(57) Реферат / Формула:
Изобретение предоставляет гербицидостойкие растения Brassica зимнего вида, а также предоставляет способы борьбы с ростом сорняков путем нанесения гербицида, к которому гербицидостойкие растения настоящего изобретения проявляют устойчивость. Растения настоящего изобретения экспрессируют фермент AHAS, устойчивый к действию одного или более ингибиторов фермента AHAS.
ГЕРБИЦИДОСТОЙКИЕ РАСТЕНИЯ
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА К РОДСТВЕННЫМ ЗАЯВКАМ
[0001] Данная заявка притязает на приоритет предварительной заявки США на патент с порядковым номером 61/314,901, поданной 17 марта 2010; 61/410,802, поданной 5 ноября 2010 и 61/417,132, поданной 24 ноября 2010, описания которых полностью включены в текст данного документа посредством ссылки.
ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Ацетогидроксиацид синтаза (AHAS; ЕС 4.1.3.18) является первым ферментом, который катализирует биохимический синтез разветвленной цепи аминокислот валина, лейцина и изолейцина (Singh В. К., 1999 Биосинтез валина, лейцина и изолейцина в: Singh В. К. (Ed) Plant amino acids. Marcel Dekker Inc. New York, N.Y. Pg 227-247). AHAS представляет собой место приложения действия четырех структурно различных гербицидных семей, включая сульфонилмочевины (LaRossa R A and Falco S С, 1984 Trends Biotechnol. 2:158-161), имидазолиноны (Shaner et al., 1984 Plant Physiol. 76:545-546), триазолопиримидины (Subramanian and Gerwick, 1989 Ингибирование ацетолактатсинтазы триазолопиримидинами (изд.) Whitaker J R, Sonnet P E Biocatalysis in agricultural biotechnology. ACS Symposium Series, American Chemical Society. Washington, D.C. Pg 277-288), и пиримидинилбензоаты (Subramanian et al., 1990 Plant Physiol 94: 239-244.). Гербициды имидазолинона (IMI) и сульфонилмочевины (SU) широко используются в современном сельском хозяйстве благодаря их эффективности при достаточно низком уровне нанесения и сравнительной нетоксичности для животных. При ингибировании активности AHAS, данные семейства гербицидов предотвращают дальнейший рост и развитие чувствительных растений, включая многие виды сорняков.
[0003] Имидазолинон стойкая канола была получена путем мутагенеза и выведения с использованием гербицидов имидазолинона (S. Tan et al, Pest Management Science 61, 2005, 246). Промышленные разновидности были выведены на базе двух наиболее стойких мутантов, РМ1 и РМ2, и сейчас продаются под товарным знаком Clearfield(r). РМ1 известен своей устойчивостью только к имидазолинонам, в то время как РМ2 имеет перекрестную устойчивость как к имидазолинонам, так и к сульфонилмочевинам.
[0004] Хотя мутантный ген РМ2 может также предоставить некоторый уровень устойчивости к гербицидам имидазолинона и/или сульфонилмочевины, масличный рапс (OSR), содержащий единственный мутантный ген РМ2, проявил недостаточную устойчивость к гербицидам SU. Например, применение тифенсульфурона в мутантном гене РМ, содержащем сорт В. napus спирального типа, 45А77, привело к сокращению биомассы канолы, симптомам повреждения гербицидом или к замедленной зрелости (R. Degenhardt et al., Weed Technology 19, 2005, 608).
[0005] В дополнение, существует четыре промышленно доступных зимних вида масличного рапса (WOSR), которые, как доказано в данной области знаний, придают устойчивость к остаткам в почве гербицидов сульфонилмочевины, которые присутствуют в качестве остатков от предыдущих посевов пшеницы или гороха. К данным разновидностям относится разновидность В. napus из Kansas State University; линии Roundup Ready DKW46-15 и DKW47-15 из DeKalb; и линия Roundup Ready HyClass 115W из Croplan Genetics.
[0006] Тем не менее, растения с остатком устойчивых WOSR проявляют ограниченную устойчивость к остаткам гербицида SU в почве, уровень которых выше, т.е. выше остаточной концентрации около 0.5х, которая остается после нанесения дозы гербицида. Таким образом, в данной области знаний остается необходимость того, чтобы зимний вид Brassica проявлял устойчивость, превышающую уровни остатков гербицида сульфонилмочевины.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007] Настоящее изобретение предоставляет гербицидостойкий (НТ) зимний вид Brassica, имеющий один или больше гербицидостойкий ген AHASL, и способы применения подобных растений. НТ зимний вид Brassica данного изобретения, содержащий один или менее ген AHASL, который кодирует РМ2 или подобные мутации, неожиданно проявил отсутствие значительных повреждений при контакте с таким количеством гербицида SU, которое обычно вызывает у неустойчивых растений значительные повреждения. Например, при контакте с 1х гербицидом SU, по шкале от 1 до 10, где 1 указывает на отсутствие видимых повреждений, а 10 - на смерть растения, НТ Brassica в данном случае имеет результат 1 по шкале.
[0008] Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии о том, что зимние культуры Brassica (как в примере с зимним видом масличного рапса (WOSR), т.е. зимним видом канолы В. napus), содержащие мутантный ген(ы) AHAS обеспечивают устойчивость к имидазолинону, или содержащий мутантый ген AHAS, который обычно приводит к недостаточной устойчивости к гербициду SU, например, у OSR, на удивление, проявляет промышленно полезный уровень устойчивости к определенным гербицидам сульфонилмочевины, т.е. подгруппе гербицидов сульфонилмочевины. Однако, в случае когда те же гены присутствуют в тех же культурах Brassica спирального типа, даже если они действительно предоставляют эффективный уровень устойчивости к гербициду имидазолинона, данные культуры оказываются подверженными указанным промышленным уровням гербицидов сульфонилмочевины.
[0009] Неожиданно высокий уровень устойчивости к гербициду SU, который проявляет зимний вид Brassica настоящего изобретения, может проявляться, в случае когда интересующий гербицидостойкий ген AHASL присутствует в геноме А Brassica, где подобный ген НТ-AHASL является вариантом и находится в геноме А родного локуса растения. В некоторых вариантах осуществления изобретения, подобный НТ-AHASL выводится путем мутагенеза, такого как случайный мутагенез генома A AHASL Brassica. В случае, когда интересующий гербицидостойкий ген AHASL присутствует исключительно в геноме, за исключением генома A Brassica,
зимние виды Brassica подвержены промышленным уровням таких гербицидов SU. Спиральные виды тех же культур Brassica, имеющие интересующий гербицидостойкий ген AHASL в геноме A Brassica, подвержены таким уровням гербицидов SU.
[0010] Зимний вид НТ Brassica настоящего изобретения может включать растения, имеющие, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где только один из генов HT-AHASL растения кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выведенную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, который может дополнительно кодировать другую мутацию(и) НТ, где указанный ген MOHO-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного растения Brassica. Зимний вид НТ Brassica настоящего изобретения, имеющий такой ген моно-SU-HT-AHASL может далее содержать в геноме второй ген HT-AHASL, который кодирует не замещение Р197Х или W574X, а другое замещение НТ, такое как другая мутация НТ. Например, растения зимнего вида Brassica настоящего изобретения с геном HT-AHASL, кодирующим W574L гомозиготным, гемизиготным или гетерозиготным способом в геноме А, могут также иметь второй ген HT-AHASL в геноме С Brassica, например, ген AHAS, кодирующий мутацию S653N.
[ООП] Настоящее изобретение предоставляет способы применения зимних видов Brassica, включая способы контроля сорняков, способы выведения зимних видов НТ Brassica, а также способы защиты урожая зимней культуры Brassica. Данные способы могут включать проведение послевсходовой обработки или предвсходовой обработки гербицидом зимних видов НТ Brassica настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0012] На фигуре 1 представлена частичная нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0:1) гена AHASL В. napus, кодирующего мутацию РМ2 (BnAHASLlA_PM2).
[0013] На фигуре 2 представлена частичная нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0:2) гена AHASL В. napus, кодирующего мутацию РМ1 (BnAHASLlC_PMl).
[0014] На фигуре 3 представлена частичная аминокислотная последовательность (SEQ ID N0:3) гена AHASL В. napus с мутацией РМ2 (BnAHASLl А_РМ2).
[0015] На фигуре 4 представлена частичная аминокислотная последовательность (SEQ ID N0:4) гена AHASL В. napus с (BnAHASLlС_РМ1).
[0016] На фигуре 5 представлена вторая нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0:5) гена AHASL В. napus, кодирующего мутацию РМ2 (AHASL 1 А_РМ2).
[0017] На фигуре 6 представлена вторая аминокислотная последовательность SEQ ID N0:6) гена AHASL В. napus с мутацией РМ2 (AHASL 1А_РМ2).
[0018] На фигуре 7 представлен график, описывающий активность ферментов AHAS при наличии гербицида имидазолинона.
[0019] На фигуре 8 представлен график, описывающий активность ферментов AHAS при наличии гербицида сульфонилмочевины.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0020] Определения
[0021] В соответствии с данным документом, для обозначения аминокислот используются следующие однобуквенные сокращения: А обозначает аланин, Р -пролин, W - триптофан, X обозначает любую аминокислоту и т.д. Мутации, по сравнению с последовательностью дикого типа, будут обозначаться путем указания аминокислоты дикого типа и позиции, за которой следует аминокислота, присутствующая в мутанте. Например, Р197Х будет использоваться для обозначения того, что пролин на позиции 197 можно заменить любой аминокислотой.
[0022] В соответствии с данным документом, позиции аминокислоты относятся к полипептиду большой субъединицы пластидных ферментов AHAS Brassica (AHASL). Позиции аминокислоты в Brassica AHASL, указанные в данном документе, нумеруются согласно нумерации промышленного стандарта остатков, соответствующих остаткам в последовательности AHASL арабидопсиса (At), которая
может обозначаться как (At). Например, Р197'(At) относится к остатку пролина на позиции в Brassica AHASL, что соответствует пролину на позиции 197 арабидопсиса AHASL.
[0023] В соответствии с данным документом, "устойчивый" или "гербицидостойкий" обозначает, что растение или его часть способно произрастать при наличии такого количества гербицида, которое обычно вызывает задержку роста нестойких растения (например, дикого типа) или его части. Специалисту в данной области известно количество гербицида, обычно вызывающее задержку роста нестойкого растения, и он может легко его определить. В примерах указано количество, рекомендованное производителями для применения. Максимальный уровень является примером такого количества гербицида, которое ведет к задержке роста нестойкого растения.
[0024] В соответствии с данным документом, "гербицидостойкий (НТ) AHASL" относится к полипептиду AHAS, выраженному из одной аллели НТ AHASL гена AHASL в клетке растения и/или из одной из или обеих гомологических аллелей одного гена НТ AHASL, т.е. в том же геноме клетки растения, где HT-AHASL может предоставить ферменту AHAS клетки растения устойчивость к гербициду. Ген HT-AHASL может быть рекомбинантным, либо может быть получен путем мутагенеза, размножения или другого процесса, известного в данной области знаний. Такой ген может быть гемизиготным, гетерозиготным или гомозиготным.
[0025] В соответствии с данным документом, "AHAS" и "AHASL" соответственно относится к функциональным пластидным ферментам AHAS и их полипептидам AHASL, которые, как указано в данном документе, являются функциональными в клетках Brassica. Подобным образом, такие термины как "ген" и "полинуклеотид", при обозначении генов и полинуклеотидов, которые кодируют "AHAS" и "AHASL", относятся к функциональным генам, т.е. генам, которые выражаются в таких клетках.
[0026] В соответствии с данным документом, касательно гербицидов эффективных в различных вариантах осуществления изобретения, такие термины как ингибитор AHAS, ингибитор ACCase, ингибитор РРО, ингибитор EPSPS, имидазолинон,
сульфонилмочевина и подобные относятся к допустимым в агрономии активным ингредиентам (АЛ.) гербицида, признаваемых в данной области знаний. Подобным образом, такие термины как фунгицид, нематоцид, пестицид и подобные относятся к другим допустимым в агрономии активным ингредиентам, признаваемым в данной области знаний.
[0027] В случае, когда такие термины как гербицидостойкий (НТ) и устойчивость к гербицидам используются в отношении определенного мутантного фермента или его мутантного полипептида, они обозначают способность такого фермента (или способность полипептида передавать способность своему ферменту) переносить гербицид A.I., который при нормальных условиях деактивирует или замедляет активность дикой (немутантной) версии указанного фермента. При использовании в отношении к ферменту AHAS или полипептиду AHASL, данный термин относится главным образом к способности переносить ингибитор AHAS. К классам ингибиторов AHAS относятся сульфонилмочевины, имидазолиноны, триазолопиримидины, сульфониламинокарбонилтриазолиноны и пиримидинилбензоаты.
[0028] В соответствии с данным документом, понятие "рекомбинантный" относится к организму, имеющему генетический материал от различных источников, в результате применения человеком рекомбинантной техники.
[0029] В соответствии с данным документом, понятие "мутировавший" относится к организму с измененным генетическим материалом, по сравнению с генетическим материалом соответствующего организма дикого типа, в котором изменение(я) генетического материала были вызваны и/или выведены человеком. К примерам действий человека для получения мутировавшего организма относятся, в том числе, эксплантация клеток растения (например, каллюсы) в сублетальных концентрациях гербицидов (например, гербициды сульфонилмочевины), обработка клеток растения химическим мутагеном и последующее выведение с гербицидами (например, гербициды сульфонилмочевины); или обработка клеток растения рентгеновским излучением и последующее выведение с гербицидами (например, гербицидами сульфонилмочевины). Любой способ, известный в данной области знаний, может использоваться для получения мутации. Способы получения мутаций могут
вызывать мутации на случайных позициях генетического материала, либо на определенных отрезках генетического материала (т.е. могут использоваться техники направленного мутагенеза).
[0030] В соответствии с данным документом, "генетически модифицированный организм" (ГМО) это организм, чьи генетические характеристики были изменены человеком путем ввода генетического материала другого организма-источника или его потомства, хранящего введенный генетический материал. Организмом-источником может быть другой тип организма (например, растение ГМО может содержать бактериальный генетический материал) или тот же тип организма (например, растение ГМО может содержать генетический материал другого растения). В соответствии с данным документом, рекомбинантный и ГМО считаются синонимами и означают наличие генетического материала другого источника, в то время как мутировавший означает измененный генетический материал соответствующего организма дикого типа, при этом генетический материал другого организма-источника отсутствует.
[0031] В соответствии с данным документом, "дикий тип" или "соответствующее растение дикого типа" обозначает типичную форму организма или его генетический материал, как это обычно происходит, в отличие от, например, мутировавших и/или рекомбинантных форм.
[0032] В соответствии с данным документом, мутация, вызывающая гербицидостойкость, "мутация НТ" представляет собой изменение в аминокислотной последовательности фермента AHASL, что обеспечивает устойчивость к одному или более гербицидам (т.е. гербицидам сульфонилмочевины, гербицидам имидазолинона и т.д.).
[0033] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутация НТ может представлять собой "мутацию SU-НТ", т.е. мутацию, выбранную из группы, которая состоит из Р197Х и W574X. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутация SU-НТ может быть выбрана из группы, состоящей из P197S, Р197А, Р197Е, P197L, P197Q, P197R, P197S, P197V, P197W, P197Y, P197I, Р197Н, Р197Си P197G. В
других вариантах осуществления изобретения, мутация SU-НТ может быть выбрана из группы, состоящей из P197S, P197L, и Р197Т. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутация SU-НТ может быть выбрана из группы, состоящей из W574L, W574M, W574C, W574S, W574R, W574G, W574A, W574F, W574Q и W574Y. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутация SU-НТ может включать W574L.
[0034] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутация НТ может представлять собой "другую мутацию НТ". В соответствии с данным документом, "другая мутация НТ" представляет собой изменение в аминокислотной последовательности фермента AHASL, что обеспечивает устойчивость к одному или более гербицидам (т.е. гербицидам сульфонилмочевины, гербицидам имидазолинона и т.д.), где изменение происходит на позиции, кроме пролина 197 или триптофан 574. В следующей Таблице 1 указан перечень возможных сайтов других мутаций НТ, допустимых замен, предпочтительных замен и более предпочтительных замен. X обозначает любую аминокислоту.
[0035] Таблица 1. "Другие" НТ мутации
w/t (At)
Допустимые замены
Предпочтительные замены
Более Предпочтительные
G121
N SAD
А122
TV DPY(orX)
М124
R142
V196
R199
Т203
А205
V CDERTWYN
F206
RAHWY
К256
DENPTG
М351
CKVGPQY
w/t (At)
Допустимые замены
Предпочтительные замены
Более Предпочтительные
H352
FMQ
R373
D375
NAE
D376
EVN GPSWAC
R377
M570
ANC
V571
ACNYIQSW
F578
CGLNRDEIKPSW
S653
NIFT
G654
QCED
[0036] В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутации НТ могут быть выбраны из группы, состоящей из А122Х, R199X, А205Х, S653X и G654X и их комбинаций. В других вариантах осуществления изобретения, другие мутации НТ могут быть выбраны из группы, состоящей из А122Т, A122V, A122D, А122Р, A122Y, R199A, R199E, A205V, А205С, A205D, А205Е, A205R, А205Т, A205W, A205Y, A205N, S653N, S653I, S653F, S653T, G654Q, G654C, G654E, G654DH ИХ комбинаций. В некоторых вариантах осуществления изобретения, другие мутации НТ могут быть выбраны из группы, состоящей из А122Т, A122V, R199A, R199E, A205V, S653N, G654E и их комбинаций.
[0037] Растения
[0038] Источники эффективных пластидных генов AHASL могут быть предоставлены из любых следующих хранящихся клеточных линий, перечисленных в Таблице 2, Brassica napus (Вп) и Brassica juncea (Bj), где их устойчивые к ингибитору (НТ) AHAS большие субъединицы (AHASL) аллелей обозначаются, как показано ниже, последней буквой, указывающей на геном (А, В, или С), родной для аллели: BnAHASLlA или BnAHASLIC для В. napus и BjAHASLlА или BjAHASLIB для В. juncea. Обратите внимание, что позиции мутации AHASL указаны со ссылкой
на стандартизированную номенклатуру данной области, где пластидный полипептид AHASL арабидопсиса (At) предоставляет стандарт для нумерации позиции остатка.
[0039] Таблица 2. Примеры линейных источников Brassica для эффективных генов AHASL
Патент США № 5,545,821 до Wong et al.
Название линии
Вид растения
АТСС Осадок
AHAS аллель
Мутация
РМ-1
В. napus
40683
BnAHASLIC
S653(Af)N
РМ-2
В. napus
40684
BnAHASLlA
W574(Af)L
Международная заявка № PCT/US09/58169 до Beetham et al.
Название линии
Виды
АТСС Осадок
AHAS аллель(и)
Мутация(и)
BnCL120C7
В. napus
РТА-9278
BnAHASLlA
A122(Af)T
BnCL131Al
В. napus
РТА-9279
BnAHASLlA
A122(A0T + S653(A0N
BnCL140B3
В. napus
РТА-9402
BnAHASLlA
A122(A0T + S653(Af)N
BnCL140C7
В. napus
РТА-9403
BnAHASLlA
A122(A0T + S653(A0N
PM1PM2/CL131A1
В. napus
РТА-10321
BnAHASLIC
S653(A0N
BnAHASLlA
W574(A0L
BnAHASLlA
A122(A0T + S653(A0N
Патент США № 7,355,098 до Yao et al.
Название линии
Виды
АТСС Осадок
AHAS аллель
Мутация
J04E-0044
В. juncea
РТА-6324
BjAHASLIB
S653(A0N
J04E-0122
В. juncea
РТА-7944
BjAHASLlA
A122(Af)T
J04E-0130
В. juncea
РТА-7945
BjAHASLlA
A122(A0T
J04E-0139
В. juncea
РТА-7946
BjAHASLlA
S653(A0N
Международная публикация WO 2009/031031 до Yao et al.
Название линии
Виды
АТСС Осадок
AHAS аллель (и)
Мутация(и)
J05Z-07801
В. juncea
РТА-8305
BjAHASLIB
S653(A0N
BnAHASLlA
W574(A0L
[0040] Патентные документы, указанные в Таблице 2, представлены в настоящем документе в полном объеме. Как в WO 2009/046334 Schopke et al.
[0041] Хотя в примерах поясняются разновидности Brassica napus канола/OSR зимнего типа, устойчивые к ингибитору AHAS, предполагается, что в различных вариантах осуществления изобретения, вышеописанные способы использования гербицидов сульфонилмочевины могут применяться с промышленно полезными видами Brassica зимнего типа устойчивыми к ингибитору AHAS, такими как В. oleracea, В. гара, В. nigra и В. juncea. Линии Brassica, устойчивые к ингибитору AHAS, описанные в данном документе как эффективные, могут использоваться в способах борьбы с сорняками прямо или опосредованно, т.е. либо в качестве культур для гербицидной обработки, либо в качестве устойчивых к ингибитору AHAS донорских линий для развития, как в традиционном растениеводстве, для производства других зимних видов сортовой Brassica и/или гибридных культур, содержащих подобную особенность или особенности. Все подобные полученные разновидности или гибриды культур, содержащие наследственную особенность или особенности устойчивости к ингибитору AHAS, называются в данном документе наследственной линией(ями), устойчивой к ингибитору AHAS. В случае особенностей генома А-, В-, и С Brassica, они могут быть выведены в зимние виды Brassica с соответствующим геномом, например: Разновидности В. napus (ААСС), В. juncea.(AABB), В. oleracea (СС), В. гара (АА), В. nigra (ВВ), В. carinata (ВВСС) и Raphanobrassica, являющиеся потомством, полученным в результате скрещивания
любых вышеуказанных видов и Raphanus spp., например, Raphanobrassica "rabbage" (RRCC) из В. oleracea х Raphanus sativus или Raphanobrassica var. "raparadish" (RRAA) из В. гара x Raphanus sativus. Особый интерес представляют В. napus, В. гара и В. juncea, а В. napus является предпочтительным в некоторых вариантах осуществления изобретения.
[0042] К растениям настоящего изобретения относятся растения, котрые будучи устойчивыми к сульфонилмочевине, были подвержены дальнейшим генетическим модификациям путем разведения, мутагенеза или генной инженерии, например, получили устойчивость к другим специфичным классам гербицидов, таким как ауксин гербициды, дикамба или 2,4-D; отбелтвающие гербициды, такие как гидроксифенилпируватдиоксигеназ (ГФПДГ) ингибиторы или фитоин десатураза (PDS) ингибиторы; энолпирувилшикимат 3-фосфат-синтазы (EPSP) ингибиторы, такие как глифосат; глутаминсинтетаза (GS) ингибиторы, такие как глюфосинат; протопорфириноген-К оксидаза ингибиторы, такие как ацетил-СоА-карбоксилаза (ACCase) ингибиторы; или оксинил (т.е. бромоксинил или иоксинил) гербициды в результате применения обычных способов разведения или генной инженерии; более того, устойчивый к сульфонилмочевине зимний масличный рапс (зимняя канола) можно сделать более устойчивым к различным классам гербицидов с помощью многократных генетических модификаций, таких как устойчивасть к глифосату и глюфосинату или глифосату и гербициду другого класса, например, ингибиторам ГФПДГ, гербицидам ауксина или ингибиторам ACCase. Данные технологии гербицидоустойчивости представляют собой, например, описанные в Pest Management Science at volume, year, page 61, 2005, 246; 61, 2005, 258; 61, 2005, 277; 61, 2005, 269; 61, 2005, 286; 64, 2008, 326; 64, 2008, 332; Weed Science 57, 2009, 108; Australian Journal of Agricultural Research 58, 2007, 708; Science 316, 2007, 1185; цитируются в данном документе.
[0043] Более того, сульфонилмочевина устойчивый зимний масличный рапс (зимняя канола) также покрывается, с помощью технологий рекомбинантных ДНК, которые способны синтезировать один или более инсектицидный белок, особенно белки из бактериального вида Bacillus, в частности Bacillus thuringiensis, такие как 8
эндотоксин, например, CrylA(b), CrylA(c), CrylF, CryIF(a2), CryllA(b), CrylllA, CrylllB(bl) или Cry9c; растительные инсектицидные белки (VIP), например, VIP1, VIP2, VIP3 или VIP3A; инсектицидные белки колонизирующих бактерии нематодов, например, Photorhabdus spp. или Xenorhabdus spp.; токсины, вырабатываемые животными, такие как токсины скорпиона, токсины паукообразных, токсины ос, либо другие специфические нейротоксины насекомых; токсины, вырабатываемые грибами, такие как токсины стрептомицетов; растительные лектины, такие как лектины гороха или ячменя; агглютинин; ингибиторы протеиназы, такие как трипсин ингибиторы, серин-протеаза ингбиторы, пататин, цистатин или папаин ингибиторы; белки, инактивирующие рибосому (RIP), такие как рицин, кукуруза-RIP, абрин, луффин, сапорин или бриодин; ферменты метаболизма стероидов, такие как 3-гедрокси-стероид оксидаза, экдистероиды-IDP- гликозил- трансфераза, холестеролоксидаза, ингибиторы экдиозоны или HMG-CoA- редуктаза; ингибиторы ионных каналов, такие как ингибиторы каналов натрия или кальция; ювенильный гормон эстераза; диуретические рецепторы гормона (спирально кининовой рецепторы); стильбена синтазы, бибензил синтазы, хитиназа или гликаназы. В контексте настоящего изобретения, под данными инсектицидными белками или токсинами должны пониматься также претоксины, гибридные белки, укороченные или модифицированные другим способом белки. Гибридные белки характеризуются новыми комбинациями белковых доменом (смотрите, например, WO 02/015701). Примеры подобных токсинов или генетически модифицированных растений, способных синтезировать такие токсины, описаны в, например, ЕР-А 374 753, WO 93/007278, WO 95/34656, ЕР-А 427 529, ЕР-А 451 878, WO 03/18810 и WO 03/52073. Способы производства подобных генетически модифицированных растений известны специалистам данной области и описаны, например, в вышеуказанных публикациях. Данные инсектицидные белки, которые содержаться в генетически модифицированных растениях, придают растениям, производящим данные белки, устойчивость к вредителям всех таксономических групп членистоногих, в особенности жукам (Coeloptera), двукрылым насекомым (Diptera), мотылькам (Lepidoptera) и круглым червям (Nematoda).
[0044] Более того, сульфонилмочевина устойчивый зимний масличный рапс (зимняя канола) также покрывается, с помощью технологий рекомбинантных ДНК, которые способны синтезировать один или более белок, для повышения сопротивляемости или устойчивости данных растений к бактериальным, вирусным или грибуовым патогенам. Способы производства подобных генетически модифицированных растений известны специалистам данной области.
[0045] Более того, сульфонилмочевина устойчивый зимний масличный рапс (зимняя канола) также покрывается, с помощью технологий рекомбинантных ДНК, которые способны синтезировать один или более белок, для повышения производительности (например, масличность), устойчивости к засухе, солености или другим природным факторам, замедляющим рост, либо устойчивости тех растений к вредителям и грибковым, бактериальным или вирусным патогенам.
[0046] Более того, сульфонилмочевина устойчивый зимний масличный рапс (зимняя канола) также покрывается, с помощью технологий рекомбинантных ДНК определенным количеством веществ в составе или новых веществ в составе, в частности для улучшения питание людей и животных, например, масличные культуры, которые производят улучшающие здоровье омега-3 жирные кислоты с длинной цепью или ненасыщенные омега-9 жирные кислоты (например, Nexera(r) rape, Dow Agro Sciences, Canada).
[0047] В некоторых вариантах осуществления изобретения, настоящее изобретение предоставляет агрономическую продукцию, например, масло из семян, жмых и др. В некоторых вариантах осуществления изобретения, указанная агрономическая продукция может быть пригодна для употребления животными или людьми. Агрономическая продукция может производиться из растений, включая семена указанных растений, обработанные или полученные способами, получившими подробное описание в данном документе.
[0048] Ферменты AHAS
[0049] В различных вариантах осуществления изобретения могут использоваться зимние виды Brassica, содержащие как W574(A?)X, так и S653(A?)X в пластидных полипептидах AHASL. Они могут находиться в различных аллелях, например, в различных геномах, где каждый содержит одну мутацию в соответствующем гене AHASL, либо они могут находиться в одном гене AHASL в качестве аллели с двойной мутацией. В различных вариантах осуществления изобретения это могут быть W574(A?)L и S653(A?)N: первый из которых назвать мутацией "РМ2", а второй мутацией "РМ1". На фигуре 1 (SEQ ГО N0:1) и фигуре 3 (SEQ ГО N0:3) о представлена частичная нуклеотидная последовательность и частичная аминокислотная последовательность, соответственно, для мутации РМ2 в В. napus. На фигуре 2 (SEQ ГО N0:2) и фигуре 4 SEQ ГО N0:4) представлена частичная нуклеотидная последовательность и частичная аминокислотная последовательность, соответственно, для мутации РМ1 в В. napus. На фигуре 5 (SEQ ID N0:5) и фигуре 6 представлена вторая нуклеотидная последовательность и вторая аминокислотная последовательность, соответственно, для мутации РМ2, например, последовательности РМ2, введенной в В. juncea из В. napus.
[0050] Зимние виды Brassica, указанные в данном документе могут представлять собой разновидности, полученные посредством межродового скрещивания, например, разновидности с естественным опылением или гибриды, например, гибриды F1.
[0051] Несмотря на то, что характеристики трансгенного или нетранстенного мутанта AHAS могут использоваться в данном изобретении, в зимних видах Brassica, в различных вариантах осуществления изобретения, данная характеристика или характеристики могут быть нетрансгенными, т.е. могут получены с помощью процесса, за исключением технологий рекомбинантных ДНК, включающего мутагенез, генопластику и/или изоляцию растений, являющихся спонтанными мутантами. В данной области знаний известно большое количество техник мутагенеза, которые могут включать применение мутагенных химических агентов или облучение семян, частей растений или выращенных клеток растения; либо, или в дополнение, выращивание клеток растения или условий для выращивания клеток
растения, что может повысить частоту появления или накопления спонтанных мутаций. Технологии генопластики могут включать стратегии направленной мутации, такие как введение в ядро клетки растения олигонуклеотидов, способствующих нуклеотидному замещению системы исправления ошибок спаривания оснований.
[0052] Обратите внимание, что в ферментах AHAS существует два участка мутации, которые подвержены мутациям, что способствует значительному развитию устойчивости к различным SU. Они обе происходят на позициях Р197(А?) и W574(Af).
[0053] В различных вариантах осуществления изобретения, WOSR и другие зимние виды Brassica могут содержать одну подобную мутацию в пластидном(ых) AHASL; в дополнение к одной или больше мутациям в том же или другом пластидном гене AHASL, который может быть выбран на участках, где мутации способны придавать устойчивость к одному или больше ингибитору AHAS, к данным участкам относятся, например, G121(Af), A122(Af), M124(Af), R142(Af), V196(Af), R199(Af), T203(Af), A205(Af), F206(Af), K256(Af), M351(Af), H352(A?), R373(A?), D375(A0, D376(Af), R377(A0, M570(A0, V571(Af), F578(A?), S653(A?), и G654(A?).
[0054] Поэтому, в некоторых вариантах осуществления изобретения, эффективные, согласно данному документу, WOSR и другие зимние виды Brassica могут содержать одну мутацию SU-НТ в пластидном(ых) AHASL. В различных вариантах осуществления изобретения, эффективное, согласно данному документу, растение может содержать более одной устойчивой к гербициду мутации в совокупности пластидных AHASL. В различных вариантах осуществления изобретения, они могут содержаться в различных генах AHASL с одной мутацией.
[0055] В целом, WOSR или другой эффективный вид Brassica может содержать до одного выразимого пластидного гена AHASL, кодирующего мутацию на позиции Pl97(At) или W574(At), независимо от того, кодирует ли ген AHASL другую устойчивую к ингибитору AHAS мутацию(и) [т.е. мутации, кроме дополнительной мутации на позиции Р197(А?) или W574(A?)], независимо от того, представлен ли ген
одной аллелью, например, гетерозиготной, или двумя аллелями, например, гомозиготными. Такой WOSR или другой вид Brassica не содержит более одного пластидного гена AHASL, кодирующего мутацию, выбранную из мутаций, которые находятся на позициях Р197(А?) или W574(A?) геноме А.
[0056] В случае, когда WOSR или другой зимний вид Brassica содержит выразимый пластидный ген AHASL, который кодирует мутацию на позиции Р197(А?) или W574(A?) в аллели генома A Brassica, отсутствует необходимость в дополнительной мутации в гене AHASL. Подобные варианты осуществления изобретения не включают зимние виды В. oleracea (СС), В. nigra (ВВ), В. carinata (ВВСС) и Raphanobrassica var. "rabbage" (RRCC), в котором отсутствует геном А Brassica.
[0057] Как указано в данном документе, растения, эффективные в различных вариантах осуществления изобретения, содержат один или больше мутантный ген AHASL, где, по меньшей мере, одна мутация придает гербицидную устойчивость к ферменту AHAS, частью которого является AHAS и таким образом придает гербицидную устойчивость растению, в котором находится. Подобный мутантный ген AHASL называется "геном НТ-AHASL". В данном документе также указано, что растения, эффективные в различных вариантах осуществления данного изобретения, как ген HT-AHASL, ген SU-HT-AHASL, т.е., ген HT-AHASL, кодирующий мутацию, выбранную из Р197Х и W574X, при этом мутации Р197Х и W574X называются в данном документе сульфонилмочевина устойчивыми НТ мутациями или мутациями "SU-НТ". Растения, указанные в данном документе, могут содержать только один подобный ген SU--HT-AHASL, т.е. ген "моно-SU-HT-AHASL". Указанный ген моно-SU-HT-AHASL может находиться в геноме A Brassica. В соответствии с данным документом, ген "моно-SU-HT-AHASL" относится к гену HT-AHASL, который кодирует только одну мутацию SU-НТ или только одну мутацию SU-НТ в аллели указанного гена. Таким образом, ген "моно-SU-HT-AHASL" относится к гену HT-AHASL, который:
(1) кодирует
(a) кодирует только одну из Р197Х или W574X, а также кодирует их гомозиготным или гемизиготным способом;
(b) кодирует только одну из Р197Х или W574X, а также кодирует ее в одной аллели и кодирует Р197Р дикого типа или остаток W574W, соответственно, в гомологичной аллели;
(c) две различные мутации Р197Х гетерозиготным способом, а остаток W574W дикого типа - гомозиготным;
(d) две различные мутации W574X гетерозиготным способом, а Р197Р дикого типа - гомозиготным; или
(e) кодирует как (i) одну мутацию Р197Х, так и остаток W574W дикого типа в одной аллели, а также (ii) одну мутацию W574X и остаток Р197Р дикого типа в гомологической аллели; и
(2) дополнительно кодирует другую мутацию(и) НТ, в соответствии с определением данного термина в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, ген моно-SU-HT-AHASL не может кодировать другие мутации кроме других НТ мутаций.
[0058] Понятие "гемизиготный", при использовании в данном документе в отношение закодированной "гемизиготно" мутации AHASL, относится к отношению между соответствующими положениями двух гомологических хромосом в геноме, где одно их двух положений занято (функционирующей) аллелью AHASL, которая содержит аминокислотный остаток (замещение) мутации, а другое местоположение занято либо нефункционирующей аллелью AHASL, либо вообще свободно, например, вторая аллель отсутствует или удалена. Обратите внимание, что гены "моно-SU-HT-AHASL", перечисленные в (1)(Ь)-(1)(е), могут также называться "гетерозиготными-моно-SU-HT-AHASL" генами, т.е. так как они кодируют каждую мутацию SU-НТ гетерозиготным способом.
[0059] В соответствии с данным документом, растения Brassica в различных вариантах осуществления изобретения, могут содержать один гербицидостойкий ген
AHASL (HT-AHASL), где только один из генов HT-AHASL растения кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-НТ), выведенную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, который может дополнительно кодировать другую мутацию(и) НТ, где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного растения Brassica.
[0060] В дополнение к устойчивости к гербицидам, который ингибируют активность AHAS, растения настоящего изобретения могут также иметь устойчивость к гербицидам, действующим на другие физиологические процессы. Например, растения настоящего изобретения могут переносить ингибиторы ацетил-СоА карбоксилаза (ACCase), такие как "dims" (например, циклоксидим, сетоксидим, клетодим или тепралоксидим), "fops" (например, клодинафоп, диклофоп, флуазифоп, галоксифоп или хизалофоп) и "dens" (например, пиноксаден); ингибиторы 5-энолпирувилшикимат-3-фосфат синтазы (EPSPS), такие как глифосат; ингибиторы протопорфириноген [IX] оксидазы (РРО), такие как сафлюфенацил; ингибиторы глютамин синтетазы, такие как глюфосинат. В дополнение к данным классам ингибиторов, растения настоящего изобретения могут также быть устойчивыми к гербицидам с другими способами действия, например, регуляторами роста ауксина (например, дикамба), ингибиторами пигмента хлорофилл/каротеноид, разрушителями клеточной оболочки, ингибиторами фотосинтеза, ингибиторами деления клетки, корневыми ингибиторами, выпущенными ингибиторами и их комбинациями. Подобные характеристики устойчивости могут выражаться, например, в качестве мутантных белков ACCase, мутантных белков EPSPS или белков мутантной глутаминсинтетазы; либо в качестве родной, выведенной путем родственного скрещивания или трансгенной арилоксиалканоат диоксигеназы (AAD или DHT), галоарилнитрилов (BXN), 2,2-дихлорпропионовой кислоты дегалогеназы (DEH), дикамбы монооксигеназа (DMO), глифосат-К-ацетилтрансферазы (GAT), глифосат декарбоксилазы (GDC), глифосатоксидоредуктазы (GOX), глутатион-S-трансферазы (GST), фосфинотрицин ацетилтрансфазы (PAT или бар) или белки цитохрома Р450 (CYP450), имеющие гербицидопонижающую активность. Зимние виды Brassica можно также сочетать с другими характеристиками, включая, в том числе, пестицидные черты, такие как Bt Cry и другие белки с пестицидной
активностью к жесткокрылым насекомым, чешуйчатокрылым, нематодам и другим вредителям; питательные или нутрицевтические характеристики, такие как изменённое содержание масла и другие известные в данной области знаний.
[0061] Настоящее изобретение также включает потомство растений изобретения, а также семена и клетки гербицидостойких растений данного изобретения. Настоящее изобретение также предоставляет способы производства семян с помощью способов, подробно описанных в данном документе, а также сбора семян гербицидостойких растений. Настоящее изобретение предоставляет семена Brassica, полученные с помощью способов, подробно описанных в данном документе.
[0062] Молекулы нуклеиновой кислоты
[0063] Настоящее изобретение также включает молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют все или часть вышеописанных белков AHASL. Молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения могут включать нуклеотидная последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность, которая включает изменённую, или где возможно, неизмененную версию последовательностей, перечисленных в патентных документах в Таблице 2, отличающихся тем, что полученная последовательность кодирует белок AHASL, содержащий одно или больше из следующего: аминокислота на позиции 197, кроме пролина, при этом аминокислота на позиции 574 это триптофан; либо аминокислота на позиции 574, кроме триптофана, при этом аминокислота на позиции 197 это пролин.
[0064] Настоящее изобретение также включает нуклеиновые кислоты, кодирующие rassica AHASL с одной или более другой НТ мутацией. Такие AHASL могут также включать аминокислотные последовательности с одним или больше из следующего: аминокислота на позиции 197, кроме пролина, при этом аминокислота на позиции 574 это триптофан; либо аминокислота на позиции 574, кроме триптофана, при этом аминокислота на позиции 197 это пролин.
[0065] Молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения может быть ДНК, полученной из геномной ДНК или кДНК, или РНК. Молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения может быть естественного или искусственного происхождения. Молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения может быть изолированной, рекомбинантной и/или мутировавшей.
[0066] Молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения может иметь некодирующие последовательности, которые могут быть или не быть транскрибированными. Некодирующие последовательности, которые могут быть включены в молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются, 5' и 3' нетранслируемые области сигналов полиаденилирования и регуляторные последовательности, контролирующие генную экспрессию (например, промоторы). Молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения также включают последовательности, кодирующие транзитные пептиды, участки расщепления протеазы, участки ковалентной модификации и т.д. В одном варианте осуществления изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты изобретения кодируют последовательность транзитного пептида хлоропласта в дополнение к последовательности, кодирующей фермент AHAS.
[0067] В другом варианте осуществления изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты способны кодировать AHASL, имеющий, по меньшей мере, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше идентичность последовательности для Р197Х или W574X AHASL, как описано выше, где белок, закодированный последовательностью, включает одно или более из следующего: аминокислота на позиции 197 кроме пролина, при этом аминокислота на позиции 574 это триптофан; или аминокислота на позиции 574 кроме триптофана, при этом аминокислота на позиции 197 это пролин.
[0068] В соответствии с данным документом, "процент (%) идентичности последовательности" определяется как процентное содержание нуклеотидов или аминокислот в подходящей производной последовательности идентичной нуклеотидам или аминокислотам в объектной последовательности (или ее определенной частью), после выравнивания последовательностей и введения
пробелов при необходимости достижения максимального процентного уровня идентичности последовательности, генерированной программой BLAST, которая доступна на http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi, при этом параметры поиска выставлены по умолчанию.
[0069] Настоящее изобретение также включает молекулы нуклеиновой кислоты, которые скрещиваются с молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент AHAS изобретения, а также молекулы нуклеиновой кислоты, которые скрещиваются с реверсивным комплементом молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент AHAS изобретения. В другом варианте осуществления изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты включают молекулы нуклеиновой кислоты, которые гибридизируются с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей Р197Х или W574X AHASL, как описано выше, где белок, закодированный последовательностью, включает одно или более из следующего: аминокислоту на позиции 197 кроме пролина, при этом аминокислота на позиции 574 это триптофан; или аминокислоту на позиции 574 кроме триптофана, при этом аминокислота на позиции 197 это пролин. Точность гибридизации можно контролировать температурой, ионной силой, рН а также наличием во время гибридизации или промывки денатурирующих агентов, таких как формамид. К жестким условиям, которые могут использоваться, относятся условия, определённые в Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, Chap. 2.10, John Wiley & Sons, Publishers (1994) и Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor (1989), которые представлены в данном документе, так как они относятся к обучению жестким условиям.
[0070] В одном варианте осуществления изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты изобретения включают олигонуклеотиды, которые могут использоваться в качестве гибридизационных зондов, праймеров секвенирования и/или праймеров ПНР. Подобные олигонуклеотиды могут использоваться, например, для определения кодонной последовательности на определённой позиции в молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент AHAS, например, с помощью аллельспецифической ПЦР. Подобные нуклеотиды могут иметь в длину от около 15 до около 30, от около 20 до около 30 или около 20-25 нуклеотидов.
[0071] Гербициды
[0072] Гербицидные составы настоящего изобретения включают один или больше гербицид SU, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации. В некоторых вариантах осуществления изобретения гербицидный состав не включает ничего кроме значительного количества SU. Дополнительно, гербицидные составы настоящего изобретения могут также содержать A.I., входящую в один или более дополнительных классов AHAS ингибиторных гербицидов, например, имидазолинон гербициды и/или один или больше АЛ. других классов, например, агрономические фунгициды, бактерициды, альгициды, нематоциды, инсектициды и им подобные.
[0073] Каждая SU имеет свою рекомендованную дозу 1х. Размеры доз 1х для активных ингредиентов SU, эффективная в данном документе, указаны ниже; они также применимы к солям или их эфирам.
[0074] Таблица 3 Гербициды сульфонилмочевины и применяемые дозы
Сульфонилмочевина(ы)
1х (г/га)
Флупирсульфурон
Имазосульфурон
Тифенсульфурон
Трибенурон
Амидосульфурон
Форамсульфурон
Йодсульфурон
Мезосульфурон
7,5
Никосульфурон
Мезосульфурон + йодсульфурон (5:1 мас/мас)
14,4
[0075] Способы предвсходовой или предпосадочной борьбы с сорняками, эффективные в различных вариантах осуществления изобретения, используют > 0,5х дозы применяемого SU в течение 30 дней перед прорастанием; в некоторых вариантах осуществления изобретения доза SU может составлять > 0,6х, > 0,7х, > 0,8х, > 0,9х, или > 1х.
[0076] В дополнение, лишь у устойчивых к переноске WOSR отсутствует устойчивость, или является недостаточной, к послевсходовой обработке SU. Способы предвсходовой или предпосадочной борьбы с сорняками, эффективные в различных вариантах осуществления изобретения, используют > 0,25х дозы применяемого SU; в некоторых вариантах осуществления изобретения доза SU может составлять > 0,3х, > 0,4х, > 0,5х, > 0,6х, > 0,7х, > 0,8х, > 0,9х или > 1х.
[0077] Селекционные способы для гербицидостойких зимних Brassica также могут применяться с использования данных параметров способа обработки, отличающегося тем, что в непосредственной близости от Brassica или от его места посадки нет сорняков.
[0078] Как в предвсходовых, так и послевсходовых способах борьбы с сорняками, способ может использовать дозы lx SU без значительного повреждения растения; в некоторых вариантах осуществления изобретения применяемая доза SU может превышать 1х; в некоторых вариантах осуществления изобретения такая доза SU может составлять до 4х, однако обычно она составляет около 2,5х или менее, либо около 2х или менее. В случае использования комбинации активных ингредиентов SU, доза гербицида SU составляет, предпочтительно, в пределах от > 0,5х до 4х или от 0,25х до 4х. Например, комбинация 5:1 мас/мас мезосульфурона и йодсульфурона с дозой 1х 18 г/га, при использовании в данном количестве, предоставляет 15 г/га и 3 г/га АЛ., соответственно: что приблизительно составляет 2х и 0,3х, а общая доза обработки SU составит около 2.3х.
[0079] Гербицидные составы настоящего изобретения включают гербицид, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон,
тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, которые могут применяться в агрономически допустимых формах. Например, они могут иметь форму готовых к распылению водных растворов, порошков, суспензий; концентрированных или высококонцентрированных водных, масляных или других растворов, суспензий или диспергаторов; эмульсий, масляных диспергаторов, мазей, гранул или иметь другую распространенную форму. Гербицидные составы могут наноситься такими известными в данной области знаний способами, как обрызгивание, пульверизация, распыление, разбрасывание, поливка, обработка семян или введение примеси вместе с семенами. Выбор способов обработки зависит от цели; в любом случае они должны обеспечить наилучшее распределение активных ингредиентов согласно данному изобретению.
[0080] В случае, когда необязательный АЛ. включает ингибитора AHAS, он может
быть выбран из следующих: (1) имидазолиноны, т.е., имазамокс, имазетапир,
имазапир, имазапик, имазакин и имазаметабенз, предпочтительно имазамокс,
имазетапир, имазапир и имазапик, предпочтительно имазамокс; (2)
пиримидинилбензоаты, т.е., включающие пиримидинилоксибензоаты (например,
биспирибак, пириминобак и пирибензоксим) и пиримидинилтиобензоаты (например,
пиритиобак и пирифталид); и (3) сульфонамиды, т.е., включающие
сульфониламинокарбонилтриазолины (например, флукарбоназа и
пропоксикарбоназа) и триазолопиримидины (например, клоранзулам, диклозулам, флоразулам, флуметзулам, метозулам и пеноксзулам). Сюда также относятся вышеуказанные агрономически допустимые соли и эфиры, а также их комбинации.
[0081] В случае, когда необязательный АЛ. включает гербицид из другого класса, к которому обычно восприимчивы зимние виды Brassica, используемый зимний Brassica выбирается из растений, имеющих устойчивость к подобным гербицидам. Подобные дальнейшие характеристики устойчивости могут придаваться растению любым известным в данной области знаний способом, например, с помощью
технологий традиционного разведения для получения устойчивости гена путем гибридизации или интрогрессии, а также с помощью мутагенеза, генопластики и/или трансформации. Можно сказать, что такие растения имеют "введенные" характеристики.
[0082] К сульфонилмочевина гербицидным активным ингредиентам, эффективным в различных вариантах осуществления изобретения, относятся активные ингредиенты, перечисленные в Таблице 4.
никосульфурон
ортосульфамурон
другое
оксасульфурон
другое
примисульфурон
примисульфурон-метил
другое
пропирисульфурон
другое
просульфурон
другое
пиразосульфурон
пиразо сул ьфурон -этил
другое
римсульфурон
другое
сульфометурон
сульфометурон-метил
другое
сульфосульфурон
другое
тифенсульфурон
тифенсульфурон-метил
триасульфурон
другое
трибенурон
трибенурон-метил
трифлоксисульфурон
трифлоксисульфурон-натрий
другое
три флусуль фурон
трифлусульфурон-метил
другое
тритосульфурон
другое
[0084] В некоторых вариантах осуществления изобретения, гербицидный состав, который содержит SU, выбранную из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон и трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации, может дополнительно содержаться SU, обычно не более 50% состава, одного или более другого SU. Как указано в данном документе, "другая SU" относится к SU A.I., перечисленным в пункте "Другое" в Таблице [4], в нем также перечислены агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации.
[0085] В некоторых вариантах осуществления изобретения гербицидный состав может содержать 50% или менее массы (в %) SU, либо около или менее 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 3%, 2% или 1 мас.%; либо в диапазоне: 0 мас.%
или более SU в составе, или либо около или более 1%, 2%, 3%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% или 45 мас.%.
[0086] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть "значительным", т.е. в данном случае менее 50 мас.% SU в составе, например, от около 35 мас.% до менее 50 мас.%
[0087] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть "умеренным", т.е. в данном случае менее 35 мас.% SU в составе, например, от около 20 мас.% до менее 35 мас.%
[0088] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть "небольшим", т.е. в данном случае менее 20 мас.% SU в составе, например, от около 10 мас.% до менее 20 мас.%
[0089] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть "несущественным", т.е. в данном случае менее 10 мас.% SU в составе, например, от около 5 мас.% до менее 10 мас.%
[0090] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть "минимальным", т.е. в данном случае менее 5 мас.% SU в составе, например, от около 3 мас.% до менее 5 мас.%
[0091] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть более, чем "значительным", т.е. в данном случае менее 3 мас.% SU в составе, например, от около 1 мас.% до менее 3 мас.%
[0092] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть не более, чем "ничтожным", т.е. в данном случае около или менее 1 мас.% SU в составе, например, от около 1 мас.% до более 0 мас.%
[0093] В некоторых вариантах осуществления изобретения, количество другого SU в гербицидном составе может быть 0% масс или около 0 мас.%, например, от около 0,5 мас.% до 0 мас.%
[0094] В вышеперечисленных диапазонах количество другого SU в гербицидном составе, в значении, котором термин "около" недопустим, данный перечень должен читаться без данного термина. В любой другой части Описания, в которой используется термин "около", Описание должно читаться без указанного термина, в значении, когда термин "около" недопустим.
[0095] Дополнительно, АЛ. другого гербицидного класса включают ингибиторы ACCase, ингибиторы РРО, ингибиторы EPSPS, ингибиторы глютамин синтетазы, ингибиторы р-гидроксифенилпируватдиоксигеназ (4ЛЛРЭ). Дополнительно, к АЛ. других видов относятся, в том числе, такие фунгициды как стробилурины, например, пираклостробин; такие инсектициды как нематоциды, лепидоптерициды, колеоптерициды; моллускициды и другие, известные в данной области знаний.
[0096] Гербицидные составы включают гербицид, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, которые могут также содержать вспомогательные вещества, которые обычно входят в состав защитных агентов культуры.
[0097] К примерам вспомогательных веществ, входящих в состав защитных агентов, относятся инертные вспомогательные вещества, твердые носители, ПАВ (такие как диспергаторы, защитные коллоиды, эмульгаторы, смачивающие агенты и агенты, придающие липкость), органические и неорганические загустители, пенетранты (такие как усиливающие проникновение кремнийорганические ПАВ или кислотные сульфат хелаты, например, СТ-301(tm) Cheltec, Inc.), антидоты, бактерициды, антифризы, противовспениватели, красители и связывающие вещества. Композиции гербицидных составов, эффективных в данном изобретении, могут быть приготовлены по любому из способов, известных в данной области знаний.
[0098] К загустителям (т.е. соединениям, придающим составу измененные свойства текучести, т.е. высокую вязкость в состоянии покоя и низкую вязкость в движении) относятся полисахариды, такие как ксантановая камедь (Kelzan(r) Kelco), ксантановая смола(r) 23 (Rhone Poulenc) или вигум (R.T. Vanderbilt), а также органические и неорганические листовые силикаты, такие как Attaclay(r) (Engelhardt).
[0099] К примерам противовспенивателей относятся силиконовые эмульсии (такие как, например, Silikon(r) SRE, Wacker или Rhodorsil(r) Rhodia), длинноцепочечные спирты, жирные кислоты, соли жирных кислот, соединения органофлуорина и их смеси.
[0100] Бактерициды могут добавляться для стабилизации водных гербицидных составов. Примеры бактерицидов включают бактерициды на основе дихлорофена и бензилового спирта полуформаля (Proxel(r) ICI или Acticide(r) RS Thor Chemie и Kathon(r) МК Rohm & Haas), а также производные изотиазолинона, такие как алкил изотиазолиноны и бензизотиазолиноны (Acticide MBS Thor Chemie).
[0101] К примерам антифризов относятся этиленгликоль, пропиленгликоль, мочевина или глицерин.
[0102] К примерам красителей относятся представители классов красителей, такие как малорастворимые пигменты и растворимые красители. Некоторые определённые примеры красителей включают красители, известные под названиями Rhodamin В, СЛ. Pigment Red 112 и СЛ. Solvent Red 1, и также синий пигмент 15:4, синий пигмент 15:3, синий пигмент 15:2, синий пигмент 15:1, синий пигмент 80, желтый пигмент 1, желтый пигмент 13, красный пигмент 112, красный пигмент 48:2, красный пигмент 48:1, красный пигмент 57:1, красный пигмент 53:1, оранжевый пигмент 43, оранжевый пигмент 34, оранжевый пигмент 5, зеленый пигмент 36, зеленый пигмент 7, белый пигмент 6, коричневый пигмент 25, базовый фиолетовый 10, базовый фиолетовый 49, кислотный красный 51, кислотный красный 52, кислотный красный 14, кислотный синий 9, кислотный желтый 23, базовый красный 10, базовый красный 108.
[0103] К примерам связывающих веществ относятся поливинилпирролидон, поливинилацетат, поливиниловый спирт и тилоза.
[0104] Вспомогательные инертные вещества включают:
[0105] доли минерального масла с точкой кипения от средней до высокой, такие как керосин и дизельное топливо, кроме того каменноугольные масла и масла растительного и животного происхождения, алифатические, циклические и ароматические гидрокарбоны, например, керосин, тетрагидронафталин, алкилированные нафталины и их производные, алкилированные бензолы и их производные, спирты, такие как метанол, этанол, пропанол, бутанол и циклогексанол, кетоны, такие как циклогексанон или сильные полярные растворители, например, амины, такие как N-метилпирролидон и вода.
[0106] К подходящим носителям относятся жидкие и твердые носители.
[0107] К жидким носителям относятся, например, неводные растворители, такие как циклические и ароматические гидрокарбоны, например, керосин, тетрагидронафталин, алкилированные нафталины и их производные, алкилированные бензолы и их производные, спирты, такие как метанол, этанол, пропанол, бутанол и циклогексанол, кетоны, такие как циклогексанон или сильные полярные растворители, например, амины, такие как N-метилпирролидон и вода.
[0108] К твердым носителям относятся, например, минеральные почвы, такие как кремний, кремнегель, силикаты, тальк, каолин, известняк, известь, мел, колода, лёсс, глина, доломит, диатомовая земля, сульфат кальция, сульфат магния и оксид магния, грунтовые синтетические материалы, удобрения, такие как сульфат аммония, фосфат аммония, нитрат аммония и мочевины, а также продукты растительного происхождения, такие как хлебная мука, древесная кора, древесная мука и мука из ореховой скорлупы, целлюлозные порошки или другие твердые носители.
[0109] К подходящим ПАВ (адъювантам, смачивающим агентам, агентам, придающим липкость, диспергаторам и эмульгаторам) относятся соли щелочных металлов, соли щёлочноземельных металлов и соли аммония ароматических
сульфокислот, например, лигносульфоновые кислоты (например, типа Borrespers, Borregaard), фенолсульфокислоты, нафталинсульфокислота (типов Morwet, Akzo Nobel) и дибутил нафталинсульфокислота (типов Nekal, BASF AG) и жирных кислот, алкил- и алкиларилсульфонаты, алкил сульфаты, аурил эфир сульфаты и сульфаты жирных спиртов, соли сульфатных гекса-, гепта- и октадеканолов, а также жирных спиртов гликоль эфиров, конденсаты сульфированного нафталина и его производные с формальдегидом, конденсаты нафталина или нафталинсульфокислот с фенолом и формальдегидом, полиоксиэтиленовый октилфеноловый эфир, этоксилированный изооктил-, октил- или нонилфенол, алкилфенил или трибутилфенил полигликолевый эфир, алкиларил полиэфирные спирты, изотридекиловый спирт, жирный спирт/этиленоксид конденсаты, этоксилированное касторовое масло, полиоксиэтиленовый алкиловые эфиры или полиоксипропиленовые алкиловые эфиры, лауриловый спирт полигликолевый эфир ацетат, сложные эфиры сорбита, лигносульфитные щелоки и белки, денатурированные белки, полисахариды (например, метилцеллюлоза), гидрофобномодифицированный крахмал, поливиниловый спирт (типов Mowiol, Clariant), поликарбоксилаты (BASF AG, Sokalan), полиалкоксилаты, поливиниламины (BASF AG, Lupamine), полиэтиленимин(ВА8Р AG, Lupasol), поливинилпирролидон и их кополимеры.
[ОНО] Порошки, материалы для передачи и пылевидные препараты можно приготовить путем смешивания или одновременного измельчения активных ингредиентов с твердым носителем.
[0111] Гранулы, например, имеющие оболочку гранулы, пропитанные гранулы и однородные гранулы можно получить путем связывания активных ингредиентов с твердыми носителями.
[0112] Водные формы можно получить из концентратов эмульсии, суспензий, паст, смачиваемых порошков или диспергируемых в воде гранул при добавлении воды.
[0113] Для получения эмульсий, паст или масляных диспергаторов, гербицидные составы включают гербицид, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон,
мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры как таковые, либо растворенные в масле или растворителе, могут гомогенезироваться в воде посредством смачивающего агента, агента, придающего липкость, диспергатора или эмульгатора. В качестве альтернативы, также существует возможность получения концентратов, включающих активное соединение, смачивающий агент, агент, придающий липкость, диспергатор или эмульгатор, при необходимости растворитель или масло, которые подходят для разбавления в воде.
[0114] Концентрации гербицида, выбранного из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры в готовых формах (составах), могут иметь широкий диапазон значений. Обычно, составы содержат приблизительно от 0,001 до 98 мас.%, в частности, от 0,1 до 95 мас.%, по меньшей мере, одного активного ингредиента. Активные ингредиенты используются при чистоте от 90% до 100%, предпочтительно, от 95% до 100% (согласно спектру ЯМР).
[0115] В составе гербицидов, выбранных из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры активных ингредиентов, согласно
настоящему изобретению, например, гербициды, выбранные из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, присутствуют в суспензионном, эмульгированном или растворенном виде. Согласно настоящему изобретению, состав может иметь форму водных растворов, порошков, суспензий, высококонцентрированных водных, масляных или других суспензий или диспергаторов, водных эмульсий, водных микроэмульсий, водных суспоэмульсий, масляных диспергаторов, паст, пылевидных препаратов, материалов для расширения или гранул.
[0116] Гербициды, выбранные из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, которые согласно настоящему изобретению, могут иметь следующие формы:
[0117] 1. Продукты для разбавления в воде
[0118] А.Растворимые концентраты
[0119] 10 массовых частей активного соединения растворяются в 90 частях массы в воде или водорастворимом растворителе. В качестве альтернативы, могут добавляться смачивающий агент(ы) или другие адъюванты. Активное соединение растворяется при разбавлении с водой. В результате содержание состава с активным ингредиентом составляет 10 мас.%.
[0120] В. Диспергируемые концентраты
[0121] 20 массовых частей активного соединения растворяются в 70 частях массы циклогексанона с добавлением 10 массовых частей диспергатора, например, поливинилпирролидона. Разбавление водой приводит к дисперсии Содержание активного соединения составляет 20 мас.%.
[0122] С. Эмульгируемые концентраты
[0123] 15 массовых частей активного соединения растворяются в 75 частях массы органического растворителя (например, ароматического алкила) с добавлением кальций додецилбензолсульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом из случаев 5 массовых частей). Разбавление водой приводит к эмульсии. Содержание состава с активным ингредиентом составляет 15 мас.%.
[0124] Э.Эмульсии
[0125] 25 массовых частей активного соединения растворяются в 35 частях массы органического растворителя (например, ароматического алкила) с добавлением кальций додецилбензолсульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом из случаев 5 массовых частей). Данная смесь вводится в 30 массовых частей воды с помощью эмульгатора (Ultraturrax) и становится однородной эмульсией. Разбавление водой приводит к эмульсии. Содержание состава с активным ингредиентом составляет 25 мас.%.
[0126] Е Суспензии
[0127] В взболтонном грануляторе, 20 массовых частей активного соединения измельчаются с добавлением 10 массовых частей диспергатора и смачивающего агента(ов) и 70 массовых частей воды или органического растворителя для получения высококачественного активного соединения суспензии. Разбавление водой приводит к стабильности суспензии активного соединения. Содержание в активного соединения в составе составляет 20 мас.%.
[0128] F Диспергируемые в воде гранулы и растворимые гранулы
[0129] 50 массовых частей активного соединения перемалываются добавлением 50 массовых частей диспергатора и смачивающего агента(ов) и становятся диспергируемыми в воде или растворимыми гранулами с помощью технических приспособлений (например, вытеснение, скруббер с брызгалом, псевдоожиженный слой). Разбавление водой приводит к стабильности суспензии или раствора активного соединения. Содержание состава с активным ингредиентом составляет 50 мас.%.
[0130] G Диспергируемые в воде порошки и растворимые порошки
[0131] 75 массовых частей активного соединения перемалываются в роторном статорном измельчителе с добавлением 25 массовых частей диспергатора, смачивающего агента(ов) и кремнегеля. Разбавление водой приводит к стабильности суспензии или раствора активного соединения. Содержание в активного соединения в составе составляет 75 мас.%.
[0132] Н Гели
[0133] В грануляторе, 20 массовых частей активного соединения, 10 массовых частей диспергатора, 1 часть массы гелеобразователя и 70 массовых частей воды или органического растворителя смешиваются для получения качественной суспензии. Разбавление водой приводит к стабильности суспензии с содержанием активного соединения 20 мас.%.
[0134] 2. Вещества, используемые в неразбавленном виде [0135] I Пылевидные препараты
[0136] 5 массовых частей активного соединения измельчаются и тщательно смешиваются с 95 частями массы измельчённого каолина. В результате получается присыпка с содержанием активного соединения 5 мас.%.
[0137] J Гранулы (GR, FG, GG, MG)
[0138] 0,5 массовых частей активного соединения измельчаются и смешиваются с 99,5 частями массы носителей. К используемым в настоящее время способам относятся вытеснение, сушка распылением или псевдоожиженный слой. В результате получаются гранулы, используемые в неразбавленном виде, с содержанием активного соединения 0,5 мас.%.
[0139] К Растворы ULV (UL)
[0140] 10 массовых частей активного соединения растворяются в 90 частях массы органического растворителя, например, ксилола. В результате получается вещество, используемое в неразбавленном виде, с содержанием активного соединения 10 мас.%.
[0141] Водные формы можно получить из концентратов эмульсии, суспензий, паст, смачиваемых порошков или диспергируемых в воде гранул при добавлении воды.
[0142] Гербициды, выбранные из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры или гербицидные составы, могут применяться в предвсходовый, послевсходовый или предпосадочный период или вместе с семенами имидазолинон устойчивого зимнего масличного рапса. Также возможно использование гербицидного состава или активных соединений посредством использования семян, предварительно обработанных гербицидными составами или активными соединениями, сельскохозяйственной культуры.
[0143] В другом варианте осуществления изобретения, гербицид, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их
комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры или гербицидные составы, могут наноситься на семена. Обработка семян включает преимущественно всех производителей, известных специалистам данной области знаний (дезинфекция семян, дражирование семян, опудривание семян, замачивание семян, нанесение пленочной оболочки на семена, нанесение многослойной оболочки на семена, покрытие семян коркой, обработка семян жидкостью и удобрение семян солями), основанных на гербицидах, выбранных из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры настоящего изобретения или приготовленные из них составы. В данном случае, гербицидные составы могут применяться в разбавленном или неразбавленном виде.
[0144] Понятие "семена" включает семена всех видов, таких как, например, кукуруза, семена, плоды, клубни, сеянцы и подобные формы. В данном случае, предпочтительно, понятие семена относится к кукурузе и семенам.
[0145] Используемые семена могут обозначать семена эффективных вышеупомянутых растений, а также семена трансгенных растений или растений, полученных с помощью традиционных способов разведения.
[0146] Для расширения спектра действия, гербицид SU АЛ., выбранный из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры,
могут смешиваться с большим количеством представителей других групп гербицидных или регулирующих рост активных соединений и затем использоваться одновременно. К подходящим компонентам для смесей относятся, например, 1,2,4-тиадиазолы, 1,3,4-тиадиазолы, амиды, аминофосфорная кислота и ее производные, аминотриазолы, анилиды, (гет)арилоксиалкановые кислоты и их производные, бензойная кислота и ее производные, бензотиадиазиноны, 2-ароил-1,3-циклогексанедионы, 2-гетароил-1,3-циклогексан-дионы, гетарил арил кетоны, бензилизоксазолидиноны, производные мета-СБЗ-фенила, карбаматы, хинолинкарбоновая кислота и ее производные, хлорацетанилид, производные циклогексенон оксим эфира, диазины, дихлорпропионовая кислота и ее производные, дигидро бензофураны, дигидрофуран-3-он, динитроанилины, динитрофенолы, дифенилоксиды, дипиридилы, галокарбоновые кислоты и их производные, мочевины, 3 фенилурацилы, имидазолы, имидазолиноны, N-фенил-3,4,5,6-тетрагидрофталимиды, оксадиазолы, оксираны, фенолы, арилокси- и гетарилоксифеноксипропионовые эфиры, фенилуксусная кислота и ее производные, 2-фенилпропионовая кислота и ее производные, пиразолы, фенилпиразолы, пиридазины, никотиновая кислота и ее производные, пиримидил эфиры, сульфонамиды, сульфонилмочевины, триазины, триазиноны, триазолиноны, триазолкарбоксамиды, урацилы, фенил пиразолины и изоксазолины и их производные.
[0147] Полезно также использовать гербициды, выбранные из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические A.I., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры по отдельности или в комбинации с другими гербицидами, либо в виде смесей с другими защищающими культуры агентами, например, вместе с агентами, контролирующими вредителей, фитопатогенные грибки или бактерии. Представляет интерес смешиваемость с растворами минеральных солей, которые используются для
лечения недостатка питательных веществ и микроэлементов. Могут использоваться и другие добавки, например, нефитотоксичные масла и масляные концентраты.
[0148] Более того, эффективно использовать гербициды, выбранные из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры в комбинации с антидотами. Антидоты это химические соединения, предотвращающие или уменьшающие вызванные гербицидом повреждения эффективных растений без значительного влияния на гербицидное действие гербицидов амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, направленные на нежелательные растения. Они могут применяться либо перед засевом (например, при удобрении семян, побегов или сеянцев) или в предвсходовый или послевсходовый период эффективных растений. Антидоты и гербициды амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их агрономически приемлемые соли и эфиры, а также их комбинации и дополнительно другие агрономические АЛ., например, один или больше имидазолинон, выбранный из группы, включающей имазамокс, имазетапир, имазапир, имазапик, их комбинации и агрономически приемлемые соли и эфиры, могут использоваться одновременно или по очереди.
[0149] К подходящим антидотам относятся, например, (хинолин-8-окси) уксусная кислота, 1-фенил-5- галогеналкил-1Н-1,2,4-триазол-3- карбоновые кислоты, 1-фенил-4,5-дигидро-5-алкил-1 Н-пиразол-3,5-дикарбоновые кислоты, 4,5-дигидро-5,5-диарил
3-изоксазол карбоновые кислоты, дихлорацетамиды, альфа
оксиминофенилацетонитрилы, ацетофеноноксимы, 4,6-дигалоген-2-
фенилпиримидины, ГЧ-[[4-(аминокарбонил)фенил]сульфонил]-2-бензойные амиды, 1,8-нафтойный ангидрид, 2-гало-4-(галоалкил)-5-тиазол карбоновые кислоты, фосфотиоаты и N-алкил-О-фенил-карбаматы и их агрономически допустимые соли и их агрономически допустимые производные, такие как амиды, эфиры, тиоэфиры при наличии кислотной группы.
[0150] Способы борьбы с сорняками
[0151] Гербицидостойкие растения настоящего изобретения могут использоваться в сочетании с гербицидом, к которому они устойчивы. Гербициды могут применяться для растений настоящего изобретения с помощью любых известных специалистам способов. Гербициды могут применяться на любом этапе выращивания растений. Например, гербициды могут применяться на предпосадочном, посадочном, предвсходовом, послевсходовом этапе или на нескольких из них.
[0152] Гербицидные составы также могут применяться для, например, обработки листьев, обработки почвы, удобрения семян или пропитывания почвы. Гербицид наносится путем обрызгивания, распыления, распространения или любым другим эффективным, известным в данной области, способом.
[0153] В одном варианте осуществления изобретения, гербициды могут использоваться для контроля за ростом сорняков, которые могут произрастать в непосредственной близости от гербицидостойких растений настоящего изобретения. В вариантах осуществления изобретения, гербицид может наноситься на участок, на котором произрастают гербицидостойкие растения данного изобретения в непосредственной близости от сорняков. Гербицид, к которому устойчиво гербицидостойкое растение настоящего изобретения, может наноситься на участок в концентрации, достаточной для уничтожения или замедления роста сорняка. В данной области знаний известны указанные выше концентрации гербицида, достаточные для уничтожения или замедления роста сорняка.
[0154] Способы борьбы с сорняками могут также включать выведение зимнего вида Brassica, имеющего устойчивость к гербицидному составу SU. Как указано в данном документе, выведение зимнего вида Brassica, устойчивого к гербицидному составу SU, может происходить следующим образом: лицо выбирает растение, которое будет выращиваться, либо первое лицо выбирает другое лицо, которое определит, какое растение будет выращиваться. Например, производитель Brassica может действовать в качестве семеновода для производства семян, или в качестве хлебороба для производства зерна или другой продукции для рынка. В обоих случаях, производитель Brassica может сам выбирать разновидность Brassica, либо может позволить другому лицу выбрать разновидность растения, либо выращивать разновидность, выбранную третьим лицом и указанную в контрактном соглашении, например, согласно договору об оказании услуг, форвардному контракту или другому соглашению. Все подобные способы выбора производителем выращиваемой разновидности растения представляют собой способ выведения зимнего вида Brassica.
[0155] Способы защиты урожая
[0156] Способы посадки, выращивания и обработки зимних видов Brassica гербицидными составами SU согласно различным вариантам осуществления настоящего изобретения, могут обеспечить защиту урожая Brassica, выращиваемого в условиях присутствия сульфонилмочевины (SU) гербицидного состава. К данным способам относится:
посадка семян зимнего вида Brassica при наличии гербицидного состава SU; и
выращивание семян в условиях, подходящих для производства зимнего вида Brassica;
где указанное растение Brassica включает, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где только один из генов HT-AHASL в растении кодирует сульфонилмочевина гербицидостойкую мутацию (SU-НТ), выбранную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, который может
дополнительно кодировать другую НТ мутацию(и), где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного Brassica;
где урожай может быть равен или больше урожая дикорастущей разновидности того же зимнего вида Brassica.
[0157] К данным способам также относится:
посадка семян зимнего вида Brassica;
выращивание семян в условиях, подходящих для производства зимнего вида Brassica; и
проведение гербицидной обработки растения путем нанесения гербицидного состава, включающего сульфонилмочевину(ы) (SU), на растение, область в непосредственной близости от него; где Brassica включает, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где только один из генов HT-AHASL в растении кодирует сульфонилмочевина гербицидостойкую мутацию (SU-НТ), выбранную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, который может дополнительно кодировать другую НТ мутацию(и), где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного Brassica;
где урожай может быть равен или больше урожая дикорастущей разновидности того же зимнего вида Brassica. Гербицидная обработка может представлять собой обработку растения перед цветением.
[0158] Способы защиты урожая могут также включать выбор зимнего вида Brassica, имеющего устойчивость к гербицидному составу SU.
[0159] К способам защиты урожая также относится сбор семян зимнего вида Brassica. Данные способы могут также контролировать сорняки, произрастающие в непосредственной близости от растений зимнего вида Brassica.
[0160] Как указано в данном документе, "защита урожая" также включает, в том числе, небольшой риск потери урожая, уменьшение урожайности или и то и другое.
Нанесение гербицидных составов SU на зимний вид Brassica может привести к таким негативным последствиям как, в том числе, смерть; повреждение растения в переходном состоянии; задержка роста; измененное созревание; визуальные симптомы значительного повреждения; уменьшение плотности произрастания (т.е. меньшее количество растений в популяции); и увеличение в пропорции растений, проявляющих замедленное созревание, уменьшение размера (уменьшение биомассы) и/или повреждение после болезни или воздействия насекомых, которое началось в период временного стресса/фазы увядания (т.е. временное гербицидное повреждение SU). Неустойчивые к SU зимние виды Brassica обычно страдают от негативного воздействия в присутствии гербицидных составов; и зимние виды Brassica, устойчивые только к остаточному количеству гербицидов SU могут также страдать от негативного воздействия. Однако, зимние виды Brassica настоящего изобретения более устойчивы к воздействию подобных гербицидных составов SU. Таким образом, зимний вид Brassica, выращиваемый из устойчивых к SU растений зимнего вида Brassica данного изобретения, может произвести больший урожай, по сравнению с SU гербицидо восприимчивыми или устойчивыми к остаткам растениями, выращиваемыми в присутствии гербицидных SU составов.
[0161] Желание может мотивировать на выбор растения зимнего вида Brassica, имеющего устойчивость к гербицидным составам SU. Например, и без ограничения, производитель Brassica может захотеть: (1) контролировать сорняки Brassica с использованием SU, где нанесение гербицида SU не может произойти без значительного повреждения или потери растения; или (2) избежать или снизить риск постоянного или временного повреждения остатками SU в почве, или избежать или снизить риск с большей вероятностью, чем при использовании Brassica, устойчивого только к остаткам SU; или (3) избежать или снизить риск постоянного или временного повреждения растения остатками SU, присутствующими в баках, повторно использующихся для приготовления или снабжения другой агрономической продукции, или избежать или снизить риск с большей вероятностью, чем при использовании Brassica, устойчивого только к остаткам SU. Выбрав растения зимнего вида Brassica, можно достичь этих целей.
[0162] В некоторых вариантах осуществления изобретения, производитель возможно захочет иметь контроль над сорняками путем нанесения SU. К сорнякам растения Brassica, которые могут обрабатываться средствами различных вариантов осуществления изобретения, относятся, например, сорняки семейства Brassicaceae, такие как брюква (Brassica tournefortii), пастушья сумка (Capsella bursa-pastoris), индийская горчица (Conringia orientalis), желтушник левкойный (Erysimum cheiranthoides; Treacle mustard), сорняк Бьюкена (Hirschfeldia incana), обычный клоповник (Lepidium virginicum; Virginia pepperweed), мускусный сорняк (Myagrum perfoliatum), неслия метельчатая (Neslia paniculata), редька дикая (Raphanus raphanistrum), редька полевая (Rapistrum rugosum), горчица полевая (Sinapis arvensis; Charlock), индийский гулявник (Sisymbrium orientale), сорняк льна (Sisymbrium sophia; Tansy mustard; Fluxweed) и ярутка полевая (Thlaspi arvense; Field pennycress). Такие сорняки семейства Brassicacea достаточно тяжело поддаются контролю в традиционных культурах Brassica. Выбрав растения зимнего вида Brassica, можно достичь этих целей.
[0163] В соответствии с данным документом, выбрать растение зимнего вида Brassica, имеющее устойчивость к гербицидному составу SU, может лицо, которое выбирает выращиваемое растение, или первое лицо выбирает другое лицо, которое определит, какое растение будет выращиваться. Например, производитель Brassica может действовать в качестве семеновода для производства семян, или в качестве хлебороба для производства зерна или другой продукции для рынка. В обоих случаях, производитель Brassica может сам выбирать разновидность Brassica, либо может позволить другому лицу выбрать разновидность растения, либо выращивать разновидность, выбранную третьим лицом и указанную в контрактном соглашении, например, согласно договору об оказании услуг, форвардному контракту или другому соглашению. Все подобные модели выбора производителем выращиваемой разновидности растения представляют собой способ выбора зимнего вида Brassica.
[0164] Растения зимнего вида Brassica настоящего изобретения, произрастающие в почве, содержащей гербициды SU и дополнительно содержащей сульфонамид и/или имидазолинон ингибирующие гербициды AHAS, могут иметь более высокую
урожайность, по сравнению с растениями зимнего вида Brassica соответствующей дикой изолинии, произрастающими в тех же условиях содержания гербицида. Кроме того, культура, выращиваемая из растений зимнего вида Brassica данного изобретения и обрабатываемая гербицидами SU из распылителей, зараженных гербицидами SU из остатков гербицида в баках, имеет преимущество при защите урожая, по сравнению с растениями зимнего вида Brassica соответствующей дикой изолинии.
[0165] Культуры растений зимнего вида Brassica настоящего изобретения могут производить эквивалентное количество урожая при обработке гербицидами SU и при отсутствии обработки гербицидами SU, когда они в противном случае произрастают в подобных условиях. Кроме того, культуры растений зимнего вида Brassica данного изобретения могут достигать равной урожайности, при обработке гербицидами SU из зараженных распылителей, а также при отсутствии обработки гербицидами SU из зараженных распылителей, когда они в противном случае произрастают в подобных условиях.
[0166] Культура зимнего вида Brassica содержит кодирующую ген AHASL мутацию на участке Р197(А?) или W574(A?) и расположенную в любом геноме Brassica.
[0167] Настоящее изобретение также относится к растениям зимнего вида Brassica, имеющим выразимый пластидный ген AHASL, который кодирует мутацию на участке Р197(А?) или W574(A?), расположенную в любом геноме, например, геноме А, В или С Brassica. Это является исключением из вышеописанных вариантов осуществления изобретения, где гербицидостойкий ген AHASL может располагаться только в геноме A Brassica. В тех вариантах осуществления изобретения, где WOSR или другая культура зимнего вида Brassica содержит выразимый пластидный ген AHASL, который кодирует мутацию на участке Р197(А?) или W574(A?), если данная мутация закодирована в геномной аллели В или С Brassica, по меньшей мере, одна дополнительная мутация должна быть также закодирована в растении, в том же или другом выразимом пластидном гене AHASL, где данная мутация выбирается из замен на участках: G121(Af), A122(Af), M124(Af), R142(Af), V196(Af), R199(Af), T203(Af), A205(Af), F206(Af), K256(Af), M351(Af), H352(Af), R373(Af), D375(Af),
D376(Af), R377(A0, M570(A?), V571(Af), F578(Af), S653(A?), и G654(A?); и предпочтительно на участках Al22(At), R199(Af), А205(Аг), S653(A?), и G654(A?); и более предпочтительно на участке S653(At). Растения зимнего вида данного варианта осуществления изобретения могут использоваться в способах, подробно описанных в данном документе, включая способы контроля сорняков с проведением послевсходовой гербицидной обработки, способы выведения растений и способы, обеспечивающие защиту урожайности.
[0168] Настоящее изобретение предоставляет способ борьбы с сорняками культуры зимнего вида Brassica, включающий следующие меры: проведение послевсходовой обработки указанной культуры гербицидостойкого (НТ) растения Brassica путем нанесения гербицидного состава на растение и область непосредственной близости, доза которого составляет от 0,25х до около 4х SU, где указанный гербицидный состав включает SU; и указанное растение (1) включает, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), один из генов HT-AHASL кодирует сульфонилмочевина устойчивую НТ мутацию (SU-НТ), выбранную из Р197Х и W574X, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, V196X, R199X/T203X, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X; или (2) включает, по меньшей мере, два гербицидостойких гена AHASL (HT-AHASL), где первый ген HT-AHASL кодирует сульфонилмочевина устойчивую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, а второй ген HT-AHASL кодирует мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X.
[0169] В некоторых вариантах осуществления изобретения, указанный гербицидный состав может включать другие агрономически эффективные формы сульфонилмочевина(н). В некоторых вариантах осуществления изобретения, сульфонилмочевина выбирается из группы, включающей амидосульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, никосульфурон, тифенсульфурон, а также трибенурон, их
агрономически приемлемые соли и эфиры и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления изобретения, гербицидный состав не включает ничего кроме значительного количества SU.
[0170] В некоторых вариантах осуществления изобретения, указанная мутация SU-НТ выбирается из Р197А, P197S, P197L, и W574L. В некоторых вариантах осуществления изобретения, только один из указанных генов кодирует мутацию SU-НТ, выбранную из Р197Х и W574X. В некоторых вариантах осуществления изобретения, по меньшей мере, одна дополнительная мутация SU-НТ, выбирается из А122Т, A122Q, A122V, P197L, Р197А, P197S, A205V, R199A, A205V, W574L, S653N, G654E и G654D. В некоторых вариантах осуществления изобретения, по меньшей мере, одна дополнительная мутация, выбирается из А122Т, R199A, A205V, G654E и S653N.
[0171] Очевидно, что специалисту будет понятно, что подходящие модификации и адаптации к вышеописанным способам и методам нанесения могут использоваться в рамках настоящего изобретения или любого варианта осуществления. После подробного описания настоящего изобретения, следующие примеры наглядно его проиллюстрируют, в то же время они не расчитаны на ограничение данного изобретения.
ПРИМЕРЫ
[0172] Ниже указаны особые примеры получения гербицидостойких растений настоящего изобретения.
[0173] В соответствии с данным документом, "незначительное" повреждение растения приравнивается к повреждениям уровня 5 или менее по шкале PHYTOX 0100, как будет описано ниже, предпочтительно повреждения уровня 4, 3, 2, 1 или менее. В некоторых вариантах осуществления изобретения, "незначительное" повреждение растения может означать временное повреждение, длившееся 5 дней или меньше, предпочтительно 4, 3, 2 или 1 день или меньше.
[0174] Ниже приводится расшифровка аббревиатур и акронимов, используемых в данном документе:
ED50 = эффективная доза (т.е. доза, необходимая для получения желаемого эффекта в 50% популяции);
DAT = дней после обработки;
DALT = дней после последней обработки;
DAP = дней после посадки;
GS = стадия роста
ВВСН = признанный в промышленности стандарт для определения фенологических стадий роста канолы
[0175] ПРИМЕР 1
[0176] Гербицидная устойчивость в устойчивых к ингибитору AHAS линиях растения WOSR, по сравнению с восприимчивым (традиционным) к ингибитору AHAS линиями растения WOSR.
[0177] Растения устойчивой к ингибитору AHAS линии WOSR, например, линия, представляющая образец семян, хранящихся под АТСС № 40684, и растения WOSR первой линии, восприимчивые к ингибитору AHAS, высаживаются в 10 см горшки с суглинистой почвой. В каждый горшок высаживается два растения, растения поливаются в поддон и удобряются в соответствии с требованиями. Горшки хранятся рядом друг с другом в теплице, при температуре 12°С в период произрастания. Через три недели после посадки, температуру поднимают до 15-20°С.
[0178] В послевсходовый период растения обрабатываются гербицидами посредством распределения через отверстия, а уровень использования воды составляет 200 л/га на стадии роста GS/ ВВСН 12 (2 стадия появления листьев). Гербициды тестируются на различных уровнях. На каждом уровне копируется пять сортов.
[0179] Оценка эффективности производится, когда происходит повреждение растения гербицидами, по шкале от 0 до 100%, по сравнению с необработанными контрольными растениями. В данном случае 0 означает отсутствие повреждений, а 100 - полное разрушение растений. Уровень эффективности оценивается на 20-22 день после обработки (DAT). Результаты эффективности представлены в виде значений ED50
[0181] ПРИМЕР 2
[0182] Гербицидная устойчивость в устойчивых к ингибитору AHAS линиях растения WOSR, по сравнению с восприимчивым (традиционным) к ингибитору AHAS линиями растения WOSR.
[0183] Растения WOSR с устойчивыми к ингибитору AHAS линиями и растения второй, восприимчивой к ингибитору AHAS, линией высаживаются в 10 см горшки с суглинистой почвой. В каждый горшок высаживается два растения, растения поливаются в поддон и удобряются в соответствии с требованиями. Горшки хранятся рядом друг с другом в теплице, при температуре 12°С в период произрастания. Через три недели после посадки, температуру поднимают до 15-20°С.
[0184] В послевсходовый период растения обрабатываются гербицидами посредством распределения через отверстия, а уровень использования воды составляет 200 л/га на стадии роста GS/ ВВСН 10. Гербициды тестируются на различных уровнях. На каждом уровне копируется двенадцать сортов.
[0185] Оценка эффективности производится, когда происходит повреждение растения гербицидами, по шкале от 0 до 100%, по сравнению с необработанными контрольными растениями. В данном случае 0 означает отсутствие повреждений, а 100 - полное разрушение растений. Уровень эффективности оценивается на 19 день после обработки (DAT). Результаты эффективности представлены в виде значений ED50.
[0186] Таблица 6
Растения второй линии WOSR, восприимчивые к ингибитору AHAS.
Растения линии WOSR, устойчивые к ингибитору AHAS.
ED50 (г/аи/га)
ED50 (г/аи/га)
Трибенурон метил
0.11
9.11
Флорасулам
0.28
4.9
Флупирсульфурон-метил-натрий
0.79
147.97
Метсульфурон-метил
0.17
2.28
Тритосульфурон
1.76
2.96
Сульфосульфурон
0.01
3.29
Пропоксикарбазон-натрий
0.17
42.07
Йодсульфурон мезосульфурон
0.07
0.62
Хлорсульфурон
0.04
11.2
Трисульфурон-метил 500
0.03
4.48
[0187] ПРИМЕРЗ
[0188] Повышенная гербицидная устойчивость в растениях с устойчивыми к AHAS линиями, по сравнению с устойчивыми к AHAS линиями весеннего масличного рапса (SOSR).
[0189] Растения WOSR с устойчивой к ингибитору AHAS линией и растения SOSR с устойчивой к AHAS линией высаживаются на участке рядом друг с другом. В послевсходовый период растения обрабатываются гербицидами посредством распределения через отверстия на стадии роста GS/ ВВСН 12/13. Каждый вид обработки повторяется четыре раза.
[0190] Оценка устойчивости культуры производится при появлении симптома PHYTOX, вызванного химическими соединениями, по шкале от 0 до 100%, по сравнению с необработанными контрольными растениями. В данном случае 0 означает отсутствие повреждений, а 100 - полное разрушение растений.
метил-натрий
Тифенсульфурон-метил
0.03
Тритосульфурон
0.035
Трибенурон метил
0.03
[0192] ПРИМЕР 4
[0193] Гербицидная устойчивость в линиях растения, устойчивых к ингибитору AHAS, по сравнению с линиями растений WOSR, восприимчивыми (традиционными) к ингибитору AHAS.
[0194] Растения WOSR с устойчивой к ингибитору AHAS линией и растения WOSR с восприимчивой к ингибитору AHAS линией высаживаются на участке рядом друг с другом. В предвсходовый период растения обрабатываются гербицидами посредством его распределения через отверстия. Каждый вид обработки повторяется четыре раза.
[0195] Оценка устойчивости культуры производится при появлении симптома PHYTOX, вызванного химическими соединениями, по шкале от 0 до 100%, по сравнению с необработанными контрольными растениями. В данном случае 0 означает отсутствие повреждений, а 100 - полное разрушение растений.
[0199] Активность AHAS в присутствии гербицидов имидазолинона
[0200] Ферменты AHAS с различными мутациями вступают в реакцию с солями пировиноградной кислоты и обрабатываются водой и серийными растворами с различной концентрацией имазамокса для определения активности AHAS. Реакции длились 45 минут при температуре 37°С и заканчивались при добавлении 20 мкЛ 5% раствора серной кислоты и нагревании до 60°С в течение 15-30 минут для преобразования ацетолактата в ацетоин. Полученный ацетоин выдерживается в течение 15 минут с креатином и нафтилом (комплекс креатин-нафтил) в растворе
гидроксида натрия при температуре 60°С для получения окрашенного вещества, используемого для измерения и сравнения с активностью ферментов AHAS. На сх.7 показана активность фермента AHAS.
[0201] ПРИМЕР 6
[0202] Активность AHAS в присутствии гербицидов сульфонилмочевины
[0203] Ферменты AHAS с различными мутациями вступают в реакцию с солями пировиноградной кислоты и обрабатываются водой и серийными растворами с различной концентрацией хлорсульфурона для определения активности AHAS. Реакции длились 45 минут при температуре 37°С и заканчивались при добавлении 20 мкЛ 5% раствора серной кислоты и нагревании до 60°С в течение 15-30 минут для преобразования ацетолактата в ацетоин. Полученный ацетоин выдерживается в течение 15 минут с креатином и нафтилом (комплекс креатин-нафтил) в растворе гидроксида натрия при температуре 60°С для получения окрашенного вещества, используемого для измерения и сравнения с активностью ферментов AHAS. На сх.8 показана активность фермента AHAS.
[0204] В то время как вышеизложенное изобретение было подробно описано в целях разъяснения и понимания, специалист, после прочтения данного описания, оценит тот факт, что могут быть внесены различные изменения без отклонения в рамках данного изобретения и прилагаемой формулы изобретения. Все патенты и публикации, на которые даны ссылки в данном документе, полностью включены в текст данного документа посредством ссылки.
Формула изобретения
1. Способ борьбы с сорняками культуры Brassica зимнего вида, включающий:
проведение предвсходовой обработки, либо предпосадочной обработки в 0-30 день, гербицидостойкого (НТ) растения Brassica указанной культуры посредством нанесения гербицидного состава, содержащего сульфонилмочевину(ы) (SU), на место посадки семян и область, находящуюся в непосредственной близости, доза которого составляет от более 0,5х до около 4х SU, отличающийся тем, что
(A) указанный гербицидный состав
(1) содержит SU, выбранную из амидосульфурона,
флупирсульфурона, форамсульфурона, имазосульфурона,
йодсульфурона, мезосульфурона, никосульфурона,
тифенсульфурона, а также трибенурона, их агрономически
приемлемых солей и эфиров и их комбинаций, а также
(2) содержит не более 3 мас.% любой другой SU; и
(B) указанное растение Brassica
(1) содержит сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-НТ), выбранную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, и где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного растения Brassica, или
(2) содержит, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где один из генов HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, и, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X; или
(3) содержит, по меньшей мере, два гербицидостойких гена AHASL (HT-AHASL), где первый ген HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT),
(1)
выбранную из Р197Х и W574X, а второй ген HT-AHASL кодирует мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X, и G654X; и
где указанное растение Brassica может переносить указанную обработку дозой SU 1х с поражением не более 5 по шкале PHYTOX (от 0 до 100) при измерениях, проведенных, по меньшей мере, через 21 день после указанной обработки, и
где доза 1х активных ингредиентов SU составляет:
Сульфонилмочевины
1х (г/га)
Флупирсульфурон
Имазосульфурон
Тифенсульфурон
Трибенурон
Амидосульфурон
Форамсульфурон
Йодсульфурон
Мезосульфурон
7,5
Никосульфурон
Мезосульфурон +
йодсульфурон (5:1
14,4
мас/мас)
причем "другие SU" относится к следующим активным ингредиентам SU, их агрономически приемлемым солям и эфирам, а также их комбинациям:
SU А. И.
Примеры соли или эфира
азимсульфурон
бенсульфурон
бенсульфурон-метил
хлоримурон
хлоримурон-этил
хлорсульфурон
циносульфурон
циклосульфамурон
этаметсульфурон
этаметсульфурон-метил
этоксисульфурон
флазасульфурон
флуцетосульфурон
галосульфурон
галосульфурон-метил
метазосульфурон
метсульфурон
метсульфурон-метил
ортосульфамурон
оксасульфурон
примисульфурон
примисульфурон-метил
пропирисульфурон
просульфурон
пиразосульфурон
пиразосульфурон-этил
римсульфурон
сульфометурон
сул ьф ометурон- метил
сульфосульфурон
триасульфурон
трифлоксисульфурон
трифлоксисульфурон-натрий
трифлусульфурон
трифлусульфурон-метил
тритосульфурон
2. Способ по пункту 1, отличающийся тем, что указанный ген моно-SU-HT-AHASL:
(a) кодирует только один из Р197Х или W574X, а также кодирует его гомозиготным или гемизиготным способом;
(b) кодирует только один из Р197Х или W574X, а также кодирует его в одной аллели и кодирует остаток Р197Р дикого типа или остаток W574W дикого типа, соответственно, в гомологичной аллели;
(c) кодирует две различные мутации Р197Х гетерозиготным способом, а остаток W574W дикого типа - гомозиготным;
(d) кодирует две различные мутации W574X гетерозиготным способом, а остаток Р197Р дикого типа - гомозиготным; или ъ
(e) кодирует (!) одну мутацию Р197Х и остаток W574W дикого типа в одной аллели, а также (ii) одну мутацию W574X и остаток Р197Р дикого типа в гомологической аллели.
3. Способ отбора гербицидостойкого растения Brassica зимнего вида, включающий:
(I) проведение предвсходовой обработки, либо предпосадочной обработки в 0-30 день, растений Brassica посредством нанесения гербицидного состава, содержащего сульфонилмочевину(ы) (SU), на место посадки семян и область, находящуюся в непосредственной близости, доза которого составляет от более 0,5х до около 4х SU, отличающийся тем, что
(А) указанный гербицидный состав
(1) содержит SU, выбранную из амидосульфурона,
флупирсульфурона, форамсульфурона, имазосульфурона,
йодсульфурона, мезосульфурона, никосульфурона,
тифенсульфурона, а также трибенурона, их агрономически
приемлемых солей и эфиров и их комбинаций, а также
(2) содержит не более 3 мас.% любой другой SU; и
(В) указанное растение Brassica
(1) содержит сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного растения Brassica, или
(2) содержит, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где один из генов HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, и, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X; или
(3) содержит, по меньшей мере, два гербицидостойких гена AHASL (HT-AHASL), где первый ген HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, а второй ген HT-AHASL кодирует мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X, и G654X; или
(II) отбор растения Brassica, способного переносить указанную обработку SU дозой SU 1х с поражением не более 5 по шкале PHYTOX (от 0 до 100) при измерениях, проведенных, по меньшей мере, через 21 день после указанной обработки, и
где доза 1х активных ингредиентов SU составляет:
Сульфонилмочевины
1х (г/га)
Флупирсульфурон
Имазосульфурон
Тифенсульфурон
Трибенурон
Амидосульфурон
Форамсульфурон
Йодсульфурон
Мезосульфурон
7,5
Никосульфурон
Мезосульфурон + йодсульфурон (5:1 мас/мас)
14,4
причем "другие SU" относится к следующим активным ингредиентам SU, их агрономически приемлемым солям и эфирам, а также их комбинациям.
SU А. И.
Примеры соли или эфира
азимсульфурон
бенсульфурон
бенсульфурон-метил
хлоримурон
хлоримурон-этил
хлорсульфурон
циносульфурон
циклосульфамурон
этаметсульфурон
этаметсульфурон-метил
этоксисульфурон
флазасульфурон
флуцетосульфурон
галосульфурон
галосульфурон-метил
метазосульфурон
метсульфурон
метсульфурон-метил
ортосульфамурон
оксасульфурон
примисульфурон
примисульфурон-метил
пропирисульфурон
просульфурон
пиразосульфурон
пиразосульфурон-этил
римсульфурон
сульфометурон
сул ьф ометурон- метил
сульфосульфурон
триасульфурон
трифлоксисульфурон
трифлоксисульфурон-натрий
трифлусульфурон
трифлусульфурон-метил
тритосульфурон
4. Способ обеспечения защиты урожая растения Brassica зимнего вида, включающий:
посадку семян растения Brassica зимнего вида;
выращивание семян в условиях, позволяющих производить растение Brassica зимнего вида; и
проведение гербицидной обработки растения путем нанесения гербицидного состава, содержащего сульфонилмочевину(ы) (SU), на растение и область, находящуюся в непосредственной близости, причем указанный гербицидный состав содержит (1) SU, выбранную из амидосульфурона, флупирсульфурона, форамсульфурона, имазосульфурона, йодсульфурона, мезосульфурона, никосульфурона, тифенсульфурона, а также трибенурона, их агрономически приемлемых солей и эфиров и их комбинаций, и (2) не более 3 мас.% любой другой SU;
где указанное растение Brassica
(1) содержит сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, и представляет собой ген моно-SU-HT-AHASL, где указанный ген моно-SU-HT-AHASL расположен в геноме А указанного растения Brassica, или
(2) содержит, по меньшей мере, один гербицидостойкий ген AHASL (HT-AHASL), где один из генов HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-HT), выбранную из Р197Х и W574X, и, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X; или
(3) содержит, по меньшей мере, два гербицидостойких гена AHASL (HT-AHASL), где первый ген HT-AHASL кодирует сульфонилмочевины гербицидостойкую мутацию (SU-НТ), выбранную из Р197Х и W574X, а второй ген HT-AHASL кодирует мутацию, выбранную из G121X, А122Х, М124Х, R142X, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X;
(1)
где урожай равен или больше урожая, полученного от дикого типа такого же растения Brassica зимнего вида, и
где доза 1х активных ингредиентов SU составляет:
Сульфонилмочевины
1х (г/га)
Флупирсульфурон
Имазосульфурон
Тифенсульфурон
Трибенурон
Амидосульфурон
Форамсульфурон
Йодсульфурон
Мезосульфурон
7,5
Никосульфурон
Мезосульфурон +
йодсульфурон (5:1
14,4
мас/мас)
причем "другие SU" относится к следующим активным ингредиентам SU, их агрономически приемлемым солям и эфирам, а также их комбинациям.
SU А. И.
Примеры соли или эфира
азимсульфурон
бенсульфурон
бенсульфурон-метил
хлоримурон
хлоримурон-этил
хлорсульфурон
циносульфурон
циклосульфамурон
этаметсульфурон
этаметсульфурон-метил
этоксисульфурон
флазасульфурон
флуцетосульфурон
галосульфурон
галосульфурон-метил
метазосульфурон
метсульфурон
метсульфурон-метил
ортосульфамурон
оксасульфурон
примисульфурон
примисульфурон-метил
пропирисульфурон
просульфурон
пиразосульфурон
пиразосульфурон-этил
римсульфурон
сульфометурон
сул ьф ометурон- метил
сульфосульфурон
триасульфурон
трифлоксисульфурон
трифлоксисульфурон-натрий
трифлусульфурон
трифлусульфурон-метил
тритосульфурон
5. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что указанный гербицидный состав дополнительно содержит один или более имидазалинонов гербицидов.
6. Способ по пункту 5, отличающийся тем, что имидазалинон гербицид представляет собой имазамокс или его агрономически приемлемую соль или эфир.
7. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что указанный гербицидный состав содержит комбинацию йодсульфуруна и мезосульфурона.
8. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что мутацию SU-НТ выбирают из P197S, Р197А, Р197Е, P197L, P197Q, P197R, P197S, P197V, P197W, P197Y, P197I, Р197Н, Р197С, P197G.
9. Способ по пункту 8, отличающийся тем, что мутация SU-HT выбирается из P197S, P197L и Р197Т.
10. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что мутацию SU-НТ выбирают из W574L, W574M, W574C, W574S, W574R, W574G, W574A, W574F, W574Q и W574Y.
11. Способ по пункту 10, отличающийся тем, что мутация SU-HT представляет собой W574L.
12. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что
дополнительную мутацию растения Brassica (B)(2) и мутацию, кодируемую вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), выбирают из А122Х, R199X, А205Х, S653X, G654X и их комбинаций.
13. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что
дополнительную мутацию растения Brassica (B)(2) и мутацию, кодируемую вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), выбирают из А122Т, A122V, A122D, А122Р, A122Y, R199A, R199E, A205V, А205С, A205D, А205Е, A205R,
А205Т, A205W, A205Y, A205N, S653N, S653I, S653F, S653T, G654Q, G654C, G654E, G654D и их комбинаций.
14. Способ по любому из пунктов 1-4, отличающийся тем, что растение Brassica имеет один ген HT-AHASL/197/574, мутация SU-НТ которого представляет собой W574X.
15. Способ по пункту 14, отличающийся тем, что дополнительную мутацию растения Brassica (B)(2) и мутацию, кодируемую вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), выбирают из G121X, А122Х, М124Х, V196X, R199X, Т203Х, А205Х, F206X, К256Х, М351Х, Н352Х, R373X, D375X, D376X, R377X, М570Х, V571X, F578X, S653X и G654X.
16. Способ по пункту 15, отличающийся тем, что дополнительную мутацию растения Brassica (B)(2) и мутацию, кодируемую вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), выбирают из А122Х, R199X, А205Х, S653X, G654X и их комбинаций.
17. Способ по пункту 16, отличающийся тем, что дополнительную мутацию растения Brassica (B)(2) и мутацию, кодируемую вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), выбирают из А122Т, A122V, R199A, R199E, A205V, S653N, G654E и их комбинаций.
18. Способ по пункту 16, отличающийся тем, что дополнительная мутация растения Brassica (B)(2) и мутация, кодируемая вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), представляют собой S653X.
19. Способ по пункту 18, отличающийся тем, что дополнительная мутация растения Brassica (B)(2) и мутация, кодируемая вторым геном HT-AHASL растения Brassica (B)(3), представляют собой S653N.
20. Способ по пункту 15, отличающийся тем, что дополнительная мутация растения Brassica (B)(2) закодирована геном HT-AHASL, расположенном в геноме А растения Brassica.
21. Способ по пункту 15, отличающийся тем, что дополнительная мутация растения Brassica (B)(2) закодирована геном моно-SU-AHASL.
14.
22. Способ по пункту 4, дополнительно включающий сбор семян, произведенных растением Brassica зимнего вида.
23. Способ по пункту 4, отличающийся тем, что сорняки, произрастающие в непосредственной близости от растения Brassica зимнего вида, обрабатывают указанным гербицидным составом SU.
24. Способ по пункту 4, отличающийся тем, что гербицидный состав SU присутствует в почве в качестве остатка гербицидного состава SU, которым обрабатывают указанные выше культуры.
25. Способ по пункту 4, отличающийся тем, что урожайность растения Brassica зимнего вида выше, по сравнению с урожайностью растения Brassica зимнего вида, соответствующего изолинии дикого типа и произрастающего в тех же условиях содержания гербицида.
26. Способ по пункту 4, отличающийся тем, что урожайность растения Brassica зимнего вида в значительной степени эквивалентна урожайности, в случае когда зимний вид выращивают без использования гербицидного состава SU.
27. Способ по любому из пунктов 1 - 26, отличающийся тем, что
указанный гербицидный состав содержит, по меньшей мере, один дополнительный активный ингредиент, выбранный из: ингибиторов EPSPS, глифосата; ингибиторов глутаминсинтетаза, глюфосината; ингибиторов ацетил-КоА карбоксилазы, ДИМов, ФОПов или ДЕНов (dims, fops или dens); ингибиторов РРО, сафлуфенацила; фунгицидов, пираклостробина; или их агрономически приемлемых солей или эфиров; и растение Brassica также имеет характеристику устойчивости к указанному(ным) дополнительному(ным) А.И.
28. Способ производства семян, включающий осуществление способа по любому из пунктов 1 - 27 и получение семян растения Brassica.
29. Семена, собранные с растения Brassica, обработанного способом по любому из пунктов 1-27.
28.
30. Способ обработки семян, собранных способом по любому из пунктов 1 - 27, включающий обработку семян гербицидным составом, содержащим сульфонилмочевину(ы) (SU), отличающийся тем, что указанный гербицидный состав содержит SU, выбранную из амидосульфурона, флупирсульфурона, форамсульфурона, имазосульфурона, йодсульфурона, мезосульфурона, никосульфурона, тифенсульфурона, а также трибенурона, их агрономически приемлемых солей и эфиров и их комбинаций, и содержит не более 3 мас.% любой другой SU.
31. Способ по пункту 30, отличающийся тем, что указанный гербицидный состав дополнительно содержит имидазолинон гербицид.
32. Способ по пункту 31, отличающийся тем, что указанный
имидазолинон гербицид содержит один или более из следующих гербицидов:
имазамокс, имазтапир, имазапир и имазапик.
> BnAHASLlA_PM2 partial <
actttcatctcccgctacgctcccgacgagccccgcaagggtgctgatatcctcgtggaagccctcgagcgtcaagg cgtcgaaaccgtcttcgcttatcccggaggtgcctccatggagatccaccaagccttgactcgctcctccaccatcc gtaacgtcctcccccgtcacgaacaaggaggagtcttcgccgccgagggttacgctcgttcctccggcaaaccggga atctgcatagccacttcgggtcccggagctaccaacctcgtcagcgggttagccgacgcgatgcttgacagtgttcc tctcgtcgccatcacaggacaggtccctcgccggatgatcggtactgacgcgttccaagagacgccaatcgttgagg taacgaggtctattacgaaacataactatctggtgatggatgttgatgacatacctaggatcgttcaagaagcattc tttctagctacttccggtagacccggaccggttttggttgatgttcctaaggatattcagcagcagcttgcgattcc taactgggatcaacctatgcgcttgcctggctacatgtctaggctgcctcagccaccggaagtttctcagttaggcc agatcgttaggttgatctcggagtctaagaggcctgttttgtacgttggtggtggaagcttgaactcgagtgaagaa ctggggagatttgtcgagcttactgggatccctgttgcgagtacgttgatggggcttggctcttatccttgtaacga tgagttgtccctgcagatgcttggcatgcacgggactgtgtatgctaactacgctgtggagcatagtgatttgttgc tggcgtttggtgttaggtttgatgaccgtgtcacgggaaagctcgaggcgtttgcgagcagggctaagattgtgcac atagacattgattctgctgagattgggaagaataagacacctcacgtgtctgtgtgtggtgatgtaaagctggcttt gcaagggatgaacaaggttcttgagaaccgggcggaggagctcaagcttgatttcggtgtttggaggagtgagttga gcgagcagaaacagaagttcccgttgagcttcaaaacgtttggagaagccattcctccgcagtacgcgattcaggtc ctagacgagctaacccaagggaaggcaattatcagtactggtgttggacagcatcagatgtgggcggcgcagtttta caagtacaggaagccgaggcagtggctgtcgtcctcaggactcggagctatgggtttcggacttcctgctgcgattg gagcgtctgtggcgaaccctgatgcgattgttgtggacattgacggtgatggaagcttcataatgaacgttcaagag ctggccacaatccgtgtagagaatcttcctgtgaagatactcttgttaaacaaccagcatcttgggatggtcatgca attggaagatcggttctacaaagctaacagagctcacacttatctcggggacccggcaagggagaacgagatcttcc ctaacatgctgcagtttgcaggagcttgcgggattccagctgcgagagtgacgaagaaagaagaactccgagaagct attcagacaatgctggatacacctggaccgtacctgttggatgtcatctgtccgcaccaagaacatgtgttaccgat gatcccaagtggtggcactttcaaagatgtaataaccgaaggggatggtcgcactaagtactga
> BnAHASLlC_PMl partial <
actttcgtctcccgctacgctcccgacgagccccgcaagggtgctgatatcctcgtcgaagccctcgagcgtcaagg cgtcgaaaccgtctttgcttatcccggaggtgcttccatggagatccaccaagccttgactcgctcctccaccatcc gtaacgtccttccccgtcacgaacaaggaggagtcttcgccgccgagggttacgctcgttcctccggcaaaccggga atctgcatagccacttcgggtcccggagctaccaacctcgtcagcgggttagcagacgcgatgcttgacagtgttcc tcttgtcgccattacaggacaggtccctcgccggatgatcggtactgacgccttccaagagacaccaatcgttgagg taacgaggtctattacgaaacataactatttggtgatggatgttgatgacatacctaggatcgttcaagaagctttc tttctagctacttccggtagacccggaccggttttggttgatgttcctaaggatattcagcagcagcttgcgattcc taactgggatcaacctatgcgcttacctggctacatgtctaggttgcctcagcctccggaagtttctcagttaggtc agatcgttaggttgatctcggagtctaagaggcctgttttgtacgttggtggtggaagcttgaactcgagtgaagaa ctggggagatttgtcgagcttactgggatccccgttgcgagtactttgatggggcttggctcttatccttgtaacga tgagttgtccctgcagatgcttggcatgcacgggactgtgtatgctaactacgctgtggagcatagtgatttgttgc tggcgtttggtgttaggtttgatgaccgtgtcacgggaaagctcgaggctttcgctagcagggctaaaattgtgcac atagacattgattctgctgagattgggaagaataagacacctcacgtgtctgtgtgtggtgatgtaaagctggcttt gcaagggatgaacaaggttcttgagaaccgggcggaggagctcaagcttgatttcggtgtttggaggagtgagttga gcgagcagaaacagaagttccctttgagcttcaaaacgtttggagaagccattcctccgcagtacgcgattcagatc ctcgacgagctaaccgaagggaaggcaattatcagtactggtgttggacagcatcagatgtgggcggcgcagtttta caagtacaggaagccgagacagtggctgtcgtcatcaggcctcggagctatgggttttggacttcctgctgcgattg gagcgtctgtggcgaaccctgatgcgattgttgtggatattgacggtgatggaagcttcataatgaacgttcaagag ctggccacaatccgtgtagagaatcttcctgtgaagatactcttgttaaacaaccagcatcttgggatggtcatgca atgggaagatcggttctacaaagctaacagagctcacacttatctcggggacccggcaagggagaacgagatcttcc ctaacatgctgcagtttgcaggagcttgcgggattccagctgcgagagtgacgaagaaagaagaactccgagaagct attcagacaatgctggatacaccaggaccatacctgttggatgtgatatgtccgcaccaagaacatgtgttaccgat gatcccaaatggtggcactttcaaagatgtaataacagaaggggatggtcgcactaagtactga
> BnAHASLlA_PM2 partiaK
TFISRYAPDEPRKGADILVEALERQGVETVFAYPGGASMEIHQALTRSSTIRNVLPRHEQGGVFAAEGYARSSGKPG ICIATSGPGATNLVSGLADAMLDSVPLVAITGQVPRRMIGTDAFQETPIVEVTRSITKHNYLVMDVDDIPRIVQEAF FLATSGRPGPVLVDVPKDIQQQLAIPNWDQPMRLPGYMSRLPQPPEVSQLGQIVRLISESKRPVLYVGGGSLNSSEE LGRFVELTGIPVASTLMGLGSYPCNDELSLQMLGMHGTVYANYAVEHSDLLLAFGVRFDDRVTGKLEAFASRAKIVH IDIDSAEIGKNKTPHVSVCGDVKLALQGMNKVLENRAEELKLDFGVWRSELSEQKQKFPLSFKTFGEAIPPQYAIQV LDELTQGKAIISTGVGQHQMWAAQFYKYRKPRQWLSSSGLGAMGFGLPAAIGASVANPDAIVVDIDGDGSFIMNVQE LATIRVENLPVKILLLNNQHLGMVMQLEDRFYKANRAHTYLGDPARENEIFPNMLQFAGACGIPAARVTKKEELREA IQTMLDTPGPYLLDVICPHQEHVLPMIPSGGTFKDVITEGDGRTKY
> BnAHASLlC_PMl partial <
TFVSRYAPDEPRKGADILVEALERQGVETVFAYPGGASMEIHQALTRSSTIRNVLPRHEQGGVFAAEGYARSSGKPG ICIATSGPGATNLVSGLADAMLDSVPLVAITGQVPRRMIGTDAFQETPIVEVTRSITKHNYLVMDVDDIPRIVQEAF FLATSGRPGPVLVDVPKDIQQQLAIPNWDQPMRLPGYMSRLPQPPEVSQLGQIVRLISESKRPVLYVGGGSLNSSEE LGRFVELTGIPVASTLMGLGSYPCNDELSLQMLGMHGTVYANYAVEHSDLLLAFGVRFDDRVTGKLEAFASRAKIVH IDIDSAEIGKNKTPHVSVCGDVKLALQGMNKVLENRAEELKLDFGVWRSELSEQKQKFPLSFKTFGEAIPPQYAIQI LDELTEGKAIISTGVGQHQMWAAQFYKYRKPRQWLSSSGLGAMGFGLPAAIGASVANPDAIVVDIDGDGSFIMNVQE LATIRVENLPVKILLLNNQHLGMVMQWEDRFYKANRAHTYLGDPARENEIFPNMLQFAGACGIPAARVTKKEELREA IQTMLDTPGPYLLDVICPHQEHVLPMIPNGGTFKDVITEGDGRTKY
РМ2
atggcggcggcaacatcgtcttctccgatctccttaaccgctaaaccttcttccaaatcccctctacccatttccag attctcccttcccttctccttaaccccacagaaaccctcctcccgtctccaccgtccactcgccatctccgccgttc tcaactcacccgtcaatgtcgcacctgaaaaaaccgacaagatcaagactttcatctcccgctacgctcccgacgag ccccgcaagggtgctgatatcctcgtggaagccctcgagcgtcaaggcgtcgaaaccgtcttcgcttatcccggagg tgcctccatggagatccaccaagccttgactcgctcctccaccatccgtaacgtcctcccccgtcacgaacaaggag gagtcttcgccgccgagggttacgctcgttcctccggcaaaccgggaatctgcatagccacttcgggtcccggagct accaacctcgtcagcgggttagccgacgcgatgcttgacagtgttcctctcgtcgccatcacaggacaggtccctcg ccggatgatcggtactgacgcgttccaagagacgccaatcgttgaggtaacgaggtctattacgaaacataactatc tggtgatggatgttgatgacatacctaggatcgttcaagaagcattctttctagctacttccggtagacccggaccg gttttggttgatgttcctaaggatattcagcagcagcttgcgattcctaactgggatcaacctatgcgcttgcctgg ctacatgtctaggctgcctcagccaccggaagtttctcagttaggccagatcgttaggttgatctcggagtctaaga ggcctgttttgtacgttggtggtggaagcttgaactcgagtgaagaactggggagatttgtcgagcttactgggatc cctgttgcgagtacgttgatggggcttggctcttatccttgtaacgatgagttgtccctgcagatgcttggcatgca cgggactgtgtatgctaactacgctgtggagcatagtgatttgttgctggcgtttggtgttaggtttgatgaccgtg tcacgggaaagctcgaggcgtttgcgagcagggctaagattgtgcacatagacattgattctgctgagattgggaag aataagacacctcacgtgtctgtgtgtggtgatgtaaagctggctttgcaagggatgaacaaggttcttgagaaccg ggcggaggagctcaagcttgatttcggtgtttggaggagtgagttgagcgagcagaaacagaagttcccgttgagct tcaaaacgtttggagaagccattcctccgcagtacgcgattcaggtcctagacgagctaacccaagggaaggcaatt atcagtactggtgttggacagcatcagatgtgggcggcgcagttttacaagtacaggaagccgaggcagtggctgtc gtcctcaggactcggagctatgggtttcggacttcctgctgcgattggagcgtctgtggcgaaccctgatgcgattg ttgtggacattgacggtgatggaagcttcataatgaacgttcaagagctggccacaatccgtgtagagaatcttcct gtgaagatactcttgttaaacaaccagcatcttgggatggtcatgcaattggaagatcggttctacaaagctaacag agctcacacttatctcggggacccggcaagggagaacgagatcttccctaacatgctgcagtttgcaggagcttgcg ggattccagctgcgagagtgacgaagaaagaagaactccgagaagctattcagacaatgctggatacacctggaccg tacctgttggatgtcatctgtccgcaccaagaacatgtgttaccgatgatcccaagtggtggcactttcaaagatgt aataaccgaaggggatggtcgcactaagtactga
РМ2
MAAATSSSPISLTAKPSSKSPLPISRFSLPFSLTPQKPSSRLHRPLAISAVLNSPVNVAP EKTDKIKTFISRYAPDEPRKGADILVEALERQGVETVFAYPGGASMEIHQALTRSSTIRN VLPRHEQGGVFAAEGYARSSGKPGICIATSGPGATNLVSGLADAMLDSVPLVAITGQVPR RMIGTDAFQETPIVEVTRSITKHNYLVMDVDDIPRIVQEAFFLATSGRPGPVLVDVPKDI QQQLAIPNWDQPMRLPGYMSRLPQPPEVSQLGQIVRLISESKRPVLYVGGGSLNSSEELG RFVELTGIPVASTLMGLGSYPCNDELSLQMLGMHGTVYANYAVEHSDLLLAFGVRFDDRV TGKLEAFASRAKIVHIDIDSAEIGKNKTPHVSVCGDVKLALQGMNKVLENRAEELKLDFG VWRSELSEQKQKFPLSFKTFGEAIPPQYAIQVLDELTQGKAIISTGVGQHQMWAAQFYKY RKPRQWLSSSGLGAMGFGLPAAIGASVANPDAIWDIDGDGSFIMNVQELATIRVENLPV KILLLNNQHLGMVMQLEDRFYKANRAHTYLGDPARENEIFPNMLQFAGACGIPAARVTKK EELREAIQTMLDTPGPYLLDVICPHQEHVLPMIPSGGTFKDVITEGDGRTKY
Фиг. 7
120
-•-wt А ^-А122Т
A122Q
A122TS653N -*^A122QS653N |- • W574L S653M
WS74L S653I
- A122TW574L
A122QW574L
wtC
S653N
W574L
200 400 600 800 1000 1200
Имазамокс (мкМ)
1400
1600
Фиг. 8
л н о о X ta S н ¦л. ез
120
100
wtA ¦А122Т A122Q A122TS653N A122Q S653N ¦W574LS653N W574LS653I A122TW574L A122Q W574L wtC S653N W574L
0.00
20.00
40.оо бо.оо ео.оо
нМ хлорсульфурон
100.00
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
International application No
PCT/IB2011/GGG7G4
A. CLASSIFICATION 0 F SUBJECT MATTER
INV. C12N9/88 C12N15/82
ADD.
According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B. FIELDS SEARCHED
Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols)
C12N
Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched
Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practical, search terms used)
EPO-lntemal , WPI Data
* Special categories of cited documents
"A" document defining the general state of the art which is not considered to be of particular relevance
"E" earlier document but published on or after the international filing date
"L" documentwhich may throw doubts on priority claim(s) or which is cited to establish the publication date of another citation or other special reason (as specified)
"O" document referring to an oral disclosure, use, exhibition or other means
T later document published after the international filing date or priority date and not in conflict with the application but cited to understand the principle or theory underlying the invention
"X" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered novel or cannot be considered to involve an inventive step when the document is taken alone
"Y" document of particular relevance; the claimed invention
cannot be considered to involve an inventive step when the document is combined with one or more other such docu--merits, such combination being obvious to a person skilled in the art.
page 1 of 2
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
International application No
РСТ/IB2011/000704
C(Continuation). DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT
Category*
Citation of document, with Indication, where appropriate, of the relevant passages
Relevant to claim No.
RAY К ET AL: "Mutant acetol actate synthase gene is an effi ci ent in vitro sel ectabl e marker for the geneti с transformati on of Brassi ca juncea (oi I seed mustard) ",
pages
JOURNAL OF PLANT PHYSIOLOGY, FISCHER, STUTTGART, DE, vol . 161 , no. 9, 20 September 2004 (2004-09-20) 1079-1083 , XP004955445 , ISSN : 0176-1617 , D0I : 1Q. 1Q16/J .JPLPH .2Q04.Q2 .QQ1 page 1080, col umn 2, paragraph page 1082, col umn 1, paragraph 2 - col umn 2, paragraph 1
1-45
X, P
Wo 2010/037057 Al PRODUCTS BV [NL] ; CARLSON DALE [) 1
paragraphs [0022] : claims 94, 96, 99 (BASF AGR0CHEMICAL BEETHAN PETER [US] ; Apri I 2010 (2010-04-01) [0159] , [0260] ;
1-45
US 6 214 769 Bl (BURDICK BRUCE [US] ET AL) 10 Apri I 2001 (2001-04-10) claims 14, 19, 21
1-45
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
page 2 of 2
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
Intormation on patent family members
International application No
PCT/IB2011/000704
Patent document cited in search report
Publication date
Patent family member(s)
Publication date
2009046334
-04-
-2009
2008308530
09-
-2009
2701624
09-
-2009
101883868
10-
-2010
201070430
30-
-2010
2203565
07-
-2010
2010539986
24-
-2010
2009205064
13-
-08
-2009
5434283
-07
-1995
5545821
13-
-1996
2010037057
0 1
-04
-2010
2C10037061
01-
-2010
6214769
-04
-2001
2346753
09-
-2001
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactorv.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactorv.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
1/8
Фиг. 1
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
2/8
Фиг. 2
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
3/8
Фиг. 3
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
4/8
Фиг. 4
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
5/8
Фиг. 5
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
6/8
Фиг. 6
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
7/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
7/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
7/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
8/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
8/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
8/8
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com
