(57) Реферат / Формула:
Предложены соединения формулы I
а также фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I, и способы лечения ортомиксовирусных инфекций путем введения этих соединений. Предложенные соединения, композиции и способы являются особенно подходящими для лечения инфекций, вызванных вирусом гриппа человека.
2'-ЗАМЕЩЕННЫЕ КАРБАНУКЛЕОЗИДНЫЕ АНАЛОГИ ДЛЯ
ПРОТИВОВИРУСНОГО ЛЕЧЕНИЯ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ 5 [0001] Настоящее изобретение относится в целом к композициям, обладающим противовирусной активностью, более конкретно к нуклеозидам, обладающим активностью в отношении инфекций, вызываемых вирусами семейств Orthomyxoviridae (ортомиксовирусных инфекций), а также к фармацевтическим композициям и способам, в которых они применяются.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ [0002] Вирусы гриппа из семейства Orthomyxoviridae, которые принадлежат к родам А и В, являются причиной ежегодных сезонных эпидемий гриппа, вызывая контагиозные острые респираторные инфекции. Дети, люди преклонного возраста и люди с
15 хроническими заболеваниями подвержены риску развития тяжелых осложнений,
связанных с высокими уровнями опасности и смертности (Memoli et al., Drug Discovery Today 2008, 13, 590- 595). Из трех родов гриппа вирусы типа А являются наиболее вирулентными патогенами человека, которые вызывают наиболее тяжелую болезнь, могут передаваться другим видам и вызывать пандемии гриппа человека. Недавние
20 вспышки гриппа у людей в 2009 г, вызванные агрессивным штаммом вируса свиней A/H1N1, подчеркнули потребность в новых противовирусных терапевтических средствах. Несмотря на применение программ ежегодной вакцинации для защиты населения от инфекций, вызываемых вирусом гриппа, эти программы должны быть направлены на штаммы вируса, которые будут превалировать в сезонных вспышках,
25 чтобы быть эффективными, и они не решают проблему неожиданных, непредвиденных пандемий гриппа. Упоминаемая выше недавняя вспышка гриппа у людей в 2009 г, вызванная агрессивным штаммом вируса свиней A/H1N1, является примером этой проблемы.
[0003] В настоящее время доступно несколько противовирусных терапевтических 30 средств, другие находятся в стадии разработки (Hedlund et al., Viruses 2010, 2, 17661781). Среди доступных в настоящее время противовирусных терапевтических средств можно назвать блокаторы ионных каналов М2 амантадин и римантадин и ингибиторы нейраминидазы озельтамивир и занамивир. Однако ко всем этим средствам выработалась устойчивость. Соответственно, существует постоянная потребность в 35 новых противовирусных терапевтических средствах.
[0004] В настоящее время разрабатываются новые перспективные противогриппозные агенты с новыми механизмами действия. К этим агентам относятся фавипиравир, направленно воздействующий на репликацию вирусных генов путем ингибирования РНК-полимеразы гриппа. Однако еще не известно, станет ли это исследуемое 5 перспективное лекарственное средство доступно для терапии. Соответственно, сохраняется потребность в разработке дополнительных соединений, которые подавляют грипп по этому механизму действия.
[0005] Определенные рибозиды нуклеиновых оснований пиррол[1,2-г][1,2,4]триазин, имидазо[1,5-г][1,2,4]триазин, имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин и [1,2,4]триазоло[4,3-
10 1][1,2,4]триазин раскрыты в Carbohydrate Research 2001, 331(1), 77-82; Nucleosides &
Nucleotides 1996, 15(1-3), 793-807; Tetrahedron Letters 1994, 35(30), 5339-42; Heterocycles 1992, 34(3), 569-74; /. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1985, 3, 621-30; /. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1984, 2, 229-38; WO 2000056734; Organic Letters 2001, 3(6), 839-842; /. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1999, 20, 2929-2936; и /. Med. Chem. 1986, 29(11), 2231-5. Однако эти
15 соединения не описаны как подходящие для лечения ортомиксовирусных инфекций. [0006] Рибозиды нуклеозидов пиррол[1,2-1][1,2,4]триазинила, имидазо[1,5-1][1,2,4]триазинила, имидазо[1,2-1][1,2,4]триазинила и [1,2,4]триазоло[4,3-1][1,2,4]триазинила, обладающие противовирусной, анти-ВГЧ и анти-RdRp активностью, раскрыты Babu в WO2008/089105 и WO2008/141079, Cho et al. в WO2009/132123 и
20 Francom et al. В WO2010/002877. Butler et al. в WO2009/132135 описывают противовирусные нуклеозиды пиррол[1,2-1][1,2,4]триазинил, имидазо[1,5-1][1,2,4]триазинил, имидазо[1,2-г][1,2,4]триазинил и [1,2,4]триазоло[4,3-1][1,2,4]триазинил, в которых положение Г сахара нуклеозида содержит в качестве заместителя цианогруппу или метальную группу. Однако эффективность этих
25 соединений для лечения ортомиксовирусных инфекций не раскрыта.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ [0007] Предложены соединения, которые ингибируют вирусы семейства Orthomyxoviridae. Изобретение также включает соединения Формулы I, которые 30 ингибируют вирусные полимеразы нуклеиновых кислот, в частности РНК-зависимую РНК-полимеразу (RdRp) ортомиксовирусов {Orthomyxoviridae), в большей степени, чем клеточные полимеразы нуклеиновых кислот. Соединения Формулы I можно применять для лечения ортомиксовирусных инфекций у человека и других животных.
Формула I
или его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или эфиру, 5 где:
каждый из R1 и R7 независимо представляет собой Н, галоген, ORa, (Ci-Cg) галоалкил, CN, N3, (Ci-Cg) алкил, (Ci-Cg) замещенный алкил, (C2-Cg) алкенил, (С2-С8) замещенный алкенил, (C2-Cg) алкинил или (C2-Cg) замещенный алкинил,
причем заместитель выбран из группы, состоящей из -X, -Rb, -ОН, =0, -ORb, -SRb, -S", 10 -NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3,
-NHC(=0) Rb, -OC(=0) Rb, -NHC(=0) NRb2, -S(=0) 2-, -S(=0) 2OH, -S(=0) 2Rb, -OS(=0) 2ORb, -S(=0) 2NRb2, -S(=0) Rb, -OP(=0) (ORb) 2, -P(=0) (ORb) 2, -P(=0) (О ) 2, -P(=0) (OH) 2, -P(O) (ORb) (O ), -C(=0) Rb, -C(=0) X, -C(S) Rb, -C(O) ORb, -C(O) О , -C(S) ORb, -C(O) SRb, -C(S) SRb, -C(O) NRb2, -C(S) NRb2, -C(=NRb) NRb2, где каждый X независимо представляет собой 15 галоген: F, CI, Вг или I; и каждый Rb независимо представляет собой Н, алкил, арил, арилалкил, гетероцикл или защитную группу, или пролекарственную группу; R2 представляет собой ORa; R представляет собой галоген или N3;
каждый Ra независимо представляет собой Н, арил, арилалкил или (Ci-Cg) алкил; 20 каждый из R%R5 независимо представляет собой Н, =0, ORa, N(Ra) 2, N3, CN, S(O) nRa, галоген или (Ci-Cg) галоалкил; п равен 0, 1 или 2; и
R6 представляет собой Н, арил, арилалкил, или
S-i
w1-^yP *
W2 ;
25 где W1 и W2 каждый независимо представляет собой ORa или группу формулы 1а:
Формула la,
где:
каждый Y независимо представляет собой связь или О; М2 равен 0, 1 или 2;
каждый Rx представляет собой Н, галоген или ОН.
[0009] В предпочтительном варианте реализации соединение Формулы I представлено Формулой II:
Формулой II
или ее фармацевтически приемлемой солью, сольватом или эфиром. В других
1 2
предпочтительных вариантах реализации R представляет собой Н, R представляет собой ОН или О-бензил, и/или R представляет собой F или N3 и, в более предпочтительном варианте, R представляет собой F. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения R4 представляет собой NH2, и R5 представляет собой Н, F, CI, Вг, N3, CN, CF3, NH2, SMe или S02Me, и, в другом варианте реализации, R5 представляет собой NH2, и R4 представляет собой =0, ОН, ОМе, CI, Br, I, NH2, NHMe, NHcPr или SMe. В еще более предпочтительных вариантах реализации R4 и R5 оба представляют собой NH2 или SMe, R5 представляет собой Н, или R4 представляет собой =0. В других предпочтительных вариантах реализации R6 представляет собой Н, бензил, или
Формула 1а,
5 где каждый Y представляет собой О; М2 равен 2; и каждый Rx представляет собой Н. В другом варианте реализации R7 представляет собой Н или ОН. [0010] Второй вариант реализации настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения Формулы I, II или Ш согласно определению для первого варианта
10 реализации и фармацевтически приемлемую основу или вспомогательное вещество. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция дополнительно включает по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент. [ООН] Третий вариант реализации настоящего изобретения относится к способу лечения ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего, включающему
15 введение терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира согласно определению для первого варианта реализации настоящего изобретения. В некоторых вариантах реализации ортомиксовирусная инфекция, которую лечат, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа А, инфекцию, вызванную вирусом гриппа В, или
20 инфекцию, вызванную вирусом гриппа С. В другом варианте реализации способ включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения Формулы I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира в
25 комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или основой.
[0012] В другом варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования ортомиксовирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы. В другом варианте реализации этот способ включает осуществления контакта клетки,
инфицированной вирусом Orthomyxoviridae, с эффективным количеством соединения Формулы I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира. [0013] В другом аспекте этого варианта реализации настоящее изобретение обеспечивает способ лечения инфекции, вызванной вирусом Orthomyxoviridae, и, в 5 одном варианте реализации дополнительно включает введение терапевтически
эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента или содержащей его композиции, причем дополнительный агент выбран из группы, состоящей из кортикостероида, противовоспалительного модулятора передачи сигнала, бронходилататора, представляющего собой агонист [32-адренорецепторов,
10 антихолинергического средства, муколитического агента, гипертонического раствора, агента, который подавляет миграцию провоспалительных клеток в участок инфицирования и их смесей. В некоторых вариантах реализации дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор вирусного гемагглютинина, ингибитор вирусной нейрамидазы, ингибитор ионного канала М2, ингибитор
15 ортомиксовирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы или сиалидазу. В другом варианте реализации дополнительный терапевтический агент выбран из группы, состоящей из рибавирина, озельтамивира, занамивира, ланинамивира, перамивира, амантадина, римантадина, CS-8958a, фавипиравира, AVI-7100a, ингибитора альфа-1 протеазы и DAS181.
20 [0014] В другом варианте реализации настоящего изобретения соединение Формулы I, II или III и/или по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент вводят путем ингаляции.
Формула I,
или его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или эфиру;
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 25 [0015] Первый вариант реализации настоящего изобретения относится к соединению Формулы I:
где:
каждый из R1 и R7 независимо представляет собой Н, галоген, ORa, (Ci-Cg) галоалкил, CN,
N3, (Ci-Cg) алкил, (Ci-Cg) замещенный алкил, (C2-Cg) алкенил, (С2-С8) замещенный
алкенил, (C2-Cg) алкинил или (C2-Cg) замещенный алкинил, 5 причем заместитель выбран из группы, состоящей из -X, -Rb, -ОН, =0, -0Rb, -SRb, -S",
-NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3, -NHC(=0) Rb, -0C(=0) Rb, -NHC(=0) NRb2, -S(=0) 2-, -S(=0) 20H, -S(=0) 2Rb, -0S(=0) 20Rb, -S(=0) 2NRb2, -S(=0) Rb, -0P(=0) (0Rb) 2, -P(=0) (0Rb) 2, -P(=0) (О ) 2, -P(=0) (OH) 2, -P(0) (0Rb) (O ), -C(=0) Rb, -C(=0) X, -C(S) Rb, -C(0) 0Rb, -C(0) О , -C(S) 0Rb, -C(0) SRb, -C(S) 10 SRb, -C(O) NRb2, -C(S) NRb2, -C(=NRb) NRb2, где каждый X независимо представляет собой
галоген: F, CI, Вг, или I; и каждый Rb независимо представляет собой Н, алкил, арил,
арилалкил, гетероцикл или защитную группу, или пролекарственную группу;
R2 представляет собой ORa;
R представляет собой галоген или N3;
15 каждый Ra независимо представляет собой Н, арил, арилалкил или (Ci-Cg) алкил;
каждый из R4 и R5 независимо представляет собой Н, =0, ORa, N(Ra) 2, N3, CN, S(O) nRa, галоген или (Ci-Cg) галоалкил; каждый п равен 0, 1 или 2; и
R6 представляет собой Н, арил, арилалкил или
где W1 и W2 каждый независимо представляет собой ORa или группу формулы 1а:
где:
25 каждый Y независимо представляет собой связь или О; М2 равен 0, 1 или 2; и
каждый Rx представляет собой Н, галоген или ОН. В Формуле 1а, если Y представляет собой О, Rx не является галогеном.
[0016] Если не указано иначе, следующие термины и словосочетания в настоящем тексте имеют следующие значения. 5 [0017] В случае использования в настоящем тексте торгового наименования, заявитель предполагает независимое включение продукта, имеющего такое торговое наименование, и активный фармацевтический ингредиент(ы) товара, имеющего такое торговое наименование.
[0018] "Алкил" представляет собой углеводород, содержащий обычные, вторичные,
10 третичные или циклические атомы углерода. Например, алкильная группа может
содержать от 1 до 20 атомов углерода {т.е., С1-С20 алкил), от 1 до 8 атомов углерода {т.е., Ci-Cg алкил) или от 1 до 6 атомов углерода {т.е., Q-Сб алкил). Примеры подходящих алкильных групп включают, но не ограничиваются следующими: метил (Me, -СН3), этил (Et, -СН2СН3), 1-пропил (п-Рг, гг^пропил, -СН2СН2СН3), 2-пропил (i-Pr,
15 изопропил, -СН(СНз) 2), циклопропил (с-пропил, сРг), 1-бутил (n-Bu, н-бутил, -
СН2СН2СН2СН3), 2-метил-1-пропил (i-Bu, изобутил, -СН2СН(СН3) 2), 2-бутил (s-Bu, s-бутил, -СН(СНз) СН2СН3), 2-метил-2-пропил (t-Bu, t-бутил, -С(СНз) з), 1-пентил {н-пентил, -СН2СН2СН2СН2СН3), 2-пентил (-СН(СН3) СН2СН2СН3), 3-пентил (-СН(СН2СН3) 2), 2-метил-2-бутил (-С(СН3) 2СН2СН3), З-метил-2-бутил (-СН(СН3) СН(СН3) 2),
20 З-метил-1-бутил (-СН2СН2СН(СН3) 2), 2-метил-1-бутил (-СН2СН(СН3) СН2СН3), 1-гексил (-СН2СН2СН2СН2СН2СН3), 2-гексил (-СН(СНз) СН2СН2СН2СН3), 3-гексил (-СН(СН2СН3) (СН2СН2СНз)), 2-метил-2-пентил (-С(СН3) 2СН2СН2СН3), З-метил-2-пентил (-СН(СН3) СН(СНз) СН2СН3), 4-метил-2-пентил (-СН(СН3) СН2СН(СН3) 2), З-метил-З-пентил (-С(СН3) (СН2СН3) 2), 2-метил-З-пентил (-СН(СН2СН3) СН(СН3) 2), 2,3-диметил-2-бутил
25 (-С(СНз) 2СН(СН3) 2), 3,3-диметил-2-бутил (-СН(СН3) С(СН3) з и октил(-(СН2) 7СН3). [0019] "Алкенил" представляет собой углеводород, содержащий обычные, вторичные, третичные или циклические атомы углерода, с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е., углерод-углеродной sp2 двойной связью. Например, алкенильная группа может содержать от 2 до 20 атомов углерода {т.е., С2-С20 алкенил), от 2 до 8
30 атомов углерода {т.е., C2-Cg алкенил) или от 2 до 6 атомов углерода {т.е., С2-Сб
алкенил). Примеры подходящих алкенильных групп включают, но не ограничиваются следующими: винил (-СН=СН2), аллил (-СН2СН=СН2), циклопентил (-С5Н7) и 5-гексенил (СН2СН2СН2СН2СН=СН2).
[0020] "Алкинил" представляет собой углеводород, содержащий обычные, вторичные, третичные или циклические атомы углерода, с по меньшей мере одним сайтом ненасыщенности, т.е. углерод-углеродной тройной ^-связью. Например, алкинильная группа может содержать от 2 до 20 атомов углерода {т.е., С2-С20 алкинил), от 2 до 8 5 атомов углерода {т.е., Сг-Cg алкин,) или от 2 до 6 атомов углерода {т.е., Сг-Сб алкинил). Примеры подходящих алкинильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными: ацетиленовая группа (-С=СН), пропаргил (-СНгС=СН) и т.п. [0021] "Арил" обозначает ароматический углеводородный радикал, полученный путем удаления одного атома водорода от единственного атома углерода основной
10 ароматической системы колец. Например, арильная группа может содержать от 6 до 20 атомов углерода, от 6 до 14 атомов углерода, или от 6 до 10 атомов углерода. Типичные арильные группы включают, но не ограничиваются радикалами, полученными из бензола (например, фенил), замещенного бензола, нафталина, антрацена, бифенила и т.п. [0022] "Арилалкил" относится к ациклическому алкильному радикалу, в котором один
15 из атомов водорода, связанных с атомом углерода, обычно концевым или sp атомом
углерода, заменен арильным радикалом. Типичные арилалкильные группы включают, но не ограничены следующими: бензил, 2-фенилэтан-1-ил, нафтилметил, 2-нафтилэтан-1-ил, нафтобензил, 2-нафтофенилэтан-1-ил и т.п. Арилалкильная группа может содержать от 7 до 20 атомов углерода, например, алкильный фрагмент образован 1-6 атомами
20 углерода, а ар ильный фрагмент образован 6-14 атомами углерода.
[0023] "Карбоцикл" или"карбоциклил" относится к насыщенному (т.е., циклоалкил), частично ненасыщенному (например, циклоалкенил, циклоадкандиенил и т.д.) или ароматическому кольцу, содержащему от 3 до 7 атомов углерода в случае моноцикла, от 7 до 12 атомов углерода в случае бицикла и до 20 атомов углерода в случае моноцикла.
25 Моноциклические карбоциклы содержат от 3 до 7 атомов в кольце, чаще от 5 до 6 атомов в кольце. Бициклические карбоциклы содержат от 7 до 12 атомов в кольце, например, образующих бициклическую [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систему, или 9 или 10 атомов в кольце образующих бициклическую [5,6] или [6,6] систему, или спиро-конденсированные кольца. Неограничивающие примеры моноциклических бициклов
30 включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-З-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил и фенил. Неограничивающие примеры бициклических карбоциклов включают нафтил, тетрагидронафтален и декалин.
[0024] "Галоалкил" представляет собой алкильную группу в соответствии с приведенным выше определением, в которой один или большее число атомов водорода алкильной группы заменено на атом галогена. Алкильная часть галоалкильной группы может включать от 1 до 20 атомов углерода {т.е., С1-С20 галоалкил), от 1 до 12 атомов 5 углерода {т.е., Ci-Сц галоалкил) или от 1 до 6 атомов углерода {т.е., Ci-Сб алкил). Примеры подходящих галоалкильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными: -CF3, -CHF2, -CFH2, -CH2CF3 и т.п.
[0025] "Гетероцикл" или"гетероциклил" в настоящем тексте включает в качестве примеров, но не ограничения, гетероциклы, описанные в источнике Paquette, Leo А.;
10 Principles of Modern Heterocyclic Chemistry (W.A. Benjamin, New York, 1968), в
частности, в Главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A Series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 - наст, время), в частности, в томах 13, 14, 16, 19 и 28; ив/. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. В одном конкретном варианте реализации настоящего изобретения "гетероцикл" включает "карбоцикл", определенный
15 здесь, в котором один или большее число (например, 1, 2, 3, или 4) атомов углерода заменены гетероатомом (например, О, N или S). Термины "гетероцикл" или "гетероциклил" включают насыщенные кольца, частично ненасыщенные кольца и ароматические кольца (т.е., гетероароматические кольца).
[0026] Термин "замещенный" (содержащий заместители) применительно к алкилу, 20 алкенилу, ар илу и т.д., например, "замещенный алкил", "замещенный алкенил", "замещенный арил", соответственно, где один или более атомов водорода каждый независимо заменен заместителем, отличным от водорода. Обычные заместители включают перечисленные, но не ограничиваются ими: -X, -Rb, -ОН, =0, -ORb, -SRb, -S", -NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3, 25 -NHC(=0) Rb, -OC(=0) Rb, -NHC(=0) NRb2, -S(=0) 2-, -S(=0) 2OH, -S(=0) 2Rb, -OS(=0)
2ORb, -S(=0) 2NRb2, -S(=0) Rb, -OP(=0) (ORb) 2, -P(=0) (ORb) 2, -P(=0) (О ) 2, -P(=0) (OH) 2, -P(O) (ORb) (O ), -C(=0) Rb, -C(=0) X, -C(S) Rb, -C(O) ORb, -C(O) О , -C(S) ORb, -C(O) SRb, -C(S) SRb, -C(O) NRb2, -C(S) NRb2, -C(=NRb) NRb2, где каждый X независимо представляет собой галоген: F, CI, Вг или I; и каждый Rb независимо представляет собой 30 Н, алкил, арил, арилалкил, гетероцикл или защитную группу, или пролекарственную группу.
[0027] Термин "пролекарство" в настоящем тексте относится к любому соединению, которое при введении в биологическую систему дает лекарственное вещество, т.е. активный ингредиент, в результате спонтанной химической реакции (реакций),
катализируемой ферментом химической реакции (реакций), фотолиза и/или метаболической химической реакции (реакций). Таким образом, пролекарство представляет собой ковалентно модифицированный аналог или латентную форму терапевтически активного соединения. 5 [0028] "Защитная группа" относится к фрагменту соединения, который маскирует или изменяет свойства функциональной группы или свойства соединения в целом. Защитные группы могут сильно различаться по химической структуре. Одна из функций защитных групп - служить интермедиатом в синтезе основного лекарственного соединения. Химические защитные группы и стратегии защиты/удаления защиты хорошо известны в
10 области техники. См.: "Protective Groups in Organic Chemistry", Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991). Защитные группы часто применяются для маскирования реактивности некоторых функциональных групп с целью повешения эффективности целевых химических реакций, например, путем упорядоченного и запланированного создания и разрушения химических связей. Защита функциональных
15 групп соединения изменяет помимо реактивности другие физические свойства защищенной функциональной группы, такие как полярность, липофильность (гидрофобность) и другие свойства, которые могут быть измерены обычными аналитическими средствами. Химически защищенные промежуточные соединения могут сами по себе обладать биологической активностью, или не обладать биологической
20 активностью.
[0029] Защищенные соединения могут демонстрировать измененные, и, в некоторых случаях, оптимизированные свойства in vitro и in vivo, такие как прохождение через клеточные мембраны и устойчивость к ферментативному разрушению или секвестрации. В этом качестве защищенные соединения с целевыми терапевтическими эффектами
25 могут быть отнесены к пролекарствам. Другая функция защитной группы -
преобразовывать основное лекарственное средство в пролекарство, благодаря чему основное лекарство высвобождается после превращения пролекарства in vivo. Поскольку активные пролекарства могут всасываться более эффективно, чем основное лекарственное средство, пролекарства могут обладать более высокой эффективностью in
30 vivo, чем основное лекарственное средство. Защитные группы удаляются либо in vitro в случае химических интермедиатов, либо in vivo в случае пролекарств. В случае химических интермедиатов не особенно важно чтобы продукты, образующиеся в результате удаления защиты, например, спирты, были физиологически приемлемыми, хотя в целом предпочтительнее когда продукты фармакологически безвредны.
[0030] "Пролекарственная группа (фрагмент) " обозначает лабильную функциональную группу, которая отделается от активного ингибиторного соединения в процессе метаболизма, системно, внутри клетки, в результате гидролиза, ферментативного отщепления или какого-либо другого процесса (Bundgaard, Hans, "Design and Application 5 of Prodrugs" in Textbook of Drug Design and Development (1991), P. Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Eds. Harwood Academic Publishers, pp. 113-191). Ферменты, способные к ферментативной активации фосфонатных пролекарств, включают следующие, но не ограничиваются ими: амидазы, эстеразы, микробные ферменты, фосфолипазы, холинэстеразы и фосфатазы. Пролекарственные фрагменты могут служить для 10 повышения растворимости, всасывания и липофильности для оптимизации доставки, биодоступности и эффективности лекарственных средств. Пролекарственная группа может включать активный метаболит самого лекарственного средства. [0031] Премеры пролекарственных групп включают чувствительные к гидролизу или не
обладающие устойчивостью к гидролизу ацилоксиметиловые эфиры -СНгОС(=0) R и
30 30
15 ацилоксиметилкарбонаты -СНгОС(=0) OR , где R представляет собой Q-Сб алкил, Ci-Сб замещенный алкил, Сб-Сго арил или Сб-Сго замещенный арил. Ацилоксиалкиловые эфиры использовались в пролекарственной стратегии для карбоновых кислот, позже их применяли для фосфатов и фосфонатов, как описано в Farquhar et al., (1983) /. Pharm. Sci. 72: 324; а также в патентах США под номерами
20 4816570, 4968788, 5663159 и 5792756. В некоторых соединениях согласно настоящему изобретению пролекарственная группа представляет собой часть фосфатной группы. Ацилоксиалкиловый эфир может использоваться для доставки фосфорных кислот через клеточные мембраны и для повышения биодоступности при пероральном введении. Близкий вариант ацилоксиалкилового эфира, алкоксикарбонилоксиалкиловый эфир
25 (карбонат) в качестве пролекарственного фрагмента в соединениях комбинаций согласно настоящему изобретению возможно также повышает биодоступность при пероральном введении. Примером ацилоксиметилового эфира является пивалоилоксиметокси, (РОМ) -СНгОС(=0) С(СНз) з. Примером ацилоксиметилкарбонатной пролекарственной группы является пивалоилоксиметилкарбонат (РОС) -СНгОС(=0) ОС(СНз) з.
30 [0032] Фосфатная группа может представлять собой фосфатный пролекарственный фрагмент. Пролекарственные фрагменты могут быть чувствительными к гидролизу, например, содержавшие пивалоилоксиметилкарбонатную (РОС) группу или РОМ, но не ограничиваясь ими. В альтернативном варианте пролекарственный фрагмент может быть
чувствителен к опосредуемому ферментами отщеплению, например, такой как лактатный эфир или фосфонамид-эфирная группа.
[0033] Специалисту понятно, что заместители и другие фрагменты соединений Формулы I следует выбирать таким образом, чтобы полученное соединение было 5 достаточно стабильным для получения фармацевтически приемлемого соединения, которое можно включить в фармацевтическую композицию с приемлемой стабильностью. Соединения Формулы I, обладающие такой стабильностью, считаются включенным в объем настоящего изобретения.
[0034] Следует отметить, что настоящее изобретение охватывает все энантиомеры,
10 диастереомеры и рецемические смеси, таутомеры, полиморфы, псевдополиморфы соединений в рамках объема Формулы I и их фармацевтически приемлемые соли (а также комплексы, сокристаллы и т.д.), сольваты или эфиры. Все смеси таких энантиомеров и диастереомеров входят в объем настоящего изобретения. [0035] Соединение Формулы I и его фармацевтически приемлемые соли, сольваты или
15 эфиры могут существовать в виде различных полиморфов или псевдополиморфов. В настоящем тексте кристаллический полиморфизм обозначает способность кристаллического соединения существовать в формах с различными кристаллическими структурами. Кристаллический полиморфизм может быть обусловлен различиями в упаковке в кристаллах (полиморфизм упаковки) или различиями в упаковке между
20 разными конформационными изомерами одной и той же молекулы (конформационный полиморфизм). В настоящем тексте кристаллический псевдополиморфизм обозначает способность гидрата или сольвата соединения существовать в формах с различными кристаллическими структурами. Существование псевдополиморфов согласно настоящему изобретению обусловлено различиями в упаковке кристаллов
25 (псевдополиморфизм упаковки) или различям в упаковке между различными конформационными изомерами одной молекулы (конформационный псевдополиморфизм). Настоящее изобретение охватывает все псевдополиморфы соединений Формулы I и их фармацевтически приемлемых солей. [0036] Соединение Формулы I и его фармацевтически приемлемые соли, сольваты или
30 эфиры могут также существовать в форме аморфного твердого вещества. В настоящем тексте аморфное твердое вещество представляет собой твердое вещество, в котором отсутствует дальний порядок положений атомов твердого вещества. Это определение также применимо в случае, когда размер кристалла составляет два нанометра или меньше. Добавки, включая растворители, могут применяться для получения аморфных
форм согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение включает все аморфные формы соединений Формулы I и их фармацевтически приемлемых солей. [0037] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения соединение Формулы I представлено Формулой II:
или ее фармацевтически приемлемой солью, сольватом или эфиром; где переменные имеют значения, определенные для Формулы I. В предпочтительном варианте R1 в Формуле II представляет собой Н, R4 представляет собой NH2 или =0, и/или 10 R5 представляет собой NH2 или Н. В более предпочтительном варианте соединение
N. Р NH2
\oJ-N NH V°y^N' /
\_7 М U ^
NH2 НО" 'F
выбрано из группы, состоящей из НО F ,
NH2
НО^ 1_Х?
или их фармацевтически приемлемых солеи, сольватов или эфиров. [0038] В предпочтительном варианте реализации соединений Формулы I, R1 представляет собой Н, СН2ОН, CH2F, CHF2, СН=СН2, С=СН, CN, СН2СН=СН2, N3, СН3
15 или СН2СНз, и, в более предпочтительном варианте, R1 представляет собой Н.
[0039] В другом варианте реализации изобретения R представляет собой ОН или О-бензил, и, в более предпочтительном варианте, представляет собой ОН. [0040] В другом варианте реализации изобретения R представляет собой F или N3, и, в более предпочтительном варианте, R представляет собой F.
20 [0041] В другом предпочтительном варианте реализации R4 и R5 выбраны из Н, NH2, =0,
предпочтительном варианте R4 представляет собой =0 или NH2, и/или R5 представляет
NHMe, NHcPr, ОН, ОМе, CI, Br, I, SMe, F, N3, CN, CF3 и S02Me, и в более предпочтительном собой Н или NH2.
[0042] В другом варианте реализации R6 представляет собой Н, бензил или
-P-
2 1
где W представляет собой ОН, и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула 1а,
где:
Y представляет собой О; М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н, и, в более предпочтительном варианте, R6 представляет собой Н.
[0043] В другом варианте реализации изобретения R7 представляет собой Н или ОН, и, в более предпочтительном варианте, R7 представляет собой Н.
[0044] В других предпочтительных вариантах реализации изобретения R1 представляет
2 3
собой Н, R представляет собой ОН, и R представляет собой F. В другом
1 2
предпочтительном варианте реализации R представляет собой Н, R представляет собой ОН, R3 представляет собой F, R4 и R5 представляют собой NH2, Н или =0, и R6 и R7 являются атомами водорода.
[0045] В еще одном предпочтительном варианте реализации R1 представляет собой Н,
2 3 4
R представляет собой О-бензил или ОН, R представляет собой F, R представляет собой SMe, NH2 или =0, R5представляет собой SMe, S02Me, Н или NH2, R6 представляет собой
-р s
w1^ I
бензил или W ;
2 1
где W представляет собой ОН, и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула la,
где:
Y представляет собой О; М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н, и R7 представляет собой Н или ОН.
[0046] В некоторых других вариантах реализации изобретения R4 представляет собой
NH2, и R5 представляет собой Н, F, CI, Br, N3, CN, CF3, NH2, SMe или S02Me, или R5
представляет собой NH2 и R4 представляет собой =0, ОН, ОМе, CI, Br, I, NH2, NHMe,
NHcPr или SMe. В его предпочтительных вариантах реализации R4 и R5 оба
представляют собой NH2 или SMe, R5 представляет собой Н, или R4 представляет собой
=0.
[0047] В другом варианте реализации настоящего изобретения R1 представляет собой Н,
2 3 4
R представляет собой О-бензил, R представляет собой F, R представляет собой SMe, NH2, ОМе или ОСН2СН3, R5 представляет собой Н, SMe, S02Me, NH2, N3 или F, R6 представляет собой бензил, и R7 представляет собой Н или ОН.
[0048] В предпочтительном варианте реализации изобретения соединение Формулы I представляет собой:
нс? \ , не? \ , или его фармацевтически приемлемую
5 соль, сольват или эфир.
приемлемую соль, сольват или эфир.
[0050] В еще одном предпочтительном варианте реализации изобретения Формулы I 5 представляет собой:
эфир.
[0051] В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к соединениям Формулы III:
где
R представляет собой NH2, ОМе, ОСН2СН3 или =0 и R9 представляет собой NH2, Н или F,
или их фармацевтически приемлемым солям, сольватам или эфирам.
фармацевтически приемлемых солей, сольватов или эфиров указанных соединений. В
[0052] В предпочтительном варианте соединение Формулы III выбрано из группы,
более предпочтительном варианте соединение Формулы III выбрано из группы,
NH2
Hd F
VJ N= <
IH2 HON 'F '"V Hd F
состоящей из ни h , и или
фармацевтически приемлемых солей, сольватов или эфиров указанных соединений.
[0053] Второй вариант реализации настоящего изобретения относится к
фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество
соединения Формулы I в соответствии с определением для первого варианта реализации
и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. В конкретном
варианте реализации соединение Формулы I представлено Формулой II или формулой III
в соответствии с определениями для первого варианта реализации. Термины,
используемые во втором варианте реализации изобретения, определены выше
применительно к первому варианту реализации. Предпочтительные варианты
1 2 3 4 5 6 7
реализации R , R , R , R ' R , R hR во втором варианте реализации изобретения совпадают с предпочтительными вариантами для первого варианта реализации изобретения.
[0054] В предпочтительном варианте реализации второго варианте реализации изобретения соединение Формулы I представляет собой:
NH2
но^ i ул
\_J n= < U N= Hd F
NH2 N
N SMe
BnO F
N SQ2Me
NH,
NH2 N
BnO
BnO
BnO
но* "F , или фармацевтически приемлемая соль, сольват или эфир такого
5 соединения, и в более предпочтительном случае представляет собой
фармацевтически приемлемую соль, сольват или эфир.
[0055] В другом предпочтительном варианте реализации изобретения соединение Формулы I представляет собой:
такого соединения.
[0056] Термины "фармацевтическая композиция" и "фармацевтический состав" используются в настоящем тексте взаимозаменяемо. Фармацевтические композиции
10 согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены с использованием любых
обычных носителей и вспомогательных веществ, которые будут выбраны в соответствии с обычной практикой. Таблетки могут содержать вспомогательные вещества, вещества, обеспечивающие скольжение, наполнители, связующие и т.п. Водные фармацевтические
составы готовят в стерильной форме и, в случае если они предназначены для введения путем, отличным от перорального, они обычно являются изотоническими. Все фармацевтические составы обычно содержат вспомогательные вещества, такие как описанные в "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986). Подходящие 5 вспомогательные вещества включают, но не ограничены перечисленными: аскорбиновая кислота и другие антиоксиданты, хелатирующие агенты, такие как ЭДТА, углеводороды, такие как декстран, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметилцеллюлоза, стеариновая кислота и т.д. рН фармацевтических составов в предпочтительном случае лежит в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 11, и в более
10 предпочтительном случае, от приблизительно 7 до приблизительно 10.
[0057] Хотя активные ингредиенты могут быть введены отдельно, может быть предпочтительно представить их в форме фармацевтических составов. Фармацевтические составы, как для ветеринарного, так и для медицинаского (для лечения людей) применения, согласно настоящему содержит по меньшей мере один
15 активный ингредиент, определенный выше, совместно с одним или большим числом носителей или вспомогательных вещества с возможно дополнительными терапевтическими агентами.
[0058] "Терапевтически эффективное количество" или "эффективная доза" используются в настоящем тексте взаимозаменяемо и означают количество активного
20 ингредиента, необходимое для достижения желаемого результата. Эффективная доза активного ингредиента зависит, по меньшей мере, от природы заболевания, которое лечат, токсичности, того, используется ли соединение в целях профилактики (более низкие дозы) или для борьбы с активной вирусной инфекцией, способа доставки и фармацевтического состава, и может быть легко определена клиницистом с
25 использованием обычных исследований с эскалацией дозы. Эффективное количество может составлять от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в день; в предпочтительном случает от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг массы тела в день; в более предпочтительном варианте от приблизительно.,01 до приблизительно 5 мг/кг массы тела в день; и в наиболее предпочтительном варианте от
30 приблизительно 0,05 до приблизительно 0,5 мг/кг массы тела в день. Например,
предполагаемая доза для взрослого человека с массой тела приблизительно 70 кг может лежать в диапазоне от приблизительно 1 мг до приблизительно 1000 мг, в предпочтительном варианте от приблизительно 5 мг до 500 мг, и может быть выполнено в однодозовой или многодозовой форме.
[0059] В другом варианте реализации фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или большее число дополнительных терапевтических агентов. Дополнительный терапевтический агент может представлять собой другое соединение Формулы I или любой другой терапевтический агент, подходящий для применения с 5 соединением Формулы I. Например, дополнительный терапевтический агент может быть выбран из группы, состоящей из кортикостероида, противовоспалительного модулятора передачи сигнала, бронходилататора, представляющего собой агонист |32-адренорецептора, антихолинергического средства, муколитического агента, гипертонического раствора, агента, который подавляет миграцию провоспалительных
10 клеток в участок инфицирования и их смесей. Дополнительный терапевтический агент может также включать другие лекарственные средства для лечения инфекций, вызванных вирусом из семейства Orthomyxoviridae. В других вариантах реализации дополнительный терапевтический агент может представлять собой ингибиторы вирусного гемагглютинина, ингибиторы вирусной нейрамидазы, блокаторы ионных
15 каналов М2, ингибиторы РНК-зависимых РНК-полимераз ортомиксовирусов, сиалидазы и другие лекарственные средства для лечения ортомиксовирусных инфекций. В еще одном варианте реализации дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон, рибавирин, озельтамивир, занамивир, ланинамивир, перамивир, амантадин, римантадин, CS-8958, фавипиравир, AVI-7100, ингибитор альфа-1 протеазы или
20 DAS181.
[0060] В некоторых других вариантах реализации изобретения ортомиксовирусная инфекция, которую лечат с использованием фармацевтической композиции, вызвана вирусом гриппа А, вирусом гриппа В или вирусом гриппа С.
[0061] Фармацевтические композиции включают композиции, подходящие для пути 25 введения, соответствующего заболеванию, которое лечат. Подходящие пути включают пероральный, ингаляционный, ректальный, назальный, топический (включая буккальный и сублингвальный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный) и т.п. Понятно, что предпочтительный путь введения может варьировать, например, в 30 зависимости от состояния реципиента.
[0062] Фармацевтические композиции могут быть представлены в удобной дозированной лекарственной форме и могут быть приготовлены способом, известным в области фармацевтики. Общее описание методик фармацевтических композиций можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Такие
методы включают объединение активного ингредиента с носителем, содержащим один или большее число вспомогательных ингредиентов. Обычно фармацевтические композиции готовят путем однородного и тщательного объединения активного ингредиента с жидкими носителями или мелкодисперсными твердыми носителями, или с 5 носителями обоих видов, с последующим формованием продукта в случае необходимости.
[0063] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, саше или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное 10 количество активного ингредиента, в форме порошков или гранул, в форме раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа "масло в воде" или жидкой эмульсии типа "водя в масле". Активный ингредиент также может быть введен в форме болюса, электуария или пасты.
[0064] Таблетку изготавливают путем прессования или формования, возможно с одним
15 или большим числом вспомогательных ингредиентов. Прессованные таблетки могут
быть получены путем прессования в подходящем устройствеа сыпучей формы, такой как порошки или гранулы, возможно смешанной со связующим, лубрикантом, инертным разбавителем, поверхностно-активным веществом или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в подходящем
20 устройстве смеси активного ингредиента в форме порошка, смоченного инертным
жидким разбавителем. Таблетки необязательно могут быть снабжены покрытием или отметками и могут быть изготовлены таким образом, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента из таблетки. [0065] Для инфекций глаза и других наружных тканей, например, рта и кожи,
25 фармацевтические композиции в предпочтительном варианте применяют в качестве топической мази или крема, содержащих активный ингредиент (ы) в количестве например, от 0,075 до 20% масс/масс, (включая активный ингредиент(ы) в диапазоне от 0,1% до 20% с шагом 0,1% масс/масс, например 0,6% масс/масс, 0,7% масс/масс, и т.д.), в предпочтительном случае от 0,2 до 15% масс/масс, и в наиболее
30 предпочтительном случае от 0,5 до 10% масс/масс. В случае изготовления в форме мази активные ингредиенты могут применяться с парафиновой или смешиваемой с водой основой для мази. В альтернативном варианте активные ингредиенты могут быть изготовлены в форме крема с основой для крема типа "масло-в-воде".
[0066] При желании водная фаза основы для крема может включать например, по меньшей мере 30% масс/масс, многоатомного спирта, т.е. спирта, содержащего две или больше гидроксильных групп, такого как пропиленгликоль, бутан 1,3-диол, маннитол, морбит, глицерин и полиэтилегликоль (включая PEG 400) и их смеси. Топические 5 фармацевтические композиции желательно, но не обязательно, содержат соединение,
которое повышает впитываемость или проникновение активного ингредиента через кожу или в других пораженных участках. Примеры таких веществ, улучшающих проникновение через кожу, включают диметилсульфоксид и близкие аналоги. [0067] Масляная фаза эмульсий согласно настоящему изобретению может быть
10 приготовлена из известных ингредиентов известным образом. Хотя эта фаза может состоять исключительно из эмульгатора (называемого также эмульгентом), она в предпочтительном случае включает смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или и с жиром, и с маслом. В предпочтительном случае гидрофильный эмульгатор применяют совместно с липофильным эмульгатором, который действует как
15 стабилизатор. Также предпочтительно включать и масло, и жир. Совместно, эмульгатор (ы) со стабилизатором (ами) составляют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и жиром составляет так называемую эмульгирующую основу для мази, которая образует масляную диспергирующую фазу фармацевтических композиций в форме крема.
20 [0068] Эмульгенты и стабилизаторы эмульсии для применения в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются
перечисленными: Tween(r) 60, Span(r) 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт,
миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.
[0069] Выбор подходящих масел или жиров для фармацевтической композиции основан
25 на достижении желаемых косметических свойств. В предпочтительном случае крем будет нежирным, не пачкающимся и смываемым продуктом, консистенция которого предотвращает вытекание из тюбиков и других контейнеров. Могут использоваться эфиры с линейной или разветвленной цепью, моно- или диосновные эфиры, такие как диизоадипат, изоцетилстеарат, пропиленгликолевый диэфир или кокосовые жирные
30 кислоты, изопропил миристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат 2-
этилгексил пальмитат или смесь эфиров с разветвленной цепью, известная как Crodamol САР, предпочтительными являются последние три эфира. Их можно использовать отдельно или в комбинации, в зависимости от желаемых свойств. В альтернативном
варианте можно применять липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин и другие минеральные масла. [0070] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат комбинацию согласно настоящему изобретению совместно с одним или большим числом 5 фармацевтически приемлемых носителе или вспомогательных веществ и возможно дополнительными терапевтическими агентами. Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть выполнены в форме, подходящей для предполагаемого пути введения. В случае применения для перорального применения, например, могут быть приготовлены таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные
10 суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие
капсулы, сиропы или эликсиры. Фармацевтические композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть изготовлены в соответствии с любым известным в технике способом изготовления фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или большее число агентов, включая подсластители,
15 вкусоароматические агенты, красители и консерванты, для обеспечения приемлемого состава. Таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемым наполнителем, которые подходят для производства таблеток, являются приемлемыми. Эти вспомогательные вещества могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как кальций или карбонат натрия,
20 лактоза, кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без покрытия или могут быть снабжены покрытием известными способами, включая микроинкапсулирование, что
25 позволяет задержать дезинтеграцию и всасывание в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, можно применять задерживающий материал, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат отдельно или с воском.
[0071] Фармацевтические композиции для перорального применения могут также быть 30 представлены в твердых желатиновых капсулах, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например, фосфатом кальция или каолином, или в мягких желатиновых капсулах, в которых активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, такой как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.
[0072] Водные суспензии согласно настоящему изобретению содержат активные материалы в смеси с вспомогательными веществами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие вспомогательные вещества включают суспендирующий агент, такой как карбоксиметилцеллюлоза натрий, метилцеллюлоза, 5 гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камеди и гуммиарабик, а также диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природный фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации алкиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, 10 гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации алкиленоксида с неполным эфиром, образованным жирной кислотой и ангидридом гексита (например,
полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия может также содержать один или большее число консервантов, таких как этил- или н-пропил п-гидрокси-бензоат, один или большее число красителей, один или большее число вкусоароматических веществ и
15 один или большее число подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
[0073] Масляные суспензии могут быть получены путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или какао-масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Суспензии для перорального применения могут содержать загуститель, такой
20 как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители, такие как описаны выше, могут быть добавлены для получения композиции, приемлемой для перорального применения. Консервация этих композиций может достигаться путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота. [0074] Диспергируемые порошки и гранулы согласно настоящему изобретению,
25 подходящие для приготовления водной суспензии путем добавления воды, содержат активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом и одним или большим числом консервантов. Примеры подходящих диспергирующих или смечивающих агентов приведены выше. Также могут присутствовать дополнительные вспомогательные вещества, например подсластители, пищевкусовые вещества и
30 красители.
[0075] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут иметь форму эмульсий типа масло в воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, такое как жидкий парафин, или их смеси. Подходящие эмульгирующие агенты
включают природные камеди, такие как гуммиарабик и трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как лецитин соевых бобов, эфиры или неполные эфиры, образованные жирными кислотами и ангидридами гекситов, такие как сорбитанмоноолеат, и продукты конденсации этих неполных эфиров с оксидом этилена, 5 такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсия может также содержать подсластители и вкусоароматические агенты. Сиропы и эликсиры могут быть изготовлены с подсластителями, такими как глицерин, сорбит или сахароза. Такие фармацевтические композиции могут также содержать мягчительное средство, консервант и вкусоароматический агент или краситель.
10 [0076] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут иметь форму стерильного состава для инъекций, таких как водная или масляная суспензия для инъекций. Суспензия может быть изготовлена известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов, упоминавшийся выше. Стерильный состав для инъекций может представлять собой стерильный раствор или
15 суспензию для инъекций в нетоксичном подходящем для парентерального введения разбавителя или растворителя, такого как раствор в 1,3-бутандиола, или быть приготовлен в форме лиофилизированного порошка. Приемлемые носители и растворители, которые можно применять, включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, обычно можно применять
20 стерильные нелетучие масла в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели может использоваться любое нелетучее мелкодисперсное масло, включая синтетические моно- и диглицериды. Кроме того, аналогичным образом в приготовлении составов для инъекций могут применяться жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
25 [0077] Количество активного ингредиента, которое может быть смешано с основой, например, для получения дозированной лекарственной формы, будет различным в зависимости от реципиента лечения и конкретного пути введения. Например, фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, предназначенная для перорального введения человеку, может содержать от приблизительно 1 до
30 приблизительно 1000 мг активного ингредиента, объединенного с соответствующим и удобным количеством основы, которое может лежать в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 95% всей композиции (масс.:масс). Может быть приготовлена фармацевтическая композиция, обеспечивающая легко измеримые количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенного вливания
может содержать от приблизительно 3 до приблизительно 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора, что позволяет достичь скорости вливания приблизительно 30 мл/ч.
[0078] Фармацевтические композиции, подходящие для топического введения в глаз 5 также включают глазные капли, в которых активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в частности, в водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент присутствует в таких фармацевтических композициях предпочтительно в концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 20% масс/масс.
10 [0079] Фармацевтические композиции, подходящие для топического введения в рот включают лепешки, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно сахарозе, и гуммиарабике или трагакантовой камеди; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и гуммиарабик; и полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем
15 жидком носителе.
[0080] Фармацевтические композиции для ректального введения могут быть представлены в виде суппозитория с подходящей основой, содержащей, например, какао-масло или салицилат.
[0081] Фармацевтические композиции, подходящие для внутрилегочного или 20 назального введения характеризуются размером частиц, например, в диапазоне от
приблизительно 0,1 до приблизительно 500 микрон, например, от приблизительно 0,5, приблизительно 1, приблизительно 30, приблизительно 35 и т.д., которые вводят путем быстрого вдыхания через носовые ходы или путем вдыхания через рот для достижения альвеолярных мешков. Подходящие фармацевтические композиции включают водные 25 или масляные растворы активного ингредиента. Фармацевтические композиции,
подходящие для введения в форме аэрозоля или сухого порошка, можно приготовить в соответствии с обычными методами и могут доставляться с дополнительными терапевтическими агентами, такими как соединения, описанные выше, для лечения или профилактики ортомиксовирусных инфекций, описанных ниже. 30 [0082] В другом аспекте настоящее изобретение представляет собой новую, эффективную, безопасную, нераздражающую и физиологически совместимую композицию для ингаляций, содержащую соединение Формулы I, II или его фармацевтически приемлемую соль, подходящую для лечения ортомиксовирусных инфекций и, потенциально, сопутствующего бронхиолита. Предпочтительные
фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли неорганических кислот, включая гидрохлорид, гидробромид, сульфат и фосфат, поскольку вызываемое ими раздражение легких может быть меньше. В предпочтительном варианте фармацевтическую композицию для ингаляций вводят в эндобронхиалдьное 5 пространство в аэрозоле с масс-медианным аэродинамическим диаметром (MMAD) в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм. В предпочтительно варианте соединение Формулы I изготовлено в форме для аэрозольной доставки с использованием небулайзера, нагнетательного дозирующего ингалятора (pMDI) или ингалятора для доставки сухого порошка (DPI).
10 [0083] Неограничивающие примеры небулайзеров включают атомизирующие,
струйные, ультразвуковые, нагнетательные небулайзеры, небулайзеры с вибрирующей пористой пластинкой или эквивалентные небулайзеры, включающие небулайзеры использующие адаптированную технологию доставки аэрозоля (Denyer, /. Aerosol Medicine Pulmonary Drug Delivery 2010, 23 Supp 1, S1-S10). В струйных небулайзерах
15 поток воздуха используется для превращения жидкого раствора в капельки аэрозоля Ультразвуковой небулайзер работает за счет пьезоэлектрического кристалла, который разделяет жидкость на маленькие капельки аэрозоля за счет сдвига. Нагнетательная небулайзерная система нагнетает раствор под давлением через маленькие поры, в результате чего образуются капельки аэрозоля. В устройстве с вибрирующей пористой
20 пластиной высокочастотная вибрация используется для разделения потока жидкости сдвигом на капельки подходящего размера.
[0084] В предпочтительном варианте реализации фармацевтическую композицию для распыления (орошения) доставляют в эндобронхиальное пространство в аэрозоле, содержащем частицы с масс-медиальным аэродинамическим диаметром (MMAD)
25 преимущественно в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм с использованием небулайзера, который позволяет фармацевтические композиции соединения Формулы I предположить в состояние аэрозоля с частицы с необходимым MMAD. Для обеспечения оптимальной терапевтической эффективности и устранения побочных эффектов в отношении верхних дыхательных путей и системных побочных
30 эффектов, MMAD большей части частиц в аэрозоле не должен превышать 5 мкм, поскольку оседание частиц в верхних дыхательных путях снижает доставку лекарственного средства в очаг воспаления или сужения бронхов в нижних дыхательных путях. Если MMAD аэрозоля меньше 1 мкм частицы склонны оставаться в
суспендированном состоянии во вдыхаемом воздухе и, соответственно, выводятся наружу при выдохе.
[0085] В случае изготовления и доставки в соответствии со способом согласно настоящему изобретению, фармацевтическая композиция в форме аэрозоля для 5 распыления обеспечивает доставку терапевтически эффективной дозы соединения Формулы I в очаг ортомиксовирусной инфекции, достаточной для лечения ортомиксовирусной инфекции. Вводимое количество лекарственного средства следует корректировать в соответствии с доставкой терапевтически эффективной дозы соединения Формулы I. В предпочтительном варианте реализации комбинация водной
10 фармацевтической композиции в форме аэрозоля в комбинации с атомизирующей, разбрызгивающей, нагнетающей, вибрирующей пористой платформой или ультразвуковым небулайзером обеспечивает, в зависимости от небулайзера, доставку приблизительно от по меньшей мере 20 до по меньшей мере 90%, обычно приблизительно 70% введенной дозы соединения Формулы I, II или Ш в дыхательные
15 пути. В предпочтительном варианте реализации обеспечивается доставка по меньшей мере приблизительно 30 до приблизительно 50% активного ингредиента. В более предпочтительном варианте обеспечивается доставка от приблизительно 70 до приблизительно 90% активного ингредиента.
[0086] В другом варианте реализации настоящего изобретения соединение Формулы I 20 или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в форме ингаляционного
порошка. Соединения согласно настоящему изобретению вводят эндобронхиальным путем в виде фармацевтической композиции в форме сухого порошка для эффективной доставки мелкодисперсных частиц соединения в эндобронхиальное пространство с использованием сухого порошка или дозирующего ингалятора. Для доставки с 25 использованием порошкового ингалятора соединение Формулы I перерабатывают в
частицы со среднемассовым аэродинамическим диаметром (MMAD) преимущественно в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм путем измельчения и сушки распылением, обработки критической жидкости или осаждения из раствора. Устройства для мокрого размола, размола на стройной мельнице и сушки распылением, 30 а также процедуры, позволяющие получать размер частиц с MMAD в диапазоне от
приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм, хорошо известны в технике. В одном варианте реализации к соединению Формулы I добавляют вспомогательные вещества перед переработкой в частицы необходимого размера. В другом варианте реализации вспомогательные вещества смешивают с частицами необходимого размера для
диспергирования частиц лекарственного средства, например, с использованием лактозы в качестве вспомогательного вещества.
[0087] Определение размера частиц осуществляют с использованием известных в области техники устройств. Например, мультистадийный каскадный импактор 5 Андерсона или другие способы, конкретно указанные в Главе 601 Фармакопеи США в качестве аналитических устройств для аэрозолей в дозирующих ингаляторах или порошковых ингаляторах.
[0088] В другом предпочтительном варианте реализации соединение Формулы I доставляют в форме сухого порошка с использованием устройства, какого как
10 порошковый ингалятор или другого устройства для порошкового ингалятора или других устройств для дозирования сухого порошка. Неограничивающие примеры порошковых ингаляторов и устройств включают устройства, раскрытые в US5,458,135; US5,740,794; US5775320; US5,785,049; US3,906,950; US4,013,075; US4,069,819; US4,995,385; US5,522,385; US4,668,218; US4,667,668; US4,805,811 и US5,388,572. Существует две
15 основные конфигурации порошковых ингаляторов. Одна конфигурация представляет собой дозирующее устройство, в котором резервуар для лекарственного средства находится внутри устройства и пациент добавляет дозу лекарственного средства в ингаляционную камеру. Вторая конфигурация представляет собой устройство с отмеренными на заводе дозами, в котором каждая отдельная доза заключена при
20 производстве в отдельный контейнер. Обе системы основаны на преобразовании
фармацевтической композиции лекарственного средства в мелкие частицы с MMAD от 1 мкм до приблизительно 5 мкм, и часто изготавливают совместно со вспомогательными частицами более крупного размера, такими как лактоза, но не ограничиваясь лактозой. Лекарственный порошок помещают в ингаляционную камеру (либо при помощи
25 дозирования устройством, либо путем нарушения целостности упаковки дозировки,
отмеренной на фабрике) и частицы устремляются из устройства в ротовую полость под действием потока инспирации пациента. Неламинарные характеристики потока движения порошка обуславливают разрушение агрегатов лекарственное средство-вспомогательное вещество, крупные вспомогательные частицы большей массы
30 прижимаются к задней стенке горла, в то время как более мелкие частицы
лекарственного средств располагаются глубоко в легких. В предпочтительных вариантах реализации соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в виде сухого порошка с использованием любого типа порошкового ингалятора, описанного здесь, при этом MMAD сухого порошка, за исключением всех
вспомогательных веществ, в основном лежит в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм.
[0089] В другом предпочтительном варианте реализации соединение Формулы I доставляют в форме сухого порошка с использованием ингалятора с отмеренными 5 дозами. Неограничивающие примеры ингаляторов с отмеренными дозами включают устройства, описанные в US5,261,538; US5,544,647; US5,622,163; US4,955,371; US3,565,070; US3,361306 и US6,116,234. В предпочтительных вариантах реализации соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в форме сухого порошка с использованием ингалятора с отмеренными дозами, при этом MMAD 10 сухого порошка, за исключением всех вспомогательных веществ, в основном лежит в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм.
[0090] Фармацевтические композиции, подходящие для вагинального введения могут быть представлены в виде фармацевтических композиций в форме пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст или спреев, содержащих в дополнение к активному ингредиенту
15 основы, которые в данной области техники известны как подходящие.
[0091] Фармацевтические композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые обеспечивают фармацевтической композиции изотоничность с кровью предполагаемого
20 реципиента, водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.
[0092] Фармацевтические композиции представлены в контейнерах, содержащих одну дозу или несколько доз, например в запаянных ампулах или виалах, и могут храниться в лиофилизированном состоянии (достигаемом сублимационной сушкой) и требуют
25 только добавления стерильной жидкой основы, например, воды для инъекций,
непосредственно перед применением. Экстемпоральные растворы и суспензии для инъекций готовят из стерильных порошков, гранул и таблеток, описанного выше типа. Предпочтительными дозированными фармацевтическими композициями являются композиции, содержащие дневную дозу или часть дневной дозы активного ингредиента,
30 описанной выше, или подходящую часть такой дозы.
[0093] Понятно, что в дополнение к конкретно указанным выше ингредиентам фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут включать другие агенты, обычно применяемые в этой области для рассматриваемого типа
фармацевтической композиции, например, агенты, подходящие для перорально применения, могут включать вкусоароматические агенты.
[0094] Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный ингредиент, как описано выше, вместе с 5 ветеринарным носителем для него.
[0095] Ветеринарные носители и материалы, подходящие для введения композиции, могут быть твердыми, жидкими или газообразными материалами, которые являются в остальном инертными или подходящими для применения в ветеринарии и совместимы а активным ингредиентом. Ветеринарные композиции могут вводиться перорально,
10 парентерально или любым другим желаемым путем.
[0096] Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для получения фармацевтических композиций с контролируемым высвобождением, содержащих в качестве активного ингредиента одно или большее число соединений согласно настоящему изобретению ("препаратов с контролируемым высвобождением"), в которых
15 контроль и регуляция высвобождения активного ингредиента обеспечивает возможность менее частого введения или улучшение профиля фармакокинетики или токсичности данного активного ингредиента.
[0097] В другом варианте реализации в настоящей заявке раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно настоящему изобретению или его 20 фармацевтически приемлемую соль, сольват или эфир в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом и фармацевтически приемлемую основу или наполнитель.
[0098] Для лечения инфекций, вызванных вирусом семейства Orthomyxoviridae, дополнительный терапевтический агент предпочтительно обладает активностью против
25 инфекций, вызванных вирусом семейства Orthomyxoviridae, в частности инфекций, вызванной вирусом гриппа. Примерами таких активных терапевтических агентов являются ингибиторы вирусного гемагглютинина, ингибиторы вирусной нейрамидазы, ингибиторы каналов ионов М , ингибиторы РНК-зависимой РНК-полимеразы ортомиксовирусов и сиалидазы, но не ограничиваются ими. Примеры ингибиторов
30 нейрамидазы включают озельтамивир, занамивир, ланинамивир, перамивир и CS-8958, но не ограничиваются ими. Примеры ингибиторов вирусных каналов М2 включают амантадин и римантадин, но не ограничиваются ими. Примеры ингибиторов РНК-зависимой РНК-полимеразы ортомиксовирусов включают рибавирин и фавипиравир, но не ограничиваются ими. Примеры сиалидаз включают DAS181, но не ограничиваются
ей. В другом варианте реализации указанный дополнительный терапевтический агент выбран их группы, включающей рибавирин, озельтамивир, занамивир, ланинамивир, перамивир, амантадин, римантадин, CS-8958, фавипиравир, AVI-7100, ингибитор альфа-1 протеазы и DAS181.
5 [0099] Большинство инфекций, вызываемых вирусами семейства Orthomyxoviridae, являются респираторными инфекциями. Поэтому дополнительный активный терапевтический агент, используемый для лечения респираторных симптомов и последствий инфекции, может быть использован в комбинации с соединениями Формулы I, II или III. Например, другие предпочтительные дополнительные 10 терапевтические агенты для использования в комбинации с соединениями Формулы I, II или III для лечения вирусных респираторных инфекций включают бронходилататоры и кортикостероида, но не ограничиваются ими.
[00100] Глюкокортикоиды, которые впервые были введены в оборот для лечения астмы в 1950 (Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950), остаются наиболее
15 сильнодействующим и стабильно эффективным терапевтическим средством для этого заболевания, хотя механизм их действия ещё недостаточно полно изучен (Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985). К сожалению, пероральные глюкокортикоидные терапии ассоциированы с выраженными нежелательными побочными эффектами, такими как ожирение туловища, гипертензия, глаукома,
20 непереносимость глюкозы, ускорение формирования катаракты, утрату минералов костей, и психологические эффекты, все из которых ограничивают их применение в качестве терапевтических агентов для длительного применения (Goodman and Gilman, 10-е издание, 2001). Решением проблемы системных побочных эффектов является разработка стероидных лекарств непосредственно к месту воспаления. Кортикостероиды
25 для ингаляции (ICS) были разработаны для снижения сильных побочных эффектов стероидов для орального применения. Примерами кортикостероидов, которые могут быть использованы в комбинациях с соединениями Формулы I, являются дексаметазон, дексаметазона фосфат натрия, фторметолон, фторметолона ацетат, лотепреднол, лотепреднола этабонат, гидрокортизон, преднизолон, флудрокортизоны, триамцинолон,
30 триамцинолона ацетонид, бетаметазон, беклометазона дипропионат, метилпреднизолон, флуоцинолон, флуоцинолона ацетонид, флунизолид, флуокортин-21-бутилат, флуметазон, флуметазона пивалат, будесонит, галобетазол пропионат, мометазон фуроат, флутиказон пропионат, циклесонид; или их фармацевтически приемлемые соли, но не ограничиваются ими.
[00101] Другие противовоспалительные агенты, действующие по механизму противовоспалительного каскада, также являются подходящие в качестве дополнительных терапевтических агентов в комбинации с соединениями Формулы I для лечения вирусных респираторных инфекций. Применение "модуляторов передачи 5 противовоспалительных сигналов" (обозначенных в настоящем тексте как AISTM), таких как ингибиторы фосфодиэстераз (например, специфичных к ФДЭ-4, ФДЭ-5, или ФДЭ-7), ингибиторы факторов транскрипции (например, блокирующие NFKB посредством ингибирования IKK), или ингибиторы киназ (например, блокирующие Р38 MAP, JNK, PI3K, EGFR или Syk) является логическим подходом к подавлению 10 воспаления, поскольку эти малые молекулы оказывают влияние на ограниченное количество общих внутриклеточных путей - тех путей передачи сигнала, которые являются критическими для противовоспалительной терапевтической интервенции (см, обзор P.J. Barnes, 2006). Такие дополнительные терапевтические агенты включают: 5-(2,4-Дифторфенокси) -1-изобутил-1Н-индазол-6-карбоновой кислоты (215 диметиламиноэтил) амид (ARRY-797, ингибитор киназы Р38 Map) ; 3-
Циклопропилметокси-гЧ-(3,5-дихлорпиридин-4-ил) -4-дифторметоксибензамид (Рофлумиласт, ингибитор ФДЭ-4) ; 4-[2-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил) -2-фенилэтил]-пиридин (CDP-840, ингибитор ФДЭ-4) ; гЧ-(3,5-дихлор-4-пиридинил) -4-(дифторметокси) -8-[(метилсульфонил) амино]-1-дибензофуранкарбоксамид 20 (Оглемиласт, ингибитор ФДЭ-4) ; К-(3,5-Дихлорпиридинил-4-ил) -2-[1-(4-фторбензил) -5-гидрокси-1Н-индол-3-ил]-2-оксо-ацетамид (AWD 12-281, ингибитор ФДЭ-4) ; 8-Метокси-2-трифторметилхинолин-5-карбоновой кислоты (3,5-дихлор-1-оксипиридин-4-ил) -амид (Sch 351591, ингибитор ФДЭ-4) ; 4-[5-(4-Фторфенил) -2-(4-метансульфинилфенил) -1Н-имидазол-4-ил]-пиридин (SB-203850, ингибитор Р38) ; 4-[4-25 (4-Фторфенил) -1-(3-фенилпропил) -5-пиридин-4-ил-1Н-имидазол-2-ил]-бут-3-ин-1-ол (RWJ-67657, ингибитор Р38) ; 4-Циано-4-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил) -циклогексанкарбоновой кислоты 2-диэтиламиноэтиловый эфир (2-диэтил-этиловое эфирное пролекарство Циломиласта, ингибитора ФДЭ-4) ; (З-Хлор-4-фторфенил) -[7-метокси-6-(3-морфолин-4-ил-пропокси) -хиназолин-4-ил]-амин (Гефитиниб, ингибитор 30 рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) ; и 4-(4-Метил-пиперазин-1-илметил) -гЧ-[4-метил-3-(4-пиридин-3-ил-пиримидин-2-иламино) -фенил]-бензамид (Иматиниб, ингибитор EGFR), но не ограничиваются ими.
[00102] Агенты, которые ингибируют миграцию провоспалительных клеток к месту инфекции также являются пригодными в качестве дополнительных терапевтических
агентов в комбинации с соединениями Формулы I для лечения вирусных респираторных инфекций. Примерами таких агентов, которые действуют посредством этого механизма и применимость которых показана на животных, например, при снижении конечной смертности, обусловленной гриппом, являются EV-077 (двойной ингибитор 5 тромбоксансинтазы / антагонист рецептора тромбоксана) и Финголимод(r) (антагонист сфингозин-1-фосфатного рецептора), но не ограничиваются ими. [00103] Комбинации, включающие ингаляционные бронхорасширители на основе агонистов р2-адренорецепторов, такие как формотерол, альбутерол или салметерол, с соединениями Формулы I также являются комбинациями, приемлемыми для лечения
10 респираторных вирусных инфекций, но круг таких комбинаций не ограничен ими. [00104] Комбинации ингаляционных бронхорасширителей на основе агонистов Р 2-адренорецепторов, таких как формотерол или салметерол, с кортикостероидами для ингаляций (ICS) также используются для лечения как бронхостеноза, так и воспаления (Симбикорт(r) и Адваир(r), соответственно). Комбинации, включающие комбинации этих
15 ICS и агонистов р2-адренорецепторов вместе с соединениями Формулы I, также являются комбинациями, приемлемыми для лечения респираторных вирусных инфекций, но круг таких комбинаций не ограничен ими.
[00105] Для лечения и профилактики лёгочного бронхостеноза подходящими являются антихолинергические средства и, поэтому, они пригодны в качестве дополнительных
20 терапевтических агентов в комбинации с соединениями Формулы I для лечения
вирусных респираторных инфекций. К таким антихолинергическим средствам относятся антагонисты мускаринового рецептора (в частности подтипа МЗ), которые продемонстрировали терапевтическую эффективность на людях для контроля холинэргического тонуса при ХОЛЗ (Witek, 1999) ; 1-{4-Гидрокси-1-[3,3,3-трис-(4-
25 фторфенил) -пропионил]-пирролидин-2-карбонил}-пиррлидин-2-карбоновой кислоты (1-метилпиперидин-4-илметил) амид; 3-[3-(2-Диэтиламино-ацетокси) -2-фенилпропионилокси]-8-изопропил-8-метил-8-азоний-бицикло[3,2,1]остан (Ипратропий-гЧ,гЧ-диэтилглицинат) ; 1-Циклогексил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 1-аза-бицикло[2,2,2]окт-3-иловый эфир (Солифенацин) ; 2-Гидроксиметил-4-
30 метансульфинил-2-фенилмасляной кислоты 1-аза-бицикло[2,2,2]окт-3-иловый эфир (Реватропат); 2-{ 1-[2-(2,3-Дигидробензофуран-5-ил) -этил]-пирролидин-3-ил}-2,2-дифенилацетамид (Дарифенацин); 4-Азепан-1-ил-2,2-дифенилбутирамид (Бузепид); 7-[3-(2-Диэтиламиноацетокси) -2-фенилпропионилокси]-9-этил-9-метил-3-окса-9-азоний-трицикло[3,3,1,02,4]нонан (Окситропий-гЧ,гЧ-диэтилглицинат) ; 7-[2-(2-
Диэтиламиноацетокси) -2,2-ди-тиофен-2-ил-ацетокси]-9,9-диметил-3-окса-9-азоний-трицикло[3,3,1,02,4]нонан (Тиотропий-гЧ,гЧ-диэтилглицинат); Диметиламиноуксусной кислоты 2-(3-дииэопропиламино-1-фенил-пропил) -4-метил-фениловый эфир (Толотеродин-гЧ,гЧ-диметилглицинат); 3-[4,4-Бис-(4-фторфенил) -2-оксо-имидазолидин-5 1-ил]-1-метил-1-(2-оксо-2-пиридин-2-илэтил) -пирролидиний; 1-[1-(3-Фтор-бензил) -пиперидин-4-ил]-4,4-бис-(4-фтор-фенил) -имидазолидин-2-он; 1-Циклооктил-3-(3-метокси-1-аза-бицикло[2,2,2]окт-3-ил) -1-фенилпроп-2-ин-1-ол; 3-[2-(2-Диэтиламиноацетокси) -2,2-дитиофен-2-ил-ацетокси]-1-(3-феноксипропил) -1-азоний-бицикло[2,2,2] октан (Аклидиниум-гЧ,гЧ-диэтилглицинат); или (2-Диэтиламиноацетокси) 10 -дитиофен-2-ил-уксусной кислоты 1-метил-1-(2-феноксиэтил) -пиперидин-4-иловый эфир, но не ограничиваются ими.
[00106] Соединения Формулы I также можно комбинировать с муколитическими агентами для лечения как указанной инфекции, так и симптомов респираторных инфекций. Примером муколитического агента является амброксол, но круг таких агентов 15 не ограничен им. Также, соединения Формулы I можно комбинировать с
отхаркивающими средствами для лечения как указанной инфекции, так и симптомов респираторных заболеваний. Примером отхаркивающего средства является гвайфенезин, но круг таких средств не ограничен им.
[00107] Для улучшения немедленного и длительного очищения малых дыхательных 20 путей пациента с заболеваниями лёгких используют распылённый гипертонический раствор (Kuzik, J. Pediatrics 2007, 266). Соединения Формулы I также можно комбинировать с распылённым гипертоническим раствором, в частности когда инфекция, вызванная вирусами семейства Orthomyxoviridae осложнена капиллярным бронхитом (бронхолитом). Комбинация соединений Формулы I с гипертоническим 25 раствором также может содержать любой дополнительный агент, описанный выше. В предпочтительном варианте используют распылённый примерно 3% гипертонический раствор.
[00108] Также можно комбинировать любое соединение согласно настоящему изобретению с другим одним или более активными терапевтическими агентами в 30 комбинированной лекарственной форме для одновременного или последовательного приёма пациентом. Комбинированная терапия может назначаться в режиме одновременного приёма или последовательных приёмов. При одновременном приёме указанная комбинация может вводиться в двумя или более приёмами.
[00109] Одновременное введение соединения согласно настоящему изобретению с другим одним или более активными терапевтическими агентами в общем случае относится к одновременному или последовательному приёму соединения согласно настоящему изобретению и другого одного или более активного терапевтического 5 агента, так что терапевтически эффективные количества соединения согласно
настоящему изобретению и другого одного или более активного терапевтического агента одновременно присутствуют в теле пациента.
[00110] Одновременное введение включает введение единичной дозы соединения согласно настоящему изобретению перед или после введения единичной дозы одного
10 или более активных терапевтических агентов, например, введение соединений согласно настоящему изобретению в течение секунд, минут, или часов после введения одного или более активных терапевтических агентов. Например, единичная доза соединения согласно настоящему изобретению может быть введена сначала с последующим в течение секунд или минут введением единичной дозы одного или более активных
15 терапевтических агентов.
[00111] В качестве альтернативы единичная доза одного или более активных терапевтических агентов может быть введена сначала с последующим в течение секунд или минут введением единичной дозы соединения согласно настоящему изобретению. В некоторых случаях может быть предпочтительным введение сначала единичной дозы
20 соединения согласно настоящему изобретению с последующим через несколько часов (например, 1-12 часов) ведением единичной дозы одного или более активных терапевтических агентов. В других случаях может быть предпочтительным введение сначала единичной дозы одного или более активных терапевтических агентов с последующим через несколько часов (например, 1-12 часов) ведением единичной дозы
25 соединения согласно настоящему изобретению.
[00112] Третий вариант реализации настоящего изобретения относится к способу лечения инфекций, вызванных вирусом семейства Orthomyxoviridae, у нуждающегося в этом млекопитающего. Указанный способ включает стадию введения терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, как определено выше в отношении
30 первого варианта реализации настоящего изобретения. В конкретном варианте
реализации соединение Формулы I представлено Формулой II или Формулой III, как определено выше в отношении первого варианта реализации настоящего изобретения. Термины в третьем варианте реализации настоящего изобретения определены выше в отношении первого и второго вариантов реализации настоящего изобретения.
Предпочтительными вариантами реализации Rl, R2, R3, R4, R5, R6 и R7 в третьем варианте реализации настоящего изобретения являются те же варианты, что и для первого варианта реализации настоящего изобретения.
[00113] В предпочтительном варианте соединение Формулы I представляет собой:
но* *f или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или эфир
такого соединения, а в более предпочтительном случае представляет собой
NH2
HO-i 1 ^? Н°Л О X
Hd" F
V / N=( \-l N= <.
но"" 'F
NH,
, или или его
фармацевтически приемлемую соль, сольват или эфир такого соединения. [00114] В другом предпочтительном варианте реализации изобретения соединение Формулы I представляет собой:
такого соединения.
[00115] В другом варианте реализации настоящего изобретения фармацевтически 5 эффективное количество рацемата, энантиомера, диастереомере, таутомера, полиморфа, аморфной формы или гидрата соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира вводят нуждающемуся в этом млекопитающему. [00116] В другом варианте реализации предложено применение соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира для лечения вирусной
10 инфекции, вызванной вирусом Orthomyxoviridae.
[00117] В другом аспекте этого третьего варианта реализации ортомиксовирусная инфекция, которую лечат, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа А. В другом аспект этого варианта реализации ортомиксовирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа В. В другом аспект этого варианта
15 реализации ортомиксовирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа С.
[00118] В предпочтительном варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества соединения
20 Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или эфира.
[00119] В другом варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения
25 Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира, в
комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или основой. В настоящему изобретении могут применяться любые известные в технике основы или разбавители для
применения в фармацевтических композициях, которые также совместимы с другими ингредиентами состава и физиологически безвредные для реципиента. Подходящие разбавители включают, но не ограничиваются следующими: карбонат кальция или натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия. 5 [00120] В другом варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или эфира, в комбинации с по
10 меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом. Указанный
дополнительный терапевтический агент может представлять собой терапевтический агент, подходящий для применения с соединением Формулы I. Например, терапевтический агент может быть выбран из группы, состоящей из ингибиторов вирусного гемагглютинина, ингибиторов вирусной нейрамидазы, блокаторов ионных
15 каналов М2, ингибиторов ортомиксовирусных РНК-зависимых РНК-полимераз,
сиалидаз и других лекарственных средств для лечения ортомиксовирусных инфекций. [00121] В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способы лечения ортомиксовирусных инфекций у пациента, включающие: введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, II или его
20 фармацевтически приемлемого соли, сольвата или эфира.
[00122] В еще одном варианте реализации в настоящей заявке предложены способы лечения ортомиксовирусных инфекций у пациента, включающие: введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, II или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира, и по меньшей мере одного
25 дополнительного активного терапевтического агента, что обеспечивает ингибирование ортомиксовирусной полимеразы.
[00123] В еще одном варианте реализации в настоящей заявке предложены способы лечения ортомиксовирусных инфекций у пациента, включающие: введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, II или его 30 фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира и по меньшей мере одного
дополнительного активного терапевтического агента, выбранного из группы, состоящей из интерферонов, аналогов рибавирина, ингибиторов вирусного гемагглютинина, ингибитора вирусной нейрамидазы, блокатора ионных каналов М2, ингибитора
ортомиксовирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы и других лекарственных средств для лечения ортомиксовирусных инфекций.
[00124] В еще одном варианте реализации настоящая заявка предусматривает применение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически 5 приемлемой соли, сольвата и/или эфира для приготовления лекарственного средства для лечения ортомиксовирусных инфекций у пациента.
[00125] В другом аспекте настоящего изобретения ниже описаны способы, которые могут применяться для получения соединений Формулы I согласно настоящему изобретению.
10 [00126] Другой аспект настоящего изобретения относится к способам ингибирования активности полимеразы ортомиксовирусов, включающий этап обработки образца, предположительно содержащего вирус Orthomyxoviridae, композицией согласно настоящему изобретению.
[00127] Композиции согласно настоящему изобретению могут действовать как
15 ингибиторы полимеразы ортомиксовирусов, как интермедиаты для таких ингибиторов или обладать другими полезными свойствами, описанными ниже. Эти ингибиторы связываются в участках на поверхности или в полости полимеразы ортомиксовирусов, геометрия которой уникальна для полимеразы ортомиксовирусов. Композиции, связывающие полимеразу ортомиксовирусов, могут связывать ее с различной степенью
20 обратимости. Соединения, которые связываются по существу необратимо, являются идеальными кандидатами для применения с этом способе согласно настоящему изобретению. По существу необратимо связывающие композиции, если их снабдить меткой, можно применять в качестве зондов для детектирования полимеразы ортомиксовирусов. Соответственно, настоящее изобретение относится к способам
25 детектирования полимеразы ортомиксовирусов в образце, предположительно
содержащем полимеразу ортомиксовирусов, включающим этапы: обработки образца, предположительно содержащего полимеразу ортомиксовирусов, композицией, содержащей соединение согласно настоящему изобретению, связанное с меткой; и наблюдения влияния образца на активность метки. Подходящие метки хорошо известны
30 в области диагностики и включают стабильные свободные радикалы, флюорофоры, радиоизотопы, ферменты, хемилюминесцентные группы и хромогены. Мечение описанных здесь соединений осуществляют обычным образом с использованием функциональных групп, таких как гидроксил, карбоксил, сульфгидрил или амино.
[00128] В контексте настоящего изобретения, образцы, предположительно содержащие полимеразу ортомиксовирусов, включают природные или созданные человеком материалы, такие как живые организмы; культуры тканей или клеток; биологические образцы, такие как образцы биологического материала (крови, сыворотки, мочи, 5 спинномозговой жидкости, слезной жидкости, мокроты, слюны образцы тканей и т.п.); лабораторные образцы; образцы пищи, воды или воздуха; образцы биологических продуктов, такие как экстракты клеток, в частности, рекомбинантных клеток, синтезирующих целевой гликопротеин, и т.п. В типичном случае предполагают, что образец содержит организм, который продуцирует полимеразу ортомиксовирусов, часто 10 патогенный организм, такой как вирус семейства Orthomyxoviridae. Образцы могут содержаться в любой среде, включая воду и смеси органический растворитель/вода. Образец включают живые организмы, такие как человек и материалы, созданные человеком, такие как культуры клеток.
[00129] Этапы обработки согласно настоящему изобретению включают добавление 15 композиции согласно настоящему изобретению к образцу или добавление
предшественника к образцу. Этап добавления включает любой способ введения, описанный здесь.
[00130] При желании, активность полимеразы ортомиксовирусов после применения композиции можно наблюдать любым способов, включая прямые и непрямые методы
20 детектирования активности полимеразы ортомиксовирусов. Предусмотрено применение всех количественных, качественных и полуколичественных методов определения активности полимеразы ортомиксовирусов. Обычно применяется один из описанных выше методов скрининга, однако, также может применяться любой другой способ наблюдения за физиологическими свойствами живого организма.
25 [00131] Организмы, которые содержат полимеразу ортомиксовирусов, включают вирусы семейства Orthomyxoviridae. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в лечении или профилактике ортомиксовирусных инфекций у животных или человека.
[00132] В еще одном варианте реализации в настоящей заявке предложены способы 30 ингибирования РНК-зависимой РНК-полимеразы ортомиксовирусов в клетке,
включающие: осуществление контакта клетки, инфицированной вирусом семейства Orthomyxoviridae, с эффективным количеством соединения Формулы I, II или его фармацевтически приемлемая соли, сольвата или эфира, что обеспечивает ингибирование полимразы ортомиксовирусов. В одном аспекте этого варианта
реализации клетку также приводят в контакт с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом. В некоторых вариантах реализации этого изобретения РНК-зависимая РНК-полимераза ортомиксовируса может представлять собой РНК-зависимую РНК-полимеразу вируса гриппа А, РНК-зависимую РНК-полимеразу вируса гриппа В, 5 РНК-зависимую РНК-полимеразу вируса гриппа С.
[00133] В еще одном варианте реализации в настоящей заявке предложены способы ингибирования полимеразы ортомиксовируса в клетке: включающие осуществление контакта клетки, инфицированной вирусом семейства Orthomyxoviridae, с эффективным количеством соединения Формулы I, II, или его фармацевтически приемлемой соли,
10 сольвата или эфира и по меньшей мере одним дополнительным активным
терапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из интерферонов, аналогов рибавирина, ингибиторов вирусной нейрамидазы, ингибиторов вирусной нейрамидазы, Блокаторов ионных каналов М2, ингибиторов РНК-зависимых РНК-полимераз ортомиксовирусов, сиалидаз и других лекарственных средств, применяемых для лечения
15 инфекций, вызываемых вирусами семейства Orthomyxoviridae.
[00134] В другом аспекте настоящее изобретение также обеспечивает способы и новые промежуточные соединения, раскрытые в настоящем тексте, которые можно применять для получения соединений Формулы I согласно настоящему изобретению. [00135] В других аспектах предложены новые способы синтеза, анализа, разделения,
20 выделения, очистки, исследования и тестирования соединения согласно настоящему изобретению.
[00136] Также в объем настоящего изобретения входят образующие in vivo продукты метаболизма описанных здесь соединений, при условии, что такие продукты являются новыми и неочевидными из уровня техники. Такие продукты могут образовываться в
25 результате, например окисления, восстановления, гидролиза, амидирования,
этерификации и т.д. введенного соединения, в первую очередь за счет ферментативных процессов. Соответственно, настоящее изобретение включает новые и неочевидные соединения, образующиеся в результате процесса, включающего контакт соединения согласно настоящему изобретению с млекопитающим в течение периода времени,
30 достаточного для образования продукта метаболизма указанного соединения. Такие
продукты обычно определяют путем приготовления радиомеченого (например, или
Зн) соединения согласно настоящему изобретению, его парентерального введения в детектируемой дозе (например, выше приблизительно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, обеспечения времени, достаточного
для метаболизирования (обычно приблизительно от 30 секунд до 30 часов) и выделения продуктов его превращения из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты легко выделить, поскольку они содержат метку (другие выделяются с использованием антител, способных связывать эпитопы, сохранившиеся в метаболите). 5 Структуры метаболитов определяют обычными способами, например, путем анализа методом МС или ЯМР. Обычно анализ метаболитов осуществляют таким же образом, что и обычные исследования метаболизма лекарственных средств, как хорошо известно специалисту. Продукты превращения, при условии, что они не встречаются в других условиях in vivo, можно применять в диагностических тестах для определения
10 терапевтических доз соединений согласно настоящему изобретению, если они сами обладают ингибиторной активностью в отношении ортомиксовирусной полимеразы. [00137] Процедуры и методы для определения стабильности соединений в суррогатных секретах желудочно-кишечного тракта известны. Здесь, соединения определяются как стабильные в желудочно-кишечном тракте, если в суррогоатных желудочных или
15 кишечных соках после инкубации в течение 1 часа при 37°С теряется защита на менее приблизительно 50 мольных процентах защищенных групп. Сама о себе стабильность в желудочно-кишечном тракте не означает, что они не могут гидролизоваться in vivo. Пролекарства согласно настоящему изобретению обычно стабильны в пищеварительной системе, но могут быть практически гидролизованы до исходного соединения в просвете
20 ЖКТ, в печени или в другом органе, где происходит метаболизм, или в клетке вообще.
ПРИМЕРЫ
[00138] В подробном описании экспериментов используется несколько аббревиатур и сокращений. Хотя для специалиста они понятны, в Таблице 1 приведен список многих из 25 этих аббревиатур и сокращений.
(MS)
THF (ТГФ)
тетрагидрофуран
частей на миллион по отношению к остаточному пику
недеитерированного растворителя
[00139] Получение соединений
[00140] Соединение 1: (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(2,4-5 бис(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-7-ил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ол
[00141] К смеси 7-бром-2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин (2,5 г, 7,57 ммоль) в ТГФ (30 мл) at -78°С по каплям добавляли nBuLi (1,6 М в гексане, 6,15 мл, 9,84 ммоль). После перемешивания при -78°С в течение 30 минут по каплям добавляли (3R,
10 4R, 5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтордигидрофуран-2(ЗН) -он (2,43 г, 8,33 ммоль) в ТГФ (5мл). После перемешивания при -78°С в течение 3 часов смеси позволяли нагреться до комнатной температуры. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем нейтрализовали насыщенным NH4CI. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Слои разделяли и объединенные
15 органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na2S04 и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-7-ил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ола (1) (2 г, 48 %) в форме
20 желтой пленки. МС (m/z) : 543,2 [М+Н]+.
[00142] Соединение 2: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бепшлоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин
SMe SMe .N*t^N Et,SiH
BnO4' 'F Bn(J \
(D <2)
[00143] К раствору (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(2,4-5 бис(метилтио) имидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-7-ил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ола (1) (300 мг, 0,55 ммоль) в дихлорметане (3 мл) при -78°С по каплям добавляли BF3'OEt2 (1,20 мл, 8,81 ммоль), с последующим добавлением EtsSiH (1,52 мл, 8,8 1 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали ее в течение 2 чесов, а затем нейтрализовали насыщенным NaHC03, а затем экстрагировали
10 дихлорметаном. Органические слои отделяли, промывали солевым раствором, сушили над Na2S04 и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения 1-{{2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазина (2) (218 мг,
15 75%). МС (m/z) : 527,2 [М+Н]+.
[00144] Соединение 3: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-4-амин
SMe МН2
SMe
BnO" 'F
N^N N^N
Bn°\o)-NMASMe NH3(9).60°C ^ Bn0^NN'A
O/N
Bntf F
(2) (3)
20 1-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-Л[1,2,4]триазин (2) (390 мг, 0,74 ммоль) в жидком аммиаке (120 мл) нагревали при 60°С в стальном баллоне в течение 18 часов. Баллон охлаждали до комнатной температуры и очищали реакционную смесь флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого
25 соединения 1-{{2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-
фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-4-амина (3) (330 мг, 89%). МС (m/z) : 496,2 [М+Н]+
[00145] Соединение 4: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бепшлоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилсульфонил) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-4-амин
NH2 NH2
Bn0^NN^SMe МСРВА В"°^^302Ме
Bntf F DCM, RT BnON F
(3) (4)
5 [00146] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-
фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-4-амин (3) (300 мг, 0,57 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при 0°С одной порцией добавляли 3-хлорпербензойную кислоту (МСРВА, 77%) (627 мг, 3,42 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов.
10 Реакционную смесь нейтрализовали 20% раствором КаБгОзвНгО (15 мл) и оставляли перемешиваться н 20 минут. Слои разделяли, водный раствор экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали насыщенным NaHC03 и солевым раствором, а затем сушили над Na2S04 и концентрировали с получением неочищенной смеси, которую затем очищали путем хроматографии на колонке с
15 силикагелем с использованием этилацетата/дихлорметана с получением целевого продукта 1-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилсульфонил) имидазо[ 1,2-f] [ 1,2,4]триазин-4-амина (4) (276 мг, 87%) в форме прозрачного маслае. МС (m/z) : 528,1 [М+Н]+.
20 [00147] Соединение 5: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-2,4-диамин
NH2 NH2
N J_ ' INI
-^Vs02Me ^ ^ BnO> (|!0
Bntf 'F 110°C, 26 hrs часов
Э F
(4) (5)
[00148] 1-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилсульфонил) имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4-амин (4) (276 мг, 0,52 ммоль) в 25 жидком аммиаке (100 мл) нагревали при 110°С в течение 26 часов в стальном баллоне. Баллон охлаждали до комнатной температуры и неочищенную реакционную смесь очищали флэш-хроматографией с этилацетатом/дихлорметаном с получением целевого соединения 1-{{2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3
фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-2,4-диамина (5) (185 мг, 78%). МС (m/z) : 465,3 [М+Н]+
[00149] Соединение 6: (2S,3S,4R,5R) -5-(2,4-диаминоимидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-7-5 ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол
NH2 NH2
Bn0\o> NN"V io% Pd/C снзсоон ^ H°YyNN'ANH2
Bn°N F RT KT, В течение ночи F
(5) (6)
[00150] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-2,4-диамина (5) (145 мг, 0,31 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) добавляли 10% Pd/C Degussa, типа Е101 NE/W (290
10 мг). Реакционную атмосферу заменяли на Нг (газ) и перемешивали реакционную смесь в течение 18 часов. Катализатор удаляли путем фильтрации и концентрировали смесь при пониженном давлении. Сырой продукт сушили с получением целевого продукта (2S,3S,4R,5R) -5-(2,4-диаминоимидазо[ 1,2-f\[ 1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола (6) (85 мг, 96%) в виде белого твердого
15 вещества. МС (m/z): 285,2 [М+Н]+.
[00151] ХН ЯМР (400 МГц, CD3OD) : 8 7,45 (s, Ш), 5,44-5,38 (m, Ш), 5,24-5,11 (d, / =, Ш), 4,38-4,33(m, Ш), 3,98 (s, Ш), 3,91 - 3,70 (m 2Н). [00152] 19F (376 МГц, CD3OD): 8 (-199,86) -(-200,13) (m)
20 [00153] Соединение 7: 2-OMUHO-7-(2S,3S,4R,5R) -3-фтор-4-гидрокси-5-
(гидроксиметил) тетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-4(ЗН) -он
аденозиндезаминаза HQ VN Д.
H4oV-/,, Ґf 4
\J Н^СЭ7С НС F
HC" 'F
<7\
[00154] К раствору (2S,3S,4R,5R) -5-(2,4-диаминоимидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола (6) (310 мг, 1,09 ммоль) в 800мл воды 25 добавляли аденозиндезаминазу IX типа из коровьей селезенки (№Cas 9026-93-1, 205мкл). Раствор помещали в водяную баню при 37°С на 16 часов. Раствор концентрировали и кристаллизовали конечное соединение отдельно от примесей, используя воду в качестве кристаллизующего растворителя. Твердые вещества собирали и сушили с получением 2
амино-7-(2S,3S,4R,5R) -3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин-4(ЗЯ) -она (7) (246 мг, 80%) в виде чистого, беловатого твердого вещества. МС (m/z) : 286,2 [М+Н]+.
[00155] 1И ЯМР (400 МГц, ДМСО-ё6): 8 11,27 ( s, Ш ), 7,41 (s, Ш), 6,24 (s, 2Н), 5,435 5,42 (m, Ш), 5,26-5,20 (d, / = 22,8 Гц, Ш), 5,09-4,85 (т, 2Н), 4,14-4,09 (т, Ш), 3,77 (s, Ш), 3,69-3,51 (т, 2Н).
[00156] 19F (376 МГц, ДМСО-ё6): 8 (-196,68) -(-196,94) (т)
[00157] Соединение 8: ((2R, 3R, 4R, 5S) -5-(2-амино-4-оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-Ю Л[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-3-гидрокси-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил) метилтетраводород трифосфат
[00158] 2-aMHHO-7-(2S,3S,4R,5R) -3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин-4(ЗЯ) -он (7) (12 мг, 0,042 ммоль)
15 растворяли в триметилфосфате (1 мл) в инертной атмосфере (N2). Добавляли оксихлорид фосфора (58 мг, 0,378 ммоль) добавляли и перемешивали смесь при 0°С в течение 2 часов, и при комнатной температуре в течение 2 часов. Путем мониторинга с использованием аналитической ионообменной колонки определяли время, когда образовывалось > 80% монофосфата. Раствор охлаждали до 0°С и добавляли раствор
20 трибутиламина (0,15 мл, 0,63 ммоль) и триэтиламмонияфосфата (0,25 г, 0,55 ммоль) в
безводном ДМФ (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2,5 часов, а затем нейтрализовали путем добавления 1H раствора триэтиламмония бикарбоната в воде Н2О (6 мл). Смесь концентрировали при пониженном давлении и перерастворяли остаток в Н2О. Раствор подвергали ионообменной хроматографии с получением
25 целевого продукта ((2R, 3R, 4R, 5S) -5-(2-амино-4-оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-3-гидрокси-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил) метилтетраводорода трифосфата (8) (в форме триэтиламмонийной соли) (11 мг, 28% выход). МС (m/z) : 526,0 [М+Н]+.
[00159] ХН ЯМР (400 МГц, D20): 8 7,53 (s, Ш), 5,43-5,37 (d, / = 24,8 Гц, Ш), 5,29-5,15
30 (d, / = 55,2, Ш), 4,52 -3,47 (m, 4Н).
[00160] iyF (376 МГц, D20): 8 (-197,33) -(-197,60) (m, IF)
[00161] 31P (162 МГц, D20) 8 (-10,66) -(-10,78) (d, J = 48,4 Гц, IP), (-11,070) -(-11,193) (d, / = 49,2 Гц, IP), (-22,990) -(-23,236) (m, IP).
[00162] Ионообменная ВЭЖХ: Растворитель А: воды; Растворитель В: 1М 5 триэтиламмония бикарбонат.
[00163] 0-50% в течение 12 минут, затем 100% в течение 5 минут, затем обратно до 0% в течение 5 минут.
[00164] Колонка: Dionex, DNAPac PA-100, 4x250мм. [00165] Время удерживания= 12,04 мин
[00166] Соединение 9: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бепшлоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-4-амин
[00167] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -315 фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-(метилсульфонил) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-4-амина (4) (63 мг, 0,12 ммоль) в ТГФ (5 мл) при -78°С по каплям добавляли LiBHEt3 (1,0 М в ТГФ, 4,78 мл, 4,78 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 31 часа. Реакционную смесь нейтрализовали ледяной водой и экстрагировали этилацетатом. Органический раствор 20 промывали солевым раствором и концентрировали с получением сырой смеси, которую растворяли в СН3ОН и концентрировали под вакуумом (Зх). Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата/ дихлорметана, в результате получали целевой продукт 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[ 1,2-f][ 1,2,4]триазин-4-амин 25 (9) (50 мг, 95% выход). МС (m/z) : [М+Н]+ 450,3.
[00168] Соединение 10: (2S,3S,4R,5R) -5-(4-аминоимидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол
Pd/C,
AcOH, overnight
[00169] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-4-амина (9) (50мг, 0,11 ммоль) в уксусной кислоте (5 мл) добавляли 10% Pd/C (100 мг). Атмосферу в реакционных сосудах заменяли на водород и перемешивали реакционную смесь при комнатной 5 температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали СНзОН. Фильтрат концентрировали с получением сырой смеси, которую очищали колоночной хроматографией на силикагеле с использованием СНзОН/дихлорметана, в результате получали целевой продукт (2S,3S,4R,5R) -5-(4-аминоимидазо[1,2-Я.[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол (10) в виде 10 белого твердого вещества (23 мг, 77 % выход). МС (m/z) : 270,2 [М+Н]+.
[00170] ХН ЯМР (400 МГц, nMCO-d6): 8 8.22 ( d, / = 26 Гц, 2 Н), 8,07 (s, 1 Н), 7,67 (s, 1 Н), 5,50 - 5,48 (d, / = 6,4,1 Н), 5,42 - 5,36 (m,l Н), 5,19 - 5,03 (т, 1 Н), 4,88 - 4,85 ( т, 1 Н), 4,19 - 4,11 ( т, Ш), 3,83 - 3,81 (т, 1 Н), 3,72 - 3,67 (т, 1 Н), 3,54 - 3,50 ( т, 1 Н). [00171] 19F (376 МГц, CD3OD): 8 (-196,69) -(-196,95) (т)
[00172] Соединение 11: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-фторимидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-4-амин
NH2 МН2 Nf^N фтороводород/
Bno^NN*v дирвдин ^ Bn0^VF
ВпО" F 1Ч Впб F
(5) (11)
[00173] 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-20 2-ил) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-2,4-диамин (5) (140 мг, 0,30 ммоль) в 4 мл 50% фтороводорода/пиридин перемешивали в ванне при -10°С и добавляли 45 мкл (0,38 ммоль) t-бутилнитрил. Реакционную смесь перемешивали при низкой температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь нейтрализовали путем добавления 50 мл Н2О и экстрагировали водный слой 2 х 50 мл дихлорметана. Объединенные органические 25 вещества сушили над Na2S04 и концентрировали. Остаток хроматографировали на 6 г силикагеля с получением целевого соединения 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ил) -2-фторимидазо[ 1,2-f] [ 1,2,4]триазин-4-амина (11) (50мг, 36%). МС (m/z): 468,2 [М+Н]+.
[00174] 1И ЯМР (400 МГц, CDC13): 7,60 (s, 1 Н), 7,3-7,2 (bm, ЮН), 7,14 (bs, Ш), 6,37 (bs, 30 Ш), 5,46 - 5,48 (dd, /= 23,2, 2,4 Гц, 1 Н), 5,29 - 5,15 (m,l Н), 4,72 (т, 1 Н), 4,56 - 4,52 ( т, 2Н), 4,29 ( т, 2Н), 3,83 - 3,81 (т, 1 Н), 3,65 - 3,63 (т, 1 Н).
[00175] iyF (376 МГц, CDC13): 5 -69,1 (s), (-197,7) -(-198,0) (m).
[00176] Соединение 12: (2R,3R,4R,5S) -5-(4-амино-2-фторимидазо[1,2-fj[ 1,2,4]триаш11-7-и.1) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол
10% Pd/C, H2
BnO" F
кт, 26 часов
hrs
HO" F
(11)
(12)
[00177] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) имидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-4-амина (11) (50 мг, 0,11
10 ммоль) в уксусной кислоте (8 мл) добавляли 10% Pd/C (100 мг). Атмосферу в
реакционном сосуде заменяли на водород и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали уксусной кислотой, а затем СН3ОН. Фильтрат концентрировали с получением сырой смеси, которую очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением
15 целевого продукта (2R,3R,4R,5S) -5-(4-амино-2-фторимидазо[1,2-Я[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола (12) в виде белого твердого вещества
(26 мг, 84%). МС (m/z) : 288,1 [М+Н]+.
[00178] ХН ЯМР (400 МГц, CD3OD) : 8 7,66 (s, 1 Н), 5,47 - 5,41(dd, / = 23,6, 2,4 Гц, 1 Н), 5,21 - 5,06 (m,l Н), 4,35 - 4,27 (m, 1 Н), 3,93 (bm, 1 Н), 3,88 ( т, Ш), 3,68 (т, 1 Н). 20 [00179] 19F (376 МГц, CD3OD): 8-72,15(s),(-199,39)-(-196,69) (т)
[00180] Соединение 13: 7-бром-4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин
25 [00181] К смеси 7-бром-2,4-бис(метилтио) имидазо[1,2-/|[1,2,4]триазина (1,0 г, 3,45
ммоль) в ЕЮН (25 мл) при комнатной температуре добавляли NaOEt (21% in EtOH, 1,28 мл, 3,45 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа реакцию нейтрализовали уксусной кислотой (АсОН, 1 мл). Растворители удаляли при пониженном давлении и разделяли смесь между CH2CI2 и Уг насыщенным солевым
раствором. Органические вещества отделяли, сушили над Na2S04, удаляли твердые вещества путем фильтрации и удаляли растворитель при пониженном давлении. Сырой материал очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения 7-бром-4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-
5 г][1,2,4]триазина (13) (791 мг, 79 %) в виде желтой пленки. МС (m/z) : 288,9 / 290,8
[М+Н]+.
[00182] Соединение 14: (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин-7-ил) -3-фтортетрагидрофуран-
2-ол
[00183] К смеси 7-бром-4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-Л[1,2,4]триазина (13) (917 мг, 3,17 ммоль) в ТГФ (15 мл) при -78°С добавляли LaCl 3*2LiCl (0,6М в ТГФ, 5,28 мл, 3,17 ммоль), а затем по каплям добавляли nBuLi (2,5 М в гексане, 1,27 мл, 3,17 ммоль).
15 После перемешивания при -78°С в течение 30 минут по каплям добавляли (3R, 4R, 5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтордигидрофуран-2(ЗЯ) -он (805 мг, 2,44 ммоль) в ТГФ (10 мл). После того как смесь перемешивали при -78°С в течение 30 минут и позволяли ей нагреться до комнатной температуры, смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем нейтрализовали уксусной кислотой
20 (АсОН). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Слои разделяли,
объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na2S04 и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов, с получением целевого соединения (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(4-этокси-2-
25 (метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-7-ил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ола (14) (244 мг, 19%) в форме желтой пленки. МС (m/z) : 541,1 [М+Н]+.
[00184] Соединение 15: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-/][1,2,4]триазин
CH2CI2, BF3*Et20, TES
[00185] К раствору (2S,3R,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -2-(4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-7-ил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ола (X) (244 мг, 0,45 ммоль) в CH2CI2 (5 мл) при 0°С по каплям добавляли BF3 OEt2 (900 мкл, 3,5 ммоль) с 5 последующим добавлением EtsSiH (600 мкл, 3,5 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным NaHC03 и экстрагировали CH2CI2. Органические слои отделяли, промывали солевым раствором, сушили над Na2S04 и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с 10 использованием этилацетата/гексанов, с получением целевого соединения 7-
((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -З-фтортетрагидрофуран-2-ил) -4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-1][1,2,4]триазина (15) (107 мг, 46%). МС (m/z) : 525,1 [М+Н]+.
15 [00186] Соединение 16: 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран-2-ил) -4-этокси-2-(метилсульфонил) имидазо[1,2-f][l,2,4]mpua3UH
[00187] К раствору 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -320 фтортетрагидрофуран-2-ил) -4-этокси-2-(метилтио) имидазо[1,2-1][1,2,4]триазина (15) (107 мг, 0,204 ммоль) в CH2CI2 (3 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляли 3-хлорпербензойную кислоту (МСРВА, 77%) (100 мг, 0,443 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакцию нейтрализовали 20% раствором КаБгОз в Н2О (5 мл) и оставляли 25 перемешиваться в течение 20 минут. Слои разделяли, водный раствор экстрагировали дихлорметаном CH2CI2. Объединенные органические слои промывали насыщенным NaHCOs, солевым раствором, сушили над Na2S04 и концентрировали с получением сырого 7-((2S,3S,4R,5R) -4-(бензилокси) -5-(бензилоксиметил) -3-фтортетрагидрофуран
фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола (18) (27 мг, 48%) в виде твердого вещества белого цвета. МС (m/z): 314,10 [М+Н]+.
[00192] ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-ё6): 8 7.526 (s, 1 Н), 8,07 (s, 1 Н), 6,55 (s, 2 Н), 5,435,41 (d, / = 6,46 Гц,1 Н), 5,33 - 5,27 (dd, / = 2,25 и 22,69 Гц, 1 Н), 5,11-4,96 (m, 1 Н), 4,84 5 (t, / = 5,58 Гц, 1 Н), 4,52 - 4,47 ( q, / = 7,04 Гц, 2Н), 4,17-4,07 (т, Ш), 3,78-3,76 (т, Ш), 3,69-3,65 (т, Ш), 3,511-3,45 (т, Ш), 1,37 (t,/ = 7,04 Гц, ЗН). [00193] 19F (376 МГц, nMCO-d6): 8 (-196,79) -(-197,05) (т).
[00194] Соединение 19: (2R,3R,4R,5S) -5-(2-амино-4-метоксиимидазо[1,2-Ю Л[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол
(19)
[00195] (2R,3R,4R,5S) -5-(2-амино-4-мегоксиимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол (19) готовили способом, прямо аналогичным способу, использованному для получения (2R,3R,4R,5S) -5-(2-амино-4-15 этоксиимидазо[1,2-г][1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола, за тем исключением, что использовали NaOMe в МеОН вместо NaOEt в ЕЮН на первом этапе синтеза. МС (m/z): 300,18 [М+Н]+.
[00196] 1И ЯМР (400 МГц, CD3OD) : 8 7,56 (s, Ш), 5,46 (dd, /= 24, 2,4 Гц, Ш), 5,15 (ddd, / = 54,8, 4,4, 2,4 Гц, Ш), 4,34 (ddd, / = 4,4, 8, 20,4 Гц, Ш), 4,15 (s, ЗН), 3,97 (m, Ш), 3,91 20 (dd, / = 2,4, 12,4 Гц, Ш), 3,72 (dd, / = 4,4, 12 Гц, Ш).
[00197] 19F (376 МГц, CD3OD): 8 (-198,98) -(-199,25) (т).
[00198] Противовирусные тесты
25 [00199] Тест на ингибирование РНК-полимеразы (IC50)
[00200] Очищенный вирус гриппа A/PR/8/34 (H1N1) получили в Advanced Biotechnologies Inc. (Колумбия, Мерилэнд, США) в форме суспензии в ФБР, Вирионы разрушали путем обработки таким же объемом 2% буфера Triton Х-100 в течение 30 минут при комнатной температуре в буфере, содержащем 100 мМ Tris-HCl, рН 8, 200
30 мМ КС1, 3 мМ дитиотриэтола [DTT], 10% глицерина, 10 мМ MgCb, 2 ед/мл ингибитора
рибонуклеазы RNasin и 2 мг/мл лизолицетина V типа (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США). Лизат вируса хранили при -80°С в аликвотах.
[00201] Концентрации относятся к конечным конентрациям, если не указано другое. Готовили 3-кратные серийные разведения нуклеотидных аналогов - ингибиторов в воде 5 и добавляли в реакционную смесь, содержащую 10% лизат вируса (об./об.), 100 мМ Tris-НС1 (рН 8,0), 100 мМ КС1, 1 мМ DTT, 10% глицерин, 0,25% Triton-101 (восстановленный), 5 мМ MgC^, 0,4 ед./мл RNasin и 200 мкМ динуклеотидного праймера ApG (TriLink, Сан-Диего, Калифорния, США). Реакции инициировали путем
добавления субстратной смеси рибонуклеотидтрифосфата (NTP), содержащей один а- Р 10 - меченый NTP и 100 мкМ других трех природных NTP (PerkinElmer, Шелтон,
Коннектикут, США). Радиометка, используемая для каждого теста, соответствовали классу проверяемого нуклеотидного аналога. Концентрации для ограничения природных NTP составляют 20, 10, 2 и 1 мкМ для ATP, СТР, UTP и GTP, соответственно. Молярные отношения для NTP для радиометки : радиомеченому NTP лежали в диапазоне 10015 400:1.
Реакционные смеси инкубировали при 30°С в течение 90 минут, а затем наносили пятнами на фильтровальную бумагу. Фильтры сушили, промывали 0,125 М Na2HP04 (Зх), водой (1х) и ЕЮН (1х) и сушили на воздухе, а затем обрабатывали люминофором Typhoon и измеряли радиоактивность на устройстве Typhoon Trio (GE Healthcare,
20 Пискатавэй, Нью-Джерси, США). Рассчитывали значения IC50 для ингибиторов путем аппропсимации данных в программе GraphPad Prism сигмоидальной функцией доза-ответ с переменным наклоном, при заданных значениях Ymax и Ymin 100% и 0%. IC50 для ((2R, 3R, 4R, 5S) -5-(2-амино-4-оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-/|[1,2,4]триазин-7-ил) -4-фтор-З-гидрокси-З-гидрокситетрагидрофуран-2-ил) метилтетрааводорода трифосфата
25 (Соединение 8) оказалось равным 2,8мкМ.
[00202] Анализ инфекционности с нормальными клетками эпителия бронхов/трахеи человека (ЕС50)
[00203] Нормальные клетки эпителия бронхов/трахеи человека (Lonza, Базель, Швейцария) высевали в 384-луночные планшеты при плотности 4000 клеток на лунку в 30 среде BEGM, дополненной факторами роста (Lonza, Базель, Швейцария). На следующий день среду удаляли, а клетки трижды промывали 100 мкл среды RPMI+ 1% БСА (RPMI-BSA). Затем к клеткам добавляли 30 мкл RPMI-BSA. Готовили 3-кратные серийные разведения соединений в ДМСО, и по 0,4 мкл разведений соединения переносили на чашки. Вирус гриппа А НК/8/68 (Advanced Biotechnology Inc, Колумбия, Мэриленд,
США, 13,5 MOI), PC/1/73 (АТСС, Манассас, Вирджиния, США, 0,3 MOI) и вирус гриппа В B/Lee/40 ((АТСС, Манассас, Вирджиния, США, 10 MOI) добавляли к клеткам в 10 мкл среды RPMI-BS, дополненной 8 мкг/мл трипсина (Worthington, Лейквуд, Нью-Джерси, США). После инкубирования в течение 5 дней к клеткам добавляли 40 мкл буфера, 5 содержащего 66 мМ Mes рН 6,5, 8мМ СаС12, 0,5% NP-40 и 100 мкМ субстрата нейрамидазы (2'-(4-Метилумбеллиферил) -a-D-N-ацетилнейраминовой кислоты натриевой соли гидрат (Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Флюоресценцию продукта гидролиза считывали с использованием возбуждения на длине волны 360 нм и испускания на длине волны 450 нм после инкубации в течение 1 часа при 37°С. Значения 10 ЕС so рассчитывали с использованием нелинейной регрессии нескольких наборов данных. [00204] В таблице ниже объединены значения ЕС50, объединённые в этом анализе:
Соединение
ЕС50 в отношении вируса гриппа А РС/1/73
ЕС50 в отношении вируса гриппа В Lee/40
30 мкМ
36 мкМ
> 200 мкМ
> 200 мкМ
> 100 мкМ
> 100 мкМ
0,9 мкМ
0,9 мкМ
27 мкМ
37 мкМ
21 мкМ
51 мкМ
[00205] Хотя данное изобретение описано со ссылкой на различные конкретные и 15 предпочтительные варианты реализации и методики, следует понимать, что это описание не предназначено для ограничения изобретения указанными вариантами реализации. Специалист поймёт, что в рамках сущности и объема изобретения могут быть реализованы многочисленные варианты и модификации. Предполагается, что изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут 20 быть включены в объем настоящего изобретения.
5 Формула I
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или эфир; где:
каждый из R1 и R7 независимо представляет собой Н, галоген, ORa, (Ci-Cg) галоалкил, CN, N3, (Ci-Cg) алкил, (Ci-Cg) замещенный алкил, (C2-Cg) алкенил, (C2-Cg) замещенный
10 алкенил, (C2-Cg) алкинил или (C2-Cg) замещенный алкинил,
причем заместитель выбран из группы, состящей из -X, -Rb, -ОН, =0, -ORb, -SRb, -S", -NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3, -NHC(=0) Rb, -OC(=0) Rb, -NHC(=0) NRb2, -S(=0) 2-, -S(=0) 2OH, -S(=0) 2Rb, -OS(=0) 2ORb, -S(=0) 2NRb2, -S(=0) Rb, -OP(=0) (ORb) 2, -P(=0) (ORb) 2, -P(=0) (О ) 2, -P(=0) (OH) 2, -P(O)
15 (ORb) (O ), -C(=0) Rb, -C(=0) X, -C(S) Rb, -C(O) ORb, -C(O) О , -C(S) ORb, -C(O) SRb, -C(S) SRb, -C(O) NRb2, -C(S) NRb2, -C(=NRb) NRb2, где каждый X независимо представляет собой галоген: F, CI, Вг или I; и каждый Rb независимо представляет собой Н, алкил, арил, арилалкил, гетероцикл или защитную группу, или пролекарственный фрагмент; R2 представляет собой ORa;
20 R представляет собой галоген или N3;
каждый Ra независимо представляет собой Н, арил, арилалкил или (Ci-Cg) алкил; каждый из R4 и R5 независимо представляет собой Н, =0, ORa, N(Ra) 2, N3, CN, S(O) nRa, галоген или (Ci-Cg) галоалкил; каждый п равен 0, 1 или 2;
где W1 и W2 каждый независимо представляет собой ORa или группу формулы 1а:
К заявке №201491548
25 R6 представляет собой Н, арил, арилалкил или
Формула la,
где:
каждый Y независимо представляет собой связь или О; 5 М2 равен 0, 1 или 2;
каждый Rx представляет собой Н, галоген или ОН.
2. Соединение по п. 1, представленное Формулой II:
10 Формула II
или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или эфир.
3. Соединение по п. 2, где R1 представляет собой Н.
15 4. Соединение по п. 3, выбранное из группы, состоящей из
20 5. Соединение по п. 1, где R1 представляет собой Н, СН2ОН, CH2F, CHF2, СН=СН2, С=СН, CN, СН2СН=СН2, N3, СН3 или СН2СН3.
6. Соединение по п. 5, где R представляет собой Н.
7. Соединение по п. 1, где R представляет собой ОН или О-бензил.
5 8. Соединение по п. 7, где R представляет собой ОН.
9. Соединение по п. 1, где R представляет собой F или N3.
10. Соединение по п. 9, где R представляет собой F.
11. Соединение по п. 1, где R4 представляет собой NH2, и R5 представляет собой Н, F,
CI, Br, N3, CN, CF3, NH2, SMe или S02Me.
12. Соединение по п. 1, где R5 представляет собой NH2, и R4 представляет собой =0,
15 ОН, ОМе, CI, Br, I, NH2, NHMe, NHcPr или SMe.
13. Соединение по п. 1, где каждый из R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, NH2, =0, NHMe, NHcPr, ОН, ОМе, CI, Br, I, SMe, F, N3, CN, CF3 и S02Me.
20 14. Соединение по п. 13, где R5 представляет собой Н или NH2.
15. Соединение по п. 13, где R4 представляет собой =0 или NH2.
16. Соединение по п. 1, где R6 представляет собой Н, бензил или
W1*
//2
25 V\T
2 1
где W представляет собой ОН, и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула la,
где:
Y представляет собой О; 5 М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н.
17. Соединение по п. 16, где R6 представляет собой Н. 10 18. Соединение по п. 1, где R7 представляет собой Н или ОН.
19. Соединение по п. 18, где R7 представляет собой Н.
12 3
20. Соединение по п. 1, где R представляет собой Н, R представляет собой ОН, и R 15 представляет собой F.
21. Соединение по п. 20, где R HR представляют собой NH2, Н ИЛИ =0, и R и R являются атомами водорода.
1 2
20 22. Соединение по п. 1, где R представляет собой Н, R представляет собой О-бензил или ОН, R3 представляет собой F, R4пpeдcтaвляeт собой SMe, NH2 или =0, R5представляет собой SMe, S02Me, Н или NH2, R6 представляет собой бензил или
11 .
2 1
где W представляет собой ОН, и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула la,
где:
Y представляет собой О; М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н, и R7 представляет собой Н или ОН. 23. Соединение по п. 1, представляющее собой
но* *F , но* % , или его фармацевтически приемлемая
соль, сольват или эфир.
, или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или
эфир.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая:
5 терапевтически эффективное количество соединения по п. 1, и
фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.
26. Фармацевтическая композиция по п. 25, дополнительно содержащая по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент.
27. Фармацевтическая композиция по п. 26, где указанный по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент выбран из группы, состоящей из кортикостероида, противовоспалительного модулятора передачи сигнала, бронходилататора, представляющего собой агонист [32-адренорецепторов,
15 антихолинергического средства, муколитического агента, гипертонического раствора, агента, который подавляет миграцию провоспалительных клеток в участок инфицирования, и их смесей.
28. Фармацевтическая композиция по п. 27, где указанный по меньшей мере один 20 дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор вирусного
гемагглютинина, ингибитор вирусной нейрамидазы, ингибитор ионного канала М2, ингибитор РНК-зависимой РНК полимеразы вируса Orthomyxoviridae или сиалидазу.
29. Фармацевтическая композиция по п. 27, где указанный по меньшей мере один 25 дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон, рибавирин,
озельтамивир, занамивир, ланинамивир, перамивир, амантадин, римантадин, CS-8958, фавипиравир, AVI-7100, ингибитор альфа-1 протеазы или DAS181.
30. Способ лечения ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом
30 млекопитающего, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения Формулы I:
Формула I
или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира; где:
5 каждый из R1 и R7 независимо представляет собой Н, галоген, ORa, (Ci-Cg) галоалкил, CN, N3, (Ci-Cg) алкил, (Ci-Cg) замещенный алкил, (C2-Cg) алкенил, (С2-С8) замещенный алкенил, (C2-Cg) алкинил или (C2-Cg) замещенный алкинил,
причем заместитель выбран из группы, состящей из -X, -Rb, -ОН, =0, -0Rb, -SRb, -S", -NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3,
10 -NHC(=0) Rb, -OC(=0) Rb, -NHC(=0) NRb2, -S(=0) 2-, -S(=0) 2OH, -S(=0) 2Rb, -OS(=0) 2ORb, -S(=0) 2NRb2, -S(=0) Rb, -OP(=0) (ORb) 2, -P(=0) (ORb) 2, -P(=0) (О ) 2, -P(=0) (OH) 2, -P(O) (ORb) (O ), -C(=0) Rb, -C(=0) X, -C(S) Rb, -C(O) ORb, -C(O) О , -C(S) ORb, -C(O) SRb, -C(S) SRb, -C(O) NRb2, -C(S) NRb2, -C(=NRb) NRb2, где каждый X независимо представляет собой галоген: F, CI, Вг или I; и каждый Rb независимо представляет собой Н, алкил, арил,
15 арилалкил, гетероцикл или защитную группу, или пролекарственную группу; R2 представляет собой ORa; R представляет собой галоген или N3;
каждый Ra независимо представляет собой Н, арилалкил, арил или (Ci-Cg) алкил; каждый из R4 и R5 независимо представляет собой Н, =0, ORa, N(Ra) 2, N3, CN, S(O) nRa, 20 галоген или (Ci-Cg) галоалкил; каждый п равен 0, 1 или 2;
где W1 и W2 каждый независимо представляет собой ORa или группу формулы 1а:
каждый R6 представляет собой Н, арил, арилалкил или
Формула la
где:
каждый Y независимо представляет собой связь или О; 5 М2 равен 0, 1 или 2;
каждый Rx представляет собой Н, галоген или ОН.
31. Способ по п. 30, где соединение Формулы I представлено Формулой II:
10 Формула II
или ее фармацевтически приемлемой солью, сольватом или эфиром.
32. Способ по п. 31, где R1 представляет собой Н.
15 33. Способ по п. 30, где R1 представляет собой Н, СН2ОН, CH2F, CHF2, СН=СН2, С=СН, CN, СН2СН=СН2, N3, СН3 или СН2СН3.
34. Способ по п. 33, где R1 представляет собой Н.
20 35. Способ по п. 30, где R представляет собой ОН или О-бензил.
36. Способ по п. 35, где R представляет собой ОН.
37. Способ по п. 30, где R представляет собой F или N3.
38. Способ по п. 37, где R представляет собой F.
39. Способ по п. 30, где R4 представляет собой NH2 и R5 представляет собой Н, F, О,
Br, N3, CN, CF3, NH2, SMe или S02Me.
40. Способ по п. 30, где R5 представляет собой NH2, и R4 представляет собой =0, ОН,
ОМе, CI, Br, I, NH2, NHMe, NHcPr или SMe.
41. Способ по п. 30, где R4H R5 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, NH2, 10 =0, NHMe, NHcPr, ОН, ОМе, CI, Br, I, SMe, F, N3, CN, CF3 и S02Me.
42. Способ по п. 41, где R представляет собой Н или NH2.
43. Способ по п. 41, где R представляет собой =0 или NH2.
44. Способ по п. 30, где R6 представляет собой Н, бензил, или
" I
Р 1
/ 1
2 1
где W представляет собой ОН, и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула 1а,
где:
каждый Y представляет собой О; М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н.
45. Способ по п. 44, где R6 представляет собой Н.
46. Способ по п. 30, где R7 представляет собой Н или ОН.
5 47. Способ по п. 46, где R7 представляет собой Н.
12 3
48. Способ по п. 30, где R представляет собой Н, R представляет собой ОН, и R представляет собой F.
10 49. Способ по п. 48, где R4 и R5 представляют собой NH2, Н или =0, и R6 и R7 являются атомами водорода.
1 2
50. Способ по п. 30, где R представляет собой Н, R представляет собой О-бензил или ОН, R3 представляет собой F, R4пpeдcтaвляeт собой SMe, NH2 или =0, 15 R5представляет собой SMe, S02Me, Н или NH2, R6 представляет собой бензил или
W1-"""J * W2 ;
2 1
где W представляет собой ОН и W представляет собой группу Формулы 1а:
Формула 1а,
где:
Y представляет собой О; М2 равен 2; и
каждый Rx представляет собой Н, и R7 представляет собой Н или ОН.
51. Способ по п. 30, где соединение представляет собой
нс? *F , но* *F или его фармацевтически приемлемую
соль, сольват или эфир.
52. Способ по п. 51, где соединение представляет собой
54. Способ по п. 30, дополнительно включающий введение фармацевтически приемлемого носителя или вспомогательного вещества.
55. Способ по п. 30, дополнительно включающий введение терапевтически
5 эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента или композиции, содержащей терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из кортикостероида, противовоспалительного модулятора передачи сигнала, бронходилататора, представляющего собой агонист [32-адренорецептора, антихолинергического средства, муколитического агента, гипертонического раствора, 10 агента, который подавляет миграцию провоспалительных клеток в участок инфицирования, и их смесей.
56. Способ по п. 55, где указанный по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор вирусного гемагглютинина,
15 ингибитор вирусной нейрамидазы, ингибитор ионного канала М2, ингибитор РНК полимеразы РНК-зависимой вируса Orthomyxoviridae или сиалидазу.
57. Способ по п. 55, где указанный по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон, рибавирин, озельтамивир,
20 занамивир, ланинамивир, перамивир, амантадин, римантадин, CS-8958, фавипиравир, AVI-7100, ингибитор альфа-1 протеазы или DAS181.
58. Способ по п. 55, где соединение Формулы I, Формулы II и/или по меньшей мере один терапевтический агент или их смеси вводят путем ингаляции.
59. Способ по п. 58, где соединение Формулы I, Формулы II и/или по меньшей мере один терапевтический агент или их смеси вводят путем распыления.
60. Способ по п. 30, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа А.
61. Способ по п. 30, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа В.
62. Способ по п. 30, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа С.
61.
63. Способ по п. 30, где ортомиксовирусную инфекцию лечат путем введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или эфира в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем
5 или носителем.
64. Способ по п. 30, где осуществляется ингибирование РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса Orthomyxoviridae.
-2-
-2-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-3 -
-3 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-6-
-7 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-6-
-7 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-6-
-7 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-8-
-7 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-9-
-9-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 10-
-11 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 13 -
- 13 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 14-
- 14-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 14-
- 14-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-16-
- 15-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-16-
- 15-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 18-
- 18-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-20-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-22-
-21 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-24-
-24-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-30-
-31 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-33-
-33-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-40-
-41 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-44-
-43 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-44-
-43 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-46-
-46-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-50-
-51 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-52-
-51 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-52-
-51 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-52-
-51 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-53-
-53-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-53-
-53-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-53-
-53-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-57-
-57-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-58-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-58-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-58-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-58-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-60-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-60-
-59-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-61 -
-61 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-61 -
-61 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-62-
-62-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-66-
-65-
К заявке №201491548
-68-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-68-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-68-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-70-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-71 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-74-
-74-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-76-
-76-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-76-
-76-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-76-
-76-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-76-
-76-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-76-
-76-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
-77-
-77-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 81 -
- 81 -
К заявке №201491548
К заявке №201491548
- 82-
- 82-
К заявке №201491548
К заявке №201491548
