мутаций. Мутации, описанные в настоящем документе, могут быть в комбинации с любой
35 другой известной мутацией или мутациями, обнаруживаемыми в дальнейшем.
[00141] В некоторых вариантах реализации RTDS основана на изменении целевого гена путем использования собственной системы клетки для репарации генов для специфической модификации последовательности гена in situ, а не встраивания чужеродной ДНК и последовательностей, контролирующих экспрессию генов. Данная 5 процедура может производить точное изменение в генетической последовательности, тогда как остальная часть генома остается неизменной. В отличие от традиционных трансгенных ГМО, не происходит интеграция чужеродного генетического материала, а также в растении не остается никакой чужеродный генетический материал. Во многих вариантах реализации изменения в генетической последовательности, вводимые с 10 помощью RTDS(tm), не являются вносимыми случайным образом. Поскольку затрагиваемые гены остаются в нативной локализации, не наблюдается случайный, неконтролируемый или неблагоприятный профиль экспрессии.
[00142] Способ RTDS(tm) осуществляют с использованием химически синтезированного олигонуклеотида (олигонуклеооснование репарации генов (GRON)), который может
15 состоять как из оснований ДНК, так и модифицированных оснований РНК, а также других химических фрагментов, и предназначен для гибридизации в локализации целевого гена с образованием пары (пар) оснований, спаренных вопреки принципу комплементарности. Данная пара оснований, спаренных вопреки принципу комплементарности, выступает в качестве сигнала для привлечения собственной природной системы клетки для репарации
20 генов в данный участок и коррекции (замены, встраивания или делеции) намеченного нуклеотида (нуклеотидов) в пределах гена. По завершении процесса коррекции молекула GRON распадается, и ныне модифицированный или подвергнутый репарации ген продолжает экспрессироваться в соответствии с обычными для данного гена внутренними механизмами контроля.
25 [00143] Олигонуклеооснования репарации генов ("GRON")
[00144] Способы и композиции, описанные в настоящем документе, можно применять на практике или получать с помощью "олигонуклеооснований репарации генов", например, имеющих конформации и химические структуры, подробно описанные ниже. "Олигонуклеооснования репарации генов", предусмотренные настоящим изобретением,
30 были также описаны в опубликованной научной и патентной литературе с использованием других названий, включая "рекомбинагенные олигонуклеооснования"; "химерные РНК/ДНК-олигонуклеотиды"; "химерные олигонуклеотиды"; "смешанные дуплексные олигонуклеотиды (MDON)"; "РНК ДНК-олигонуклеотиды (RDO)"; "олигонуклеотиды направленного воздействия на гены"; "генопласты"; "одноцепочечные
35 модифицированные олигонуклеотиды"; "одноцепочечные олигонуклеотидные
мутационные векторы" (SSOMV); "дуплексные мутационные векторы" и "гетеродуплексные мутационные векторы".
[00145] Олигонуклеооснования, имеющие конформации и химические структуры, описанные в патенте США №5565350 автором Kmiec (Kmiec I) и патенте США №5731181 5 автором Kmiec (Kmiec II), содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки, подходят для применения в качестве "олигонуклеооснований репарации генов" согласно настоящему изобретению. Указанные олигонуклеооснования репарации генов в Kmiec I и/или Kmiec II содержат две комплементарные цепи, одна из которых содержит по меньшей мере один сегмент нуклеотидов РНК-типа ("РНК-
10 сегмент"), основания которых спарены с нуклеотидами ДНК-типа другой цепи.
[00146] В Kmiec II описано, что нуклеотиды могут быть заменены на ненуклеотиды, содержащие пуриновые и пиримидиновые основания. Дополнительные молекулы репарации генов, которые можно использовать для настоящего изобретения, описаны в патентах США №№5756325; 5871984; 5760012; 5888983; 5795972; 5780296; 5945339;
15 6004804; и 6010907, и в международном патенте № PCT/US00/23457; и в международных публикациях патента №№ WO 98/49350; WO 99/07865; WO 99/58723; WO 99/58702; и WO 99/40789, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание. [00147] В одном из вариантов реализации олигонуклеооснование репарации генов представляет собой смешанный дуплексный олигонуклеотид (MDON), в котором
20 нуклеотидам РНК-типа указанного смешанного дуплексного олигонуклеотида придают устойчивость к РНКазе путем замены 2'-гидроксила функциональной группой, представляющей собой фтор, хлор или бром, или путем введения заместителя в 2'-0. Подходящие заместители включают заместители, указанные в Kmiec П. Альтернативные заместители включают заместители, указанные в патенте США №5334711 (Sproat), и
25 заместители, указанные в публикациях патента ЕР 629387 и ЕР 679657 (обобщенно заявки Martin), содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки. В настоящем описании 2'-фтор-, хлор- или бромпроизводное рибонуклеотида или рибонуклеотид, в котором 2'-ОН содержит заместитель, описанный в заявках Martin или у Sproat, называется "2'-содержащим заместители рибонуклеотид ом". В настоящем
30 описании термин "нуклеотид РНК-типа" означает 2'-гидроксильный или 2'-содержащий заместители нуклеотид, связанный с другими нуклеотидами смешанного дуплексного олигонуклеотида не содержащей заместителей фосфодиэфирной связью или любой из неприродных связей, указанных в Kmiec I или Kmiec П. В настоящем описании термин "нуклеотид дезоксирибо-типа" означает нуклеотид, содержащий 2'-Н, который может
35 быть связан с другими нуклеотидами олигонуклеооснования репарации генов не
содержащей заместителей фосфодиэфирной связью или любой из неприродных связей, указанных в Kmiec I или Kmiec П.
[00148] В конкретном варианте реализации настоящего изобретения олигонуклеооснование репарации генов представляет собой смешанный дуплексный 5 олигонуклеотид (MDON), который связан исключительно не содержащими заместителей фосфодиэфирными связями. В альтернативных вариантах реализации указанная связь осуществляется содержащими заместители фосфодиэфирами, производными фосфодиэфиров и связями не на основе фосфора, указанными в Kmiec П. В другом варианте реализации каждый нуклеотид РНК-типа в смешанном дуплексном
10 олигонуклеотиде представляет собой 2'-содержащий заместители нуклеотид. Наиболее предпочтительными вариантами 2'-содержащих заместители рибонуклеотидов являются 2'-фтор-, 2'-метокси-, 2'-пропилокси-, 2'-аллилокси-, 2'-гидроксилэтилокси-, 2'-метоксиэтилокси-, 2'-фторпропилокси- и 2'-трифторпропилоксизамещенные рибонуклеотиды. Более предпочтительными вариантами 2'-содержащих заместители
15 рибонуклеотидов являются 2'-фтор-, 2'-метокси-, 2'-метоксиэтилокси- и 2'-аллилоксизамещенные нуклеотиды. В другом варианте реализации смешанный дуплексный олигонуклеотид связан не содержащими заместителей фосфодиэфирными связями.
[00149] Хотя смешанные дуплексные олигонуклеотиды (MDON), содержащие только
20 один вид 2'-содержащего заместители нуклеотида РНК-типа, удобнее синтезировать, способы согласно настоящему изобретению можно применять на практике с помощью смешанных дуплексных олигонуклеотидов, содержащих два или более видов нуклеотидов РНК-типа. Прерывание, вызванное введением дезоксинуклеотида между двумя тринуклеотидами РНК-типа, может не влиять на функцию РНК-сегмента, соответственно,
25 термин "РНК-сегмент" включает такие термины, как "прерванный РНК-сегмент". Непрерывный РНК-сегмент называется сплошным РНК-сегментом. В альтернативном варианте реализации РНК-сегмент может содержать чередующиеся устойчивые к РНКазе нуклеотиды и нуклеотиды с не содержащим заместителей 2'-ОН. Смешанные дуплексные олигонуклеотиды предпочтительно содержат меньше 100 нуклеотидов и более
30 предпочтительно меньше 85 нуклеотидов, но больше 50 нуклеотидов. Основания первой и второй цепей спарены по Уотсону-Крику. В одном из вариантов реализации цепи смешанного дуплексного олигонуклеотида ковалентно связаны линкером, таким как одноцепочечный гекса-, пента- или тетрануклеотид так, что первая и вторая цепи являются сегментами одной олигонуклеотидной цепи, имеющей один 3'- и один 5'-конец.
35 Указанные 3'- и 5'-концы могут быть защищены путем присоединения "шпилечного
кэпа", при котором 3'- и 5'-концевые нуклеотиды спариваются по Уотсону-Крику с соседними нуклеотидами. Второй шпилечный кэп может быть дополнительно помещен на соединение между первой и второй цепями в отдалении от 3'- и 5'-концов так, чтобы стабилизировать спаривание по Уотсону-Крику между первой и второй цепями. 5 [00150] Первая и вторая цепи содержат две области, гомологичные двум фрагментам целевого гена, т.е. имеют такую же последовательность, что и целевой ген. Гомологичная область содержит нуклеотиды РНК-сегмента и может содержать один или более нуклеотидов ДНК-типа соединяющего ДНК-сегмента, и может также содержать нуклеотиды ДНК-типа, которые не находятся в пределах промежуточного ДНК-сегмента.
10 Две области гомологии отделены и каждая из них прилегает к области, имеющей последовательность, отличную от последовательности целевого гена, называемой "гетерологичной областью". Указанная гетерологичная область может содержать один, два или три несовпадающих нуклеотида. Несовпадающие нуклеотиды могут примыкать друг к другу или, в качестве альтернативы, могут быть разделены одним, двумя, тремя,
15 четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью, девятью, десятью, одиннадцатью, двенадцатью, тринадцатью, четырнадцатью или пятнадцатью нуклеотидами, гомологичными целевому гену. В качестве альтернативы, гетерологичная область может также содержать вставку из одного, двух, трех или из пяти или менее нуклеотидов. В качестве альтернативы, последовательность смешанного дуплексного олигонуклеотида
20 может отличаться от последовательности целевого гена только делецией одного, двух, трех или пяти, или менее нуклеотидов из смешанного дуплексного олигонуклеотида. В данном случае длиной и положением гетерологичной области считается длина делеции, даже несмотря на то, что в пределах гетерологичной области нет нуклеотидов смешанного дуплексного олигонуклеотида. Расстояние между фрагментами целевого гена, которые
25 комплементарны двум гомологичным областям, идентично длине гетерологичной области, в которой предполагается замена или замены. Когда гетерологичная область содержит встраивание, гомологичные области таким образом расположены в смешанном дуплексном олигонуклеотиде дальше друг от друга, чем их комплементарные гомологичные фрагменты расположены в гене, и обратное утверждение применимо, когда
30 гетерологичная область кодирует делецию.
[00151] Каждый из РНК-сегментов смешанных дуплексных олигонуклеотидов является частью гомологичной области, т.е. области, последовательность которой идентична фрагменту целевого гена, при этом указанные сегменты вместе предпочтительно содержат по меньшей мере 13 нуклеотидов РНК-типа и предпочтительно от 16 до 25 нуклеотидов
35 РНК-типа или более предпочтительно 18-22 нуклеотида РНК-типа, или наиболее
предпочтительно 20 нуклеотидов. В одном из вариантов реализации РНК-сегменты гомологичных областей разделены и прилегают к, т.е. "соединены" промежуточным ДНК-сегментом. В одном из вариантов реализации каждый нуклеотид гетерологичной области представляет собой нуклеотид промежуточного ДНК-сегмента. Промежуточный 5 ДНК-сегмент, который содержит гетерологичную область смешанного дуплексного олигонуклеотида, называется "мутаторным сегментом".
[00152] В другом варианте реализации настоящего изобретения олигонуклеооснование репарации генов (GRON) представляет собой одноцепочечный олигодезоксинуклеотидный мутационный вектор (SSOMV), например, такой как описан в
10 международной заявке на патент PCT/US2000/23457; патентах США №№ 6271360; 6479292; и 7060500, полное содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки. Последовательность SSOMV основана на тех же принципах, что и мутационные векторы, описанные в патентах США №№ 5756325; 5871984; 5760012; 5888983; 5795972; 5780296; 5945339; 6004804; и 6010907, и в международных
15 публикациях №№ WO 98/49350; WO 99/07865; WO 99/58723; WO 99/58702; и WO 99/40789. Последовательность SSOMV содержит две области, гомологичные целевой последовательности, разделенные областью, которая содержит желаемое генетическое изменение, называемой мутаторной областью. Мутаторная область может иметь последовательность той же длины, что и последовательность, которая разделяет
20 гомологичные области в целевой последовательности, но отличную от нее последовательность. Такая мутаторная область может обуславливать замену. В качестве альтернативы, гомологичные области в SSOMV могут граничить друг с другом, в то время как области в целевом гене, имеющие такую же последовательность, разделены одним, двумя или более нуклеотидами. Такой SSOMV вызывает делецию нуклеотидов в целевом
25 гене, которые отсутствуют в SSOMV. Наконец, последовательность целевого гена, которая идентична гомологичным областям, может быть смежной в целевом гене, но отделенной одним, двумя или более нуклеотидами в последовательности SSOMV. Такой SSOMV вызывает встраивание в последовательности целевого гена.
[00153] Нуклеотиды SSOMV представляют собой дезоксирибонуклеотиды, связанные 30 немодифицированными фосфодиэфирными связями за исключением того, что 3'-концевая и/или 5'-концевая межнуклеотидная связь или, в качестве альтернативы, две 3'-концевые и/или 5'-концевые межнуклеотидные связи могут представлять собой фосфоротиоат или фосфоамидат. В настоящем описании межнуклеотидная связь представляет собой связь между нуклеотидами в SSOMV и не включает связь между 3'-концевым нуклеотидом или 35 5'-концевым нуклеотидом и блокирующим заместителем. В конкретном варианте
реализации длина SSOMV составляет от 21 до 55 дезоксинуклеотидов, и длины областей гомологии составляют, соответственно, общую длину, равную по меньшей мере 20 дезоксинуклеотидам, и каждая из по меньшей мере двух областей гомологии должна иметь длину, равную по меньшей мере 8 дезоксинуклеотидам. 5 [00154] SSOMV может быть разработан таким образом, чтобы он был комплементарен либо кодирующей, либо некодирующей цепи целевого гена. В случае, когда желаемая мутация представляет собой замену одного основания, предпочтительно, чтобы как мутаторный нуклеотид, так и целевой нуклеотид представляли собой пиримидин. В тех случаях, когда это соответствует достижению желаемого функционального результата,
10 предпочтительно, чтобы как мутаторный нуклеотид, так и целевой нуклеотид в комплементарной цепи представляли собой пиримидины. Наиболее предпочтительными являются SSOMV, которые кодируют трансверсии, т.е. мутаторный С или Т нуклеотид спаривается вопреки принципу комплементарности соответственно с С или Т нуклеотидом в комплементарной цепи.
15 [00155] В дополнение к олигодезоксинуклеотиду SSOMV может содержать 5'-блокирующий заместитель, присоединенный к 5'-концевым атомам углерода через линкер. Химическая структура линкера не имеет критического значения в отличие от его длины, которая предпочтительно должна составлять по меньшей мере 6 атомов, и линкер должен быть гибким. Можно использовать различные нетоксичные заместители, такие как
20 биотин, холестерин или другие стероиды, или неинтеркалирующий катионный флуоресцентный краситель. Наиболее предпочтительными реагентами для получения SSOMV являются реагенты, продаваемые под названием СуЗ(tm) и Су5(tm) компанией Glen Research, Стерлинг, Вирджиния (в настоящее время GE Healthcare), которые представляют собой блокированные фосфорамидиты, которые при включении в олигонуклеотид
25 образуют красители, представляющие собой 3,3,3',3'-тетраметил-гЧ,гЧ'-изопропилзамещенный индомонокарбоцианин и индодикарбоцианин соответственно. СуЗ(tm) является наиболее предпочтительным. Когда индокарбоцианин является N-оксиалкилзамещенным, он может быть легко связан с 5'-концом олигодезоксинуклеотида в виде фосфодиэфира с 5'-концевым фосфатом. Химическая структура красителя-линкера
30 между красителем и олигодезоксинуклеотидом не имеет критического значения и выбирается из соображений удобства синтеза. Когда коммерчески доступный фосфорамидит СуЗ(tm) используют в соответствии с указаниями, полученная 5'-модификация состоит из блокирующего заместителя и линкера, которые вместе представляют собой N-гидроксипропил, гЧ'-фосфатидилпропил-3,3,3',3'-
35 тетраметилиндомонокарбоциацин.
[00156] В предпочтительном варианте реализации индокарбоцианиновый краситель является тетразамещенным в 3- и З'-положениях индольных колец. Без ограничения рамками какой-либо теории, данные замещения препятствуют тому, чтобы указанный краситель был интеркалирующим красителем. Идентичность заместителей в данных 5 положениях не имеет критического значения. SSOMV может дополнительно содержать 3'-блокирующий заместитель. Снова химическая структура указанного 3'-блокирующего заместителя не имеет критического значения.
[00157] Мутации, описанные в настоящем документе, также могут быть получены путем мутагенеза (случайного, соматического или направленного) и других технологий
10 "редактирования" или рекомбинации ДНК, включая, но не ограничиваясь ими, направленное воздействие на гены с использованием сайт-специфической гомологичной рекомбинации под действием цинк-пальцевых нуклеаз, мегануклеаз или других нуклеаз. [00158] Доставка олигонуклеооснований репарации генов в растительные клетки [00159] Для доставки олигонуклеооснований репарации генов можно использовать
15 любой общеизвестный способ, используемый для трансформации растительной клетки. Типичные способы описаны ниже. [00160] Микроносители и микроволокна
[00161] Применение металлических микроносителей (микросфер) для введения крупных фрагментов ДНК в растительные клетки с целлюлозными клеточными стенками путем 20 "бомбардирующего" проникновения хорошо известно специалисту в соответствующей области техники (далее биолистическая доставка). В патентах США №№ 4945050; 5100792 и 5204253 описана общая методика выбора микроносителей и устройств для их получения.
[00162] Конкретные условия применения микроносителей в способах согласно 25 настоящему изобретению описаны в международной публикации WO 99/07865. Согласно типичной методике охлажденные до температуры льда микроносители (60 мг/мл), смешанный дуплексный олигонуклеотид (60 мг/мл), 2,5 М СаСЬ и 0,1 М спермидин добавляют в данном порядке; смесь осторожно встряхивают, например, на вортексе в течение 10 минут, а затем оставляют при комнатной температуре на 10 минут, после чего 30 микроносители разводят в 5 объемах этанола, центрифугируют и ресуспендируют в 100% этаноле. Хорошие результаты могут быть получены при концентрации в отвечающем условиям растворе, составляющей 8-10 мкг/мкл микроносителей, 14-17 мкг/мл смешанного дуплексного олигонуклеотида, 1,1-1,4 М СаСЬ и 18-22 мМ спермидин. Оптимальные результаты наблюдали в условиях, представляющих собой 8 мкг/мкл
микроносителей, 16,5 мкг/мл смешанного дуплексного олигонуклеотида, 1,3 М СаСЬ и 21 мМ спермидин.
[00163] Олигонуклеооснования репарации генов можно также вводить в растительные клетки для практического применения настоящего изобретения с использованием 5 микроволокон для проникновения в клеточную стенку и клеточную мембрану. В патенте США №5302523 авторов Coffee et al. описано применение 30 X 0,5 мкм и 10 X 0,3 мкм карбидокремниевых волокон для облегчения трансформации суспензионных культур кукурузы Black Mexican Sweet. Любой механический способ, который можно использовать для введения ДНК для трансформации растительной клетки с 10 использованием микроволокон, можно применять для доставки олигонуклеооснований репарации генов для трансмутации.
[00164] Типичная методика доставки олигонуклеооснования репарации генов с использованием микроволокон заключается в следующем: стерильные микроволокна (2 мкг) суспендируют в 150 мкл растительной культуральной среды, содержащей примерно 15 10 мкг смешанного дуплексного олигонуклеотида. Суспензионной культуре дают осесть и равные объемы клеточной массы и суспензии стерильного волокна/нуклеотида перемешивают на вортексе в течение 10 минут и высевают. Селективные среды добавляют сразу же или с отсрочкой до примерно 120 часов в зависимости от конкретного признака.
20 [00165] Электропорация протопластов
[00166] В альтернативном варианте реализации олигонуклеооснования репарации генов могут быть доставлены в растительную клетку путем электропорации протопласта, полученного из части растения или суспензии растительных клеток. Протопласты получают путем ферментативной обработки части растения, в частности, листа в
25 соответствии с методиками, хорошо известными специалисту в данной области техники. См., например, Gallois et al., 1996, Methods in Molecular Biology 55:89-107, Humana Press, Totowa, N.J.; Kipp et al, 1999, Methods in Molecular Biology 133:213-221, Humana Press, Totowa, N.J. Протопласты не нужно культивировать в питательных средах перед электропорацией. Типичные условия электропорации являются следующими: ЗХ105
30 протопластов в общем объеме 0,3 мл с концентрацией олигонуклеооснования репарации генов, составляющей 0,6-4 мкг/мл.
[00167] ПЭГ-опосредуемое поглощение ДНК протопластами
[00168] В альтернативном варианте реализации нуклеиновые кислоты поглощаются протопластами растений в присутствии модифицирующего мембрану агента 35 полиэтиленгликоля в соответствии с методиками, хорошо известными специалисту в
данной области техники (см., например, Gharti-Chhetri et al, Physiol. Plant. 85:345-351 (1992); Datta et al, Plant Molec. Biol. 20:619-629 (1992)). [00169] Микроинъекция
[00170] В альтернативном варианте реализации олигонуклеооснования репарации генов 5 могут быть доставлены путем введения их с помощью микрокапилляра в растительные клетки или в протопласты (см., например, Miki В. et al., Meth. Cell Science 12:139-144 (1989); Schnorf M., et al, Transgen. Res. 1:23-30 (1991)). [00171] Трансгенные растения
[00172] В соответствии с любым из различных аспектов и вариантов композиций и
10 способов, описанных в настоящем документе, мутации в генах и белках могут быть осуществлены с использованием, например, трансгенной технологии. В некоторых вариантах реализации композиции и способы включают растение или растительную клетку, содержащую конструкцию трансформированной нуклеиновой кислоты, включающую промотор, функционально связанный с нуклеотидом AOS2, описанным в
15 настоящем документе. Способы, описанные в настоящем документе, могут включать введение конструкции нуклеиновой кислоты AOS2, описанной в настоящем документе, по меньшей мере в одну растительную клетку и регенерацию трансформированного растения на ее основе. Конструкция нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, которая кодирует устойчивый и/или толерантный к
20 патогену белок AOS2, описанный в настоящем документе, в частности, нуклеотидные последовательности, представленные на фиг.2 и 4, и их фрагменты и варианты. Способы дополнительно включают использование промотора, который способен регулировать экспрессию генов в растительной клетке. В одном из вариантов реализации такой промотор представляет собой конститутивный промотор или тканепредпочтительный
25 промотор. Растение, получаемое данными способами, может обладать повышенной или стабилизированной активностью AOS2, и/или повышенными уровнями жасмоновой кислоты и/или 12-оксофитодиеновой кислоты (OPDA), приводящими к повышенной устойчивости и/или толерантности к патогенам по сравнению с ^трансформированным растением. Таким образом, указанные способы находят применение для усиления или
30 повышения устойчивости и/или толерантности растения по меньшей мере к одному патогену.
[00173] В одном из вариантов реализации способы получения устойчивого и/или толерантного к патогену растения включают трансформацию растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, 35 функционально связанную с промотором, который регулирует экспрессию в растительной
клетке, и регенерацию трансформированного растения из указанной трансформированной растительной клетки. Указанная нуклеотидная последовательность выбрана из тех нуклеотидных последовательностей, которые кодируют устойчивый и/или толерантный к патогену AOS2, описанный в настоящем документе, в частности, нуклеотидных 5 последовательностей, представленных на фиг.2 и 4, и их фрагментов и вариантов. Устойчивое и/или толерантное к патогену растение, получаемое данным способом, обладает повышенной устойчивостью и/или толерантностью по сравнению с ^трансформированным растением по меньшей мере к одному патогену, например, Phytophthora infestans.
10 [00174] Описанные молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы в конструкциях нуклеиновых кислот для трансформации растений, например, культурных растений, таких как Solanum tuberosum. В одном из вариантов реализации такие конструкции нуклеиновых кислот, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению, можно применять для получения трансгенных растений с
15 обеспечением устойчивости и/или толерантности к патогенам, таким как Phytophthora infestans. Конструкции нуклеиновых кислот можно применять в кассетах экспрессии, векторах экспрессии, трансформационных векторах, плазмидах и т.п. Трансгенные растения, получаемые в результате трансформации такими конструкциями, демонстрируют повышенную устойчивость и/или толерантность к патогенам, таким как,
20 например, Phytophthora infestans. [00175] Конструкции
[00176] Молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе (например, мутированные гены AOS2), можно применять для получения рекомбинантных конструкций нуклеиновых кислот. В одном из вариантов реализации молекулы 25 нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению можно применять для получения конструкций нуклеиновых кислот, например, кассет экспрессии для экспрессии в представляющем интерес растении.
[00177] Кассеты экспрессии могут содержать регуляторные последовательности, функционально связанные с последовательностями нуклеиновых кислот AOS2, 30 описанными в настоящем документе. Кассета может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген для котрансформации в организме. В качестве альтернативы, указанный дополнительный ген (гены) может быть предусмотрен в нескольких кассетах экспрессии.
[00178] Конструкции нуклеиновых кислот могут быть снабжены множеством сайтов 35 рестрикции для встраивания последовательности нуклеиновой кислоты AOS2 таким
образом, чтобы находиться под регуляцией транскрипции регуляторными областями. Конструкции нуклеиновых кислот могут дополнительно содержать молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие селектируемые маркерные гены.
[00179] Для получения конструкций нуклеиновых кислот можно использовать любой 5 промотор. Промотор может быть нативным или схожим, или чужеродным, или гетерологичным по отношению к растению-хозяину и/или по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот AOS2, описанным в настоящем документе. Кроме того, промотор может представлять собой природную последовательность или, в качестве альтернативы, синтетическую последовательность. В случае, когда промотор
10 является "чужеродным" или "гетерологичным" по отношению к растению-хозяину, предполагается, что указанный промотор не встречается в нативном растении, в который вводят промотор. В случае, когда промотор является "чужеродным" или "гетерологичным" по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот AOS2, описанным в настоящем документе, предполагается, что указанный промотор не является
15 ни нативным, ни встречающимся в природе промотором для функционально связанных последовательностей нуклеиновых кислот AOS2, описанных в настоящем документе. В настоящем описании химерный ген содержит кодирующую последовательность, функционально связанную с областью инициации транскрипции, которая является гетерологичной по отношению к указанной кодирующей последовательности.
20 [00180] В некоторых вариантах реализации последовательности нуклеиновых кислот AOS2, описанные в настоящем документе, экспрессируются с использованием гетерологичных промоторов, нативные промоторные последовательности могут быть использованы для получения конструкций. Такие конструкции будут изменять уровни экспрессии белка AOS2 в растении или растительной клетке. Таким образом, изменяется
25 фенотип растения или растительной клетки.
[00181] Для получения конструкций можно использовать любой промотор для контроля экспрессии кодирующей последовательности AOS2, такие как конститутивные, тканепредпочтительные, индуцибельные промоторы или другие промоторы для экспрессии в растениях. Конститутивные промоторы включают, например, коровый
30 промотор Rsyn7-npoMOTopa и другие конститутивные промоторы, описанные в WO 99/43838 и патенте США №6072050; коровый промотор CaMV 35S (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812); промотор актина риса (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2:163-171); убиквитина (Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:619-632 и Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS
35 (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); промотор ALS (патент США №5659026) и т.п.
Другие конститутивные промоторы включают, например, промоторы из патентов США №№5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142; и 6177611. [00182] Тканепредпочтительные промоторы можно использовать для регуляции экспрессии AOS2 в конкретной ткани растения. Такие тканепредпочтительные промоторы 5 включают, но не ограничиваются ими, предпочтительные для листа промоторы, предпочтительные для корня промоторы, предпочтительные для семени промоторы и предпочтительные для стебля промоторы. Тканепредпочтительные промоторы включают промоторы, описанные в Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12(2):255-265; Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen et al. (1997) Mol. Gen Genet. 254(3):337-343;
10 Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6(2):157-168; Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 1 12(3):1331-1341; Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 1 12(2):525-535; Canevascini et al. (1996) Plant Physiol. 112(2): 513-524; Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994) Results Probl. Cell Differ. 20:181-196; Orozco et al. (1993) Plant Mol Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka et al. (1993) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586- 9590; и
15 Guevara-Garcia et al. (1993) Plant J. 4(3):495-505.
[00183] Конструкции нуклеиновых кислот могут также содержать области терминации транскрипции. В случае, когда используют области терминации транскрипции, для получения конструкций нуклеиновых кислот можно использовать любую область терминации. Например, область терминации может быть нативной по отношению к
20 области инициации транскрипции, может быть нативной по отношению к функционально связанной представляющей интерес последовательности AOS2, может быть нативной по отношению к растению-хозяину или может быть получена из другого источника (т.е. чужеродная или гетерологичная по отношению к промотору, представляющей интерес молекуле нуклеиновой кислоты AOS2, растению-хозяину или их любой комбинации).
25 Примеры областей терминации, которые доступны для использования в конструкциях согласно настоящему изобретению, включают области терминации из Ti-плазмиды А. tumefaciens, такие как области терминации октопинсинтазы и нопалинсинтазы. См. также Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262:141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al. (1990) Plant Cell 2:1261-1272;
30 Munroe et al. (1990) Gene 91:151-158; Ballas et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; и Joshi et al. (1987) Nucleic Acid Res. 15:9627-9639.
[00184] В некоторых вариантах реализации нуклеиновые кислоты могут быть оптимизированы для увеличения экспрессии в трансформированном растении. То есть нуклеиновые кислоты, кодирующие мутантные белки AOS2, можно синтезировать с 35 использованием предпочтительных для растения кодонов для улучшения экспрессии. См.,
например, обсуждение предпочтительного для хозяина использования кодонов в Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92:1-11. В данной области техники доступны способы синтеза предпочтительных для растения генов. См., например, патенты США №№5380831 и 5436391, и Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498. 5 [00185] Кроме того, могут быть осуществлены другие модификации последовательностей нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе. Например, дополнительные модификации последовательностей усиливают экспрессию генов в клетке-хозяине. Они включают удаление последовательностей, кодирующих ложные сигналы полиаденилирования, сигналы сайтов сплайсинга экзона/интрона, подобные
10 транспозонам повторы и других таких хорошо охарактеризованных последовательностей, которые могут оказывать неблагоприятное воздействие на экспрессию генов. Содержание G-C в последовательности можно также регулировать до уровней, которые являются средними для целевой клетки-хозяина, рассчитанных в соответствии с известными генами, экспрессируемыми в указанной клетке-хозяине. Кроме того, последовательность
15 можно модифицировать для избегания предсказанных вторичных шпилечных структур мРНК.
[00186] Другие последовательности нуклеиновых кислот можно также использовать для получения конструкций согласно настоящему изобретению, например, для усиления экспрессии кодирующей последовательности AOS2. Такие последовательности
20 нуклеиновых кислот включают интрон 1 гена Adhl кукурузы (Callis et al. (1987) Genes and Development 1:1183-1200) и лидерные последовательности, (W-последовательность) из вируса табачной мозаики (TMV), вируса хлоротической пятнистости кукурузы и вируса мозаики люцерны (Gallie et al., (1987) Nucleic Acid Res. 15:8693-8711 и Skuzeski et al., (1990) Plant Mol. Biol. 15:65-79). Было показано, что первый интрон локуса shrunken-1
25 кукурузы увеличивает экспрессию генов в химерных генетических конструкциях. В патентах США №№5424412 и 5593874 описано применение конкретных интронов в конструкциях экспрессии генов, и Gallie et al., Plant Physiol. 106:929-939 (1994) также показали, что интроны подходят для регуляции экспрессии генов на тканеспецифической основе. Для дополнительного усиления или для оптимизации экспрессии гена AOS2
30 растительные векторы экспрессии, описанные в настоящем документе, могут также содержать последовательности ДНК, содержащие участки прикрепления к ядерному матриксу (MAR). Растительные клетки, трансформированные такими модифицированными системами экспрессии, в таком случае могут демонстрировать сверхэкспрессию или конститутивную экспрессию нуклеотидной последовательности
35 согласно настоящему изобретению.
[00187] Конструкции экспрессии, описанные в настоящем документе, могут также содержать последовательности нуклеиновых кислот, способные направлять экспрессию последовательности AOS2 в хлоропласт. Такие последовательности нуклеиновых кислот включают нацеленную на хлоропласты последовательность, кодирующую транзитный 5 пептид хлоропласта, для направления представляющего интерес генного продукта в хлоропласты растительных клеток. Такие транзитные пептиды известны в данной области техники. В отношении нацеленных на хлоропласты последовательностей термин "функционально связанный" означает, что последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая транзитный пептид (т.е. нацеленная на хлоропласты последовательность),
10 связана с молекулой нуклеиновой кислоты AOS2 согласно настоящему изобретению так, что две последовательности примыкают друг к другу и находятся в одной и той же рамке считывания. См., например, Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965968; Romero al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986)
15 Science 233:478-481. В то время как белки AOS2, описанные в настоящем документе, могут включать нативный транзитный пептид хлоропласта, любой транзитный пептид хлоропласта, известный в данной области техники, может быть слит с аминокислотной последовательностью зрелого белка AOS2 согласно настоящему изобретению путем функционального связывания нацеленной на хлоропласты последовательности с 5'-
20 концом нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый белок AOS2 согласно настоящему изобретению.
[00188] Нацеленные на хлоропласты последовательности известны в данной области техники и включают малую субъединицу рибулоза-1,5-бисфосфаткарбоксилазы (Rubisco) хлоропластов (de Castro Silva Filho et al. (1996) Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell et al.
25 (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5-(енолпирувил)шикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS) (Archer et al. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810); триптофансинтазу (Zhao et al. (1995) J. Biol. Chem. 270(1 1):6081- 6087); пластоцианин (Lawrence et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); хоризматсинтазу (Schmidt et al. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); и светособирающий хлорофилл a/b-связывающий белок (LHBP)
30 (Lamppa et al. (1988) J. Biol. Chem. 263:14996-14999). См. также Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986) Science 233:478-481.
[00189] В другом варианте реализации могут быть получены конструкции нуклеиновых 35 кислот для направления экспрессии мутантной кодирующей последовательности AOS2 из
хлоропласта растительной клетки. Способы трансформации хлоропластов известны в данной области техники. См., например, Svab et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab and Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606. Способ основан на доставке ДНК, содержащей 5 селектируемый маркер, с помощью генной пушки, и нацеливании ДНК на геном пластид посредством гомологичной рекомбинации. Кроме того, трансформацию пластид можно осуществлять путем трансактивации молчащего происходящего из пластид трансгена посредством тканепредпочтительной экспрессии кодируемой ядром и направленной на пластиды РНК-полимеразы. Такая система была описана в McBride et al. (1994) Proc. Natl. 10 Acad. Sci. USA 91:7301-7305.
[00190] Представляющие интерес нуклеиновые кислоты для нацеливания на хлоропласт могут быть оптимизированы для экспрессии в хлоропласте с учетом различий в использовании кодонов между ядром растения и данной органеллой. Таким образом, представляющие интерес нуклеиновые кислоты можно синтезировать с использованием 15 предпочтительных для хлоропластов кодонов. См., например, патент США №5380831, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. [00191] Конструкции нуклеиновых кислот можно применять для трансформации растительных клеток и регенерации трансгенных растений, содержащих мутантные кодирующие последовательности AOS2. Доступны многочисленные векторы для 20 трансформации растений и способы трансформации растений. См., например, патент США № 6753458; An, G. et al. (1986) Plant Physiol., 81:301-305; Fry, J. et al. (1987) Plant Cell Rep. 6:321-325; Block, M. (1988) Theor. Appl Genet.76:767-774; Hinchee et al. (1990) Stadler. Genet. Symp.203212.203-212; Cousins et al. (1991) Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494; Chee, P. P. et al. (1992) Gene. 118:255-260; Christou et al. (1992) Trends. Biotechnol. 10:23925 246; D'Halluin et al. (1992) Bio/Technol. 10:309-3 14; Dhir et al. (1992) Plant Physiol. 99:8188; Casas et al. (1993) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90:11212-11216; Christou, P. (1993) In Vitro Cell. Dev. Biol.-Plant; 29P:1 19-124; Davies et al. (1993) Plant Cell Rep. 12:180-183; Dong, J. A. et al. (1993) Plant Sci. 91:139-148; Franklin, С. I. et al. (1993) Plant. Physiol. 102:167; Golovkin et al. (1993) Plant Sci. 90:41-52; Guo Chin Sci. Bull. 38:2072-2078; Asano et al. 30 (1994) Plant Cell Rep. 13; Ayeres, N. M. et al. (1994) Crit. Rev. Plant. Sci. 13:219-239; Barcelo et al. (1994) Plant. J. 5:583-592; Becker, et al. (1994) Plant. J. 5:299-307; Borkowska et al. (1994) Acta. Physiol Plant. 16:225- 230; Christou, P. (1994) Agro. Food. Ind. Hi Tech. 5: 17-27; Eapen et al. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman et al. (1994) Bio-Technology 12: 919923; Ritala et al. (1994) Plant. Mol. Biol. 24:317-325; и Wan, Y. C. et al. (1994) Plant
Physiol. 104:3748. Указанные конструкции можно также трансформировать в растительные клетки с использованием гомологичной рекомбинации. [00192] Описанные конструкции, содержащие последовательности нуклеиновых кислот AOS2, описанные в настоящем документе, можно применять в различных способах для 5 получения трансгенных клеток-хозяев, таких как бактерии, дрожжи, и для трансформации растительных клеток и в некоторых случаях регенерации трансгенных растений. Например, способы получения трансгенного культурного растения, содержащего мутантные белки AOS2, описанные в настоящем документе, в которых экспрессия нуклеиновой кислоты (кислот) в указанном растении обуславливает устойчивость и/или
10 толерантность к патогену по сравнению с растениями дикого типа или с известными мутантными по AOS2 растениями, включают: (а) введение в растительную клетку вектора экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую мутантный белок AOS2, и (Ь) получение из указанной растительной клетки трансгенного растения, которое является устойчивым и/или толерантным к патогену.
15 [00193] Мутации AOS2
[00194] Композиции и способы могут относиться, по меньшей мере отчасти, к мутациям в гене AOS2, например, мутациям, которые делают растение устойчивым или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации композиции и способы также относятся к использованию олигонуклеооснования репарации генов для осуществления
20 желаемой мутации в хромосомных или эписомальных последовательностях растения в гене, кодирующем белок AOS2. Мутированный белок может в некоторых вариантах реализации по существу сохранять каталитическую активность белка дикого типа, что обеспечивает повышенную устойчивость и/или толерантность растения к патогену и, таким образом, в некоторых вариантах реализации обеспечивает по существу нормальный
25 или измененный рост или развитие растения, его органов, тканей или клеток по сравнению с растением дикого типа, независимо от наличия или отсутствия патогена. Композиции и способы также относятся к нетрансгенной растительной клетке, в которой ген AOS2 был подвергнут мутации, нетрансгенному растению, регенерированному из нее, а также растению, полученному в результате скрещивания с использованием
30 регенерированного нетрансгенного растения с растением, содержащим мутацию в другом гене AOS2 или в том же гене AOS2, например. Композиции и способы также относятся к трансгенной растительной клетке, в которой ген AOS2 был подвергнут мутации, трансгенному растению, регенерированному из нее, а также растению, полученному в результате скрещивания с использованием регенерированного трансгенного растения с
35 растением, содержащим мутацию в другом гене AOS2 или в том же гене AOS2, например.
[00195] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 5 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении,
10 соответствующем положению 12 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 37 последовательности SEQ Ш NO:
15 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит
20 одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении,
25 соответствующем положению 113 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ ID NO:
30 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит
35 одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 227
последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, 5 соответствующем положению 256 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID N0:
10 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит
15 одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении,
20 соответствующем положению 320 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID N0:
25 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит
30 одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций в положении,
35 соответствующем положению 407 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых
вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ ID NO: 5 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит
10 одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 480 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении,
15 соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 5.
[00196] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ Ш N0: 7; Р в положении
20 аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5; R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ Ш N0: 11; А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5; F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3; Т в положении аминокислоты 48
25 последовательности SEQ Ш N0: 5; I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27; V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7; М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 5;
30 D в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 49; F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID NO: 9; L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ Ш N0: 5; Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ Ш N0: 3; К в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7; А в положении аминокислоты 227
SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7; G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9; F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 5; V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ Ш NO: 3; А в положении аминокислоты 264 последовательности 5 SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7; F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41; V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ Ш N0: 11; N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13; V
10 в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19; М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ Ш NO: 23; М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5; L в
15 положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19; V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27; Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ Ш NO: 5; D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13; V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ Ш NO: 5; L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13; I в положении
20 аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5; М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 3; Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ Ш NO: 5; L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ Ш NO: 35; Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ Ш NO: 9; G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5; С в положении аминокислоты 407
25 последовательности SEQ Ш NO: 13; F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ Ш NO: 5; делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39; V в положении
30 аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ Ш NO: 5; D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ Ш NO: 21; и/или Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в
35 положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах
реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной 5 последовательности AOS2, содержащей R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
10 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 46
15 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
20 последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный
25 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 51
30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
35 последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 76
последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении 113 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или 5 более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей D в положении 113 последовательности SEQ ID N0: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ Ш N0: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный
10 белок A0S2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей Е в положении аминокислоты 197
15 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
20 последовательности A0S2, содержащей К в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
25 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 231
30 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
35 последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 256
последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный 5 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 270
10 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
15 последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
20 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 289
25 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
30 последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный
35 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 320 5 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
10 последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный
15 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 337
20 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
25 последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
30 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 381
белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной 5 последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
10 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 423
15 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
20 последовательности AOS2, содержащей делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
25 белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 480
30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной
35 последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 494
последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5. 5 [00197] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в
10 положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 678 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит Т в положении, соответствующем положению 681 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых
15 вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 727 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 744 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит С в положении,
20 соответствующем положению 774 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 879 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 содержит А в положении, соответствующем положению 900 последовательности SEQ Ш N0: 2. В некоторых
25 вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 954 последовательности SEQ ID NO: 2. [00198] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 может кодировать мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2
30 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7; Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ Ш N0: 5; R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ Ш N0: 11; А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении
последовательности SEQ ID NO: 5; F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3; T в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ Ш NO: 5; I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ Ш N0: 27; V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID N0: 7; М в положении аминокислоты 51 5 последовательности SEQ Ш N0: 5; D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID N0: 5; N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ Ш N0: 5; G в положении 113 последовательности SEQ Ш N0: 5; D в положении 113 последовательности SEQ Ш N0: 49; F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID N0: 9; L в положении аминокислоты 187 последовательности
10 SEQ Ш N0: 5; Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID N0: 5; D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ Ш N0: 3; К в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID N0: 7; А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID N0: 5; Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID N0: 5; I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID N0: 7; G в
15 положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID N0: 9; F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID N0: 5; V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ Ш N0: 3; А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID N0: 7; L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID N0: 7; F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID N0: 5; S в положении
20 аминокислоты 282 последовательности SEQ ID N0: 41; V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID N0: 5; S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ Ш N0: 11; N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID N0: 13; V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID N0: 5; L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID N0: 5; I в положении аминокислоты 309
25 последовательности SEQ ID N0: 19; М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID N0: 5; L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ Ш N0: 23; М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID N0: 5; L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID N0: 19; V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID N0: 27; Е в положении аминокислоты 337
30 последовательности SEQ Ш N0: 5; D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID N0: 13; V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ Ш N0: 5; L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID N0: 13; I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID N0: 5; М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID N0: 3; Р в положении аминокислоты 381 последовательности
положении аминокислоты 394 последовательности SEQ Ш N0: 9; G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5; С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ Ш N0: 13; F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 430 последовательности 5 SEQ Ш N0: 5; делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39; V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5, G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ Ш N0: 5; D в положении аминокислоты 494 последовательности
10 SEQ Ш N0: 21; и/или Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген
15 AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей R в
20 положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок
25 AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении
30 аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий
35 одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2,
содержащей Т в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей I в положении аминокислоты 48 5 последовательности SEQ ID N0: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID N0: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или
10 более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID N0: 5. В
15 некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций
20 относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей G в положении 113 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей D в положении 113 последовательности SEQ ID N0: 49. В некоторых вариантах реализации
25 мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID N0: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2,
30 содержащей L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности A0S2, содержащей Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген
35 A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий одну или более мутаций
относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей К в 5 положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок
10 AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении
15 аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий
20 одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 256
25 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или
30 более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ Ш NO: 5. В
35 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок
A0S2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций 5 относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ Ш N0: 11. В некоторых
10 вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной
15 последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации
20 мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ Ш NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности
25 AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ Ш NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный
30 ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в
35 положении аминокислоты 328 последовательности SEQ Ш NO: 19. В некоторых
вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный 5 белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении
10 аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок
15 AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении
20 аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ Ш N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2,
25 содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 381
30 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или
35 более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в
положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13. В 5 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций
10 относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В
15 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций
20 относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ Ш NO: 5. В
25 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций
30 относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5.
[00199] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, или 5 одиннадцать или более, или двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций в положениях, выбранных из группы, состоящей из S6,
10 Р12, R12, V30, Т37, F46, L46,148, Т48,151, D76, N76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292,1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407, 1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35,
15 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит две или более мутаций, по меньшей мере одна из которых расположена в положении аминокислоты, соответствующем положению, выбранному из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46,148, Т48,151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289,
20 А292, 1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407, 1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит три или более мутаций, по меньшей мере одна из
25 которых расположена в положении аминокислоты, соответствующем положению, выбранному из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46,148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, 1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407, 1423, F430, А439 (где А обозначает
30 делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. [00200] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F6
35 последовательности SEQ ID NO: 7 или 9. В соответствии с любым из аспектов, вариантов
реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению R12 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов 5 реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Р12 последовательности SEQ ID N0: 11. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты,
10 соответствующем положению АЗО последовательности SEQ ГО N0: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V30 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В
15 соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 137 последовательности SEQ ГО N0: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит
20 мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F46 последовательности SEQ ID N0: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L46 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27,
25 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 148 последовательности SEQ ID N0: 27, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем
30 документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V48 последовательности SEQ ГО N0: 7. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т48 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5,
35 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В соответствии с любым
из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М51 последовательности SEQ ID NO: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в 5 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению N76 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 19, 21, 23, 25, 29, 31 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G113 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31,
10 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45 или 47. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F145 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых
15 вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L187 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Е197 последовательности SEQ Ш NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
20 В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D197 последовательности SEQ Ш N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению К200 последовательности SEQ ID NO: 7 или 9. В некоторых вариантах реализации
25 мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению А227 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 1231 последовательности SEQ ID N0: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в
30 положении аминокислоты, соответствующем положению G231 последовательности SEQ Ш N0: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т231 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 23, 25, 27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок
35 A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F256
последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации 5 мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению А264 последовательности SEQ Ш N0: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L270 последовательности SEQ ID N0: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в
10 положении аминокислоты, соответствующем положению F282 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению S282 последовательности SEQ Ш N0: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит
15 мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению N289 последовательности SEQ ID N0: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V289 последовательности SEQ ID N0: 5, 7 или 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты,
20 соответствующем положению S289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V292 последовательности SEQ ID N0: 5, 7, 9 или 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в
25 положении аминокислоты, соответствующем положению L309 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 1309 последовательности SEQ Ш N0: 19, 21, 23, 25 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2
30 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М320 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L320 последовательности SEQ ID N0: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный
35 белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем
положению V328 последовательности SEQ ID NO: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М328 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит 5 мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Е337 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В
10 некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D337 последовательности SEQ Ш N0: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V338 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39,
15 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L338 последовательности SEQ ID N0: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 1357 последовательности SEQ Ш NO: 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17,
20 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М357 последовательности SEQ ID N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Р381 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3,
25 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L381 последовательности SEQ Ш N0: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т394 последовательности SEQ
30 Ш N0: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению С407 последовательности SEQ ID N0: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G407 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17,
реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F423 последовательности SEQ ID NO: 7, 25, 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L430 последовательности SEQ 5 Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению S467 последовательности SEQ ID N0: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G467 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25,
10 27, 29, 31, 33, 35, 37, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V480 последовательности SEQ Ш N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D494 последовательности SEQ ID N0: 21,
15 23, 31 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G494 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т495
20 последовательности SEQ ID N0: 5, 7 или 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок A0S2 содержит делецию аминокислоты в положении, соответствующем положению Е439 последовательности SEQ ID N0: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
[00201] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и 25 способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серии в положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту пролин в положении, соответствующем положению 30 12 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аргинин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в 35 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в
положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 37 5 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ Ш NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в
10 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID
15 NO: 27, SEQ Ш NO: 47 или SEQ Ш NO: 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов,
20 описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении,
25 соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аспарагин в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации,
30 композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой
35 аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 113
последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту тирозин в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем 5 документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой глутаминовую кислоту, в положении,
10 соответствующем положению 197 последовательности SEQ Ш NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ Ш N0: 3. В соответствии с любым из аспектов,
15 вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту
20 треонин в положении, соответствующем положению 227 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из
25 аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ Ш N0: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 1. В
30 некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ Ш N0: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID NO:
35 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации,
композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем 5 документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серии в положении, соответствующем положению 282 последовательности
10 SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серии в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный
15 белок AOS2 содержит аминокислоту аланин в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В
20 соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 19. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит
25 аминокислоту метионин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В соответствии с
30 любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит
35 аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 328 последовательности
SEQ ID NO: 27. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой глутаминовую кислоту, в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В 5 соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ Ш N0: 13 или SEQ Ш N0: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в
10 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 338
15 последовательности SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ Ш NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в
20 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту метионин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту пролин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO:
25 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный
30 белок AOS2 содержит аминокислоту лизин в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В
35 соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов,
описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту цистеин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ Ш N0: 13 или SEQ ID NO: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 5 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ
10 Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит делецию аминокислоты, представляющей собой глутаминовую кислоту, в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ Ш N0: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в
15 настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 466 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ Ш NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серии в положении, соответствующем положению 467 последовательности
20 SEQ ID NO: 39. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 479 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем
25 документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 493 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем
30 положению 494 последовательности SEQ Ш NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лизин в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. [00202] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует
35 мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций, две или более мутаций,
три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать 5 или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем
10 положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем
15 положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота -
20 глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая
25 кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении,
30 соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении,
35 соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем
положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем 5 положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин
10 - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении,
15 соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении,
20 соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота -
25 глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем
30 положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33,39,41,43,45,47 или 49.
[00203] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - серии в 35 положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 11,
13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 5 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID N0: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты
10 аланин - валин в положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ГО NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37 последовательности SEQ ГО NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17,
15 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ГО NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации
20 мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты валин - треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ГО
25 NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ГО NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации
30 мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID N0: 27, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48
мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 5 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 11, 13, 15, 17, 27, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - аспарагин в
10 положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 13, 15, 17, 27, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25,
15 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45 или 47. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ Ш N0: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию
20 аминокислоты фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ Ш
25 NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный
30 белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты лизин -
35 треонин в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ ID NO:
1, 3, 5, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 5 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 23, 25, 27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует
10 мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO:
15 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 23, 25, 27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий
20 мутацию аминокислоты фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ Ш N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35,
25 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок
30 AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - серии в положении, соответствующем
35 положению 282 последовательности SEQ Ш N0: 41. В некоторых вариантах реализации
мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 5 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ Ш N0: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты валин - серии в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11,
10 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2
15 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ Ш N0: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты валин - аланин в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11,
20 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID N0: 19, 21, 23, 25 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий
25 мутацию аминокислоты изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7,
30 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ Ш N0: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию
35 аминокислоты метионин - валин в положении, соответствующем положению 328
последовательности SEQ ID NO: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. 5 В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ Ш N0: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты валин - лейцин в положении,
10 соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29,
15 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID N0: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий
20 мутацию аминокислоты лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO:
25 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2,
30 содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ Ш N0: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25,
35 27, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации
мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты 5 треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7,
10 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий
15 мутацию аминокислоты фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ Ш
20 NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты серии - глицин в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 466 последовательности SEQ ID
25 NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - серии в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - треонин в положении,
30 соответствующем положению 480 последовательности SEQ ID NO: 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 479 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем
35 положению 494 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 25, 27, 29, 33,
35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49, или положению 493 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494 5 последовательности SEQ Ш N0: 21, 23 или 43, или положению 493 последовательности SEQ ID N0: 31. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID N0: 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 494 10 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген A0S2 кодирует мутированный белок A0S2, содержащий мутацию аминокислоты, при которой глутаминовая кислота подвергнута делеции в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37.
15 [00204] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, по меньшей мере две мутации, по меньшей мере три мутации, по меньшей мере четыре мутации, по меньшей мере пять мутаций, по меньшей мере шесть мутаций, по меньшей мере семь мутаций, по меньшей мере восемь мутаций,
20 по меньшей мере девять мутаций, по меньшей мере десять мутаций, по меньшей мере одиннадцать мутаций, по меньшей мере двенадцать мутаций, по меньшей мере тринадцать мутаций, по меньшей мере четырнадцать мутаций, по меньшей мере пятнадцать мутаций, по меньшей мере шестнадцать мутаций, по меньшей мере семнадцать мутаций, по меньшей мере восемнадцать мутаций, по меньшей мере
25 девятнадцать мутаций, по меньшей мере двадцать мутаций, по меньшей мере двадцать одну мутацию, по меньшей мере двадцать две мутации, по меньшей мере двадцать три мутации, по меньшей мере двадцать четыре мутации, по меньшей мере двадцать пять мутаций, по меньшей мере двадцать шесть мутаций, по меньшей мере двадцать семь мутаций, по меньшей мере двадцать восемь мутаций, по меньшей мере двадцать девять
30 мутаций, по меньшей мере тридцать мутаций, по меньшей мере тридцать одну мутацию, по меньшей мере тридцать две мутации, по меньшей мере тридцать три мутации, по меньшей мере тридцать четыре мутации, по меньшей мере тридцать пять мутаций, по меньшей мере тридцать шесть мутаций или по меньшей мере тридцать семь мутаций. [00205] Паралоги
[00206] Рассматриваемые мутации в гене AOS2, в целом, описаны в настоящем документе с использованием выбранных генов и белков AOS2 Solanum tuberosum с аминокислотами с указанием на положения в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и 49, и положениям нуклеиновых кислот с 5 указанием на положения в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и 50. Композиции и способы также включают мутантные гены и белки AOS2 других культурных сортов картофеля, а также других видов растений (паралоги). Однако вследствие изменений в генах AOS2 разных видов количество изменяемых остатков аминокислот у одного вида может быть другим у другого вида. Тем 10 не менее, специалист в данной области техники может легко определить аналогичное положение с помощью гомологии последовательностей. Таким образом, аналогичные положения в паралогах могут быть идентифицированы и подвергнуты мутации. [00207] Патогены
[00208] Композиции и способы, предложенные согласно настоящему изобретению,
15 включают гены AOS2 и белки AOS2, которые обеспечивают устойчивость и/или толерантность к патогенам. В некоторых вариантах реализации патоген представляет собой патоген Phytophthora. В конкретных вариантах реализации патоген представляет собой Phytophthora infestans. В конкретных вариантах реализации патоген представляет собой вирус, бактерии, нематоды, грибки и т.п. Вирусные патогены включают любой
20 вирус растений, например, вирус табачной мозаики или вирус мозаики огурца, Y-вирус картофеля, вирус кольцевой пятнистости, вирус некроза, вирус карликовой мозаики кукурузы и т.п. Грибковые, оомицетные и вирусные патогены для основных сельскохозяйственных культур включают, но не ограничиваются ими, Phytophthora, Fusarium ssp, Alternaria, Pythium spp., вирус мозаики соевых бобов, вирус кольцевой
25 пятнистости табака, вирус полосатости табака, вирус бронзовости томата, Sclerotinia, Peronospora, Cladosporium, Erysiphe, Aspergillus, Puccinia spp., Botrytis spp., Blumeria spp. и Trichoderma. Бактериальные патогены растений включают любые виды бактерий, которые инфицируют растение, и включают, но не ограничиваются ими, Xanthomonas (например, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii, Xanthomonas campestris pv. campestris,
30 Xanthomonas campestris pv. vesicatoria), Pseudomonas (Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. syringae), Erwinia (например, Erwinia carotovora subsp. atroseptica), Ralstonia (например, Ralstonia solanacearum), Clavibacter michiganensis и Xylella fastidiosa.
[00209] Также предложено трансгенное или нетрансгенное растение или растительная 35 клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, например, таких как описаны в
настоящем документе. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, обладает повышенной устойчивостью и/или толерантностью к патогену. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, 5 может демонстрировать по существу нормальный рост или развитие растения, его органов, тканей или клеток по сравнению с соответствующим растением или клеткой дикого типа. В соответствии с конкретными аспектами и вариантами реализации предложены нетрансгенные растения, содержащие мутацию в гене AOS2, например, такую как описана в настоящем документе, которые в некоторых вариантах реализации
10 обладают повышенной устойчивостью и/или толерантностью к Phytophthora infestans.
[00210] Также предложены способы получения растения, содержащего мутированный ген AOS2, например, содержащий одну или более мутаций, описанных в настоящем документе; предпочтительно указанное растение по существу сохраняет каталитическую активность белка дикого типа, независимо от наличия или отсутствия соответствующего
15 патогена. В некоторых вариантах реализации указанные способы включают введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов с одной или более целевыми мутациями в гене AOS2 (например, такими как описаны в настоящем документе) и идентификацию клетки, семени или растения, содержащего мутированный ген AOS2. [00211] Виды растений
20 [00212] В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может относиться к любому виду двудольного, однодольного или голосеменного растения, включая любой вид древесных растений, который растет в виде дерева или кустарника, любой вид травянистых растений или любой вид, который дает съедобные
25 плоды, семена или овощи, или любой вид, который дает яркие или ароматические цветы. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из вида растения, выбранного из группы, состоящей из картофеля, подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, сои, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, табака, баклажана, ячменя, boxthane, сорго, томата, физалиса клейкоплодного, тамарилло, манго,
30 персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, плодов годжи, паслена черного, физалиса пушистого, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, тыквы, льна, масличной культуры, огурца, тыквы крупноплодной столовой, тыквы обыкновенной, арбуза, дыни мускусной, ипомеи, бальзамина, перца,
хабанеро, перца кайенского, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи, в той мере, в какой они еще не упомянуты специально. Растение или растительная клетка может также относиться к виду, выбранному из группы, состоящей из Arabidopsis thaliana, Solanum 5 tuberosum, Solanum phureja, Oryza sativa, Amaranthus tuberculatus и Zea mays. В различных вариантах реализации растения, описанные в настоящем документе, могут относиться к любому виду семейства Solanaceae.
[00213] В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой томат. В некоторых вариантах реализации растения или растительные 10 клетки могут представлять собой баклажан. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой перец. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой сою. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой табак.
15 [00214] В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растения могут представлять собой картофель любого коммерческого сорта. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из сорта картофеля, выбранного из группы, состоящей из Anya, Агтап Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo,
20 Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Fontana, Flava, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar,
25 Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, B53 (Roslin Eburu), Kiraya, Kenya Akiba, 9, Original, Gituma, Mukorino, Amin, Pimpernel, Anett, B, Gituru, Feldeslohn, C, Kigeni, Romano, Kenya Ruaka, Purplu, Njae, Suzanna, Cardinal, Kathama, Kinare-Mwene, Kibururu, Karoa-Igura, Muturu, Faraja, Kiamucove, Michiri, Rugano, Njine Giathireko, Meru Mix, Blue Baranja, Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Mirka и Roslin Sasamua.
30 [00215] В различных вариантах реализации растения или растительные клетки, описанные в настоящем документе, могут представлять собой картофель любого коммерческого сорта. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Апуа. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Arran Victory. В
сорту картофеля Atlantic. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Belle de Fontenay. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля BF-15. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к 5 сорту картофеля Bintje. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Cabritas. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Camota. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Chelina. В некоторых вариантах реализации растение или растительная
10 клетка может относиться к сорту картофеля Chiloe, Cielo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Clavela Blanca. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fianna. В некоторых вариантах
15 реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fingerling. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Flava. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fontana. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Golden
20 Wonder. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Innovator. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Jersey Royal. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kerr's Pink. В некоторых вариантах реализации растение или растительная
25 клетка может относиться к сорту картофеля Kestrel. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля King Edward. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kipfler. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Lady Balfour. В некоторых вариантах
30 реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Maris Piper. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Nicola. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pachacona. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту
35 картофеля Pink Eye. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка
может относиться к сорту картофеля Pink Fir Apple. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Primura. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Red Norland. В некоторых вариантах реализации растение или 5 растительная клетка может относиться к сорту картофеля Red Pontiac. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Rooster. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Russet Burbank. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Russet Norkotah. В
10 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Shepody. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Spunta. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Vivaldi. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к
15 сорту картофеля Yukon Gold. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Nyayo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Mukori. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Tana. В некоторых вариантах реализации растение
20 или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kerrs's Pink/Meru. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Golof. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kinongo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Ngure. В
25 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya В атака. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Maritta. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kihoro. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к
30 сорту картофеля Americar. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Bvumbwe. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Njine. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Gucha. В некоторых вариантах реализации растение или
35 растительная клетка может относиться к сорту картофеля Arka. В некоторых вариантах
реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля В53 (Roslin Eburu). В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kiraya. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya Akiba. В некоторых 5 вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля 9. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Original. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Gituma. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля
10 Mukorino. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Amin. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pimpernel. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Anett. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка
15 может относиться к сорту картофеля В. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Gituru. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Feldeslohn. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля С. В некоторых вариантах реализации растение или
20 растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kigeni. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Romano. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya Ruaka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Purplu. В некоторых
25 вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Njae. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Suzanna. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Cardinal. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к
30 сорту картофеля Kathama. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kinare-Mwene. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kibururu. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Karoa-Igura. В некоторых вариантах реализации растение
35 или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Muturu. В некоторых
вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Faraja. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kiamucove. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Michiri. В 5 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Rugano. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Njine Giathireko. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Meru Mix. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может
10 относиться к сорту картофеля Blue Baranja. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Patrones. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Robijn. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Chania. В некоторых вариантах реализации
15 растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Urgentia. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Mirka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Sasamua.
[00216] Олигонуклеооснование репарации генов может быть введено в растительную 20 клетку с применением любого способа, обычно используемого в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, микроносители (биолистическая доставка), микроволокна, полиэтиленгликоль (ПЭГ)-опосредуемое поглощение, электропорацию и микроинъекцию.
[00217] Также предложены способы и композиции, относящиеся к культуре клеток, 25 мутированных в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, для получения растения, которое дает семена, далее "фертильного растения", и получению семян и дополнительных растений из такого фертильного растения.
[00218] Также предложены способы и композиции, относящиеся к культуре клеток, мутированных в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, для 30 получения растения, которое образует по существу нормальные клубни с по существу нормальным выходом, благодаря чему по существу нормальные растения образуются из клубня или части клубня картофеля, имеющего по меньшей мере один или два глазка (спящие почки), часто называемого семенным картофелем.
[00219] Также предложены мутации в гене AOS2, которые обеспечивают растению 35 устойчивость и/или толерантность к соответствующему патогену, или при которых
мутированный ген AOS2 обладает по существу такой же или измененной ферментативной активностью по сравнению с AOS2 дикого типа.
[00220] Отбор устойчивых к патогену растений и применение патогенов [00221] Растения и растительные клетки можно тестировать на предмет устойчивости 5 и/или толерантности к патогену с использованием способов, общеизвестных в данной области техники, например, путем выращивания растения или растительной клетки в присутствии патогена и измерения скорости роста по сравнению со скоростью роста в отсутствии патогена. Заражение патогеном для отбора устойчивых и/или толерантных растений можно осуществлять путем введения либо спорангиев, либо зооспор патогена. 10 Уровни устойчивости растения в случае данных заражений можно оценивать в соответствии с различными способами, такими как определение скорости увеличения ДНК патогена в инфицированном растительном материале, скорости прогрессирования размеров поражения и т.д.
[00222] В настоящем описании по существу нормальный рост растения, органа растения, 15 растительной ткани или растительной клетки определяется как скорость роста или скорость деления клеток указанного растения, органа растения, растительной ткани или растительной клетки, которая составляет по меньшей мере 35%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 75% скорости роста или скорости деления клеток в соответствующем растении, органе растения, растительной ткани или 20 растительной клетке, экспрессирующей белок AOS2 дикого типа.
[00223] В настоящем описании по существу нормальное развитие растения, органа растения, растительной ткани или растительной клетки определяется как возникновение одного или более явлений развития в указанном растении, органе растения, растительной ткани или растительной клетке, которые по существу совпадают с теми, которые 25 возникают в соответствующем растении, органе растения, растительной ткани или растительной клетке, экспрессирующей белок AOS2 дикого типа.
[00224] В некоторых вариантах реализации органы растений, предложенные согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, листья, стебли, корни, вегетативные почки, цветочные почки, меристемы, зародыши, семядоли, эндосперм,
30 чашелистики, лепестки, пестики, плодолистики, тычинки, пыльники, микроспоры, пыльцу, пыльцевые трубки, семяпочки, завязи и плоды или полученные из них срезы, части или диски. Растительные ткани включают, но не ограничиваются ими, каллюсные ткани, основную паренхиму, сосудистые ткани, запасающие ткани, меристематические ткани, ткани листьев, ткани побегов, ткани корней, ткани галлов, ткани опухолей
ими, выделенные клетки с клеточными стенками, их агрегаты различных размеров и протопласты.
[00225] Растения являются по существу "толерантными" к соответствующему патогену, когда они подвергаются его воздействию и обеспечивают кривую доза/ответ, которая 5 смещена вправо по сравнению с кривой, обеспечиваемой подобным нетолерантным растением, подвергнутым аналогичному воздействию. Такие кривые доза/ответ включают "дозу", нанесенную на ось X, и "процент уничтожения", "патогенный эффект" и т.д., нанесенный на ось Y. Для конкретного патогенного эффекта толерантным растениям потребуется большее количество патогена, чем подобным нетолерантным растениям.
10 Растения, которые являются по существу "устойчивыми" к патогену, демонстрируют малое количество (при наличии) некротических, литических, хлоротических или других поражений при воздействии патогена в концентрациях и со скоростями, которые типичны для воздействия патогена в природе. Растения, которые устойчивы к патогену, являются также толерантными к указанному патогену.
15 [00226] Методы полимеразной цепной реакции для детектирования и количественного определения патогенов в растениях
[00227] Устойчивость хозяина к патогену может быть определена с использованием способов, уже разработанных и известных специалисту в данной области техники. Как правило, для разных патогенов используют разные способы, но в целом, следующие
20 способы можно применять в отношении грибковых и бактериальных патогенов.
[00228] Устойчивость и/или толерантность к патогену может быть определена путем мониторинга присутствия и количества патогенспецифической нуклеиновой кислоты в растении. Например, листочки растения инокулируют 10 мкл каплями суспензии спорангиев (30-40 спорангиев/мкл) на обеих сторонах средней жилки. Oberhagemann, P., et
25 al. Mol. Breed. Vol. 5, p. 399-415 (1999). Симптомы заболевания могут быть оценены через 7 дней после инфицирования. ДНК экстрагируют из инфицированного растительного материала. Осуществляют мониторинг роста патогена с использованием описанных Phytophthora ш/е51 <ш?-рибосомная ДНК-специфических праймеров (типичная последовательность прямого праймера: 5'-GAAAGGCATAGAAGGTAGA-3' и типичная
30 последовательность обратного праймера: 5'-TAACCGACCAAGTAGTAAA-3'). Интенсивность ампликонов Phytophthora infestans калибруют относительно ДНК-полос тубулина картофеля. Интенсивность полос определяют количественно и переводят в произвольные единицы относительно абсолютных значений, полученных у контрольных растений. Judelson, HS, et al. Phytopathology, vol. 90, p. 1112-1119 (2000).
[00229] Уровни устойчивости к патогену у представляющих интерес растений, представляющих собой картофель, могут быть оценены путем заражения растений Phytophthora infestans или другим представляющим интерес патогеном. Для Phytophthora infestans листья 6-8-недельных растений отделяют от стебля и помещают абаксиальной 5 стороной вверх в чашки с 4% водным агаром. Листья инокулируют каплей суспензии спорангиев (40000-100000 спорангиев/мл) с использованием пипетки Пастера на абаксиальной стороне листа. Чашки помещают в инкубатор 18°С с 12-часовым фотопериодом.
[00230] Развитие заболевания оценивают через 6 дней после инокуляции и при 10 необходимости в соответствии с опубликованными способами, как в Vleeshouwers et al. (2000) Physiol and Mol Plant Pathology, vol. 57, p. 35 - 42; Vleeshouwers et al. (1999) Europ J of Plant Pathology, vol. 105, p. 241-250; Oberhagemann et al. (1999) Molecular Breeding, vol. 5,p.399-415.
[00231] Для анализов грибковой инфекции оценку уровня инфицирования осуществляют
15 в соответствии с опубликованными способами для каждых взаимодействий грибок-хозяин. Источники включают Rogers et al. (1994) Plant Cell, vol. 6, p. 935 - 945; Valent et al. (1991) Genetics, vol. 127, p. 87- 101; Thomas et al. (1997) Plant Cell, vol. 9, p. 2209 - 2224. [00232] Как правило, для спорообразующего грибка инокуляцию осуществляют с использованием инокулята, содержащего споры представляющего интерес грибка в
20 желаемой концентрации. Данный инокулят наносят распылением на растение на конкретной стадии развития (например: до появления 4-го листа/6-8-недельное и т.д.). Инокулированные растения инкубируют в условиях высокой влажности в течение 24 часов после инокуляции, а затем переносят в желаемые условия роста с циклами дня и ночи, подходящими для роста растения-хозяина. Интенсивность инфицирования
25 оценивают, как правило, через 3-4 дня после инфицирования и проводят оценку в соответствии с разработанными способами для системы хозяин-патоген. Как правило, неспорулирующие поражения оценивают как реакции "устойчивости", тогда как спорулирующие поражения считаются реакциями "чувствительности". Последние оценивают на предмет тяжести инфекции в соответствии с размером и внешним видом
30 поражений.
[00233] Для оценки тяжести заболевания, связанной с бактериальными патогенами, используют опубликованные способы для каждого вида бактерий, упомянутые в Elibox, W., et al. (2008) Phytopathology, vol. 98, p. 421-426; Chaudhry et al. (2006) - Pakistan J of Botany, vol. 38 (1), p. 193 - 203; Zhao et al. (2005) J of Bacteriology, vol. 187, p. 8088. Как 35 правило, для бактериальных патогенов бактериальная суспензия с предварительно
определенной плотностью (например: 5х104 колониеобразующих единиц) будет проникать в листья растения-хозяина на конкретной стадии развития (например: 3-недельные растения). Инокулированные растения выдерживают при высокой влажности в течение 3-4 дней, и тяжесть инфекции оценивают путем взятия образцов двух-трех 5 листовых дисков, которые измельчают, и полученную надосадочную жидкость высевают в среды для роста бактерий для подсчета колониеобразующих единиц бактерий, образующихся из инфицированного растительного материала.
[00234] Тяжесть инфекции преобразованного растения оценивают путем определения количества колониеобразующих единиц, образующихся из инфицированной ткани 10 преобразованного растения, по сравнению с образующимися из инфицированной ткани растений дикого типа.
[00235] Для специалиста в данной области техники совершенно очевидно, что настоящее изобретение позволяет реализовать задачи и достичь результатов и преимуществ, упомянутых в настоящем описании, а также присущих ему. Примеры, 15 приведенные в настоящем описании, представляют предпочтительные варианты реализации, являются типичными и не ограничивают объем настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
[00236] Ниже следуют примеры, иллюстрирующие процедуры для практического 20 применения настоящего изобретения. Данные примеры не следует рассматривать как ограничивающие. Все проценты приведены по массе и все пропорции смеси растворителей приведены по объему, если не указано иное.
[00237] Пример 1: повышение устойчивости растения к патогену с применением технологии RTDS(tm)
25 [00238] Оценка представляющих интерес культурных сортов на предмет генотипа в локусах генов AOS2
[00239] С использованием навыков, известных специалисту в данной области техники, представляющие интерес культурные сорта картофеля подвергали генотипированию следующим образом: геномную ДНК представляющих интерес культурных сортов
30 растения экстрагировали с помощью известных способов и подвергали амплификации гена, опосредуемой полимеразной цепной реакцией (ПЦР), с выделением всех аллелей AOS2, присутствующих в образцах указанных геномной ДНК. Праймеры для ПЦР, используемые для амплификации, были следующими: прямой праймер 5'-CACCTTTGTATCACTAACATTACCCATCC-3' (SEQ ID NO: 51) и обратный праймер 5'-
35 GCATGTGTTGCTTGTTCTTATAATTTCAG-3' (SEQ Ш NO: 52). Амплифицированные
фрагменты клонировали в вектор ТОРО 2.1 (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) и подвергали секвенированию по 12 клонов на амплификацию. Полученные последовательности выравнивали с эталонной последовательностью (SEQ ID NO 2) с использованием пакета программного обеспечения для анализа Vector NTI (Invitrogen 5 Corporation, Карлсбад, Калифорния) и определяли полиморфные сайты. Трансляцию указанных последовательностей нуклеиновых кислот в последовательность, кодирующую белок, осуществляли также с использованием программного обеспечения для анализа последовательностей Vector NTI и полученные последовательности сравнивали с эталонной белковой последовательностью (SEQ ID NO 1) с идентификацией
10 полиморфных аминокислот. Все обнаруженные аминокислотные полиморфизмы и их положения в белковых последовательностях, полученных на сегодняшний день, приведены в таблице 1. Положения аминокислот обозначены в соответствии с положениями аминокислот в эталонной белковой последовательности, представленной последовательностью SEQ ID NO 1.
15 [00240] Получение характеристик биохимической активности аллелей AOS2 (in vitro)
[00241] Нуклеиновую кислоту идентифицированных аллелей AOS2 амплифицировали методом ПЦР с помощью праймеров, описанных выше, но с добавлением сайтов Xma I и Pst I в прямой и обратный праймеры соответственно с введением сайтов Xma I и Pst I в 5'-и 3'-концы аллелей соответственно для облегчения клонирования амплифицированных
20 продуктов в вектор pQE30 для гетерологичной экспрессии в Е. coli (штамм М15, Qiagen Inc., Валенсия, Калифорния). Амплифицированные методом ПЦР фрагменты расщепляли с помощью рестриктаз Xma I и Pst I, и клонировали в расщепленный подобным образом вектор pQE30b (подвергнутый сайт-направленному мутагенезу со встраиванием нуклеотида 5' в сайт Xma I так, что любой фрагмент гена, клонированный в сайт Xma I,
25 находится в рамке с кодирующей последовательностью вектора pQE30), и отбирали клоны путем трансформации в штамм XL-1 Blue Е. coli. Полученные экспрессионные плазмиды экстрагировали из клеток XL-1 Blue и подвергали ПЦР в геле и секвенированию для подтверждения клонирования и отсутствия каких-либо сдвигов рамки считывания. Подтвержденные клоны трансформировали в клетки М15 (Qiagen Inc., Валенсия,
30 Калифорния) и использовали для анализа экспрессии белка.
[00242] Для анализов экспрессии белка каждые 500 мкл ночных 5 мл культур представляющих интерес штаммов (например, несущий только вектор штамм, содержащий плазмиду без гена AOS2, и представляющий интерес штамм, содержащий один аллель гена AOS2,) инокулировали в 10 мл среды LB с добавлением карбенициллина
35 (100 мкг/мл) и канамицина (25 мкг/мл). Культуры инкубировали при 37°С со
встряхиванием при 250 об/мин пока поглощение при 600 нм (А600) не достигало желаемых единиц оптической плотности (OD) (например, 0,6-0,8 единиц OD). Затем в клетках индуцировали экспрессию белка с помощью 1 мМ изопропилтиогалактозида (IPTG) и инкубировали при желаемой температуре (например, 12°С) со встряхиванием 5 при 100 об/мин в течение желаемого периода времени (например, 3-7 дней). Экспрессию белка контролировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ПААГ) и путем спектрального анализа на предмет экспрессии белка цитохрома Р450 типа I. Очистку белка AOS2 осуществляли с использованием коммерчески доступных колонок для связывания Ni NTA в соответствии 10 с инструкциями производителя (Thermo Scientific, Рокфорд, Иллинойс).
[00243] Биохимический анализ для определения характеристик каталитической активности белков AOS2
[00244] Очищенные белки, экспрессированные в E.coli, использовали для анализа на предмет каталитической активности белков, кодируемых идентифицированными
15 различными аллелями гена AOS2. Анализ проводили в соответствии с опубликованными протоколами (Schreier and Lorenz (1982) Z. Naturforsch, Vol. 37 °C, p. 165). Как правило, 138-гидроперокси-9г,11Е-октадекадиеновая кислота (13-HPODE) и 138-гидроперокси-9Z,llE,15Z-oктaдeкaтpиeнoвaя кислота (НРОТгЕ) выступают в качестве субстрата для анализа ферментов, а эталонный образец без добавления фермента служит в качестве
20 отрицательного контроля. Для оценки каталитической активности различных белков, кодируемых различными аллелями AOS2, определяли известное количество очищенного белка, нормализованное путем спектрального анализа или другим способом, с помощью 3 - 13 мкМ раствора субстрата в 0,1 М фосфатном буфере, рН 6,0. Скорость уменьшения поглощения при А234 контролировали с течением времени и полученные кинетические
25 данные использовали для расчета удельной активности каждого из представляющих интерес белков. Ферменты с самыми высокими значениями удельной активности считали представляющими интерес ферментами, и аминокислотные последовательности таких ферментов сравнивали с последовательностями ферментов с более низкими значениями удельной активности с идентификацией конкретных положений аминокислот, которые
30 обеспечивают белкам AOS2 большую каталитическую активность.
[00245] Для оценки влияния мутации G231T нуклеотиды (ИТ) 691/692 аллелей StAOS2, StAOS2_CB17 и StAOS2_CB18, Bintje превращали из G/G в А/С с использованием сайт-направленного мутагенеза (SDM), что приводило к переходу G231T в соответствующих белках AOS2. Аминокислотные (АК) полиморфизмы, обнаруженные повсеместно в
35 данных белках AOS2, представлены в таблице 2. Данные клоны подвергали
биохимическому анализу, описанному выше, и значения удельной активности данных белков и белков с изменением в положении АК 231 приведены в таблице 3. [00246] Таблица 2: отличия генотипов среди положений аминокислот 48, 76, 231, 328, 423 и 494 аллелей StAOS2 Bintje, подвергнутых анализу биохимической активности
231
328
423
494
StAOS2_CB17
StAOS2_CB17_G231T
StAOS2_CB18
StAOS2_CB18_G231T
[00247] Таблица 3: значения удельной активности белков, кодируемых аллелями StAOS2, StAOS2_CB18 и StAOS2_CB17, и их производными. Генотип по положениям НТ 691/692 в виде G/G и А/С соответственно соответствует G и Т в АК 231 в кодируемых белках
Название аллеля
Генотип
691/692
(AK231)
Нормализованная удельная
активность StAOS2 Исследование 1 (мкМ/мии/мг
белка)
Нормализованная удельная
активность StAOS2 Исследование 2 (мкМ/мин/мг белка)
Средняя
удельная
активность
StAOS2
(мкМ/мин/мг
белка)
Кратность изменения (по
сравнению саллелем дикого типа)
Процент
StAOS2_ СВ18
GG(G)
14,55
9,66
12,11
StAOS2_ CB18_G 23 IT
AC(T)
17,73
13,19
15,46
1,3х
30%
StAOS2_ CB17
GG(G)
7,64*
5,83
6,74
StAOS2_ CB17_G 23 IT
AC(T)
16,88*
12,8
14,84
2,2х
120%
[00248] Как показано в таблице 3, при сравнении значений удельной активности изогенных белков, отличающихся только в положении АК 231, превращение генотипа по положениям НТ 691/692 аллелей гена StAOS2 из G/G в А/С приводит к повышению удельной активности кодируемых белков.
[00249] Дополнительная оценка влияния аминокислотного профиля в положениях 231 и 328 в белке, кодируемом StAOS2_CB18, показывает, что данная комбинация состава аминокислот в этих двух положениях повышает удельную активность белка AOS2. Данные приведены в таблице 4. 5 [00250] Таблица 4: значения удельной активности белков, кодируемых аллелем StAOS2_CB18 и его производными, отличающихся в положениях АК 231 и 328
AK 231
AK 328
Удельная активностьА082 Исследование 1 (мкМ/мин/мг)
Удельная активностьА082 Исследование 2 (мкМ/мин/мг)
Средняя удельная активностьА082 (мкМ/мин/мг)
StAOS2_CB 18_L328V
9,147982
9,982926
9,565454
StAOS2_CB
18_G231T_L
328V
6,738131
6,950514
6,844323
StAOS2_CB 18
7,355882
9,447077
8,40148
StAOS2_CB 18_G231T
9,190796
10,25108
9,72094
[00251] Изменение аминокислотного (АК) профиля белка AOS2, кодируемого аллелем StAOS2_CB18, в положении АК 328 с L на V (StAOS2_CB 1_L328V) повышало активность
10 в случае комбинации с G в положении АК 231, но снижало активность в случае комбинации с Т в положении АК 231 (StAOS2_CB18_G231_L328V). Эти данные показывают, что переход G231T в случае комбинации с мутацией L328V приводит к снижению удельной активности белка AOS2, и указывают на то, что взаимодействие указанных АК профилей в этих двух положениях влияет на активность белка AOS2.
15 [00252] Анализы активности in vitro также использовали для оценки влияния мутации D76N в StAOS2_CB19. StAOS2_CB19 подвергали SDM с получением аллеля StAOS2_CB19_D76N с превращением 76-го остатка в белке AOS2 в аспарагин (N) из аспарагиновой кислоты (D). Их оценивали на предмет различий в удельной активности с использованием способов, описанных выше. Данные, полученные в результате трех
20 независимых исследований, показали, что мутация D76N приводила к приблизительно 30% снижению активности фермента.
[00253] Аллели с большей каталитической активностью выбирали для анализов in planta.
[00254] Получение характеристик биохимической активности аллелей AOS2 {in vivo) [00255] Для оценки гипотезы, что те белки AOS2, которые обладают большей 5 биохимической активностью in vitro, будут также демонстрировать большую биохимическую активность in planta, аллели AOS2, которые демонстрировали большую удельную активность, клонировали в растительный бинарный вектор под контролем конститутивного или Arabidopsis промотора AOS2. С использованием способа Agrobacterium tumefaciens-опосредуемой трансформации данные конструкции превращали
10 в линию растения CS6149 Arabidopsis thaliana с разрушенным геном AOS2 (TAIR, http://www.arabidopsis.org/) с помощью разработанных способов (Bent et al. (2000) Plant Physiol, vol. 124, p. 1540). Трансформанты идентифицировали путем подходящего отбора (в зависимости от селектируемого маркера, присутствующего в бинарном векторе - т.е. канамицина для гена nptll в качестве селектируемого маркера), с помощью молекулярных
15 способов, а также способности введенных генов AOS2 дополнять А082-дефицитный фенотип аномального развития опыления/стручка вследствие мужской стерильности, вызванной отсутствием функционального гена AOS2. Дополненные геном AOS2 линии растения оценивали на предмет уровней ЖК и/или OPDA в основных и индуцирующих условиях с использованием разработанных способов (Chebab et al. (2008), PLoS ONE, vol
20 3: p.el904; Schmelz et al. (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al. (2003) Anal Biochem, vol. 312, p 242.). В качестве альтернативы, дополненные линии использовали для анализов заболеваний растений с использованием патогенов для Arabidopsis, таких как Erwinia carotovora или ssp. carotovora, или Hyaloperonospora arabidopsidis, и/или других для проверки гипотезы, что более высокие уровни ЖК или более высокая каталитическая
25 активность AOS2 приводит к повышенной устойчивости и/или толерантности к патогенам.
[00256] Для оценки влияния АК полиморфизмов в белке AOS2 на накопление жасмоновой кислоты (ЖК) in planta, два аллеля культурного сорта картофеля Bintje, StAOS2_CB18_G231T, регулируемые промотором AtAOS2 Arabidopsis thaliana,
30 использовали для дополнения нулевого мутантного фенотипа мутантных по aos2 растений A. thaliana. Полученные трансгенные линии развивали до ТЗ-поколения с получением гомозигот, и полученные растения подвергали исследованиям для количественного определения ЖК в соответствии с описанными способами (Chebab et al. (2008), PLoS ONE, vol 3: p.el904; Schmelz et al. (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al.
35 (2003) Anal Biochem, vol. 312, p 242). Результаты представлены в таблице 5.
[00257] Таблица 5: схема накопления ЖК в трансгенных линиях Arabidopsis thaliana, содержащих аллели StAOS2_CB19 или StAOS2_Cbl8_G231T. Показанные средние количества ЖК представляют собой уровни ЖК, присутствующие в ткани листьев Arabidopsis при основных уровнях экспрессии, в нг на грамм массы сырой ткани. 5 Показанные результаты представляют собой средние значения двух повторных образцов, содержащих несколько листьев.
Аллель StAOS2
Линия растения
Среднее количество ЖК
Стандартная ошибка
StAOS2_CB19
1001-13-6
32,34
4,25
1001-14-6
29,94
5,69
1001-14-7
59,91
1,96
1001-19-4
107,21
22,59
1001-4-6
16,04
1,63
1001-9-1
20,48
7,47
StAOS2_CB18_G231T
1003-10-8
20,90
6,26
1003-16-6
84,20
24,58
1003-17-1
97,60
18,37
1003-17-2
81,08
1,81
1003-4-4
95,50
3,61
1003-7-9
67,66
30,93
aos2
0,16
0,02
Col-0
74,17
7,53
[00258] Данные эксперименты показали, что, в целом, трансгенные линии A. thaliana, содержащие StAOS2_CB18_G231T с АК профилем Т и L в положениях АК 231 и 328 соответственно, накапливали более высокий уровень ЖК (в среднем 44,32 нг ЖК/г массы свежей ткани), чем те, которые содержали StAOS2_CB19 с АК профилем Т и V (в среднем 74,45 нг ЖК/г массы свежей ткани) в указанных положениях соответственно. Эти данные согласуются с данными, представленными в таблице 3, что показывает, что взаимодействие между АК 231 и 328 в белке AOS2 играет роль в модуляции активности белка AOS2. Эти данные также подтверждают полученные in vitro данные in planta, описанные в настоящем документе, что указывает на то, что положения 231 и 328 в белке AOS2 играют роль в модуляции уровней ЖК in planta.
[00259] Для оценки влияния генотипа StAOS2 и являющегося результатом АК профиля белка AOS2 на толерантность к заболеванию, трансгенные растения A. thaliana, содержащие аллели StAOS2, StAOS2_CB18_G231T и StAOS2_CB19, культурного сорта картофеля Bintje, инокулировали Erwinia carotovora ssp. carotovora (Ecc) в количестве 5 5x104 КОЕ/мл в соответствии с разработанными способами (Kariola et al., (2003) Arabidopsis, 16: MPMI, 179-187). В различные моменты времени после инокуляции брали образцы листьев и количественно определяли бактериальный титр. Рост бактерий был значительно меньше в трансгенных растениях A. Thaliana, содержащих аллель StAOS2_CB18_G231T, чем в тех, которые содержали аллель StAOS2_CB19. 10 [00260] Оценка влияния профиля АК 231 на толерантность картофеля к Phytophthora infestans
[00261] Для соотнесения функционального различия с отличиями генотипов в аллелях гена StAOS2 и проверки гипотезы, что аллели гена StAOS2 с А/С в НТ 691/692 обеспечивают повышенную толерантность по сравнению с аллелями, содержащими G/G в
15 данных положениях, два варианта аллеля StAOS2, StAOS2_CB18 и StAOS2_CB18_G231T, с G/G и А/С в положениях НТ 691/692 соответственно, подвергали сверхэкспрессии в картофеле под контролем промотора 35S. Некоторые из полученных линий тестировали на предмет толерантности к Phytophthora infestans с использованием стандартного анализа отделенного от стебля листа. Вкратце, для каждого тестируемого аллеля листья
20 приблизительно шести независимых 4-8-недельных трансгенных растений, представляющих собой картофель, выращенных в почве, отделяли от стебля и инокулировали 300 спорами в 4 местах на абаксиальной стороне листа. Листья выдерживали в темноте в течение 24 часов после инокуляции, а затем инкубировали по 12 часов в темноте и при свете при 18°С в течение 8 дней. Эксперимент повторяли с
25 одинаковыми результатами с использованием независимых анализов отделенных от стебля листьев. Тогда как в листьях растений со сверхэкспрессией StAOS2_CB18 развивались поражения, схожие с поражениями у растений, представляющих собой картофель Bintje, дикого типа, и контрольных трансгенных растений с "пустым" вектором, листья трансгенных растений с StAOS2_CB18_G231T демонстрировали
30 заметное снижение развития или отсутствие развития поражений. Следовательно, это подтверждает, что сверхэкспрессия аллеля гена StAOS2 с генотипом А/С в положении НТ 691/692 обуславливает повышенную толерантность к Phytophthora infestans у растений, представляющих собой картофель.
[00262] Подобным образом, эти две генетические конструкции также подвергали 35 экспрессии в растениях, представляющих собой картофель, под контролем нативного
промотора гена StAOS2. Культурный сорт картофеля Bintje представлял собой родительскую линию для трансгенных растений, тогда как Bintje_pJffloon представлял собой контрольную трансгенную линию, несущую только вектор. Полученные линии растений также подвергали инфицированию Phytophthora infestans с использованием 5 стандартного анализа отделенного от стебля листа (описанного в настоящем документе). Аналогично результатам, полученными для растений со сверхэкспрессией трансгена, тогда как в листьях растений со сверхэкспрессией StAOS2_CB18 развивались поражения, схожие с поражениями у контрольных трансгенных растений с "пустым" вектором, листья растений с StAOS2_CBl_G231T демонстрировали заметное снижение развития 10 или отсутствие развития поражений.
[00263] Опосредуемое RTDS(tm) преобразование аллелей AOS2
[00264] Для преобразования представляющих интерес аллелей AOS2 по технологии RTDS(tm), GRON AOS2 доставляли в протопласты растений (т.е. через ПЭГ-опосредуемое поглощение нуклеиновых кислот, путем электропорации и т.д.), содержащие конкретное
15 изменение в представляющем интерес целевом остатке нуклеиновой кислоты. Например, для осуществления желаемых преобразований А/С в положении 691/692 в гене AOS2 соответственно GRON содержал последовательность, идентичную последовательности, расположенной выше (upstream) и ниже (downstream) положений 691/692 целевого аллеля AOS2, но с АС в положениях 691/692. Клетки, подвергнутые воздействию GRON,
20 превращали в каллюсы с использованием разработанных способов.
[00265] Отбор растений/каллюсов с желаемыми изменениями генотипа [00266] Растения/каллюсы с желаемыми изменениями отбирали путем отбора с использованием заражения патогеном (в патосистеме картофель-фитофтороз заражение патогеном осуществляют путем введения спорангиев или зооспор Phytophthora). В
25 качестве альтернативы, растения/каллюсы с желаемыми изменениями выбирали на основе способов без отбора, таких как секвенирование материала каллюса/растительного материала, например, опосредуемая праймером специфическая амплификация желаемых мишеней для идентификации тех, которые обладают желаемыми изменениями. [00267] Оценка и применение нескольких циклов RTDS(tm)
30 [00268] После идентификации растительного материала с желаемыми изменениями в гене AOS2, повторяли генотипический анализ локуса гена AOS2 для полной оценки природы разнообразия аллелей AOS2. Если аллели "чувствительного" или "промежуточного" типа по-прежнему имели место, данные растения/каллюсы снова подвергали манипуляциям RTDS для получения желаемых изменений в аллеле. При
необходимости, такие повторные циклы RTDS и отбора повторяли по мере необходимости пока не получали желаемый генотип в локусе/локусах AOS2. [00269] Окончательная оценка культурных сортов с желаемыми изменениями [00270] После идентификации каллюсов с целевыми изменениями из их регенерировали 5 растения. Такие растения подвергали оценкам с использованием анализов патогенов, оценки уровней ЖК/OPDA, анализов экспрессии белка. Для этого растение дикого типа использовали в качестве контроля для оценки степени предполагаемых изменений, таких как более высокая устойчивость к патогену, более высокие уровни ЖК/OPDA в растениях, содержащих желаемые преобразования. 10 [00271] Пример 2: идентификация новых мутаций гена AOS2, усиливающих активность AOS2, и функциональный анализ in planta [00272] Получение новых аллелей гена StAOS2
[00273] Для обнаружения тех аминокислот, которые могут повышать каталитическую активность или стабильность белка AOS2, которые не наблюдаются в природе, или тех
15 аминокислот, которые не обнаруживаются путем таким анализов генотипирования (см. выше), предпринимали попытки проведения неспецифического мутагенеза или более направленные попытки проведения направленного мутагенеза конкретных целевых остатков белка AOS2 с использованием допускающей ошибки ПЦР или сайт-направленного мутагенеза (SDM). Для сайт-направленного мутагенеза целевые сайты
20 могли представлять собой сайты в гене AOS2, идентифицированные в результате попыток генотипирования, описанного выше и в таблице 1 (например, N76D и Т495К), другие сайты, такие как сайты, которые, по прогнозам, расположены вблизи активного центра фермента, которые могут влиять на связывание субстрата или каталитическую активность, или другие сайты, которые могут влиять на каталитическую активность на
25 расстоянии.
[00274] Для этого использовали плазмидную ДНК конструкции, содержащей эталонный ген, такой как представленный последовательностью SEQ ID NO: 2, и подвергали мутагенезу с использованием разработанных способов (набор Diversify Random PCR mutagenesis Kit, Clonetech, Маунтин-Вью, Калифорния; ссылка на допускающую ошибки 30 ПЦР; набор QuikChange XL Site-Directed Mutagenesis Kit; Stratagene, Сан-Диего, Калифорния). Мутированные клоны отбирали и подвергали анализу последовательностей с идентификацией мутаций, и те, которые представляли интерес, отбирали для гетерологичной экспрессии белка с использованием системы экспрессии pQE30 от Qiagen Inc., Валенсия, Калифорния (см. ниже).
[00275] В качестве альтернативы, библиотеку таких подвергнутых мутагенезу конструкций клонировали в бинарный вектор и трансформировали в протопласты растений, и трансформанты превращали в каллюсы и из них регенерировали растения. Полученные каллюсы подвергали количественному определению уровней ЖК/OPDA с 5 помощью разработанных способов (см., например, Chebab et al., (2008), PLoS ONE, vol 3: p.el904; Schmelz (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al. (2003) Anal Biochem, vol. 312, p 242.), и толерантность данных линий оценивали с использованием представляющего интерес патогена (например, Phytophthora infestans). [00276] Пример 3: идентификация новых мутаций гена AOS2, усиливающих активность
10 AOS2, и комплементационный анализ в Arabidopsis
[00277] Варианты генов AOS2, полученные посредством анализов генотипирования или процедур мутагенеза, описанных выше, трансформировали в линию CS6149 Arabidopsis thaliana с мутантным aos2 (TAIR, http://www.arabidopsis.org/), и представляющие интерес аллели AOS2 отбирали по уровням ЖК/OPDA или на основе анализов патогенов,
15 описанных выше.
[00278] Хотя настоящее изобретение описано и проиллюстрировано на примерах достаточно подробно, для специалиста в данной области техники очевидны различные альтернативы, модификации и усовершенствования его получения и применения, находящиеся в пределах сущности и объема настоящего изобретения. Примеры,
20 приведенные в настоящем описании, представляют предпочтительные варианты реализации, являются типичными и не ограничивают объем настоящего изобретения. Модификации и другие виды применения будут понятны специалисту в данной области техники. Данные модификации включены в сущность настоящего изобретения и определяются объемом формулы изобретения.
25 [00279] Для специалиста в данной области техники очевидно, что могут быть осуществлены различные изменения и модификации настоящего изобретения, описанного в настоящем документе, в пределах объема и сущности настоящего изобретения. [00280] Все патенты и публикации, упомянутые в настоящем описании, указывают на уровень специалиста в данной области техники, к которой относится настоящее
30 изобретение. Содержание всех патентов и публикаций включено в настоящее описание посредством ссылки так же, как если бы содержание каждой индивидуальной публикации было специально включено отдельно.
[00281] Настоящее изобретение, наглядно описанное в настоящем документе, подходящим образом может быть реализовано в отсутствие какого-либо элемента или 35 элементов, ограничения или ограничений, которые, в частности, не указаны в настоящем
документе. Таким образом, например, в каждом случае в настоящем описании любой из терминов "содержащий", "по существу состоящий из" и "состоящий из" может быть заменен на любой из указанных двух других терминов. Употребляемые термины и выражения используются в качестве описывающих и не ограничивающих терминов, и использование таких терминов и выражений не исключает любые эквиваленты показанных и описанных признаков или их частей, и понятно, что различные модификации возможны в пределах объема заявленного изобретения. Таким образом, следует понимать, что несмотря на то, что настоящее изобретение специально описано с помощью предпочтительных вариантов реализации и возможных признаков, специалист в данной области техники может прибегнуть к модификации и вариации концепций, указанных в настоящем описании, и что такие модификации и вариации считаются входящими в объем данного изобретения, определяемый прилагаемой формулой изобретения.
[00282] Другие варианты реализации изложены в приведенной ниже формуле изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ получения нетрансгенной растительной клетки, содержащей мутированный ген AOS2, включающий
введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ Ш NO: 5.
2. Способ получения нетрансгенной растительной клетки, содержащей мутированный ген AOS2, включающий
введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот относительно аминокислотной последовательности AOS2, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из F6, R12, Р12, А30, 137, L46, F46, V48, V48, Т48, 148, М51, N76, G113, D113, F145, L187, D197, Е197, К200, А227, 1231, G231, Т231, F256, V256, А264, L270, F282, S282, V289, S289, N289, V292, L309, 1309, М320, L320, М328, L328, V328, Е337, D337, V338, L338, 1357, М357, Р381, L381, Т394К G407, С407, F423, L430, Е439А, G467, S467, V480, G494, D494 и Т495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
3. Способ получения нетрансгенной растительной клетки, содержащей мутированный ген AOS2, включающий
введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, 1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357,
М357, L381, Р381, К394, С407, G407,1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанная мутация представляет собой одну или более мутаций в одном или более положениях аминокислот, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем
положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка является тетраплоидной; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID
NO: 2, и гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой клетку растения, выбранного из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой клетку вида растения, выбранного из группы, состоящей из картофеля, томата, сои, перца и табака.
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой растительную клетку вида Solanum tuberosum.
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.
10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанную нетрансгенную растительную клетку репродуцируют бесполым способом.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что указанную нетрансгенную растительную клетку получают из клубня.
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка имеет оценку среднеранней зрелости.
13. Способ получения нетрансгенного устойчивого к патогену растения, включающий
(a) введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, 1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407, 1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49;
(b) идентификацию растительной клетки, демонстрирующей по существу нормальный рост и каталитическую активность по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа, в присутствии патогена; и
(c) регенерацию нетрансгенного устойчивого к патогену растения, содержащего мутированный ген AOS2, из указанной растительной клетки.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что патоген представляет собой один или более видов, выбранных из группы, состоящей из видов бактерий, грибков, вирусов, прионов и микоплазм.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что вид патогена представляет собой один или более видов, выбранных из группы, состоящей из Phytophthora infestans Fusarium spp., Botrytis spp., Alternarial spp., Pythium spp., Personospora spp., Cladosporim spp., Erysiphe spp., Aspergillus spp., Puccinia spp., Blumeria spp. и/или Trichoderma spp., Xanthomonas (например, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii, Xanthomonas campestris pv. campestris, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria), Pseudomonas {Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. syringae), Erwinia (например, Erwinia carotovora subsp. atroseptica), Ralstonia (например, Ralstonia
14.
solanacearum), Clavibacter michiganensis, Xylella fastidiosa, вируса мозаики соевых бобов, вируса кольцевой пятнистости табака, вируса полосатости табака, вируса бронзовости томата и других.
16. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что указанная мутация включает одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии -
аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин
- валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин
- треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
17. Способ по любому из пп. 13-16, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение является тетраплоидным; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2, и гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2.
18. Способ по любому из пп. 13-17, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение выбрано из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии, картофеля, томата, сои, перца, табака и растений, образующих орехи.
19. Способ по любому из пп. 13-18, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из картофеля, томата, сои, перца и табака.
20. Способ по любому из пп. 13-20, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к виду Solanum tuberosum.
21. Способ по любому из пп. 13-21, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Агтап Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Golden Wonder, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.
22. Способ по любому из пп. 13-22, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение репродуцируют бесполым способом.
18.
23. Способ по любому из пп. 13-23, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение получают из клубня.
24. Способ по любому из пп. 13-23, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение имеет оценку среднеранней зрелости.
25. Способ получения нетрансгенного растения с оценкой среднеранней зрелости, включающий
(a) введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, 1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407, 1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49;
(b) идентификацию растительной клетки, демонстрирующей по существу нормальный рост и каталитическую активность по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа, в присутствии растения со среднеранней зрелостью; и
(c) регенерацию нетрансгенного растения со среднеранней зрелостью, содержащего мутированный ген AOS2, из указанной растительной клетки.
26. Способ по п. 26, отличающийся тем, что патоген представляет собой Phytophthora infestans.
27. Способ по любому из пп. 25-27, отличающийся тем, что указанная мутация включает одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении,
26.
соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в
положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
28. Способ по любому из пп. 25-28, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение является тетраплоидным; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ Ш N0: 2 или SEQ Ш NO: 4.
29. Способ по любому из пп. 25-29, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение выбрано из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи.
29.
30. Способ по любому из пп. 25-30, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из картофеля, томата, сои, перца и табака.
31. Способ по любому из пп. 25-31, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к виду Solanum tuberosum.
32. Способ по любому из пп. 25-32, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Агтап Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Golden Wonder, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.
33. Способ по любому из пп. 25-33, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение репродуцируют бесполым способом.
34. Способ по любому из пп. 25-34, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение получают из клубня.
35. Способ по любому из пп. 25-34, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение имеет оценку среднеранней зрелости.
36. Способ повышения устойчивости к патогену у нетрансгенного растения, включающий
(а) введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145,
187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 5.;
(b) идентификацию растительной клетки, демонстрирующей по существу нормальный или выше нормального значения рост и каталитическую активность по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа, в присутствии патогена;и
(c) регенерацию нетрансгенного устойчивого к патогену растения, содержащего мутированный ген AOS2, из указанной растительной клетки.
37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что патоген представляет собой Phytophthora infestans.
38. Способ по любому из пп. 36-37, отличающийся тем, что указанная мутация включает одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин
37.
в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин
- валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин
- треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439.
39. Способ по любому из пп. 37-38, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение является тетраплоидным; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, и гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ Ш N0: 2 или SEQ Ш N0: 4.
40. Способ по любому из пп. 37-39, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение выбрано из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии, картофеля, томата, сои, перца, табака и растений, образующих орехи.
41. Способ по любому из пп. 37-41, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из картофеля, томата, сои, перца и табака.
42. Способ по любому из пп. 37-42, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к виду Solanum tuberosum.
43. Способ по любому из пп. 37-42, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Агтап Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.
40.
44. Способ по любому из пп. 37-44, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение репродуцируют бесполым способом.
45. Способ по любому из пп. 37-45, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение получают из клубня.
46. Способ по любому из пп. 37-45, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение имеет оценку среднеранней зрелости.
47. Картофель или клетка картофеля, содержащая мутированный ген AOS2, при этом указанный ген кодирует белок, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из положений 12, 48, 113, 282, 289, 309, 320, 328, 337, 338, 381, 407, 467 и 494 последовательности SEQ ID NO: 5.
48. Картофель или клетка картофеля Desiree, содержащая мутированный ген AOS2, при этом указанный ген кодирует белок, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292,1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407,1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
49. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 46-48, отличающаяся тем, что мутации в одном или более положениях аминокислот выбраны из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем
40.
положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин -
метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
50. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 46-49, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является тетраплоидной; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ Ш NO: 2.
51. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 46-51, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является устойчивой к патогену.
52. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 46-51, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является устойчивой к Phytophthora infestans.
53. Картофель или клетка картофеля Bintje, содержащая мутированный ген AOS2, при этом указанный ген кодирует белок, содержащий мутацию в одном или более положениях аминокислот, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197,
51.
Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292,1309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, К394, С407, G407,1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и К495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.
54. Картофель или клетка картофеля по п. 53, отличающаяся тем, что мутации в одном или более положениях аминокислот выбраны из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серии в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серии - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серии в
положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серии в положении, соответствующем положению 289, серии - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серии в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серии - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серии в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ Ш NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.
55. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 53-54, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является тетраплоидной; и
при этом указанные мутации обеспечивают гомозиготный генотип АААА в положении нуклеотида, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, гомозиготный генотип СССС в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ Ш N0: 2.
56. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 53-55, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является устойчивой к патогену.
57. Картофель или клетка картофеля по любому из пп. 53-56, отличающиеся тем, что указанный картофель или указанная клетка картофеля является устойчивой к Phytophthora infestans.
58. Мутация по любому из пп. 1-57, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к А в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ Ш N0: 2.
59. Мутация по любому из пп. 1-58, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к А по меньшей мере в двух положениях, соответствующих положению 691 последовательности SEQ ID N0: 2.
60. Мутация по любому из пп. 1-59, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к А по меньшей мере в трех положениях, соответствующих положению 691 последовательности SEQ ID N0: 2.
61. Мутация по любому из пп. 1-60, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к А по меньшей мере в четырех положениях, соответствующих положению 691 последовательности SEQ ID N0: 2.
62. Мутация по любому из пп. 1-61, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к С в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ Ш N0: 2.
63. Мутация по любому из пп. 1-62, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к С по меньшей мере в двух положениях, соответствующих положению 692 последовательности SEQ ID N0: 2.
56.
64. Мутация по любому из пп. 1-63, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к С по меньшей мере в трех положениях, соответствующих положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2.
65. Мутация по любому из пп. 1-64, отличающаяся тем, что указанная мутация приводит к С по меньшей мере в четырех положениях, соответствующих положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2.
56.
1 MALT55FSLF LPG1HQQFP5 KYSTFRPIIV SLSEKPT7W TQPTKLF7RT IPCDYGLPC-I
61 CPWKDRI.nTF YHQGK7F.F7E fiRWKYKGTТ FRTS'MPPGPr TG5KPKV7VL I.DGKf.FPVI.F
121 DVSKVEKKDL FTGIYKPSTE 1TGGYRVLSY 1DPSEPMHEK LKKLMFJLLS SRRDKVIPKF
131 HETYTEFF37 LDEEMAEEGT AGLHSG^IDQA AFNFLARG1F GVHPVETKLG TDGPTLIGKW
241 VLLQLHPVL7 LGLPKFLDUL ILHTFRLPPF 1VKKDYQR1Y DFFYTHSASL FAEAEKLGIS
3 31 KEt'ACHNlLF Al'CFHGEGGM K1FFFWMLK5 IAKA3VEVKT KLAKKIHJL'V KGAGGK lX'MIj
351 AKEKMPLMKG WYEALRV3P PVASQYGRAK QDLKIE3HDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD
421 PKIFDRPEEF VADRFVGEGE KLLKYVLKSM GPETESP7VG KKQCAGKDFV VMVSRLFVTE
48". FFT.RYD7FNV DVGKSAI.GA.I ТТ7ТЯТ.ККА
Фиг.2: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель A0S2-1 (StA0S2-l) (номер доступа GB DQ369736)
1 A7GSCA7TAA СХТСАТСХТТ ТХСТСТТССТ СХГССХТСХС ХХСАССААСА ATX7GGATCA
61 АААТАС7ССА CATTTCGTCC ТАХГАТТСТТ TCTTTATCGG AAAAGCCAAC AATCGTGGTA
Л7.\ АССGAACCTA GAAAAT7ACC TACTAGGACA АТАСGTGGCG AGTATGGGTT GCCGGGTATT
181 SGTCCA7GGA AAGATAGSCT TGATTACTTT TACAATCAAG GSAAAGACSA ATTTTTCGAA
241 TCAAGAGTAG TGAAATACAA АТСААСТАТА TTCAGAACGA ACATGCCACC GGGACCATTC
301 А7ТТСТТСТА ACCCGAAGGT TATTGTTTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCGC AGTCCTTTTC
36". GATGTT7CGA AACTCGAAAA AAAGGACGTC TTCAGGGGAA CTTACATGGC GTCGACTGAA
421 C7CACCGGTG STTACCGTGT ТС7ТТСТТАТ CT7GACCCAT CTGAACCAAA CCA7GAAAAA
4 81 Т7GAAAAAA7 TGATGT7GTT CC7TGTTTCT TG7CSTCGTG ATCACGT7AT ЛСССЛЛАТТС
541 CATGAAACT7 ATACAGAGTT TT7TGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTACA
6 31 GCTSGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAASCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC
661 GGAS1TAACC CAGTXGAAAC TAAACTCSGA AC7GA1GGXC CGACA1IGAT CGGAAAA'i'GG
"21 S7TTTGCTTC AGCTTCATCC TG7ACICACT CTCGGTC7TC CGAAGTT7CT AGACGACTXA
/8". A7CGTCCATA GTTTCCGGTT ACCTGCGTTT CTGGTGAACA AAGATTACGA GAGACTTTAC
а--;: глтттсгттг ACACCAACTC CGCCAGTTTA TTCGGCGAAG CTGAAAAAGT CGGCATTTGA
9 31 АЛЛGAAGAAG CTTGTCATAA TC7TGTCTTC GC7AGTTGCT ТСЛЛТТССТТ CGGCGGGATG 361 AAGATTTTCT TCCCGAATAT GCTGAAATCG ATAGCGAAAG CAGGGGTGGA GGTCCATACC 1С 21 CGTTTAGCAA ACGAGATCCG ATCGGAAGTA AAATCCGCTC GCGGGAAGAT CACGATGTCG 1CB1 SCGAXGGAGA AAATGCСGTT AA7GAAAXGA GXAGXXTATG AAGCT1TGCG AGX7GATCGT 1141 CCGGTAGCT7 CACAATACGG AAGASCCAAA CAGGACC7TA A.SATCGAATC ACACGACGCC "12 3". G7TTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGGTA TTCGGGTACC AACGATT7GC AACGAAGGAT 1261 CCGAAAATTT TTGACCGSCC GGAASAGTTC GTCGCCGATC GSTTCGTCGG AGAAGSAGAA 13 21 AAGXXA7TGA AATAXG7A1T AXGGXCTAAT GSACGGGAAA CSGAAAGTCC AACAGXGGGG
13 81 AATAAACAG7 GTGCTGGCAA AGATTTTGTA GTGATGG7TT CGAGGTTATT CGTAACGGAG
14 4". T7TTTTCTCC GTTACGATAC AT7CAACGTC GACGTTGGTA AGTCCCCCTT GGGGCGTTGA 1531 ATTACTATAA CTTCTT7GAA AAAASCTTAG
MALTSSFSLP
& 1
Г.РККПШ.ПУР
121
3VSKVEKK3L
131
•1ETYTEFFE7
2 41
VLLQLHPVL7
331
KEEACHW1LF
3S1
AKEKMPLM.HG
421
PKIFDRPESF
4 8".
7FLRYD7FMV
LPG1HQQFP5 YHCjCKUEFFF.
?TGTYI-:PSTE LDEEMADKGT LGLPKVLDDL AXCEH:JFGGM WYEALRVDP VADRFVGEGE DVGKSAI.SA-I KYSTFRPIIV ERWKYK5TI LTGGYRVLSY AGLNSGMDQA ILHTFRLPPF
KlFFPHMbKD PVA5QYGRAK KLLKYVLKSM ТТ7ТГЛ.ККА 5LGEKPT7W FR7XMPPGP7 IDPSEP^-JHEK AFNFLARS1F 1VKKDYQR1Y IAKASVEVKT COLKIESHDA GPETESP7VG
TQPTKFP7RT TGSKPKV7VJ, LKKLMFFLLS GVHFVETKLG DFFYTHSASL RLAKEIHJL'V VFEVKKGEML KKQCAGKDFV
IPCDYGLPGI T,nGKf> F?VT.F SRRDKVIPKF TDGPTLIGKW FAEAEELGIG K^AGG KKTMJ FGYQPFATKD VMVSRLFVTE
Фиг.4: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-6 (StAOS2-6) (номер доступа GB DQ369737)
A7GGCATTAA АЛАТАС7ССА АСССААССТА GGTCCATGGA TCAAGAGTAG А7ТТСТ7СТА GATGTT7CGA CICACCGGTG T7GAAAAAA7 CATGAAACT7 SCTSGTTTAA SGAG'I'TAACC GTTTTGCTTC A7CCTCCATA SATTTCTTT7 AAAGAAGAAG AAGATT7TC7 CGTTTAGCAA GCGATGGAGA CCGGTAGCT7 S7TTTCGAGG CCGAAAATT7 AAGTTA7TGA AATAAACAG7 TTTTTTCTCC A1TACTATAA
CTTCATCTTT CATTTCGTCC CAAAAT7TCC AAGATAGGCT TGAAATACAA ACCCGAAGGT AAGTGGAAAA GTTACCGTGT TGATGT7CTT ATACAGAGTT ACTCCGGCAA CAGTTGAAAC AGCTTCATCC GTTTCCGGTT ACACCAACTC CTTGTCATAA TCCCGAATAT ACGAGATCCG AAATGCCGTT CACAATACGG TGAAAAAAGG TTGACCGGCC AATATG7ATI' GTGCTGGCAA GTTACGATAC GTTCTT7GAA
TTCTCTTCCT ТЛ7ТЛТТ5ТТ TACTAGGACA TGATTACTTT AXCAACXAXA TATTGTTTTG AAAGGACGTC TCITTCTTAT CC7TCTTTCT TT7TGAAACC TGATCAASCT TAAACTCSGA TG7ACTCACT ACC TCCGTTT CGCCAGTTTA TC7ICTCXTC GCTGAAATCG ATCGGAAGTA AA7GAAATCA AAGAGCCAAA TGAAATGCTA GGAAGAGTTC AXGGTCXAAl AGATTTTGTA ЛТ7СЛАС5ТС AAAAGCTTAG
CTTCCTTCTC TC7TTATCGG ATACCTGGCG TACAATCAAG T TCASAAC GA CTCGACGGCA TTCAGGGGAA CTTGACCCAT TC7CSTCGTG CTAGATAAGG GCGTTTAATT AC7GATGGTC CTCGGTC7TC CTCGTCAAGA TTCGCCGAAG GC7ACTXGCT ATAGCGAAAG AAATCCGCTG GTAGTTTATG CAGGACC7TA TTCGGGTACC GTCGCCGATC GGACCGGAAA GTGATGGTTT GACGTTGGTA
TTCACCAACA AAAAGCCAAC ACTATGGGTT GGAAAGACGA ACATGCCACC AGAGTTTCCC CTTACATGGC CTGAACCAAA ATCACGT7AT AAATGGCGGA TCTTAGCTAG CSACATTGAT CGAAAGT7CT AAGATTACGA С TGAAAAAC T XCAAT i'CCXT CAGGAGTGGA GGCC-GAAGAT AAGCGTTGCG ASATC GAATC AACCATT7GC GGTTCGTCGG CGGAAAGTCC CGAGGTTATT AGTCGGCGTT
ATTTCCATCA AATCGTGGTA GCCGGGTATT ATTTTTCGAA GGGACCATTC AGTCCTTTTC GTCGAGTGAA CCA1GAAAAA ЛСССЛААТТС TAAAGGTACA ATCGTTGTTC CGGAAAATGG AGACGACTTA GAGACTTTAC CGGCATITCA CGGCGGGATG GGTCCATACC GACGATGTCG AGT7GATCCT ACACGACGCC AACGAAGGAT AGAAGGAGAA AACAG XGG GG CGTAACGGAG GGGGGCTTCA
' MALT55FSLF LP51HQQFPS KY5TFRPIIA 5LGEKPI7W TQPTKL-7RT MPCDYGLPGI
Е> ". GPWKnRIiDYF YHQCKNF.FFF. f.RVVKYKGTT FR7XMPPCPF TGSKPKV7VL I,nGKf)F?VI,F
121 3VEKVEKK7> L FTGTYl-'PSТЕ LTGGYRVLSY 1DPSEPMHEK LSKLMFFLLS SRRDKVIPKF
131 :1ETYTELFS7 LDKEMAEEGT AGLH5G:]DQA AFNFLARG1F GVHFVEAKLG TDGPTLIGKW
241 VLLCjLHPVLT LGLPKFLD3L ILHTFRLPPF 1VKKDYQR1Y DFFYTH5AKL FVEAEKLGIS
3 31 KEEACHHILF ATCKWUKGGM KIFFPHMMKS IAKAGVEVHT RLAKB1K5EV K^AGGKITMG
3 51 AKEKMPLHXG WYEALRVDP PVA5QYGRAK QDLKIED-HDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD
421 PKIFDRPEEL VADRFVGEEG EKLLKWLWS HGPETESPTV GNKQCAGKDF WMVSRLFW
481 SFFI.RYDT7N VDVGT^AI.GA -ST7TTST.FKA
Фиг.б: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-7 (StAOS2-7) (номер доступа GB DQ369738)
1 A7GGCA7TAA СТТСАТСТТТ ТТСТСТТССТ СТ7ССТТСТС ТТСАССААСА АТТТССАТСА
51 АААТАСТССА CATTTCGTCC TATTATTSCT TCGTTATCCG АААААССААГ AATCGTGGTA
121 АСССААССТА СААААТТАСС TACCAGGACA ATGCCCGGCG ACТATGGGTТ ACCGGGTATT
131 SGTCCA7GGA AAGATAGGCT TGATTACTTT TACAATCAAG GСАЛАААСGA ATTTTTCGAA
2 41 TCAAGAGTAG TGAAATACAA АТСААСТАТА TTCAGAACGA ACATGCCACC GGGACCATTC
3 31 ATTTCTTCTA ACCCGAAGGT TATTGTTTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCCC AGTCCTTTTC
3 51 SATSTT7CGA AAGTCGAAAA AAAGSACCTC TTCACTGGAA CTTACAXGCC GTCGACTGAA
4 21 CTCACCGGTG GTTACCGTGT TCTTTCTTAT CTTGACCCAT CTGAACCAAA CCATGAAAAA
А1Г. T7GAAAAAA7 TGATGT7CTT CC7TCTTTCT TC7CGTCGTG ATCACGT7AT ACCCAAATTC
5-',l CATGAAACTT ATACAGAGTT GTTTGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTACA
601 GCTGGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC
6 61 GGAGTTAACC CAGTTGAAGC TAAACTCGGA ACTGATGGTC CGACATTGAT CGGAAAATGG
7Й1 GTTTTGCTTC AGCTTCATCC TG7GGTTACT CTCGGTG7TC GGAAGTT7CT AGACGACTТА
731 ATCCTCCATA CTTTCCGGTT ACCTCCGTTT CTGGTGAAAA AAGATTACGA GAGACTTTAC
8 41 GATTTC7TT7 АСЛССААТТС CGCCAATTTA TTCGTCGAAG CTGAAAAACT CGGCATTTCT
9 3". AAAGAAGAAG CTTGTCATAA TC7TCTCTTC GC7ACTTGCT TCAATTCCTT CGGCGGGATG
951 AAGATTTTCT TCCCGAATAT GATGAAATCG ATAGCGAAAG CAGGGGTGGA GGTCCATACC
1С 21 CGTTTAGCAA ACGAGA7CCG ATCGGAAGTA AAATCCGCCG GCGGGAAGAT CACGAXGTCG
1031 GCGATGGAGA AAATGCCGTT AATGAAATCA GTAGTATATG AAGCTTTACG AGTTGATCCT
114". CCGGTAGCT7 CACAATACGG AAGAGCCAAA CACGACC7TA AGATCGAATC ACACGACGCC
12 31 G7TTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGCTA TTCGGGTACC AACCATT7GC AACGAAGGAT
1261 GСGAAAATT7 TTGACCGACC GGAASAGCTC GTCGCCGATC GGTTCGTCGG AGAAGAAGGA
13 21 GAAAAGTTAT TGAAATATGT ATTATGGTCT AATGGACCGG AAACGGAAAG TCCGACAGTG
1381 GGGAATAAAC AGTGTGCTGG AAAAGATTTT GTAGTGA7GG TTTCGAGGTT ATTCGTAGTG
14 41 GAGTTT7TTC TCCGTTACGA TACAl'TCAAC GTCGACG7TG GTACGTCGGC GTXGGSGGCT
1501 TCAATTACTA TAACTTCTTT GAAAAAAGCT TAG
I MALTSFFSLP LPSLHQQFPS KYSTFRPIIV SLSEKPTIW TQPTKLPVRT IPGDYGLPGI
6". GPWnRIiDYF YHQGKHEFFF. fiRWKYKGTT FR7XMPPGPF TSSKPKVTVL T,r)GKr> F?VJ,F
121 7> VSKVEKK7> L FTGTYl-'PS ТЕ 1.TGGYRVLSY 1.DPSEPMHEX LKKLMFFLLS SRRDKVIPKF
131 HETYTEFF37 LDEEMAEKGK AGLNSG:3DQA AFNFLARGLF GVHFVETKLG IDGFTLIGKW
241 VLLCjLHPVLT LGLPKFLDTiL ILHAFRLPPL 1VKKDYQR1Y DFFYTHSAKL FVEAEKLGIS
3 31 XEEACHN1LF ATCEMGFGGM KlFtTMMMKS IAKASVEVET RLAKKIHSL'V KGAGGK1TMG
3S1 AKEKMPLHKG WYEALRV3P PVA3QYGRAK QDLKIESHDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD
4 21 PKFFDRPESF VADRFVGEEG EKLLKWLWS NGPETE5PTV GNKQCAGKDF WMVSRLFVT
А1Г. F.FFLRYDT7N VDVGTSAI.GA ГЛТТТЛЬККА
Фиг.8: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum., аллель AOS2-8 (StAOS2-8) (номер доступа GB DQ369739)
в: 12: is: 24; зэ: за: А2: 4s:
бэ: 66: 72: nr. а--;: ээ: эе: 1С2: 1 с в: 114: 123: 126: 132: 138: 144: i:::i;
A1GGCT1TAA АЛЛТАС 7 С ТА АСССААССТА GGTCCATGGA TCAAGAGTAG ATTTCTTCTA GATGTT7CGA C7CACCGGTG T7GAAAAAA7 CATGAAACT7 SCTGGTTTAA GGAGTTAACC GTTTTGCTTC A7CGTCCATG SATTTC7TT7 AAAGAAGAAG AAC-ATT7TC7 CGTTTAGCAA GCGATGGAGA CCGGTAGCT7 GTTTTCGAGG CCGAAA7TT7 GAAAAGTTAi GGGAATAAAC GAGTTT7TTC TCAATTACTA
CTTCATГТТТ CATTTCGTCC CAAAAT7ACC AAGATAGGCT TGAAATACAA ACCCGAAGGT AACTCCAAAA GTTATCGTGT TGATGT7CTT AT AC AG AG TT ACTCTGGCAA CAGTTGAAAC AGCTTCATCC CTTTCCGGTT ACACCAACTC CTTGTCATAA TCCCGAATAT ACGAGA7CCG AAATGCCGCT CACAATACGG TGAAAAAAGG TTGACCGGCC TGAAATACGT AGTGTGCTGG TCCGTTACGA TAACTICTTT
TTCTCTTCCT TA7TATTGTT TGTCAGGACA TGATTACTTT АТСAACTATA TATTGTTTTG AAAGGACCTC TC7TTCTTAT CC7TCTTTCT TT7TGAAACC TGATCAAGCT TAAACTCGGA TG7ACTCACT AGCTCCGCTT CGCCAATTTA TC7TCTCTTC GA7GAAATCG ATCGGAAGTA AA7GAAATCA AAGAGC С AAA TGAAATGCTA GGAAGAGTTC AT 7 ATGG ТС T AAAAGATTTT ТАСЛТТСЛАТ GAAAAAAGCT
СТГССТТСТС TCTTTGTCCG ATACCCGGCG TACAATCAAG T TC A SAAC ТА CTCGACGGCA TTCACCGGAA CT7GACCCAT TCTCGTCGTG CTAGATAAGG GCGTTTAATT AT 7 GAT GGTC CTCC-GTCTTC CTCGTGAAGA TTCGTCGAAG GC7ACTTGCT ATAGCGAAAG AAATCCGCCG GTAGTATATG CAGGACC7TA TTCGGGTACC GTCGCCGATC AATG5ACCGG GTAGTGA7GG GTCGACG7TG TAA
XTCACCAACA AAAAACCAAC ACTATGGGTT GCAAAAACSA ACATGCCACC AGAGTTTCCC CTTACATGCC CTGAACCAAA ATCACGT7AT AAATGGCGGA TCTTAGCTAG CGACATTGAT CGAAGTT7CT AAGATTACGA CTGAAAAACT ТСААПССТТ CAGGGGTGGA C-CGGGAACAT AAGCTTTACG AGATCGAATC AACCATT7GC GGTTCGTCGG AAACGGAAAG TTTCGAGGTT GTACGTCGGC
ATTl'CCATCA AATCGTGGTA GCCGGGTATT ATTTTTCGAA GGGACCATTC AGTCCTTTTC GTCGACTGAA CCA7GAAAAA ACCCAAATTC AAAAGGTAAA ATCGTTGTTC CGGAAAATGG AGA7GACTTA GAGACTTTAC CGGCATTTCT CGGCGGGATG GGTCCATACC CACGATGTCG AGT7GATCCT ACACGACGCC AACGAAGGAT AGAAGAAGGA TCCGACAGTG ATTCGTAACG ATTGGGGGCT
MALTSFFGLP
Ь i
wPKKDRJiDYF
121
DVSKVEKKDL
131
HETYTEFF37
2 41
VLLQLHPVL7
331
KKEACHNLLE
351
AKEKMFLMKG
421
PKIFDRPEEF
4 81
SFFLRYDTFN
LPG1HQQFP5 YHQGKNFiFFE FTGTYKPS ТЕ LDKEMAEKGK LGLPKFLD3L ATCFNGFGGM WYEALRVDP VADRFVGEEG VPVGTSAI.GA
KYSTFRPIIV FiRVVKYKHT T
1TGGFRVLSY AGLHSG:IDQA ILHTFRLPPF K1FEPWMMKS PVA3QYGRAK EKL1KYVLWS SITITSLKKA
S-LSE KPT7W FSTXMPPGPF IDPSEP^HEK AFNFLARGLF LVKKDYQRLY 1AKA GV EVK T QDLTIESHDA MGPETESPTV
TQPTKLP7RT TGSKPKV7VL LKKLMFFLLS GVHPVETKLG DFFYTHSAKL KLAKE1 HGt" V VFEVKKGEML GNKQCAGKDF
IPGDYGLPGI I.nGK.SFPVT.F SRRDKVIPKF GDGPTL IGKW FVEAEKLGIS KGAGGK1TMG FGYQPFATKD WMVSRLFVT
Фиг.10: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-12 (StAOS2-12) (номер доступа GB DQ369735)
5: 12: is:
,'i4".
:зз: 35: 42: 4в; 54: бэ: 66: 72: тз: 84: 9 гг. 5 &: 1С2: юз:
1141
12з: 126: 132: 11 в: 144:
150J
ATGGCTTTAA АААТАС7СТА АС С СААС С ТА GGTCCA7GGA TCAAGAGTAG АТТТСТТСТА GATGTT7CGA CTCACCGGTG T7GAAAAAA7 CATGAAACT7 GCTGGT7TAA GGAGTTAACC GTGTTGCTTC А7ССТССАТА GATTTC7TT7 AAAGAAGAAG ААС-АТТГТС7. CGTTTAGCAA GCGATGGAGA CCC-GTAGCT7 G 7 T IT CGAGG CCGAAAATT7 GAAAAG7TA7 SGGAATAAAC GAGTTT7TTC TCAATTACTA
CTTCATTTTT CATTTCGTCC CAAAAT 7 AC С AAGATAGGCT TGAAATACAA ACCCGAAGGT AAGTCGAAAA GTTTCCGTGT TGATGT7CTT ATACAGAGTT ACTCCGGCAA СAG T TGAAAC AGCTTCATCC CTTTCCGGTT ACACCAACTC CTTGTCATAA TCCCGAATAT ACGAGATCCG AAATGCCGTT CACAATACGG TGAAAAAAGG TTGACCGGCC TGAAATACGT AGTGTGCTGG TCCGTTACGA 7AACTTCTTT
TTCTCTTCCT TA7TATTGTT TACCAGGACA TGATTACTTT ATCAACTATA TAITGTTTTG AAAGGACCTC TCTTTCTTAT CC7TCTTTCT TT7TGAAACC TGATCAAGCT TAAACTCGGA TGTGCTTACT ACCTCCGTTT CGCCAATTTA TC7TCTCTTC GAIGAAATCG ATCGGAAGTA AATGAAATCA AAGAGCCAAA TGAAATGCTA GGAAGAGTTC AT7ATGGTCT AAAAGATTTT TAG AT ICAAC GAAAAAAGCT
CTTCCTTCTC TC7TTGTCCC ATACCCGGCG TACAATCAAG TTCAGAACGA CTCC-ACGGCA TTCACCGGAA CTTGACCCAT TC7CGCCGTG CTAGATAAGG GCGTTTAATT GGTGATGGTC CTCGGTCTTC CTGGTGAAGA TTCGTCGAAG GC7ACTTGCT ATAGCGAAAG AAATCCGCCG GTAGTATATG CAGC-ACC7TA TTCGGGTACC GTCGCCGATC AA7C-GACCGG GTAGTGATGG GTCGACG7TG TAA
TTCACCAACA AAAAACCAAC ACTATGGGTX G СAAAAAC GA ACATGCCACC AGAC-TTTCCC CTTACATGCC CTGAACCAAA ATCACGT7AT AAATGGCGGA TCTT.AGC TAG CGACATTGAT CGAAGTTTCT AAGATTACGA CTGAAAAACT TCAATTCCTT CAGC-GGTGC-A GCGGGAAGAT AAGCTTTACG CGATCGAATC AACCATT7GC GGTTCGTCGG AAACGGAAAG TTTCGAGGTT GTACGTCGGC
ATTTCCATCA AATCGTGGTA GCCGGGTATT ATT7TTCGAA GGGACCATTC AGTCCTTTTC GTCGACTGAA. CCATGAAAAA ACCCAAATTC AAAAGG TAAA ATCGTTGTTC CGGAAAATGG AGATGACTTA GAGACTTTAC CGGCATTTCA CGGCGGGATG C-GTCCATACC CACGATGTCG AGT7GATCCT ACACGACGCC AA.CGAAGGAT AGAAGAAGGA TCCGACAGTG ATTCGTAACG GTTGGGGGCT
RALTSSFSLPLPSLHQOFPSKYSTFR?" IVSLSEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGCYSLPGIGPb'KDELDYFYI-lQGK DEFFESRWKYKS TIFRTNMPPGPF ISGK?KVIVLLDGKGFPVLFDVGKVEK?".DL?TGTYHPE! TELTGGYRVLGY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLGSRRDHVIPKFHETYrEFFETLDKEMAEKGTAGLNGGNDQAAFKFLAR5LFGVlJPV KTKLGGUGl'TLlGKWVLljQLH^VLIXGLl'KFbUDLIbHTFRLPPy LVKKDY^HLY1> FF YTNGAGbFAEAEKLGIG KEEACHHLLFATCFHSFGGXKIFFPIM^LKSIAKAGVEVHTRLAHSIRSEVKSAGGKITMSAMEKHPLMKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLKIESIIDAVFEVKEGEMLFGYQPFArKDPEIFDRPSEFVADRFVGEEGEKLLKYVLb'G KGPETESPIVSNKaCAGK^FVlW'SRLFVTEFFLRYDTFWDvGKSALGASITITSLKKA
Фиг.12: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CBl
AtGGCATTAACTTCATCTXTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTICCATCAAAATACTCTACATTT CGXCCTAXrAXCC-TTTCTXIAXCCGAA7u\ACCJJVCJJVTCGTGGTAJiCCCA7iCCIACAAJiATrACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTIGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTrGAITACTTTIACAATCAAGGGAAA GAGGAAl'X'rTXGGAAXGAAGAGl'A.GXG.AAAX'ACAAAXGAACX'ATArX'CAGAAGGAACA.IGGGAGCGGGAGGAX'XC ATXTCTTCTAACCCGAAGGTCATTGTTTXGCTCGACGGCAAGAGXTTCCCAGXCCXTTTCGAXGTTTCGAAAGTC C-AAAAAAAGGACCTCT7CACCGGAACTrATATCCCGXCGACTGAACTCACCCCrGGTTACCGXCTTCT7rCTTAT GTTGAGCGATGTGAACCAAAGGATKAAAAHTTGAAAAAATTGATGTTGTTCCTTCTTTCTTCGCGTCGTGATCAC GTXATACCCAAJiTTCCATGJu\ACTTATACAGAGTrTXTTGAAJiCCCTAGArAAGGAAATGGCGGAAJJLAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCC-GAGGTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTGCTCACT CXCGGXCXrCCGAAGTrXC:'AGACGACrXA.Vi'CCrCCATACXrXGCGGl'llACCrCCGTTXCrGGTGA.AGAAAGAX TACCAGAGACTrTACGATTrCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AJmGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCCTCGCTACTTGCTTCr^ATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGArAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGlCCATACGCGTTTAGCAAACGAGArGCGATCGGAAGTA AAATCCGCCGGCGGGAAGArCACGATGTCGGCTATGGAGAAAATGCCGTTAATGAAATCAGTAGTATArGAAGCT TTGCGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTXTTGGAGGXGAAAAAAGGTGAAATCCXATTCGGGXACCAACCAGTTCCAACGAAGGATCCGAAAATGrXTGAC GGGCCGGAAGHGTTCGTCGCCGATCGCTTCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT А^Т6СЛССССА2и\ССС?^СТСС6АСАСТвС6СА.АГА^\САСТСХ6СТ66СЛА?1 &АТТГТ6ГЛ6Т6ЛТССТТТСС AGGTTATTCGXAACGGAGXTTXTTCTCCGTTACGATACATTCAJyCGTCGACGXTGGTAJLGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TAG ГАХААСТТС T TTGAAAAAAGC XT AG
Фиг.13: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CE2
MALTSSF5LPLKS LHQQFPSKYSTFRPTIVSLSEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGDYGLPGIGPHXDRLDYFYNQGK DEFFESRWKYKS XI FRTNMPPGPE 1 GGKI'K VIVL 1.DGKGFPVL.F U VGK VEKKULFTGT YKl'G XELTGG YRVLG Y LDPGEPHHEKLKKLMFFLLGSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNSGHDQAAFKFLARSLFGVyPV ErKLGGDGPTLIGf^/LLQLll?VLTLGLPKFLDDLILf]TFRLPPFLVKKDYQ?,LYT> FFYTNGANLFVEAEKLGIS KEEACHHLLFATCFH3FGG> :KIFFPHKMK3IAKAGVDLHTRLANSrRSEVT,5AGGKITMGAMESMPLt-№GWYEA LRVCPPVAGQYGRAKQDl.KlEGHDAV?EVKKCEMLFSYQPFArKI)PKIFDRP3EFVADRFVGE3GEKLLKYVLK'G KGRETE^PTVGMKi3GAGK3t'VAT"4V jRLt'VXEFFLKYDXFHVDVGKGALGAj 1Ill'GLKKA
ATGGCATTfiACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCGTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAGCCAAC AATCGTGGTAACCCAACC IACAAAAT TACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GAGGAATXГTXCGAAXC AAGAGXAGTGAAATACAAAXCAACTATATXCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATXC ATTTCTTCTAACCCGA?i.GGTCATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC G/JlAAAAAGGACCTCTTCACCGGAJi.CTTATATGCCGTCGACTGJ'LACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTrrCTTAT CITGACCCATCIGWiCCAAACC^^
G Г XAXACCCAAAXXC СATGAAAC XTA1ACAGAG X Г T X T X GAAAC СС TAGATAAGC- AAAT GGC GGAAAAAG GIACA
GCXGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAATCCAGTT
GAAACTAAACTCC-GAGCTGATCGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTGCTCACT
С TGGGTCT7CGGAAGT7TC 7AGACGAC 7TAATCC7CCATACT7TGCGGTTACC 7CCGTTTC 7GGTGAAGAAAGAT
TACCASAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCSCCAJiTTTATTCGTCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCT
AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG
AATATGATGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGATCTC'ATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA
A_AATCCGCCGGCGGGAAGArCACGATG7CGGCGArGGAGAJ'J^ATGCCGXi7AATGAAAlCAGrAGTXTArGAji
TTACGAGTTGACCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC
GTTTTCCAGGTGAAAAAATGTGAAATGCTATTCCGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7 TTTGAC
CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT
AATGGACCGGAAA.GGGAAAGTCCGACAGTGGC-GAAIAJ^tAGTGTGCTGGCAAAGATTTTG'rAGTGATGGTTTCG
AGGTXATTCGTAACGGAGTiTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT
TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.15: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB3
RALTGSFDLPLPSLHQOF?GKYGTFR?IIVSLCEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGCYGLPGIGPKKDRliDYFYNQGK DEFFESRWKYKSTIFRT№-:P?GPFISGK?KVIVLLDGKSFPVLFDVGICvbK?".DL" TGTYKPSTELTGGYRVLSY LDPGEPI^EKLKKLMFFTJLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKCTACLNSGHDQAAFTTFLARSLFGVIJPV ETKT.GGnGPTI^GH^Ipr.Qr.HPVI.TLCI.PKFT.nni.TI.HTFRT.PPr T.VKKDYQRr.Y^FFYTHnASr.FAEAEKT.GTF! KEEACHIJLLFATCFHSFGGMKIFFPlM-^MKSIAKAGVDLHTRLANErRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVCPPVAGQYGRAKQDLKIESimr^VFEVKKCEMLFSYQPFATKDPKIFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLWS RGPETESPTVGNKQCAGKDFV\T"rvrSRLFVTEFFLRYDTFrft'DVGESALGASITITSLKKA
ATG &CATТААСТТCATCТТТТ
CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAAXXriTCGAJVICAAGAGXAGTGAAJU'ACAAAXCAACXAXArXCA.^^
ATTTCTTC7AACCCGAAGG7CATTGTT7TGCTCGACGGCAAGAGTCTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCXCT7CACCGGAACX7AIATGCCGXCGACXGAACTCACCGG7GGTXACCGTGX ХСТ7ТС1ХЛТ CTTGACCCATCCGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCTICTTTCTTCCCGTCGTGAICAC GTTATACCCAAATrcCATGAAACTTATACAGAGXriXTTSAAACCCTAGArAAC^AAAXCKiCSGAAAAAGSTACA GCTGGTTIAAACXCCGGCAAXGATCAAGCTGCGTTIAATTTCTTAGCXAGATCGTXGXTCGGAGXIAACCCAGIT CAAACTAAACTCCGAGCTCATCCTCCCACATTCACCGCAAAATCGCTTTTCCTCCACCrTCATCCTCTCCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC 7AGACGAC 7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC 7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7XACGATX7CTITTACACCAACTCCSCCAGX7XA7TCGCCGAAGCTGAAAAACXCGGCAXIICA AAAGAAGAAGCTXGTCATAAXCTTCTCTXCGCTACTXGCTTCAATTCCTXCGGCGGGATGAAGAXXTTCTXCCCG AATATGATGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGATCTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAATCCGCCGGCGSGAAGArCACGATGICGGCGArGSAGAA^
TTACGAGX7GATCCTCCGGrAGCTrCACAAXACGG.AAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTGGAGGTGAAAAAATCTGAAATGCTATTCGGGTACGAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC GGGCGGGAAGAGTTCG7CGCGGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTXACGATACATTCAACGTCGACGTTGGT.AAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.17: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB4
RALTGCFGLPLRS LHQOF?SKYCTFR?I IVGLGEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGCYGLPGIGPKKDF.liDYFYt-IQGK DEFFESRWKYKSTIFRTNXPPGPFISGKPKVIVLLDGKGFPVLFDVGir^KKDLFTGTYKPGTELTGGYRVLGY LDPSEPI-№EKLKKLMFFLLGaRRDHVIPK7HETY7EFFET7,DKEMAEKCTAGLWGGr5DQAAFt:7LARSLFGV7]PV FДKI.GGnGPTI,7G^WI.:.Q^H?Vr,TI,GI1PKFT,nDIЛI.HTFPJ,FPFTЛ'KKDYQГ^I/^'Г> FFYT^IGAGT,FAFAEKI.GTГ^ KEEACHHLLFArCFHSFGGXKIFFPHKLKSIAKAGVEVHTRLAHSIRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLKIE 3HDAVFEVKKGEKLFGY"QPFA7KDPEIFDRPSEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKS, RGPEXESPTVGWKQCAGKDFVWI\.rSRLFVTEFFLRYDTF:rvDVGKGALGAGITIT5LKKA
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCGTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATT~TTGGAATGAAGAGTAGl'GAA^TACAAATGAACTATATTCAGAACGAACArGCGACCGGGAGCATTC i\TTTCTTCrAACCCGA_AGGrCATTGTTrTGCTCGACGGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACС ТС T ТСЛСС GG AAC T ТА TATG CCGTCGACTGAAC T CACC GGTG GT ТАСС GTGT ТС T Г T С T TAT CTTGAGCCATGTC-AACCAAACGATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTGTTCCTTCTTTCTTCCCGTCGTGATCAC GTTATACCCAAATTCCATGAAACTTATIACAGAGTTTTTTGAAACCCTAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTICAGCTTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7TACGATT7CTTTTACACCAACTCCGCCAGT7TA7TCGCCGAJIGCTG.AAAJIACTCGGC7LTTTCA
AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATXCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAATCCGCCGGCGSGAAGArCACGATGrCGGCTArGGAGAAJ^TGCCGTTAATGAAATCAGrAGTATATGAAGCT TTGCGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTGGACGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACGAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTG'TAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTIGAAAAAAGCTTAG
Фиг.19: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB5
RALTD3FDLPLPSLHQOF?OKYETFR?:IVSL5EKPTIVVTQPTKLPTRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQSK KEFFE3RWKYKGTIFRTNMP?GPFIGGK?KVIVLLDGK3FPVLFCVGKVEK: ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT
CGXCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGIATTGGTCCATGGAAAGATAC-GCTTGATTACTTTTACAATCAGGGCAAA AJ> .C"GAATTTTTGGAJVICAAGASTAGTAAAJY17I^
ATTTCTTCrAACCCGA-AGGrTATTGTTrTGCTCGACGGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGT TACCGTGTTCTCTCTTAT CrTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCTTCTTTCClCCCGTCGTGATCAC GTXATACCCAAAI'TCCATGAAACITAIACAGAGI(tm)XTIX3AAACCCU'AGArAAG Фиг.21: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB6
MALT5GFDLPLPSLKQOF?GKYGTFR?:IVDLEEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK
KEFFESRVVKYKC TIFRTNMPPGPFI SGK?KVIVLLDGKGFPVLFDVGKVEK?".CL7TGTYHPS TELTGGYRVLSY LDPSEPNHEKLKKLMFF LLSGRRDHVIPKFHETY7EFFETLDKEMAEKGTACLtJGGJ-TDQAAFKFLARELFGV> ]PV F^KI.GGnGPTT^G№^,:,QI.H?VTTr,Cr,P: FFYTNn:AGT,FAEAEKT.GTr>
KEEACHHL;FATCFHSFGG:-:KIFFPHKLKSIAK/VGVTVHTRLAHS;RSEVKSAGGKITMSAME: RGPETESPTVGHKQCAGKDFVVMV'SRLFVTEFFLRYDTFWDVDKSALGASITITSLEKA
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTICCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAAT TAG С ТАСС AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAGGGCAAA A^XGAATTTTTCGAJ^^AAGAGTAGTAAAJYIACAAATCAAC^^^
A.TTTCTTCTAACCCGA.AGGTTATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GJU\AAAAAGGACCTCTTCACCGGA.ACTTACATGCCGTCGACTGJLACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGACCCATСTGAACCAAACСATGAAAAATTGAAAAAATTGATS7TCTTCCT7CTTTCCTCCCGTCG7GATCAC GTI'ATACCCAAATTCCATGAAACTTAllACAGAGTTTTT'i'GAAACCCTAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT C-AAACTAAACTCC-CAGGTGATCGTCCC AC ATTGATCCGAAAATGGGTTTTGCTTC ACC ГТС ATCCTCTCCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAJtGCTG/iAAJiACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTATC7TCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT SC TGAAAT С GA T AGC GAAAGCAGGGG TG G AG S T С С AT AC С С G TT TAGCAAAC GAGA T С С GAT CGGAAG ТА AJiAI'CCGCTGGCGGGAAGATCACGATGCCGGCGATGGAGAAJlATGCCGTTA^
TTACGAGTIGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGG.AAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT A_ATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATA_AACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TACTATAACT ТС T T TGAAAAAAG С TTAG
Фиг.23: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB7
RALT5SFSLPLPSLKQOF?CKYGTFR?:IVSLCEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK
KEFFESRWKYKCTIFRTNXP?GPFISGK?^VIVLLDGKSFPVLFDVSK'in:K: ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTТССТСТТССТТСТСТТСАССААСААТТГССАТСАА.ААTACTСТАСАТТТ CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAC-GCTTGATTACTTTTACAATCAAGGCAAA A^.CGAATTTTTCGAJa^AAGAGTAGTGAAjVl^.CAAATC^
A^TTCTTCrAACCCGATi.TGrTATTGTTrTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGJ'iAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGSTTACC GTGTTCTTTCTTAT CrTGATCCATCIC-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCTICTTTCTTCTCGACGTGATCAC GTTAT'ACCCAAATTCCATGAAACTTATACAGAGXT TTTCGAAACCCTAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCTTCCGAAGT7TC 7AGAGGAC 7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC 7CCGTTTC TGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7TACG7iTT7CTTTTACACCAACTCCGCCAGT7TA7TCGCCGA7iGCTG7JUU'u^CTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTATCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGTTGAAGATTTTCTTCCCG
AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACC-AGATCCGATCGGAAGTA
AJAATCCGCTGGCGGGAAGATCACGATGTCGGCGATGGAGAJLAATGCCGT'llAAiiTjAAATCAGTA.GTTTA'^^
TTACGAGTRGATCCTCCGGRAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7 TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG 7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTA TGGTCT AJ^TGGACCGGAAAXGGAAAGTCCCIACAGTGGGGAATAJ^CAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG
AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTТСT TTGAAAAAAGC TTAG
Фиг.25: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum, StA0S2_CBS
RALT3-GF5-LPLPDLKQ0FPGKYGTFRPI IVS-LGEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGCYSLPGIGPKKDP.IJDYFYNQGK DEFFEGRVVKYKTJ TIFRTNXPPGPFISGKPKVIVLLDGKGFPVLFDVSKVEKLKDLFTGTYKPG TELTGGYEVLGY ЬОРЕЕРТЩЕКЬККЬМГР^ЬЕЗГЧРОНУТРК^НЕТУТЕГГЕТ^ОКЕМАЕКСТАСЬЫЗСИБОААРКТЕАКЕТГСтаР^* ГЛКШТ^РТТ^№ЯЧ,:,?1.Н?УГ,ТГ,С1,Р: <РТ,ПШДТ^^
KEEACHtJLLFA7CFIJSFGGXKIFFPI-H-:LKSIAKAGV*EVHTRLAH3CRSEVKSAGGKITMSAME: АТйеСАТТААСГТСАТСТТГТТСТСТТССТСТТССТТСТСТТСАССААСААТТТССАТСААААТАСТСТАСАТТТ CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGCAAA AAC GAAT T Г T TC GAATC AAGASTAGTGAAATACAAATC AAC TATA Г T CAG AACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTCTAACCCGAATGTTATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGT TTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGT ТСТТТСТТЛТ CTTGATCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATS7TCTTCCT7CTTTCTTCTCGACG7GATCAC GTTATAXCCAAATTCCATGAA-ACTTATACAGAGTTTTTCGAAACCCTAGATAAGGAAATGGCGGAAjy^AGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTCATCCTCCGACATTCACCGGAAAA7CGCTTTTCCT7CACCTTCATCCTCTACTCACT CTTGGTCTTCCGAAGT7TC TAGAGGAC 7TAATCCTCCATACTTTCCGGTTACC 7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCASAGACTTTACGATTrCTTTTACACCAACTCCSCCAGTTTATTCGCCGA7iGCTG.',iAA.',iACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTATCiTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGSGGTGGAGSTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAATCCGCTGSCGSGAAGATCACGATGTCGGCGArGSAGAAAATGCCSTTAATGAAATCAGrAGTTTATGAAGCT TTACGAGT7GATCCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAACGTGAAATGCTATTCGGCTACCAACCA7TTGCAACCAAGGATCCGAAATT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TAC TATAAC T ТС T T TGAAAAAAGC TTAG
Фиг.27: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB9
RALT^3F5LPLPSLKQOF?3KYGTFR?:IVSLSEKPTIVVTQPTKLPIRT:PGCYSLPGIGPKKDRIDYFYHQGK
DEFFESRWKYKS TIFRTNXPPGPFIGGKPKVIVL LDGEGFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYMPCTELTGGYRVLCY LDPGEPi(tm)EKLKKLMFFLLG3RRDHVIPKrHETY7EFFETLDKEMAEKCTACLNGGHDQAAFK7LAR3LFGV75PV ETKT.GTnGPTTЛG^П^ГЛw,QI.H?Vr.Tr,GI,PKFT,DDIЛI,HTFPJ,FPFI7^,KKDYQHI/fЗFFYT^IПAGT,FAEAFKT.GTГ1 KEEACHMLLFACCFHSFGGICEIFFPHKVKSIAKAGVEVHTRLAHECRSEVKSAGGKITMSAMES.MPLHKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLKIEGIIDAVFEVKKGEMLFGY"QPFA7KDPKFFDRPSEFVADRFVGESGEKLLKYVLKG KGPETES FTVGHKQCAGK OFVVMV5RLFV ТЕ F F LRY D TFMVDVGKSALGASITITSLKKA
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTATCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAAT X 7 X XC G AAXC AAGAG TAG I'GAAA ТАСАААХСAAC X ATA 'Г X CAGAAC GAACAX GC CACCGG G AC С AX XC A.TTTCTTCTAACCCGA_AGGTTATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCG.AAAGTC GJU\AAAAAGGACCTCTTCACCGGA.ACTTACATGCCGTCGACTGJLACTCACCGGTGGTT.ACCGTGTTCTTTCTTAT CITGACCCATCrC-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGITCTTCCTrCTTTCCTCCCGTCGTGATCAC GXXAX'ACCCAAAX'X'CCAXGAAACXTATACAGAGXTTT'TX'GAAACCCXAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGIACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT CAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCCACATTGATCGCAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT СTCGGTCTTCCGAAGT7TC TAGACGAC 7TААТСС7ССATACT7TCCGGTTACC 7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCASAGACT7TACG7ITT7CTTTTACACCAACTCCSCCAGT7TA7TCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCT AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA A_AATCCGCCGGCGGGAAGArCACGATG7CGGCGArGGAGAJ^ATGCCGTTAA/i"GAAATCAGTAGTXTA':GAAGCT TTACGAGTTGATCCTCCAGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCATTTGGAACCAAGGATCCGAAATTTTTTGAC CGGCC5GAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TACTATAACTTC T TTGAAAAAAGC TTAG
Фиг.29: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB10
RALTSSF3LPLPSLKQOF?SKYGTFR?:IVSLGEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK KEFFEGRWKYKGTIFRTNXP?GPFIGGK?KVIVLLDGKGFPVLFDVGKVEK: KEEACHHLLFATCFIJSFGGMKIFFPHKLKSIAKAGVEVHTRLAHSCRSEVKSAGGKITMSAMEXMPLMKSVVYEA LRVDPPV-AGQYGRAKQDL: ATGGCATTAACITCATCTTITTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTICCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTIGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGAITACTTTTACAATCAGGGCAAA AJ^GAAT Г!'T TC G AJV1C AAGAGTAGIA AA^TA
ATTTCTTCTAACCCGA_AGGTTATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTICACCGGA.ACTTACATGCCGTCGACTGJIACTCACCGG7GGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGAT57TCTTCCT7CTTTCCTCCCGTCG7GATCAC GTTATACCCAAATL^CATGAAACTTATACAGAGL'RTTTTSAAACCC'RAGARAAGGAAATGGCSGAAAAAGSTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT CAAACTAAACTCGGAGCTCATGCTCCGACATTCA7CCGAAAA7CCCTTTTCCT7CACCTTCATCCTCTCCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAJIGCTGJTAAJIACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATICCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT Z- Фиг.31: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CBll
MALTSSFSLPLPSLHQOF?OKYGTFR?:IVSLCEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQSK KEFFEGRWKYKGTI FRTNMPPGPF15GK?B7VIVLLDGK3FPVL7DVGKVEK?".DLFTGTYKPGTELTGGYRVLGY LDPGEPI№EKLKKLMFFLLGGRRDHVIPK7HETY7EFFETCDKEMAEKCTAGLIJGGHDQAAFKFLAR5LFGV75PV
F^KI.GTDGPTb7GFm7^,QI.H?Vr,TT.GI,PKFI.nDI.TI.HTFP.T.PPFI.VKKDYQai.Y3FFYTt-7GAGT.FAFAEKT.GTf1 EEEACHHLLFATCFI-lSFGGyKIFFPIB-'LKS IAKAGVEVHTRLAHSCRSEVKSAGGKITM5AMEXMPCMKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDL?".IEGIIDAVFEVKEGEMLFGY'CiPFA7KDFK IFDRPSEFVADRFVGEGEELLKYVLWGH GPETEGPTVGNKQCAGKDFWW3RLFVTEFFLRYDTFNVDVDKGALGASITIT3LKKA
ATSGCATTAACrTCATCTTrTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTrCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTIGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAGGGCAAA AJiCGAATTri'TGGAATCAAGASTAGTAAA^TACAAATCAACTATArTCAGAACGAACATGCGACCGGGAGCATTC A.TTTCTTCrAACCCGA.AGGrTATTGTTrTGCTCGACGGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTrCACCSGAACTrACATGCCGTCGACTG/iACTCACCGGrGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CITGACCCATCIGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTICTTTCTTCTCGTCGTGATCAC GTTATAGCGAAATXGCATGAAACTTATACAGAGI'rXU'TTGAAAGGGTAGArAAGGAAATGGGGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCrTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC 7AGACGAC 7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC 7GGGTTTC 7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTITACGATTrCTTTIACACCAACTCCGCCAGTITArTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCITGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCITCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAAICCGCrGSCGSGAAGArCACGAXGrCGGCGArGSAGAAJUiXSCCSXXAATGAAAXCAGrAGTXTATGAAGCX TTACGAGTrGArCCTCCGGrAGCTrCACAATACGG.AAGAGCCAAACAGGACCTrAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCCACCTCAAAAAAGCTGAAATCCTATTCCGCTACCAAC.CA7TTCCAACCAAGGATCCCAAAAT7 TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTGG7CGCGGATCGGTTCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTGTAAT GGACCSGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGArTTTGTAGrGATGGTTTCGAGG TTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCTTCA ATTACTATAACTTCTTIGAAAAAAGCTTAG
Фиг.ЗЗ: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB12
RALT53F5LPLPSLKQOF?GKYGTFRP:IVSLGEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGDYGLPGIGPKKDRLDYFYI-IQGK
DEFFE3RWKYK5TIFRTN> CP?GPFISGK?KVIVLLDGKSFPVLFDVSKVEK: 5PV ГЛКТ.СТПСРТТЛГгИ^ЬГ^Г.НРУТ.ГТ.СЬРКРТ.ППТЛТ.НТГРТ^РРТЛ'ККПУОНГУЭРРТТНПА^ТТАЕАЕРЛ.СТГ, KEEACHHLLFAICFHSFGGMKIFFPHKVKSIAKAGVEVHTRLAHEIRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVCPF^/AGQYGnAKQDLKIE3IIDAVFEVKKGEMLFGY"QPFA7KDPKFFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKG NGPETESPTVGHKQCAGKDFV"V№!5RLFVTEFFLRYDTFr-rv*DVGKGALGAS ITITSLKKA
ATSGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTrCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACTAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GA.GGAATTrTTGGAATGA^GAGTAGXGAA^TACAAATGAACTATArXGAGAACGAACATGGCAGCGGGACCAT'rC ATTICTTCTAACCCGATiGGTTATTGTllTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCSGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCTTCTCGTCGTGATCAC GrXAXAGCCAAATTCClATGAA-ACXrAllACAGAGXriXTXGAAACCCXAGACAAGGAAAtGGGGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTCATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7TACGATT7CTTTTACACCAACTCCGCCAGT7TA7TCGCCGAi,iGCTG/iAAi,iACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT SG TGAAAT С GA T AGC AAAAGC AGC-GG TGGAGSTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGA T ZСGAT CGGAAG ТА AJViTCCGCCGGCGSGAAGArCACGAXGrC"GGCGArGGAGAJ"JUrr^^
TrACGAGTrGArCCTCCAGrAGCTTCACAATACGG.AAGAGCCAAACAGGACCXrAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTAGCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAATT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTG7AGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TACTATAA CT ТС T TAGAAAAAAG С TTAG
Фиг.35: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB13
RALTSSFDLPLP5LKQOF?CKYGTFR?:IVDLEEKPTIVVTQPTKLPTRT:PGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQSK DEFFEGRWKYKGTIFRTN:-:P?GPFIGGK?KVIVLLDGKGFPVL7DV3K-IN:K?".DL7TGTYKPGTELTGGYRVLGY LDPGEPNHEKLKKLMFFLLGGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNGGHDQAAFKFLARSLFG'VLLPV ЕТКТ.СТПСРТТЛАИ^Л^.ОГ.НРУГ.ТГ^Г.РКРЬППТЛТ.НТГР.Т.РР^ТЛ'ККПУОЯЬУЭГЕУТНПАПТТАЕАЕКТ.ПТГ!
KEEACHHLLFATCFHSFGG:-;KIFFPHKLH3IAKAGVEVHTRLAHЈ1RSEVKSAGGKITMSAHEKMPLMKSVVYEA LRVCPLVAGQYGRAKQD1?:7EGIIDAVFEVKEGEMLFGYQPFA7K7IFKIFDRPSEFVADRFVGEGEELLKYVLWGH GPETEGPTVGNKQCAGKDFWWGRLFVTEFFLRYDTFMVDVGKSALGAGITITGLKKA
Фнг.Зб: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB13
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT
CGTCCTAT7ATRGTTTCTT7ATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACC7ACAAAAT7ACCTAC7AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATTTTTGGAJVIX^AAGAGIYAGTGAA^T^
A.RTTCTTCRAACCCGA.AGGITATTGTTITGCTCGACGGCAAGAGTITCCCAG TCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCT7CACCSGAACT7ACATGCCGTC GACTG/IACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTRTGTTAT CRTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATS7TCTTCCT7CTTTCTICTCGTCG7GATCAT
GTTA'i'ACCCAAAXXCCATGAAAGTTAllAGAGAGl'ri'Tl'rGAAACGGIAGArAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTAGA
GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCAACATTGAICGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTGGGTCTTCGGAAGTTTCTAGACGACTTAATCCTCGATACTTTGCGGTTACCTCGGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTITACGATTRCTTTTACACCAACTCCGCCAGTITAITCGCCGA/IGCTG/IAAJIACTCGGCATTTCA
AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATSCTGAAATCGArAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AJ^TCGGCrGGGGGGAAGArCAGGATGrGGGCGArGGAGAAAATGCCGTI\AA.XGA.AAl'CAGrAGTXTArGAAGGT TTACGAGTTGArCGTCrGGrASCTTCACAATACGG.AAGAGCCAAACAGGACCTrAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTGGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTAGGAACCATTTGCAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCGGGAAGAGTTGG7CGGCGATCGG7TCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTGTAAT GGACCGGAAACGGAJiAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGrGATGGTTTCGAGG TTATTCGTAAGGGAGT7TT7TGTCCGT7ACGATACATTCAACGTGGACGT7GG7AAGTCGGCGTTGGGGGGTTGA ATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фнг.37: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB14
RALTGGFSLPLPOLKQOFPGKYETFRPIIVS-LOEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGCYGLPGIGPKKDRIJDYFYNQGK DEFFE3RWKYKGTIFRTNXP?GPFIGGK?KVIVLLDGKGFPVLFCVGK"UTI;K: KEEACHMLLFATCFHSFGGXKIFFPHKLKSIAKAGVEV^
LRVDPPVAGQYGRAKQDLKIEGHDJ^FEVKr:GEMLFGYQPFA7KDPKIFDRPSEFVADRFVGEGEp;LLKYVLWSH С-РЕТЕЗРТ\'С:1К0САСКО:\п/М\таНЕг\'Т2ГР1КУ0ТР:-]УОУСКЗАЬаАД7Т173ЬККА
ATSGCATTAACTTCATCTTrTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTrCCATCAAAATACTCCACATTT
CGTCCTAT7AT7GTTTCTT7ATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACC 7ACAAAAT7ACCTAC7AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATTrTTGGAAirAAGAGTAGTGAAJiTACAAAl'GAACTATArTCAGAACGAACATGCGACCGGGAGCATTC A.TTTCTTCrAACCCGAAGGrTATTGTTrTGCTCGACSGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTrCACCGGAACTrACATGCCGTCGACTG/iACTCACCGGrGGTTACCGTGTTCT~TCTTAT CrTGACCCATC7C-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCT7CTTTCTTCTCGTCGTGATCAT GTXATACCCAAAXXCCATGAAAClTATACAGAGTrTXTXGAA\ACCCTAGArAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATCGTCCAACATTGA7CGGAAAATGCCTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTCAAGAAAGAT TACCAGAGACTrTACGATTrCTTTTACACCAACTCCGCCAGTrTAITCGCCGAJiGCTGJiAA-AACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAASATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATС GATAGC GAAAGCAGGGG TGGAGSTCCАТАС CCGTTTAGCAAAC GAGA T С С GAT CGGAAGTA AAJiTCCGCrGGGGSGAAGArCACGAXGrCGGCGArGSAGAAAATGGCGXXAAXGAAAXCAGrAGTXTArGAAGCT TTACGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGA.TCGAATCACACGACGCC GTTTTCCAGCTGAAAAAACCTCAAATCCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7 TTTGAC CGGCC5GAAGAGTTCG7CGCGGATCGG7TCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTGTAAT GGACCGGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGArTTTGTAGTSATGGTTTCGAGG TTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCSTTGGGGGCTTCA ATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.39: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB15
RALTSGFSLPLPOLKQOF?CKYCTFR?:IVSLCEKPTIVVTQPTXLPTRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK DEFFE5RWKYKG TIFRTNXPPGPFI GGKPKVIVLLDGBTGFPVLFDVGKVEKR^CLFTGTYKPG TELTGGYEVLGY LDPGEPHHEKLKKLMFFLLGGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNG GHDQAAFK7LARGLFGVMPV FДKI.GTNGFTTДGI^MЛ,:,QГ.H?VT,TR,GЬPSFT,NNTЛI,HTFRT,FPFTЛ,KKDYQГ^I.YГ> FFYTNGAGT,FAEAFKT.GTГ) KEEACHIJLLFATCFHEFGGMEIFFPHKLKSIAKAGVEVHTRLAHSTRSEVKSAGGKITMSAMEXMPLMKSVVYEA
LRVDPFVAGQYGRAKQDLKIEGIID7kVFEVKKGEMLFSYQPFATKDPKIFDRPSEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKG KGPETESPTVGNKQCASKDFVVMVSRLFVTEFFLRYDTFt-lVDVGKSALGASITITSLKKA
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATT Г T TG GAATC AAGA GT AGTGAAAT АСАААХС AAG TAT AC 1 CAGAAC GAACAT GC С AC CGGG AC CAT 1С AITTCTTCTAACCCGAAGGCTATTGTTTTGCTCGATSGCAAGAGTCTCCCAG TCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT
CITGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCTTCTCGACG7GATCAC G Г T A'I'AC CC AAA 1" 1С CATGAAAC T TAT AC AG AG T ГI III' GAAAC С СIAGATAAGG AAATGGC GGAAAAAG 5 TACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGCAACTCATGCTCCCACATTCA7CGCAAAA7GGCTTTTCCT7CACCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT
TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTAC7LCCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAJIGCTGJIAA.AACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATiCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG
AATATGCTGAAATCGARAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA
A.AATCCGCTGGCGGGAAGARCACGATGRCGGCGARGGAGAA-AATGCCGTTAATGAAATCAGRAGTTT
TTACGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC
GTTTTCCACCTGAAAAAACGTGAAATCCTATTCCCGTACCAACCATTTGCAACCAAGCATCCGAAAATTTTTGAC
CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCC GATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTA TGGTCT
A_ATGGACCGGAAA.CGG.AAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAG":GTGCTAGCAA.AGATTTTGTAGTGATGGTTTCG
AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT
TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.41: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB16
RALTSSFSLPLPCLHQOFPSKYGTFRPIIVSLGEKPTIVVTQFTKLPTRTIPGDYGLPGIGPKKDF.IDYFYNQGK DEFFESRWKYKETIFRTN^PPGPFIGGKPKVIVLLDGKDFPVLFDVSKVEKKDLFTC-TYHPGTELTGGYRVLSY LDPGEPHHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETIJDKEMAEKGTAG LNGGNDQAAF17FLARSLFGVT-3PV FДKT.GTNGPTTДGFД^M,:,QI.H?VT,TT,GI,PSF^ЛDTЛI.HTFRT,PPFI7^KKNYQГ^I.YГ)FFYTNGAGR,FAFARFT.GTГ)
KEEACHMLLFATCFMSFGGXKIFFPHKLKSIAKAGVEVHTRLAHSTRSEVKSAGGKITMSAMEKMPIJMKSVVYEA
LRVDPPVAGQYGRAKQDL:KIEGIIDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKIFDRPEEFVADRFVGESGEKLLKYVLK5 KG PETESPTVGNK QC AG К DFWMVSRLFV ТЕ F F LRYDTFMVDVGKSALGASITIT S L KKA
ATGGCATTAACTTCATCTTITTCTCTICCTCTTCCITCTCTTCACCAACAATTTCCATCArtAATACTCCACrtTTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATXTTXCGAJQCAAGA.GTAGTGAAATAC
ArTTCTTCTAACCCGAAGGTTATTGTTTTGCTCGATGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGAC С ТС T7 СЛСС GGAAC T 7ACATG CCGTCGAC TGAAC T CACC GG TG GT ТЛСС GTGT TG T Г T С T TAT CrTGACCCATCTC-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCTICTTTCTTCTCGACG-GATCAC GTXATACGCAAAXXCCATGAA.ACX1W1\ACAGAGX'TTTTXGAAAGCGTAGATAAGGAAATGGGGGAAJ^AAGGTAC"A
GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATCCTCCCACATTCA7CCCAAAA7CGCTTTTCCT7CACCTTCATCCTCTACTCACT CTCGGTCTTCCGAAGT7TC TAGACGAC 7TAATCCTCCATACTTTCCGGTTACC 7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGTIAAFIACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATXCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT TGAAATС GA T AGC GAAAGCAGGGG TG GAG S T С С АТАС CCGTTTAGCAAAGGAGA TCCGATCGGAAGТА AAATCCGCRGSCGSGAAGARCACGATGTCGGCGATGSAGAAAATSCCSTTAATGAAATCAGRAGTLTARGAACJCT TRACGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGG,AAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTAGCAACCATTTGGAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG 7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTA TGGTCT AATGGACGGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.43: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB17
RALTS3FSLPLPSLKQOF?3KYCTFR?:IVSL^EKPTIVVTQPTKLPTRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK
KEFFESRWKYKS TIFRTNXPPGFFIG GKPEVIVL 1DGESFPVL.F DVGKVEKKCLFTC-TYKPG TELTGGYRVLC Y LDPGEPNHEKLKKLMFFLLGGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNGGHDQAAFtTFLARGLFG^PV FTKI.GGDGPTT^G№m^,QI.H?VITT.CI,PKFT.nDI.TI.HTFRT,PPFI.VKKDYQRI,Y7)FFYTHGAGT,FAEAEKT.GTr. KEEACHHLIFATCFHSFGGXKIFFPM-^LKS IAKJiGVEVHTRLAHE
LRVDPFA''AGQYGRAKQDL?:7EGIIDAVFEVKEGEMLFGYQPFA7KDFEIFDRPEEFVADRFVGE3GEKLLKYVLKG KG РЕ T EG FTVGHKQC AG К QF VVMV S RL FVTEFFLRYDT FHVDV? KSALGAGITITSL EKA
ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTICCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GATTACTTTTACAATCAGGGCAAA AACGAATiriTCGAAl^AAGASTAGTAAAATACAAATCAACIATArXC^^
ATTTCTTC7AACCCGATiGG7TATTGTT7TGCTCGACSGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACITACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CITGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT:CTTTCCTCCCGTCG7GAICAC GTTATACCCAAAXTCCATGAAACTrAIACAGAGITTTTTGAAACCCTAGAIAAGGAAATGGCSGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCITAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATCGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCASAGACT7TACGATT7CTTTrACACCAACTCCGCCAGT7TA7TCGCCGAJs.GCTGAAAJiACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTATCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATSCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGSTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAJ*Xl'C7GCrGGCGGGAAGATCACGAXGrCGGCGATGGAGAAAATGCCGTXAAXGA.AAXCAGTAGXXTA'rGAAGCX TTACGAGTrGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTIAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCCAGCTGAAAAAAGCTGAAATCCTATTCCCGTACCAACCA7TTGCAACCAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGSCCSGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGASAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCT ТСAATТАCTATAACTТСTTTOДАAAAAGCTTAG
Фиг.45: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB18
RALTSSFCLPLPSLKQOF?3KYGTFR?:IVSL5EKPTIVVTQPT: DEFFESRWKYK3TIFRTNXF?GPFISSK?KVIVLLDGE3FFV1S CVSKVEKKDLFTC-TYKPGTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNЈ3GHDQAAF"-r?LARGLFGVSPV ГЛК1.ССПКРТТ-7СИЛ7,:^1.Н?\а.ТГХ:1.Р: <Р1.ПП1Л1.НТГКТ,РРгГЛ'ККПУСН1ТГ> ГРТТНПА5Г.ГАГДЕК1.КТП
EEEACHHLLFATCFHSFGGXKIFFPHKLKSIAXKAGVEVHTRLAHSIRSEVKSAGGKITMSAMEXMPIMKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLKIESIIDAVFEVKEGEMLFSYQPFATKDPEIFDRPSEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKS KGPETESPTVGNKQCAGKDFVVmRSRLFVTEFFLRYDTFWDVGKSALGASITITSLEKA
ATGGCATTAACITCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCAICAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAAT T Г T TC GAATCAAGA GTAGTGAAAX AC AAA'TC AAC T ATA Г T CAG AAC GAAC A T GC С AC CGGG AC С AT TC ATTTCTTCrAACCCGA.AGGrCATTGTTrTGCTCGACGGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACСТСТГСАССGGAACT - ATATGCCGTCGACTGAACT САСС GG 7G GT TACCGTGTТСТ7 TCTTAT CrTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCTTCCCGTCGIGAICAC GI'J'AI'ACCCAAATTCCATGAA.ACXTATACAGAGT'r T'l TTGAAACCCTAGArAAGGAAAIGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCC-GAGGTGATGGTCCGACATTGACCGGAAAACGGCTTTTCCTrCACCГТСATCCTCTCCTCACT СTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCSCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCXTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG
AATATGCTGAAATCGATAGCC-AAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA
AJIJITCCGCCGGCGGGAAGATCACGATGTCGGCTATGGAGAJ1JLATGCCGTTAATGAAATCA
TTGCGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGG.AAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC
GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCATTTGCAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC
CGGCCGGAAGAGTTCGTCGCCGATCGGTTCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT
AATGGACCGGAAACGG.AAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG
AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT
TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG
Фиг.47: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB19
RALT^0FSLPLPSLHQ0F?CKY5TFR?:IVDL6EKPTIVVTQPTKLPIRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQЈK DEFFEGRWKYKS TIFRTNXPPGPFIS GKPF.VIVL 1DGKSFPV1F DVSKVEKKDLFTGTYKPS TELTGGYRVLS Y LDPGEPNHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKCTAGLNSGNDQAAFKFLARGLFG'VIIPV
глкт.атпарть7акъяч,:,01.н?ут.тг,с1,рхгт,п^^
KEEACHHLLFA7CFHSFGG^aFFPI-H-!VK5IAKAGVEVHTRL7vH57RSEVKSAGGKITMSAME: ATGGCATT/ЛСТТСАТСТТТТТСТСТТССТСТТССТТСТСТТСАССААСААТТТССАТСААААТАСТССАСАТТТ CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTATCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATU'XTTCGAA'l'CAAGAG'lA-GlGAAATAGAAAU'CAAC'iATA'rU'CAGAACGAACAXGCCACCGGGACCATTG ATTTCTTCIAACCCGAAGGTTATTGTTXTGCTCGACGGCAAGAGTXTCCCAGTCCTTTICGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTXCACCGGAACTXACATGCCGTCGACTGJdlCTCACCGGXGSTTACCGTGTTCTXTCTTAT CTTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCT7CTTTCCTCCCGTCG7GATCAC GTXAXAtCCAAAX'l^CATGAAACXIATACAGAGXrTXTXGAAACCCXAGAXAAGGAAATGGCSGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTGGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TGCGSTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTXTACGATTXCTTTTACACCAACTCCGCCAGTXTAXTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCT AAAGAAGAAGCXTGTCATAATCTTCTCITCGCTACITGCTTCAATXCCTTCGGCGGGArGAAGATTTTCTTCCCG AATATSGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGSGGTGGAGSTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAAICCGCCGGCGSGAAGArCACGAXGrCGGCGArGSAGAAAATSCCSXXAAXGAAAXCAGrAGXXXArGAAGCX TTACGAGTXGAXCCTCCAGXAGCTTCACAATACGG.AAGAGCCAAACASGACCTXAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTGGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACGAACCA7TTCCAACGAAGGATCCGAAATTTTTTGAC CGGCGGGAAGAGTTGG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAG7GTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTIGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT ТА С TATДАСT TCT TTGAAAAAAGС TTAG
Фог.49: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB20
RALT5SFSLPLPCLHQOF?SKYGTFR?:IVSLCEKPTIVVTQPTKLPIRT:PGDYSLPGIGPKKDF.LDYFYHQGK
DEFFESRWKYKЈTIFRTNy_P?GPFISGK?EVIVLlDDKSFPVl." CVGKVEKKCLFTGTYKPCTELTGGYRVLCY LDPGEPNHEKLKKLMFFLLSSHRDHVIPKFHETYXEFFETLDKEMAEKGTAGLI-KGHDQAAFKXLARSLFG'^PV F.TKI.GTnGPTI,XGiaWI.:.QI.H PVI.TT.G 1.РКГГ.ПШ. TI .HTFRr.PP? I.VKKDYQai.Y3FF YTNr; АЙГТ AFAKKI.G TG KEEACHHLLFATCFHSFGGyjaFFPHKVKSIAKAG
LRVDPPV'AGQYGRAKQDL: ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT
CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTATC AGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATTXriCGAJVXCAJ^GASTAGXGAAjVXACAAAXCAACT
ATTTCTTC7AACCCGAAGG7TATTGTTTTGCTC GACGACAAGAGTrTCCCAG TCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CITGACCCATC7C-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATS7TCTTCCT7CTTTCCTCCCGTCG7GAICAC GXTATACCCAAATTCCATGAA^ClTATACAGAGI'rTTTTGAAACGG'JAGArAAGGAAATGGC GGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGrTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT CAAACTAAACTCGGAACTCATCCTCCCACATTCA7CCCAAAA7CGCTTTTCCT7CACCTTCATCCTCTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC 7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC TC CGTTTC 7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATT7CTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAJIGCTG.AAAJLACTCGGCATTTCT AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACrTGCTTCAATTCCTTCGGCeGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AJ^XCCGCCGGGGGGAAGATCACGAXGrCGGCGATGGAGAAJUiTGGCGTllAATGAJ^TCAGTAGXTTArGAAGCT TTACGAGTTGArCCTCCAGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAATT7 TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTGG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT A.ATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGrGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACIATAACTTCTT7CAAAAAAGCTTAG
35 они еще не упомянуты специально. Растение или растительная клетка может также
35 они еще не упомянуты специально. Растение или растительная клетка может также
35 соответствующем положению 678 последовательности SEQ ГО NO: 2. В некоторых
35 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении
35 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении
35 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении
35 эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении
35 последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 480. В некоторых
35 последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 480. В некоторых
35 положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338,
35 положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338,
35 (2) демонстрирует нормальный или измененный рост и/или каталитическую активность
35 (2) демонстрирует нормальный или измененный рост и/или каталитическую активность
35 растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях)
35 растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях)
35 реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене
35 реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене
35 другой последовательностью.
35 другой последовательностью.
35 нуклеиновой кислоты" означает определение того, является источник нуклеиновой
35 нуклеиновой кислоты" означает определение того, является источник нуклеиновой
35 повреждение растения и атаку патогена.
35 последовательности SEQ ID NO: 5; Т в положении аминокислоты 231 последовательности
35 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный
35 аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 46
35 аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 46
35 SEQ Ш N0: 5; L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ Ш N0: 35; Т в
35 SEQ Ш N0: 5; L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ Ш N0: 35; Т в
35 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах
35 последовательности SEQ ID N0: 27, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации
35 сладкого перца, перца красного стручкового, перца чили, паприки, перца гвоздичного,
102
35 сладкого перца, перца красного стручкового, перца чили, паприки, перца гвоздичного,
102
35 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к
103
35 некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к
103
104
104
35 растений и репродуктивные ткани. Растительные клетки включают, но не ограничиваются
108
107
1/25
Фиг.1: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель A0S2-1 (StA0S2-l) (номер доступа GB ABD15173)
1/25
Фиг.1: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель A0S2-1 (StA0S2-l) (номер доступа GB ABD15173)
2/25
ФиГ.З: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-6 (StAOS2-6) (номер доступа GB ABD15174)
2/25
ФиГ.З: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-6 (StAOS2-6) (номер доступа GB ABD15174)
3/25
Фиг.5: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-7 (StAOS2-7) (номер доступа GB ABD15175)
3/25
Фиг.5: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-7 (StAOS2-7) (номер доступа GB ABD15175)
4/25
Фиг.7: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-8 (StAOS2-8) (номер доступа GB ABD15176)
4/25
Фиг.7: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-8 (StAOS2-8) (номер доступа GB ABD15176)
5/25
Фиг.9: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, аллель AOS2-12 (StAOS2-12) (номер доступа GB ABD15172)
5/25
Фиг.9: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, аллель AOS2-12 (StAOS2-12) (номер доступа GB ABD15172)
6/25
Фиг.11: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CEl
6/25
Фиг.11: Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CEl
7/25
Фиг.14: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB2
7/25
Фиг.14: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB2
8/25
Фиг.16: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB3
8/25
Фиг.16: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB3
9/25
Фиг.18: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB4
9/25
Фиг.18: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB4
10/25
Фиг.20: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB5
10/25
Фиг.20: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB5
11/25
Фи Г.22: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CB6
11/25
Фи Г.22: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CB6
12/25
Фиг.24: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB7
12/25
Фиг.24: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB7
13/25
Ф ПГ.26: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB8
13/25
Ф ПГ.26: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB8
14/25
Фиг.28: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum., StAOS2_CB9
14/25
Фиг.28: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum., StAOS2_CB9
15/25
Фиг.30: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB10
15/25
Фиг.30: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB10
16/25
Фиг.32: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, StA0S2_CBll
16/25
Фиг.32: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, StA0S2_CBll
17/25
Фиг.34: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB12
17/25
Фиг.34: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB12
18/25
18/25
19/25
Фиг.38: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB14
19/25
Фиг.38: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB14
20/25
Ф ПГ.40: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB15
20/25
Ф ПГ.40: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB15
21/25
Фиг.42: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CB16
21/25
Фиг.42: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StA0S2_CB16
22/25
Фнг.44: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB17
22/25
Фнг.44: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solatium tuberosum, StAOS2_CB17
23/25
Фиг.46: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB18
23/25
Фиг.46: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB18
24/25
Фиг.48: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB19
24/25
Фиг.48: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB19
25/25
Фнг.50: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, StAOS2_CB2Q
25/25
Фнг.50: Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (A0S2) Solarium tuberosum, StAOS2_CB2Q
