|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Настоящее изобретение относится к новым модуляторам связанного с ретиноидом сиротского рецептора гамма (ROR γ), способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим эти модуляторы, и к их применению для лечения воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых ROR γ.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к новым модуляторам связанного с ретиноидом сиротского рецептора гамма (ROR γ), способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим эти модуляторы, и к их применению для лечения воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых ROR γ.
2420-519508ЕА/011
НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ Настоящее изобретение относится к новым модуляторам связанного с ретиноидом сиротского рецептора гамма (RORy) , способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим эти модуляторы, и к их применению при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых RORy.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Связанные с ретиноидом сиротские рецепторы (ROR) являются факторами транскрипции, которые образуют подгруппу надсемейства ядерных рецепторов {Adv. Dev. Biol. 2006, 16, 313-355). Эта подгруппа содержит трех представителей: ROR альфа (RORa), ROR бета (ROR(3) и ROR гамма (RORy) . RORa и ROR(3 характеризуются составляющей примерно 55% гомологией в связывающих лиганд доменах по сравнению с RORy. ROR включают 4 главных домена, содержащихся в большинстве ядерных рецепторов: N-концевой домен А/В, связывающий ДНК домен, шарнирный домен и связывающий лиганд домен.
Гены RORa, ROR(3 и RORy картировали на хромосомах человека 15q22.2, 9q21.13 и lq21.3 соответственно. Каждый ген ROR образует различные изоформы, которые различаются только по их N-концевому домену А/В. К настоящему времени обнаружены 5 сплайсинговых вариантов для RORy и идентифицированы 2 изоформы этого представителя семейства ROR: RORyl и RORy2 (также известный под обозначением RORyt) . RORy является термином, использующимся для описания RORyl и/или RORyt.
В то время как RORyl экспрессируется в различных тканях, включая вилочковую железу, мышцы, почки и печень, RORyt экспрессируется только в клетках иммунной системы и играет критически важную роль в тимопоэзе, развитии различных вторичных лимфоидных тканей и спецификации дифференцировки
клеток Thl7.
RORyt идентифицировали, как ключевой регулятор дифференцировки клеток Thl7 (A. Jetten, Nuclear Receptor Signalling 2009, 7, 1-32) . Клетки Thl7 представляют собой недавно открытую подгруппу Т хелперных клеток, которые предпочтительно продуцируют цитокины IL-17A, IL-17F, IL-21 и
IL-22. RORyt также индуцирует транскрипцию гена, кодирующего IL-17A и IL-17F в интактных CD4+ Т хелперных клетках, iNKT и NKT {Mucosal Immunol. 2009, 2(5), 383-392; J. Immunol. 2008, 180, 5167-5171), убТ клетках {Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2010, 182, 464-476), CD8+ T клетках (J. leucocyte Biol. 2007, 82, 354-360) и в заключение в CD4~CD8~TCRa|3+ Т клетках (J. Immunol. 2008, 181, 8761-8766). Дополнительные иммунные клетки, такие как эозинофилы, нейтрофилы и макрофаги, также могут являться источниками IL-17A при аллергическом воспалении, связанном с астмой (J. Allergy Clin. Immunol. 2001, 108, 43 0438; J. Immunol. 2008, 181, 6117-6124; Immunity 2004, 21, 467476) .
Показано, что Thl7 клетки и их продукты связаны с патологией целого ряда воспалительных и аутоиммунных нарушений человека. IL-17A и IL-17F участвуют в многочисленных иммунных и воспалительных ответах, преимущественно как провоспалительные регуляторы, индуцирующие экспрессию цитокинов, хемокинов, адгезионных молекул, генов муцина и факторов роста. Поступает все больше данных о том, что увеличение содержания IL-17A тесно связано с целым рядом хронических воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит {Curr. Opin. Investig. Drugs 2009, 10, 452-462), рассеянный склероз {Allergol. Int. 2008, 57(2), 115-120), воспалительные болезни кишечника (J. Inflamm. Res. 2010, 3, 33-44), увеит, псориаз {Sci. Transl. Med. 2010, 2(52)) и заболевания легких {Prog. Respir. Res. Basel 2010, 39, 141-149; Resp. Research 2010, 11 (78), 1-11).
Имеется значительное количество данных о том, что Thl7 клетки/1Ъ-17 играют ключевую роль в патогенезе астмы. Показано, что у страдающих астмой пациентов степени экспрессии и RORyt, и
IL-17A увеличены в мокроте {Chin. Med. J. 2005, 118, 953-956; Resp. Res. 2006, 7(135), 1-9), легких (J. Allergy Clin. Immunol. 2003, 111(6), 1293-1298), бронхоальвеолярном лаваже (BAL) и периферической крови {Immunol. Invest. 2009, 38, 652664; Int. Arch. Allergy Immunol. 2005, 137(suppl. 1), 51-54) и их содержание прямо коррелирует с тяжестью заболевания {Int. Arch. Allergy Immunol. 2010, 151, 297-307). В дополнение к IL-17А недавние исследования показали, что другой цитокин семейства IL-17, IL-17F, может играть критически важную роль в аллергическом воспалении дыхательных путей и поэтому может играть критически важную роль в заболеваниях дыхательных путей, таких как астма. Сверхэкспрессирование гена IL-17F в дыхательных путях мышей было связано с нейтрофилией дыхательных путей, индукцией цитокинов, усилением гиперреактивности дыхательных путей и гиперсекрецией слизи {Inflamm. Allergy Drug Targets 2009, 8, 383-389). Данные о роли Thl7 клеток в аллергенах обсуждены в публикации Int. Immunopharmacol. 2 010, 10, 226-229.
Патогенез хронических аутоиммунных заболеваний, включая рассеянный склероз и ревматоидный артрит, обусловлен нарушением переносимости собственных антигенов и развитием аутоагрессивных эффекторных Т клеток, инфильтрующихся в ткани-мишени. Исследования показали, что ТЫ7 клетки являются одной из важных движущих сил воспалительного процесса при тканеспецифичной аутоиммунной реакции (J. Exp. Med. 2008, 205, 1517-1522; Cell. Mol. Immunol. 2010, 7, 182-189). Также имеются данные о том, что Thl7 клетки активируются при развитии заболевания и ответственны за рекрутинг воспалительных клеток других типов, в особенности нейтрофилов, для опосредования патологии в тканях-мишенях {Аппи. Rev. Immunol. 2009, 27, 485-517). RORyt играет критически важную роль в патогенетических ответах Thl7 клеток {Cell 2006, 126, 1121-1133). У мышей с дефицитом RORyt обнаруживается очень мало Thl7 клеток. Дополнительные данные, свидетельствующие о роли RORyt в патогенезе аутоиммунных или воспалительных заболеваний, приведены в следующих публикациях:
Immunity 2007, 26, 643-654; Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 205217; J. Immunol. 2009, 183, 7169-7177; Brain Pathol. 2004, 14, 164-174; Brain 2007, 130, 1089-1104; Nat. Rev. Immunol. 2008, 8, 183-192.
С учетом роли, которую RORy играет в патогенезе
заболеваний, желательно получение соединения, которые
модулируют активность RORy и поэтому применимы при лечении
воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний,
опосредуемых RORy, таких как респираторные заболевания астма,
хроническое обструктивное заболевание легких (COPD) и бронхит,
аллергические заболевания, включая аллергический ринит и
атопический дерматит, муковисцидоз и отторжение
аллотрансплантата легких.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым модуляторам связанного с ретиноидом сиротского рецептора гамма (RORy) , способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим эти модуляторы, и к их применению при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний,
опосредуемых RORy. Точнее, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и к их фармацевтически приемлемым солям:
*7 (I)
где
Ri, R2 и R5 все независимо выбраны из группы, включающей Н, Ci-залкил, Ci-залкоксигруппу, CF3 и галоген;
R3 и R4 все независимо выбраны из группы, включающей Н, СН3, ОСН3, CF3 и галоген;
R6 означает С3-5алкил или -СН2С3-4циклоалкил;
каждый Rs независимо выбран из группы, включающей галоген, CV 6алкил, Ci-балкоксигруппу, Сз-бДиклоалкил, CN, ОН, С (О) ОН, С (О) OCi-залкил и СН2ОН;
R9 означает группу - (CHRio) s- (X) t- (CHRio) U-Rn;
каждый Rio независимо выбран из группы, включающей Н, СНз, ОН и СН2ОН;
X означает СН2, NH или О;
Rn означает гетероциклоалкильную или Сз-бЦиклоалкильную группу, которая может быть незамещенной или содержать один или большее количество заместителей, независимо выбранных из группы, включающей СН3, ОМе, ОН, СН2ОН и галоген;
г равно 0, 1 или 2;
s равно 0, 1 или 2;
t равно 0 или 1;
и равно 0, 1 или 2;
при условии, что не более двух групп R10 означают СН3, ОН или СН2ОН.
Одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая а) соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и Ь) один или большее количество фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются модуляторами RORy и могут быть применимы при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых RORy, таких как астма, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD) и бронхит,
аллергические заболевания, включая аллергический ринит и
атопический дерматит, муковисцидоз, отторжение
аллотрансплантата легких, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, анкилозирующий спондилит, системная красная волчанка, псориаз, болезнь Хашимото, панкреатит, аутоиммунный диабет, аутоиммунное заболевание глаз, язвенный колит, болезнь Крона, воспалительная болезнь кишечника (IBS), воспалительный синдром кишечника (IBD), синдром Шегрена, неврит зрительного нерва, диабет типа I, нейромиелит зрительного нерва, злокачественная миастения, увеит, синдром Гийена-Барре, псориатический артрит, болезнь Грейвса и склерит.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении астмы или хронического обструктивного заболевания легких.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении псориаза.
Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения хронического обструктивного заболевания легких или астмы, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения псориаза, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Другим объектом настоящего изобретения является применение
соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения в лечении воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Первым объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:
(I)
где
Ri, R2 и R5 все независимо выбраны из группы, включающей Н, Ci-залкил, Ci-залкоксигруппу, CF3 и галоген;
R3 и R4 все независимо выбраны из группы, включающей Н, СН3, ОСН3, CF3 и галоген;
R6 означает Сз-ьалкил или -СН2Сз-4Циклоалкил;
R7 выбран из группы, включающей:
каждый R8 независимо выбран из группы, включающей галоген, Ci_ 6алкил, С1-6алкоксигруппу, С3-6Циклоалкил, CN, ОН, С (О) ОН, С (О) OCi-залкил и СН2ОН;
R9 означает группу - (CHRio) s- (X) t- (CHRio) U-Rii;
каждый Rio независимо выбран из группы, включающей Н, СН3, ОН и СН2ОН;
X означает СН2, NH или О;
Rn означает гетероциклоалкильную или Сз-бДиклоалкильную группу, которая может быть незамещенной или содержать один или
большее количество заместителей, независимо выбранных из группы, включающей СН3, ОМе, ОН, СН2ОН и галоген;
г равно 0, 1 или 2;
s равно 0, 1 или 2;
t равно 0 или 1;
и равно 0, 1 или 2;
при условии, что не более двух групп R10 означают СН3, ОН или СН2ОН.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:
(I)
где
Ri; R2 и R5 все независимо выбраны из группы, включающей Н, Ci-залкил, Ci-залкоксигруппу, CF3 и галоген;
R3 и R4 все независимо выбраны из группы, включающей Н, СН3, ОСН3, CF3 и галоген;
R6 означает С3-5алкил или -СН2С3-4циклоалкил;
R7 выбран из группы, включающей:
каждый R8 независимо выбран из группы, включающей галоген, CV 6алкил, С1-6алкоксигруппу, С3-6Циклоалкил, CN, ОН, С (О) ОН, С (О) OCi-эалкил и СН2ОН;
R9 означает группу - (CHRio) s- (X) t- (CHRio) U-Rn;
каждый Rio независимо выбран из группы, включающей Н, СН3, ОН и СН2ОН;
X означает СН2, NH или О;
Rn означает гетероциклоалкильную или Сз-бДиклоалкильную группу, которая может быть незамещенной или содержать один или большее количество заместителей, независимо выбранных из группы, включающей СН3, ОМе, ОН, СН2ОН и галоген;
г равно 0, 1 или 2;
s равно 0, 1 или 2;
t равно 0 или 1;
и равно 0, 1 или 2;
при условии, что не более двух групп R10 означают СН3, ОН или СН2ОН, и при дополнительном условии, что Ri, R2, R3, R4 и R5 не все означают Н.
Другим объектом настоящего изобретения являются подгруппы соединений формулы (I), формулы (Ia-Ig) или их фармацевтически приемлемая соль:
н R3
"7 (Ig).
Другим объектом настоящего изобретения являются подгруппы
соединений формулы (I), формулы (1а-1с) или их фармацевтически
приемлемая соль:
Другим объектом настоящего изобретения является подгруппа
соединений формулы
формулы (1а) или их фармацевтически
приемлемая соль
Другим объектом настоящего изобретения является подгруппа соединений формулы (I), формулы (1а), приведенных выше, или их фармацевтически приемлемая соль, где R5 означает Ci-залкил.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (1а) или его фармацевтически приемлемая соль:
(1а)
где Ri выбран из группы, включающей Н, Ci-залкил, Ci-залкоксигруппу, CF3 и галоген;
R2, R3 и R4 означают Н;
R5 означает Ci-залкил;
R6 означает Сз-ьалкил или -СН2Сз-4Циклоалкил; R7 выбран из группы, включающей:
каждый R8 независимо выбран из группы, включающей галоген, CV 6алкил, Ci-балкоксигруппу, Сз-бЦиклоалкил, CN, ОН, С (О) ОН, С (О) OCi-залкил и СН2ОН;
R9 означает группу - (CHRio) s- (X) t- (CHRio) U-Rii;
каждый Rio независимо выбран из группы, включающей Н, СН3, ОН и СН2ОН;
X означает СН2, NH или О;
Rn означает гетероциклоалкильную или Сз-бЦиклоалкильную группу, которая может быть незамещенной или содержать один или большее количество заместителей, независимо выбранных из группы, включающей СНз, ОМе, ОН, СН2ОН и галоген;
г равно 0, 1 или 2;
s равно 0, 1 или 2;
t равно 0 или 1;
и равно 0, 1 или 2;
при условии, что не более двух групп R10 означают СН3, ОН
или СН2ОН.
Другим объектом настоящего изобретения является подгруппа соединений формулы (I), формулы (1а), приведенных выше, или их фармацевтически приемлемая соль, где Ri означает Н.
Другим объектом настоящего изобретения является подгруппа соединений формулы (I), формулы (1а), приведенных выше, или их фармацевтически приемлемая соль, где Ri и R5 все независимо означают СН3 или галоген.
Другим объектом настоящего изобретения является подгруппа соединений формулы (I), формулы (1а), приведенных выше, или их фармацевтически приемлемая соль, где Ri и R5 означают СН3.
В другом объекте настоящего изобретения R6 выбран из группы, включающей пропил, изобутил и -СН2-циклопропил.
В другом объекте настоящего изобретения R6 означает изобутил.
В другом объекте настоящего изобретения R7 означает:
- В другом объекте настоящего изобретения R7 означает
В другом объекте настоящего изобретения г равно 1.
В другом объекте настоящего изобретения г равно 2.
В другом объекте настоящего изобретения каждый R8 независимо выбран из группы, включающей СН3, ОСН3, СН2ОН, циклопропил, фтор и хлор.
другом
объекте
настоящего
изобретения
означает
другом
объекте
настоящего
изобретения
равно
другом
объекте
настоящего
изобретения
равно
другом
объекте
настоящего
изобретения
равно
другом
объекте
настоящего
изобретения
равно
2 .
В другом объекте настоящего изобретения и равно 1. В другом объекте настоящего изобретения и равно 0. В другом объекте настоящего изобретения t равно 1, и X означает О.
В другом объекте настоящего изобретения t равно 0.
В другом объекте настоящего изобретения каждый R10 означает
В другом объекте настоящего изобретения s равно 0, t равно 1, X означает О, и равно 1, где Ri0 означает Н.
В другом объекте настоящего изобретения s равно 1, где Rio означает ОН, t равно 0 и и равно 1, где Rio означает Н.
В другом объекте настоящего изобретения Rn означает гетероциклоалкильную группу, выбранную из группы, включающей оксиран, оксетан, тетрагидрофуран, тетрагидро-2Я-пиран, пирролидин, пиперидин, морфолин, морфолин-3-он и тиоморфолин-1,1-диоксид.
В другом объекте настоящего изобретения Rn означает гетероциклоалкил, выбранный из группы, включающей тетрагидро-2Я-пиран и морфолин.
В другом объекте настоящего изобретения Rn означает циклогексан.
В другом объекте настоящего изобретения Rn является незамещенным.
Следует понимать, что в объем настоящего изобретения входят все комбинации замещающих групп, указанных выше в настоящем изобретении.
Конкретными примерами соединений формулы (I) являются:
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-[(оксан-4-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[2-(морфолин-4-ил)этокси]бензол-1-сульфонамид;
2-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-5-(оксан-4-илметокси)бензойная кислота;
N-(2,4-диметилфенил)-2-метокси-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-(гидроксиметил)-N-(2-метилпропил)
4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(океан-4-илметил)амино]метил}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пиперидин-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(1-метилпирролидин-3-ил)метокси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(5-оксоморфолин-2-ил)метокси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(З-метил-5-оксоморфолин-З-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{ [1- (2,2,2-трифторэтил)пиперидин-4-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-((цис-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)метокси)-N-изобутилбензолсульфонамид;
4-[(3,5-дигидроксициклогексил)окси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-(((lS,3R,5S)-3,5-дигидроксициклогексил)окси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
4-[2-(3,5-диметилморфолин-4-ил)этокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(океан-4-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(оксетан-3-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
З-циклопропил-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-метил-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-метил-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-гидрокси-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
2- хлор-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-фтор-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-фтор-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-метокси-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксолан-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-4-ил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-этокси-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(((2R,3R)-2-метилморфолин-3-ил)метокси)бензолсульфонамид;
3- циано-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
2-циано-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4- (циклогексилметокси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-
4-[(2,б-диметилциклогексил)метокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(3-гидроксициклогексил)окси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-{ [ (2S)-4,4-дифторпирролидин-2-ил]метокси}-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(6-оксопиперидин-3-ил)окси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-(1,4-диоксан-2-илметокси)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(4-метилциклогексил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[1-(морфолин-4-ил)пропан-2-ил]окси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-2-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-2-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
4-[(б,б-диметилморфолин-3-ил)метокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-[2-(морфолин-4-ил)этокси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[(2R,3S)-З-гидроксиоксан-2-ил]метокси}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(4-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(2,б-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(2R,3S,4R,5S)
3,4,5-тригидроксиоксан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-метилпиперидин-4-ил)окси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]метил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[2-(2,б-диметилморфолин-4-ил)этокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2,З-дифтор-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[1-(2-метоксиэтил)пирролидин-3-ил]метокси}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-этилпирролидин-З-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-метилпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пирролидин-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пиперидин-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-(пиперидин-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
4-(азетидин-3-илметокси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(б-оксопиперидин-3-ил)окси]метил}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)-2-(пропан-2-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(пиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-(2-(1,1-диоксидотиоморфолино)-1-гидроксиэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(З-фторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[2
(гидроксиметил)морфолин-4-ил]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(4-фторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(пиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[3-(гидроксиметил)морфолин-4-ил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(3S,4R)-3,4,5-тригидроксиоксолан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(3R,4S,5S)-3,4,5-тригидроксиоксолан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-4-[2-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-{2-окса-б-азаспиро[3,3]гептан-б-ил}этил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[транс-(3-гидроксициклобутил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-фтор-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-
2- MeTrai-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-
3- метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-
3- метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
5-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-2-(оксан-
4- илметокси)бензойная кислота;
2-6poM-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
2- циклопропил-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксан-4-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(4-метоксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
3- циано-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(5-оксопирролидин-2-ил)бензол-1-сульфонамид,•
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(гидроксиметил)морфолин-4-ил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(5-хлор-2-фторфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3-фтор-4-{1-гидрокси-2-[(3-метилоксетан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-2-метил-Ы-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-З-метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N- (2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
метил-5-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-2
(оксан-4-илметокси)бензоат;
N-(2,4-диметилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N- (4-этилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[ (З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(4-этилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2-этилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,2-дигидрокси-З-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,2-дигидрокси-З-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксетан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,З-дигидрокси-2-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,З-дигидрокси-2-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N-(4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид;
(S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид; и
(R)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, которое выбрано из группы, включающей:
N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N- (4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид;
(S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид; и
(R)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение
или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет
собой (S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-
(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение
или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет
собой N-(4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-Ы-изобутил-4-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид.
При использовании в настоящем изобретении термин "алкил" означает насыщенную углеводородную цепь, содержащую указанное количество атомов углерода. Например, Ci-балкил означает алкильную группу, содержащую от 1 до б атомов. Если не указано иное, алкильные группы являются незамещенными. Алкильные группы могут обладать линейной или разветвленной цепью. Термин "алкил" включает, но не ограничивается только ими, метил, этил, пропил (н-пропил и изопропил), бутил (н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил), пентил и гексил.
При использовании в настоящем изобретении термин "алкоксигруппа" означает -О-алкильную группу, где "алкил" определен выше.
При использовании в настоящем изобретении термин "гетероциклоалкил" означает насыщенное или ненасыщенное 3-7-членное моноциклическое кольцо, которое должно содержать 1, 2 или 3 атомов, не являющихся атомами углерода, которые выбраны из группы, включающей азот, кислород и серу. Гетероциклоалкильные группы могут содержать одну или большее количество групп С(О), S (О) или SO2. Бициклические гетероциклоалкильные группы включают спиросочлененные
соединения, в которых кольца соединены с помощью только одного атома. Однако гетероциклоалкильные группы не являются ароматическими. Гетероциклоалкильные группы, содержащие более одного гетероатома, могут содержать разные гетероатомы. Гетероциклоалкил включает, но не ограничивается только ими, пирролидин, пиперидин, оксетан, тетрагидрофуран, тетрагидро-2Н-пиран, морфолин, морфолин-3-он, пиперидин-2-он, пиримидин-2,4(1Н,ЗН)-дион, тиоморфолин, тиоморфолин-1,1-диоксид.
При использовании в настоящем изобретении термин "циклоалкил" означает насыщенное углеводородное кольцо, содержащее указанное количество атомов углерода. Циклоалкильные группы являются моноциклическими кольцевыми системами. Например, Сз-бЦиклоалкил означает циклоалкильную группу, содержащую от 3 до б атомов углерода. Циклоалкил включает циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
При использовании в настоящем изобретении термин "галоген" означает галогенидные радикалы фтора, хлора, брома и иода.
При использовании в настоящем изобретении термин "RORy" означает все изоформы этого представителя семейства ROR, включая RORyl и RORyt.
При использовании в настоящем изобретении термин "модулятор RORy" означает химическое соединение формулы (I) которое ингибирует, прямо или косвенно, активность RORy. Модуляторы RORy включают антагонистов и обратных агонистов RORy.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут содержать один или большее количество асимметрических центров (также называющихся хиральными центрами) и поэтому существуют в виде отдельных энантиомеров, диастереоизомеров или других стереоизомерных форм, или в виде их смесей. Хиральные центры, такие как хиральные атомы углерода, также могут находиться в заместителе, таком как алкильная группа. Если стереохимическая конфигурация хирального центра, содержащегося в соединении формулы (I) или в любой химической структуре, приведенной в настоящем изобретении, не задана, то предполагается, что структура включает все отдельные
стереоизомеры и все их смеси. Таким образом, соединения формулы
(1) и их фармацевтически приемлемые соли, содержащие один или большее количество хиральных центров, можно использовать в виде рацемических смесей, энантиомерно обогащенных смесей, или в виде энантиомерно чистых отдельных стереоизомеров.
Отдельные стереоизомеры соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые содержат один или большее количество асимметрических центров, можно выделить по методикам, известным специалистам в данной области техники. Например, такое выделение можно провести (1) путем образования диастереоизомерных солей, комплексов или других производных;
(2) с помощью селективных реакций со специфическим по отношению к стереоизомеру реагентом, например, путем ферментативного окисления или восстановления; или (3) с помощью газо-жидкостной или жидкостной хроматографии в хиральной среде, например, на хиральной подложке, такой как диоксид кремния со связанным с ним хиральным лигандом, или в присутствии хирального растворителя. Специалист в данной области техники должен понимать, что при превращении необходимого стереоизомера в другое химическое соединение по одной из описанных выше методик разделения необходима дополнительная стадия для выделения необходимой формы. Альтернативно, конкретные стереоизомеры можно синтезировать путем асимметрического синтеза с использованием оптически активных реагентов, подложек, катализаторов или растворителей или путем превращения одного энантиомера в другой посредством асимметрического превращения.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) могут содержать кислотную функциональную группу. В некоторых других вариантах осуществления соединения формулы (I) могут содержать основную функциональную группу. Поэтому специалист в данной области техники должен понимать, что можно получить фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I). В действительности в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) могут быть предпочтительнее, чем соответствующее свободное основание или свободная кислота, поскольку такие соли могут
обладать большей стабильностью или лучшей растворимостью, что облегчает их включение в дозированную форму.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I)
могут содержать основную функциональную группу и поэтому при
обработке подходящей кислотой они могут образовать
фармацевтически приемлемые соли присоединения с кислотами.
Подходящие кислоты включают фармацевтически приемлемые
неорганические кислоты и фармацевтически приемлемые
органические кислоты. Фармацевтически приемлемые соли
присоединения с кислотами включают гидрохлорид, гидробромид,
нитрат, метилнитрат, сульфат, бисульфат, сульфамат, фосфат,
ацетат, гидроксиацетат, фенилацетат, пропионат, бутират,
изобутират, валерат, малеат, гидроксималеат, акрилат, фумарат,
малат, тартрат, цитрат, салицилат, п-аминосалицилат, гликолят,
лактат, гептаноат, фталат, оксалат, сукцинат, бензоат, о-
ацетоксибензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат,
гидроксибензоат, метоксибензоат, нафтоат, гидроксинафтоат,
манделат, таннат, формиат, стеарат, аскорбат, пальмитат, олеат,
пируват, памоат, малонат, лаурат, глутарат, глутамат, эстолат,
метансульфонат (мезилат), этансульфонат (эзилат), 2-
гидроксиэтансульфонат, бензолсульфонат (безилат), п-
аминобензолсульфонат, п-толуолсульфонат (тозилат) и нафталин-2-сульфонат.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) могут содержать кислотную функциональную группу. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные с этими кислотными функциональными группами. Типичные соли включают фармацевтически приемлемые соли металлов, такие как соли натрия, калия, лития, кальция, магния, алюминия и цинка; карбонаты и бикарбонаты фармацевтически приемлемого катиона металла, такого как натрий, калий, литий, кальций, магний, алюминий и цинк; фармацевтически приемлемые соли с органическими первичными, вторичными и третичными аминами, включая алифатические амины, ароматические амины, алифатические диамины и гидроксиалкиламины, такие как метиламин, этиламин, 2-гидроксиэтиламин, диэтиламин, ТЭА (триэтиламин), этилендиамин,
этаноламин, диэтаноламин и циклогексиламин.
Обзор подходящих фармацевтических солей приведен в публикациях Berge et al, J. Pharm, Sci., 66, 1-19, 1977; P L Gould, International Journal of Pharmaceutics, 33 (1986), 201217; и Bighley et al, Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology, Marcel Dekker Inc, New York 1996, Volume 13, page 453-497. Другие соли, которые не считаются фармацевтически приемлемыми, могут быть применимы для получения соединений формулы (I) и входят в объем настоящего изобретения, такие как соли аммония и трифторуксусной кислоты. В объем настоящего изобретения входят все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединений формулы (I).
При использовании в настоящем изобретении термин "фармацевтически приемлемые соли" означает соли, которые сохраняют желательную биологическую активность рассматриваемого соединения и оказывают минимальные нежелательные токсические воздействия. Эти фармацевтически приемлемые соли можно получить in situ при конечном выделении и очистке соединения или путем отдельного проведения реакции очищенного соединения в форме свободной кислоты или в форме свободного основания с подходящим основанием или кислотой соответственно.
Настоящее изобретение также включает все подходящие изотопнозамещенные варианты соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Изотопнозамещенный вариант соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли определяется, как такой, в котором по меньшей мере один атом заменен атомом, обладающим таким же атомным номером, но атомной массой, отличающейся от атомной массы, обычно встречающейся в природе. Примеры изотопов, которые можно включить в соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора и хлора, такие как 2Н, 3Н, 13С, 14С, 15N, 110, 180, 18F и 36С1 соответственно. Некоторые изотопнозамещенные варианты соединения формулы (I) или его соли или сольвата, например, такие, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как 3Н или 14С, применимы в исследованиях распределения лекарственного средства и/или
субстрата в тканях. Изотопы тритий, т.е. 3Н, и углерод-14, т.е.
14С, являются особенно предпочтительными, поскольку их легко
получить и обнаружить. Кроме того, замещение такими изотопами,
как дейтерий, т.е. 2Н, может привести к некоторым
терапевтическим преимуществам, обусловленным большей
метаболической стабильностью, например, увеличенным периодом полувыведения in vivo или возможностью использования меньших доз, и, следовательно, при некоторых обстоятельствах может быть предпочтительным. Изотопнозамещенные варианты соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли обычно можно получить по стандартным методикам, таким как иллюстративные методики или методики синтеза, описанные в приведенных ниже примерах, с использованием подходящих изотопнозамещенных вариантов подходящих реагентов.
Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль могут находиться в аморфной или кристаллической форме. Кроме того, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль может находиться в одной или большем количестве кристаллических форм. Поэтому в объем настоящего изобретения всходят все формы соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Специалист в данной области техники должен понимать, что многие органические соединения могут образовывать комплексы с растворителями, в которых они взаимодействуют или из которых их осаждают или кристаллизуют. Эти комплексы известны под названием "сольваты". Если растворителем является вода, то комплекс известен под названием "гидрат". В объем настоящего изобретения входят все сольваты соединений формулы (I).
Кроме того, в объем настоящего изобретения также включены
пролекарства. При использовании в настоящем изобретении термин
"пролекарство" означает соединение, которое в организме,
например, путем гидролиза в крови, превращается в его активную
форму, которая оказывает медицинское воздействие.
Фармацевтически приемлемые пролекарства описаны в публикациях Т. Higuchi and V. Stella, Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, Edward B. Roche, ed.,
Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, и D. Fleisher, S. Ramon and H. Barbra "Improved oral drug delivery: solubility limitations overcome by the use of prodrugs", Advanced Drug Delivery Reviews (1996) 19(2) 115-130, каждая из которых включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.
Пролекарствами являются любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают соединение формулы (I) in vivo, когда такое пролекарство вводят пациенту. Пролекарства обычно получают путем модификации функциональных групп, такой, что эти модифицированные группы отщепляются с помощью стандартных процедур или in vivo и образуется исходное соединение. Пролекарства включают, например, соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в которых гидроксигруппа, аминогруппа или сульфгидрильная группа связана с любой группой, которая при введении пациенту отщепляется с образованием гидроксигруппы, аминогруппы или сульфгидрильной группы. Таким образом, типичные пролекарств включают (но не ограничиваются только ими) ацетаты, формиаты и бензоаты гидроксигрупп, сульфгидрильных и аминогрупп соединений формулы (I). Кроме того, в случае карбоновой кислоты (-СООН) можно использовать эфиры, такие как метиловые эфиры, этиловые эфиры и т.п. Эфиры могут быть активными сами по себе и/или могут гидролизоваться в условиях in vivo в организме человека. Подходящие фармацевтически приемлемые in vivo гидролизующиеся сложноэфирные группы включают такие, которые легко расщепляются в организме человека с образованием исходной кислоты или ее соли.
Экспериментальный раздел
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить по методикам, известным в области органического синтеза, которые частично приведены на представленных ниже схемах синтеза. На представленных ниже схемах реакции и далее, если не указано иное, все группы определены в первом объекте. Также следует понимать, что на всех представленных ниже схемах в соответствии с общими принципами органического синтеза для чувствительных или реакционноспособных групп используются
защитные группы (T.W. Greene and P.G.M. Wuts (1991) Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons). Эти группы удаляют на подходящей стадии синтеза по методикам, известным специалистам в данной области техники. Выбор методик, а также условий проведения реакций и порядка их проведения должен быть согласован с получением соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.
Общие схемы реакций
Схема 1а и lb
Соединения формулы (А) а и (A) b можно получить из сульфонилхлоридов формулы (С)а и (С)Ь соответственно по реакции с анилином формулы (В) в соответствии со схемой 1а и lb. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание сульфонилхлорида формулы (С) а или (С)Ь с подходящим анилином (В) в основном растворителе, таком как пиридин, в течение подходящего времени, такого как 16 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
и = 1,2
Соединения формулы (А) с и (A) d можно получить из промежуточных соединений формулы (D) а и (D)b соответственно путем сочетания с соответствующим замещенным спиртом в соответствии со схемой 2а и 2Ь. Типичные условия сочетания включают реакцию Мицунобу и включают перемешивание спирта с промежуточным соединением формулы (D) а или (D)b и трифенилфосфином в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран. Затем смесь обрабатывают подходящим реагентом сочетания, таким как диизопропилазодикарбоксилат, и реакционную смесь перемешивают в течение подходящего времени, такого как 16 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
Соединения формулы (A) e и (A) f можно получить из
промежуточных соединений формулы (D)с и (D)d соответственно по
реакции с подходящим замещенным алкиловым или
гетероциклоалкиловым спиртом или амином в соответствии со схемой За и ЗЬ. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание спирта или амина с промежуточным соединением формулы (D) с или (D)d, с сильным основанием, таким как гидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как 2-метилтетрагидрофуран, в атмосфере азота при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды, в течение подходящего времени, такого как 3 ч.
Соединения формулы (A) g и (A) h можно получить из промежуточных соединений формулы (D)е и (D) f соответственно по реакции с подходящим алкилирующим реагентом в соответствии со схемой 4а и 4Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание промежуточного соединения формулы (D)е или (D)f с сильным основанием, таким как гидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как диметилсульфоксид, в течение подходящего времени, такого как 5 мин, в атмосфере азота. Затем смесь обрабатывают алкилирующим реагентом и перемешивают при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды, в течение подходящего времени, такого как 18 ч.
R12 = -галоген, -(CHR10)S-галоген, -винил,-ОМе/-ОВп, -C02Me/-C02Et, -CN, -NHAc R= R6 или H
Ключевые промежуточные соединения формулы (D), где R12 означает функциональную группу, подходящую для последующего превращения в Rg; можно получить из сульфонилхлоридов формулы (Е)а и (Е)Ь по реакции с анилином формулы (В) в соответствии со схемой 5а и 5Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание сульфонилхлорида формулы (Е)а или (Е)Ь с подходящим анилином (В) в основном растворителе, таком как пиридин, в течение подходящего времени, такого как 16 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
R12 может включать функциональную группу (которую можно защитить/замаскировать), которая инертна по отношению к реакции при указанных выше условиях и которую затем можно превратить в Rg на последующей стадии (стадиях). Подходящие примеры Ri2 могут включать -галоген, -(CHRio) s-галоген, -винил, -ОМе/-ОВп, C02Me/-C02Et, -CN, -NHAc (из последних четырех из которых
позднее можно удалить защитные группы или превратить их в -ОН, -СН2ОН, -CH2NH2 и -NH2 соответственно по методикам, известным специалистам в области органического синтеза).
Схема ба и 6Ь
Y = подходящая отщепляющаяся группа, например, Br, I, CI, OTs
R12 = -галоген, -(CHR10)S-галоген, -винил,-OMe/-OBn, -C02Me/-C02Et, -CN, -NHAc
Соединения формулы (D) , где R=R.6/ можно получить из промежуточных соединений формулы (D) , где R=H, по реакции с подходящим алкилирующим реагентом в соответствии со схемой ба и 6Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание соединения формулы (D) , где R=H, с сильным основанием, таким как основание Бэртона, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, в течение подходящего времени, такого как 1 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды. Затем смесь обрабатывают подходящим алкилирующим реагентом и нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 150°С, микроволновым излучением в течение подходящего
Вторичные сульфонамиды формулы (F)a и (F)b можно получить из сульфонилхлоридов формулы (С) а и (С)Ь соответственно по реакции с первичным анилином формулы (В), R=H в соответствии со схемой 7а и 7Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание сульфонилхлорида формулы (С) а или (С)Ь с подходящим анилином (В) , R=H, в основном растворителе, таком как пиридин, в течение подходящего времени, такого как 16 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
Y = подходящая отщепляющаяся группа, например, Br, I, CI, OTs
Соединения формулы (A) i и (A) j можно получить из промежуточных соединений формулы (F)a и (F)b по реакции с подходящим алкилирующим реагентом в соответствии со схемой 8а и 8Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание соединения формулы (F)a или (F)b, с сильным основанием, таким как основание Бэртона, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, в течение подходящего времени, такого как 1 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды. Затем смесь обрабатывают подходящим алкилирующим реагентом и нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 150°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 25 мин.
Вторичные анилины формулы (В) , R=F <6 можно получить из первичных анилинов формулы (В) , R=H, по реакции с подходящим первичным спиртом в соответствии со схемой 9. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание первичного анилина (В) , R=H, с подходящим спиртом, подходящим основанием, таким как иодид калия, и подходящим катализатором, таким как пентаметилциклопентадиенилиридий(III)хлорид, в подходящем растворителе, таком как вода. Затем смесь нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 17 0°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 1 ч.
Схема 10
Вторичные анилины формулы (В) , R=R6 можно получить из
арилхлоридов формулы (G) по реакции с подходящим первичным
алкиламином в соответствии со схемой 10. Типичные условия
проведения реакции включают перемешивание арилхлорида (G) с
подходящим первичным алкиламином, подходящим катализатором,
таким как {1,3-бис[2,б-бис(1-метилэтил)фенил]-2-
имидазолидинил}(хлор)(2-метил-2-пропен-1-ил)палладий, и подходящим основанием, таким как гексаметилдисилазид лития, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран. Затем смесь нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры,
например, 7 0°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 45 мин.
Схема 11
Вторичный анилин формулы (В) , R=R.6/ можно получить из первичного анилина формулы (В) , R=H, по реакции с подходящим альдегидом в соответствии со схемой 11. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание первичного анилин (В) , R=H, с подходящим альдегидом в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, в течение подходящего времени, такого как 2 0 мин. Затем смесь обрабатывают подходящим восстановителем, таким как триацетоксиборогидрид натрия, и перемешивают в течение подходящего времени, такого как 18 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
Схема 12
Rg. = С2_4 алкил или Сз_4 циклоалкил
Вторичный анилин формулы (В) , R=R6 можно получить из первичного анилина (В) по двустадийной методике через промежуточный первичный амид формулы (Н) в соответствии со схемой 12. Промежуточный продукт (Н) можно получить из первичного анилина (В) по реакции с подходящим ангидридом.
Типичные условия проведения реакции включают перемешивание первичного анилин формулы (В) с подходящим ангидридом в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, с подходящим основанием, таким как триэтиламин, в атмосфере азота, в течение подходящего времени, такого как 2 0 ч, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.
Затем вторичный анилин (В) , R=F <6 можно получить из промежуточного продукта (Н) восстановлением амидной группы. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание промежуточного первичного амида (Н) с подходящим восстановителем, таким как раствор комплекса боран-тетрагидрофуран в тетрагидрофуране, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, в атмосфере азота. Затем смесь нагревают до подходящей температуры, такой как 60°С, и перемешивают в течение подходящего времени, такого как 2 ч.
Схема 13
(В), R=H (В), R=Re
Вторичные анилины формулы (В) , R=R6 можно получить из первичных анилинов формулы (В) , R=H, по реакции с подходящим диалкиламином в соответствии со схемой 13. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание первичного анилин (В), R=H, с подходящим диалкиламином, подходящим основанием, таким как иодид калия, и подходящим катализатором, таким как пентаметилциклопентадиенилиридий(III)хлорид, в подходящем растворителе, таком как ксилол. Затем смесь нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 190°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 2 ч.
Соединения формулы (А)к/(A)1 и (A)m/(A)n можно получить из содержащих эпоксидную группу промежуточных соединений формулы (К) а и (К)Ь соответственно по реакции с подходящим амином в соответствии со схемой 14а и 14Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание содержащего эпоксидную группу промежуточного соединения (К) а или (К)Ь с избытком подходящего амина в подходящем растворителе, таком как этанол, при подходящей температуре, такой как 50°С, в течение подходящего времени, такого как в течение ночи. Отношение количеств региоизомерных продуктов (А) к к (А) 1 или (A) m к (А) п может меняться при изменении выбранного амина и, если образуется смесь продуктов, разделение можно провести с помощью подходящей системы очистки, такой как препаративная HPLC.
Винилсодержащие промежуточные соединения формулы (L) а и (L)b можно получить из промежуточных соединений формулы (D)g и (D)h соответственно по реакции с винилсодержащим металлоорганическим реагентом в соответствии со схемой 15. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание промежуточного соединения (D)g или (D)h с подходящим винилсодержащим металлоорганическим реагентом, таким как трифтор(винил)борат калия, подходящим основанием, таким как карбонат цезия, и подходящим катализатором, таким как палладий(II)хлорид с подходящим лигандом, таким как трифенилфосфин. Затем добавляют подходящий растворитель, такой как смесь тетрагидрофуран/вода и реакционную смесь нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 14 0°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 1 ч.
Содержащие эпоксидную группу промежуточные соединения формулы (К)а и (К)Ь можно получить из промежуточных соединений формулы (L) а и (L)b соответственно путем окисления винильной группы в соответствии со схемой 16. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание промежуточного винилсодержащего соединения (L)а или (L)b с подходящим окислителем, таким как м-хлорпербензойная кислота, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, в течение подходящего времени, такого как 16 ч, при подходящей температуре, такой как равная от 0°С до температуры окружающей среды.
Y = подходящая отщепляющаяся группа, например, галоген, OTs, OMs S = 1, 2
Соединения формулы (А) р и (A) q можно получить из промежуточных соединений формулы (D)с и (D)d соответственно по реакции с подходящим гетероциклоалкилом, содержащим свободную группу NH, с гетероциклоалкильной кольцевой системой в соответствии со схемой 17а и 17Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание амина с промежуточным соединением формулы (D)с или (D)d, с сильным основанием, таким как гидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как 2-метилтетрагидрофуран, в атмосфере азота при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды, в течение подходящего времени, такого как 3 ч.
X = CH2 или О s = 0, 1,2 t = 0, 1 u = 1,2
Соединения формулы (A) г и (A) s можно получить из
промежуточных соединений формулы (D)i и (D) j соответственно по
реакции с подходящим гетероциклоалкилом, содержащим свободную
группу NH, с гетероциклоалкильной кольцевой системой в
соответствии со схемой 18а и 18Ь. Типичные условия проведения
реакции включают перемешивание промежуточного соединения
формулы (D) i или (D)j, с подходящим гетероциклоалкилом,
подходящим основанием, таким как иодид калия, и подходящим
катализатором, таким как
пентаметилциклопентадиенилиридий(III)хлорид, в подходящем
растворителе, таком как вода. Затем смесь нагревают в герметичном сосуде до подходящей температуры, например, 150°С, микроволновым излучением в течение подходящего времени, такого как 3 ч.
Схема 19
Соединения формулы (A)t/(А)и и (A)v/(A)w можно получить из содержащих эпоксидную группу промежуточных соединений формулы (К)а и (К)Ь соответственно по реакции с подходящим гетероциклоалкилом, содержащим свободную группу NH, с гетероциклоалкильной кольцевой системой в соответствии со схемой 19а и 19Ь. Типичные условия проведения реакции включают перемешивание содержащего эпоксидную группу промежуточного соединения (К)а или (К)Ь с избытком подходящего амина в подходящем растворителе, таком как этанол, при подходящей
температуре, такой как 50°С, в течение подходящего времени, такого как в течение ночи. Отношение количеств продуктов (A)t к (А) и или (A)v к (A) w может меняться при изменении выбранного амина и, если образуется смесь продуктов, разделение можно провести с помощью подходящей системы очистки, такой как
препаративная HPLC.
Примеры модуляторов RORy
Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется приведенными ниже неограничивающими примерами модуляторов RORy, которые получены с помощью целого ряда различных методик.
Получение промежуточного продукта
Промежуточный продукт 1: (2,4-Диметилфенил) (2-
метилпропил)амин
(2,4-Диметилфенил)(2-метилпропил)амин получали по одному из 4 разных путей, как это показано ниже:
a) Промежуточный продукт 1а (11а)
Водный раствор формиата аммония (3,15 г, 50,0 ммоля, 10 мл) разбавляли изопропанолом (80 мл) и в атмосфере азота добавляли к палладию на угле, обладающему 10% влажностью (1,064 г, 10,00 ммоля). Добавляли раствор 2,4-диметиланилина (1,212 г, 10 ммоля) и изомасляного альдегида (1,004 мл, 11,00 ммоля) в изопропаноле (3 мл) и смесь перемешивали в течение 1 ч. Смесь фильтровали через целит, слой целита промывали изопропанолом и объединенные жидкие фазы концентрировали в вакууме. Остаток
(1,8 г) очищали с помощью предварительно кондиционированного картриджа для экстракции, содержащего включающую аминопропил
(NH2 SPE) твердую фазу (20 г) , с использованием метанола в качестве элюента. Метанольный раствор органической фазы концентрировали в вакууме и получали второй остаток, который дополнительно очищали в течение 4 0 мин с помощью Biotage Flashmaster II с использованием диоксида кремния (Si) 10 г/ммоль в градиентном режиме 0-100% дихлорметан-циклогексан. Фракции, содержащие искомый продукт, объединяли и концентрировали в вакууме и получали искомый продукт, 1,5 г, в виде желтого масла. LCMS [LCMS1] Rt 1,04 мин, m/z (ES+) 178
(М+Н) .
b) Промежуточный продукт lb (lib)
Изомасляный альдегид (5 мл, 55,1 ммоля) добавляли к (2,4-диметилфенил)амину (7,01 г, 57,8 ммоля) в тетрагидрофуране (50 мл) и получали коричневый раствор. Раствор перемешивали в
течение 2 0 мин при комнатной температуре, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (16,34 г, 77 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и реакционную смесь анализировали с помощью LCMS для подтверждения превращения в искомый продукт. Раствор разбавляли этилацетатом (100 мл) и органическую фазу промывали водой (100 мл) . Органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу концентрировали в вакууме и получали продукт в виде коричневого масла. LCMS [LCMS3] Rt 1,34 мин, m/z (ES+) 178 (М+Н) .
c) Промежуточный продукт 1с (11с)
Смесь 1-хлор-2,4-диметилбензола (1687 мг, 12 ммоля), изобутиламина (1755 мг, 24,00 ммоля) и катализатора Caddick (14 0 мг, 0,238 ммоля) обрабатывали гексаметилдисилазидом лития в тетрагидрофуране (1М LHMDS в ТГФ, 15 мл, 15,00 ммоля) в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали при 7 0°С в течение 4 5 мин в герметизированном с помощью мембраны сосуде. Охлажденную смесь концентрировали в вакууме и остаток подвергали распределению между водным раствором лимонной кислоты (50 мл) и трет-бутилметиловым эфиром (ТБМЭ) (2x50 мл). Органическую фазу обрабатывали сухим MgS04, твердое вещество удаляли фильтрованием и органическую фазу концентрировали в вакууме и получали (2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)амин (2,05 г, 11,56 ммоля) в виде оранжевого масла. LCMS [LCMS1] Rt 1,03 мин, m/z (ES+) 178 (М+Н).
d) Промежуточный продукт Id (lid)
2-Метил-1-пропанол (3,12 мл, 33,8 ммоля), 2,4-диметиланилин (2,093 мл, 16,92 ммоля), иодид калия (5,62 г, 33,8 ммоля) и [Ср*1гС1г]2 (0,108 г, 0,135 ммоля) растворяли в воде (10 мл) . Полученную смесь облучали микроволновым излучением (микроволновая печь СЕМ) при 150°С в течение 1 ч. Реакционную смесь анализировали, сосуд повторно герметизировали и нагревали при 150°С в течение еще 30 мин. К реакционной смеси добавляли дихлорметан (25 мл) и воду (25 мл). Органическую фазу пропускали через гидрофобную фритту и концентрировали в
вакууме. Затем неочищенный продукт растворяли в минимальном количестве дихлорметана, загружали в колонку с диоксидом кремния и очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой. Соответствующие фракции объединяли и концентрировали и получали очищенный продукт (1,89 г, 10,67 ммоля) в виде оранжевого масла. LCMS [LCMS1] Rt 1,02 мин, m/z (ES+) 178 (М+Н).
Промежуточный продукт 2: N-(2,4-Диметилфенил)-4-[(2-гидроксиэтил)окси]-N-(2-метилпропил)бензолсульфонамид
К раствору (2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)амина (0,2 г,
1,128 ммоля) в пиридине (10 мл) при перемешивании на воздухе
при комнатной температуре добавляли 2-{[4-
(хлорсульфонил)фенил]окси}-этил-2-пропеноат (0,656 г, 1,128 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 3 0 мин для обеспечения растворения и затем выдерживали в течение ночи. Пиридин выпаривали в вакууме (biotage VI0) и получали остаток. Его частично растворяли в метаноле и вносили в предварительно кондиционированный картридж для экстракции, содержащий включающую аминопропил (SPE) твердую фазу, и элюировали дополнительным количеством метанола. Затем метанольную фракцию пропускали через содержащий сульфоновую кислоту картридж (SCX) SPE, также элюируя метанолом. Растворитель выпаривали в вакууме и образец помещали в метанол и очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой (С18). Соответствующие фракции объединяли и сушили в потоке азота и получали промежуточный продукт. Затем его переносили в тетрагидрофуран (ТГФ) (1 мл) и добавляли гидроксид лития (0,027 г, 1,128 ммоля) в воде (1 мл). Смесь перемешивали в течение 2 ч и затем выпаривали в потоке азота и получали остаток. Его подвергали распределению между водой и дихлорметаном и разделяли с помощью гидрофобной фритты. Органический растворитель выпаривали в вакууме (Biotage vlO) и получали продукт, из которого удалена защитная группа, в виде бесцветного масла, 44,8 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,23 мин, m/z (ES+) 378 (М+Н).
Промежуточные продукты 3-2 4 получали в соответствии с
К раствору вторичного анилина (1 экв.) в пиридине (4 мл/ммоль) при комнатной температуре одной порцией добавляли сульфонилхлорид (1 экв., см. таблицу 1, в которой указан конкретный использующийся сульфонилхлорид). Реакционную смесь выдерживали при 2 0°С в течение 16 ч. В некоторых случаях раствор реакционной смеси нагревали (80 или 95°С) в течение 1 ч, затем выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Затем проводили обработку по методике обработки, указанной в таблице 1, и неочищенное вещество очищали при необходимости по методике очистки, указанной в таблице 1.
Конкретный пример пути 1 - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(фенилметил)окси]бензолсульфонамида (промежуточный продукт 3)
К (2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)амину (1,00 г, 5,64
ммоля) в пиридине (20 мл) добавляли 4-
[(фенилметил)окси]бензолсульфонилхлорид (1,754 г, 6,20 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, затем повторно растворяли в этилацетате и промывали 10% раствором лимонной кислоты. На этой стадии образовывался белый осадок и его отделяли фильтрованием, анализ с помощью LCMS подтвердил, что осадок является искомым продуктом. Затем органическую фазу промывали с помощью 2М NaOH и собирали дополнительный осадок, анализ с помощью LCMS также подтвердил, что он представляет собой искомый продукт. Органическую фазу сушили над сульфатом
магния, концентрировали в вакууме и обрабатывали дихлорметаном и получали мутную суспензию, которую фильтровали и получали дополнительное количество искомого продукта. В заключение фильтрат концентрировали в вакууме и обрабатывали метанолом, в результате чего из раствора кристаллизовалось дополнительное количество продукта. Собранные порции продукта объединяли (97 4 мг, 2,300 ммоля) и использовали без дополнительной очистки на следующей стадии. LCMS [ LCMS 1 ] Rt 1,54 мин, m/z (ES+) 424 (М+Н) .
Таблица 1
Особенности получения промежуточных продуктов 3-24 (13-124) Промежуточные продукты 3-24 (13-124) получали с использованием промежуточного продукта 1 (в виде
SM1), полученного по одной из четырех методик, описанных выше (la-d)
Обозначе
ние продукта
Путь
Обозначение SM1
Обозначение SM2
Источник
Количество (ммоль)
Выход
(%)
Обработка
Очистка
Основной ион (М + 1)
Методика LCMS
Enamine Ltd
5,6
А и F
1, 54
424
LCMS1
Sigma Aldrich
5, 64
ДН*
1, 42
336
LCMS1
Sigma Aldrich
0, 564
1,47
366
LCMS1
Apollo
Scientific
Ltd
1,918
1,41
179
LCMS1
Apollo
Scientific
Ltd
0,919
1, 53
370
LCMS2
Fluorochem
1, 128
1, 57
414/416
LCMS2
Sigma Aldrich
1, 128
1, 62
410/412
LCMS2
110
Asdi
Chemicals
1, 128
1, 63
410/412
LCMS2
111
S10
Acros Organics
2, 82
100
1,56
370
LCMS2
112
Sll
Apollo
Scientific
Ltd
2, 54
1,47
414/416
LCMS1
113
S12
Sigma Aldrich
11,28
1,49
396/398
LCMS1
114
S13
Sigma Aldrich
0,1
100
А и S
1,5
372
LCMS2
115
S14
Enamine Ltd
0,2
100
1,59
350
LCMS2
116
S15
Sigma Aldrich
0,2
100
1,5
350
LCMS2
117
S16
Sigma Aldrich
0,1
100
А и S
1,4
361
LCMS2
118
S17
Sigma Aldrich
0,2
100
1,44
LCMS2
119
S18
Sigma Aldrich
0,2
100
1,45
354
LCMS2
120
S19
ChemCollect GmbH
0,6
1,26
364
LCMS1
121
S20
Alfa Aesar
2,096
1,44
348
LCMS1
122
S21
Sigma Aldrich
0,1
100
А и S
1,47
372
LCMS2
123
S22
Activate Scientific
1,777
1,4
376
LCMS1
124
Activate Scientific
2, 82
1,56
430
LCMS1
*ДН = Данных нет
Промежуточный продукт 25: (Тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метилметансульфонат
(Тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанол (29,9 мг, 0,257 ммоля) растворяли в дихлорметане (ДХМ) (4 мл) . К этому раствору добавляли триэтиламин (0,108 мл, 0,772 ммоля). Реакционную смесь охлаждали до 0°С, добавляли метансульфонилхлорид (0,03 мл, 0,386 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи, давая реакционной смеси нагреться до 2 0°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Продукт подвергали распределению между этилацетатом (20 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл). Органическую фазу сушили и концентрировали в вакууме, затем использовали в следующей реакции без дополнительной очистки или исследования характеристик, 4 9 мг.
Промежуточный продукт 26: 4-(9Н-Флуорен-9-илметил)-3-метил-3,4-морфолиндикарбоксилат
При перемешивании к раствору гидрохлорида метилморфолин-3-карбоксилата (2,0 г, 11,01 ммоля) в смеси 1,4-диоксана (10 мл) и воды (20 мл) добавляли бикарбонат натрия (2,79 г, 33,2 ммоля). Суспензию охлаждали в бане из воды со льдом и добавляли раствор Fmoc-хлорида (2,93 г, 11,33 ммоля) в 1,4-диоксане (30 мл) . Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Смесь подвергали распределению между этилацетатом (150 мл) и водой (150 мл) . Фазы разделяли и органический экстракт промывали 1М водным раствором НС1 (150 мл) и рассолом (50 мл) . Органический экстракт сушили (MgSO,}) , фильтровали и растворитель удаляли в вакууме и получали бесцветную смолу, 4,2 г. LCMS [LCMS4] Rt 3,10 мин, m/z (ES+) 368 (М+Н).
Промежуточный продукт 27: 9Н-Флуорен-9-илметил-3-формил-4-морфолинкарбоксилат
При перемешивании к раствору 4-(9Н-флуорен-9-илметил)-3-метил-3,4-морфолиндикарбоксилата (0,6 г, 1,633 ммоля) в безводном толуоле (80 мл) при охлаждении до -7 8°С в бане из твердого диоксида углерода с ацетоном в атмосфере азота в течение 4 мин по каплям добавляли 1,0 М диизобутилалюминийгидрид
в гексанах (6,53 мл, 6,53 ммоля). Раствор перемешивали при -78°С в течение 1,5 ч. Реакцию останавливали при -7 8°С метанолом (1,5 мл) и затем водным раствором НС1 (1М, 50 мл) . Смеси давали нагреться до температуры окружающей среды и фазы разделяли. Водный раствор промывали этилацетатом (2x50 мл) . Объединенные органические экстракты сушили (MgSO,}) , фильтровали и растворитель удаляли в вакууме и получали масло. Остаток переносили в дихлорметан и очищали с помощью флэш-хроматографии (Si) с использованием смеси 0-100% этилацетат-циклогексан в течение 30 мин. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт в виде белого вспененного вещества, 32 9 мг. LCMS [LCMS4] Rt 2,43 мин, m/z (ES+) 338 (М+Н).
Промежуточный продукт 28: 9Н-Флуорен-9-илметил-3-
(гидроксиметил)-4-морфолинкарбоксилат
К раствору 9Н-флуорен-9-илметил-3-формил-4-
морфолинкарбоксилата (610 мг, 1,808 ммоля) в дихлорметане (ДХМ)
(6 мл) при охлаждении в бане из воды со льдом добавляли триметилсилилтрифторметансульфонат (0,470 мл, 2,60 ммоля). К раствору по каплям добавляли раствор метил-5-бром-1Н-индол-7-карбоксилата (333 мг, 1,311 ммоля) в ДХМ (18 мл) . Полученный оранжевый раствор перемешивали при 0°С в течение 1 ч в атмосфере азота. К темно-оранжевому раствору добавляли триэтилсилан (1 мл, 6,26 ммоля) и смесь перемешивали при температуре 5-10°С в течение 1,5 ч. Раствору давали нагреваться до температуры окружающей среды в течение б ч, затем выдерживали в течение ночи при 5°С. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (75 мл) и ДХМ (50 мл) . Фазы разделяли и водную фазу промывали с помощью ДХМ (2x4 0 мл) . Объединенные органические экстракты концентрировали в вакууме и получали желтое вспененное вещество. Остаток переносили в дихлорметан и в течение 4 0 мин очищали на диоксиде кремния (Si) с использованием смеси 0-100% этилацетат-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали продукт, 142 мг, в виде желтого смолообразного вещества. LCMS [LCMS4] Rt 2,61 мин, m/z (ES+) 340
(М+Н) .
Промежуточный продукт 29: 2-{[4-
(хлорсульфонил)фенил]окси}этил-2-пропеноат
Раствор 2-(фенилокси)этил-2-пропеноата (5 г, 26,0 ммоля) в
дихлорметане (50 мл) охлаждали до 0°С. В течение 15 мин при 0°С по каплям добавляли хлорсульфоновую кислоту (5,21 мл, 78 ммоля), затем смеси давали нагреваться до комнатной температуры в течение 3 0 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи
(16 ч) при комнатной температуре. Затем раствор выливали на лед и экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл) . Полученную эмульсию разбавляли этилацетатом (200 мл) и рассолом (50 мл) для обеспечения разделения фаз. Водный слой дополнительно экстрагировали этилацетатом (100 мл) . Объединенные органические фракции сушили над сульфатом магния затем выпаривали в вакууме и получали маслянистое твердое вещество, которое сушили в высоком вакууме в течение ночи. После сушки выделяли липкое твердое вещество (3,2 г) и его использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS [LCMS 1 ] Rt 0,47 мин, m/z (ES-) 272
(М-С1+ОН).
Промежуточный продукт 30: N-(2,4-Диметилфенил)-3-гидрокси-N-изобутилбензолсульфонамид
N-(2,4-Диметилфенил)-N-изобутил-З-метоксибензолсульфонамид (431,4 мг, 1,242 ммоля) растворяли в дихлорметане (ДХМ) (10 мл) и охлаждали до -78°С. По каплям добавляли ВВгз в ДХМ (1М) (6,21 мл, 6,21 ммоля) и реакционную смесь помещали в атмосферу азота. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. К реакционной смеси по каплям добавляли воду (20 мл) до прекращения выделения дымов. Затем неочищенный продукт экстрагировали в органическую фазу, подвергая его распределению между ДХМ (30 мл) и водой (20 мл) . Водную фазу промывали с помощью ДХМ (2x20 мл) . Затем органическую фазу сушили и концентрировали в вакууме. Затем неочищенный продукт растворяли в минимальном количестве ДХМ и загружали в колонку с диоксидом кремния, затем очищали с помощью колоночной хроматографии на диоксиде кремния (Si) (20 мин, 0-25% EtOAc в циклогексане). Затем соответствующие фракции объединяли и
концентрировали, и получали искомый продукт, 384, 4 мг. LCMS
[LCMS1] Rt 1,26 мин, m/z (ES+) 334 (М+Н).
Промежуточный продукт 31: N-(2,4-Диметилфенил)-4-гидрокси-N-(2-метилпропил)бензолсульфонамид
К N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-
[(фенилметил)окси]бензолсульфонамиду (974 мг, 2,300 ммоля) добавляли формиат аммония (725 мг, 11,50 ммоля), гидроксид палладия (II) (20% на угле) (164 мг, 0, 230 ммоля) и этанол (65 мл) . Реакционную смесь при перемешивании кипятили с обратным холодильником в течение ночи. В LCMS наблюдали пик продукта, но происходило только частичное превращение. К реакционной смеси добавляли еще 5 экв. формиата аммония (725 мг, 11,50 ммоля). Реакционную смесь повторно кипятили с обратным холодильником. После кипячения в течение еще 3 0 мин LCMS не обнаруживала изменения отношения количества исходного вещества к количеству продукта. Реакционную смесь охлаждали в течение 5 мин, затем дополнительно добавляли гидроксид палладия (II) (20% на угле)
(164 мг, 0,230 ммоля). Затем реакционную смесь повторно кипятили с обратным холодильником в течение еще 3 0 мин и после этого наблюдали полное превращение в продукт. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали через картридж с целитом, затем концентрировали в вакууме и получали 72 7 мг неочищенного продукта. Неочищенную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой, затем рассолом. Затем органическую фазу концентрировали в вакууме и получали 6 63 мг искомого соединения. LCMS [LCMS1] Rt 1,25 мин, m/z (ES+) 334 (М+Н).
Промежуточный продукт 32: N-(2,4-Диметилфенил)-3-
(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид
Метил-3-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензоат
(400 мг, 1,065 ммоля) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ) (10 мл) . К этому раствору добавляли борогидрид лития (2М в ТГФ)
(0,932 мл, 1,864 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию останавливали путем добавления 5% лимонной кислоты (10 мл) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1 ч. Затем реакционную смесь разбавляли этилацетатом (25 мл) и продукт экстрагировали в
органическую фазу. Органическую фазу сушили путем пропускания через гидрофобную фритту и затем концентрировали в вакууме и получали искомый продукт, 37 8, 7 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,23 мин, m/z (ES+) 348 (М+Н).
Промежуточный продукт 33: N-(5-Хлор-2-фторфенил)-4-винилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору 4-винилбензол-1-
сульфонилхлорида (950 мг, 4,69 ммоля) в пиридине (8 мл) при 20°С добавляли 5-хлор-2-фторанилин (682 мг, 4,69 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 2 ч, затем выпаривали в вакууме и повторно растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором карбоната натрия (25 мл) , сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде желтого масла. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) в градиентном режиме 0-25% этилацетат-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 822,7 мг в виде белого твердого вещества. LCMS [LCMS2] Rt 0,86 мин, m/z (ES+) 312 (М+Н).
Промежуточный продукт 34: N-(5-Хлор-2-фторфенил)-N-изобутил-4-винилбензолсульфонамид
К раствору N-(5-хлор-2-фторфенил)-4-винилбензолсульфонамида (822 мг, 2,64 ммоля) в ацетонитриле (10 мл) при перемешивании на
воздухе при 20°С добавляли 2-(трет-бутил)-1,1,3,3-
тетраметилгуанидин (903 мг, 5,2 7 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч. Затем добавляли 1-бром-2-метилпропан (0,57 3 мл, 5,2 7 ммоля) и сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Emrys Optimiser) при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения реакционную смесь концентрировали в вакууме и повторно растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали водой (10 мл) , сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде желтого масла, которое затвердевало. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) в градиентном режиме 0
50% этилацетат-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 82 4 мг, в виде бесцветного масла. LCMS [LCMS2] Rt 1,46 мин, m/z (ES+) 368 (М+Н) .
Промежуточный продукт 35: 4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензамид
Метил-4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензоат
(280 мг, 0,746 ммоля) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ) (5 мл) и к этому раствору добавляли раствор аммиака в диоксане (0,5 М)
(4,47 мл, 2,237 ммоля), затем LiHMDS в ТГФ (1М, 0,895 мл, 0,895 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакцию останавливали водой (1 мл), затем для обработки объединяли с полученной ранее идентичной пробной реакционной смесью в меньшем количестве
(0,075 ммоля). Неочищенное вещество концентрировали в вакууме, затем продукт экстрагировали в органическую фазу, подвергая его распределению между этилацетатом (15 мл) и рассолом (10 мл) . Органическую фазу пропускали через гидрофобную фритту и концентрировали в вакууме и получали неочищенный продукт, 2 63 мг. Дополнительную очистку не проводили. LCMS [LCMS1] Rt 1,14 мин, m/z (ES+) 361 (М+Н).
Промежуточный продукт 36: 4-(аминометил)-N-(2,4-
диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид
4-(N-(2,4-Диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензамид
(263,6 мг, 0,731 ммоля) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ) (10 мл) и к этому раствору добавляли комплекс боран-тетрагидрофуран
(1 М) (2,194 мл, 2,194 ммоля). Затем реакционную смесь нагревали при 7 5°С и кипятили с обратным холодильником в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали и реакцию останавливали путем добавления 2М НС1. Затем реакционную смесь нейтрализовывали путем медленного добавления ЮМ гидроксида натрия и продукт экстрагировали в органическую фазу, подвергая его распределению между этилацетатом и водой. Органическую фазу пропускали через гидрофобную фритту и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep
(очистка с помощью LCMS с отбором по массе) (модификатор муравьиная кислота) с помощью трех инжектирований. Соответствующие фракции выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 152 мг. LCMS [LCMS1] Rt 0,87 мин, m/z (ES+) 347 (М+Н).
Путь 2
В сосуд для микроволновой печи добавляли
бромбензолсульфонамид (1 экв.), трифтор(винил)борат калия (1,2 экв.), трифенилфосфин (0,06 экв.), карбонат цезия (3 экв.) и хлорид палладия(II) (0,02 экв.). Добавляли тетрагидрофуран (ТГФ)
(3,6 мл/ммоль) и воду (0,4 мл/ммоль). Сосуд герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 140°С в течение 3 0 мин, затем охлаждали до комнатной температуры. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблице 2.
Конкретный пример - Получение N- (2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-винилбензолсульфонамида (промежуточный продукт 45)
В сосуд для микроволновой печи добавляли 4-6poM-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид (4,44 г, 11,20 ммоля), трифтор(винил)борат калия (4,50 г, 33,6 ммоля), трифенилфосфин
(0,176 г, 0,672 ммоля), карбонат цезия (10,95 г, 33,6 ммоля) и хлорид палладия(II) (0,040 г, 0,224 ммоля). Затем добавляли тетрагидрофуран (ТГФ) (12 мл) и воду (1, 333 мл), так чтобы все частицы находились ниже уровня растворителя. Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали в микроволновой печи (Biotage Initiator) при 140°С в течение 60 мин, охлаждали до комнатной температуры и к смеси добавляли этилацетат (40 мл). Органическую фазу промывали водой (50 мл), сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде оранжевого масла. Образец переносили в
дихлорметан и очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) в градиентном режиме 0-25% этилацетат-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 1,8 г, в виде почти белого твердого вещества. LCMS [LCMS1] Rt 1,47 мин, m/z (ES+) 344 (М+Н).
Путь 3
МХПБК
ДХМ
К раствору винилбензолсульфонамида (1 экв.) в дихлорметане (ДХМ) (8,1 мл/ммоль) при перемешивании в атмосфере азота при 0°С
порциями добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК) (4
экв.) . Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 0 мин.
Затем реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при 2 0°С.
Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблице 2.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (промежуточный
продукт 4 6)
К раствору N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-
винилбензолсульфонамида (1,27 г, 3,70 ммоля) в дихлорметане
(ДХМ) (30 мл) при перемешивании в атмосфере азота при 0°С порциями добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК)
(2,55 г, 14,79 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 0 мин. Затем реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при 2 0°С. К смеси добавляли ДХМ (20 мл). Органическую фазу промывали 0,1М раствором гидроксида натрия (2x50 мл), сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт. Образец переносили в дихлорметан и очищали на диоксиде кремния (Si) в градиентном режиме 0-50% этилацетат-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в
вакууме и получали искомый продукт, 935 мг, в виде почти белого масла, которое затвердевало при выдерживании. LCMS [LCMS1] Rt 1,35 мин, m/z (ES+) 360 (М+Н).
Промежуточные продукты 37-51 получали в соответствии с путем 2, 3, 4, 5 или 8. Конкретные условия проведения реакции и данные по характеристикам для промежуточных продуктов 37-51 приведены ниже в таблице 2.
Пути 4, 5 и 8 описаны в разделе, посвященном получению соединений примеров.
144
142
1, 021
1,48
374
LCMS 2
145
113
S25
Aldrich
11,2
1,47
344
LCMS1
146
145
3,70
1, 35
360
LCMS1
147
141
0,906
1,47
374
LCMS 2
148
R4*
131
S26
Acros
0,75
1, 57
517
LCMS1
149
R4*
130
S26
Acros
0,883
(чистота
55%)
1,58
517
LCMS1
150
151
1,191
1,5
394
LCMS1
151
124
S25
Aldrich
1,5
1,58
378
LCMS1
*Процедуру проводили в виде одиночных реакций, а не в виде группы реакций.
Пример получения
Пример 1: N-(2,4-Диметилфенил)-N-изобутил-З-(((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)метил)бензолсульфонамид
N- (2,4-Диметилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-
изобутилбензолсульфонамид (40 мг, 0,115 ммоля) и гидрид натрия
(4,14 мг, 0,173 ммоля) растворяли в безводном N,N-
диметилформамиде (ДМФ) (3 мл) . Раствор перемешивали в течение 10
мин в атмосфере азота при 20°С. К раствору добавляли (тетрагидро-
2Н-пиран-4-ил)метилметансульфонат (49 мг, 0,252 ммоля) и
перемешивали в течение ночи при 2 0°С в атмосфере азота.
Реакционную смесь концентрировали в вакууме (Biotage VI0) и
получали неочищенный продукт. Затем его подвергали распределению
между этилацетатом (10 мл) и водой (10 мл) . Органический слой
промывали водой (5x5 мл), пропускали через гидрофобную фритту и
концентрировали в вакууме. Затем неочищенный продукт растворяли
в минимальном количестве ДХМ и очищали с помощью хроматографии
на диоксиде кремния (Si) в градиентном режиме 0-25% этилацетат-
циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и
концентрировали и получали искомый продукт, 2 8 мг. LCMS [LCMS1]
Rt 1,46 мин, m/z (ES+) 446 (М+Н).
Пример 2: N-(2,4-Диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[2-(4-морфолинил)этил]окси}бензолсульфонамид
В сосуд для микроволновой печи добавляли морфолин (5,10 мкл, 0,058 ммоля), иодид калия (19,26 мг, 0,116 ммоля), [Ср*1гС12]2 (0,639 мг, 0,580 мкмоля), N-(2,4-диметилфенил)-4-[(2-гидроксиэтил)окси]-N-(2-метилпропил)бензолсульфонамид (43,8 мг, 0,116 ммоля), стержень для перемешивания и воду (0,1 мл). Затем сосуд герметизировали и смесь нагревали при 150°С микроволновым излучением (Biotage Initiator) в течение 3 ч. Затем реакционную смесь разбавляли метанолом (1 мл) и пропускали через предварительно кондиционированный картридж для экстракции (SPE), содержащий включающую сульфоновую кислоту (SCX) твердую фазу, элюировали метанолом и затем 2н метанольным раствором аммиака. Фракции, содержащиеся в метанольном растворе аммиака, концентрировали в вакууме и остаток очищали с помощью mass
directed autoprep с использованием модификатора - муравьиной кислоты. Фракции, содержащие продукт, выпаривали в потоке азота и получали продукт, 2,6 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,01 мин, m/z (ES+) 447 (М+Н).
Пример 3: 2-(N-(2,4-Диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-5-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензойная кислота
При перемешивании к раствору 2-бром-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида
(50 мг, 0,098 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) при -78°С добавляли nBuLi 1,6М в гексанах (92 мкл, 0,147 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли диоксид углерода
(небольшую гранулу) и реакционную смесь перемешивали при -7 8°С в течение 30 мин, затем нагревали при 20°С и перемешивали в течение еще 1 ч. Реакцию останавливали насыщенным раствором хлорида аммония и смесь концентрировали в вакууме. Остаток затем переносили в этилацетат (20 мл) и органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида аммония (2x25 мл) , органические вещества сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде бесцветного смолообразного вещества, 40 мг. LCMS [LCMS2] Rt 0,97 мин, m/z
(ES+) 476 (М+Н).
Пример 4: N-(2,4-Диметилфенил)-Ы-изобутил-2-метокси-4-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-2-фтор-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида
(358 мг, 0, 47 8 ммоля) в метаноле (1 мл) при комнатной температуре добавляли 25% метоксид натрия в метаноле (109 мкл, 0,47 8 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Реакцию останавливали водой (1 мл) и растворители удаляли в вакууме и получали светло-желтое твердое вещество. Неочищенный остаток растворяли в дихлорметане
(ДХМ) (10 мл) и органические вещества промывали водой (3x10 мл) . Органические вещества пропускали через гидрофобную фритту и фильтрат выпаривали досуха и получали желтое масло. Неочищенное
вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор -карбонат аммония). Растворитель выпаривали в потоке азота и получали искомый продукт, 12 9 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,4 7 мин, m/z (ES+) 462 (М+Н).
Пример 5: N-(2,4-Диметилфенил)-2-(гидроксиметил)-N-
изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид
При перемешивании к раствору 2-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-5-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензойной кислоты (40 мг, 0,0 84 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (1 мл) при 0°С добавляли алюмогидрид лития (1,0М в диэтиловом эфире) (0,084 мл, 0,084 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 0 мин, затем нагревали при
25°С в течение 1 ч. Реакцию осторожно останавливали водой. Органический растворитель удаляли в вакууме и оставшийся водный слой экстрагировали этилацетатом (20 мл х 3). Органические вещества объединяли и концентрировали в вакууме и получали желтое масло. Затем неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота в аппарате для продувки Radleys и получали искомый продукт, 25,2 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,40 мин, m/z (ES+) 462 (М+Н).
Пример 6: N-(2,4-Диметилфенил)-Ы-изобутил-4-((((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)амино)метил)бензолсульфонамид
4-(Аминометил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид (25 мг, 0,072 ммоля), (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанол (16,76 мг, 0,144 ммоля), иодид калия (23,95 мг, 0,144 ммоля) и [Ср*1гС1г]2 (1,150 мг, 1,443 мкмоля) растворяли в воде (2 мл) в сосуде для микроволновой печи. Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение 1 ч. После анализа сосуд для проведения реакции повторно герметизировали и повторно нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение еще 1 ч. После еще одного анализа добавляли еще 1 экв. [Ср*1гС12]2 и 1 экв. (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанола и реакционную смесь в течение третьего периода
времени нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали и смесь концентрировали в вакууме (Biotage VI0). Неочищенный продукт экстрагировали в органическую фазу, подвергая его распределению между этилацетатом (5 мл) и водой (5 мл) . Органическую фазу пропускали через гидрофобную фритту и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - муравьиная кислота). Соответствующие фракции выпаривали в вакууме (Biotage VI0) и получали искомый продукт, 1,2 мг. LCMS [LCMS1] Rt 0,97 мин, m/z (ES+) 445 (М+Н).
Соединения примеров 7-101 получали в соответствии с одним из следующих путей (4-14). Конкретные условия проведения реакции и данные по характеристикам соединений примеров 7-112 приведены ниже в таблице 3.
Путь 4
Группа реакций
Смесь фенолсульфонамида (1 экв., см. таблицы 2 и 3, в которых указан конкретный использующийся фенол), спирта (1,2 экв., см. таблицы 2 и 3, в которых указан конкретный использующийся в каждой реакции спирт) и трифенилфосфина (1 экв.) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ) (б мл/ммоль) и обрабатывали диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилатом (ДИАД) (1,3 экв.). Сосуд закрывали и перемешивали при 2 0°С в течение 2 дней. Если анализ с помощью LCMS показывал, что реакция не завершилась, дополнительно добавляли спирт (1,2 экв.) и диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат (ДИАД) (1,6 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 18 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-4-((2, 6-диоксо-1,2,3,б-тетрагидропиримидин-4-ил)метокси)-N-изобутилбензолсульфонамида (пример 56)
Смесь N-(2,4-диметилфенил)-4-гидрокси-Ы-
изобутилбензолсульфонамида (33 мг, 0,099 ммоля), 6-
(гидроксиметил)пиримидин-2,4(1Н,ЗН)-диона (17,1 мг, 0,12 ммоля)
и трифенилфосфина (26 мг, 0,099 ммоля) растворяли в
тетрагидрофуране (ТГФ) (0,6 мл) и обрабатывали
диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилатом (ДИАД) (25 мкл, 0,13 ммоля). Сосуд закрывали и перемешивали при 2 0°С в течение 2 дней. Дополнительно добавляли б-(гидроксиметил)пиримидин-2,4(1Н,ЗН)-дион (17,1 мг, 0,12 ммоля) и диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат
(ДИАД) (30 мкл, 0,156 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 18 ч. Затем реакционную смесь фильтровали и пытались провести очистку с помощью mass directed autoprep (модификатор -карбонат аммония), но чистое вещество выделить не удалось. Очистку успешно проводили с помощью mass directed autoprep
(модификатор - муравьиная кислота) и получили искомый продукт, 1,1 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,13 мин, m/z (ES+) 458 (М+Н). Режим одиночной реакции
Фенолсульфонамид (1 экв., см. таблицы 2 и 3, в которых указан конкретный использующийся фенол), спирт (1,2-1,5 экв., см. таблицы 2 и 3, в которых указан конкретный использующийся в каждой реакции спирт) и трифенилфосфин (1-1,5 экв.) отвешивали и помещали в сосуд. Добавляли тетрагидрофуран (ТГФ) (4 мл/ммоль), затем диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат (ДИАД) (1,2-1,5 экв.). Сосуд закрывали и в некоторых случаях 3 раза заполняли азотом, затем перемешивали при 2 0°С в течение до 2 дней. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Конкретный пример - Получение трет-бутил 4-(3-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенокси)пиперидин-1-карбоксилата (промежуточный продукт 49)
Трет-бутил 4-гидроксипиперидин-1-карбоксилат (213,0 мг,
1,061 ммоля), N-(2,4-диметилфенил)-4-гидрокси-Ы-
изобутилбензолсульфонамид (294,5 мг, 0,883 ммоля) и трифенилфосфин (232 мг, 0,883 ммоля) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ) (4 мл). Раствор перемешивали в течение 20 мин, затем добавляли ДИАД (0,206 мл, 1,060 ммоля), сосуд герметизировали и 3 раза заполняли азотом, затем перемешивали в течение ночи при 2 0°С. Раствор реакционной смеси концентрировали в вакууме (Biotage VI0) и получали неочищенный продукт. Его подвергали распределению между этилацетатом (20 мл) и рассолом
(20 мл) . Органическую фазу пропускали через гидрофобную фритту затем концентрировали в вакууме и получали неочищенный продукт 200 мг, который использовали на следующей стадии, без дополнительной очистки. LCMS [LCMS1] Rt 1,58 мин, m/z (ES+) 517
(М+Н) .
Путь 5
Группа реакций
Каждый промежуточный пара-фторсульфонамид (8 экв., см.
таблицы 2 или 3, в которых указан конкретный использующийся
промежуточный пара-фторсульфонамид) растворяли в
диметилсульфоксиде (ДМСО) (8 реакций х 0,75 мл/ммоль) и аликвоту, составляющую 1 экв., добавляли к каждому из 8 спиртов (1 экв., см. таблицы 2 или 3, в которых указан конкретный использующийся спирт). Затем к каждой реакционной смеси добавляли 60% гидрид натрия, диспергированный в масле (1 экв.). Реакционные смеси закрывали и обрабатывали ультразвуком для содействия диспергированию и затем выдерживали при 2 0°С в течение 18 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Примечание: Если использовали содержащие защитную группу Fmoc аминоспирты, то установлено, что группу Fmoc необходимо
удалить при указанных выше условиях проведения реакции сочетания, хотя часто была необходима дополнительная вторая очистка (с помощью mass directed autoprep). Если использовали содержащие защитную группу Вое аминоспирты или содержащие изопропилидиновую защитную группу полигидроксисоединения, то удаление защитной группы из продуктов проводили следующим образом: После очистки содержащий защитную группу продукт растворяли в смеси трифторуксусной кислоты (ТФК) (0,7 мл/ммоль) и дихлорметана (ДХМ) (0,7 мл/ммоль), затем выдерживали в течение 18 ч при комнатной температуре и выпаривали досуха и получали не содержащий защитную группу продукт (в виде соли с ТФК в случае основных соединений). Если использовали содержащие бензильную защитную группу аминоспирты, то удаление защитной группы из продуктов проводили следующим образом: После очистки содержащие бензильную защитную группу продукты повторно растворяли в метаноле (1 мл) и гидрировали в проточном аппарате для гидрирования (автоматизированная система H-cube) при следующих условиях: комнатная температура, давление водорода, равное 1 бар, скорость потока, равная 1 мл/мин, и с использованием 10% Pd/C CatCart 30 в качестве катализатора. Затем при необходимости проводили очистку (с помощью mass directed autoprep).
Конкретный пример - Получение трифторацетата N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(пиперидин-4-илметокси)бензолсульфонамида (пример 8)
Исходный раствор N-(2,4-диметилфенил)-4-фтор-Ы-
изобутилбензолсульфонамида (8 экв., 0,8 08 г, 2,4 ммоля) готовили в диметилсульфоксиде (ДМСО) (3,2 мл) и аликвоту, составляющую 1 экв. (0,4 мл), добавляли к каждому из 8 спиртов (по 0,3 ммоля каждого), в этом примере включая трет-бутил 4-(гидроксиметил)пиперидин-1-карбоксилат (64,6 мг, 0,3 ммоля). Затем к каждой реакционной смеси добавляли 60% гидрид натрия, диспергированный в масле (0,012 г, 0,300 ммоля). Реакционные смеси закрывали и обрабатывали ультразвуком для содействия диспергированию, затем выдерживали при 2 0°С в течение 18 ч. Затем реакции останавливали метанолом (0,5 мл) и обрабатывали
ультразвуком для содействия диспергированию. Все образцы очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомые продукты (в виде аммониевых солей, ели это являлось подходящим). Для удаления защитной группы Вое все очищенные образцы растворяли в дихлорметане (ДХМ) (0,2 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (ТФК) (0,2 мл) . Образцы закрывали и выдерживали при 2 0°С в течение 18 ч. Затем растворитель удаляли в потоке азота и получали искомый продукт, в этом случае 54 мг. LCMS [LCMS 1 ] Rt 1,59 мин, m/z (ES+) 431 (М+Н) .
Режим одиночной реакции
К раствору промежуточного пара-фторсульфонамида (0,075 ммоля, см. таблицы 2 или 3, в которых указан конкретный использующийся промежуточный пара-фторсульфонамид) и спирта (1 экв. см. таблицы 2 или 3, в которых указан конкретный использующийся спирт) в диметилсульфоксиде (ДМСО) (б,б мл/ммоль) при перемешивании на воздухе при 2 0°С одной порцией добавляли твердый гидрид натрия (1 экв., 60% дисперсия в масле). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 16 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-((1-(2,2,2-трифторэтил)пиперидин-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (пример 13)
К раствору N-(2, 4-диметилфенил)-4-фтор-Ы-
изобутилбензолсульфонамида (25 мг, 0, 075 ммоля) и (1-(2,2,2-трифторэтил)пиперидин-4-ил)метанола (14,70 мг, 0,075 ммоля) в диметилсульфоксиде (ДМСО) (0,5 мл) при перемешивании на воздухе при 20°С одной порцией добавляли гидрид натрия (примерно 2,98 мг, 0,075 ммоля, 60% дисперсия в масле). Реакционную смесь
перемешивали при 2 0°С в течение 16 ч. Реакцию осторожно останавливали метанолом (0,5 мл) и водой (0,5 мл) . Растворитель концентрировали в вакууме (Biotage VI0) и получали неочищенный продукт в ДМСО (0,5 мл) . Остаток переносили в дополнительное
количество ДМСО (0,5 мл) и метанола (1 мл), затем очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - муравьиная кислота). Соответствующие фракции выпаривали в потоке азота и получали искомый продукт, 11,5 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,51 мин, m/z (ES+) 513 (М+Н).
Путь б
P-R
В сосуд добавляли промежуточный фенол (1 экв., см. таблицу 3, в которой указан конкретный использующийся фенол), спирт
(1,25 экв., см. таблицу 3, в которой указан конкретный
использующийся спирт) и (4-
(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,10-
гептадекафтордецил)фенил)дифенилфосфин (Fluoroflash, 1,5 экв.). Добавляли тетрагидрофуран (ТГФ) (14 мл/ммоль), затем диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат (ДИАД) (1,25 экв.). Сосуды закрывали и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-3-(2-морфолиноэтокси)бензолсульфонамида (пример 53)
В сосуд добавляли N-(2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-N-
изобутилбензолсульфонамид (76,9 мг, 0,231 ммоля), 2-
морфолиноэтанол (0,035 мл, 0,288 ммоля) и (4-
(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,10-
гептадекафтордецил)фенил)дифенилфосфин (204 мг, 0,288 ммоля). Добавляли тетрагидрофуран (ТГФ) (4 мл), затем диизопропилдиазен-1,2-дикарбоксилат (ДИАД) (0,056 мл, 58,3 мг, 0,288 ммоля). Сосуд для проведения реакции герметизировали и перемешивали в течение ночи при 2 0°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и затем разбавляли этилацетатом (25 мл) и водой (25 мл) .
Органическую фракцию отделяли, сушили и концентрировали в вакууме и получали неочищенный продукт. Неочищенный продукт растворяли в ДМФ:Н20 (9:1) (1 мл) и загружали во фторсодержащую колонку (предварительно кондиционированную с помощью 1 мл ДМФ, затем б мл МеОН:Н20 (5:1)) . Частично очищенное вещество элюировали с помощью б мл МеОН:Н20 (5:1) . Его концентрировали и растворяли в смеси 1:1 МеОН:ДМСО (1 мл), затем дополнительно очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор муравьиная кислота). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 17 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,03 мин, m/z (ES+) 447 (М+Н).
Путь 7
К раствору промежуточного фенолсульфонамида (1 экв.) и спирта (3 экв.) в толуоле (42 мл/ммоль) при перемешивании на воздухе при 20°С в течение 1 мин добавляли раствор 2-
(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрила (1 экв.) в толуоле (14
мл/ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 2 4
ч. При необходимости дополнительно добавляли 2-
(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрил (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-2-этокси-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (пример 35)
К раствору N-(2,4-диметилфенил)-2-гидрокси-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (15,7 мг, 0,035 ммоля) и этанола (4,8 мг, 0,105 ммоля) в толуоле (1,5 мл) при перемешивании на воздухе при 2 0°С в течение 1 мин добавляли
раствор 2-(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрил (8,47 мг, 0,035 ммоля) в толуоле (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при
20°С в течение 24 ч. Затем дополнительно добавляли 2-(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрил (8,47 мг, 0,035 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и остаток очищали с помощью предварительно заполненного картриджа с диоксидом кремния при элюировании смесью этилацетат-циклогексан (0-50%). Соответствующие фракции выпаривали и получали искомый продукт, 8,7 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,48 мин, m/z (ES+) 476 (М+Н).
Путь 8
Группа реакций
К раствору спирта (1 экв., см. таблицу 2 или 3, в которой указан конкретный использующийся спирт) и 4-(бромметил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида (1 экв.) в 2-метилтетрагидрофуране (2-MeTHF) (13 мл/ммоль) при перемешивании в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли гидрид натрия (60% дисперсия в масле, 1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 3 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-((оксетан-3-илметокси)метил)бензолсульфонамида (пример 19)
К раствору оксетан-3-илметанола (7 мг, 0,075 ммоля) и 4-(бромметил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида (31 мг, 0,075 ммоля) в 2-метилтетрагидрофуране (2-MeTHF) (1 мл) при перемешивании в атмосфере азота при комнатной температуре
добавляли гидрид натрия (60% дисперсия в масле, примерно 2 мг, 0,075 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 3 ч, затем реакцию останавливали водой (75 мкл) . Растворитель удаляли в потоке азота и получали неочищенный продукт. Затем неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 2,4 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,34 мин, m/z (ES+) 418 (М+Н). Режим одиночной реакции
К раствору неочищенного 4-(бромметил)-N-(2,4-диметилфенил)-
N-изобутилбензолсульфонамида (1 экв.) и спирта (1 экв.) в 2-
метилтетрагидрофуране (2-MeTHF) (8,2 мл/ммоль) и
диметилсульфоксиде (ДМСО) (4,1 мл/ммоль) одной порцией добавляли гидрид натрия (примерно 1 экв., 60% дисперсия в масле). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 16 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблицах 2 или 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-(((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)метил)бензолсульфонамида (пример 18)
К раствору неочищенного 4-(бромметил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида (100 мг, 0,122 ммоля) и
(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанола (14,15 мг, 0,122 ммоля) в 2-метилтетрагидрофуране (2-MeTHF) (1 мл) и диметилсульфоксиде
(ДМСО) (0,5 мл) одной порцией добавляли гидрид натрия (примерно 4,87 мг, 0,122 ммоля, 60% дисперсия в масле). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 16 ч. Затем реакцию останавливали метанолом (0,5 мл) и водой (0,5 мл) и концентрировали в вакууме и получали остаток в ДМСО. Его разбавляли дихлорметаном (10 мл) и водой (10 мл) и энергично перемешивали в течение 10 мин. Слои разделяли с помощью гидрофобной фритты и органическую фракцию выпаривали и получали неочищенный продукт. Затем образец очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - муравьиная кислота). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 4,2 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,4 4 мин,
Трифторуксусная кислота
ДХМ
Удаление защитной группы Вое из конечных продуктов проводили следующим образом: Содержащее защитную группу Вое соединение растворяли в смеси дихлорметана (ДХМ) (1,0 мл/0,1 ммоля) и трифторуксусной кислоты (ТФК) (1,0 мл/0,1 ммоля). Раствор перемешивали в течение 30 мин при 20°С в атмосфере азота. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-4-[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамида (пример 39)
Трет-бутил-цис-4-((4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенокси)метил)-З-фторпиперидин-1-карбоксилат растворяли в дихлорметане (ДХМ) (1,0 мл) и трифторуксусной кислоте (ТФК) (1,0 мл) . Раствор перемешивали в течение 30 мин при 2 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали в потоке азота. Затем неочищенный не содержащий защитную группу продукт очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор -карбонат аммония). Соответствующие фракции выпаривали в вакууме и получали не содержащий защитную группу продукт, 15 мг. LCMS
Группа реакций
Раствор промежуточного эпоксид-сульфонамида (7 экв.)
[LCMS2] Rt 1,38 мин, m/z (ES+) 449 (М+Н).
готовили в этаноле (0,5 мл/ммоль х 7) и для каждой отдельной реакции дозировали аликвоту (составляющую 1 экв.). К каждой реакционной смеси добавляли один из аминов (1,1 экв.) в виде раствора в этаноле (0,5 мл/ммоль), затем триэтиламин (2 экв.). Затем реакционные смеси нагревали при 50°С в течение до 2 дней. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблице 3. Примечание: В некоторых случаях выделяли оба региоизомера.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-((З-метилоксетан-З-ил)амино)этил)-N-изобутилбензолсульфонамида (пример 72)
Раствор N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-
ил)бензолсульфонамида (173 мг, 0,481 ммоля) готовили в этаноле
(1,75 мл) и дозировали по 0,25 мл/сосуд в 7 сосудов для каждой отдельной реакции. В один сосуд добавляли З-метилоксетан-З-амин
(0,076 ммоля) в виде раствора в этаноле (0,25 мл), затем триэтиламин (0,023 мл, 0,165 ммоля). Затем реакционную смесь нагревали при 50°С в течение выходных дней. Растворитель концентрировали в потоке азота и образец очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции выпаривали в потоке азота и получали продукт, 7,3 мг (выделяли только один региоизомер). LCMS [LCMS2] Rt 1,23 мин, m/z (ES+) 447 (М+Н). Режим одиночной реакции
При перемешивании к раствору промежуточного эпоксид-сульфонамида (1 экв.) в этаноле (1,5 мл/ммоль) при 2 5°С добавляли или амин (1,1 экв.) и триэтиламин (2,4 экв.), или амин (2 экв.) и реакционную смесь нагревали при 50°С в течение до 2 дней. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблице 3. Примечание: В некоторых случаях выделяли оба региоизомера.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-4-(2-гидрокси-1-морфолиноэтил)-N-изобутил-3-метилбензолсульфонамида
(пример 89) и N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутил-З-метилбензолсульфонамида (пример 90)
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-З-метил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (50 мг, 0,134 ммоля) в этаноле (200 мкл) при 25°С, добавляли морфолин
(12,83 мг, 0,147 ммоля) и триэтиламин (44,8 мкл, 0,321 ммоля) и
реакционную смесь нагревали при 50°С в течение 12 ч. Реакционную
смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass
directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Растворитель
удаляли в потоке азота и получали искомые региоизомерные
продукты: N-(2,4-диметилфенил)-4-(2-гидрокси-1-морфолиноэтил)-N-
изобутил-3-метилбензолсульфонамид (12 мг) и N-(2,4-
диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутил-З-метилбензолсульфонамид (16 мг) . LCMS [LCMS2] Rt 1,3 0 мин, m/z
(ES+) 461 (М+Н).
Путь 11
К суспензии промежуточного галогенсульфонамида (1 экв.), циклопропилбороновой кислоты (2,5 экв.), трициклогексилфосфина
(0,2 экв.) и трифосфата калия (3 экв.) в толуоле (18,6 мл/ммоль) и воде (0,9 мл/ммоль) добавляли ацетат палладия(II) (0,1 экв.). Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением при 120°С в течение 30 мин. Затем реакционную смесь пропускали через колонку с диоксидом кремния для удаления остатков палладия при элюировании метанолом. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике
(методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение З-циклопропил-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4
ил)метокси)бензолсульфонамида (пример 21)
К суспензии З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (100 мг, 0,215 ммоля), циклопропилбороновой кислоты (46,1 мг, 0,536 ммоля), трициклогексилфосфина (12,03 мг, 0,043 ммоля) и трифосфата калия (137 мг, 0, 644 ммоля) в толуоле (4 мл) и воде
(0,2 мл) добавляли ацетат палладия(II) (примерно 4,82 мг, 0,021 ммоля), так чтобы все частицы находились ниже уровня растворителя. Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Emrys Optimiser) при 120°С в течение 3 0 мин. После охлаждения, реакционную смесь пропускали через предварительно заполненную колонку с диоксидом кремния
(500 мг) при элюировании метанолом для удаления остатков палладия. Раствор реакционной смеси выпаривали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор муравьиная кислота). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 34 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,55 мин, m/z (ES+) 472 (М+Н).
Путь 12
К раствору промежуточного хлорсульфонамида (1 экв.) в N-метил-2-пирролидоне (NMP) (4,6 мл/ммоль) добавляли цианид меди(I) (2 экв.). Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 220°С в течение 2 ч. При необходимости реакционную смесь дополнительно нагревали при 22 0°С в течение еще б ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в
таблице 3.
Конкретный пример - Получение 2-циано-Ы-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (пример 38)
К раствору 2-хлор-Ы-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (200 мг, 0,429 ммоля) в Ы-метил-2-пирролидоне (NMP) (2 мл) добавляли цианид меди(1) (77 мг, 0,858 ммоля). Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением
(Biotage Initiator) при 220°С в течение 2 ч. После охлаждения реакционной смеси анализ с помощью LCMS указывал на наличие некоторого количества искомого продукта. Реакционную смесь повторно нагревали микроволновым излучением при 22 0°С в течение еще б ч. Реакцию медленно и осторожно останавливали разбавленной НС1 (5 мл) и ДХМ (5 мл) . Смесь пропускали через гидрофобную фритту и органический слой собирали и концентрировали в вакууме и получали коричневое масло. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 56 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,47 мин, m/z (ES+) 457 (М+Н).
Путь 13
При перемешивании к раствору промежуточного
цианосульфонамида (1 экв.) в этаноле (2,5 мл/ммоль) добавляли 4н раствор гидроксида натрия (20 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 15 ч, затем охлаждали и этанол удаляли в вакууме. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение 5-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-2-(оксан-4-илметокси)бензойной кислоты (пример 91)
При перемешивании к раствору З-циано-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензолсульфонамида (50 мг, 0,110 ммоля) в этаноле (1 мл) при 25°С добавляли гидроксид натрия (0,548 мл, 2,190 ммоля). Затем реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 15 ч, затем охлаждали, этанол удаляли и неочищенное вещество подвергали распределению между этилацетатом (20 мл) и НС1 (2н, 15 мл) . Органический слой отделяли, сушили над MgS04 и растворитель удаляли в вакууме и получали желтое масло. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep
(модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 16,1 мг. LCMS
[LCMS2] Rt 0,91 мин, m/z (ES+) 476 (М+Н).
Промежуточный хлорбензолсульфонамид (1 экв.),
трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (каталитическое
количество, 1 мол.%), 2-ди-трет-бутилфосфино-2',4',б'-
триизопропилбифенил (каталитическое количество, 1 мол.%) и гидроксид калия (3 экв.) добавляли в сосуд для микроволновой печи. Реагенты растворяли в 1,4-диоксане (2,8 мл/ммоль) и воде (2,8 мл/ммоль). Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением при 150°С в течение 2 ч. Затем проводили обработку и очистку по соответствующей методике (методикам), указанным в таблице 3.
Конкретный пример - Получение N-(2,4-диметилфенил)-2-гидрокси-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамида (пример 26)
2-Хлор-И-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид (200 мг, 0,429 ммоля), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (3,93 мг, 4,29 мкмоля), 2-ди-трет-бутилфосфино-2',4',б'-триизопропилбифенил (1,822 мг, 4,2 9 мкмоля) и гидроксид калия (72,2 мг, 1,287 ммоля) добавляли в сосуд для микроволновой печи. Реагенты растворяли в 1,4-диоксане (1,2 мл) и воде (1,2 мл) . Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, добавляли 2н NaOH и реакционную смесь разбавляли этилацетатом. Органическую фазу отделяли и промывали 2н НС1. Органическую фазу отделяли, сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде желтого масла. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Затем соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 32 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,51 мин, m/z (ES+) 448 (М+Н).
Е12
S32
Apollo Scientific
0,15
Q и F
1, 48
432
LCMS1
Е13
S33
UKOrgSynthesi s
Нет
0, 075
Q и F
1,51
513
LCMS1
Е14
S35
Fluorochem
0, 15
Q и F
1,28
448
LCMS1
Е15
S36
Tokyo Chemical Industry UK Ltd
0, 15
Q и F
1, 14
448
LCMS1
Е16
S37
Tokyo Chemical Industry UK Ltd
0, 15
Q и F
1, 15
448
LCMS1
Е17
S38
Czech. 1983, CS 203705 Bl 19810331
Нет
0, 198
Q и F
1, 05
475
LCMS1
Е18
S32
Apollo Scientific
Нет
0, 122
Q и А
1, 44
446
LCMS1
Е19
S34
Pharmablock
0, 075
1, 34
418
LCMS1
Е20
111
S32
Apollo Scientific
0, 034
Q и F
1, 52
466
LCMS1
Е21
Rll
E20
S39
Fluorochem
Нет
0, 215
1, 55
472
LCMS1
Е22
RIO
146
S40
Aldrich
Нет
0,556
1, 30
447
LCMS2
Е23
114
S32
Apollo Scientific
0, 05
1, 53
408
LCMS1
Е24
115
S32
Apollo Scientific
0,1
Q и F
1,51
446
LCMS1
Е25
116
S32
Apollo Scientific
0,1
Q и F
1,51
446
LCMS1
Е26
R14
Е27
Нет
0,429
1,51
448
LCMS2
Е27
S32
Apollo Scientific
Нет
4, 97
Q и F
1, 57
486
LCMS2
Е28
118
S32
Apollo Scientific
0,1
Q и F
1, 46
450
LCMS1
Е29
119
S32
Apollo Scientific
0,1
Q и F
1, 46
450
LCMS1
ЕЗО
120
S32
Apollo Scientific
Нет
0, 091
1, 40
462
LCMS1
Е31
S41
Sigma Aldrich
0, 15
Q и F
1, 41
418
LCMS1
Е32
R14
Е20
Нет
0,429
1, 37
448
LCMS2
ЕЗЗ
S40
Alfa Aesar
Нет
0,089
1, 38
403
LCMS1
Е34
S42
Sigma Aldrich
0, 15
Q и F
1, 42
418
LCMS1
Е35
Е26
S43
Sigma Aldrich
Нет
0, 035
1, 48
476
LCMS1
ЕЗб
S44
Helv. Chim. Acta. 2004, 87 (1), 90105
0,3
Q и F
1, 03
447
LCMS1
Е37
117
S32
Apollo Scientific
0,1
1,41
457
LCMS1
Е38
R12
Е27
Нет
0,429
Q и А
1, 47
457
LCMS2
Е39
137
Нет
0, 063
1, 38
449
LCMS2
Е40
S45
Sigma Aldrich
0,1
Q и F
1,70
430
LCMS1
Е41
S46
Asdi
Incorporated
0,1
Q и F
1,76
458
LCMS1
Е42
S47
Sigma Aldrich
0,1
Q и F
1, 35
432
LCMS1
Е43
S48
Tet. Lett.,
2003, 44 (42), 78097812
0,1
Q и F
1, 00
453
LCMS1
Е44
S49
Milestone PharmTech LLC
0,1
Q и F
1, 47
432
LCMS1
Е45
S50
Fluorochem
0,1
Q и F
1, 18
431
LCMS1
Е46
S51
www.hit21ead. com
0,149
Q и F
1, 35
434
LCMS1
Е47
S52
TCI Europe NV
0,149
Q и F
1, 72
444
LCMS1
Е48
S53
TCI Europe NV
0,149
Q и F
0, 98
461
LCMS1
Е49
S54
J. Org. Chem., 2008, 73 (9), 36623665
0,3
Q и F
1, 01
433
LCMS1
Е50
128
См. текст
0,3
Q и F
0, 89
433
LCMS1
Е51
S55
Sigma Aldrich
0,149
Q и F
1, 49
432
LCMS1
Е52
138
Нет
0, 024
0, 97
461
LCMS1
Е53
130
S56
Aldrich
Нет
0,288
А и FL
1, 03
447
LCMS1
Е54
S57
Tet. Lett.,
1996, 37 (16), 28652868
0,115
Q и F
1,29
448
LCMS1
Е55
S58
Activate Scientific
0, 15
Q и F
1, 01
449
LCMS1
Е56
131
S59
ABCR GmbH & CO. KG
0, 099
1, 13
458
LCMS1
Е57
130
S32
Apollo Scientific
Нет
0,288
А и FL
1, 47
432
LCMS1
Е58
S60
Sigma Aldrich
0, 115
Q и F
1, 09
480
LCMS1
Е59
S61
UkrOrgSynthes is Ltd.
0,149
Q и F
1, 04
431
LCMS1
Е60
139
Нет
0, 021
Е и S
1, 03
463
LCMS1
Е61
S62
Asdi
Incorporated
0,149
Q и F
1, 01
475
LCMS1
Е62
122
S32
Apollo Scientific
0, 05
1, 53
468
LCMS1
ЕбЗ
S63
Aldrich
0, 15
Q и F
1, 00
475
LCMS1
Е64
S64
J. Org. Chem., 19 61,
26, 1519
0, 15
Q и F
1, 04
445
LCMS1
Е65
S65
SynChen Inc
Нет
0, 095
Q и F
0, 98
445
LCMS1
Ебб
S66
Tyger Scientific Inc.
0,3
Q и F
1, 03
417
LCMS1
Е67
148
Нет
0,446
1, 00
417
LCMS1
Е68
149
Нет
0, 214
1, 03
417
LCMS1
Е69
S67
Manchester
Organics
Limited
0,149
Q и F
0, 96
403
LCMS1
Е70
S50
Fluorochem Ltd
0, 075
Q и F
1, 18
445
LCMS1
Е71
E26
S68
Sigma Aldrich
Нет
0, 076
1,50
490
LCMS1
Е72
RIO
146
S69
Fluorochem Limited
0, 069
1, 23
447
LCMS2
Е73
RIO
146
S70
Sigma Aldrich
0, 069
1,56
445
LCMS2
Е74
RIO
146
S71
Syntech
Development
Company
0, 069
1,24
495
LCMS2
Е75
RIO
146
S72
Aldrich
0, 069
1, 46
463
LCMS2
Е76
RIO
146
S73
Tyger Scientific Inc.
0, 069
1,20
477
LCMS2
Е77
RIO
146
S74
Sigma Aldrich
0, 069
1, 44
463
LCMS2
Е78
RIO
146
S70
Sigma Aldrich
1, 069
1, 47
445
LCMS2
Е79
S76
Activate Scientific
0,1
1, 23
433
LCMS1
Е80
S77
emolecules
0,15
1, 11
466
LCMS1
Е81
S78
emolecules
0,15
1, 10
466
LCMS1
Е82
RIO
150
S79
Milestone PharmTech LLC
0, 075
1,50
515
LCMS2
Е83
RIO
150
S40
Sigma Aldrich
0, 075
1, 37
481
LCMS2
Е84
RIO
150
S40
Sigma Aldrich
0, 075
1, 42
481
LCMS2
Е85
RIO
150
S80
Енамин
0, 075
1, 32
493
LCMS2
Е86
RIO
150
S81
Chembridge corporation
1, 075
1, 22
481
LCMS2
Е87
RIO
143
S40
Sigma Aldrich
Нет
0,106
1,36
465
LCMS2
Е88
RIO
144
S40
Sigma Aldrich
Нет
0, 054
1,39
461
LCMS2
Е89
RIO
147
S40
Sigma Aldrich
Нет
0, 134
1, 23
461
LCMS2
Е90
RIO
147
S40
Sigma Aldrich
Нет
0, 134
1, 30
461
LCMS2
Е91
R13
E97
Нет
0,11
1, 27
476
LCMS2
Е92
112
S32
Apollo Scientific
Нет
1, 791
1, 52
510/512
LCMS1
Е93
Rll
E92
S39
Sigma Aldrich
Нет
0, 098
F и Е
1, 53
472
LCMS1
Е94
RIO
146
S82
3BScientific corporation
0,08
1, 25
461
LCMS2
Е95
RIO
146
S83
Енамин
0,08
1, 42
475
LCMS2
Е96
RIO
146
S84
Aldrich
0,08
1,24
461
LCMS2
Е97
R12
E98
Нет
0,751
1, 46
457
LCMS2
Е98
111
S32
Apollo Scientific
Нет
2,82
1,56
466
LCMS2
Е99
RIO
146
S84
Aldrich
0,08
1, 12
461
LCMS2
Е100
RIO
146
S85
Fluorochem Ltd
0,08
1, 27
461
LCMS2
E101
RIO
146
S40
Aldrich
Нет
0,556
1, 25
447
LCMS2
Пример 102: N-(2,4-Диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(5-
оксопирролидин-2-ил)бензолсульфонамид
Промежуточный продукт 52: Метил-4-(4-(N-(2,4-
диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-4-нитробутаноат
К раствору метил-4-нитробутаноата (0,094 мл, 0,757 ммоля), 4-бром-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида (200 мг, 0,505 ммоля), ди-трет-бутил(2'-метил-[1,1'-бифенил]-2-ил)фосфина (15,77 мг, 0,050 ммоля) и карбоната цезия (197 мг, 0, 606 ммоля) в 1,2-диметоксиэтан (ДМЭ) (3 мл) при комнатной температуре добавляли бис(дибензилиденацетон)палладий(0) (14,51 мг, 0,025 ммоля). Сосуд продували азотом в течение 2 мин, затем герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Emrys Optimiser) при 120°С в течение 60 мин. Реакционную смесь охлаждали, затем пропускали через предварительно заполненный картридж с диоксидом кремния (Si), элюировали метанолом (15 мл). Полученный фильтрат выпаривали в вакууме, затем очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - муравьиная кислота). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт (чистота ~70%), 96 мг, который прямо использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS [LCMS1] Rt 1,41 мин, m/z (ES+) 463 (М+Н).
Пример 102: N- (2, 4-Диметилфенил) -Ы-изобутил-4-(5-
оксопирролидин-2-ил)бензолсульфонамид
К суспензии палладия на угле (22,09 мг, 0,208 ммоля) в этаноле (5 мл) при перемешивании в атмосфере азота при комнатной температуре по каплям добавляли раствор метил-4-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-4-нитробутаноата (96 мг, 0, 208 ммоля) в этаноле (5 мл) . Сосуд осторожно заполняли водородом и реакционную смесь перемешивали
при 2 0°С в течение 2 ч. Анализ с помощью LCMS указывал на израсходование исходного вещества. Реакционную смесь фильтровали через целит в атмосфере азота и фильтрат выпаривали в вакууме и получали желтую смолу. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - муравьиная кислота). Соответствующие фракции концентрировали в потоке
азота и получали искомый продукт, 1,01 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,17 мин, m/z (ES+) 400 (М+Н, слабый) 442 (M+MeCN+H)
Пример 103: N-(2,4-Диметилфенил)-4-(2-
(гидроксиметил)морфолино)-N-изобутилбензолсульфонамид
К раствору морфолин-2-илметанола (30 мг, 0,256 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (3 мл) при перемешивании в атмосфере азота при комнатной температуре по каплям добавляли триэтиламин (0,071 мл, 0,512 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем добавляли N-(2,4-диметилфенил)-4-фтор-Ы-изобутилбензолсульфонамид (86 мг, 0,256 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ с помощью LCMS указывал на отсутствие продукта, поэтому растворитель удаляли в потоке азота и неочищенное вещество обрабатывали с помощью LiHMDS (1М в ТГФ, 0,768 мл, 0,768 ммоля) и ТГФ (2 мл). Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения анализ с помощью LCMS указывал на некоторую степень превращения, поэтому сосуд для проведения реакции повторно герметизировали и повторно нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение еще 30 мин. С помощью LCMS не обнаруживали дополнительного превращения, так что к смеси добавляли этилацетат (10 мл) и органическую фазу промывали водой (10 мл) затем сушили с помощью гидрофобной фритты. Растворитель удаляли в потоке азота и получали неочищенный продукт. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 4 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,2 9 мин, m/z (ES+) 433 (М+Н).
Пример 104: N-(2,4-Диметилфенил)-3,5-дифтор-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
а) Промежуточный продукт 53: 4-BpoM-N-(2,4-диметилфенил)-3, 5-дифтор-Ы-изобутилбензолсульфонамид
К раствору 4-бром-З, 5-дифторбензол-1-сульфонилхлорида
(1462 мг, 5,02 ммоля) в пиридине (10 мл) при 20°С добавляли N-изобутил-2,4-диметиланилин (889 мг, 5,01 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 2 ч. Затем реакционную смесь выпаривали в вакууме и повторно растворяли в этилацетат. Органическую фазу промывали насыщенным раствором карбоната натрия (25 мл) , сушили с помощью гидрофобной фритты и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт в виде желтого масла, 2,06 г. LCMS [ LCMS 2 ] Rt 1,57 мин, m/z (ES+) 432/434
(М+Н) .
b) Промежуточный продукт 54: N-(2,4-Диметилфенил)-3, 5-дифтор-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамид
В сосуд добавляли трифтор(винил)борат калия (0,744 г, 5,55
ммоля), трифенилфосфин (0,073 г, 0,278 ммоля), 4-бром-И-(2,4-
диметилфенил)-3,5-дифтор-Ы-изобутилбензолсульфонамид (2 г, 4,63
ммоля), суспензию в тетрагидрофуране (ТГФ) (22 мл), карбонат
цезия (4,52 г, 13,88 ммоля), воду (2,200 мл) и хлорид
палладия(II) (0,016 г, 0,0 93 ммоля). Смесь, разделенную точно
надвое, помещали в 2 сосуда для микроволновой печи и затем
сосуды герметизировали и нагревали микроволновым излучением
(Biotage Initiator) при 140°С в течение 30 мин. Анализ с
помощью LCMS указывал на некоторую степень превращения, поэтому
к каждой реакционной смеси дополнительно добавляли 0,5 экв.
трифтор(винил)борат калия и дополнительное количество воды (2
мл) и ТГФ (2 мл). Реакционные смеси повторно нагревали
микроволновым излучением при 14 0°С в течение еще 1 ч. Затем
реакционные смеси разбавляли дихлорметаном (5 мл) и водой (2
мл) , фильтровали через целит и сушили с помощью гидрофобной
фритты. Органические вещества концентрировали и очищали с
помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в
градиентном режиме 0-25% этилацетат-циклогексан).
Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали две порции искомого продукта, 7 69 мг и 856 мг, в виде желтых масел. LCMS [LCMS2] Rt 1,60 мин, m/z (ES+) 380 (М+Н).
c) Промежуточный продукт 55: N-(2,4-Диметилфенил)-3, 5-дифтор-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид
c)
К раствору N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамида (1,5 г, 3,95 ммоля) в дихлорметане (ДХМ) при 0°С добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК) (2,73 г, 15,81 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при температуре от 0°С до 25°С. Затем дополнительно добавляли МХПБК (1,364 г, 7,91 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще б ч. Затем реакционную смесь промывали водой (2 мл) , раствором гидроксида натрия (2М, 2 мл) и рассолом (2 мл) , затем выпаривали в вакууме. Неочищенное вещество очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0100% дихлорметан-циклогексан). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 926 мг, в виде желтого масла. LCMS [LCMS2] Rt. 1,45, m/z (ES+) 396 (М+Н).
d) Пример 104: N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
К раствору N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (150 мг, 0,379 ммоля) в этаноле (1,5 мл) при 25°С добавляли морфолин (0, 033 мл, 0,379 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение б ч. Смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 9 мг, в виде бесцветного масла. LCMS [LCMS2] Rt 1,33 мин, m/z (ES+) 483 (М+Н).
Пример 105: N-(5-Хлор-2-фторфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
а) Промежуточный продукт 56: N-(5-Хлор-2-фторфенил)-N-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(5-хлор-2-фторфенил)-N-изобутил-4-винилбензолсульфонамида (824 мг, 2,240 ммоля) в дихлорметане (ДХМ) при 0°С добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК) (1546 мг, 8,96 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение б ч при температуре от 0°С до 2 5°С. Затем
реакционную смесь промывали водой (5 мл), раствором гидроксида натрия (2М, 5 мл) и рассолом (5 мл), затем выпаривали в вакууме и получали искомый продукт (503 мг) . LCMS [LCMS2] Rt 1,34 мин, m/z (ES+) 384 (М+Н).
b) Пример 105: N-(5-хлор-2-фторфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(5-хлор-2-фторфенил)-N-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (200 мг, 0,521 ммоля) в этаноле (2 мл) при 25°С добавляли морфолин (0,045 мл, 0,521 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 24 ч. Затем смесь очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 51,4 мг. LCMS [ LCMS 2 ] Rt 1,25 мин, m/z (ES+) 471 (М+Н) .
Пример 106: N-(2,4-Диметилфенил)-З-фтор-4-(1-гидрокси-2-((З-метилоксетан-З-ил)амино)этил)-N-изобутилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-3-фтор-Ы-изобутил-4- (оксиран-2-ил) бензолсульфонамида (20 мг, 0,053 ммоля) в этаноле при 25°С добавляли З-метилоксетан-З-амин (5,08 мг, 0,058 ммоля). Затем реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 18 ч. Затем добавляли еще порцию З-метилоксетан-3-амина (5,08 мг, 0,058 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 8 ч при 50°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 11,2 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,25 мин, m/z (ES+) 465 (М+Н).
Пример 107: N-(2,4-Диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-((3-метилоксетан-3-ил)амино)этил)-N-изобутил-З-метилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-З-метил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (20 мг, 0,054 ммоля) в этаноле при 25°С добавляли З-метилоксетан-З-амин (5,08 мг, 0,058 ммоля). Затем реакционную смесь перемешивали
при 50°С в течение 18 ч. Затем добавляли еще порцию 3-метилоксетан-3-амина (5,08 мг, 0,058 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 8 ч при 50°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 9,3 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,25 мин, m/z (ES+) 461 (М+Н).
Пример 108: N-(2,4-Диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-((3-метилоксетан-3-ил)амино)этил)-Ы-изобутил-2-метилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-2-метил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (20 мг, 0,054 ммоля) в этаноле при 25°С добавляли З-метилоксетан-З-амин (5,08 мг, 0,058 ммоля). Затем реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 18 ч. Затем добавляли еще порцию 3-метилоксетан-3-амина (5,08 мг, 0,058 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 8 ч при 50°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 5,2 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,23 мин, m/z (ES+) 461 (М+Н).
Пример 109: N-(2,4-Диметилфенил)-З-гидрокси-4-(2-гидрокси-
1- морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
а) Промежуточный продукт 57: N-(2,4-Диметилфенил)-3-гидрокси-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамид
З-Хлор-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-
винилбензолсульфонамид (250 мг, 0,662 ммоля),
трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (6,06 мг, 6,62 мкмоля),
2- ди-трет-бутилфосфино-2',4',б'-триизопропилбифенил (2,81 мг, 6,62 мкмоля) и гидроксид калия (111 мг, 1,985 ммоля) добавляли в сосуд для микроволновой печи. Затем добавляли 1,4-диоксан (1 мл) и воду (1, 000 мл) . Сосуд для проведения реакции герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage
Initiator) при 150°С в течение 2 ч. Анализ с помощью LCMS показывал наличие искомого продукта и нескольких побочных
продуктов. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0-10 0% этилацетат-циклогексан) . Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 100,8 мг, в виде желтого смолообразного вещества. LCMS [LCMS2] Rt 1,42 мин, m/z (ES+) 360 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 58: N-(2,4-Диметилфенил)-3-гидрокси-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид
К раствору N-(2,4-диметилфенил)-3-гидрокси-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамида (100,8 мг, 0,280 ммоля) в дихлорметане
(ДХМ) (20 мл) при перемешивании в атмосфере азота при 0°С порциями добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК)
(194 мг, 1,122 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем в течение 72 ч при комнатной температуре. К смеси добавляли ДХМ (20 мл) и органическую фазу промывали водой (20 мл) , сушили с помощью гидрофобной фритты и концентрировали в потоке азота и получали неочищенный продукт, 60 мг, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS [LCMS2] Rt 1,42 мин, m/z (ES-) 374 (М-Н).
c) Пример 109: N- (2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-4-(2-гидрокси-1-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-3-гидрокси-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (60 мг, 0,160 ммоля) в этаноле (1 мл) при 25°С добавляли морфолин (30,6 мг, 0,352 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 12 ч. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали один региоизомер искомого продукта, 11,2 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,25 мин, m/z (ES+) 463 (М+Н).
Пример 110: Метил-5-(N-(2,4-диметилфенил) -N-
изобутилсульфамоил)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензоат
а) Промежуточный продукт 59: Метил-5-(N-(2,4-
диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-метоксибензоат
При перемешивании к раствору метил-5-(хлорсульфонил)-2-метоксибензоата (1 г, 3,78 ммоля) в пиридине (3 мл) при 25°С добавляли Ы-изобутил-2,4-диметиланилин (0,670 г, 3,78 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч, затем выдерживали в течение 12 ч. Пиридин выпаривали в вакууме и получали желтое масло, которое очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (0-50% этилацетат-циклогексан). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 1,4 85 г, в виде бесцветного масла. LCMS [LCMS2] Rt 1,37 мин, m/z (ES+) 406 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 60: Метил-5-(N-(2,4-
диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-гидроксибензоат
Метил-5-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-метоксибензоат (1,485 г, 3,66 ммоля) растворяли в дихлорметане
(ДХМ) (10 мл) и охлаждали до -7 8°С. Затем по каплям добавляли раствор трибромида бора в ДХМ (1М, 18,31 мл, 18,31 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота. Затем реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. К реакционной смеси по каплям добавляли воду (20 мл) и неочищенный продукт экстрагировали в органическую фазу, подвергая его распределению между ДХМ и водой. Водную фазу дважды промывали с помощью ДХМ. Затем органическую фазу сушили и концентрировали в вакууме и получали неочищенный продукт. LCMS [ LCMS 2 ] Rt 1,42 мин, m/z (ES+) 392
(М+Н) .
c) Пример 110: Метил-5-(N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензоат
К раствору метил-5-(N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)-2-гидроксибензоата (100 мг, 0,255 ммоля) и
(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанола (29,7 мг, 0,255 ммоля) в
толуоле (1,5 мл) при перемешивании на воздухе при комнатной
температуре добавляли раствор 2-
(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрила (61,7 мг, 0,255 ммоля) в
толуоле (0,5 мл). Затем реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 24 ч. Затем дополнительно добавляли 2-(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрил (61,7 мг, 0,255 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 ч. Растворитель выпаривали и пытались провести очистку с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали в потоке азота и получали смесь двух продуктов. Дополнительную очистку проводили с помощью mass directed autoprep (методика О), и получали искомый продукт, 25 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,44 мин, m/z (ES+) 490 (М+Н).
Пример 111: N-(2,4-Диметилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид
При перемешивании к раствору метил-5-(N-(2, 4-
диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензоата (20 мг, 0,041 ммоля) в тетрагидрофуране
(ТГФ) при 2 5°С добавляли триэтилборогидрид лития в ТГФ
(Superhydride(r), 1,1 М, 0, 037 мл, 0,041 ммоля) и реакционную
смесь перемешивали при 2 5°С в течение 15 ч. К реакционной смеси
добавляли разбавленную НС1 и перемешивали в течение 10 мин.
Затем реакционную смесь нейтрализовывали основанием и продукт
экстрагировали этилацетатом (3x10 мл) . Органические вещества
объединяли и сушили с помощью гидрофобной фритты, затем
концентрировали в потоке азота и получали неочищенный продукт.
Его очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в
градиентном режиме 0-50% этилацетат-циклогексан).
Соответствующие фракции объединяли и концентрировали в потоке азота и получали искомый продукт, 16,2 мг, в виде бесцветного масла. LCMS [LCMS2] Rt 1,33 мин, m/z (ES+) 462 (М+Н).
Пример 112: N-(4-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-((3-
метилоксетан-3-ил)амино)этил)-N-изобутилбензолсульфонамид
а) Промежуточный продукт 61: 4-Этил-Ы-изобут,иланилин
К иодиду калия (5342 мг, 32,2 ммоля), [Ср*1гС1г]2 (128 мг, 0,161 ммоля) и 4-этиланилину (2 мл, 16,09 ммоля) при комнатной температуре добавляли 2-метилпропан-1-ол (5,94 мл, 64,4 ммоля), затем воду (10 мл) . Сосуд для проведения реакции
герметизировали и нагревали микроволновым излучением (Biotage Initiator) при 150°С в течение 90 мин. После охлаждения реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и дихлорметаном (20 мл), затем энергично перемешивали в течение 3 мин. Органическую фазу отделяли с помощью гидрофобной фритты. Водную фазу разбавляли дополнительным количеством дихлорметана (10 мл) и повторно энергично перемешивали в течение 2 мин, затем органические вещества отделяли с помощью гидрофобной фритты. Объединенные органические фракции выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0-50% дихлорметан-циклогексан). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 2,612 г, в виде бледно-желтого масла. LCMS [LCMS1] Rt 0,96 мин, m/z (ES+) 178 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 62: N-(4-Этилфенил)-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамид
К раствору 4-этил-Ы-изобутиланилина (400 мг, 2,256 ммоля) в пиридине (5 мл) при перемешивании на воздухе при комнатной температуре одной порцией добавляли 4-винилбензол-1-сульфонилхлорид (760 мг, 3,75 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 3 0 мин, затем выдерживали в течение 16 ч. Растворитель выпаривали в вакууме (Vaportec VI0) и получали неочищенный продукт, который затем очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 050% этилацетат-циклогексан). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 94 0 мг, в виде бесцветного смолообразного вещества. LCMS [LCMS1] Rt 1,44 мин, m/z (ES+) 344 (М+Н).
c) Промежуточный продукт 63: N-(4-Этилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид
Готовили раствор N-(4-этилфенил)-Ы-изобутил-4-
винилбензолсульфонамида (775 мг, 2,256 ммоля) в дихлорметане (ДХМ) (60 мл) и при 0°С добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК) (1557 мг, 9,02 ммоля). При перемешивании
реакционной смеси давали нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение выходных дней при 2 0°С. Затем реакционную смесь промывали водой (30 мл), раствором гидроксида натрия (2М, 30 мл) и рассолом (30 мл). Органический слой сушили с помощью гидрофобной фритты и концентрировали в вакууме и получали искомый продукт, 8 68 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,33 мин, m/z
(ES+) 360 (М+Н).
d) Пример 112: N-(4-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-((3-метилоксетан-3-ил)амино)этил)-N-изобутилбензолсульфонамид
Готовили раствор N-(4-этилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид (400 мг, 1,113 ммоля) в этаноле (6 мл) и добавляли З-метилоксетан-З-амин (388 мг, 4,45 ммоля). Реакционную смесь нагревали при 50°С и перемешивали в течение 16 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт, который затем очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (0-100% этилацетат-циклогексан + 0-20% метанол). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 170,7 мг, в виде белого твердого вещества. LCMS [ LCMS 2 ] Rt 1,21 мин, m/z (ES+) 447
(М+Н) .
Пример 113: N-(4-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
Готовили раствор N-(4-этилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид (400 мг, 1,113 ммоля) в этаноле (3 мл) и добавляли морфолин (0,38 9 мл, 4,4 5 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме (Vaportec VI0) и получали неочищенный продукт, который затем очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0-100% этилацетат-циклогексан+0-20% метанол). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт в виде бесцветного масла, которое затвердевало при выдерживании, 294, 9 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,30 мин, m/z (ES+) 447 (М+Н).
Пример 114: N-(2-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
a) Промежуточный продукт 64: 2-Этил-Ы-изобутиланилин
2-Этиланилин (0,102 мл, 0,825 ммоля), 2-метилпропан-1-ол
(0,3 05 мл, 3,3 0 ммоля), иодид калия (274 мг, 1,650 ммоля) и [Ср*1гС1г]2 (10,52 мг, 0,013 ммоля) добавляли в сосуд для микроволновой печи вместе с водой (1,5 мл) . Смесь нагревали, микроволновым излучением в течение 90 мин при 150°С. Добавляли дихлорметан (10 мл) и воду (10 мл) и фазы разделяли с помощью гидрофобной фритты. Водный слой дополнительно экстрагировали дихлорметаном (15 мл). Объединенные органические слои концентрировали в вакууме и очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0-50% дихлорметан-циклогексан). Соответствующие фракции концентрировали и получали продукт в виде прозрачного масла, 0,83 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,26 мин, m/z (ES+) 178 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 65: N-(2-Этилфенил)-Ы-изобутил-4-винилбензолсульфонамид
2-Этил-Ы-изобутиланилин (83 мг, 0,468 ммоля) растворяли в пиридин (3 мл) и добавляли 4-винилбензол-1-сульфонилхлорид (114 мг, 0,5 62 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение выходных дней. К раствору добавляли этилацетат (10 мл) и органическую фазу промывали водой (10 мл), раствором гидроксида натрия (2М, 2x10 мл) и рассолом (10 мл), затем сушили и концентрировали в вакууме и получали продукт, 12 9 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,43 мин, m/z (ES+) 344 (М+Н).
c) Промежуточный продукт 66: N-(2-Этилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамид
Готовили раствор N- (2-этилфенил)-Ы-изобутил-4-
винилбензолсульфонамид (129 мг, 0,376 ммоля) в дихлорметане (ДХМ) (2 мл) и добавляли мета-хлорпероксибензойную кислоту (МХПБК) (259 мг, 1,502 ммоля) при 0°С. Реакционную смесь
перемешивали в течение ночи при температуре от 0°С до 2 5°С. Затем добавляли дихлорметан (10 мл) и органические вещества промывали водой (10 мл), раствором гидроксида натрия (2М, 2x10 мл) и рассолом (10 мл) . Объединенные органические вещества сушили с помощью гидрофобной фритты и концентрировали в вакууме
и получали продукт в виде желтого масла, 106 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,31 мин, m/z (ES+) 360 (М+Н).
d) Пример 114: N-(2-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид
Готовили раствор N-(2-этилфенил)-Ы-изобутил-4-(оксиран-2-
ил)бензолсульфонамида (106 мг, 0,295 ммоля) в этаноле (2,5 мл)
и добавляли морфолин (103 мг, 1,179 ммоля). Реакционную смесь
нагревали при 50°С и перемешивали в течение 24 ч. Растворители
выпаривали и неочищенное вещество очищали с помощью флэш-
хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0-
50% этилацетат-циклогексан). Соответствующие фракции
концентрировали и получали искомый продукт в виде прозрачного
твердого вещества, 62 мг. LCMS [LCMS2 ] Rt 1,29 мин, m/z (ES+)
447 (М+Н).
Пример 115: 4- (1,2-Дигидрокси-З-морфолинопропил)-N-(2, 4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид, а-энантиомер)
a) Промежуточный продукт 67: (Е)-N-(2,4-Диметилфенил)-N-
изобутил-4-(3-морфолинопроп-1-ен-1-ил)бензолсульфонамид
Готовили суспензию 4-бром-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилбензолсульфонамида (200 мг, 0,505 ммоля), транс-3-бром-1-пропенилтрифторбората калия (126 мг, 0,555 ммоля), морфолина (0,088 мл, 1,009 ммоля), бис(трифенилфосфин)хлорид палладия(II) (10,63 мг, 0,015 ммоля) и карбоната цезия (493 мг, 1,514 ммоля) в диметилсульфоксиде (ДМСО) (1 мл) . Затем реакционную смесь нагревали микроволновым излучением при 140°С в течение 30 мин. Затем реакционную смесь пропускали через картридж для экстракции (SPE), содержащий включающую сульфоновую кислоту (SCX) твердую фазу, элюировали метанолом, затем раствором аммиака в метаноле, затем концентрировали в потоке азота. Очистку проводили с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали и объединяли и получали искомый продукт, 23,2 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,41 мин, m/z (ES+) 443 (М+Н).
b) Пример 115: 4-(1,2-Дигидрокси-З-морфолинопропил)-N-
(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид, а-энантиомер)
AD-Mix-alpha (73,4 мг, 0,052 ммоля) перемешивали при
комнатной температуре в трет-бутаноле (2 мл) и воде (2,000 мл)
до образования двух прозрачных фаз. К раствору добавляли
метансульфонамид (4,99 мг, 0,052 ммоля) и смесь охлаждали до
0°С. Добавляли (Е)-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(3-
морфолинопроп-1-ен-1-ил)бензолсульфонамид (23,2 мг, 0,052 ммоля) и смесь энергично перемешивали при температуре от 0°С до комнатной температуры в течение 2 дней. Реакционную смесь повторно охлаждали до 0°С и дополнительно добавляли AD-Mix-alpha (73,4 мг, 0,052 ммоля), затем реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч и затем добавляли третью порцию AD-Mix-alpha (73,4 мг, 0,052 ммоля). Перемешивание продолжали при температуре от 0°С до комнатной температуры в течение выходных дней. Реакционную смесь повторно охлаждали до 0°С и добавляли заключительную порцию AD-Mix-alpha (73,4 мг, 0,052 ммоля) и дополнительное количество метансульфонамида (4,99 мг, 0,052 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре от 0°С до комнатной температуры. Затем реакционную смесь охлаждали при 0°С и перемешивали в течение 1 ч, затем к раствору добавляли сульфит натрия (70 мг, 0,555 ммоля) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 0 мин. Добавляли этилацетат (10 мл) и органические вещества отделяли, водную фазу дополнительно экстрагировали этилацетатом (3x5 мл). Объединенные органические слои промывали раствором гидроксида натрия (2М, 10 мл), сушили и концентрировали в вакууме. Очистку проводили с помощью mass directed autoprep (методика N) и получали искомый продукт, 4 мг, с неизвестным энантиомерным избытком (в настоящем изобретении называется а-энантиомером). LCMS [LCMS2] Rt 1,18 мин, m/z (ES+) 477 (М+Н).
Пример 116: 4-(1,2-Дигидрокси-З-морфолинопропил)-N-(2, 4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид, (3-энантиомер)
AD-Mix-beta (24 9 мг, 0,17 8 ммоля) перемешивали при комнатной температуре в трет-бутаноле (1,000 мл) и воде (1,000
мл) до образования двух прозрачных фаз. К раствору добавляли
метансульфонамид (16,93 мг, 0,178 ммоля) и смесь охлаждали до
0°С. Добавляли (Е)-N-(2,4-диметилфенил)-Ы-изобутил-4-(3-
морфолинопроп-1-ен-1-ил)бензолсульфонамид (39,4 мг, 0,089 ммоля) и смесь энергично перемешивали при 0°С в течение 60 ч, поддерживая эту температуру. Затем дополнительно добавляли AD-Mix-beta (249 мг, 0,178 ммоля) и метансульфонамид (16,93 мг, 0,178 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, поддерживая температуру, равную 0°С. Затем добавляли заключительную порцию AD-Mix-beta (498 мг, 0,356 ммоля) и раствор перемешивали в течение ночи, поддерживая температуру, равную 0°С. К раствору добавляли сульфит натрия (2x11,22 мг, 0,08 9 ммоля) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 0 мин. К раствору добавляли этилацетат (5 мл) и водную фазу дополнительно экстрагировали этилацетатом (3x15 мл). Объединенные органические слои промывали раствором гидроксида натрия (2М, 15 мл), сушили и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции концентрировали и объединяли и получали искомый продукт, 17,9 мг, с неизвестным энантиомерным избытком (в настоящем изобретении называется р-энантиомером). LCMS [LCMS2] Rt 1,18 мин, m/z (ES+) 477 (М+Н).
Пример 117: N-(2,4-Диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-(оксетан-3-иламино)этил)-N-изобутилбензолсульфонамид
При перемешивании к раствору N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутил-4-(оксиран-2-ил)бензолсульфонамида (50 мг, 0,139 ммоля) в этаноле (1 мл) при 25°С добавляли оксетан-3-амингидрохлорид (15,24 мг, 0,139 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 12 ч. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме и пытались провести очистку с помощью mass directed autoprep (модификатор - карбонат аммония). Соответствующие фракции выпаривали в вакууме, но получали смесь искомого продукта, его региоизомера и непрореагировавшего исходного вещества. Дополнительные попытки разделения двух
региоизомеров с помощью препаративной ахиральной HPLC не удались. Разделение региоизомеров успешно провели только с помощью хиральной препаративной колонки для HPLC (условия HPLC2p), но энантиомеры не разделялись. Выделяли 1 мг (предположительно рацемического) искомого продукта. HPLC [HPLC2a] Rt 8,5 мин. LCMS [LCMS2 ] Rt 1,16 мин, m/z (ES+) 433 (M+H) .
Пример 118: Диастереоизомер-1 4-(1,З-дигидрокси-2-морфолинопропил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилбензолсульфонамида и пример 119: диастереоизомер-2 4-(1,З-дигидрокси-2-морфолинопропил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида
a) Промежуточный продукт 68: N-(2,4-Диметилфенил)-4-
формил-Ы-изобутилбензолсульфонамид
К раствору (2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)амина (400 мг, 2,256 ммоля) в пиридине (5 мл) при перемешивании на воздухе при комнатной температуре одной порцией добавляли 4-формилбензол-1-сульфонилхлорид (760 мг, 3,71 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 3 0 мин и затем выдерживали в течение б ч. Растворитель выпаривали в вакууме (Vaportec VI0) и получали неочищенный продукт. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (0-25% этилацетат-циклогексан). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме и получали искомый продукт, 7 94 мг, в виде бесцветного смолообразного вещества. LCMS [LCMS1] Rt 1,33 мин, m/z (ES+) 346 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 69: Диастереоизомер-1
трифторацетата метил-3-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)фенил)-З-гидрокси-2-морфолинопропаноата и
промежуточный продукт 70: Диастереоизомер-2 трифторацетата
метил-3-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-3-
гидрокси-2-морфолинопропаноата
Готовили раствор метил-2-морфолиноацетата (0,022 г, 0,139
ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (1 мл) и его добавляли к
раствору N- (2,4-диметилфенил)-4-формил-Ы-
изобутилбензолсульфонамида (0,040 г, 0,116 ммоля) в
тетрагидрофуране (ТГФ) (1 мл). Смесь охлаждали примерно до -
90°С (баня твердый диоксид углерода/диэтиловый эфир) в
атмосфере азота и обрабатывали раствором диизопропиламида лития
в смеси ТГФ/гексаны (2М, 0,232 мл, 0,463 ммоля). Реакционную
смесь перемешивали в течение 2 ч при -90°С, затем медленно
нагревали до комнатной температуры в течение выходных дней.
Реакцию останавливали водой (4 мл) и добавляли этилацетат (4
мл) . Органическую фазу отделяли, сушили с помощью гидрофобной
фритты и концентрировали в потоке азота. Разделение двух
полученных диастереоизомеров проводили с помощью mass directed
autoprep (методика R) и получали диастереоизомер-1
трифторацетата метил-3-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)фенил)-З-гидрокси-2-морфолинопропаноата (8,2
мг) LCMS [LCMS2 ] Rt 1,31 мин, m/z (ES+) 505 (М+Н) и
диастереоизомер-2 трифторацетата метил-3-(4-(N-(2,4-
диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-З-гидрокси-2-морфолинопропаноата (8,1 мг) LCMS [LCMS2] Rt 1,34 мин, m/z (ES+) 505 (М+Н).
с) Пример 118: Диастереоизомер-1 4-(1,З-дигидрокси-2-морфолинопропил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида
Готовили раствор диастереоизомера-1 метил-3-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-З-гидрокси-2-морфолинопропаноат (6 мг, 0,012 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ)
(0,5 мл) и при 0°С добавляли раствор алюмогидрида лития в диэтиловом эфире (1М, 0,024 мл, 0,024 ммоля). После добавления реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре от 0°С до комнатной температуры. Добавляли воду (0,5 мл), затем этилацетат (0,5 мл). Органический слой отделяли, сушили (с помощью гидрофобной фритты) и концентрировали в потоке азота. Анализ с помощью LCMS обнаруживал превращение в продукт, составляющее только ~50%, так что неочищенное вещество повторно растворяли в ТГФ (0,5 мл) и охлаждали до 0°С. Затем его обрабатывают второй порцией алюмогидрида лития в диэтиловом
эфире (1М, 0, 02 4 мл, 0, 02 4 ммоля) . Реакционную смесь перемешивали при температуре от 0°С до комнатной температуры в течение 5 ч. После этого анализ с помощью LCMS показывал, что превращение полностью завершилось. Добавляли воду (0,5 мл), затем этилацетат (0,5 мл) . Органический слой отделяли, сушили (с помощью гидрофобной фритты) и концентрировали в потоке азота, затем проводили очистку с помощью mass directed autoprep (методика М) и получали искомый продукт, 1,7 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,19 мин, m/z (ES+) 477 (М+Н).
d) Пример 119: Диастереоизомер-2 4-(1,З-дигидрокси-2-морфолинопропил)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамида
Готовили раствор диастереоизомера-2 метил-3-(4-(N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилсульфамоил)фенил)-З-гидрокси-2-морфолинопропаноата (б мг, 0,012 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (0,5 мл) и при 0°С добавляли раствор алюмогидрида лития в диэтиловом эфире (1М, 0,024 мл, 0,024 ммоля). После добавления реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре от 0°С до комнатной температуры. Добавляли воду (0,5 мл), затем этилацетат (0,5 мл) . Анализ с помощью LCMS показывал, что превращение в продукт полностью завершилось. Органический слой отделяли, сушили (с помощью гидрофобной фритты) и концентрировали в потоке азота, затем проводили очистку с помощью mass directed autoprep (методика М) и получали искомый продукт, 1,8 мг. LCMS [LCMS2] Rt 1,22 мин, m/z (ES+) 477 (М+Н).
Пример 12 0: N-(2,4-Диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамидгидрохлорид
Соль с НС1 получали путем растворения N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-
изобутилбензолсульфонамида (180 мг) в диэтиловом эфире (2 мл) и обработки раствором НС1 в диоксане (4М, избыток). Смесь концентрировали, затем перекристаллизовывали из этанола (минимальное количество) при медленной диффузии диэтилового эфира и получали искомый продукт (14 6 мг) в виде белого кристаллического вещества. LCMS [LCMS2] Rt 1,30 мин, m/z (ES+)
447 (М+Н).
Пример 121: Получение энантиомера-1 N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамида и пример 122: Получение энантиомера-2 N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамида путем хирального разделения рац-соединения примера 22
Энантиомеры рац-N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамида (26 мг) разделяли с помощью хиральной препаративной ВЭЖХ (условия HPLClp) и получали энантиомер-1 N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамида (10 мг) HPLC
[HPLCla] Rt 17,5 мин. LCMS [LCMS2] Rt 1,32 мин, m/z (ES+) 447
(М+Н) и энантиомер-2 N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-N-изобутилбензолсульфонамида (10 мг) HPLC
[HPLCla] Rt 23,5 мин. LCMS [LCMS2] Rt 1,32 мин, m/z (ES+) 447
(M+H) .
Пример 123: N-(4-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид
a) Промежуточный продукт 71: Метил-2-бром-5-(N-(4-
этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензоат
К раствору 4-этил-Ы-изобут,иланилина (400 мг, 2,256 ммоля) в пиридине (2 мл) при перемешивании на воздухе при 2 0°С порциями в течение 30 мин добавляли метил-2-бром-5-
(хлорсульфонил)бензоат (707 мг, 2,256 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при 2 0°С в течение 3 0 мин, затем выдерживали в течение ночи. Растворитель выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде липкого твердого вещества. Его растирали с метанолом и отфильтровывали и сушили и получали искомый продукт в виде белого твердого вещества, 600 мг. LCMS
[LCMS1] Rt 1,41 мин, m/z (ES+) 454/456 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 72: Метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)-2-((триметилсилил)этинил)бензоат
Смесь метил-2-бром-5-(N-(4-этилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)бензоата (325 мг, 0,715 ммоля),
бис(трифенилфосфин)хлорида палладия(II) (15,06 мг, 0,021
ммоля), иодида меди(I) (5,45 мг, 0,029 ммоля),
дихлоргексиламина (0,157 мл, 0,787 ммоля) и ацетонитрила (2 мл)
дегазировали слабым потоком азота, затем добавляли
этинилтриметилсилан (211 мг, 2,146 ммоля). Смесь
герметизировали и нагревали микроволновым излучением при 8 0°С в течение 3 ч. После охлаждения смесь подвергали распределению между раствором бикарбоната натрия (10 мл) и дихлорметаном
(ДХМ) (20 мл), затем органическую фазу промывали водой (5 мл) и НС1 (2н, 10 мл) . Органические вещества сушили и выпаривали и получали искомый продукт в виде желтого смолообразного вещества, 320 мг. LCMS [LCMS 1 ] Rt 1,58 мин, m/z (ES+) 472
(М+Н) .
c) Промежуточный продукт 73: Метил-2-ацетил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензоат
Смесь метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-((триметилсилил)этинил)бензоата (320 мг, 0,678 ммоля), сульфата ртути(II) (201 мг, 0,678 ммоля), H2SO4 (1,357 мл, 1,357 ммоля) и ацетона (6 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь подвергали распределению между раствором хлорида аммония (10%, 20 мл) и дихлорметаном (ДХМ) (2x25 мл), затем органические вещества отделяли, сушили (MgSO,}) и выпаривали с помощью florisil. Неочищенное вещество очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (в градиентном режиме 0100% дихлорметан-циклогексан) и получали искомое соединение в виде бесцветного смолообразного вещества, 110 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,33 мин, m/z (ES+) 418 (М+Н).
d) Промежуточный продукт 74: Метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-(2-морфолиноацетил)бензоат
Раствор фенилтриметиламинотрибромида (100 мг, 0,2 66 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (0,5 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 5 мин по каплям добавляли к раствору метил-2-ацетил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)бензоата (105 мг, 0,2 51 ммоля) в ТГФ (1,5 мл). Оранжевый раствор перемешивали в течение 1 ч и получали желтый раствор, содержащий белый осадок. Анализ показывал, что основным
продуктом является искомый промежуточный бромкетон. Осадок отфильтровывали и раствор обрабатывали морфолином (0,066 мл, 0,754 ммоля). Полученную суспензию перемешивали в течение 30 мин и подвергали распределению между раствором хлорида аммония
(10 мл) и этилацетатом (2x5 мл) . Высушенный (MgSO,}) экстракт выпаривали и получали искомый продукт (65 мг) в виде оранжевого смолообразного вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии. LCMS [LCMS 1 ] Rt 1,06 мин, m/z (ES+) 503
(М+Н) .
е) Пример 123: N-(4-Этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-
морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид
Раствор Super-Hydride(r) (1М в тетрагидрофуране, 0, 388 мл, 0,388 ммоля) при комнатной температуре в атмосфере азота медленно добавляли к раствору метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-(2-морфолиноацетил)бензоата (65 мг, 0,129 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (0,5 мл) . Раствор перемешивали в течение 16 ч, затем обрабатывали НС1 (2н, 2 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Смесь подщелачивали раствором бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом (2x5 мл) . Органические вещества сушили (MgSO,}) затем выпаривали и попытка очистки неочищенного вещества с помощью картриджа с диоксидом кремния (Si) при элюировании смесью 5% метанол-дихлорметан + 0,5% аммиака приводила к плохому разделению. Очистку успешно проводили с помощью картриджа с диоксидом кремния (Si) при элюировании смесью 1-3% метанол-дихлорметан + 0,1-0,3% аммиака и получили искомый продукт в виде кремового твердого вещества, 31 мг. LCMS [LCMS1] Rt 0,90 мин, m/z (ES+) 477 (М+Н).
Пример 124: N-(4-Этилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид
а) Промежуточный продукт 75: Метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-гидроксибензоат
К раствору 4-этил-Ы-изобут,иланилина (598 мг, 3,37 ммоля) в пиридине (10 мл) при перемешивании на воздухе при 2 0°С порциями в течение 1 ч добавляли метил-5-(хлорсульфонил)-2-гидроксибензоат (845 мг, 3,37 ммоля). Затем реакционную смесь
перемешивали при 2 0°С в течение 3 0 мин. Растворитель выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт в виде липкого желтого твердого вещества. Его растирали с метанолом затем отфильтровывали и сушили и получали искомый продукт в виде белого твердого вещества, 907 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,38 мин, m/z (ES+) 392 (М+Н).
b) Промежуточный продукт 76: Метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-
изобутилсульфамоил)-2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензоат
К раствору (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанол (74,2 мг, 0,639 ммоля) и метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-гидроксибензоата (500 мг, 1,277 ммоля) в толуоле (0,5 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляли раствор 2-(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрила (339 мг, 1,405 ммоля) в толуоле (0,5 мл). Реакционную смесь энергично перемешивали в течение 1 ч, затем выдерживали в течение ночи. Дополнительно добавляли 2-(трибутилфосфоранилиден)ацетонитрил (339 мг, 1,405 ммоля) и (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метанол (74,2 мг, 0,639 ммоля) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 8 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и получали неочищенный продукт, который очищали с помощью хроматографии на диоксиде кремния (Si) (0-100% этилацетат-циклогексан) и получали искомое соединение в виде оранжевого смолообразного вещества, 109,6 мг. LCMS [LCMS1] Rt 1,37 мин, m/z (ES+) 490 (М+Н).
c) Пример 124: N-(4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-
изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид
Раствор Super-Hydride(r) (1М в тетрагидрофуране, 0, 449 мл,
0,449 ммоля) в атмосфере азота в течение 5 мин добавляли к
раствору метил-5-(N-(4-этилфенил)-N-изобутилсульфамоил)-2-
((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензоата (100 мг, 0,204 ммоля) в тетрагидрофуране (ТГФ) (2 мл) . Раствор перемешивали в течение 1 ч, затем добавляли к 1:1 смеси раствора хлорида аммония и НС1 (2н, 10 мл) . Смесь экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (ТБМЭ) (2x5 мл), затем органические вещества сушили и выпаривали. Остаток очищали с помощью
хроматографии на диоксиде кремния (Si) (0-50% этилацетат-циклогексан) и получали искомое соединение в виде белого вспененного вещества (75 мг) . LCMS [LCMS1] Rt 1,28 мин, m/z (ES+) 462 (М+Н).
Хиральное разделение N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамида
N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид (рацемическое соединение, которое можно получить, например, в соответствии с примером 123; 4,5 г, 9,44 ммоля, LCMS: 97,39%) растворяли в 54 мл сорастворителя (0,5% ДЭА (диэтаноламин) в изопропаноле).
Хиральное разделение - описание аппаратуры
Система: Система автоматической очистки Thar SFC-80
Растворитель: Метанол
Количество/инжектирование: 25 мг/инжектирование
Колонка: Chiralcel-OX-H
Полная скорость потока: 70 г/мин
Содержание сорастворителя: 30% (0,5% ДЭА в изопропаноле) Суммарная длительность инжектирования: 7,5 мин УФ: 222 нм
Пик энантиомера-1 (пример 125) : Собирали 5 фракций и концентрировали при пониженном давлении и получали N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)- N-изобутилбензолсульфонамид (пик 1) (730 мг, 1,523 ммоля, выход 16,14%) в виде белого твердого вещества.
ХЕ ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5: 7,715-7,694 (1Н, д), 7,648-7,643 (1Н, д) , 7, 469-7, 444 (1Н, дд) , 7, 153-7, 132 (2Н, д) , 6, 957-6, 936 (2Н, дд) , 5, 226-5, 194 (1Н, дд) , 4, 748-4, 657 (2Н, м) , 3, 7283,694 (4Н, м), 3,354-3,336 (2Н, д), 2,723-2,566 (8Н, м), 1,541,506 (1Н, м), 1,286 (2Н, с), 1,238-1,201 (ЗН, т), 0,909-0,892 (6Н, д) .
SOR: [ос] 25589 +23, 4° (С-1, 0 в метаноле)
Пик энантиомера-2 (пример 12 6): Собирали 8 фракций и концентрировали при пониженном давлении и получали N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N
изобутилбензолсульфонамид (пик 2) (820 мг, 1,709 ммоля, выход
18,10%) в виде желтого твердого вещества.
гЕ ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5: 7,708-7,688 (1Н, д), 7,649-7,644 (1Н, д), 7,464-7,439 (1Н, дд), 7,153-7,132 (2Н, д), 6,957-6,936 (2Н, дд), 5,209-5,177 (1Н, м), 4,745-4,656 (2Н, м), 3,715-3,682 (4Н, м) , 3, 354-3, 335 (2Н, д) , 2, 689-2, 521 (8Н, м) , 1, 542-1, 506 (1Н, м) , 1, 286 (2Н, с), 1, 238-1, 201 (ЗН, т), 0, 909-0, 802 (6Н,
SOR: [а] 25589 -21 , 2° (С-1,0 в метаноле) Условия проведения анализа с помощью LC-MS
Анализ с помощью LCMS проводили на колонке X-Bridge С18 (4,6x75 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 3,5 мкм) при 2 5°С.
Использовали следующие растворители:
А = 0,05 мМ раствор ацетата аммония в воде
В = 10 0% Ацетонитрил
Использовали следующий градиентный режим:
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
0, 0
0, 8
2,5
0, 8
8, 0
0, 8
8,1
0, 8
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 190 нм до 400 нм (экстрагировали при УФ-сигнале соединения) и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
Пример 125: LC-MS m/z 477,4 [М+Н]+ чистота 99,47% при 4,2 RT (мин)
Пример 126: LC-MS m/z 477,4 [М+Н]+ чистота 99,33% при 4,17 RT (мин)
Условия проведения анализа с помощью CHIRAL-HPLC (проверка чистоты)
Колонка: Chiralpak 1А (4,6X250 мм) 5 мкм
Подвижная фаза: D: 0,1% ДЭА в гексане : С=Этанол
В изократическом режиме: 90:10
Скорость потока: 0,8 мл/мин
Температура: Температура окружающей среды
Разбавитель: Этанол
Пример 125: Хиральная HPLC чистота 99,53% при 14,11 RT
(мин)
Пример 12 6: Хиральная HPLC чистота 98,4 6% при 12,68 RT
(мин)
Условия проведения анализа с помощью HPLC Колонка: X-Bridge С18 (4,6x150 мм) 3,5 мкм
Подвижная фаза: А: 0,01 ацетат аммония В: АЦН (ацетонитрил)
Т/%В: 0/30,2/30,4/70,6/95,15/95,15,1/30 Скорость потока: 1,0 мл/мин Температура: Температура окружающей среды Разбавитель: АЦН+Н20
Пример 125: HPLC чистота 99,51% при 6,68 RT (мин)
Пример 126: HPLC чистота 99,51% при 6,69 RT (мин)
Спектроскопия колебательного кругового дихроизма (VCD)
Абсолютные конфигурации соединения примера 12 5 и
соединения примера 12 6 определяли с использованием
неэмпирических расчетов с помощью спектроскопии колебательного
кругового дихроизма (VCD), типа дифференциальной колебательной
спектроскопии, при использовании которой для определения
абсолютной стереохимической конфигурации используют
экспериментальные VCD и расчетные данные (Appl. Spectrosc. 65 (7), 699 (2011)). Эксперимент
Концентрации: эквимолярные растворы (0,15-М) в ДХМ Ячейка: герметизированная ячейка пропускания/окошко из BaF2/ длина оптического пути 100 мкм
Спектрометр: Спектрометр ChiralIR-2X(tm) FT-VCD (BioTools,
Inc. )
Параметры сканирования: 2200-800 см-1 с разрешением, равным
4 см-1
Программы для расчета
Определение конформации: стохастическое с помощью MMFF94x Химическое моделирование (колебательные характеристики): B3LYP/dgdzvp
Синтез спектра: статистика Больцмана
Количественный анализ: CompareVOA(tm) (BioTools, Inc.) Отнесение конфигураций и доверительный интервал Соединению примера 12 5 приписана абсолютная конфигурация
Соединению примера 12 6 приписана абсолютная конфигурация
Доверительный интервал для этих отнесений по оценке составлял > 98%.
Вг-
/ \
/ \
145
146
147
148
149
N 1
150
CI-
151
Br^^-CH3
SIO
Sll
Br О
S12
S13
S14
o = s=o
S15
o=s=o
S16
\.ci
S17
S18
S19
%ХХ0
S20
H3C.0XXSCCI
/°Y°
S21
o=s=o
S22
111
o=s.
^ CI
S23
-OH
(±) r\F
S24
H,C CH,
нзсАсн3
S25
K+"BF3
S26
S27
-ОН
S28
нзс Ън3о
1 Л
S29
S30
S31
S32
ОН 1
S41
S42
S43
S44
N ^~ОН
сн, он
S45
S46
1 1
0Асн3
S47
S48
на у но
S49
S50
S51
S52
S53
S54
S55
S56
y^ OH
S57
НО-.
HO rn/ \
S58
Он С "ш
но^
S59
S60
но-.
у- о
НОим/ \
но Ън
S61
сн3
S62
Н,С ~. он O^^J HCI
сн3
S63
/-ОН
к о ^ -сн3
S64
_он
S65
"3cO
S66
S67
H3c^'OVN0r^4OH
3 О
S68
S69
NH2
S70
S71
S72
HN v
- 4-
HN у
4- 0
YY4°
HN О
YY4
Ell
E12
Y0 °
Е25
Е26
<ч
Е27
YY °
Е28
YY^
^0 F
Е29
ЕЗО
YY^
Е55
+ Ъ
Y^ 0
E56
0==/ NH
^ О
YY4°
Е57
YY4°
E58
НО, ЛН
/ \ юн
0 (
* 0
Е59
E60
HCI \ /
YY4
Е91
° V
' о у он
YY4
E92
4 о
YY4
Е93
YY4
E94
HO (
О YY4°
Е95
но (
YY °
r*iY kY1
E96
^ N OH
О YY\
Е115
N '
> ОН
НО (
О YY4°
а-энантиомер \
Е116
\ он
но (
YY4°
fi-энантиомер \
Е117
но с'
Е118
N N ОН
YY °
диастереоизомер-1 \
Е119
> N ОН
YY^
диастереоизомер-2 |
Е120
4 N ОН
CI н \ /
YY^
Е121
> N ОН
энантиомер -1 \
E122
^ N OH
YY^
энантиоюер -2 \
Е123
4 N ОН
E124
YY4
Е125
I J ¦
0^ J OH
E126
°\Y
Методология анализа
Ниже описаны общие методики обработки и очистки. Обработка
Реакции проводили с помощью целого ряда методик, которые могут включать, например, твердофазную экстракцию (SPE) с использованием картриджей с сульфоновой кислотой (SCX) или
аминопропилом (NH2) при элюировании метанолом и затем 2М метанольным раствором аммиака (методика S); остановку водой, изопропанолом или метанолом (методика Q); твердофазную экстракцию с использованием фторсодержащих картриджей при элюировании смесью метанол:вода (методика FL) ; выпаривание в вакууме или путем продувки образца азотом (методика Е) ; и обработку водой, при которой образец разбавляют водой или разбавленной кислотой или разбавленным основанием и затем экстрагируют подходящим органическим растворителем, например, этилацетатом или дихлорметаном (методика А) ; или фильтрование образца через фильтрующую пробирку (методика F). Выпаривание
Образцы концентрировали с помощью установки Radley для продувки азотом, роторного испарителя или испарителя Biotage VI0 и получали неочищенный остаток.
Очистка
Методики очистки
Очистку проводили по различным методикам, включая: mass-directed autoprep (MDAP) с использованием модификаторов, устанавливающих низкое или высокое значение рН; колонки подробно описаны ниже; автоматическую хроматографию с нормальной фазой с помощью, например, Biotage Flashmaster II или ISCO companion, с использованием колонки с диоксидом кремния или аминопропилом и различных растворителей, которые включают, например, этилацетат/циклогексан/дихлорметан и метанол; или перекристаллизацию из подходящего растворителя.
MDAP
MDAP
Хроматография с нормальной фазой: диоксид кремния:
EtOAc-циклогексан 0-100%
Хроматография с нормальной фазой: диоксид кремния
0-50% этилацетат-циклогексан
Хроматография с нормальной фазой: диоксид кремния
EtOAc-циклогексан 0-25%
Хроматография с нормальной фазой: диоксид кремния
0-100% ДХМ в циклогексане
Хроматография с нормальной фазой: диоксид кремния
0-50% ДХМ в циклогексане
Перекристаллизация из метанола
Очистка MDAP MDAP: Методика F
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Sunfire С18 (150x30 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде. В = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.
Скорость потока 40 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
MDAP: Методика A
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Waters XBridge С18 (100x30 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 10 мМ бикарбонат аммония в воде, значение рН устанавливали равным 10 раствором аммиака. В = Ацетонитрил. Скорость потока 40 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
MDAP: Методика Т
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Sunfire С18 (150x30 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде. В = 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с
длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на
масс-спектрометре с использованием ионизацией
электрораспылением в режиме положительных ионов.
MDAP: Методика N
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Waters XBridge С18 (100x19 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 10 мМ Бикарбонат аммония в воде, значение рН устанавливали равным 10 раствором аммиака. В = Метанол.
Скорость потока 20 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 4 00 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
MDAP: Методика О
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Waters Atlantis dC18 (100x19 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде.
В = Ацетонитрил.
Скорость потока 20 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 4 00 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
MDAP: Методика R
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Sunfire С18 (100 мм х 19 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде. В = 1:1 ацетонитрил:метанол. Скорость потока 20 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим
временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с
длинами волн от 210 до 4 00 нм и масс-спектры регистрировали на
масс-спектрометре с использованием ионизацией
электрораспылением в режиме положительных ионов.
MDAP: Методика М
Очистку с помощью HPLC проводили на колонке Waters XBridge С18 (100x19 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды.
Использовали следующие растворители:
А = 10 мМ Бикарбонат аммония в воде, значение рН устанавливали равным 10 раствором аммиака. В = Ацетонитрил. Скорость потока 20 мл/мин.
Градиентный режим выбирали в соответствии с аналитическим временем удерживания.
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 4 00 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
Условия проведения анализа с помощью LCMS
LCMS 1
Анализ с помощью UPLC проводили на колонке Acquity UPLC ВЕН С18 (2,1x50 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 1,7 мкм) при 4 0°С.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде. В = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.
Использовали следующий градиентный режим:
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
1,5
100
1,9
100
2, 0
При УФ-детектировании использовали усредненный сигнал с длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
LCMS 2
Анализ с помощью UPLC проводили на колонке Acquity UPLC ВЕН С18 (50x2,1 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 1,7 мкм) при 4 0°С.
Использовали следующие растворители:
А = 10 мМ бикарбонат аммония в воде, значение рН
устанавливали равным 10 раствором аммиака. В = Ацетонитрил.
Использовали следующий градиентный режим:
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
1,5
1,9
2, 0
При УФ-детектировании использовали суммарный сигнал с длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре, таком как Waters ZQ, с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
LCMS3
Анализ с помощью UPLC проводили на колонке Acquity С18 (2x50 мм, 1,7 мкм)
Использовали следующие растворители:
А: Вода 10 мМ, ацетат аммония, 0,1% муравьиная кислота В: 95% ацетонитрил/вода, 0,05% муравьиная кислота
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
Зависимость
97, 0
3, 0
0,1
97, 0
3, 0
1,4
0, 0
100, 0
1,9
0, 0
100, 0
2, 0
97, 0
3, 0
При УФ-детектировании использовали суммарный сигнал с длинами волн от 220 до 330 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
LCMS 4
Анализ с помощью HPLC проводили на колонке Sunfire С18 (30x4,6 мм внутренний диаметр, диаметр частиц насадки 3,5 мкм) при 3 0°С.
Использовали следующие растворители:
А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде. В = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.
При УФ-детектировании использовали суммарный сигнал с длинами волн от 210 до 350 нм и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с поочередным использованием сканирования с ионизацией электрораспылением в режиме положительных и отрицательных ионов.
Хиральная HPLC HPLCla
Анализ с помощью хиральной HPLC проводили на колонке Chiralcel OJ (25x4,6 мм внутренний диаметр).
В изократическом режиме использовали систему растворителей: 10% этанол/гептан
Скорость потока = 1,0 мл/мин
Длина волны при УФ-детектировании 230 нм
Методика: Примерно 0,5 мг вещества растворяли в смеси 50% этанол/гептан (1 мл) и 2 0 мкл инжектировали в колонку. HPLClp
Хиральную препаративную HPLC проводили на колонке Chiralcel ОJ (25x2 см).
В изократическом режиме использовали систему растворителей: 10% этанол/гептан
Скорость потока = 14 мл/мин
Длина волны при УФ-детектировании 215 нм
Методика: Вещество растворяли в смеси 50% этанол/гептан (всего 2 мл) и 2 мл инжектировали в колонку. HPLC2a
Анализ с помощью хиральной HPLC проводили на колонке Chiralcel OJ (25x4,6 мм внутренний диаметр).
В изократическом режиме использовали систему растворителей: 20% этанол/н-гексан
Скорость потока = 1,0 мл/мин
Длина волны при УФ-детектировании 300 нм
HPLC2p
Хиральную препаративную HPLC проводили на колонке Chiralcel OJ-H (25x3 см).
В изократическом режиме использовали систему растворителей: 20% этанол/н-гексан
Скорость потока = 45 мл/мин
Длина волны при УФ-детектировании 300 нм
Методика: Вещество растворяли в теплом этаноле (1,7 мл) и очистку проводили путем инжектирования в колонку порций 0,5 мл.
Биологические исследования
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются модуляторами RORy и поэтому применимы при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых RORy. Биологическая активность типичных соединений формулы (I) исследована с помощью описанных ниже методик.
Исследование двойного переноса энергии флуоресценции (FRET)
Это исследование основано на том факте, что ядерные рецепторы взаимодействуют с кофакторами (факторами транскрипции) зависимым от лиганда образом. RORy является типичным ядерным рецептором, поскольку он содержит домен AF2 в связывающем лиганд домене (LBD), который взаимодействует с соактиваторами. Сайты взаимодействия картировали на мотивы LXXLL в последовательностях соактиватора SRC1(2). Короткие пептидные последовательности, содержащие мотив LXXLL, имитируют поведение полноразмерного соактиватора.
В этом исследовании изучают опосредуемое лигандом взаимодействие пептида-соактиватора с очищенным экспрессируемым бактериями связывающим лиганд RORy доменом (RORy-LBD) для косвенной оценки связывания лиганда. RORy при отсутствии лиганда характеризуется базовым уровнем взаимодействия с соактиватором SRC1(2), таким образом, можно обнаружить лиганды, которые ингибируют или усиливают взаимодействие R0Ry/SRCl(2).
Материалы
Генерация плазмиды бактериальной экспрессии RORy-LBD Домен связывания лиганда RORy человека (RORy-LBD) экспрессировали в штамм E.coli BL21(DE3) в виде содержащего концевую аминогруппу меченого полигистидином белка слияния. ДНК, кодирующую этот рекомбинантный белок, субклонировали в модифицированный вектор экспрессии рЕТ21а (Novagen). Модифицированную полигистидиновую метку (MKKHHHHHHLVPRGS) подвергали слиянию в рамке с остатками 2 63-518 последовательности RORy человека.
Очистка белка
Таблетку, содержащую 50 г клеток E.coli, повторно суспендировали в 300 мл литического буфера (30 мМ имидазола, рН 7,0 и 150 мМ NaCl). Клетки подвергали лизису путем обработки ультразвуком, остатки клеток удаляли центрифугированием в течение 3 0 мин при 2 0000д при 4°С. Осветленную надосадочную жидкость фильтровали через мембранный фильтр из ацетата целлюлозы с отверстиями размером 0,45 мкм. Осветленный лизат загружали в колонку (ХК-2 6), содержащую хелатную смолу ProBond Nickel (InVitrogen), предварительно приведенную в равновесие с 30 мМ имидазолом, рН 7,0 и 150 мМ NaCl. После промывки использующимся для приведения в равновесие буфером до обеспечения исходной степени поглощения колонку экстрагировали в градиентном режиме от 30 до 500 мМ раствором имидазола, рН 7,0. Поступившие из колонки фракции, содержащие белок RORy-LBD, объединяли и концентрировали до объема, равного 5 мл. Концентрированный белок загружали в колонку Superdex 2 00, предварительно приведенную в равновесие с 20 мМ Tris-Cl, рН 7,2 и 200 мМ NaCl. Фракции, содержащие искомый белок RORy-LBD, объединяли.
Биотинилирование белка
Очищенный RORy-LBD подвергали обмену с буфером с помощью исчерпывающего диализа [3 замены не менее, чем по 2 0 объемов (> 8000 х) ] относительно PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) [100 мМ фосфата Na, рН 8 и 150 мМ NaCl] . Концентрация RORy-LBD в PBS равнялась примерно 30 мкМ. Добавляли пятикратный молярный избыток NHS-LC-биотина (Pierce) в минимальном объеме PBS. Этот раствор инкубировали при периодическом осторожном перемешивании в течение 60 мин при температуре окружающей среды. Модифицированный RORy-LBD подвергали диализу с 2 заменами буфера - TBS (забуференный с помощью Tris физиологический раствор), рН 8,0, содержащий 5 мМ ДТТ (дитиотреитол) , 2 мМ ЭДТК и 2% сахарозы - каждый раз с использованием не менее 2 0 объемов. Модифицированный белок делили на аликвоты, замораживали с помощью твердого диоксида
углерода и хранили при -8 0°С. Биотинилированный RORy-LBD
исследовали с помощью масс-спектрометрического анализа для
подтверждения степени модификации биотинилирующим реагентом.
Обычно примерно 95% белка содержат по меньшей мере один сайт
биотинилирования и общая степень биотинилирования
характеризуется нормальным распределением множества сайтов в количество от 1 до 5.
Биотинилированный пептид, соответствующий аминокислотам 676-700 (CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS) соактиватора стероидного рецептора SRC1(2), получали по аналогичной методике.
Исследование
Методика, стадия 1: Получение меченого европием пептида SRC1(2)
Раствор биотинилированного SRC1(2) получали путем добавления соответствующего количества биотинилированного SRC1(2) из 100 мкМ исходного раствора в буфер, содержащий 10 мМ свежедобавленного твердого ДТТ, с обеспечением конечной концентрации, равной 4 0 нМ. Затем к биотинилированному раствору SRC1(2) в пробирке добавляли соответствующее количество меченого европием стрептавидина с обеспечением конечной концентрации, равной 10 нМ. Пробирку осторожно переворачивали и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли 2 0-кратный избыток биотина из 10 мМ исходного раствора и пробирку осторожно переворачивали и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре.
Методика, стадия 2: Получение RORy-LBD, меченого АРС Раствор биотинилированного RORy-LBD получали путем добавления соответствующего количества биотинилированного RORy-LBD из исходного раствора в буфер, содержащий 10 мМ свежедобавленного твердого ДТТ, с обеспечением конечной концентрации, равной 4 0 нМ. Затем к биотинилированному раствору
RORy-LBD в пробирке добавляли соответствующее количество меченого АРС стрептавидина с обеспечением конечной концентрации, равной 2 0 нМ. Пробирку осторожно переворачивали и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем
добавляли 2 0-кратный избыток биотина из 10 мМ исходного раствора и пробирку осторожно переворачивали и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Методика, стадия 3: Исследование
Одинаковые объемы описанных выше меченого европием пептида SRC1(2) и меченого АРС RORy-LBD осторожно смешивали и получали 20 нМ RORy-LBD, 10 нМ АРС-стрептавидина, 20 нМ SRC1(2) и 5 нМ европий-стрептавидина. Реакционные смеси инкубировали в течение 5 мин. С использованием Thermo Combi Multidrop 384 stacker unit no 2 5 мкл реакционных смесей добавляли в каждую лунку 3 8 4-луночных планшетов для исследования, содержащих в лунке по 1 мкл исследуемого соединения в 10 0% ДМСО. Планшеты инкубировали в течение 1 ч и затем считывали с помощью считывающего устройства ViewLux в режиме Lance для EU/APC.
Результаты
Типичные соединения формулы (I) изучали с помощью двойного исследования FRET, описанного выше. Все типичные соединения формулы (I), за исключением ЕЗ, Еб, Е70, Е92 и Е102, которые не исследовали, обладали средними значениями р1С50, равными от 5,0 до 8,0. Типичные соединения формулы (I) Е12, Е20, Е21, Е23, Е24, Е25, Е2б и Е98 обладали средними значениями р1С50, равными > 7,8. Е123, Е124, Е125 и Е126 обладали средними значениями р1С50, равными 7,5, 7,7, 7,5 и 7,2 соответственно.
Исследование мононуклеоцитов периферической крови (исследование РВМС- IL-17)
ROR (связанные с ретиноевой кислотой сиротские рецепторы) являются представителями класса 1 семейства ядерных рецепторов. ROR регулируют транскрипцию генов путем связывания со специфическим элементом ответа ДНК (RORE) в виде мономера и играют критически важные роли в развитии, иммунитете, циркадном ритме и метаболизме клеток (недавний обзор: A. Jetten, Nuclear Receptor Signaling 2009, 7, 1-32). Один представитель этого семейства ядерных рецепторов, RORyt, идентифицировали, как регулятора дифференциации и развития экспрессирующих IL-17 клеток CD4+ Т человека и мышей, так называемых клеток Thl7,
которые играют роль и в защите хозяина, и в воспалительных нарушениях. RORyt также необходим для транскрипции генов, кодирующих IL-17A и IL-17F в iNKT, NKT {Mucosal Immunol. 2 009, 2(5), 383-392; J. Immunol. 2008, 180, 5167-5171), уб T клетки {Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2010, 182, 464-476), CD8+ T клетки (J. leucocyte Biol. 2007, 82, 354-360) и, в заключение, CD4~CD8~TCRaP+ T клетки (J. Immunol. 2008, 181, 8761-8766) . Дополнительные иммунные клетки, такие как эозинофилы, нейтрофилы и макрофаги, также могут являться источником IL-17A при аллергическом воспалении, связанном с астмой (J. Allergy Clin. Immunol. 2001, 108, 430-438; J. Immunol. 2008, 181, 61176124; Immunity 2004, 21, 467-476), однако связь с RORyt в литературе пока не подтверждена.
Это исследование предназначено для определения содержания IL-17A, секретируемого стимулируемыми посредством antiCD3/CD28 замороженными мононуклеоцитами периферической крови (РВМС), выделенными из крови человека, для идентификации ингибиторов высвобождения IL-17A.
Растворы для исследования
Компоненты сред для исследования:
RPMI 1640 (в том виде, как поставлен, например, фирмой Gibco) - 90%
FCS (в том виде, как поставлен, например, фирмой Invitrogen) (исследован на наличие эндотоксина) - 10% Раствор пенициллин/стрептомицин xl
Приготовление: 50 мл термически инактивированной
австралийской FBS, 5 мл Glutamax и 5 мл смеси
пенициллин/стрептомицин асептически добавляют к 500 мл RPMI в
биологически безопасной камере. Исходный раствор
пенициллин/стрептомицин 100Х поставлен, например, фирмой Gibco (10000 Ед/мл пенициллина, 10000 мкг/мл стрептомицина). Исходный раствор L-глутамина 100Х (в том виде, как поставлен, например, фирмой Invitrogen)
Примечание: Необходимо хранить в холодильнике (4°С) в течение 4 недель. Перед использованием нагревают на водяной
бане при 37°С.
Компоненты детектирующих антител к IL-17 человека:
Детектирующие антитела к IL-17 и блокирующий буфер В (поставлен, например, фирмой Mesoscale Discovery)
PBS Дульбекко, не содержащий Са2+ и Мд2+ (поставлен, например, фирмой Gibco)
Примечание: Детектирующие антитела готовят при конечной концентрации, равной 1 мкг/мл. Раствор следует хранить в холодильнике.
Компоненты буфера для считывания MSD Т х 2:
Вода и буфер для считывания MSD Т х 4 (в том виде, как поставлен, например, фирмой MSD)
Примечание: буфер для считывания MSD Т х 4 вдвое разбавляют водой. Следует хранить при комнатной температуре.
Количество исследований: 384
Оборудование и материалы
MSD Sector Imager 6000, поставлен фирмой MesoScale
Discovery (MSD)
Multidrop 384, поставлен фирмой Thermo Scientific CyBi-Well, model 7518-00, поставлен фирмой CyBio AG Прозрачные 3 8 4-луночные микропланшеты, поставлены фирмой
Greiner.
Исследование
Методика, стадия 1: Подготовка планшетов для исследования перед добавлением суспензии клеток
1. Убедиться в том, что в средах и реагентах,
использующихся при исследовании, нет внешнего эндотоксина.
2. Соединения для скрининга дозируют в эталонный планшет
при равной 10 мМ максимальной концентрации и их серийно
разводят в ДМСО в соотношении 1:3 в 11 ступеней, затем 500 нл
переносят в плоскодонный 384-луночный планшет Greiner, в
который добавляют 50 мкл суспензии клеток: для однократного
скрининга наибольшая концентрация соединения равна 10~5М; для
полного исследования зависимости доза-ответ по 11 точкам
наибольшая концентрация равна 10~4 М.
КОНTPОЛИ:
В качестве нижнего контроля используют ДМСО (в том виде, как поставлен, например, фирмой VWR) (конечная концентрация 1%) в столбце б (16 лунок).
В качестве верхнего контроля следует использовать 5-(4-фторфенил)-2-уреидотиофен-З-карбоксамид (поставлен, например, фирмой Sigma) при конечной концентрации в ДМСО, равной 1СГ4М, в столбце 18 (16 лунок).
Если соединения дозированы ранее дня исследования, их следует хранить при -2 0°С.
Методика, стадия 2: День 1: Оттаивание и использование
РВМС
1. РВМС оттаивают во флаконе на водяной бане (37°С) .
Убедиться в том, что вода не закрывает флакон (уровень должен
быть ниже винтовой крышки флакона).
2. Содержимое флакона переносят в пробирку Falcon объемом 50 мл.
3. 10 мл Сред для исследования по каплям добавляют для постепенного уменьшения концентрации ДМСО (в том виде, как поставлен, например, фирмой VWR) в замороженных средах.
4. Клетки центрифугируют (1000 об/мин - 5 мин).
5. Надосадочную жидкость сливают.
6. Клетки повторно суспендируют в 10 мл сред для исследования.
7. 0,1 мл Суспензии переносят в пробирку Cedex для подсчета.
8. Добавляют 0,9 мл сред для доведения объема суспензии для подсчета, равного 1 мл. С помощью Cedex подсчитывают количество клеток при установке степени разбавления, составляющей 1:10.
9. Готовят суспензию клеток при концентрации, равной 8х105 клеток/мл, и получают конечное количество, равное 40000 клеток/лунка.
Методика, стадия 3: День 1: Стимулирование РВМС гранулами CD3/CD28
1. Тщательно перемешанные CD3/CD28 Dynabeads (в том виде,
как поставлены, например, фирмой Dynal) добавляют до
установления отношения гранулы:клетки = 2:1 (т.е. разведение 1
: 20). Тщательно перемешивают.
2. Суспензию дозируют в 384-луночные планшеты для исследования с помощью Multidrop (50 мкл/лунка). Если объем суспензии клеток большой, то после добавления в каждый следующий планшет ее перемешивают.
3. Планшеты закрывают крышками и на 4 8 ч помещают в инкубатор с увлажненной атмосферой (37°С, 5% СОг) .
Методика, стадия 4: День 2: Подготовка планшетов MSD
1. Планшеты Mesoscale Discovery MSD для захвата цитокинов блокируют 0,1% блокирующим буфером В (поставлен фирмой Mesoscale Dsicovery) в растворе D-PBS с использованием 40 мкл/лунка.
2. Планшеты закрывают крышками и на ночь помещают в холодильник.
3. Планшеты вручную промывают с помощью PBS и устройства multidrop combi. Блокирующий буфер В удаляют в сосуд для отходов и с помощью устройства combi в планшет дозируют 4 0 мкл PBS. Затем его вручную удаляют промокают рулонным синим бумажным полотенцем для удаления как можно большего количества оставшейся жидкости до переноса надосадочной жидкости с клетками.
4. Планшеты высушивают бумажным полотенцем.
Методика, стадия 5: День 3: Детектирование IL-17 с помощью планшетов MSD
1. 10 мкл Надосадочных жидкостей с помощью устройства Cybiwell переносят из планшетов для исследования в планшеты MSD. Следует убедиться в том, что все лунки покрыты раствором. Если некоторые лунки не покрыты надосадочной жидкостью, планшет осторожно встряхивают.
2. Планшеты накрывают липкой фольгой (коричневыми наклейками) и затем на 1 ч помещают для инкубации во встряхивающее устройство при комнатной температуре (КТ).
1.
3. С помощью устройства multidrop добавляют 10 мкл детектирующих антител MSD IL-17 (1 мкг/мл в D-PBS, не содержащем Са2+ и Мд2+ (поставлен, например, фирмой Gibco)).
4. Планшеты накрывают липкой фольгой и инкубируют при встряхивании в течение 3 ч при комнатной температуре.
5. Планшеты вручную дважды промывают с помощью PBS и устройства multidrop combi, как это сделано выше.
6. Планшеты высушивают бумажным полотенцем.
7. С помощью устройства multidrop добавляют 35 мкл буфера для считывания MSD Т х 2.
8. Планшеты считывают с помощью считывающего устройства MSD МА60 0 0 по методике для 3 8 4-луночных планшетов в соответствии с инструкциями изготовителя.
Результаты
Типичные соединения формулы (I) изучали с помощью исследования РВМС, описанного выше. Все типичные соединения формулы (I), за исключением ЕЗ, Е5, Еб, Е13, Е15-17, Е34, Е35, Е39, Е52, Е55, Е57, Е60-62, Е67-69, Е71, Е73, Е76, Е80, Е81, Е83, Е91-96, Е99, Е100, Е102, Е105 и Е117-119, которые не исследовали, и Е47, который обладал средним значением р1С50, равным <4, обладали средними значениями р1С50, между 4,5 и 8,0. Типичные соединения формулы (I) Е8, Е12, Е21, ЕЗЗ, ЕЗб, Е84, Е87-90, Е107, Е108, Elll, Е113, Е120, Е122-Е126 обладали средними значениями р1С50, равными > б,0. Е123, Е124, Е125 и Е126 обладали средними значениями р1С50, равными 6,5, 7,2, 6,5 и б,1 соответственно.
Ex vivo модель кожи человека
Свежую ex vivo кожу человека, взятую у здоровых страдающих ожирением пациентов, у которых при абдоминопластике удаляли кожу, обезжиривали и с помощью дерматома нарезали на кусочки толщиной 7 50 мкм. Приготовленную с помощью дерматома кожу дважды инкубировали в течение 5-10 мин при комнатной температуре в PBS, содержащем раствор антибиотик/фунгицид: фунгизон (Invitrogen #15290018), PSG (Fisher #BW17718R) и гентамицин (Invitrogen #15750060). Начиная с этого момента кожу
обрабатывали асептически. Отдельные образцы кожи получали с помощью 10 мм пункционной биопсии и помещали на 0,4 мкм PCF мембрану Transwell (Millicell #Р1НР01250), содержащую 30 мкл 64% раствора бычьего коллагена. После инкубации в течение 30 мин при 37°С, что давало раствору коллагена время для затвердевания, образцы кожи, находящиеся на Transwell переносили в б-луночные матрацы (1 образец в лунке) и в нижнюю камеру вводили 1 мл полных сред (Cornification Media) + гидрокортизон (конечная концентрация равна 0,4 мкг/мл) без добавления или с добавлением исследуемых соединений в концентрации, равной 10 мкМ (день -3), и выдерживали в течение ночи (16-18 ч) при 37°С. Затем среды из нижней камеры отсасывали, заменяли на 1 мл полных сред без гидрокортизона и инкубировали при 37°С в течение 1 ч. Это представляло собой стадию "промывки". После вымывания гидрокортизона опять отсасывали среды из нижней камеры и заменяли на 1,0 мл полных сред без гидрокортизона без добавления или с добавлением GSK соединений в концентрации, равной 10 мкМ (день -2) . Культуры инкубировали при 37°С в камере с увлажненной атмосферой и среды заменяли еще один день (день -1) . На следующий день (день 0) культуры стимулировали в течение 2 4 ч свежеприготовленной смесью Thl7 цитокинов (CD3, 1 мкг/мл, CD28, 2 мкг/мл, IL-lb, 10 нг/мл, IL-6, 5 нг/мл, TGFb, 1 нг/мл, IL-21, 10 нг/мл, анти-IL-4, 1 мкг/мл и анти-INFg, 1 мкг/мл) без добавления или с добавлением исследуемых соединений в концентрации, равной 10П мкМ. После сбора (день +1) образцы кожи нарезали лезвием бритвы и до проведения последующего анализа с помощью RT-PCR переносили в не содержащие RNAse пробирки объемом 1,5 мл,
содержащие 1 мл раствора RNAlater (хранили при -80°С) . Выделение РНК
Полную РНК выделяли примерно из 3 0-40 мг ткани с использованием набора для выделения Qiagen's (Cat # 74106) Mini RNA Isolation. Вкратце, методика состояла в следующем: ткани гомогенизировали в аппарате Precellys-24 с использованием 300 мкл буфера RLT, к которому добавляли 1% 2-бета-меркаптоэтанола,
при 6300 об/мин в течение 30 секунд с использованием б циклов при охлаждении льдом в перерывах в течение 2 мин. К гомогенизату добавляли 600 мкл воды, содержащей протеиназу К, и гидролизовывали при 55°С в течение 15 мин. Гидролизованную ткань центрифугировали в течение 3 мин при 10000Х g и надосадочную жидкость использовали для выделения РНК с применением мини-колонок Qiagen's RNeasy в соответствии с методикой изготовителя. 100 нг РНК использовали в качестве шаблона в 2 0 мкл PCR с применением набора Applied Biosciences RNA-to-CT 1 Step kit (AB Catalog # 4392938), а также специфического зонда TaqMan для каждого количественно определяемого гена. Номера по каталогу зондов фирмы Life Technologies FAM labeled Probes являются следующими: ACTb = Hs01060665_gl, IL-17A = Hs00174383_ml, IL-17F=Hs00369400_ml, IL-22 = Hs01574154_ml. Все использованные зонды (кроме ACTb) поставляет фирма Exon. В смеси Applied Biosciences' Master Mix имеется внутренний контроль с помощью красителя ROX. Аппарат OneStepPlus PCR использовали на стадии, проводимой при КТ, и на 4 0 циклах амплификации. Относительную экспрессию РНК рассматриваемого гена рассчитывали по формуле Delta Delta СТ.
^исследуемое соединение
^контроль ^ Т, контроль ^ Т, исследуемое соединение
Первая delta: Нормировка на экспрессию гена ACTb Вторая delta: Нормировка на образец 13 (день 0 + ДМСО) для рассматриваемого гена. Результаты
Как показано в таблице 1, соединение Е124 ингибирует транскрипцию генов ill 7а, illlf и ±122 для 4 разных доноров. Энантиомеры примера Е123: Е125 и Е126 также исследовали в модели целевого взаимодействия с использованием кожи человека ex vivo. Оба соединения также ингибируют транскрипцию генов illlа, ±111f и 1122. Этот подавляющий эффект являлся специфическим и статистически значимым почти для всех исследованных доноров кожи, поскольку эффект проявлялся для
всех зависимых от RORy цитокинов (IL-17A, IL-17F и IL-22), но не для IFNg.
Таблица 1
Выраженное в процентах ингибирование экспрессии IL-17A, IL-17F и IL-22 мРНК после обработки соединением примера Е123
Примечание: *р= <0,05 (статистически значимо) Применение
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются модуляторами RORy и могут быть применимы при
лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных
заболеваний, опосредуемых RORy, таких как астма, хроническое
обструктивное заболевание легких (COPD) и бронхит,
аллергические заболевания, такие как аллергический ринит и
атопический дерматит, муковисцидоз, отторжение
аллотрансплантата легких, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, анкилозирующий спондилит, системная красная волчанка, псориаз, болезнь Хашимото, панкреатит, аутоиммунный диабет, аутоиммунное заболевание глаз, язвенный колит, болезнь Крона, воспалительная болезнь кишечника (IBS), воспалительный синдром кишечника (IBD), синдром Шегрена, неврит зрительного нерва, диабет типа I, нейромиелит зрительного нерва, злокачественная миастения, увеит, синдром Гийена-Барре, псориатический артрит, болезнь Грейвса и склерит. Особый интерес представляет применение модуляторов RORy при лечении респираторных заболеваний, перечисленных выше, таких как астма и COPD.
Другим объектом настоящего изобретения также является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для применения в терапии.
Другим объектом настоящего изобретения также является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для применения при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых RORy.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении астмы или хронического обструктивного заболевания легких.
Другим объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении псориаза.
Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически
эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения хронического обструктивного заболевания легких или астмы, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения псориаза, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Другим объектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения при лечении воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy.
Еще одним объектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения при лечении астмы или хронического обструктивного заболевания легких.
Еще одним объектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения при лечении псориаза.
При использовании в настоящем изобретении термин "лечение" означает профилактику патологического состояния, облегчение или стабилизацию конкретного патологического состояния, ослабление или устранение симптомов патологического состояния, замедление или прекращение прогрессирования патологического состояния и предупреждение или замедление повторного появления патологического состояния у ранее пораженного пациента или субъекта.
При использовании в настоящем изобретении термин "терапевтически эффективное количество" означает количество
соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которое приводит к желательному биологическому ответу в организме животного или человека.
При использовании в настоящем изобретении термин "субъект" означает организм животного или человека.
Фармацевтические разработки
Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую
соль перед введением пациенту обычно, но не обязательно,
включают в фармацевтические композиции. В соответствии с этим,
другим объектом настоящего изобретения являются
фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или большее количество фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, можно приготовить с помощью процедур и методик, известных специалистам в данной области техники. Некоторые из методик, обычно использующихся в данной области техники, описаны в публикации Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).
Фармацевтическую композицию соединения формулы (I) или его
фармацевтически приемлемой соли можно приготовить для введения
любым подходящим путем, например, путем ингаляции, назальным,
пероральным (включая трансбуккальный или сублингвальный),
местным (включая трансбуккальный, сублингвальный, чрескожный,
накожный) или парентеральным (подкожным, внутримышечным,
внутривенным, внутрикожным) путем. Таким образом,
фармацевтическую композицию соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в зависимости от конкретного пути введения можно приготовить, например, в виде раствора или суспензии (водной или неводной), таблетки, капсулы, порошка, гранулы, лепешки, лосьона, крема, мази, геля, пенки или восстанавливаемого порошка. Такие фармацевтические композиции можно приготовить по любой методике, известной в области фармацевтики, например, путем объединения активного ингредиента с эксципиентом(ами).
Таблетки и капсулы для перорального введения могут быть
представлены в виде разовой дозы и могут содержать обычные эксципиенты, такие как связующие агенты, например, сироп, камедь акации, желатин, сорбит, трагакантовая камедь или поливинилпирролидон; наполнители, например, лактоза, сахар, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; таблетирующие смазывающие вещества, например, стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; разрыхлители, например, картофельный крахмал; или приемлемые смачивающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия. На таблетки можно нанести покрытие по методикам, хорошо известным в обычной фармацевтической практике.
Жидкие препараты для перорального введения могут
находится, например, в форме водных или масляных суспензии,
растворов, эмульсии, сиропов или эликсиров или могут быть
представлены в виде сухого продукта для восстановления водой
или другим подходящим разбавителем пред использованием. Такие
жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как
суспендирующие агенты, например, сорбит, метилцеллюлоза, сироп
глюкозы, желатин, гидроксиэтилцеллюлоза,
карбоксиметилцеллюлоза, гель стеарата алюминия или
гидрированные пищевые жиры, эмульгирующие агенты, например, лецитин, сорбитанмоноолеат или камедь акации; неводные разбавители (которые могут включать пищевые масла), например, миндальное масло, маслообразные сложные эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например, метил- или пропил-п-гидроксибензоат или сорбиновую кислоту, и, при желании обычные вкусовые или окрашивающие агенты.
Фармацевтические композиции соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для местного введения могут быть представлены в виде, например, мазей, кремов или лосьонов, глазных мазей и глазных или ушных капель, пропитанных повязок и аэрозолей и могут содержать обычные подходящие добавки, такие как консерванты, растворители для содействия проникновению лекарственного средства и смягчающие средства в мазях и кремах. Композиции также могут содержать обычные подходящие носители,
такие как основы для крема или мазей, и этанол или олеиловый спирт для лосьонов. Такие носители могут содержаться в количестве составляющем от примерно 1% до примерно 98% в пересчете на композицию. Чаще они составляют примерно до 8 0% в пересчете на композицию.
Фармацевтические композиции, приспособленные для
парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекции, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые делают композицию изотоничной с кровью подразумевающегося реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загущающие агенты. Композиции могут быть представлены в виде разовой дозы или контейнеров, содержащих много доз, например, в виде герметизированных ампул и флаконов, и они могут храниться в виде высушенных вымораживанием (лиофилизированных) средств, для которых необходимо только добавление стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекции, непосредственно перед использованием. Растворы и суспензии для немедленной инъекции можно получить из стерильных порошков, гранул и таблеток.
Фармацевтические композиции для местного введения в легкие могут включать аэрозольные композиции и сухие порошкообразные композиции.
Сухие порошкообразные композиции для местной доставки в легкие или нос обычно содержат порошкообразную смесь соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и подходящего носителя, такого как лактоза или крахмал. Сухие порошкообразные композиции для местной доставки в легкие или нос могут, например, быть представлены в виде капсул и картриджей для использования в ингаляторе или инсуффляторе, например, изготовленных из желатина. Каждая капсула или картридж обычно может содержать 2 0 мкг-10 мг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Альтернативно, соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть представлены без эксципиентов. Упаковка фармацевтической композиции может быть подходящей для доставки
разовой дозы или множества доз. В случае доставки множества доз композицию можно дозировать предварительно (например, как предложил Diskus, см. GB 2242134 или Diskhaler, см. GB 2178965, 2129691 и 2169265) или дозировать при использовании (например, как предложил Turbuhaler, см. ЕР 69715). Примером устройства, содержащего разовую дозу, является Rotahaler (см. GB 2064336). Устройство для ингаляции Diskus включает удлиненную ленту, изготовленную из листа-основы, обладающего множеством углублений, расположенных вдоль его длины, и герметизирующего его закрывающего листа, с образованием множества контейнеров, причем каждый контейнер содержит композицию для ингаляции, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно объединенную с носителем, таким как лактоза. Предпочтительно, если лента является достаточно гибкой, чтобы ее можно было смотать в рулон. Предпочтительно, если лист-основа и герметизирующий лист включает концевые участки, которые не герметизированы друг с другом, и по меньшей мере один из этих концевых участков связан с механизмом намотки. Также предпочтительно, если герметизирующий слой между листом-основой и герметизирующим листом располагался по всей ширине. Предпочтительно, если герметизирующий слой можно отслоить от листа-основы в продольном направлении от первого конца указанного листа-основы.
Желательно, чтобы лекарственные средства для введения путем ингаляции обладали частицами контролируемого размера. Оптимальный размер частиц для ингаляции в бронхиальную систему обычно равен 1-10 мкм, предпочтительно 2-5 мкм. Частицы размером около 2 0 мкм обычно являются слишком крупными для вдыхания и не могут попасть в мелкие дыхательные пути. Для получения частиц таких размеров частицы соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли можно уменьшить в размере с помощью обычных средств, например, путем микронизации. Необходимую фракцию можно отделить с помощью воздушной классификации или просеивания. Предпочтительно, чтобы частицы были кристаллическими, полученными, например, по
методике, которая включает проводимое в непрерывной проточной ячейке при воздействии ультразвука перемешивание текущего раствора соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства в жидком растворителе, содержащего жидкий антирастворитель для указанного лекарственного средства (например, как это описано в заявке на международный патент PCT/GB99/04368). Альтернативно, частицы можно получить по методике, которая включает введение потока раствора вещества в жидком растворителе и потока жидкого антирастворителя для указанного вещества в цилиндрическую смесительную камеру, содержащую осевое выходное отверстие, так что указанные потоки тщательно смешиваются при образовании воронки и это вызывает осаждение кристаллических частиц вещества (например, как это описано в заявке на международный патент PCT/GB00/04237). Если используют эксципиент, такой как лактоза, то обычно размер частиц эксципиента намного больше, чем частиц вдыхаемого лекарственного средства, предлагаемого в настоящем изобретении. Если эксципиентом является лактоза, то обычно она содержится в виде размолотой лактозы, где не более 8 5% частиц лактозы обладают значением СМД (средний по массе диаметр), равным 60-90 мкм, и не менее 15% обладают значением СМД, равным менее 15 мкм.
Аэрозольные композиции можно разработать с использованием подходящего сжиженного пропеллента для доставки из находящихся под давлением упаковок, таких как мерный дозирующий ингалятор. Аэрозольные композиции могут являться суспензией или раствором и обычно они содержат соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и подходящий пропеллент, такой как фторзамещенный углеводород или содержащий водород хлорфторуглерод или их смеси, предпочтительно гидрофторалканы, в особенности 1,1,1,2-тетрафторэтан, 1,1,1,2,3,3,3-гептафтор-н-пропан или их смесь. Аэрозольная композиция необязательно может содержать дополнительные входящие в смеси эксципиенты, хорошо известные в данной области техники, такие как поверхностно-активные вещества, например, олеиновую кислоту или лецитин, и сорастворители, например, этанол. Аэрозольные композиции обычно
помещают в находящуюся под давлением банку (например, алюминиевую банку), закрытую клапаном (например, дозирующим клапаном) и снабженную механизмом с мундштуком. Аэрозольные композиции также могут включать водные растворы или суспензии, которые доставляют в нос или легкие путем распыления.
Фармацевтические композиции для местного введения в нос также можно разработать для доставки с помощью назального спрея или в виде капелек для носа. Фармацевтические композиции для назального введения можно разработать так, чтобы лекарственное средство (средства) можно было доставлять на подходящие участки полости носа (целевые ткани). Кроме того, фармацевтическую композицию можно разработать для назального введения, так чтобы лекарственное средство (средства) могли оставаться во взаимодействии с целевой тканью в течение увеличенного периода времени.
Для пациента подходящим режимом введения фармацевтической композиции местно в нос при использовании назального спрея будет медленное вдыхание через нос после очистки полости носа. Во время вдыхания композицию можно вводить в одну ноздрю, сжав руками другую. Затем процедуру можно повторить для другой ноздри. Обычно по указанной методике в каждую ноздрю можно делать 1 или 2 распыления до двух или трех раз ежедневно. Обычно при каждом распылении в ноздрю можно вводить от примерно 2 5 до примерно 100 мкл фармацевтической композиции.
Фармацевтические композиции для местного введения в нос с
помощью назального спрея или назальных капель можно приготовить
в виде раствора или суспензии. Раствор или суспензию можно
готовить на водной или неводной основе, и они могут содержать
один или большее количество фармацевтически приемлемых
эксципиенты, таких как суспендирующие агенты, например,
карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, вигум, трагакантовая
камедь, бентонит и полиэтиленгликоли; консерванты, например,
хелатные агенты (например, ЭДТК (этилендиаминтетрауксусная
кислота)), четвертичные аммониевые соединения (например,
бензалконийхлорид, бензэтонийхлорид, цетримид и
цетилпиридинийхлорид), ртутьсодержащие средства (например,
фенилмеркурнитрат, фенилмеркурацетат и тимеросал), спиртовые средства (например, хлорбутанол, фенилэтиловый спирт и бензиловый спирт), антибактериальные сложные эфиры (например, эфиры пара-гидроксибензойной кислоты) и другие противомикробные средства, такие как хлоргексидин, хлоркрезол, сорбиновая кислота и ее соли (например, сорбат калия), и полимиксин; агенты, регулирующие тоничность, например, хлорид натрия, декстроза, ксилит и хлорид кальция; буферные реагенты, смачивающие агенты, например, жирные спирты, сложные и простые эфиры, такие как полиоксиэтилен (20), сорбитанмоноолеат (полисорбат 80); антиоксиданты, подсластители и агенты, маскирующие вкус.
Следует понимать, что в дополнение к ингредиентам, явно указанным выше, в зависимости от типа использующейся фармацевтические композиции могут включать другие агенты, обычно использующиеся в данной области техники.
Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую
соль также можно использовать в комбинации с одним или большим
количеством других терапевтических средств, выбранных из
группы, включающей агонисты р2-адренорецептора,
противовоспалительные средства (например, кортикостероиды и
нестероидные противовоспалительные средства) и
антихолинергические средства.
Агонисты р2-адренорецептора, которые можно использовать в комбинации с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью, включают, например, салметерол, салбутамол, формотерол и их соли, например, ксинафоат салметерола, сульфат салбутамола или фумарат формотерола. Кроме того, агонисты р2-адренорецептора включают описанные в WO03/024439, такие как 4-{ (1Я) -2- [ (б-{2-[ (2, б-дихлорбензил)окси]этокси}гексил)амино]-1-гидроксиэтил}-2-(гидроксиметил)фенол и его фармацевтически приемлемые соли, такие как трифенилацетат.
Кортикостероиды, которые можно использовать в комбинации с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью, включают, например, флутиказонпропионат и S
фторметиловый эфир ба,9а-дифтор-17а-[(2-фуранилкарбонил)окси]-
11|3-гидрокси-1 ба-метил-З-оксоандроста-1, 4-диен-17(3-карботионовой кислоты (флутиказонфуроат).
Антихолинергические средства также можно использовать в комбинации с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью. Примерами антихолинергических средств являются такие соединения, которые действуют, как антагонисты, на мускариновые рецепторы, в частности, такие соединения, которые являются антагонистами рецепторов Mi или Мз, двойными антагонистами рецепторов Mi/Мз или М2/М3, или рап-антагонисты рецепторов М1/М2/М3. Антимускариновые соединения для введения путем ингаляции включают, например, ипратропий (например, в виде бромида, CAS 22254-24-6, продающийся под названием атровент), тиотропий (например, в виде бромида, CAS 136310-935, продающийся под названием спирива), (3-эндо)-3-(2-циано-2,2-дифенилэтил)-8,8-диметил-8-азониабицикло[3,2,1]октан бромид и 4-[гидрокси(дифенил)метил]-1-{2-[(фенилметил)окси]этил}-1-азониабицикло[2,2,2]октан бромид.
Специалисту в данной области техники должно быть понятно,
что, если это целесообразно, другое терапевтическое средство
(средства) можно использовать в виде фармацевтически приемлемых
солей или пролекарств, или в виде сложных эфиров (например,
низших алкиловых эфиров), или в виде сольватов (например,
гидратов) для оптимизации активности и/или стабильности, и/или
физических характеристик (например, растворимости)
терапевтического средства. Должно быть понятно, что, если это целесообразно, терапевтическое средство (средства) можно использовать в оптически чистой форме.
Таким образом, другим объектом настоящего изобретения является комбинация, включающая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и одно или большее количество других терапевтических средств.
1. Соединение приемлемая соль:
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
формулы (1а) или его фармацевтически
Н, Ci-залкил, Ci_
где Ri выбран из группы, залкоксигруппу, CF3 и галоген;
R2, R3 и R4 означают Н;
R5 означает Ci-залкил;
R6 означает С3-5алкил или -СН2С3-4циклоалкил; R7 выбран из группы, включающей:
-(Re)r
каждый R8 независимо выбран из группы, включающей галоген, Ci_ 6алкил, Ci-балкоксигруппу, Сз-бДиклоалкил, CN, ОН, С (О) ОН, С (О) OCi-залкил и СН2ОН;
R9 означает группу - (CHRio) s- (X) t- (CHRio) U-Rn;
каждый Rio независимо выбран из группы, включающей Н, СНз, ОН и СН2ОН;
X означает СН2, NH или О;
Rn означает гетероциклоалкильную или Сз-бДиклоалкильную группу, которая может быть незамещенной или содержать один или большее количество заместителей, независимо выбранных из группы, включающей СНз, ОМе, ОН, СН2ОН и галоген;
г равно 0, 1 или 2;
s равно 0, 1 или 2;
t равно 0 или 1;
и равно 0, 1 или 2;
при условии, что не более двух групп R10 означают СН3, ОН или СН2ОН.
2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где Ri означает Н.
3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где Ri и R5 все независимо означают СНз или галоген.
4. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где Ri и R5 означают СН3.
5. Соединение по любому из пп.1-4, или его фармацевтически приемлемая соль, где R6 выбран из группы, включающей пропил, изобутил и -СН2-циклопропил.
6. Соединение по п.5 или его фармацевтически приемлемая соль, где R6 означает изобутил.
7. Соединение по любому из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, где R7 означает:
- 8. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, где R7 означает:
9. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, где г равно 1.
10. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, где г равно 2.
11. Соединение по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый R8 независимо выбран из группы, включающей СНз, ОСНз, СН2ОН, циклопропил, фтор и хлор.
12. Соединение по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемая соль, где Rg означает СН2ОН.
11.
13. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, где г равно 0.
14. Соединение по
любому
ИЗ пп.
1-13
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 0.
15. Соединение по
любому
из пп.
1-13
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 1.
16. Соединение по
любому
из пп.
1-15
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 2.
17. Соединение по
любому
из пп.
1-15
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 1.
18. Соединение по
любому
из пп.
1-15
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 0.
19. Соединение по
любому
из пп.
1-18
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 1,
и X
означает
20. Соединение по
любому
из пп.
1-18
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
равно 0.
21. Соединение по
любому
из пп.
1-20
или
его
фармацевтически приемлемая
соль, где
каждый Rio
означает Н.
22. Соединение по
любому
из пп.
1-21
или
его
фармацевтически приемлемая соль
где
означает
гетероциклоалкильную группу, выбранную из группы, включающей оксиран, оксетан, тетрагидрофуран, тетрагидро-2Н-пиран, пирролидин, пиперидин, морфолин, морфолин-3-он и тиоморфолин-1,1-диоксид.
23. Соединение по п. 22 или его фармацевтически приемлемая
соль, где Rn означает гетероциклоалкил, выбранный из группы,
включающей тетрагидро-2Я-пиран и морфолин.
24. Соединение по любому из пп.1-21 или его фармацевтически приемлемая соль, где Rn означает циклогексан.
25. Соединение по любому из пп.1-22 или его фармацевтически приемлемая соль, где Rn является незамещенным.
26. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая
соль, которое выбрано из группы, включающей:
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-[(оксан-4-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[2-(морфолин-4
ил)этокси]бензол-1-сульфонамид;
2-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-5-(оксан-4-илметокси)бензойную кислоту;
N-(2,4-диметилфенил)-2-метокси-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-(гидроксиметил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(океан-4-илметил)амино]метил}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пиперидин-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(1-метилпирролидин-3-ил)метокси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(5-оксоморфолин-2-ил)метокси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(З-метил-5-оксоморфолин-З-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{ [1- (2,2,2-трифторэтил)пиперидин-4-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-((цис-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)метокси)-N-изобутилбензолсульфонамид;
4-[(3,5-дигидроксициклогексил)окси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-(((lS,3R,5S)-3,5-дигидроксициклогексил)окси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
4-[2-(3,5-диметилморфолин-4-ил)этокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(океан-4-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(оксетан-3-илметокси)метил]бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
З-циклопропил-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3,З-дифтор-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-метил-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-метил-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-гидрокси-Ы-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
2- xлop-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-фтор-^(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-фтор-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-метокси-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксолан-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-4-ил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2-3TOKCH-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N- (2, 4-диметилфенил) -^изобутил-4- ( ( (2R, 3R) -2-метилморфолин-3-ил)метокси)бензолсульфонамид;
3- циано-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
3-
2-циано-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-(циклогексилметокси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[(2,б-диметилциклогексил)метокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(3-гидроксициклогексил)окси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-{[(2S)-4,4-дифторпирролидин-2-ил]метокси}-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид,•
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-[(б-оксопиперидин-3-ил)окси]бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-(1,4-диоксан-2-илметокси)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(4-метилциклогексил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид,•
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[1-(морфолин-4-ил)пропан-2-ил]окси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-2-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(морфолин-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-2-илметокси)бензол-1-сульфонамид,•
4-[(б,б-диметилморфолин-3-ил)метокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-[2-(морфолин-4-ил)этокси]бензол-1-сульфонамид,•
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[(2R,3S)-З-гидроксиоксан-2-ил]метокси}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(4-фторпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(2,б-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(2R,3S,4R,5S)-3,4,5-тригидроксиоксан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-метилпиперидин-4-ил)окси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[(цис-З-фторпиперидин-4-ил)метокси]метил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[2-(2,б-диметилморфолин-4-ил)этокси]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-2,З-дифтор-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{[1-(2-метоксиэтил)пирролидин-3-ил]метокси}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-этилпирролидин-З-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[(1-метилпиперидин-4-ил)метокси]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пирролидин-3-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(пиперидин-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-3-(пиперидин-4-илокси)бензол-1-сульфонамид;
4-(азетидин-3-илметокси)-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид,•
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(б-оксопиперидин-3-ил)окси]метил}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(океан-4-илметокси)-2-(пропан-2-илокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(пиперидин-1
ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-(2-(1,1-диоксидотиоморфолино)-1-гидроксиэтил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(З-фторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[2-(гидроксиметил)морфолин-4-ил]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(4-фторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(пиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[3-(гидроксиметил)морфолин-4-ил]-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(3S,4R)-3,4,5 тригидроксиоксолан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-{[(3R,4S,5S)-3,4,5-тригидроксиоксолан-2-ил]метокси}бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-4-[2-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)-1-гидроксиэтил]-N (2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-(1-гидрокси-2-{2-окса-б-азаспиро[3,3]гептан-б-ил}этил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[транс-(3-гидроксициклобутил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-фтор-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил
2- MeTnn-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил
3- метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-
3- метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
5-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-2-(оксан-
4- илметокси)бензойную кислоту;
2-6poM-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
2- циклопропил-Ы-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксан-4-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(4-метоксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
3- циано-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
З-хлор-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)-4-(5-оксопирролидин-2-ил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[2-(гидроксиметил)морфолин-4-ил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-суль фонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3,5-дифтор-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(5-хлор-2-фторфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-3-фтор-4-{1-гидрокси-2-[(3-метилоксетан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-3
ил)амино]этил}-2-метил-Ы-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-З-метил-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-З-гидрокси-4-[2-гидрокси-1-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
метил-5-[(2,4-диметилфенил)(2-метилпропил)сульфамоил]-2-(оксан-4-илметокси)бензоат;
N-(2,4-диметилфенил)-3-(гидроксиметил)-N-(2-метилпропил)-4-(оксан-4-илметокси)бензол-1-сульфонамид;
N- (4-этилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[ (З-метилоксетан-З-ил) амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(4-этилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2-этилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,2-дигидрокси-З-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,2-дигидрокси-З-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-{1-гидрокси-2-[(оксетан-3-ил)амино]этил}-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,З-дигидрокси-2-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
4-[1,З-дигидрокси-2-(морфолин-4-ил)пропил]-N-(2,4-диметилфенил)-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(2,4-диметилфенил)-4-[1-гидрокси-2-(морфолин-4-ил)этил]-N-(2-метилпропил)бензол-1-сульфонамид;
N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N-(4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-^изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид;
(S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3
(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид; и
(R)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
27. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое выбрано из группы, включающей:
N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид;
N- (4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метокси)бензолсульфонамид;
(S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид; и
(R)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
28. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой (S)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
29. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой (R)-N-(4-этилфенил)-4-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-3-(гидроксиметил)-N-изобутилбензолсульфонамид.
30. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой N-(4-этилфенил)-3-(гидроксиметил)-Ы-изобутил-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-
ил)метокси)бензолсульфонамид.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-30 или его фармацевтически приемлемую соль и один или большее количество фармацевтически приемлемых эксцепиентов.
32. Соединение по любому из пп.1-30 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
33. Соединение по любому из пп.1-3 0 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении воспалительных, метаболических и аутоиммунных заболеваний, опосредуемых RORy.
32.
34. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль для
применения по п.33, где заболеванием является астма,
хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), бронхит,
аллергические заболевания, такие как аллергический ринит и
атопический дерматит, муковисцидоз, отторжение
аллотрансплантата легких, рассеянный склероз, ревматоидный
артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит,
анкилозирующий спондилит, системная красная волчанка, псориаз,
болезнь Хашимото, панкреатит, аутоиммунный диабет, аутоиммунное
заболевание глаз, язвенный колит, болезнь Крона, воспалительная
болезнь кишечника (IBS), воспалительный синдром кишечника
(IBD), синдром Шегрена, неврит зрительного нерва, диабет типа
I, нейромиелит зрительного нерва, злокачественная миастения,
увеит, синдром Гийена-Барре, псориатический артрит, болезнь
Грейвса или склерит.
35. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль для применения по п.33, где заболеванием является астма или хроническое обструктивное заболевание легких.
36. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль для применения по п.33, где заболеванием является астма.
37. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль для применения по п.33, где заболеванием является псориаз.
38. Способ лечения воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту безопасного и терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-30 или его фармацевтически приемлемой соли.
39. Способ лечения по п.38, где заболеванием является астма, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), бронхит, аллергические заболевания, такие как аллергический ринит и атопический дерматит, муковисцидоз, отторжение аллотрансплантата легких, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, анкилозирующий спондилит, системная красная волчанка, псориаз, болезнь Хашимото, панкреатит, аутоиммунный диабет, аутоиммунное
32.
заболевание глаз, язвенный колит, болезнь Крона, воспалительная болезнь кишечника (IBS), воспалительный синдром кишечника (IBD), синдром Шегрена, неврит зрительного нерва, диабет типа I, нейромиелит зрительного нерва, злокачественная миастения, увеит, синдром Гийена-Барре, псориатический артрит, болезнь Грейвса или склерит.
40. Способ лечения по п.38, где заболеванием является астма или хроническое обструктивное заболевание легких.
41. Способ лечения по п.38, где заболеванием является астма.
42. Способ лечения по п.38, где заболеванием является псориаз.
43. Способ лечения по любому из пп.38-42, где субъектом является человек.
44. Применение соединения по любому из пп.1-30 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения при лечении воспалительного, метаболического или аутоиммунного заболевания, опосредуемого RORy.
45. Применение по п.44, где заболеванием является астма или хроническое обструктивное заболевание легких.
46. Применение по п.44, где заболеванием является псориаз.
По доверенности
Схема 2а и 2Ь
Схема 2а и 2Ь
Схема За и ЗЬ
Схема За и ЗЬ
Схема 4а и 4Ь
Схема 4а и 4Ь
Схема 5а и 5Ь
Схема 5а и 5Ь
Схема 7а и 7Ь
Схема 7а и 7Ь
Схема 8а и 8Ь
Схема 8а и 8Ь
Схема 9
Схема 9
Схема 15
15а
Схема 15
15а
Схема 16
16а
Схема 16
16а
17а
17а
18а
18а
116
116
116
116
116
116
116
116
116
116
116
116
117
120
120
124
127
127
143
146
146
149
152
152
184
184
184
184
184
184
|
