(57) Реферат / Формула:
Описаны способы лечения непереносимости лактозы, включающие в себя применение соединений, которые могут быть специфическими для рецепторов PPAR γ или могут модулировать рецепторы PPAR γ.
2420-519308ЕА/030 СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ НЕПЕРЕНОСИМОСТИ ЛАКТОЗЫ
Родственные заявки
Данная заявка заявляет приоритет ЕР 12425073.9, зарегистрированной 18 апреля 2012 г., и U.S.S.N 61/672931, зарегистрированной 18 июля 2012 г., обе из которых включены ссылками во всей их полноте.
Уровень изобретения
Белок лактаза является дисахаридазой (|3-галактозидазой) , экспрессированной на кончиках ворсинок тонкой кишки, обладающей способностью гидролизовать лактозу в галактозу и глюкозу. Неадекватная активность лактаза-флоризин-гидролазы (LPH) является ответственной за непереносимость/мальабсорбцию лактозы, которые приводят к диарее, боли в животе или вздутию живота после приема лактозы. Начальная недостаточность лактазы (или неустойчивость лактазы или гиполактазия) является основной причиной непереносимости лактозы вследствие относительного или абсолютного отсутствия экспрессии лактазы в тонкой кишке, имеющего место в детстве при различных возрастах и у различных расовых групп. Приблизительно 7 0% мировой популяции имеют первичный дефицит лактазы. Процент дефицита лактозы варьирует согласно этнической принадлежности и связан с применением молочных продуктов в пищевом рационе, достигающих до 2 0% популяции в Северной Европе, 4 0% в Средиземноморской части Европы, 8 0% в Африке и 90% в Азии. Типичными лечениями непереносимости лактозы является исключение лактозы (приводящее к пищевой неполноценности) или экспансивный режим питания, такой как применение молока с дефицитом лактозы или добавление лактазы.
Описано, что два конкретных нуклеотида с одним полиморфизмом (SNP) тесно связаны с гиполактазией взрослого типа. А С в положении_13 910 (С_1зэю) , находящимся выше гена лактазы, связан на 100% и G в положении 22018 (G_22ois) более чем на 95% связан с неустойчивостью лактазы у популяции финнов. SNP. Экспрессия мРНК LPH в слизистой оболочке кишечника у
индивидуумов с Т_139ю и A_22oi8 выше, чем обнаруженная у индивидуумов с С_139ю и G_22oi8/ что предполагает транскрипционную регуляцию гена LPH. Однако многое в регуляции гена LPH остается неизвестным. В соответствии с этим, имеется потребность в эффективных агентах, которые применимы при лечении непереносимости лактозы и родственных заболеваний.
Активированные пролифератором пероксисомы рецепторы (PPAR) являются членами суперсемейства рецепторов нуклеарных гормонов, которые являются активированными лигандом факторами транскрипции, регулирующими экспрессию гена. PPAR играют роль при регуляции дифференциации, развития и метаболизма клеток высших организмов.
Идентифицировано три типа PPAR: альфа, экспрессированный в печени, почках, сердце и других тканях и органах, бета/дельта, экспрессированный, например, в головном мозгу, и гамма, экспрессированный в трех формах: гамма 1, гамма 2 и гамма 3. Рецепторы PPARy ассоциированы со стимуляцией дифференциации креатиноцитов и служат в качестве мишени потенциального лекарственного средства для ряда болезненных состояний, включающих в себя кожные нарушения, такие как псориаз и атопический дерматит.
Сущность изобретения Данное изобретение в целом относится к способу лечения, уменьшения интенсивности симптомов или фактического предотвращения непереносимости лактозы у пациента, нуждающегося в этом, включающему в себя введение композиции, которая
содержит модулятор PPAR, например PPARa, 8 или у, например, модулятор PPARy, например, агонист (например, такой, как соединение, описанное в контексте) нуждающемуся в этом пациенту. В контексте предложен также способ стимуляции экспрессии гена лактозы у пациента, нуждающегося в этом,
содержащий введение агониста PPAR, например, агониста PPARa, PPAR8 или PPARy, пациенту.
В контексте предложен также способ лечения диареи, боли в животе и/или вздутия живота после потребления в пищю лактозы у
пациента, нуждающегося в этом, содержащий введение агониста PPAR, например агониста PPARa, PPAR8, PPARy. Например, в контексте предложен способ уменьшения интенсивности симптомов непереносимости лактозы у пациента, потребляющего композицию, которая включает в себя лактозу, содержащий введение агониста PPAR до указанного потребления, одновременно с потреблением или после потребления.
Краткое описание фигур
На фигуре 1А изображена экспрессия гена, оцененная в кПЦР, в синхронизированных Сасо2-клетках спустя 24 часа после обработки 1 мМ соединением 34. Подтверждение позитивно регулированной экспрессии 12 генов наблюдали на микромассивах. Позитивно регулированная экспрессия AQP12, OSTa и LZTS1 не подтверждается. Результаты выражены в кратных числах относительно контроля (регуляция до величины 1).
На фигуре 1В изображена экспрессия генов, оцененная в кПЦР, в синхронизированных Сасо2-клетках спустя 24 часа после обработки 1 мМ соединением 34. Подтверждение позитивно регулированной экспрессии 12 генов наблюдали в микромассивах. Позитивно регулированная экспрессия AQP12, OSTa и LZTS1 не подтверждается. Результаты выражены в величинах относительной экспрессии.
На фигуре 2А изображена экспрессия генов, оцененная в кПЦР, в синхронизированных клетках спустя 24 часа после обработки 1 мМ соединением 34. Подтверждение экспрессии всех 15 позитивно регулированных генов наблюдали в микромассивах. Результаты выражены в кратных числах относительно контроля (регуляция до величины 1).
На фигуре 2В изображена экспрессия гена, оцененная в кПЦР, в синхронизированных Сасо2-клетках спустя 24 часа после обработки 1 мМ соединением 34. Подтверждение экспрессии всех 15 позитивно регулированных генов наблюдали в микромассивах. Результаты выражены в величинах относительной экспрессии.
На фигуре 3 изображена экспрессия гена, выраженная в кратных величинах стимуляции 2, которая коррелирует с
результатами стимуляции 1 микромассивов (г=0,754, р=0,004б).
На фигуре 4 показано, что экспрессия мРНК лактазы индуцируется PPAR. Клетки Сасо-2 стимулировали различные агонисты PPARy и PPARa. Статистические различия анализировали программным обеспечением GraphPad, используя непараметрический тест Манна-Уитни.
Фигура 5: идентификация прямых повторов в промоторе (3000 п.о.) гена лактазы человека. DR1 и DR2 выделены жирным шрифтом и начинаются с AG. Указан также блок TATA блок и буквы нижних случаев представляют собой начало первого экзона.
Подробное описание
Отличительные признаки и другие детали описания теперь будут описаны более конкретно. Перед дальнейшим описанием настоящего изобретения здесь собраны некоторые термины, применяемые в описании изобретения, примерах и прилагаемой формуле изобретения. Эти определения следует рассматривать в свете остальной части описания изобретения, и они должны быть понятны специалисту в данной области. Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в контексте, имеют такие же значения, как и термины, обычно понятные среднему специалисту в данной области.
Определения
Термин "лечение" включает в себя любое действие, например, уменьшение, снижение, модуляцию или устранение, которое приводит к улучшению симптомов состояния, заболевания, нарушения и т.п.
Термин "алкенил", используемый в контексте, относится к ненасыщенной неразветвленной или разветвленной углеводородной группе, имеющей, по меньшей мере, одну углерод-углеродную двойную связь, такой как неразветвленная или разветвленная группа с 2-12, 2-10 или 2-6 атомами углерода, обозначаемой в контексте как Сг-С^алкенил, Сг-Сюалкенил, Сг-Сбалкенил, соответственно. Примеры алкенильных групп включают в себя, но не ограничиваются указанным, винил, аллил, бутенил, пентенил, гексенил, бутадиенил, пентадиенил, гексадиенил, 2-этилгексенил,
2-пропил-2-бутенил, 4-(2-метил-З-бутен)пентенил и т.д.
Термин "алкокси", используемый в контексте, относится к алкильной группе, присоединенной к атому кислорода (-О-алкил). Примеры алкоксигрупп включают в себя, но не ограничиваются указанным, группы с алкильной, алкенильной или алкинильной группой, содержащей 1-12, 1-8 или 1-6 атомов углерода, обозначаемые в контексте как С^-С^алкокси, С^-Свалкокси и Ci-Сбалкокси, соответственно. Примерные алкоксигруппы включают в себя, но не ограничиваются указанным, метокси, этокси и т.д. Аналогично этому, примерные "алкеноксигруппы" включают в себя, но не ограничиваются указанным, винилокси, аллилокси, бутенокси и т.д.
Термин "алкил", используемый в контексте, относится к насыщенной неразветвленной или разветвленной углеводородной группе, такой как неразветвленная или разветвленная группа с 112, 1-10 или 1-6 атомами углерода, обозначаемой в контексте Ci-СЧгалкил, Ci-Сюалкил и Ci-Сбалкил, соответственно. Примеры алкильных групп включают в себя, но не ограничиваются указанным, метил, этил, пропил, изопропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, З-метил-1-бутил, 2-метил-З-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, З-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, З-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,З-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил, гептил, октил и т.д. В некоторых вариантах осуществления алкил относится к Ci-Сбалкилу. В некоторых вариантах осуществления циклоалкил относится к Сз-СбЦиклоалкилу.
Алкильные, алкенильные и алкинильные группы в некоторых вариантах осуществления могут быть необязательно замещены или могут содержать в цепи, по меньшей мере, одну группу, выбранную из алканоила, алкокси, алкила, алкенила, алкинила, амидо, амидино, амино, арила, арилалкила, азидо, карбамата, карбоната, карбокси, циано, циклоалкила, группы сложного эфира, простого эфира, формила, галогена, галогеналкила, гетероарила, гетероциклила, гидроксила, имино, кетона, нитро, фосфата, фосфонато, фосфинато, сульфата, сульфида, сульфонамидо,
сульфонила и тиокарбонила.
Термин "алкинил", используемый здесь, относится к ненасыщенной неразветвленной или разветвленной углеводородной группе, имеющей, по меньшей мере, одну углерод-углеродную тройную связь, такой как неразветвленная или разветвленная группа с 2-12, 2-8 или 2-6 атомами углерода, называемой в контексте Сг-С^алкинилом, Сг-Свалкинилом и Сг-Сбалкинилом, соответственно. Примерные алкинильные группы включают в себя, но не ограничиваются указанным, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, метилпропинил, 4-метил-1-бутинил, 4-пропил-2-пентинил и 4-бутил-2-гексинил и т.д.
Термин "арил", используемый в контексте, относится к моно, би- или другой поликарбоциклической, ароматической системе. В некоторых вариантах осуществления арил относится к моноциклическому и/или бициклическому 5-б-членному кольцу. Ароматическое кольцо может быть замещено в одном или нескольких положениях кольца заместителями, выбранными из алканоила, алкокси, алкила, алкенила, алкинила, амидо, амидино, амино, арила, арилалкила, азидо, карбамата, карбоната, карбокси, циано, циклоалкила, группы сложного эфира, простого эфира, формила, галогена, галогеналкила, гетероарила, гетероциклила, гидрокси, имино, кетона, нитро, фосфата, фосфоната, фосфинато, сульфата, сульфида, сульфонамидо, сульфонила и тиокарбонила. Термин "арил" включает в себя также полициклические системы, имеющие два или более колец, у которых два или более атомов углерода являются общими для двух соседних колец (кольца называются "конденсированными кольцами"), по меньшей мере одно из колец которых является ароматическим, другие кольца могут быть, например, циклоалкилами, циклоалкенилами, циклоалкинилами и/или арилами. Примеры арильных групп включают в себя, но не ограничиваются указанными, фенил, толил, антраценил, флуоренил, инденил, азуленил и нафтил, а также бензоконденсированные карбоциклические группы, такие как 5,б,7,8-тетрагидронафтил.
Термин "карбокси", применяемый в данном контексте, относится к радикалу -СООН или его соответствующим солям, например, -COONa и т.д.
Термин "циклоалкил", используемый в контексте, относится к одновалентной насыщенной или ненасыщенной циклической, бициклической или мостиковой бициклической углеводородной группе с 3-12, 3-8, 4-8 или 4-6 атомами углерода, обозначаемой в контексте, например, как "CVs циклоалкил", образованный из циклоалкана. Примерные циклоалкильные группы включают в себя, но не ограничиваются указанным, циклогексаны, циклогексены, циклопентаны, циклопентены, циклобутаны и циклопропаны. Циклоалкильные группы могут быть замещены алканоилом, алкокси, алкилом, алкенилом, алкинилом, амидо, амидино, амино, арилом, арилалкилом, азидо, карбоматом, карбонатом, карбокси, циано, циклоалкилом, группой сложного эфира, простого эфира, формилом, галогеном, галогеналкилом, гетероарилом, гетероциклилом, гидроксилом, имино, кетоном, нитро, фосфатом, фосфонато, фосфинато, сульфатом, сульфидом, сульфонамидо, сульфонилом и тиокарбонилом. Циклоалкильные группы могут быть конденсированы с другими циклоалкильными, арильными или гетероциклильными группами. В некоторых вариантах осуществления циклоалкил относится к Сз-СбЦиклоалкилу.
Термины "гало", "галоген" или "гал", используемые в контексте, относятся к F, CI, Вг или I.
Термин "галогеналкил", используемый в контексте, относится к алкильной группе, замещенной одним или несколькими атомами галогена.
Термин "фенил", используемый в контексте, относится к 6-членному карбоциклическому ароматическому кольцу. Фенильная группа может быть также конденсирована с кольцом циклогексана или циклопентана. Фенил может быть замещен одним или несколькими заместителями, включающими в себя алканоил, алкокси, алкил, алкенил, алкинил, амидо, амидино, амино, арил, арилалкил, азидо, карбамат, карбонат, карбокси, циано, циклоалкил, группу сложного эфира, простого эфира, формил, галоген, галогеналкил, гетероарил, гетероциклил, гидроксил, имино, кетон, нитро, фосфат, фосфонат, фосфинат, сульфат, сульфид, сульфонамидо, сульфонил или тиокарбонил.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" или
"фармацевтически приемлемый эксципиент", используемый в контексте, относится к любому и всем растворителям, дисперсионным средам, покрытиям, изотоническим и задерживающим абсорбцию агентам и т.д., которые совместимы с фармацевтическим введением. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. Композиции могут также содержать другие активные соединения, обеспечивающие добавочные, дополнительные или усиленные терапевтические функции.
Термин "фармацевтическая композиция" используемый в контексте, относится к композиции, содержащей, по меньшей мере, одно описываемое в контексте соединение, изготовленное вместе с одним или несколькими фармацевтическими приемлемыми носителями.
Термины "индивидуум", "пациент" или "субъект" применяют взаимозаменямым образом, и они включают в себя любое животное, включающее в себя млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс, других грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, крупный рогатый скот, овец, лошадей или приматов, и наиболее предпочтительно людей. Соединения по изобретению можно вводить млекопитающему, такому как человек, но можно также вводить другим млекопитающим, таким как животное, нуждающееся в ветеринарном лечении, например, домашним животным (например, собакам, кошкам и т.д.), сельскохозяйственным животным (например, коровам, овцам, свиньям, лошадям и т.д.) и лабораторным животным (например, крысам, мышам, морским свинкам и т.д.). Млекопитающим, подвергнутым лечению способами по изобретению, желательно является млекопитающее, для которого желательна модуляция рецепторов PPAR. "Модуляция" включает в себя антагонизм (например, ингибирование), агонизм, частичный антагонизм и/или частичный агонизм.
В настоящем описании изобретения термин "терапевтически эффективное количество" означает количество рассматриваемого соединения, которое может вызывать биологическую или лечебную реакцию ткани, системы, животного или человека, которую пытается достичь исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист. Для лечения заболевания, соединения по изобретению
вводят в терапевтически эффективных количествах. Альтернативно, терапевтически эффективным количеством соединения является количество, требуемое для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического действия, такое как количество, которое приводит к предотвращению или уменьшению симптомов, ассоциированных с заболеванием, связанным с рецепторами PPAR.
Термин "фармацевтически приемлемая соль(и)", используемый
в контексте, относится к солям кислотных или основных групп,
которые могут присутствовать в соединениях, используемых в
композициях настоящего изобретения. Включенные в настоящие
композиции соединения, которые являются основными по природе,
способны образовывать большое число солей с различными
неорганическими и органическими кислотами. Кислотами, которые
можно применять для получения фармацевтически приемлемых
кислотно-аддитивных солей таких основных соединений, являются
кислоты, которые образуют нетоксичные кислотно-аддитивные соли,
т.е. соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы,
включающие в себя, но не ограничивающиеся указанным, малат,
оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, сульфат, бисульфат,
фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат,
цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат,
аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат,
глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат,
метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-
толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-З-нафтоат)). Соединения, включенные в композиции настоящего изобретения, которые включают в себя аминогруппу, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами в дополнении к кислотам, указанным выше. Соединения, включенные в настоящие композиции, которые являются кислотными по природе, способны образовывать основные соли с различными фармакологически приемлемыми катионами. Примеры таких солей включают в себя соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов и, в частности, соли кальция, магния, натрия, лития, цинка, калия и железа.
Соединения настоящего описания могут содержать один или
несколько хиральных центров и/или двойных связей и, следовательно, могут существовать в виде стереоизомеров, таких как геометрические изомеры, энантиомеры или диастереомеры. Термин "стереоизомеры" при использовании в данном контексте, включает в себя все геометрические изомеры, энантиомеры или диастереомеры. Эти соединения можно обозначать символами "R" или "S", в зависимости от конфигурации заместителей вокруг стереогенного атома углерода. Настоящее изобретение включает в себя различные стереоизомеры этих соединений и их смеси. Стереоизомеры включают в себя энантиомеры и диастереомеры. Смеси энантиомеров или диастереомеров можно обозначить в номенклатуре знаком "(±)", но специалисту в данной области будет известно, что структура безусловно может указывать на присутствие хирального центра.
Индивидуальные стереоизомеры соединений настоящего изобретения можно получать синтетическим способом из коммерчески доступных исходных веществ, которые содержат асимметричные или стереогенные центры, или получением рацемических смесей с последующим разделением их способами, хорошо известными специалисту в данной области. Примерами этих способов разделения являются (1) присоединение смеси энантиомеров к хиральному вспомогательному веществу, разделение полученной смеси диастереомеров перекристаллизацией или хроматографией и освобождение оптически чистого продукта от вспомогательного вещества, (2) образование соли с использованием оптически активного разделяющегося агента или (3) прямым разделением смеси оптических энантиомеров на хиральных хроматографических колонках. Стереоизомерные смеси можно также разделить на их составные стереоизомеры хорошо известными способами, такими как газовая хроматография на хиральной фазе, высоэффективная жидкостная хроматография на хиральной фазе, кристаллизация соединения в виде комплекса хиральной соли или кристаллизацией соединения в хиральном растворителе. Стереоизомеры можно также получить из стереоизомерно чистых промежуточных продуктов, реагентов и катализом хорошо известными асимметричными синтетическими
способами.
В соединениях настоящего изобретения могут также присутствовать геометрические изомеры. Символ означает связь, которая может быть одинарной, двойной или тройной связью, описываемой в контексте. Настоящее изобретение включает в себя различные геометрические изомеры и их смеси, являющиеся результатом расположения заместителей вокруг углерод-углеродной двойной связи или расположения заместителей вокруг карбоциклического кольца. Заместители вокруг углерод-углеродной двойной связи обозначают как имеющие "Z"- или "Е"-конфигурацию, где обозначения "Z" или "Е" применяют согласно стандартам IUPAC. Если не указано иное, структуры, имеющие двойные связи, включают в себя как "Е"-, так и "Z''-изомеры.
Заместители вокруг углерод-углеродной двойной связи в качестве альтернативы можно называть "цис"- или "транс"-заместителями, где "цис" означает заместители на одной стороне двойной связи и "транс" означает заместители на противоположных сторонах двойной связи. Расположение заместителей вокруг карбоциклического кольца обозначают как "цис" или "транс". Термин "цис" означает заместители на одной стороне плоскости кольца, а термин "транс" означает заместители на противоположных сторонах плоскости кольца. Смеси соединений, у которых заместители, расположенные как на одной, так и на противоположных сторонах плоскости кольца, обозначают "цис/транс".
Соединения, описанные в контексте, могут существовать в сольватированных, а также в несольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и тому подобное, и предполагается, что настоящее изобретение включает в себя как сольватированные, так и несольватированные формы. В одном варианте осуществления соединение является аморфным. В одном варианте осуществления соединение является полиморфом. В другом варианте осуществления соединение находится в кристаллической форме.
Изобретение включает в себя также меченные изотопами соединения настоящего изобретения, которые идентичны
соединениям, указанным в контексте, за исключением того, один или несколько атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа, обычно обнаруживаемого в природе. Примеры изотопов, которые можно включить в соединения изобретения, включают в себя изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и
^"^^^ т^тлт,^ тл"тл 2тт Зтт 13^, 14^, 15ЛТ 18^ 17^ 31-п 32-п 350 18т-, т,
хлора, такие как Н, Н, С, С, N, О, О, Р, Р, S, F и 36С1, соответственно.
Некоторые меченые изотопами описанные соединения
(например, соединения, меченые 3Н и 14С) являются применимыми в анализах распределения соединения и/или субстрата в ткани. Изотопы тритий (т.е. 3Н) и углерод-14 (т.е. 14С) особенно предпочтительны вследствие легкости их получения и детектируемости. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. 2Н) , может обеспечить определенные терапевтические преимущества, являющиеся результатом более высокой метаболической стабильности
(например, повышенный in vivo период полураспада или пониженные потребности доз) и, следовательно, может быть предпочтительным в некоторых случаях. Меченые изотопами соединения настоящего изобретения обычно можно получить следующими процедурами, аналогичными процедурам, описанным, например, здесь в примерах заменой немеченого изотопом реагента реагентом, меченым изотопом.
Термин "пролекарство" относится к соединениям, которые превращаются in vivo, образуя описанное соединение, или фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват этого соединения. Превращение может происходить посредством различных механизмов, таких как гидролиза в крови. Например, если соединение изобретения или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения содержит функциональную группу карбоновой кислоты, пролекарство может содержать эфирную группу, образованную заменой атома водорода группы кислоты, такой группой, как (Ci-Cs) алкил, (С2-С12) алканоилоксиметил, 1-(алканоилокси)этил, имеющий от 4 до 9 атомов углерода, 1-метил-1-(алканоилокси)этил, имеющий от 5 до 10 атомов углерода,
алкоксикарбонилоксиметил, имеющий от 3 до б атомов углерода, 1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 4 до 7 атомов углерода, 1-метил-1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 5 до 8 атомов углерода, N-(алкоксикарбонил)аминометил, имеющий от 3 до 9 атомов углерода, 1-(N-(алкоксикарбонил)амино)этил, имеющий от 4 до 10 атомов углерода, 3-фталидил, 4-кротонолактонил, гамма-бутиролактон-4-ил, ди-N, N- (С1-С2) алкиламино (С2-С3) алкил (такой как (3-диметиламиноэтил) , карбамоил- (С1-С2) алкил, N,N-AM(CI-С2)алкилкарбамоил-(С1-С2)алкил и пиперидино-, пирролидино- или морфолино (С2-С3) алкил.
Аналогично этому, если соединение изобретения содержит
функциональную группу спирта, пролекарство может быть
образовано заменой атома водорода спиртовой группы такой
группой, как (Ci-Сб) алканоилоксиметил, 1-((Ci-
Сб) алканоилокси) этил, 1-метил-1-( (Ci-Сб) алканоилокси) этил (Ci-
Сб)алкоксикарбонилоксиметил, N- (Ci-Сб)алкоксикарбониламинометил,
сукциноил, (Ci-Сб) алканоил, а-амино (С1-С4) алканоил, арилацил и
а-аминоацил или а-аминоацил-а-аминоацил, где каждая
аминоацильная группа независимо выбрана из встречающихся в
природе L-аминокислот, Р(О) (ОН) 2, _Р(0) (О (Ci-Сб) алкил) 2 или
гликозил (радикал, являющийся результатом удаления
гидроксильной группы у полуацетатной формы углевода).
Если соединение изобретения включает в себя функциональную группу амина, пролекарство может быть образовано заменой атома водорода в аминогруппе такой группой, как R-карбонил, RO-карбонил, NRR'-карбонил, где каждый из R и R' независимо представляет собой (Ci-Сю)алкил, (С3-С7)циклоалкил, бензил или R-карбонил представляет собой природный а-аминоацил или природный а-аминоацил-природный а-аминоацил, -С(ОН)С(О)OY1, где Y1 представляет собой Н, (Ci-C6) алкил или бензил, -C(OY2)Y3, где Y2 представляет собой (С1-С4)алкил и Y3 представляет собой (Ci-Сб) алкил, карбокси (Ci-Сб) алкил, амино (С1-С4) алкил или моно-N- ИЛИ ди-N, N- (Ci-Сб) алкиламино алкил, -C(Y4)Y5, где Y4 представляет собой Н или метил и Y5 представляет собой моно-N- ИЛИ ДИ-Ы,Ы-(Ci-Сб)алкиламино, морфолино, пиперидин-1-ил или пирролидин-1
ил.
Модуляторы PPAR
Описание
предоставляет,
меньшей
мере
частично,
соединения, имеющие модулирующую PPAR активность, например, модулирующую PPARy активность. Такие соединения могут быть представлены, например, формулой, показанной ниже. В контексте представлены также композиции, которые включают в себя соединения, представленные описанными формулами, и, например, фармацевтически или косметически приемлемый носитель или эксципиент.
Например, в одном варианте осуществления рассматриваемые соединения, модулирующие PPAR (например, соединения, обладающие активностью PPAR), могут быть представлены соединениями формулы:
R2R-|N
(I)
и их фармацевтически приемлемыми солями, стереоизомерами, пролекарствами, где
Ri и R2, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и Ci-балкила; или Ri и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют ароматическое или алифатическое кольцо с 5 или б атомами, которое необязательно может быть замещено;
Y и Z, каждый независимо, выбраны из группы состоящей из Н, ОН, СООН, -0R3, -СН (0R3) СООН; и
R3 выбран из группы, состоящей из Н, фенила, бензила, винила, аллила, Ci-б алкила или Ci-балкила, замещенного одним, двумя, тремя или более атомами галогена.
В одном варианте осуществления Y может быть Н или СООН. Например, Y может быть Н и Z может быть CH(0R3> C00H или Y может быть СООН и Z может быть -OR3. В некоторых вариантах осуществления R3 может быть метилом, этилом, н-пропилом или изопропилом.
В другом варианте осуществления группа NRiR2 может быть в
4'-положении или может быть в 3'-положении. В некоторых вариантах осуществления Ri и R2 представляют собой Н.
Примерные соединения включают в себя также соединения, представленные формулой На или lib, или их фармацевтически приемлемой солью, энантиомером или стереоизомером:
у которых
Ri и R2, каждый независимо, выбран из группы, состоящей из Н и Ci-балкила, или Ri и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют ароматическое или алифатическое кольцо с 5 или б атомами;
R6 выбран из группы, состоящей из -NHOH, -ОН и -ORg;
R9 представляет собой С1-6алкил;
R4 выбран из Н, фенила, бензила, винила, аллила, С1-6алкила или Ci-балкила, замещенного одним или несколькими атомами галогена;
R5 и R7, независимо друг от друга, представляют собой водород или галоген; или
R4 и R5 или R4 и R6 вместе образуют конденсированное гетероциклическое кольцо с 5 или б атомами, необязательно замещенное галогеном или Ci-балкилом; и А представляет собой конденсированное гетероциклическое кольцо; или его фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах осуществления группа NRiR2 в формуле На может быть в 4'-положении или может быть в 3'-положении. В некоторых вариантах осуществления Ri и R2 представляют собой Н.
R9 в некоторых вариантах осуществления может быть метилом,
этилом, н-пропилом или изопропилом.
В некоторых вариантах осуществления соединение может быть представлено формулой:
в которой р равно 1 или 2, R.6 представляет собой ОН или -ORg, где Rg имеет значения, указанные выше, и Rio, независимо для каждого случая, выбран из группы, состоящей из Н, галогена и Ci-6 алкила, например, метила или этила.
Примерные соединения, рассматриваемые в контексте, включают в себя соединения формул:
или их фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах осуществления рассматриваемые
соединения включают в себя 4-амино-Ы-гидрокси-2-метоксибензамид
(соединения 13); б-метоксихинолин-5-карбоновую кислоту
(соединение 36); б-метокси-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-5-
карбоновую кислоту (соединение 37); 5-
диизопропиламиносалициловую кислоту (соединение 38) .
Другие примерные соединения включают в себя соединения, представленные формулами:
(соединение 26)
(соединение 17)
(соединение 31):
• (соединение 28):
Соединения, рассматриваемые в контексте, включают в себя рацемические смеси и энантиомеры соединений, например (±)-2-гидрокси-3-(3'-аминофенил)пропионовую кислоту (соединение 20); (±)-2-метокси-2-(4'-аминофенил)уксусную кислоту (соединение 23); (±)-2-ЭТОКСИ-2-(3'-аминофенил)уксусную кислоту (соединение
32); (±)-2-ЭТОКСИ-2
- аминофенил)уксусную кислоту (соединение
33); (±)-2-метокси-З-(4'-аминофенил)пропионовую кислоту
(соединение 34) (рацемическая форма); (±)-2-этокси-З-(4'-аминофенил)пропионовую кислоту (соединение 39); (±)-2-этокси-З-(3'-аминофенил)пропионовую кислоту (соединение 40).
Например, соединения, используемые в способах настоящего
изобретения, могут быть энантиомерами следующих рацемических
смесей: (R,S)-2-гидрокси-2-(3-аминофенил)уксусной кислоты
(соединения 10); (R,S)-2-гидрокси-2-(4-аминофенил)уксусной
кислоты (соединения 11); (R,S)-2-гидрокси-З-(4'-
аминофенил)пропионовой кислоты (соединения 21); (R,S)-2-метокси-2-(3'-аминофенил)уксусной кислоты (соединения 22); (R,S)-2-метокси-З-(3'-аминофенил)пропионовой кислоты (соединения 35); (R,S)-2-метокси-З-(4-аминофенил)пропионовой
кислоты (соединения 34), а также энантиомерами, например, (+)-
2-Б-метокси-3-(4-аминофенил)пропионовая кислота (соединение
34); (-) -2-1Ч-метокси-3- (4-аминофенил) пропионовая кислота
(соединение 34).
Другие рассматриваемые смеси соединений рацемического типа
включают в себя, например, (±)-2-гидрокси-2-(3'-
аминофенил)уксусную кислоту (соединение 10); (±)-2-гидрокси-2-
(4'-аминофенил)уксусную кислоту (соединение 11); (±)-2-гидрокси-3-(4'-аминофенил)пропионовую кислоту (соединение 21) и
(±)-2-метокси-2-(3'-аминофенил)уксусную кислоту (соединение 22) .
Следующими соединениями, рассматриваемыми для применения в
описанных способах, являются 5-аминосалицилогидроксамовая
кислота (соединение 5) ; 3-диметиламиносалициловая кислота
(соединение б) ; 2-метокси-4-аминобензойная кислота (соединение
7); 2-метокси-5-аминобензойная кислота (соединение 8); 5-
метиламиносалициловая кислота (соединение 9); 4-
метиламиносалициловая кислота (соединение 12); 4-
ацетиламиносалициловая кислота (соединение 16); 2-этокси-4-
аминобензойная кислота (соединение 18); 2-этокси-5-
аминобензойная кислота (соединение 19) ; 4-
диметиламиносалициловая кислота (соединение 24); 2-этокси-4-аминобензоилгидроксамовая кислота (соединение 25) ; б-гидроксихинолин-5-карбоновая кислота (соединение 27); 2-(2-пропил)окси-4-аминобензойная кислота (соединение 30); 4-(1-пиперазинил)салициловая кислота (соединение 41); (R,S)-5-оксахинолин-б-карбоновая кислота (соединение 15) ; б-метоксихинолин-5-карбоновая кислота (соединение 36); б-метокси-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-5-карбоновая кислота (соединение 37); 5-диизопропиламиносалициловая кислота (соединение 38) и 4-диизопропиламиносалициловая кислота (соединение 42).
Способы получения рассматриваемых соединений можно найти, например, в W02007/01051 б и W02007/010514, каждый из которых таким образом включен посредством ссылки во всей его полноте.
В контексте предложены также соединения, представленные формулой:
/4°
R2 \ Ri
в которой X представляет собой Ci-Сзалкилен, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из галогена или гидроксила;
Ri выбран из группы, состоящей из Ci-Сбалкила, С3-СбЦиклоалкила, Сг-Сбалкенила и Сг-Сбалкинила;
R2 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R3 независимо выбран для каждого случая из группы, состоящей из водорода, С1-С6алкокси, С1-С6алкила, циано, С3-СбЦиклоалкила, галогена, гидроксила и нитро;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R5 представляет собой С1-С6алкил;
или их фармацевтически приемлемые соли или N-оксиды.
В одном варианте осуществления Ri может быть Ci-Сбалкилом, таким как метил. В одном варианте осуществления R2 может быть водородом. В другом варианте осуществления R3 может быть выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6алкила, галогена и гидроксила. В следующем варианте осуществления R3 может быть водородом. В одном варианте осуществления каждый из R4 и R5 может быть Ci-Сбалкилом. В другом варианте осуществления R4 может быть водородом и R5 может быть метилом. В одном варианте осуществления X может быть (СН.2)п/ где п равно 1 или 2, например, 1.
В другом варианте осуществления -NR2-COR1 может быть в мета-положении относительно X, как показано в формуле III':
В другом варианте осуществления -NR2-COR1 может быть в пара-положении относительно X, как показано в формуле IV:
В описании предложены, по меньшей мере, частично, соединения, представленные формулой II', как показано ниже. В контексте рассматриваются также композиции, которые включают в себя соединение, представленное формулой II, и, например, фармацевтически приемлемый носитель.
нсх^о
где Ri выбран из группы, состоящей из Ci-Сбалкила, С3-С6циклоалкила, С2-С6алкенила и С2-С6алкинила;
R2 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R3 независимо выбран для каждого случая из группы, состоящей из водорода, Ci-Сбалкокси, Ci-Сбалкила, циано, С3-СбЦиклоалкила, галогена, гидроксила и нитро;
R.5 представляет собой водород или Ci-Сбалкил; или фармацевтически приемлемые соли или N-оксиды таких соединений.
Рассматриваются также соединения формулы II', показываемые выше, а также композиции, которые включают в себя соединение, представленное формулой II', и, например, фармацевтически приемлемый носитель. Рассматриваемые соединения могут включать в себя соединения формулы:
в которой Ri выбран из группы, состоящей из Ci-Сбалкила, Сз-СбЦиклоалкила, Сг-Сбалкенила и Сг-Сбалкинила;
R.3 независимо выбран для каждого случая из группы, состоящей из водорода, С1-С6алкокси, С1-С6алкила, циано, С3-СбЦиклоалкила, галогена, гидроксила и нитро;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R5 представляет собой водород или С1-С6алкил и
А представляет собой конденсированный пяти- или шестичленный гетероцикл;
или их фармацевтически приемлемые соли или N-оксиды.
В одном варианте осуществления Ri может быть Ci-Сбалкилом, таким как метил. В другом варианте осуществления каждый из Ri и R3 может быть Ci-Сбалкилом, таким как метил. В одном варианте осуществления R2 может быть водородом.
В некоторых вариантах осуществления соединение может быть представлено соединением формулы:
vr VII'
в которой p равно 1 или 2;
Ri выбран из группы, состоящей из Ci-Сбалкила, Сз-СбЦиклоалкила, Сг-Сбалкенила и Сг-Сбалкинила;
R4 и Rs, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
или его фармацевтически приемлемыми солями или N-оксидами.
Предложены рассматриваемые соединения и фармацевтические
композиции, содержащие, по меньшей мере, одно соединение,
которое может быть выбрано из группы, состоящей из N-ацетил-
(R)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовой кислоты
(соединение А), N-ацетил-(S)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-
метоксипропионовой кислоты (соединение В), рацемической N-ацетил-(S)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовой кислоты (соединение АВ); соединений формул:
4-ацетамино-Ы-гидрокси-2-метоксибензамида; 1-ацетил-б-метокси-
1,2,3,4-тетрагидрохинолин-5-карбоновой кислоты, 5-ацетамидо-2-
гидроксибензойной кислоты (т.е. ацетилированной 5-
аминосалициловой кислоты) или их фармацевтически приемлемых солей или N-оксидов.
В контексте предложены также другие модуляторы или агонисты PPAR, включающие в себя 5-аминосалициловую кислоту (месаламин), сульфасалазин, пиоглитазон, розиглитазон, экстракт цветов граната, нестероидные противовоспалительные средства, включающие в себя ибупрофен и ^Р-баптигенин.
Настоящее описание предоставляет также фармацевтические композиции, содержащие соединения, описываемые в контексте, и изготовленные вместе с одним или несколькими фармацевтически или косметически приемлемыми носителями. Эти препараты включают в себя препараты, подходящие для перорального, ректального, местного, трансбуккального и парентерального (например, подкожного, внутримышечного, внутрикожного или внутривенного) введения или для местного применения, например, в качестве косметического продукта. Хотя наиболее подходящая форма введения в любом данном случае будет зависеть от степени и тяжести состояния, подвергаемого лечению, и от природы конкретного используемого соединения.
Терапевтические применения
Данное изобретение предназначено, по меньшей мере частично, для лечения или уменьшения интенсивности симптомов непереносимости лактозы с использованием модулятора PPAR, например, модулятора PPARy, такого как описанное соединение. Например, предложены способы лечения диареи, боли в животе
и/или вздутия живота после приема лактозы, в которых описанное соединение (или, например композицию, которая включает в себя описанное соединение) вводят субъекту, нуждающемуся в этом, например, перорально.
Например, представленный в контексте способ уменьшения интенсивности симптомов непереносимости лактозы у пациента, принимающего композицию, которая включает в себя лактозу, содержит введение агониста PPAR, например, агониста PPARa, PPAR8 и/или PPARy до приема, по существу одновременно с приемом или после указанного приема композиции с лактозой.
В контексте рассматриваются также композиции, применяемые для уменьшения непереносимости лактозы, например, описанная композиция может составлять часть молока или молочного продукта, содержащего модулятор PPAR, или ее можно применять для изготовления такого молока или молочного продукта с низким содержанием лактозы. Такие композиции могут быть частью сыворотки, молока или сыра.
Соединения изобретения можно вводить субъектам (животным и/или людям) , нуждающимся в таком лечении, в дозах, которые могут обеспечивать оптимальную фармацевтическую эффективность. Следует иметь в виду, что доза, требуемая для использования при любом конкретном применении, будет изменяться от пациента к пациенту, в зависимости не только от выбранного конкретного соединения или композиции, но также от пути введения, природы состояния, подвергаемого лечению, возраста и состояния пациента, одновременной лекарственной терапии или специальных диет, которые затем будет соблюдать пациент, и других факторов, которые должны быть известны специалистам в данной области техники, причем подходящая доза, в конечном счете, находится на усмотрении лечащего врача. Для лечения клинических состояний и заболеваний, указанных выше, соединение данного изобретения можно вводить перорально, местно, парентерально, ингаляционным распылением или ректально в препаратах с унифицированными дозами, содержащими общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители. Термин
"парентеральный", используемый в контексте, включает в себя способы подкожной инъекции, внутривенной, внутримышечной, внутригрудинной инъекции или инфузии.
Обычно терапевтически аффективное количество активного компонента может быть в диапазоне от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, необязательно от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, необязательно от приблизительно 1 мг/кг до 10 мг/кг. Вводимое количество будет зависеть от таких показателей, как тип и степень заболевания или симптома, подвергаемого лечению, общее состояние здоровья конкретного пациента, относительная биологическая эффективность соединений, препарат соединений, присутствие и типы эксципиентов в препарате, и путь введения. Начальную вводимую дозу можно увеличивать выше верхнего уровня, чтобы быстро достичь требуемого уровня соединения в крови или уровня соединения в ткани, или начальная доза может быть меньше оптимальной, и суточную дозу можно прогрессивно повышать в ходе лечения в зависимости от конкретной ситуации. Дозу для человека можно оптимизировать, например, при обычном изучении эскалации дозы фазы I, разработанном для введения от 0,5 мг/кг до 20 мг/кг. Частота дозирования может изменяться в зависимости от таких факторов, как путь введения, количество доз и болезненное состояние, подвергаемое лечению. Примерными частотами дозирования являются введение дозы один раз в день, один раз в неделю и один раз каждые две недели.
Рассматриваемые препараты или композиции содержат описанное соединение и обычно могут также включать фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Рассматриваемые композиции можно вводить различными способами, зависящими от их предполагаемого применения, которые хорошо известны в данной области. Например, если композиции настоящего изобретения следует вводить перорально, их можно изготовить в виде таблеток, капсул, гранул, порошков или сиропов. Альтернативно, препараты настоящего изобретения можно вводить парентерально в виде инъекций (внутривенных, внутримышечных или подкожных), препаратов для капельного
вливания или клизм, или суппозиториев. Для введения путем глазной слизистой оболочки композиции настоящего изобретения можно изготовить в виде глазных капель или глазных мазей. Эти препараты можно приготовить общепринятыми способами, и, если требуется, композиции можно смешать с любой обычной добавкой, такой как эксципиент, связывающее вещество, дезинтегрирующий агент, смазывающее вещество, корригент, солюбилизирующий агент, суспендирующее вспомогательное средство, эмульгирующий агент или покрывающий агент.
В препаратах рассматриваемого изобретения смачивающие агенты, эмульгаторы и смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, агенты высвобождения, покрывающие агенты, подсластители, ароматизаторы и отдушки, консерванты и антиоксиданты могут присутствовать в агентах, применяемых для изготовления препарата.
Рассматриваемые композиции могут быть пригодными для
перорального, назального, местного (включая трансбуккальное и
сублингвальное введение), ректального, вагинального,
аэрозольного и/или парентерального введения. Препараты можно преимущественно предоставлять в дозированной лекарственной форме и можно получать любыми способами, хорошо известными в области фармации. Количество композиции, которое можно комбинировать с веществом-носителем для получения разовой дозы, изменяется в зависимости от субъекта, подвергаемого лечению, и конкретного способа введения.
Препараты, пригодные для перорального введения, могут быть в форме капсул, саше, пилюль, таблеток, пастилок (с использованием ароматизированной основы, обычно сахарозы, аравийской камеди или трагаканта), порошков, гранул или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа масло в воде или вода в масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилок (с использованием инертной основы, такой как желатин и глицерин, или сахароза и аравийская камедь), причем каждый препарат содержит заранее определенное количество его рассматриваемой композиции в
качестве активного ингредиента. Композиции настоящего изобретения можно также вводить в виде болюса, лекарственной кашки или пасты.
В твердых лекарственных формах для перорального введения
(капсулах, таблетках, пилюлях, таблетках с пленочным покрытием,
таблетках с сахарным покрытием, порошках, гранулах и тому
подобных формах), рассматриваемая композиция смешивается с
одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями,
такими как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или любым из
следующих компонентов: (1) наполнителями или разбавителями,
такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или
кремниевая кислота; (2) связывающие вещества, такие как,
например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин,
поливинилпирролидон, сахароза и/или аравийская камедь; (3) увлажнители, такие как глицерин; (4) дезинтегрирующие агенты, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; (5) замедляющие растворение агенты, такие как парафин; (б) ускорители абсорбции, такие как четвертичные аммониевые соединения; (7) смачивающие агенты, такие как, например, этиловый спирт и моностеарат глицерина; (8) абсорбенты, такие как каолин и бентонитовая глина; (9) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси; и (10) красители. В случае капсул, таблеток и пилюль, композиции могут также содержать буферные агенты. Твердые композиции подобного типа можно также применять в качестве наполнителей в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают в себя фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Помимо рассматриваемой композиции, жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной
области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и эфиры жирных кислот сорбита, циклодекстрины и их смеси.
Суспензии помимо рассматриваемой композиции могут содержать суспендирующие агенты, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбита, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, и их смеси.
На всем протяжении описании, в котором композиции описаны как имеющие, включающие в себя или содержащие конкретные компоненты, предполагается, что композиции также по существу состоят или состоят из перечисленных компонентов. Аналогично этому, когда способы описаны как имеющие, включающие в себя или содержащие конкретные стадии (этапы) способа, способы также состоят по существу или состоят из перечисленных стадий способа. За исключением случаев, когда указано иное, порядок стадий или порядок выполнения определенных действий является несущественным, при условии, что изобретение остается работоспособным. Кроме того, если не указано иное, две или более стадий или действий можно проводить одновременно.
ПРИМЕРЫ
Соединения, описанные в контексте, можно получить рядом способов, хорошо известных специалистам в области органического синтеза.
Пример А - вещества и способы
Культура клеток
Применяли клеточные линии Сасо-2 аденокарциномы ободочной кишки. Клетки Сасо-2 выращивали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM, Invitrogen, Cergy-Pontoise, France), дополненной 20% фетальной телячьей сыворотки (FCS,
Dutscher, Brumath, France), 1% пенициллина-стрептомицина (5 мл/л) (Invitrogen) и 1% не являющихся незаменимыми аминокислот (5 мл/л) (Invitrogen). Все клеточные культуры культивировали в виде конфлюэнтных монослоев при 37°С в атмосфере с регулируемым содержанием СОг 5%. Каждую неделю конфлюэнтный монослой трипсинизировали (Invitrogen) и затем пересевали после разведения 1:10. Для стимуляции экспериментов клетки помещали в б-луночные планшеты при плотности клеток 1x106 на лунку. Сывороточную депривацию применяли за 16 часов до стимуляции для синхронизации клеток. Обработка клеток
Клетки обрабатывали соединением 34 (1 мМ и 30 мМ) , 5-ASA (30 мМ) или пиоглитазоном (1 мкМ) . При необходимости, носитель DMSO (Sigma) применяли в качестве контроля (Ctrl) . Спустя 24 час после стимуляции, лунки промывали три раза стерильным буфером PBS при 4°С. Затем клетки лизировали буфером для лизиса (RA1, Macherey-Nagel), содержащим 1% р-меркаптоэтанола. Планшеты замораживали при -8 0°С для последующей экстракции РНК. Проводили также эксперимент с изменением времени обработки, состоящий из стимуляции клеток Сасо-2 1 мМ соединения 34 в течение б час и 12 час для сравнения экспрессии гена в зависимости от продолжительности обработки. Экстракция РНК
Общую РНК экстрагировали при помощи набора NucleoSpin RNA (Macherey-Nagel, Hoerdt, France). После инактивации РНКазы, общую РНК очищали от следов геномной ДНК посредством обработки ДНКазой и элюировали в воде, не содержащей РНКазу и DEPC. Чистоту РНК можно оценить УФ-спектроскопией на системе Nanodrop от 22 0 до 350 нм. Перед экспериментом с микромассивами РНКазу подвергали также анализу профиля на биоанализаторе Agilent 2100. В анализе с микромассивами применяли один мкг общей РНК (минимальная концентрация: 50 нг/мкл). Микромассивы
Микромассивы экспрессии гена с использованием двухцветного окрашивания применяли для сравнения кРНК из образцов (клеток,
обработанных DMSO (Ctrl) против кРНК из образцов клеток, обработанных агонистом (Ago)). Вкратце, РНК из образцов сначала обратно транскрибировали в кДНК (Affinity-Script RT, Agilent), которую затем применяли в качестве субстрата для синтеза и амплификации кРНК посредством Т7 РНК-полимеразы в присутствии цианина 3-СТР для образца Ctrl (зеленая флуоресценция) и цианина 5-СТР для образца Ago (красная флуоресценция). Две меченые кРНК затем смешивали и гибридизировали на том же самом микромассиве (G4851A Agilent 8х44К), который затем сканировали (сканером Agilent G2505B). Флуоресценцию визуализировали после лазерного возбуждения и относительные интенсивности двух флуорофоров выражали как отношение, чтобы получить статус избыточной или недостаточной экспрессии каждого гена (с помощью программного обеспечения GeneSpring (Agilent)). Этот анализ проводили для каждого агониста. Транскриптомные профили, полученные для каждого агониста, затем сравнивали. Экспрессию представляющих интерес генов оценивали количественно с помощью количественной ПЦР для подтверждения результатов анализа микромассивов.
Количественная ПЦР
Транскрипты генов оценивали количественной ПЦР (кПЦР) для подтверждения результатов анализа микромассивов. 1 мкг общей РНК обратно транскрибировали в кДНК с помощью набора кДНК High Capacity cDNA Achive kit (Applied Biosystems). кПЦР проводили с применением системы детектирования последовательности ABI PRISM 7000 (Applied Biosystem). Пары праймеров для каждого транскрипта выбирали с помощью программного обеспечения qPrimer depot. Количественную оценку сигналов кПЦР проводили методом относительной количественной оценки Act с применением GAPDH в качестве эталонного гена. Величины представляли в терминах изменения уровня относительного количества мРНК или кратного увеличения по сравнению с контрольными условиями.
Генерирование клеток с дефицитом PPARy
Клетки IEC с дефицитом PPARy получали с использованием системы pSUPER.retro (OligoEngine). Прямые и обратные целевые
последовательности, соответствующие нуклеотидам 105-123 мРНК PPARg человека (5'-GCCCTTCACTACTGTTGAC-3') клонировали в сайты рестрикции Bglll/Xhol вектора pSUPERretro (pRS), получая конструкцию ShPPAR. Генерировали также отрицательную контрольную pRS-плазмиду, содержащую последовательность 5'-ACGCTGAGTACTTCGAAAT-3', нацеленную против гена люциферазы (конструкция ShLuc). Обе конструкции трансфицировали в клетки Сасо-2 с применением технологии Nucleofector от Amaxa Biosystems в соответствии с протоколом производителя. Стабильно трансфицированные клоны отбирали спустя 2 4 часа после трансфекции полной культуральной средой, дополненной пуромицином (5 мкг/мл). Сайленсинг экспрессии PPARg проверяли количественной RT-ПЦР и вестерн-блот-анализом. После этого клеточные линии ShPPAR и ShLuc выдерживали в полной среде, дополненной 2,5 мкг/мл пуромицина. Пример 1 - микромассивы
Для оценки выполнимости транскриптомного анализа кишечных эпителиальных клеток, стимулированных соединением 34, агонистом PPAR, сравнивали профиль экспрессии гена клеток Сасо-2, стимулированных только соединением 34 при концентрации 1 мМ. Стимуляции клеток проводили с 4 повторами, и всего провели скрининг 44000 генов. 52 гена показали значимо различную экспрессию в условиях 1 мМ соединения 34 по сравнению с контролями (р <0,05) (таблица 1) . 49 генов показали позитивную регуляцию (увеличение экспрессии) в условиях 1 мМ соединения 34 по сравнению с контролями (один ген (LCT 1)) с высшим кратным изменением 5, четыре гена с кратным изменением между 3 и 5, и 13 генов с кратным изменением между 2 и 3 (таблица 1). Три гена показали отрицательную регуляцию (регуляцию с уменьшением экспрессии) в условиях 1 мМ соединения 34 по сравнению с контролями (MYB, ОХА13 и ANKRD1).
Таблица 1
Сравнение транскриптомных профилей в эпителиальных клетках, обработанных 1 мМ соединением 34 по сравнению с контролем. Результаты представлены в кратных величинах
Символ гена
Описание
Кратное изменение
Регуляция
LCT
Лактаза человека
52924175
с увеличением
DMBT1
Вариант транскрипта 2, делецированный из злокачественных опухолей 1 головного мозга человека
38939168
с увеличением
KRT2 0
Кератин 2 0 человека
31442842
с увеличением
AADAC
Арилацетамиддеацетилаза (эстераза) человека
30116935
с увеличением
MBL2
Связывающий маннозу лектин 2 человека
28058631
с увеличением
GPA33
Гликопротеин АЗЗ человека
2662811
с увеличением
SLC38A4
Вариант транскрипта 1 элемента 4 семейства 38 растворенных носителей
26554945
с увеличением
Cllorf86
Открытая рамка считывания 8 6 хромосомы 11 человека
2583426
с увеличением
SGK2
Вариант транскрипта 1 киназы 2 сыворотки/регулируемой глюкокортикоидом человека
25728035
с увеличением
ММР19
вариант транскрипта 1 матричной металлопептидазы 19 человека
2481643
с увеличением
ОБТальфа
Органический растворенный переносчик альфа человека
24348273
с увеличением
LZTS1
Супрессор 1 мнимой опухоли с "лейциновой молнией" человека
23766112
с увеличением
HMGCS2
Вариант транскрипта 1 3-гидрокси-З-метилглутарил-коэнзим-А-синтазы 2 человека
2231923
с увеличением
PLIN2
Перилипин 2 человека
22110133
с увеличением
CREB3L3
сАМФ-восприимчивый элемент, связывающий белок 3, подобный элементу 3, человека
21615057
с увеличением
SLC23A3
Вариант транскрипта 1 члена 3 семейства 23 растворенных носителей (нуклеоосновные переносчики) человека
19120694
с увеличением
ACSL5
Член 5 длинноцепочного семейства ацил-СоА-синтазы человека
18756381
с увеличением
HIGD1A
Член 1А семейства индуцируемого гипоксией домена HIG1 человека
18233925
с увеличением
MUC17
Ассоциированный с клеточной поверхностью муцин 17 человека
179823
с увеличением
AGPAT2
1-Ацилглицерин-3-фосфат-0-ацилтрансфераза 2 человека
17209687
С увеличением
FAB PI
Связывающий жирные кислоты белка 1 печени человека
17156018
с увеличением
AQP12A
Аквапорин 12А человека
17124082
с увеличением
DNAH12
Тяжелая цепь 12 аксонемаля динеина человека
17119135
с увеличением
C0L16A1
Коллаген альфа 1 типа XVI человека
17069026
С увеличением
SLC25A42
Член 42 семейства 25 растворимых носителей человека
1697567
с увеличением
AQP12B
Аквапорин-12В человека
16971904
с увеличением
ITIH3
Ингибитор НЗ интеральфа ( глобулина ) человека
16908818
с увеличением
EMP1
Эпителиальный мембранный белок 1 человека
16551878
с увеличением
CAPS
Вариант 1 транскрипта кальцифозина человека
1645898
с увеличением
ACSM3
Вариант 2 транскрипта среднецепочечного семейства ацил-СоА-синтетазы человека
16409295
с увеличением
SLC4 6A1
Член 1 семейства 4 6 растворимых носителей человека
16296347
с увеличением
ABCG2
Член 2 подсемейства G АТФ-связывающего кластера человека
16244398
с увеличением
MYB
Вариант 2 транскрипта гомолога (птичьего) вирусного онкогена V-myb-миелобластоза человека
16136038
с уменьшением
C0L12A1
Длинный вариант транскрипта коллагена альфа 1 типа XII человека
15990913
с увеличением
CYP2B6
Полипептид 6 подсемейства В семейства 2 цитохрома Р450 человека
15909243
с увеличением
ММР19
Вариант 1 транскрипта матричной металлопептидазы 19 человека
15854398
с увеличение
CREB3L3
сАМФ-восприимчивый элемент, связывающий белок 3, подобный элементу 3, человека
1578399
с увеличением
ANKRD1
Домен 1 повтора анкирина человека
15722646
с уменьшением
ZNF575
Белок 575 "цинковые пальцы" человека
15662627
с увеличением
SLC2 5A2 0
Член 20 семейства 25 (карнитин/ацилкарнитинтранслоказы) растворимых носителей человека
1563665
с увеличением
GALNT2
UDP-N-ацетил-альфа-D-галактозамин:полипептид N-ацетилгалактозаминилтрансфераза 2 человека
15570259
с увеличением
RHOU
Член U семейства гомологичных генов ras человека
15535966
с увеличением
SLC4 6A1
Член 1 семейства 4 6 растворимых носителей человека
15489862
с увеличением
PPARGC1B
Гамма-соактиватор 1-бета активированного пролифератором пероксисомы рецептора
15455792
С увеличением
CHST3
Углевод(хондроитин
6)сульфотрансфераза 3 человека
15176716
с увеличением
HOXA13
Гомеобокс А13 человека
15115318
с уменьшением
HIGD1A
Вариант 3 транскрипта, члена 1А семейства индуцируемых гипоксией доменов HIG1 человека
15103043
с увеличением
ACSL4
Вариант 1 транскрипта, члена 4 длинноцепочечного семейства ацил-СоА-синтетазы человека
15066991
с увеличением
LUM
Лумикан человека
15007194
с увеличением
Подтверждение реакцией кПЦР
Авторы использовали количественную ПЦР для подтверждения результатов микромассивов. Авторы количественно оценивали количественной ПЦР экспрессию 15 наиболее позитивно регулированных генов, оцененных микромассивами (SGK2 альфа,
SGK2 бета, GPA33, СКТ 20, LCT1, AADAC, DMBT1, ACSL5, ММР19, SLC28A4, AQP12, MBL2, ОБТальфа, HMGCoAS2, LZTS1) в Сасо-2-клетках, культивированных в тех же условиях. Данные, полученные количественной ПЦР и представленные на фигурах 1а-Ь, подтверждали результаты анализа микромассивов для 12/15 позитивно регулированных генов, за исключением AQP12, OST а и LZTS1.
Изменения экспрессии генов оценивали вторым и независимым экспериментом в стимулированных клетках Сасо-2. Применяли такой же протокол стимуляции (1 мМ соединение 34 по сравнению с контролем) и экспрессию генов изучали с помощью KRT-ПЦР. Авторы подтвердили позитивную регуляцию всех выбранных генов, индуцированную соединением 34 (в том числе генов AQP12, OSTa и LZTS1, которые слабо экспрессируются, но позитивно регулируются соединением 34), за исключением GPA33 (фигуры 2А и 2В).
Интересно, что в этом эксперименте экспрессия мРНК PPARy не была модифицирована после обработки соединением 34, подтверждая этим, что опосредованная соединением 34 позитивная регуляции целевых генов в основном была результатом модуляции активности PPARy соединением 34, а не увеличенной экспрессией рецептора.
Корреляция между экспрессией гена, выраженная в кратных величинах, в анализах микроматриц и кПЦР
Для более точной оценки воспроизводимости полученных данных микромассивов авторы оценивали корреляцию между количественной оценкой ПЦР и анализом микромассивов. Авторы подтвердили значимую явную корреляцию между результатами анализа микромассивов (стимуляция 1) и кПЦР (стимуляция 2), выраженными в кратном изменении (г=0,754, р=0,004б) (фигура 3).
Пример 2 - ген лактазы в качестве гена-мишени (PPAR)
Среди 15 новых генов-мишеней соединения 34, экспрессированных эпителиальными клетками, ген, кодирующий лактазу, был геном с самой сильной индукцией (кратное изменение 5,29) . Эту индукцию подтверждали во второй стимуляции, которая позволила предположить, что ген лактазы является одним из
наиболее PPARg-восприимчивых генов в анализе авторов (фигура
2А) . Вследствие аномальностей функциональных
последовательностей гена лактазы при дефиците лактозы, распространенного нарушения, найденного у 2 0% Европейской популяции, авторы решили глубже охарактеризовать этот результат. Недостаточная активность лактаза-флоризингидролазы
(LPH) является ответственной за непереносимость/мальабсорбцию лактозы, ведущую к диарее, боли в животе или вздутию живота после приема лактозы.
На фигуре 4 показаны результаты экспрессии транскрипта лактазы в различных экспериментах с клетками Сасо-2, стимулированными различными агонистами PPAR. Каждый эксперимент проводили, по меньшей мере, два раза. Сначала подтверждали, что экспрессия гена лактазы стимулируется соединением 34 при двух разных концентрациях (1 мМ, кратное увеличение в 4,78, р=0,0002; 30 мМ, кратное увеличение в 7,9, р=0,0006) (фиг.4А). Эксперимент с изменением времени показал, что б часов стимуляции 1 мМ соединения 34 достаточна для значительного увеличения экпрессии мРНК лактазы (р <0,05) и что максимальная эскпрессия достигается при обработке в течение 12 час
(р <0, 0001) (фигура 4А) . Аналогично соединению 34, 30 мМ 5ASA и 1 мкМ пиоглитазон значимо аналогично увеличивали экспрессию мРНК лактазы (фигура 4В) (соответственно 12,69-кратное увеличение, р=0,0006, 11,7 6-кратное увеличение, р=0,0006). Фенофибрат, агонист PPARa, индуцировал слабо и без значимости экспрессию гена лактазы в клетках Сасо-2 (фиг.4С). В клеточной линии Сасо-2 ShPPAR, клеточная линия стабильно экспрессирует антисмысловую РНК против PPAR с короткой шпилькой, приводя к определенной 7 0% отрицательной регуляции экспрессии PPARg, и экспрессия мРНК лактазы значимо уменьшается на 63% (р=0,0002) по сравнению с контрольными клетками ShLuc (фигура 4D). В целом эти данные показали, что ген лактазы человека является индуцируемым агонистами PPAR в клетках Сасо-2 и что ген лактазы может быть новым геном-мишенью PPAR в кишечных эпителиальных клетках.
Присутствие последовательностей PPRE в 3000 парах оснований выше гена LCT
PPARy способен связывать ДНК в виде гетеродимера с другим
нуклеарным рецептором RXR. Гетеродимер PPARy-RXR распознает
короткие димерные палиндромные последовательности (консенсус
AGGTCA или TGACCT), образуемые одним или двумя нуклеотидами,
дающими DR1 (прямой повтор 1) или DR2 (прямой повтор 2), тем
самым определяя PPARy-восприимчивый элемент (PPRE). Для лучшей
оценки потенциальной регуляции гена LCT посредством PPAR,
авторы исследовали потенциальное присутствие
последовательностей PPRE выше гена LCT. Способы биоинформатики применяли для обнаружения PPRE в гене лактазы человека. Применяли три разные программы: NUBIScan, PPRE Search и MatInspector. На фигуре 5 представлены результаты анализа in silico 3000 пар оснований выше начальной точки транскрипции гена лактазы человека. Показаны только прямые повторы, которые были предсказаны, по меньшей мере, двумя различными программами. Этот анализ показал, что 3000 п.о. выше начального сайта транскрипции содержит несколько PPRE, которые могут быть использованы PPAR для регуляции экспрессии лактазы.
Транскриптомный анализ эпителиальных клеток кишечника, стимулированных 1 мМ соединения 34, с использованием микромассивов, показал существенную модификацию 52 генов. Эти результаты были подтверждены количественной RT-ПЦР в различных и независимых экспериментах. Среди этих 52 генов интерес авторов изобретения был сосредоточен на гене, кодирующем лактазу, и авторы подтвердили позитивное регулирование экспрессии гена LCT в 5,29 раз. 5-ASA и пиоглитазон также способны повысить экспрессию гена LCT в клетках Сасо-2, спонтанный уровень экспрессии гена LCT значительно снижается на 7 0% в эпителиальных клетках с дефицитом PPARy по сравнению с контрольными эпителиальными клетками, 5ASA и пиоглитазон сохраняют свои действия по позитивному регулированию экспрессии генов LCT в эпителиальных клетках с полудефицитом PPAR, позволяя тем самым предположить, что уменьшенную экспрессию
гена LCT можно восстановить агонистами PPAR. В общем, эти данные показывают, что PPAR может быть новым модулятором экспрессии гена LCT и позволяют предположить, что агонист PPAR и особенно новый класс агонистов PPARg, мишенью которых является кишечник, могут быть новой стратегией для лечения пациентов с недостаточностью лактазы.
Пример 3 - анализ репортерного гена и эксперименты иммунопреципитации хроматина
3000 п.о. промотора гена лактазы клонировали в репортерный вектор pGL4-Luc. Эту конструкцию (и контрольный пустой вектор) кратковременно трансфицировали в клетки Сасо-2. Затем клетки обрабатывали различными агонистами PPAR и активность люциферазы измеряли для оценки регуляции активности промотора лактазы модуляторами PPAR. Идентификацию и локализацию элемента(ов) PPAR-реакции проводили последовательными делециями области промотора, клонированной в репортерный вектор pGL4-Luc. Физическое связывание PPARg на промоторе гена лактазы изучали ChIP-экспериментами в Сасо-2-клетках, стимулированных или не стимулированных агонистами PPAR.
Пример 4 - способность агонистов PPARy модулировать (увеличивать) активность лактазы
Обе стимуляции клеток Сасо-2 и стимуляцию ex-vivo небольших кусочков кишечника мышей применяли для проверки того, способны ли агонисты PPARy увеличивать активность лактазы. Активность лактазы (активность дисахаридазы) оценивали с применением о-нитрофенил-р-Б-галактозида (ONPG) в качестве субстрата. После гидролиза р-галактозидной связи ONPG дает галактозу и о-нитрофенол, желтое соединение, которое можно детектировать спектрофотометрическими методами (макс, поглощение = 450 нм) . Альтернативно, оценивали уровень экспрессии гена лактазы в кишечнике мышей, которые получали соединение 34 или 5-ASA перорально.
Ссылки
Все публикации и патенты, упомянутые в настоящем контексте, в том числе публикации и патенты, перечисленные
ниже, тем самым включены ссылкой в данное описание во всей их полноте, как если бы каждая отдельная публикация или патент конкретно и отдельно был включен в качестве ссылки. В случае конфликта, настоящая заявка, в том числе любые определения в контексте, будет регулироваться. Эквиваленты
Хотя конкретные варианты осуществления рассматриваемого изобретения были обсуждены, вышеприведенное описание изобретения является иллюстративным и неограничительным. Многие варианты осуществления настоящего изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники после анализа данного описания изобретения. Полный объем изобретения должен определяться обращением к формуле изобретения вместе с ее полным объемом эквивалентов и описанием изобретения, а также вместе с такими вариантами.
Если не указано иное, все числа, выражающие количества ингредиентов, условия реакции и т.д., используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как модифицированные во всех случаях термином "приблизительно". Соответственно этому, если не указано противоположное, числовые параметры, указанные в данном описании изобретения и прилагаемой формуле изобретения, являются приблизительными значениями, которые могут изменяться в зависимости от требуемых свойств, которые должны быть получены настоящим изобретением.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ лечения и/или уменьшения интенсивности симптомов непереносимости лактозы или дефицита лактазы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение соединения, агониста PPAR, указанному пациенту.
2. Способ стимуляции экспрессии гена лактазы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение указанному пациенту агониста PPARy.
3. Способ лечения диареи, боли в животе и/или вздутия живота после приема лактозы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение агониста PPAR.
4. Способ уменьшения интенсивности симптомов
непереносимости лактозы у пациента, принимающего композицию,
которая содержит лактозу, включающий введение агониста PPAR до,
по существу одновременно или после указанного приема.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором агонист PPAR
представлен соединением формулы I
R2R1N (i)
и его фармацевтически приемлемыми солями, стереоизомерами и/или пролекарствами, где
Ri и R2, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и Ci-балкила; или Ri и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют ароматическое или алифатическое кольцом с 5 или б атомами, которое может быть необязательно замещено;
Y и Z, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, ОН, СООН, -OR3, -СН (OR3) СООН; и
R3 выбран из группы, состоящей из Н, фенила, бензила, винила, аллила, Ci-балкила или Ci-балкила, замещенного одним, двумя, тремя или более атомами галогена.
б. Способ по любому из пп.1-4, в котором агонист PPAR
выбран из группы, состоящей из (±)-2-гидрокси-З-(3'-
аминофенил)пропионовой кислоты; (±)-2-метокси-2-(4'-
кислоты; кислоты; кислоты; кислоты; кислоты; кислоты;
кислоты; 5-аминосалицилогидроксамовой
кислоты (соединение 5) ; 3-диметиламиносалициловой кислоты; 2-
метокси-4-аминобензойной кислоты; 2-метокси-5-аминобензойной
кислоты; 5-метиламиносалициловой кислоты; 4-
метиламиносалициловой кислоты; 4-ацетиламиносалициловой
кислоты; 2-этокси-4-аминобензойной кислоты; 2-этокси-5-
аминобензойной кислоты; 4-диметиламиносалициловой кислоты; 2-
этокси-4-аминобензоилгидроксамовой кислоты; б-гидроксихинолин-
5-карбоновой кислоты; 2-(2-пропил)окси-4-аминобензойной
кислоты; 4-(1-пиперазинил)салициловой кислоты; (R,S)-5-
оксахинолин-б-карбоновой кислоты; б-метоксихинолин-5-карбоновой
кислоты; б-метокси-1,2,3,4-тетрагидрохинолин-5-карбоновой
кислоты; 5-диизопропиламиносалициловой кислоты и 4-диизопропиламиносалициловой кислоты или их фармацевтически приемлемых солей.
7. Способ по любому из пп.1-6, в котором агонист PPAR представляет собой (-)-2-R-MeTOKcn-3-(4-аминофенил)пропионовую кислоту.
8. Способ по любому из пп.1-4, в котором агонист PPAR является соединением, представленным формулой I';
в которой X представляет собой Ci-Сзалкилен, необязательно
замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из галогена или гидроксила;
Ri выбран из группы, состоящей из Ci-Сбалкила, С3-С6циклоалкила, С2-С6алкенила и С2-С6алкинила;
R2 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R3 независимо выбран, в каждом случае, из группы, состоящей из водорода, С1-С6алкокси, С1-С6алкила, циано, С3-СбЦиклоалкила, галогена, гидроксила и нитро;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода и Ci-Сбалкила;
R5 представляет собой водород или С1-С6алкил; или его фармацевтически приемлемыми солями или N-оксидами; и эксципиент.
9. Способ по п.8, в котором соединение представляет собой
N-ацетил-(R)-(-)-3-4-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовую
кислоту.
10. Способ по любому из пп.1-4, в котором агонист PPAR выбран из группы, состоящей из мезаламина, сульфасалазина, пиоглитазона и розиглитазона.
11. Пищевой продукт, содержащий молочный компонент и агонист PPAR.
12. Пищевой продукт по п.11, в котором молочным компонентом является сыворотка, молоко, сыр или сливки.
13. Применение соединения-агониста PPAR при лечении непереносимости лактозы или недостаточности лактазы.
14. Применение агониста PPARy в способе стимуляции экспрессии гена лактазы.
15. Применение агониста PPAR в способе лечения диареи, боли в животе и/или вздутия живота после приема лактозы.
По доверенности
519308
Стимуляция 1 GED, 1 мМ кратные величины
1-й
I I
nil п I nil я
I I
Т ?
_l Q _1 Q JQ JQ _IQ JQ _J Q JQ _IQ JQ JQ JQ J Q _l Q _J Q _J Q
|шш yj |вш uy |aa" Jjy |w J I I Щ |BB UJ |BB yj |вн QJ |вв> JJJ |вш JJJ |вв yj yj |вв yj |вн |JJ |-a JJJ |-> jJJ
Oo 0(д 0(д Оц 0(Д 0(j 0(j Оо °0 U[5 0(Д 0(Д 0(д OQ OQ
400300200100-
20-r
10-
1.0
0.5-i 0.0
JQ J hi H-Оо О
Стимуляция 1 GED, 1 мМ относительная экспрессия
III I5
-JQ JQ
I-S I- Ш
l-Ш
JQ l-Ш
о(c)
JQ I- Ш
JQ l-Ш
-JO -I ? -J о
(- Ш I- ш i- Ш
оо U(3
25-
<и 15-
а> ш > >
го а.
105543210-
Стимуляция 2 GED, 1 мМ кратные величины
^ ES3
-IQ -IQ -IО -J Q "JQ -JO -JQ -IQ -J О -IО -IQ -I Q -ID JQ -J Q JQ I-ш Н Ш НЩ I- Ш H ш Ь- Ш h- Ш I-Ш H 111 I-Ш I-111 I- Ш I- Ш i- ш (*ш H Ш 0(Д О(j Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо Оо
Стимуляция 2 GED, 1 мМ, относительная экспрессия
? LCT О KRT20 Ш AADAC О DMBT1 CD ACSL5 Ш PPARg Ш GPA33 SGK2|i SGK2a SLC38A4 AQP12 MBL2
OSTa HMGCoS2 MMP19
LZTS1
rs= 0,754
0 2 4 6
Кратные величины результатов анализа
в микромассивах
CTAATTTA^TTTACTTCTGTGTCCTAAGGGTAATTTCTCAGGATTGTTTTCAAATTGCTTTTTTAGGGGAAATAGGTCAT
TTGCTATATTACAAGCAHTCCCC^AATTTTATGGTCTTCCHGG A^AAGTTATTACCG-TTATGATACTAACAGTTCCTGA GACTTAGCTATGATCAGTATGTTCA_GAGGTGGAGCAGTTCCTGTGTTGCAGCTTTTA"CAACAGATGGC^TTCATTAAA
TCACAAAGTAJJ3JTjWiA6jiTC^CAAAAGCA^
GTACTCAACTTGCCTTGATGTCTGAGCN^CCAGTGCAATGTGAATTTGAGCAGCCAGAAATCTATTAGTAGAAAGCAAG ACAGATTAATATAGGTTAAAACAATGATTTAAATATGTTTCTCCCAATAATTATCTCTTTCCCTGGAA"LAACTTGTATG AAACCTTGTCAAAATGTACTCCACAAG^ATGTACAATTAAGTATTTTAAAAATAAATGGCAAACATTAAAAAC AAGAGTG AATACTCAAGTAGATTTGTCATGGGATTTTTATAAGAAGACTGGTATC AGGTAATGTATCTTTAAA GACTAGGCTGCTCT GCTGACGTAGTAACCATTTTTTA^TCTTT/CHTCCT^
GTGGCTCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAfifjj25-*'ili*y." U.J CCTG H •> "I C_4:"Lo-v _TT. -lAGACAAGCCT GGCC AACG'GGAGAAAACCTGTCTCTACTAAAAG'AC AAAAA" AGCCAGGCATG &TGG"GGGCACCTGTA A^CCCAGCT ACTCAGGAGGTTGAGGCAGGAGAATTGCTTGAACCCAAGAGGTGGAAGTTGCAGTGAGCTGAGATCATGCCACTGCCCTC CAGCTTGGGLGGLAALA^LArtLAALA^AAAAAGATTCLLAGGLrTLrtLLLTLTALAGTLTATGGAAAGTLATGGGAGTLT ATAAAAAAAAA С AG AC ACTATAAACC AAAT~AA AA G ATGGG AA АА"П"ТРТ ТДТС А С GTTTTA ATATGTGATATCCAAA C'CCCA^AAGA^""'ATA'CAGTAylTAAGATAAAACTrAGA> GMAAATGCCCA^*TAACAAGAAGAGC"CACC'C TTAAATAATCAGAA\AAGAAAAGCACATAATATTTACGTCAAAGTATC AAAAATGTAAAAGT '"'"ATAATAGGCATTAGC AAGGCAGAf GGATAC AGGC AC AC ATf^AArTCTATGTAGG ATT~A AfTTGG AAG АСА ATTTGCATTTf А АТГААТС AA AA HCCAI I Г I I [ EI [ [ [GAGATGhTCTCCCTGTGTTGCCCAGACTGGCCTC> *AGCTCCTGGGCTTGAGCAGTCCTACAGTCT GAGCCTCCAAAAGTACTGGCAAMCAGGCGTGATTGACCATGCCCAGCCTG'ATATAAGGATATrCATrrGCAGCATTGT TTGCAACACAAHArtTGTA AA ACCAACCGGTGTT^A^TATGC AAGATGTTrtATTTATG GTACATTCTTGCTGTGG AAAGCT ATGCATCTGTTAGAGGTGGGTCTATATGTTCTGATAC AGGC AG AACTCTAAGAGCTATTA AG-GA AGAAAAGGCTGAAAA TACATATGGCATAATTCCATATATGTTAAATTGT*CTATATTT^AAATGTTATACACGmCCATTTGTATTTACGTAAT AATAATGATCCCTGAGCTGTACTGTTG_ATACATGC^ACAAGAAAGACCC A"nTAATCCCCACAGCCTATG ATGAATTAT LCACA^CTACAGGTGACAAAATAGAGGCACAAAGTTAAGTAATTTTGTCAGGTGAGATTT"AA^CCCAGGCATTLTGAC TCCTGTATAACCMTTMAGATATGCMGAGAAAG AAHAC"GGAK"G ATAC ATATTGCTGMAGATHCTTATTATAGGMAGHGG AGGGGGGAG6GTGA AGGAATTTGCAAGTTTTTCATAG ATGTTTCCATATTGT^GAATCTCTTACA AAATATGTTCAGCA TATTTTTAAAGAGAAAATTTGGGGCMAA^TACTTATTTTTGTATTATGT
GCGCTGGCTCACACCTGTAATCCCAACACTTTAGGAGGCTGAGGCAAGAGGAT~GCTTGiCbCv> №Av "TC/-AGACCAG CCTSGSTSACATSSCAAAMCTCCA'CTCTACTArtArtATACArtAAAAT^HGCCAGTCGTGGTGGCGCMCACCTATGGTCCC ACCTACCCAGGATGCTGAGATGGGAGGATCACTrG Л5СО.ЛоСАА\?> AGGCTGCAGGAAGCTGTGATCGCACCACTGC AC'CCCACCTGGGCAA.CAGAG"GAGACCCGG'C4CCAAAAAAxAAAAAAAACAAAAAAAAT"GG'AA'CG"TTCTTCAG rtCATTTTCCGGGTTCCTCTGCTTAACTTGTHTAGGnAGTCTGAGGTTTTTGTGTTGGTCTTTHCCrМНИ STTTTTTT Tm TTAAGATGGAGTCTCA^TCTGTTGCCCAGGCTGGAGTGCAGTGGC ATGATЂTTGGGTCCTGCAACC_CCGCCTCC TGGGTTCAAGTGA^CTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCCGGGACTACAGGCGCATGCCACGATGCCTGGCTA ATTTTT TGTAFTTTAGTAGAGATGGGGTTTC ACCATGTTAGCTAGGACGGTCTCGATCTC CTGAC CTC GTGATCCGCCC ACCTCG GCCTCCCMHAGTGCTGGnATTACAGGTGTGAGCCACCHCGCCCGGCCCTGATCTTTHCATTTTTrtMATATTGCATTAGTG AACCGTGTACTGATTTTGTGATCATAGATAACCCAGT TTAAGTCTTAATTATCAC^TAGTATTTTACAACCTCA GTTGCAGTTATAAAGTAAGGGTTCCACATACCTCCTAACAgttcctogoooo
1/5
ФИГ.1
1/5
ФИГ.1
1/5
ФИГ.1
1/5
ФИГ.1
2/5
3/5
ФИГ.З
2/5
3/5
ФИГ.З
2/5
3/5
ФИГ.З
2/5
3/5
ФИГ.З
2/5
3/5
ФИГ.З
4/5
3/5
ФИГ.З
5/5
ФИГ.5
5/5
ФИГ.5