EA201491214A1 20150227 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2015\PDF/201491214 Полный текст описания [**] EA201491214 20121217 Регистрационный номер и дата заявки US61/578,458 20111221 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок IB2012/057394 Номер международной заявки (PCT) WO2013/093762 20130627 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [pdf] eaa21502 Номер бюллетеня [**] КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИТЕЛ, НАЦЕЛЕННЫХ НА ФАКТОР P Название документа [8] C07K 16/18 Индексы МПК [CH] Браннетти Барбара, [US] Гхош Джой, [DE] Егер Уте, [US] Джонсон Лесли, [US] Ким Йонг-Ин, [DE] Кунц Кристиан Карстен Сильвестер, [US] Рогуска Майкл, [US] Сплавски Игорь, [US] Ляо Ша-Мей, [US] Стефанидакис Майкл Сведения об авторах [CH] НОВАРТИС АГ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201491214a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Настоящее изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с фактором Р комплемента, и их применению, а также к комбинациям антител против фактора Р с антителами или их антигенсвязывающими фрагментами, которые связываются с компонентом 5 комплемента (С5).


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с фактором Р комплемента, и их применению, а также к комбинациям антител против фактора Р с антителами или их антигенсвязывающими фрагментами, которые связываются с компонентом 5 комплемента (С5).


2420-516830ЕА/026
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИТЕЛ, НАЦЕЛЕННЫХ НА ФАКТОР Р
Описание
Предпосылки создания изобретения
Возрастная дегенерация желтого пятна (AMD) представляет собой прогрессирующее заболевание и ведущую причину потери зрения и слепоты у американцев в возрасте 65 лет и старше. AMD главным образом поражает желтое пятно, часть сетчатки, ответственную за высокую остроту зрения, необходимую для чтения или вождения автомобиля. Большинство пациентов с AMD страдают ранней стадией заболевания, которая характеризуется присутствием внеклеточных отложений в сетчатке, называемых друзами. Друзы представляют собой внеклеточные отложения в сетчатке клеточных осколков, воспалительных медиаторов и компонентов внеклеточного матрикса. Поздние стадии AMD проявляются в виде сухой или влажной формы, где обе связаны с потерей зрения. Сухую AMD, также известна как географическая атрофия, обнаруживают при офтальмологическом обследовании в виде четко демаркированных областей, соответствующих локальным зонам утраты пигментного эпителия сетчатки (RPE). Влажная AMD связана с неоваскуляризацией сосудистой оболочки, вызывающей потерю целостности мембраны Бруха и рост сосудов в сетчатке, где они могут часто вызывать кровоизлияние. Эта утечка вызывает перманентное поражение клеток сетчатки, которые отмирают и создают слепые пятна в центральном зрении.
Врожденная иммунная система человека состоит из пути активации комплемента. Путь активации комплемента служит для защиты против пиогенной бактериальной инфекции, соединяя врожденный и адаптивный иммунитет, и удаляя продукты иммунных комплексов и воспалительного повреждения. Комплемент представляет собой систему более чем из 30 белков, задействованных в каскадных реакциях в плазме и клеточных поверхностях. Система комплемента и ее компоненты вовлечены в различные иммунные процессы. Например, комплекс комплемента С5Ь-9, также называемый терминальным комплексом или комплексом мембранной атаки (MAC), играет важную роль в гибели клеток,
вызывая повреждения проницаемости мембран.
Существуют три известных пути активации комплемента: классический, лецитиновый и альтернативный пути. Все три пути ведут к расщеплению СЗ СЗ-конвертазой и последующему расщеплению С5 С5-конвертазой, высвобождая СЗа, С5а и С5Ь. Фактор Р представляет собой ключевой регулятор альтернативного пути комплемента. Полагают, что он выполняет две основные функции in vivo. Во-первых, фактор Р стабилизирует СЗ- и С5-конвертазы связыванием с СЗЬ фермента конвертазы и, таким образом, продлевает период полужизни СЗ-конвертазы. Во-вторых, фактор Р может определить, какая клетка будет лизирована прикреплением к клеточной поверхности и функционированием в качестве матрицы, на которой могут образовываться конвертазы, приводя к активации альтернативного пути комплемента и лизису клетки.
В недавно опубликованной работе было показано, что компоненты СЗ и С5 комплемента представляют собой основные составляющие друз у пациентов с AMD. Mulling, R.F. et al.
(2 000) FASEB J 14, 835-46. Было сделано предположение, что их присутствие, а также присутствие комплекса мембранной атаки
(MAC) C5b-9 и других реактивных белков острой фазы в клетках RPE, покрывающих друзы, вовлечены в процесс, который может запустить активацию комплемента и возникновение MAC. Johnson, L et al. (2001) Exp Eye Res 73, 887-896. Таким образом, имеется все больше свидетельств того, что компоненты комплемента являются не более чем медиаторами врожденного иммунитета.
Для ингибирования прогрессирования сухой AMD во влажную AMD назначали особую диету. В настоящее время утвержденные FDA способы лечения влажной AMD включают только фотодинамическую терапию (PDT), аптамер против VEGF (сосудистого эндотелиального фактора роста), такой как пегаптаниб, и антитело против VEGF -ранимизумаб. Эти лекарственные средства или способы лечения обычно назначают пациентам, у которых уже имеется существенная потеря зрения.
Сохраняется потребность в разработке эффективного способа лечения AMD, в частности, сухой AMD для замены или дополнения
современных способов лечения. В частности, существует потребность в способах лечения, которые могут обеспечить раннее выявление, профилактику потери зрения или его восстановление. Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывается с фактором Р человека или яванского макака, где указанное антитело связывается с доменом TSR5 (SEQ ID N0:406). Например, описанные в настоящем описании антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с областью домена TSR5, содержащей последовательность SEQ ID N0:407, более конкретно, указанные антитела также связывают область домена TSR5 фактора Р, содержащую аминокислотную последовательность KSISC (SEQ ID N0:408). В определенных вариантах осуществления выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с эпитопом фактора Р, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID N0:407. В других вариантах осуществления выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с эпитопом фактора Р, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID N0:408.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связывают фактор Р с KD, равном 1,2 нМ или меньше. Например, описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут связываться с фактором Р человека или яванского макака с KD, равном 1,1 нМ или меньше, равном 1 нМ или меньше, равном 60 0 пМ или меньше, равном 50 0 пМ или меньше, равном 4 00 пМ или меньше, равном 300 пМ или меньше, равном 2 00 пМ или меньше, равном 100 пМ или меньше, равном 7 5 пМ или меньше, равном 50 пМ или меньше, равном 4 0 пМ или меньше, равном 3 0 пМ или меньше, равном 2 0 пМ или меньше или равном 10 пМ или меньше.
Аффинность связывания описанных в настоящем описании выделенных антител и антигенсвязывающих фрагментов можно определить титрованием раствора до равновесной концентрации (SET) . Способы SET известны в данной области и более подробно описаны ниже. Альтернативно, аффинность связывания описанных в
настоящем описании выделенных антител или фрагментов можно определить анализом с использованием оптического биосенсора Biacore. Способы кинетических анализов Biacore известны в данной области и более подробно описаны ниже.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела и антигенсвязывающие фрагменты можно использовать для ингибирования альтернативного пути комплемента. Например, выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может ингибировать альтернативный путь комплемента по данным гемолитического анализа in vitro при IC50 равной 25 нМ или меньше, равной 2 0 нМ или меньше, равной 16 нМ или меньше, равной 15 нМ или меньше, равной 14 нМ или меньше, равной 13 нМ или меньше, равной 12 нМ или меньше, равной 11 нМ или меньше, равной 10 нМ или меньше, равной 9 нМ или меньше, равной 8 нМ или меньше, равной 7 нМ или меньше. Более конкретно, описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать альтернативный путь комплемента у человека по данным гемолитического анализа in vitro при IC50 равном 16 нМ или меньше, или равном 9 нМ или меньше.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать альтернативный путь комплемента по данным анализа отложения СЗЬ in vitro при IC50 равной 10 нМ или меньше, равной 7 нМ или меньше, равной б нМ или меньше, равной 5 нМ или меньше, равной 4 нМ или меньше, равной 3 нМ или меньше, равной 2 нМ или меньше, равной 1 нМ или меньше, равной 15 нМ или меньше, равной 1 нМ или меньше, равной 0,5 нМ или меньше, или равной 0,1 нМ или меньше. Более конкретно, описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать альтернативный путь комплемента у человека, по данным анализа отложения СЗЬ in vitro при IC50 равной 3 нМ или меньше или равной 2 нМ или меньше.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать альтернативный путь комплемента при IC50 равной 25 нМ или меньше, равной 20 нМ
или меньше, равной 15 нМ или меньше, равной 10 нМ или меньше, равной 9 нМ или меньше, равной 8 нМ или меньше, равной 7 нМ, или равной б нМ или меньше, по данным измерения отложения комплекса мембранной атаки комплемента. Более конкретно, выделенные антитела или их фрагмент, как описано в настоящем описании, могут ингибировать альтернативный путь комплемента у человека при IC50 равной 25 нМ или меньше или равной 7,5 нМ или меньше, по данным измерения отложения комплекса мембранной атаки комплемента.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать альтернативный путь комплемента при IC50 равной 80 нМ или меньше, равной 50 нМ или меньше, равной 4 5 нМ или меньше или равной 35 нМ или меньше, по данным измерения генерированием СЗа.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут также ингибировать альтернативный путь комплемента при IC50 равной 8 0 нМ или меньше, равной 50 нМ или меньше, равной 4 5 нМ или меньше, или равной 35 нМ или меньше, по данным измерения генерированием iC3b.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут также ингибировать альтернативный путь комплемента при IC50 равной 8 0 нМ или меньше, равной 50 нМ или меньше, равной 4 5 нМ или меньше, или равной 35 нМ или меньше, по данным измерения генерированием С5а.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут также ингибировать альтернативный путь комплемента при IC50 равной 8 0 нМ или меньше, равной 50 нМ или меньше, равной 4 5 нМ или меньше, или равной 35 нМ или меньше, по данным измерения генерированием С5Ь.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут также ингибировать альтернативный путь комплемента дестабилизацией и/или блокированием активности СЗ- и/или С5-конвертазы, по данным
измерения уменьшения продукции СЗа, СЗЬ, iC3b, С5а и/или С5Ь.
Описанные в настоящем описании выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут также ингибировать генерирование С5а при IC50 равной 80 нМ или меньше, равной 50 нМ или меньше, равной 4 5 нМ или меньше или равной 35 нМ или меньше.
Выделенные антитела или их антигенсвязывающий фрагмент могут также блокировать связывание фактора Р с СЗЬ и/или предотвращать связывание фактора Р с клеточной поверхностью или с ДНК или олигонуклеотидами.
В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое специфически связывается с фактором Р человека, яванского макака и/или кролика. В дополнительном аспекте выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с антителом или антигенсвязывающим фрагментом, представленными в таблице 1.
Выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, как описано в настоящем описании, могут представлять собой моноклональные антитела, антитела человека или гуманизированные антитела, химерные антитела, одноцепочечные антитела, фрагменты Fab, фрагменты Fv, фрагменты F(ab')2 или фрагменты ScFv и/или изотипы IgG.
Выделенные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, как описано в настоящем описании, также могут содержать каркас, где аминокислота в каркасе антитела замещена соответствующими последовательностями VH или VL зародышевой линии человека.
В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту с последовательностями тяжелой и легкой цепи Fab, описанными в таблице 1. Например, выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может иметь последовательности тяжелой и легкой цепи Fab NVS9 62, NVS9 63, NVS9 64, NVS9 65, NVS966, NVS967, NVS962-G, NVS962-S, NVS962-T, NVS962-Q, NVS962-S31A, NVS965-Q, NVS965-S, NVS965-T, NVS804, NVS805, NVS806, NVS807 или NVS808.
В дополнительном аспекте изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту с последовательностями вариабельного домена тяжелой и легкой цепи Fab, описанными в таблице 1. Например, выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может иметь последовательность вариабельного домена тяжелой и легкой цепи Fab NVS9 62, NVS9 63, NVS964, NVS965, NVS966, NVS967, NVS962-G, NVS962-S, NVS962-T, NVS962-Q, NVS962-S31A, NVS965-Q, NVS965-S, NVS965-T, NVS804, NVS805, NVS806, NVS807 или NVS808.
Изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который содержит CDR1 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183, 197, 211, 225, 239, 253 и 2 67; CDR2 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86, 100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240, 254 и 268; и CDR3 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171, 185, 199, 213, 227, 241, 255 и 269, где выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с фактором Р человека. В другом аспекте выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDR1 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256, и 270; CDR2 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 257 и 271; и CDR3 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 и 272.
Изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который содержит CDR1 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256 и 270; CDR2 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117,
131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 257 и 271; и CDR3 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 и 272, где выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с фактором Р человека.
Изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывает фактор Р, имеющий HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:1, 2, 3, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:4, 5, 6; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:15, 16, 17, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:18, 19, 20; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:29, 30, 31, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:32, 33, 34; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:43, 44, 45, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:46, 47, 48; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:57, 58, 59, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:60, 61, 62; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:71, 72, 73, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:74, 75, 7 6; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:85, 86, 87, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:88, 89, 90; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:99, 100, 101, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:102, 103, 104; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:113, 114, 115, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:116, 117, 118; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:127, 128, 129, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:130, 131, 132; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:141, 142, 143, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:144, 145, 14 6; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где
HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:155, 156, 157, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:158, 159, 160; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:169, 170, 171, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:172, 173, 174; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:183, 184, 185, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:186, 187, 188; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:197, 198, 199, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:200, 201, 202; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:211, 212, 213, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:214, 215, 216; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:225, 226, 227, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:228, 229, 230; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:239, 240, 241, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:242, 243, 244; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:253, 254, 255, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:256, 257, 258; или HCDR1, HCDR2, HCDR3 и LCDR1, LCDR2, LCDR3, где HCDR1, HCDR2, HCDR3 содержат SEQ ID N0:267, 268, 269, и LCDR1, LCDR2, LCDR3 содержат SEQ ID N0:270, 271, 272.
В одном из вариантов осуществления изобретения выделенное
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит
последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, выбранную
из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91,
105, 1 19, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и
273. В другом варианте осуществления выделенное антитело или
антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит
последовательность вариабельного домена легкой цепи, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта для фактора Р. В дополнительном варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит
последовательность вариабельного домена легкой цепи, выбранную из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274, где указанное выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает фактор Р.
Изобретение также относится к выделенному антителу или его
антигенсвязывающему фрагменту, который включает
последовательность вариабельного домена легкой цепи, выбранную
из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92,
106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и
274, где указанное выделенное антитело или его
антигенсвязывающий фрагмент связывает фактор Р человека. В
одном из вариантов осуществления выделенное антитело или
антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит
последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта для фактора Р.
В другом варианте осуществления изобретения выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают фактор Р, могут иметь вариабельные домены тяжелой и легкой цепей, содержащие последовательности SEQ ID N0:7 и 8; 21 и 22; 35 и 36; 49 и 50; 63 и 64; 77 и 78; 91 и 92; 104 и 105; 118 и 119; 132 и 133; 146 и 147; 160 и 161; 174 и 175; 188 и 189; 202 и 203; 216 и 217; 230 и 231; 244 и 245; 258 и 259 или 272 и 273, соответственно.
Изобретение дополнительно относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое включает вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичный последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и 273, где указанное антитело связывается с фактором Р. В одном аспекте выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также включает вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере на 95% идентичный последовательности, выбранной из группы, состоящей
из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274.
В другом варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут включать вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичный последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176,
190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274, где указанное антитело связывает фактор Р.
В другом варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с фактором Р, могут иметь тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177,
191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275. В дополнительном варианте осуществления выделенное антитело также включает легкую цепь, которая может комбинироваться с тяжелой цепью, с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р человека. В дополнительном варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь, с последовательностью, содержащей SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 2 62 или 27 6.
Изобретение, кроме того, относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который включает тяжелую цепь, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 2 61 и 275, где указанное антитело связывается с фактором Р. В одном аспекте выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также включает легкую цепь, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 и 276.
Изобретение, кроме того, относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который включает легкую цепь, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности,
выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 2 61 и 275, где указанное антитело связывает фактор Р.
Изобретение также относится к композициям, содержащим описанное в настоящем описании выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, а также к композициям антител в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. В частности, изобретение дополнительно включает фармацевтические композиции, содержащие антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, представленные в таблице 1, такие как, например антитело NVS962, NVS963, NVS964, NVS965, NVS966, NVS967, NVS962-G, NVS962-S, NVS962-T, NVS962-Q, NVS962-S31A, NVS965-Q, NVS965-S, NVS965-T, NVS804, NVS805, NVS806, NVS807 или NVS808. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинацию двух или более выделенных антител или их антигенсвязывающих фрагментов, представленных в таблице 1.
Изобретение также относится к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей последовательность, кодирующую полипептид, который включает вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичный последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119,
133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и 273. Изобретение также относится к выделенной нуклеиновой
кислоте, содержащей последовательность, кодирующую полипептид, который включает вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичный последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120,
134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274. Изобретение также относится к вектору, который включает
одну или несколько описанных в настоящем описании молекул нуклеиновой кислоты.
Изобретение также относится к выделенной клетке-хозяину, которая включает последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую тяжелую цепь описанного выше антитела, и вторую последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую легкую цепь описанного выше антитела, где указанные последовательности ДНК
функционально связаны с промотором и способны экспрессироваться в клетке-хозяине. Предусматривается, что антитело может представлять собой моноклональное антитело человека. Также предусматривается, что клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, кроме человека.
Изобретение также относится к способу ингибирования опосредованной комплементом гибели клеток, включающему стадию приведения в контакт клетки с эффективным количеством композиции, содержащей описанное в настоящем описании выделенное антитело или его антигенсвязывающие фрагменты. Предусматривается, что клетка представляет собой клетку человека. Дополнительно предусматривается, что клетка находится у индивида. Кроме того, предусматривается, что индивидом является человек.
Изобретение, кроме того, относится к способу ингибирования альтернативного пути комплемента в клетке, включающему стадию приведения в контакт клетки с эффективным количеством композиции, содержащей выделенное антитело, описанное в настоящем описании, или его антигенсвязывающие фрагменты. В одном аспекте предусматривается, что клетка представляет собой клетку человека. Дополнительно предусматривается, что клетка находится у индивида. Кроме того, предусматривается, что индивидом является человек.
Изобретение также относится к способу ингибирования образования комплекса мембранной атаки в клетке, включающему стадию приведения в контакт клетки с эффективным количеством композиции, содержащей выделенное описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающие фрагменты. Предусматривается, что клетка представляет собой клетку человека. Дополнительно предусматривается, что клетка находится у индивида. Кроме того, предусматривается, что индивидом является человек.
Любое из указанных выше выделенных антител или их антигенсвязывающих фрагментов может представлять собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
В одном аспекте изобретение относится к первому антителу
или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывает фактор Р, и ко второму антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который связывает С5, где указанная комбинация ингибирует альтернативный путь комплемента. В одном аспекте первое и второе антитела могут находиться в комбинации в виде композиции.
Такую комбинацию можно использовать для ингибирования глазного воспаления. Глазное воспаление можно определить, измеряя накопление нейтрофилов и/или рекрутирование макрофагов в сетчатке.
В одном аспекте такую комбинацию можно использовать для ингибирования накопления нейтрофилов в сетчатке или рекрутирования макрофагов в сетчатке.
В одном аспекте антитело в такой комбинации, которое связывает фактор Р, связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:408. Альтернативно или в комбинации, такое антитело связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:407.
В дополнительном аспекте комбинация антитела или его антигенсвязывающих фрагментов, которые связывают фактор Р и С5, включают первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранный из таблицы 1, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранный из таблицы 2. В одном аспекте первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает такой же эпитоп, каким является антитело, описанное в таблице 1, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает такой же эпитоп, каким является антитело, описанное в таблице 2.
В одном аспекте изобретение относится к первому антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, который включает CDR1, 2, 3 тяжелой цепи, и CDR1, 2, 3 легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из а) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:4, 5 и б, соответственно; b) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:15, 16 и 17, соответственно, и вариабельная область легкой цепи LCDR1, LCDR2, и LCDR3 SEQ ID N0:18, 19, и
20, соответственно; с) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:29, 30 и 31, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:32, 33, и 34, соответственно; d) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:43, 44 и 45, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:46, 47 и 48, соответственно; е) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:57, 58 и 59, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:60, 61 и 62, соответственно; f) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:71, 72 и 73, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:74, 75 и 76, соответственно; д) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:85, 86 и 87, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:88, 89 и 90, соответственно; h) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:99, 100 и 101, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:102, 103 и 104, соответственно; i) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:113, 114 и 115, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:116, 117 и 118, соответственно; j) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:127, 128 и 129, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:130, 131 и 132, соответственно; к) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:141, 142 и 143, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:144, 145 и 146, соответственно; 1) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:155, 156 и 157, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:158, 159 и 160, соответственно; т) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:169, 170 и 171, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3
легкой цепи SEQ ID N0:172, 173 и 174, соответственно; п) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:183, 184 и 185, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:186, 187 и 188, соответственно; о) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:197, 198 и 199, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:200, 201 и 202, соответственно; р) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:211, 212 и 213, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:214, 215 и 216, соответственно; q) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:225, 226 и 227, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:228, 229 и 230, соответственно; г) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:239, 240 и 241, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:242, 243 и 244, соответственно; s) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:253, 254 и 255, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:256, 257 и 258, соответственно; и t) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:267, 268 и 269, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:270, 271 и 272, соответственно, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR1, 2, 3 тяжелой цепи и CDR1, 2, 3 легкую цепь, выбранную из группы, состоящей из: а) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:410, 411 и 412, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:413, 414 и 415, соответственно; Ь) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:426, 427 и 428, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:429, 430 и 431, соответственно; с) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:442, 443 и 444, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3
легкой цепи SEQ ID N0:445, 446 и 447, соответственно; d) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:426, 458 и 428, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:429, 430 и 459, соответственно; и е) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:470, 471 и 472, соответственно, и вариабельной области LCDR1, LCDR2, и LCDR3 легкой цепи SEQ ID N0:473, 474 и 475, соответственно.
В одном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности по меньшей мере на 90% идентичные SEQ ID N0:7 и 8; SEQ ID N0:21 и 22; SEQ ID N0:35 и 36; SEQ ID N0:49 и 50; SEQ ID N0:63 и 64; SEQ ID N0:77 и 78; SEQ ID N0:91 и 92; SEQ ID N0:105 и 106; SEQ ID N0:1 19 и 120; SEQ ID N0:133 и 134; SEQ ID N0:147 и 148; SEQ ID N0:161 и 162; SEQ ID N0:175 и 176; SEQ ID N0:189 и 190; SEQ ID N0:203 и 204; SEQ ID N0:217 и 218; SEQ ID N0:231 и 232; SEQ ID N0:245 и 246; SEQ ID N0:259 и 260 или SEQ ID N0:273 и 274, соответственно, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 90% идентичные SEQ ID N0:416 и 417; SEQ ID N0:432 и 433; SEQ ID N0:448 и 449; SEQ ID N0:460 и 461 или SEQ ID N0:476 и 477, соответственно.
В одном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности, выбранные из SEQ ID N0:7 и 8; SEQ ID N0:21 и 22; SEQ ID N0:35 и 36; SEQ ID N0:49 и 50; SEQ ID N0:63 и 64; SEQ ID N0:77 и 78; SEQ ID N0:91 и 92; SEQ ID N0:105 и 106; SEQ ID N0:119 и 120; SEQ ID N0:133 и 134; SEQ ID
N0:147 и 148; SEQ ID N0:161 и 162; SEQ ID N0:175 и 176; SEQ ID
N0:189 и 190; SEQ ID N0:203 и 204; SEQ ID N0:217 и 218; SEQ ID
N0:231 и 232; SEQ ID N0:245 и 246; SEQ ID N0:259 и 260 или SEQ
ID N0:273 и 274, соответственно, и где второе антитело или его
антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области
тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные
последовательности, выбранные из SEQ ID N0:416 и 417; SEQ ID N0:432 и 433; SEQ ID N0:448 и 449; SEQ ID N0:460 и 461 или SEQ ID N0:476 и 477, соответственно.
В дополнительном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающим фрагментам (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции) , где (а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175,
189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273, и дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, где указанную вариабельную область тяжелой цепи и указанную вариабельную область легкой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) , где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID N0:416, 432, 448, 460 или 476, и дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, где указанную вариабельную область тяжелой цепи и указанную вариабельную область легкой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5. В дополнительном аспекте первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176,
190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID N0:417, 433, 449, 461 или 4 7 7.
В дополнительном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где
(а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274, и дополнительно содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую вариабельный домен легкой цепи, который содержит SEQ ID N0:417, 433, 449, 461 или 477, и дополнительно содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5.
В одном из аспектов изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающим фрагментам (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где
(а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержит легкую цепь, где тяжелую цепь и легкую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь SEQ ID N0:418, 434, 450, 462 или 478, и дополнительно содержит легкую цепь, где тяжелую цепь и легкую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5. В дополнительном аспекте первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:419, 435, 451, 463, или 479.
В одном из аспектов изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающим фрагментам (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где
(а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108,
122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, и дополнительно содержит тяжелую цепь, где легкую цепь и тяжелую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или 479, и дополнительно содержит тяжелую цепь, где легкую цепь и тяжелую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5.
В одном из аспектов изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции) , где
(а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:418, 434, 450, 462 или 47 8, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или 479.
В еще одном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где
(а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 2 62 или 27 6, и где второе антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:418, 434, 450, 462 или 47 8, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или 4 7 9.
В дополнительном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или их антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции), где (а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9 и 10, 23 и 24, 37 и 38, 51 и 52, 65 и 66, 79 и 80, 93 и 94, 107 и 108, 121 и 122, 135 и 136, 149 и 150, 163 и 164, 177 и 178, 191 и 192, 205 и 206, 219 и 220, 233 и 234, 247 и 248, 261 и 262 или 275 и 276, соответственно; и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:418 и 419, 434 и 435; 450 и 451; 462 и 463 или 478 и 479, соответственно.
В еще одном аспекте изобретение относится к первому и второму антителу или его антигенсвязывающему фрагменту (которые могут быть представлены в комбинации в виде композиции) , где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:9 и 10, 23 и 24, 37 и 38, 51 и 52, 65 и 66, 79 и 80, 93 и 94, 107 и 108, 121 и 122, 135 и 136, 149 и 150, 163 и 164, 177 и 178, 191 и 192, 205 и 206, 219 и 220, 233 и 234, 247 и 248, 261 и 262 или 275 и 276, соответственно; и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID N0:418 и 419, 434 и 435; 450 и 451; 462 и 463 или 478 и 479, соответственно.
Изобретение дополнительно относится к выделенной молекуле
нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную
последовательность, кодирующую первое и/или второе антитело или
его антигенсвязывающий фрагмент, как описано в настоящем описании. Такая последовательность нуклеиновой кислоты может быть введена в вектор, который, в свою очередь, может быть введен в клетку-хозяина, которая в одном из аспектов способна экспрессировать такую последовательность нуклеиновой кислоты.
Изобретение дополнительно относится к способу лечения возрастной дегенерации желтого пятна у индивида, включающему введение указанному индивиду эффективного количества первого и второго антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, либо отдельно, либо в комбинации в виде композиции. Индивидом может являться человек.
Изобретение дополнительно относится к способу ингибирования альтернативного пути комплемента у индивида, включающему введение указанному индивиду эффективного количества первого и второго антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или отдельно, или в комбинации в виде композиции. Индивидом может являться человек.
Определения
Если не указано иное, все используемые в настоящем описании технические и научные термины имеют значение, понятное среднему специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение.
Используемый в настоящем описании термин "антитело" означает полноразмерные антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент (т.е. "антигенсвязывающую часть") или одиночные цепи. Полноразмерное антитело представляет собой гликопротеин, содержащий по меньшей мере две тяжелых (Н) цепи и две легких
(L) цепи, взаимно соединенные дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи
(обозначаемой в настоящем описании аббревиатурой VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, CHI, СН2 и СНЗ. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (обозначаемой в настоящем описании аббревиатурой VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Области VH и VL могут быть дополнительно
подразделены на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), перемежающиеся с областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (FR) . Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константная область антитела может опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (Clq) классической системы комплемента.
Используемый в настоящем описании термин
"антигенсвязывающая часть" или "антигенсвязывающий фрагмент" антитела относится к одному или более фрагментам интактного антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с данным антигеном (например, фактором Р) . Антигенсвязывающие функции антитела могут выполняться фрагментами интактного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином антигенсвязывающая часть или антигенсвязывающий фрагмент антитела, включают фрагмент Fab, моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН1; фрагмент F(ab)2/ бивалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанные дисульфидным мостиком в шарнирной области; фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН1; фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного "плеча" антитела; фрагмент однодоменного антитела (dAb) (Ward et al. , 1989 Nature 341 :544-54б), который состоит из домена VH или домена VL; и выделенную определяющую комплементарность область (CDR).
Кроме того, хотя два домена фрагмента Fv, VL и VH, кодируются отдельными генами, они могут быть объединены с помощью рекомбинантных методов искусственным пептидным линкером, который делает возможность их получения в виде одной белковой цепи, в которой области VL и VH образуют пару моновалентных молекул (известных как одноцепочечный Fv (scFv);
см., например, Bird et al., 1988 Science 242:423-426; и Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883). Такие одноцепочечные антитела включают одну или более антигенсвязывающих частей или фрагментов антитела. Эти фрагменты антитела получают, используя обычные технологии, известные специалистам в данной области, и проводят скрининг ферментов на возможность их использования таким же образом как интактные антитела.
Антигенсвязывающие фрагменты могут быть также введены в однодоменные антитела, макситела, минитела, интратела, диатела, триатела, тетратела, v-NAR и бис-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136) . Антигенсвязывающие части антитела можно пересаживать в каркасы на основе полипептидов, таких как фибронектин III типа (Fn3)
(см. патент США 6703199, в котором описаны полипептидные монотела фибронектина).
Антигенсвязывающие фрагменты могут быть введены в одноцепочечную молекулу, содержащую пару тандемных сегментов Fv
(VH-CH1-VH-CH1), которые вместе с полипептидами комплементарной легкой цепи образуют пару антигенсвязывающих областей (Zapata et al., 1995 Белок Eng. 8 (10) :1057-1062; и патент США 5641870).
Используемый в настоящем описании термин "аффинность" относится к силе взаимодействия между антителом и антигеном в одиночных антигенных сайтах. В пределах каждого антигенного сайта вариабельная область "плеча" антитела взаимодействует посредством слабых нековалентных сил с антигеном в многочисленных сайтах; чем больше взаимодействий, тем сильнее аффинность. Используемый в настоящем описании термин "высокая аффинность" в отношении IgG антитела или его фрагмента
(например, фрагмента Fab) относится к антителу, имеющему KD 10" 8М или меньше, 10~9М или меньше, или 10~10М или 10_11М или меньше, или 10~12М или меньше, или 10~13М или меньше, в отношении антигена-мишени. Однако высокая аффинность связывания может варьироваться к другим изотипам антитела. Например, высокая аффинность связывания в отношении изотипа IgM относится к антителу, имеющему KD 10~7М или меньше или 10~8М или меньше.
Термин "аминокислота" относится к природным и
синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и
миметикам аминокислот, которые функционируют так же как
природные аминокислоты. Природные аминокислоты представляет
собой аминокислоты, которые кодируются генетическим кодом, а
также такие аминокислоты, которые позднее модифицируются,
например, гидроксипролин, у-карбоксиглутамат и О-фосфосерин.
Аналоги аминокислот относятся к соединениям, которые имеют
такую же базовую химическую структуру, как и природная
аминокислота, т.е. альфа-углерод, который связан с водородом,
карбоксильную группу, аминогруппу и группу R, например,
гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид,
метионинметилсульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные группы R (например, норлейцин) или модифицированные пептидные основные цепи, но сохраняют такую же базовую химическую структуру как природная аминокислота. Миметики аминокислот относятся к химическим соединениям, которые имеют структуру, отличающуюся от общей химической структуры аминокислоты, но функционируют таким же образом, как природная аминокислота.
Используемый в настоящем описании термин "специфичность связывания" относится к способности комбинирующего отдельные антитела сайта, взаимодействовать только с одной антигенной детерминантой.
Фраза "специфически (или селективно) связывается" с антителом (например, антителом, связывающим фактор Р) относится к реакции связывания, которая определяется присутствием когнатного антигена (например, фактора Р человека или фактора Р яванского макака) в гетерогенной популяции белков и других биологических веществ. Фразы "антитело, распознающее антиген" и "антитело, специфичное в отношении антигена" используются в настоящем описании взаимозаменяемо с термином "антитело, которое специфически связывается с антигеном".
Термин "состояния или расстройства, связанные с дегенерацией желтого пятна" относится к любому из ряда состояний, при котором происходит дегенерация или развивается
дисфункция желтого пятна сетчатки, например, как следствие уменьшенного роста клеток желтого пятна, увеличенной гибели или перегруппировки клеток желтого пятна (например, клеток RPE) , потери нормальной биологической функции или комбинации этих явлений. Дегенерация желтого пятна приводит к потере целостности гистоархитектуры клеток и/или внеклеточной матрицы нормального желтого пятна, и/или потере функции клеток желтого пятна. Примеры расстройства, связанного с дегенерацией желтого пятна, включают AMD, дистрофию желтого пятна Северной Каролины, дистрофию глазного дна Сорсби, болезнь Старгардта, узорчатая дистрофия, болезнь Беста, доминантные друзы и malattia leventinese (радиальные друзы). Этот термин также охватывает изменения вне желтого пятна, которые возникают до или после дисфункции и/или дегенерации желтого пятна. Таким образом, "расстройство, связанное с дегенерацией желтого пятна" также широко включает любое состояние, которое изменяет или повреждает целостность или функцию желтого пятна (например, повреждение RPE или мембрану Бруха). Например, этот термин охватывает отслоение сетчатки, хориоретинальные дегенеративные изменения, дегенерацию сетчатки, дегенерацию фоторецепторов, дегенерацию RPE, мукополисахаридозы, дистрофии палочек-колбочек, дистрофии колбочек-палочек и дегенерации колбочек.
Термин "компонент комплемента", "белки комплемента" или "компонентные белки комплемента" относится к молекулам, которые задействованы в активации системы комплемента. Компоненты классического пути включают, например, Clq, Clr, Cls, С4, С2, СЗ, С5, Сб, С7, С8, С9 и комплекс С5Ь-9 (комплекс мембранной атаки: MAC). Компоненты альтернативного пути включают, например, фактор В, фактор D, фактор Н, фактор I и пропердин.
Термин "виды клеточной активности, регулируемые путем активации комплемента" включает повреждение клеток, вызванное комплексом атаки С5Ь-9, изменения сосудистой проницаемости, сокращение и миграцию гладкомышечных клеток, пролиферацию Т клеток, иммунную адгезию, агрегацию дендритных клеток, моноцитов, гранулоцитов и тромбоцитов, фагоцитоз, миграцию и активацию нейтрофилов (PMN) и макрофагов.
Кроме того, активация путей комплемента приводит к
усилению провоспалительной реакции, что увеличивает число
побочных продуктов в пути активации комплемента. Расстройства,
связанные с активацией пути комплемента, включают нефрит,
астму, реперфузионное повреждение, гемодиализ, ревматоидный
артрит, системную красную волчанку, псориаз, рассеянный
склероз, трансплантацию, болезнь Альцгеймера, aHUS (атипичный
гемолитический уремический синдром), MPGN II
(мембранопролиферативный гломерулонефрит) или любое другое опосредованное комплементом заболевание. Расстройства, связанные с дегенерацией желтого пятна, включают AMD, дистрофию желтого пятна Северной Каролины, дистрофию глазного дна Сорсби, болезнь Старгардта, узорчатую дистрофию, болезнь Беста, доминантные друзы и malattia leventinese (радиальные друзы), изменения вне желтого пятна, которые возникают до или после дисфункции и/или дегенерации желтого пятна, отслоение сетчатки, хориоретинальные дегенеративные изменения, дегенерацию сетчатки, дегенерацию фоторецепторов, дегенерацию RPE, мукополисахаридозы, дистрофии палочек-колбочек, дистрофии колбочек-палочек и дегенерации колбочек.
Термин "химерное антитело" представляет собой молекулу антитела, в которой (а) константная область или ее часть изменена, замещена или заменена с тем, чтобы антигенсвязывающий сайт (вариабельная область) был связан с константной областью другого или измененного класса, эффекторной функции и/или вида, или совершенно другую молекулу, которая придает новые свойства химерному антителу, например, фермента, токсина, гормона, фактора роста, лекарственного средства и тому подобное; или (Ь) вариабельная область или его часть изменена, замещена или заменена вариабельной областью с другой или измененной антигенной специфичностью. Например, антитело мыши может быть модифицировано путем замены его константной области константной областью иммуноглобулина человека. Вследствие замены константной областью человека, химерное антитело может сохранять свою специфичность распознавания антигена, при этом имея сниженную антигенность для человека, по сравнению с
первоначальным антителом мыши.
Термины "белок фактора Р" или "антиген фактора Р" или "фактор Р" используются взаимозаменяемо и относятся к белку фактора Р в различных видах. Например, фактор Р человека имеет последовательность, как показано в таблице 1: SEQ ID N0:401. Фактор Р человека может быть получен из комплемента Tech, Tyler, ТХ. Фактор Р яванского макака может быть очищен из сыворотки яванского макака (протокол, адаптированный из публикации Nakano et al. , (1986) J Immunol Methods 90:77-83) . Примеры белка фактора P из других видов представлены в таблице 1, SEQ ID N0:402, 403, 404 или 405, а также связывающие белок фактора Р домены и фрагменты (например: SEQ ID N0:406, 407 или 408). Фактор Р также известен в данной области как "пропердин".
Термин "консервативно модифицированный вариант" относится
как к аминокислотной, так и к последовательностям нуклеиновых
кислот. Что касается конкретных последовательностей нуклеиновых
кислот, то консервативно модифицированные варианты относятся к
таким нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или по
существу идентичные аминокислотные последовательности, или где
нуклеиновая кислота не кодирует аминокислотную
последовательность, к по существу идентичным
последовательностям. Ввиду вырожденности генетического кода, большое число функционально идентичных нуклеиновых кислот кодируют любой заданный белок. Например, все кодоны GCA, GCC, GCG и GCU кодируют аминокислоту аланин. Таким образом, в каждом положении, где аланин определен кодоном, кодон может быть изменен любым из соответствующих описанных кодонов без изменения кодированного полипептида. Такие варианты нуклеиновых кислот являются "молчащими вариантами", которые представляют собой один вид консервативно модифицированных вариантов. Каждая описанная в настоящем описании последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, также описывает каждый возможный молчащий вариант нуклеиновой кислоты. Специалисту в данной области понятно, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (за исключением AUG, который обычно представляет собой единственный кодон для метионина, и TGG, который обычно
представляет собой единственный кодон для триптофана) может быть модифицирован для получения функционально идентичной молекулы. Соответственно, каждый молчащий вариант нуклеиновой кислоты, который кодирует полипептид, подразумевается в каждой описанной последовательности.
Для полипептидных последовательностей "консервативно модифицированные варианты" включают отдельные замены, делеции или добавления в полипептидной последовательности, которые приводят к замене аминокислоты на химически подобную аминокислоту. Таблицы консервативных замен, обеспечивающих функционально сходные аминокислоты, хорошо известны в данной области. Такие консервативно модифицированные варианты представлены в дополнение и не исключают полиморфные варианты, межвидовые гомологи и аллели по изобретению. Следующие восемь групп содержат аминокислоты, которые представляют собой консервативные замещения одной на другую: 1) аланин (А), глицин
(G); 2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е); 3) аспарагин (N) , глутамин (Q) ; 4) аргинин (R) , лизин (К) ; 5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); б) фенилаланин (F), (Y) , триптофана (W) ; 7) серии (S), треонин
(Т) ; и 8) цистеин (С), метионин (М) (см., например, монографию
Creighton, Proteins (1984)). В некоторых вариантах
осуществления термин "консервативные модификации
последовательностей" используется в отношении модификаций аминокислот, которые по существу не оказывают воздействия или значительно не изменяют характеристики связывания антитела, содержащего аминокислотную последовательность.
Термин "эпитоп" означает антигенную детерминанту белка, способную специфически связываться с антителом. Эпитопы обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи Сахаров, и обычно имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Конформационные и неконформационные эпитопы различаются тем, что связывание с первыми, но не с последними, утрачивается в присутствии денатурирующих растворителей.
Под используемым в настоящем описании термином "антитело человека" понимают антитела с вариабельными областями, в которых как каркасная, так и области CDR получены из последовательностей человеческого происхождения. Кроме того, если антитело содержит константную область, то константная область также получена из таких последовательностей человека, например, последовательностей зародышевой линии человека, или мутированных вариантов последовательностей зародышевой линии человека. Антитела человека по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями человека (например, мутации, внесенные случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo).
Термин "моноклональное антитело человека" относится к антителам, имеющим общую специфичность связывания, которые имеют вариабельные области, где как каркасная, так и CDR области получены из последовательностей человека. В одном из вариантов осуществления моноклональные антитела человека продуцируются гибридомой, которая содержит В клетку, полученную из трансгенного животного, исключая человека, например, трансгенной мыши, имеющей геном, содержащий трансген тяжелой цепи человека и трансген легкой цепи, слитый с иммортализированной клеткой.
"Гуманизированное" антитело представляет собой антитело, которое сохраняет активность антитела, не являющегося антителом человека, в то же время, являясь менее иммуногенным для людей. Это может быть достигнуто, например, удерживанием областей CDR не человека и замещением остающихся частей антитела их человеческими аналогами (т.е. константной областью, а также каркасными частями вариабельной области) . См., например, публикации Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984; Morrison и Oi, Adv. Immunol., 44:65-92, 1988; Verhoeyen et al. , Science, 239:1534-1536, 1988; Padlan, Molec. Immun., 28:489-498, 1991; и Padlan, Molec. Immun., 31:169-217, 1994. Другие примеры технологии человеческой инженерии включают, но без ограничения, технологию Хота,
описанную в патенте США 5766886.
Термины "идентичные" или процент "идентичности" в контексте двух или более нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей относятся к двум или более последовательностям или субпоследовательностям, которые являются одинаковыми. Две последовательности являются "по существу идентичными", если две последовательности имеют определенную процентную долю аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми (т.е. на 60%, необязательно на 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% являются идентичными по определенной области или, при отсутствии уточнения, по всей последовательности), при сравнении и совмещении для максимального соответствия по окну сравнения, или предназначенной области, по данным измерения с использованием одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей или ручным совмещением и визуальным анализом. Необязательно, идентичность существует по области, которая имеет длину по меньшей мере примерно 50 нуклеотидов (или 10 аминокислот) , или предпочтительнее по области, которая имеет длину от 100 до 500 или 1000 или более нуклеотидов (или 20, 50, 200 или более аминокислот).
Для сравнения последовательностей, обычно одна
последовательность действует в качестве эталонной
последовательности, с которой сравнивают тестируемые
последовательности. При использовании алгоритма сравнения
последовательностей тестируемую и эталонную последовательности
вводят в компьютер, при необходимости, обозначают координаты
субпоследовательности, и обозначают параметры программы
алгоритма последовательности. Можно использовать параметры по
умолчанию программы или можно указать альтернативные параметры.
Алгоритм сравнения последовательностей затем на основании
параметров программы рассчитывает идентичность
последовательности в процентах для тестируемой
последовательности относительно эталонной последовательности.
Используемый в настоящем описании термин "окно сравнения" включает ссылку на сегмент из ряда смежных положений, выбранный
из группы, состоящей из от 2 0 до 60 0, обычно, примерно от 50 до примерно 2 00, более обычно, примерно от 100 до примерно 150, в котором последовательность можно сравнить с эталонной последовательностью из такого же числа смежных положений после оптимального совмещения двух последовательностей. Способы совмещения последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области. Оптимальные совмещения последовательностей для сравнения можно проводить, например, алгоритмом локальной гомологии Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c, алгоритмом совмещения по гомологии Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970, методом поиска сходства Pearson and LinMan, Proc. Nat'1. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988, компьютеризированным осуществлением этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и T FAS ТА в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl), или ручным выравниванием и визуальным осмотром (см., например, публикацию Brent et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (Ringbou ed., 2003)).
Двумя примерами алгоритмов, которые пригодны для определения идентичности последовательностей и сходства последовательностей являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, которые описаны в публикациях Altschul et al., Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, 1977; и Altschul et al. , J. Mol. Biol. 215:403410, 1990, соответственно. Программное обеспечение для выполнения анализов BLAST общедоступно через Национальный Центр Биотехнологической Информации. Этот алгоритм включает сначала идентификацию пар последовательностей с наибольшей бальной оценкой (HSP) путем идентификации коротких машинных слов длины W в искомой последовательности, которые или совпадают, или соответствуют некоторому пороговому положительному баллу Т при совмещении с машинным словом такой же длины в последовательности базы данных. Т называется порогом бальной оценки соседнего машинного слова (Altschul et al., см. выше) . Эти первоначальные попадания машинных слов действуют в качестве стимулов для начала поисков более длинных HSP, содержащих их.
Попадания машинных слов распространяются в обоих направлениях
вдоль каждой последовательности насколько можно увеличить
бальную оценку кумулятивного совмещения. Кумулятивные бальные
оценки рассчитывают, используя для нуклеотидных
последовательностей параметры М (премиальный балл за пару
совпадающих остатков; всегда > 0) и N (штрафной балл за
несовпадающие остатки; всегда <0). Для аминокислотных
последовательностей используют матрицу бальной оценки для
расчета кумулятивной бальной оценки. Продолжение попаданий
машинных слов в каждом направлении останавливают, когда:
кумулятивная бальная оценка совмещения выпадает на количество X
из его максимальной достигнутой величины; кумулятивная бальная
оценка идет к нулю или ниже накопления одного или нескольких
совмещений остатков с отрицательными бальными оценками; или
достигнут конец любой последовательности. Параметры алгоритма
BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость
совмещения. В программе BLASTN (для нуклеотидных
последовательностей) в качестве параметров по умолчанию используют длину машинного слова (W) 11, ожидание (Е) 10, М=5, N=-4 и сравнение обеих нитей. Для аминокислотных последовательностей в программе BLASTP в качестве параметров по умолчанию используют длину машинного слоа 3 и ожидание (Е) 10, и в матрице бальной оценки BLOSUM62 (см. Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915, 1989) - совмещение (В) 50, ожидание (E) 10, M=5, N=-4 и сравнение обеих нитей.
Алгоритм BLAST также выполняет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787, 1993) . Одним показателем сходства, обеспечиваемым алгоритмом BLAST, является наименьшая суммарная вероятность (P(N)), которая обеспечивает показатель вероятности, с которой могло бы случайно произойти совпадение между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями. Например, нуклеиновая кислота считается сходной с эталонной последовательностью, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет
менее чем примерно 0,2, предпочтительно, менее чем примерно 0,01 и, наиболее предпочтительно, менее чем примерно 0,001.
Процент идентичности двух аминокислотных
последовательностей можно также определить, используя алгоритм Е. Meyers и W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988), который был включен в программу ALIGN (версия 2.0), с использованием таблицы массы остатков РАМ12 0, штраф за длину гэпа 12 и штраф за гэп 4. Кроме того, процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определить, используя алгоритм Needleman и Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970), который был включен в программу GAP в пакете программного обеспечения GCG (доступного на сайте интернета gcg.com) с использованием или матрицы Blossom 62, или матрицы РАМ250 и массы гэпа 16, 14, 12, 10, 8, б или 4 и массы длины 1, 2, 3, 4, 5 или б.
Кроме отмеченного выше процента идентичности
последовательности, другим указанием на то, что две нуклеиновые кислоты последовательности или полипептиды являются по существу идентичными, состоит в том, что полипептид, кодируемый первой нуклеиновой кислотой, является иммунологически перекрестно реактивным с антителами, продуцированными против полипептида, кодируемого второй нуклеиновой кислотой, как описано ниже. Таким образом, полипептид обычно является по существу идентичными второму полипептиду, например, когда два пептида отличаются только консервативными замещениями. Другим указанием на то, что две нуклеиновые кислоты последовательности являются по существу идентичными, состоит в том, что две молекулы или их комплементы гибридизируются друг с другом в жестких условиях, как описано ниже. Еще одним указанием на то, что две нуклеиновые кислоты последовательности являются по существу идентичными, состоит в том, что одни и те же праймеры можно использовать для амплификации последовательности.
Термин "ингибируют (или ингибирует) альтернативный путь комплемента" относится к способности антитела против фактора Р препятствовать активации альтернативного пути комплемента. В частности, термин "ингибировать" относится к статистически
значимому уменьшению (т.е. р <0,05) альтернативной активации комплемента, по данным измерения одним или более анализами, как описано в настоящем описании, включая образование MAC, гемолитический анализ или анализ отложения СЗЬ в клетке или исследуемом объекте после контакта с антителом против фактора Р или его фрагмента, как описано в настоящем описании, относительно контроля. Используемый в настоящем описании термин "ингибируют (или ингибирует) альтернативный путь активации комплемента" может также относиться к клинически релевантному улучшению функции зрения или анатомии сетчатки после описанного в настоящем описании лечения антителом против фактора Р у пациента с возрастной дегенерацией желтого пятна, как описано ниже.
Термин "выделенное антитело" относится к антителу, которое по существу не содержит других антител, имеющих другие антигенные специфичности (например, выделенное антитело, которое специфически связывает фактор Р, по существу не содержит антител, которые специфически связывают антигены, кроме фактора Р). Однако выделенное антитело, которое специфически связывает фактор Р, обладает перекрестной реактивностью в отношении других антигенов. Кроме того, выделенное антитело может по существу не содержать другой клеточный материал и/или химические вещества.
Термин "изотип" относится к классу антител (например, IgM, IgE, IgG, такой как IgGl или IgG4), которые обеспечены генами константной области тяжелой цепи. Изотип также включает модифицированные варианты одного из этих классов, где модификации были осуществлены для изменения функции Fc, например, для усиления или уменьшения эффекторных функций или связывания с Fc-рецепторами.
Используемый в настоящем описании термин "Kassoc" или "Ка" предназначен для обозначения скорости ассоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген, в то время как используемый в настоящем описании термин "Kdis" или "Kd" предназначен для обозначения скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Используемый в настоящем описании термин "KD"
предназначен для обозначения константы диссоциации, которую получают из отношения Kd к Ка (т.е. Kd/Ka) и выражают в виде молярной концентрации (М). Величины KD для антител можно определить с использованием способов, общепринятых в данной области. Способы определения KD антитела включают измерение поверхностного плазмонного резонанса с использованием биосенсорной системы, такой как система Biacore(r), или измерение аффинности в растворе титрованием раствора до равновесной концентрации (SET).
Используемые в настоящем описании термины "моноклональное антитело" или "композиция моноклонального антитела" относятся к препарату молекул антитела одной молекулярной композиции. Композиция моноклонального антитела проявляет одну специфичность связывания и аффинность в отношении конкретного эпитопа.
Используемый в настоящем описании термин "нуклеиновая
кислота" используется взаимозаменяемо с термином
"полинуклеотид" и относится к дезоксирибонуклеотидам или
рибонуклеотидам и их полимерам в любой из одно- или двунитевой
форме. Термин охватывает нуклеиновые кислоты, содержащие
известные нуклеотидные аналоги, или модифицированные остатки
или связи основной цепи, которые являются синтетическими,
природными и не встречающимися в природных условиях, которые
обладают такими же свойствами связывания как эталонная
нуклеиновая кислота, и которые метаболизируются сходным образом
с эталонными нуклеотидами. Примеры таких аналогов включают, но
без ограничения, фосфортиоаты, фосфорамидаты, метилфосфонаты,
хиральные метилфосфонаты, 2-0-метилрибонуклеотиды,
пептиднуклеиновые кислоты (PNA).
Если не указано иное, то конкретная последовательность нуклеиновой кислоты также косвенно охватывает ее консервативно модифицированные варианты (например, замены вырожденного кодона) и комплементарные последовательности, а также конкретно указанную последовательность. В частности, как подробно описано ниже, замена вырожденного кодона может быть достигнута получением последовательности, в которой третье положение
одного или нескольких выбранных (или всех) кодонов замещено смешанным основанием и/или остатками деоксиинозина (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; и Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994).
Термин "функционально связанный" относится к
функциональной связи между двумя или более сегментами
(например, ДНК) полинуклеотида. Обычно, термин относится к
функциональной связи транскрипционной регуляторной
последовательности с транскрибированной последовательностью.
Например, промоторная или энхансерная последовательность
функционально связана с кодирующей последовательностью, если
она стимулирует или модулирует транскрипцию кодирующей
последовательности в соответствующей клетке-хозяине или другой
экспрессионной системе. Как правило, промоторные
транскрипционные регуляторные последовательности, которые
функционально связаны с транскрибированной последовательностью,
являются физически смежными с транскрибированной
последовательностью, т.е. они являются цис-действующими. Однако некоторые транскрипционные регуляторные последовательности, такие как энхансеры, не должны быть физически смежными или расположенными непосредственно вблизи от кодирующих последовательностей, чью транскрипцию они усиливают.
Используемый в настоящем описании термин
"оптимизированная" означает, что нуклеотидная
последовательность была изменена для кодирования аминокислотной последовательности с использованием кодонов, которые являются предпочтительными при продукции клетки или организма, как правило, эукариотической клетки, например, клетка из экспрессионного набора Pichia, клетка яичников китайского хомячка (СНО) или клетка человека. Оптимизированную нуклеотидную последовательность получают методами генной инженерии для полного или максимально возможного сохранения аминокислотной последовательности, кодируемой начальной нуклеотидной последовательностью, которая также известна как "родительская" последовательность. В настоящем изобретении
оптимизированные последовательности были получены методами
генной инженерии, чтобы иметь кодоны, которые предпочтительны в
клетках млекопитающих. Однако в настоящем изобретении также
предусмотрена оптимизированная экспрессия этих
последовательностей в других эукариотических клетках.
Аминокислотные последовательности, кодированные
оптимизированными нуклеотидными последовательностями, также называются оптимизированными.
Термины "полипептид" и "белок" используются в настоящем описании взаимозаменяемо для обозначения полимера из аминокислотных остатков. Термины относятся к аминокислотным полимерам, в которых один или несколько аминокислотных остатков представляет собой искусственный химический миметик соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также природные аминокислотные полимеры и неприродные аминокислотные полимеры. Если не указано иное, то конкретная полипептидная последовательность также косвенно включает консервативно модифицированные варианты.
Используемый в настоящем описании термин "рекомбинантное антитело человека" включает все человеческие антитела, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными средствами, такие как антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным для генов иммуноглобулина человека, или гибридому, полученную из них, антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела человека, например, из трансфектомы, антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных антител человека, и антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими средствами, которые задействуют сплайсинг всего или части гена иммуноглобулина человека, последовательности в другие последовательности ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные области, в которых каркасная и CDR области получены из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Однако в определенных вариантах осуществления такие рекомбинантные
антитела человека могут быть подвергнуты мутагенезу in vitro (или когда используется животное, трансгенное для последовательностей Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo) и, таким образом, аминокислотные последовательности областей VH и VL рекомбинантного антитела представляют собой последовательности VH и VL, которые, хотя и получены из последовательностей VH и VL зародышевой линии человека и связаны с ней, могут не существовать в природных условиях в пределах репертуара антител зародышевой линии человека in vivo.
Термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин") относится к клетке, в которую был введен в рекомбинантный экспрессионный вектор. Следует понимать, что такие термины предназначены для обозначения не только конкретной обсуждаемой клетки, но и к потомству такой клетки. Поскольку определенные модификации могут происходить в последующих поколениях ввиду или мутации, или влияний внешней среды, такое потомство в действительности может не быть идентичным родительской клетке, но тем не менее, оно входит в рамки используемого в настоящем описании термина "клетка-хозяин" .
Термин "индивид" включает человека и животное, не являющееся человеком. Животные, не являющиеся человеком, включают всех позвоночных (например: млекопитающих и не млекопитающих), таких как не человекообразные приматы
(например: обезьяна яванский макак), овцы, собака, коровы, куры, земноводные и рептилии. За исключением отмеченных случаев, термины "пациент" или "индивид" используются в настоящем описании взаимозаменяемо. Используемые в настоящем описании термин "яванский макак" относятся к обезьяне яванский макак (Масаса fascicularis).
Используемый в настоящем описании термин "подвергать лечению" или "лечение" любого заболевания или расстройства
(т.е. AMD) относится в одном из вариантов осуществления к облегчению течения заболевания или расстройства (т.е. замедлению или остановке или снижению развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом
варианте осуществления "подвергать лечению" или "лечение" относится к облегчению или смягчению по меньшей мере одного физикального параметра, включая параметры, которые могут быть неощутимы пациентом. В еще одном из вариантов осуществления "подвергать лечению" или "лечение" относится к модулированию течения заболевания или расстройства, или физически (например, стабилизации выявленного симптома), физиологически (например, стабилизации физикального параметра) или как физически, так и физиологически. В еще одном из вариантов осуществления "подвергать лечению" или "лечение" относится к профилактике или задержке начала или развития или прогрессирования заболевания или расстройства. "Профилактика" в отношении к AMD означает любое действие, которое предотвращает или замедляет ухудшение зрительной функции, анатомической структуры сетчатки и/или патологического параметра AMD, как описано ниже, у пациента с риском указанного ухудшения. Более конкретно, "лечение" AMD означает любое действие, которое приводит к улучшению или сохранению зрительной функции и/или анатомической структуры сетчатки. Способы оценки лечения и/или профилактики заболевания известны в данной области и описаны в настоящем описании ниже.
Термин "вектор" предназначен для обозначения молекулы
полинуклеотида, способной транспортировать другой
полинуклеотид, с которым он был связан. Один тип вектора
представляет собой "плазмиду", которая относится к петле
кольцевой двухцепочечной ДНК, в которую могут быть лигированы
дополнительные ДНК сегменты. Другой тип вектора представляет
собой вирусный вектор, такой как аденоассоциированный вирусный
вектор (AAV или AAV2), где дополнительные ДНК сегменты могут
быть лигированы в вирусный геном. Определенные векторы способны
к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они
вносятся (например, бактериальные векторы, имеющие
бактериальное происхождение репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина после внесения в клетку-хоязина и, по средством этого, реплицированы наряду с геномом хозяина. Кроме того,
определенные векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются в настоящем описании "рекомбинантными экспрессионными векторами" (или просто "векторы экспрессии"). Как правило, векторы экспрессии", которые можно использовать в технологиях рекомбинантной ДНК, часто представлены в виде плазмид. В настоящем описании "плазмида" и "вектор" могут использоваться взаимозаменяемо, поскольку плазмида представляет собой чаще всего используемую форму вектора. Однако следует понимать, что изобретение включает такие другие формы векторов экспрессии, как вирусные векторы (например, дефективные по репликации ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), которые выполняют эквивалентные функции. Краткое описание фигур
На фиг.1 изображен сайт связывания фактора Р. На фиг.1А проиллюстрировано относительное положение домена TSR5 фактора Р и фрагментов последовательности TSR5: А, В, С и D. На фиг.1В показана последовательность TSR5 человека, совмещенного с мышиной последовательностью. Скобками указаны фрагменты последовательности TSR5. На фиг.1С проиллюстрирована связь антитела с областью В TSR5.
На фиг.2 показаны результаты гемолитического анализа, демонстрирующие ингибирование альтернативного пути комплемента в 2 0% человеческой сыворотке.
На фиг.З показана изоболограмма, построенная с использованием данных гемолитического анализа, изображенного на фиг.2.
На фиг.4 показан % ингибирования инфильтрации макрофагами на мышиной модели poly-IC (полиинозиновой-полицитидиловой кислоты), сравнивающей ингибирование антител против фактора Р и против С5 отдельно и в комбинации.
На фиг.5 показана изоболограмма, построенная с использованием данных по результатам poly-IC, изображенным на фиг.4.
Подробное описание
Настоящее изобретение частично основано на обнаружении
молекул антител, которые специфически связываются с фактором Р как человека, так и яванского макака. Изобретение относится к полноразмерным IgG, а также к их связывающим антиген фрагментам, таким как фрагменты Fab (например, см. антитела NVS965-S, NVS962-S, NVS804 и NVS807).
Соответственно, настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с фактором Р (например, фактором Р человека, фактором Р яванского макака, фактором Р крысы, фактором Р кролика), к фармацевтическим композициям, к способам их получения и к способам применения таких антител и композиций.
Антитела против фактора Р и их антигенсвязывающие фрагменты
Настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с фактором Р. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с фактором Р человека, яванского макака и/или кролика. Антитела по изобретению включают, но, не ограничиваясь ими, моноклональные антитела человека и Fab, выделенные, как описано в разделе "Примеры".
Настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р (например, фактора Р человека и/или яванского макака), где антитела включают домен VH, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273. Настоящее изобретение также относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р, где антитела включают CDR VH, имеющую аминокислотную последовательность любой из CDR VH, перечисленных в таблице 1, представленной ниже. В частности, изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р (фактора Р, например, человека и/или яванского макака), где антитела включают (или, альтернативно, состоят из) одну, две, три или более CDR VH, имеющие аминокислотную последовательность любой из CDR VH, перечисленных в таблице 1, представленной ниже.
Настоящее изобретение относится к антителам, которые
специфически связываются с белком фактора Р, где указанные антитела включают домен VL, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274. Настоящее изобретение также относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р (например, фактора Р человека и/или яванского макака), где антитела включают CDR VL, имеющую аминокислотную последовательность любой из CDR VL, перечисленных в таблице 1, представленной ниже. В частности, изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р (например, фактора Р человека и/или яванского макака), где указанные антитела включают (или, альтернативно, состоят из) одну, две, три или более CDR VL, имеющие аминокислотную последовательность любой из CDR VL, перечисленных в таблице 1, представленной ниже.
Другие антитела по изобретению включают аминокислоты, которые были мутированы, но которые все же по меньшей мере на 60, 70, 80, 85, 90 или 95% идентичны областям CDR, изображенным в последовательностях, описанных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления они включают мутантные аминокислотные последовательности, где не более чем 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот были мутированы в областях CDR, при сравнении с областями CDR, показанными в последовательности, описанной в таблице 1.
Настоящее изобретение также относится к
последовательностям нуклеиновых кислот, которые кодируют VH, VL, тяжелую цепь полной длины и легкую цепь полной длины антител, которые специфически связываются с белком фактора Р (например, фактора Р человека и/или яванского макака). Такие последовательности нуклеиновых кислот могут быть оптимизированы для экспрессии в клетках млекопитающих (например, в таблице 1 показаны оптимизированные последовательности нуклеиновых кислот для тяжелой цепи и легкой цепи антител по изобретению).
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:7
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:8
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:9
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:10
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC CACCACACCCTC СAAACA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS963
CDRH1
15/287
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
16/288
PINPYYGDAIYAQKFQG (Rabat)/NPYYGD (Chothia)
CDRH3
17/289
YYSDYMDY (Rabat)/YYSDYMDY (Chothia)
CDRL1
18/290
TGSSSNIGAGYDVH (Rabat)/SSSNIGAGYD (Chothia)
CDRL2
19/291
DNSHRPS (Rabat)/DNS (Chothia)
CDRL3
20/292
ASYDESAHS (Rabat)/YDESAHS (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGPINPYYGDAIYAQRFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTA VYYCARYYSDYMDYWGQGTLVTVSS
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAP RLLIHDNSHRPSGVPDRFSGSRSGTSASLAITGLQSEDEADYYCAS YDESAHSVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGPINPYYGDAIYAQRFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTA VYYCARYYSDYMDYWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAP RLLIHDNSHRPSGVPDRFSGSRSGTSASLAITGLQSEDEADYYCAS YDESAHSVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVC LISDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSL TPEQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:21
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTTAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCCCATCAACCCCTACTACGGCGACGCCATCTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGCGCCCGGTACTACAGCGACTACATGGACTACTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:22
CAGTCAGTGCTGACCCAGCCTCCCTCTGTGTCTGGCGCCCCTGGCC AGAGAG T GAC CAT СAG С T G СAC С G G С T С СAG СAG СAACAT С G GAG С TGGATACGACGTGCACTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCACAGCCCCT AAGCTGCTGATCCACGACAACAGCCACAGACCCAGCGGCGTGCCCG ATAGAT T СAG С G G СAG СAAGAG С G G СAC СAG С G С СAG С С T G G С CAT CACCGGCCTGCAGAGCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCAGC TACGACGAGAGCGCCCACAGCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAA CCGTCCTA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:23
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTTAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCCCATCAACCCCTACTACGGCGACGCCATCTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGCGCCCGGTACTACAGCGACTACATGGACTACTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G С AAC G T GAAT С AC AAG С С С AG С AAC AC С AAG G T G GAC AAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:24
CAGTCAGTGCTGACCCAGCCTCCCTCTGTGTCTGGCGCCCCTGGCC AGAGAG T GAC CAT СAG С T G СAC С G G С T С СAG СAG СAACAT С G GAG С TGGATACGACGTGCACTGGTATCAGCAGCTGCCCGGCACAGCCCCT AAGCTGCTGATCCACGACAACAGCCACAGACCCAGCGGCGTGCCCG ATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCACCAGCGCCAGCCTGGCCAT CACCGGCCTGCAGAGCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCAGC TACGACGAGAGCGCCCACAGCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAA CCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCC GCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGT CTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGG С AGAT AG С AG С С С С G T С AAG G С G G GAG T G GAGAC С AC С AC AC С С T С СAAACAAAG СAACAACAAG TAC G С G G С СAG СAG С TAT С T GAG С С T G AC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG CTACAGCTGCCAGGTCA С G CAT GAAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G ТТСА
NVS964
CDRH1
29/293
SHYMH (Rabat)/GYTFTSH (Chothia)
CDRH2
30/294
RINADLGDTNYAQRFQG (Rabat)/NADLGD (Chothia)
CDRH3
31/295
DGIEHGGHYYWGYLFDI (Rabat)/DGIEHGGHYYWGYLFDI (Chothia)
CDRL1
32/296
SGDSIREYYVH (Rabat)/DSIREYY (Chothia)
CDRL2
33/297
DDTNRPS (Rabat)/DDT (Chothia)
CDRL3
34/298
AAWDFSPAI (Rabat)/WDFSPAI (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGASVRVSCRASGYTFTSHYMHWVRQAPGQGLE WMGRINADLGDTNYAQRFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARDGIEHGGHYYWGYLFDIWGQGTLVTVSS
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIREYYVHWYQQKPGQAPVLV IGDDTNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCAAWDF SPAIVFGGGTKLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMHWVRQAPGQGLE WMGKINADLGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARDGIEHGGHYYWGYLFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIREYYVHWYQQKPGQAPVLV IGDDTNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCAAWDF SPAIVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPE QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:35
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCG CCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAG CCACTACATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAAGATCAACGCCGACCTGGGCGACACCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT GAC С С G G GAC AC С AG CAT С AG С AC С G С С T AC AT G GAAC T GAG С AG С С T GAGAAG С GAG GAC AC С G С С GTGTACTACTGCGCCAGGGACGGCATCGAGCACGGCGGCCACTACT ACTGGGGCTACCTGTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC CGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:36
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT СAG С T G СAG С G G С GACAG CAT С С G G GAG TAC ТА CGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTG AT С G G С GAC GACAC СAACAGAC С СAG С G G CAT С С С С GAGAGAT Т СА G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCGCCGCCTGGGACTTC AGCCCTGCCATCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:37
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCG CCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAG CCACTACATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAAGATCAACGCCGACCTGGGCGACACCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT GAC С С G G GAC AC С AG CAT С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGCGCCAGGGACGGCATCGAGCACGGCGGCCACTACT ACTGGGGCTACCTGTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC CGTGAGCTCAGCATCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTC AGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAG TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCA GCAGCTTGGGCACC СAGAC CTACATCTG СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:38
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT СAG С Т G СAG С G G С GACAG CAT С С G G GAG TAC ТА CGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTG AT С G G С GAC GACAC СAACAGAC С СAG С G G CAT С С С С GAGAGAT Т СА G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCGCCGCCTGGGACTTC AGCCCTGCCATCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTAG GTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTC TGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGT GACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCA G С С С С G T СAAG G С G G GAG T G GAGAC CACCACACCCTC СAAACAAAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G T СAC G CAT GAAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS966
CDRH1
43/299
NYWIG (Rabat)/GYSFTNY (Chothia)
CDRH2
44/300
RIDPGESLTNYAPSFQG (Rabat)/DPGESL (Chothia)
CDRH3
45/301
TGVADVDMPFAH (Rabat)/TGVADVDMPFAH (Chothia)
CDRL1
46/302
SGDNLGSYYVN (Rabat)/DNLGSYY (Chothia)
CDRL2
47/303
GDSERPS (Rabat)/GDS (Chothia)
CDRL3
48/304
GSWDITSF (Rabat)/WDITSF (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGESLRISCRGSGYSFTNYWIGWVRQMPGRGLE WMGRIDPGESLTNYAPSFQGQVTISADRSISTAYLQWSSLRASDTA MYYCARTGVADVDMPFAHWGQGTLVTVSS
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSYYVNWYQQRPGQAPVLV IYGDSERPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCGSWDI TSFVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVRRPGESLRISCRGSGYSFTNYWIGWVRQMPGRGLE WMGRIDPGESLTNYAPSFQGQVTISADRSISTAYLQWSSLRASDTA MYYCARTGVADVDMPFAHWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRS TSGGTAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSYYVNWYQQRPGQAPVLV IYGDSERPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCGSWDI TSFVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLISD FYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTPEQ WRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:49
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAGCCTGGCG AGAG С С T GAAGAT СAG С T G СAAG GGCAGCGGCTACAGCTTCAC СAA CTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCTGGCAAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAGAATCGACCCCGGCGAGTCCCTGACCAACTACGCCC С СAG С T T С СAG G G С СAG G T GACAAT СAG С G С С GACAAGAG CAT СAG CACCGCCTATCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCC ATGTACTACTGCGCCAGAACCGGCGTGGCCGACGTGGACATGCCTT TTGCCCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:50
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGACCGCCAGAATCAGCTGCAGCGGCGACAACCTGGGCAGCTACTA CGTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACGGCGACAGCGAGAGGCCTAGCGGCATCCCCGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCTCTAGAGC CCAGGCCGGCGACGAGGCCGATTACTACTGCGGCTCCTGGGACATC ACCAGCTTCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:51
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAGCCTGGCG AGAG С С T GAAGAT СAG С T G СAAG GGCAGCGGCTACAGCTTCAC СAA CTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCTGGCAAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAGAATCGACCCCGGCGAGTCCCTGACCAACTACGCCC С СAG С T T С СAG G G С СAG G T GACAAT СAG С G С С GACAAGAG CAT СAG CACCGCCTATCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCC ATGTACTACTGCGCCAGAACCGGCGTGGCCGACGTGGACATGCCTT TTGCCCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTC CACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACT TCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAG CGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTAC TCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCC AGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:52
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGACCGCCAGAATCAGCTGCAGCGGCGACAACCTGGGCAGCTACTA CGTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACGGCGACAGCGAGAGGCCTAGCGGCATCCCCGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCTCTAGAGC CCAGGCCGGCGACGAGGCCGATTACTACTGCGGCTCCTGGGACATC ACCAGCTTCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTAGGTC AGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGA GGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGAC TTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCC С С G Т СAAG G С G G GAG Т G GAGАС САССАСАСССТС САААСAAAG САА СAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С Т GAC G С С Т GAG СAG Т G GAAG ТСС СACAGAAG С ТACAG С Т G С СAG G Т СAC G CAT GAAG G GA G СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS965
CDRH1
57/305
SYAIS (Rabat)/GGTFNSY (Chothia)
CDRH2
58/306
RIIPIFGTANYAQRFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
59/307
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
60/308
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
61/309
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
62/310
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFNSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFNSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:63
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:64
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:65
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:66
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS967
CDRH1
71/311
SHYMH (Rabat)/GYTFTSH (Chothia)
CDRH2
72/312
NINPVDGGTEYAQRFQG (Rabat)/NPVDGG (Chothia)
CDRH3
73/313
DGIEHGGHYYWGYLFDI (Rabat)/DGIEHGGHYYWGYLFDI (Chothia)
CDRL1
74/314
SGDSIREYYVH (Rabat)/DSIREYY (Chothia)
CDRL2
75/315
DDTNRPS (Rabat)/DDT (Chothia)
CDRL3
76/316
AAWDFSPAI (Rabat)/WDFSPAI (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGASVRVSCRASGYTFTSHYMHWVRQAPGQGLE WMGNINPVDGGTEYAQRFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARDGIEHGGHYYWGYLFDIWGQGTLVTVSS
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDSIREYYVHWYQQRPGQAPVLV IGDDTNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCAAWDF SPAIVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMHWVRQAPGQGLE WMGNINPVDGGTEYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARDGIEHGGHYYWGYLFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
SYVLTQPPSVSVAPGKTARISCSGDSIREYYVHWYQQKPGQAPVLV IGDDTNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCAAWDF SPAIVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPE QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:77
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCG CCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAG CCACTACATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAACATCAACCCCGTGGACGGCGGCACCGAGTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT GAC С С G G GAC AC С AG CAT С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGCGCCAGGGACGGCATCGAGCACGGCGGCCACTACT ACTGGGGCTACCTGTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC CGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:78
TCTTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT СAG С T G СAG С G G С GACAG CAT С С G G GAG TAC ТА CGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTG AT С G G С GAC GACAC СAACAGAC С СAG С G G CAT С С С С GAGAGAT Т СА G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCTCTAGAGC CCAGGCCGGCGACGAGGCCGATTACTACTGCGCCGCCTGGGACTTC AGCCCTGCCATCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:79
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCG CCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAG CCACTACATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCAACATCAACCCCGTGGACGGCGGCACCGAGTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT GAC С С G G GAC AC С AG CAT С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGCGCCAGGGACGGCATCGAGCACGGCGGCCACTACT ACTGGGGCTACCTGTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC CGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTC AGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAG TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCA GCAGCTTGGGCACC СAGAC CTACATCTG СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:80
TCTTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT СAG С Т G СAG С G G С GACAG CAT С С G G GAG TAC ТА CGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTG AT С G G С GAC GACAC СAACAGAC С СAG С G G CAT С С С С GAGAGAT Т СА GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCTCTAGAGC CCAGGCCGGCGACGAGGCCGATTACTACTGCGCCGCCTGGGACTTC AGCCCTGCCATCGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCCTAG GTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTC TGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGT GACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCA G С С С С G Т СAAG G С G G GAG Т G GAGАС САССАСАСССТС САААСAAAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С Т GAC G С С Т GAG СAG Т G GAAG ТСС СACAGAAG С ТACAG С Т G С СAG G Т СAC G CAT GAAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS807
CDRH1
85/317
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
86/318
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
87/319
HGGYSYFDS (Rabat)/HGGYYFDS (Chothia)
CDRL1
88/320
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
89/321
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
90/322
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYYFDSWGQGTLVTVSS
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYYFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:91
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACTACTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:92
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:93
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACTACTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:94
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS808
CDRH1
99/323
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
100/324
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
101/325
HGGYIFDS (Rabat)/HGGYIFDS (Chothia)
CDRL1
102/326
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
103/327
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
104/328
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
105
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYIFDSWGQGTLVTVSS
106
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
107
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYIFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
108
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:105
109
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACATTTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:106
110
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:107
111
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACATTTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:108
112
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS806
CDRH1
113/329
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
114/330
RIIPIFGTANYAQRFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
115/331
HGGYVFDS (Rabat)/HGGYVFDS (Chothia)
CDRL1
116/332
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
117/333
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
118/334
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
119
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYVFDSWGQGTLVTVSS
120
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
121
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQKFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYVFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
122
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSKYVDWYQQKPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTP EQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:119
123
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACGTCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:120
124
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:121
125
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACGTCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:122
126
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS804
CDRH1
127/335
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
128/336
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
129/337
HGGYVFDS (Rabat)/HGGYIFDS (Chothia)
CDRL1
130/338
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
131/339
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
132/340
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
133
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYIFDSWGQGTLVTVSS
134
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
135
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYIFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
136
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:133
137
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACATTTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:134
138
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:135
139
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACATTTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:136
140
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS809
CDRH1
141/341
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
142/342
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
143/343
HGGYYFDS (Rabat)/HGGYYFDS (Chothia)
CDRL1
144/344
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
145/345
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
146/346
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
147
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYYFDSWGQGTLVTVSS
148
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
149
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYYFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
150
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:147
151
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACTACTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:148
152
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:149
153
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACTACTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:150
154
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS805
CDRH1
155/347
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
156/348
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
157/349
HGGYVFDS (Rabat)/HGGYVFDS (Chothia)
CDRL1
158/350
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
159/351
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
160/352
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
161
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYVFDSWGQGTLVTVSS
162
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
163
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQKFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYVFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
164
SYVLTQPPSVSVAPGKTARISCSGDNLGSKYVDWYQQKPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTP EQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:161
165
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACGTCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:162
166
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:163
167
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACGTCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:164
168
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS962-S
CDRH1
169/353
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
170/354
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
171/355
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
172/356
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
173/357
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
174/358
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
175
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
176
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
177
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
178
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:175
179
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:176
180
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:177
181
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:178
182
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS962-Q
CDRH1
183/359
SYAIS (Rabat)/GGTFQSY (Chothia)
CDRH2
184/360
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
185/361
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
186/362
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
187/363
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
188/364
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
189
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFQSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
190
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
191
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFQSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
192
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:189
193
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCCAAAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:190
194
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:191
195
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCCAAAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID NO:192
196
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS962-S31A
CDRH1
197/365
SYAIS (Rabat)/GGTFNAY (Chothia)
CDRH2
198/366
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
199/367
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
200/368
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
201/369
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
202/370
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
203
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFNAYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
204
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
205
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNAYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQKFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
206
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSKYVDWYQQKPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTP EQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:203
207
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACGC CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:204
208
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:205
209
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAACGC CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:206
210
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS962-G
CDRH1
211/371
SYAIS (Rabat)/GGTFGSY (Chothia)
CDRH2
212/372
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
213/373
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
214/374
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
215/375
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
216/376
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
217
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFGSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
218
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
219
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFGSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
220
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:217
221
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCGGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:218
222
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:219
223
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCGGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:220
224
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS962-T
CDRH1
225/377
SYAIS (Rabat)/GGTFTSY (Chothia)
CDRH2
226/378
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
227/379
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
228/380
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
229/381
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
230/382
QTYTSGNNYL (Rabat)/YTSGNNYL (Chothia)
231
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFTSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
232
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
233
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFTSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
234
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTS GNNYLVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:231
235
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCACCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:232
236
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC С СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С СAGAC С TACAC СAG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:233
237
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCACCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:234
238
AGCTACGAGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCC AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC С С AG G С С GAG GAC GAG G С С GAC T AC T AC T G С С AGAC С T AC AC С AG С GGCAACAACTACCTGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS965-T
CDRH1
239/383
SYAIS (Rabat)/GGTFTSY (Chothia)
CDRH2
240/384
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
241/385
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
242/386
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
243/387
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
244/388
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
245
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFTSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
246
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
247
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFTSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQKFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
248
SYVLTQPPSVSVAPGKTARISCSGDNLGSKYVDWYQQKPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTP EQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:245
249
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCACCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:246
250
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:247
251
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCACCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:248
252
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS965-Q
CDRH1
253/389
SYAIS (Rabat)/GGTFQSY (Chothia)
CDRH2
254/390
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
255/391
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
256/392
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
257/393
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
258/394
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
259
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFQSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
260
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
261
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFQSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
262
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:259
263
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCCAAAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:260
264
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:261
265
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCCAAAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:262
266
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
NVS965-S
CDRH1
267/395
SYAIS (Rabat)/GGTFSSY (Chothia)
CDRH2
268/396
RIIPIFGTANYAQKFQG (Rabat)/IPIFGT (Chothia)
CDRH3
269/397
HGGYSFDS (Rabat)/HGGYSFDS (Chothia)
CDRL1
270/398
SGDNLGSRYVD (Rabat)/DNLGSRY (Chothia)
CDRL2
271/399
SDNNRPS (Rabat)/SDN (Chothia)
CDRL3
272/400
ATYDSSPRTE (Rabat)/YDSSPRTE (Chothia)
273
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSS
274
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVL
ТЯЖЕЛАЯ ЦЕПЬ
275
EVQLVQSGAEVRRPGSSVRVSCRASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE WMGR11PIFGTANYAQRFQGRVTITADE S T S TAYME LSSLRSEDTA VYYCARHGGYSFDSWGQGTLVTVSSASTRGPSVFPLAPSSRSTSGG TAALGCLVRDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHRPSNTRVDRRVEPRSC
ЛЕГКАЯ ЦЕПЬ
276
SYVLTQPPSVSVAPGRTARISCSGDNLGSRYVDWYQQRPGQAPVLV IYSDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYDS SPRTEVFGGGTRLTVLGQPRAAPSVTLFPPSSEELQANRATLVCLI SDFYPGAVTVAWRADSSPVRAGVETTTPSRQSNNRYAASSYLSLTP EQWRSHRSYSCQVTHEGSTVERTVAPTECS
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:273
277
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:274
278
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA G С G G СAG СAACAG С G G СAATAC CGCCACCCT GAC CATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC ТА
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:275
279
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCA GCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAG CTACGCCATCAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAA TGGATGGGCCGGATCATCCCCATCTTCGGCACCGCCAACTACGCCC AGAAAT T С С AG G G С AGAG T GAC CAT С AC С G С С GAC GAGAG С AC С AG СAC С G С С TACAT G GAAC T GAG СAG С С T GAGAAG С GAG GACAC С G С С GTGTACTACTGTGCCCGGCACGGCGGCTACAGCTTCGATAGCTGGG GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCC ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG TGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC СAAG G T G GACAAGAGAG T TGAGCCCAAATCTTGT
PN,
КОДИРУЮЩИЙ SEQ ID N0:276
280
AGCTACGTGCTGACTCAGCCCCCTTCTGTGTCTGTGGCCCCTGGCA AGAC С G С СAGAAT CAGCTGCAGCGGC GACAAC CTGGGCAG СAAATA CGTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCGTGCTGGTG ATCTACAGCGACAACAACCGGCCCAGCGGCATCCCTGAGCGGTTCA GCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCAC CCAGGCCATGGACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTACGACAGC AGCCCCAGAACCGAGGTGTTCGGAGGCGGAACAAAGTTAACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATA AGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATA GCAGCCCCGT СAAG G С G G GAG T G GAGAC САССАСАСССТС САААСA AAG СAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTATCT GAG С С T GAC G С С T GAG СAG T G GAAG T С С СACAGAAG С TACAG С T G С СAG G Т СAC G CAT G AAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
Фактор P
человека
NP 001138724.
401
PVLCFTQYEESSGKCKGLLGGGVSVEDCCLNTAFAYQKRSGGLCQP CRSPRWSLWSTWAPCSVTCSEGSQLRYRRCVGWNGQCSGKVAPGTL EWQLQACEDQQCCPEMGGWSGWGPWEPCSVTCSKGTRTRRRACNHP APKCGGHCPGQAQESEACDTQQVCPTHGAWATWGPWTPCSASCHGG PHEPKETRSRKCSAPEPSQKPPGKPCPGLAYEQRRCTGLPPCPVAG GWGPWGPVSPCPVTCGLGQTMEQRTCNHPVPQHGGPFCAGDATRTH ICNTAVPCPVDGEWDSWGEWSPCIRRNMKSISCQEIPGQQSRGRTC RGRKFDGHRCAGQQQDIRHCYSIQHCPLKGSWSEWSTWGLCMPPCG PNPTRARQRLCTPLLPKYPPTVSMVEGQGEKNVTFWGRPLPRCEEL QGQKLWEEKRPCLHVPACKDPEEEEL
Фактор Р
шимпанзе
ХР 001136665.
402
MITEGAQAPCLLLPPLLLLLTLPATGSDPVLCFTQYEESSGKCKGL LGGGVSVKDCCLNTAYAYQERNGGLCQPCRSPRWSLWSTWAPCSVT CSEGSQLRYRRCVGWNGQCSERVALGTLEWQLQACEDKQCCPEMGG WSDWGPWEPCSVTCSKGMRTRRRACNHPAPKCGGHCPGEAQESEAC DTQQVCPTHGAWAAWGPWSPCSGSCHGGPHEPKETRSRTCSAPEPS QKPPGKPCPGPAYEHRKCTGLPPCPVAGGWGPWGPVSPCPVTCGLG QTIERRTCNRPVPQHGGPSCAGDATRTHICNTAAPCPVDGEWDLWG QWSTCVRRNMKSISCEEIPGQQSRWRTCKGRKFDGHRCTGQQQDIR HCYSIQHCPLKGSWSEWSTWGLCMPPCGPNPTRARQRLCTPLLPKY PPTVSMVEGQGEKNVTFWGRPLPRCEELQGQKLWEEKRPCLHVPA CKDPEEEKL
Крысиный фактор Р NP 001100227. 1
403
MPVGMQAPQWLLLLLLILPTTGSDPVLCFTQYEEPSGRCKGLLGRD IRVEDCCLNTAYAFQEHDGGLCQSCRSPQWSAWSSWGPCSVTCSEG SQLRHRRCVGRGGQCSEKAAPGTLEWQLQACEDQLCCPEMGGWSEW GPWGPCSVTCSKGTQTRQRLCDNPAPKCGGHCPGEAQQSQACDTQK ICPTHGAWASWGPWSACSGSCLGGAQEPKETRSRSCSAPAPSHQPP GKPCSGTAYEHRGCSGLPPCPVAGGWGPWGPSSPCPVTCGLGQTLE RRTCDHPVPRHGGPFCAGDATRKHVCNTAMPCPVNGEWEAWGKWSH CSRVRMKSISCDEIPGQQSRSRSCGGRKFDGQPCTGKLQDIRHCYD IHNCVLKGSWSQWSTWGLCTPPCGPNPTRVRQRLCTPLLPKYSPTV SMVEGQGEKNVTFWGIPRPLCEVLQGQKLWEEKRPCLHVPSCRDP ЕЕККР
Кроличий фактор Р ХР 002719931. 1
404
MPAQAQPPLPLLLLPLLLTLPATGADPWCFTEYDEPSGKCKGLLG GGVSVEHCCLNAAYAFQEPGSGLCHACRSPLWSPWSAWAPCSVTCS EGSQLRHRRCVGQGGPCSEKAAPGTLQWQLQACEDQPCCPEIGGWS DWGPWRPCSVTCSKGTKTRQRACDRPAPKCGGRCPGEAQESEACDT KQVCPTHGLWAAWGPWSPCSGSCHGGPQVPKETRSRTCSAPEPSKQ PPGKPCSGPAYEEQSCAGLPPCPVAGGWGPWGPVSSCSVTCGLGKT LEKRTCDHPVPQHGGPFCTGDATRTHICNTAVPCPVNGEWEAWGEW SECSRPGRKSISCEEVPGQQRRTRVCKGRKFDGQRCAGEYQDIRHC YNIQRCRLKGSWLEWSSWGLCTPPCGPSPTRTRQRLCTALLPKFPP TISLVEGQGEKNVTFWGKPWPQCEQLQGQKLWEEKRPCLHVPACK DPEEKP
Мышиный фактор Р NP 032849.2
405
MPAEMQAPQWLLLLLVILPATGSDPVLCFTQYEESSGRCKGLLGRD IRVEDCCLNAAYAFQEHDGGLCQACRSPQWSAWSLWGPCSVTCSEG SQLRHRRCVGRGGQCSENVAPGTLEWQLQACEDQPCCPEMGGWSEW GPWGPCSVTCSKGTQIRQRVCDNPAPKCGGHCPGEAQQSQACDTQK TCPTHGAWASWGPWSPCSGSCLGGAQEPKETRSRSCSAPAPSHQPP GKPCSGPAYEHKACSGLPPCPVAGGWGPWSPLSPCSVTCGLGQTLE QRTCDHPAPRHGGPFCAGDATRNQMCNKAVPCPVNGEWEAWGKWSD CSRLRMSINCEGTPGQQSRSRSCGGRKFNGKPCAGKLQDIRHCYNI HNCIMKGSWSQWSTWSLCTPPCSPNATRVRQRLCTPLLPKYPPTVS MVEGQGEKNVTFWGTPRPLCEALQGQKLWEEKRSCLHVPVCKDPE ЕККР
Домен TSR5 SEQ ID N0:401
406
VDGEWDSWGEWS PCIRRNMKSISCQEIPGQQSRGRTCRGRKFDGHR CAGQQQDIRHCYSIQHCP
Область В домена TSR5
407
PCIRRNMKSISCQEIPGQQSRGR
Примеры антител против С5, Fab и белков С5
Антитело 8109
Идентификатор последовательности (SEQ ID NO:)
CDRH1
410 SYAIS
CDRH2
411
GIGPFFGTANYAQKFQG
CDRH3
412
DTPYFDY
CDRL1
413
SGDSIPNYYVY
CDRL2
414
DDSNRPS
CDRL3
415
QSFDSSLNAEV
416
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWM GGIGPFFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC ARDTPYFDYWGQGTLVTVSS
417
SYELTQPLSVSVALGQTARITCSGDSIPNYYVYWYQQKPGQAPVLVIY DDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQSFDSSLNA EVFGGGTKLTVL
Тяжелая цепь
418
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWM GGIGPFFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC ARDTPYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
Легкая цепь
419
SYELTQPLSVSVALGQTARITCSGDSIPNYYVYWYQQKPGQAPVLVIY DDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQSFDSSLNA EVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPG AVTVAWKAD S S PVKAGVE TTTPSKQS NNKYAAS SYLSLTPEQWKSHRS YSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
кодирующий SEQ ID N0:416
420
GAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGC AGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTAT GCCATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATG GGCGGTATCGGTCCGTTTTTTGGCACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTT CAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTAT ATGGAACTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGC GCGCGTGATACTCCTTATTTTGATTATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:417
421
TCCTATGAACTCACACAGCCCCTGAGCGTGAGCGTGGCCCTGGGCCAG ACCGCCCGGATCACCTGCTCCGGCGACAGCATCCCCAACTACTACGTG TACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC GACGACAGCAACCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGCGGTTCAGCGGCAGC AACAG С G G СAACAC С G С CAC С С T GAC CAT T T С СAGAG СACAG G СAG G С GAC GAG G С С GAC TACTACTGC С AG AG С T T С GAC AG С AG С С T GAAC G С С GAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGTTAACCGTCCTA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:418
422
GAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGC AGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTAT GCCATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATG GGCGGTATCGGTCCGTTTTTTGGCACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTT CAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTAT ATGGAACTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGC GCGCGTGATACTCCTTATTTTGATTATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTG GTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGC GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCA GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T GACААААС Т САСАСА TGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTC CTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTC AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTC CTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCC AAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGG CAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGAC GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:419
423
TCCTATGAACTCACACAGCCCCTGAGCGTGAGCGTGGCCCTGGGCCAG ACCGCCCGGATCACCTGCTCCGGCGACAGCATCCCCAACTACTACGTG TACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC GACGACAGCAACCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGCGGTTCAGCGGCAGC AACAG С G G СAACAC С G С CAC С С T GAC CAT T T С СAGAG СACAG G СAG G С GAC GAG G С С GAC TACTACTGC С AG AG С T T С GAC AG С AG С С T GAAC G С С GAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAG GCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAA GCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGA GCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGA G T G GAGAC CAC СACAC С С T С САААСAAAG СAACAACAAG TAC G С G G С С AGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGC TACAG С T G С СAG G T СAC GCAT GAAG G GAG CAC С G T G GAGAAGACAG T G GCCCCTACAGAATGTTCA
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:418
424
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGTAGC AGCGTCAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCGGCACCTTCAGCAGCTAC GCCATCAGCTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGCCAGGGCCTGGAGTGGATG GGCGGCATCGGCCCATTCTTCGGCACCGCCAACTACGCCCAGAAGTTC СAG G G СAG G G T CAC CAT CAC С G С С GAC GAGAG CAC СAG CAC С G С С TAC ATGGAGCTGTCCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGC GCCAGAGACACCCCCTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACCGTGAGCAGCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCC CCCAGCAGCAAGAGCACCTCCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTG GTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGA GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGC GGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTGCCCAGCAGCAGCCTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAC СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T G GAG С С СAAGAG С T G С GACAAGAC С СACAC С TGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAAGCTGCAGGCGGCCCTTCCGTGTTC CTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCC GAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCAGAGGTG AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACC AAG С С СAGAGAG GAG СAG TACAACAG CAC С TACAG GGTGGTGTCCGTG CTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGC AAGGCCAAGGGCCAGCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCT TCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTG AAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGC СAG С С С GAGAACAAC TACAAGAC CAC С С С С С СAG Т G С Т G GACAG С GAC GGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCAC ААС САС ТАСАС С СAGAAGAG С С Т GAG С С Т G Т САС С С G G СAAG
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:419
425
AGCTACGAGCTGACCCAGCCCCTGAGCGTGAGCGTGGCCCTGGGCCAG ACCGCCAGGATCACCTGCAGCGGCGACAGCATCCCCAACTACTACGTG TACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC GAC GACAG СAACAG G С С СAG CGGCATCCCC GAGAG GTTCAGCGGCAGC AACAG С G G СAACAC С G С CAC С С T GAC СAT СAG СAGAG CCCAGGCCGGC GAC GAG G С С GAC TACTACTGC СAGAG С T T С GACAG С T СAC T GAAC G С С GAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTGCTGGGCCAGCCTAAG GCTGCCCCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAGCTGCAG GCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTACCCAGGC GCCGTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCCGGC G T G GAGAC CAC CAC С С С CAG СAAG СAGAG СAACAACAAG TAC G С С G С С AGCAGCTACCTGAGCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGAGCCACAGGTCC TACAGCTGCCAGGTGACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTG GCCCCAACCGAGTGCAGC
Антитело 8110
Идентификатор последовательности (SEQ ID NO:) и последовательность или комментарии
CDRH1
426 NYIS
CDRH2
427
IIDPDDSYTEYSPSFQG
CDRH3
428
YEYGGFDI
CDRL1
429
SGDNIGNSYVH
CDRL2
430
KDNDRPS
CDRL3
431
GTYDIESYV
432
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYISWVRQMPGKGLEWMG IIDPDDSYTEYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RYEYGGFDIWGQGTLVTVSS
433
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGNSYVHWYQQKPGQAPVLVIY KDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCGTYDIESYV FGGGTKLTVL
Тяжелая цепь
434
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYISWVRQMPGKGLEWMG IIDPDDSYTEYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RYEYGGFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
Легкая цепь
435
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGNSYVHWYQQKPGQAPVLVIY KDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCGTYDIESYV FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYS CQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
кодирующий SEQ ID NO:432
436
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTAATTAT ATTTCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGC ATTATTGATCCTGATGATTCTTATACTGAGTATTCTCCTTCTTTTCAG G G T СAG G T CAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC CGCGTATCTT CAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCG CGTTATGAGTATGGTGGTTTTGATATTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:434
437
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTAATTCTTATGTT CATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GAC GAAG С GGAT TAT TAT T GC GG TAC T TAT GATAT TGAGTCTTATGTG TTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:435
438
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTAATTAT ATTTCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGC ATTATTGATCCTGATGATTCTTATACTGAGTATTCTCCTTCTTTTCAG G G T СAG G T CAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC CGCGTATCTT CAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCG CGTTATGAGTATGGTGGTTTTGATATTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTG GTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGC GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCA GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T GACААААС Т САСАСА TGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTC CTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTC AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTC CTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCC AAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGG CAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGAC GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:43 6
439
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTAATTCTTATGTT CATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GAC GAAG С GGAT TAT TAT T GC GG TAC T TAT GATAT TGAGTCTTATGTG TTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCC CCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAAC AAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTG ACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAG AC CAC СACAC С С T С САААСAAAG СААСААСAAG ТAC G С G G С СAG СAG С ТAT С Т GAG ССТ GAC GCCTGAGCAGTG GAAG ТСС СACAGAAG С ТACAG С TGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCT ACAGAAT G Т Т СА
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:4 34
440
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGTGAG AG С С Т GAAGAT СAG С Т G СAAG GGCAGCGGCTACAGCTTCAC СААС ТАС ATCAGCTGGGTGCGGCAGATGCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGC AT СAT С GAC С С С GAC GACAG С ТАСАС С GAG ТACAG С С С СAG С Т Т С СAG GGCCAGGT GAC CATCAGCGCC GACAAGAG CATCAGCACCGCCTACCTG CAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCCATGTACTACTGCGCC AGATACGAGTACGGCGGCTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACCGTCAGCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCC CCCAGCAGCAAGAGCACCTCCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTG GTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGA GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGC GGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTGCCCAGCAGCAGCCTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAC СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T G GAG С С СAAGAG С T G С GACAAGAC С СACAC С TGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAAGCTGCAGGCGGCCCTTCCGTGTTC CTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCC GAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCAGAGGTG AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACC AAG С С СAGAGAG GAG СAG TACAACAG CAC С TACAG GGTGGTGTCCGTG CTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGC AAGGCCAAGGGCCAGCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCT TCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTG AAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGC СAG С С С GAGAACAAC TACAAGAC CAC С С С С С СAG Т G С Т G GACAG С GAC GGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCAC ААС САС ТАСАС С СAGAAGAG ССТ GAG С С Т G Т САС С С G G СAAG
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:435
441
AGCTACGAGCTGACCCAGCCCCCCAGCGTGAGCGTGGCCCCAGGCCAG ACCGCCAGGATCAGCTGCAGCGGCGACAACATCGGCAACAGCTACGTG CACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC AAGGACAACGACAGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGGTTCAGCGGCAGC AACTCCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCACCCAGGCCGAG GAC GAG G С С GAC TAC TAC T G С G G CAC С TAC GACAT С GAG T СATAC G T G TTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTGCTGGGCCAGCCTAAGGCTGCC CCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAGCTGCAGGCCAAC AAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTACCCAGGCGCCGTG ACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCCGGCGTGGAG AC CAC CAC С С С СAG СAAGCAGAG СAACAACAAG TACGCCGC СAG СAG С TAC С T GAG С С T GAC С С С С GAG СAG Т G GAAGAG CCACAGGTCCTACAGC TGCCAGGTGACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCCCCA ACCGAGTGCAGC
Антитело 8111
Идентификатор последовательности (SEQ ID NO:) и последовательность или комментарии
CDRH1
442
TSGGGVS
CDRH2
443
NIDDADIKDYSPSLKS
CDRH3
444
GPYGFDS
CDRL1
445
TGTSSDIGTYNYVS
CDRL2
446
DDSNRPS
CDRL3
447
QSYDSQSIV
448
EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGGGVSWIRQPPGKALE WLANIDDADIKDYSPSLKSRLTISKDTSKNQWLTMTNMDPVDTATYY CARGPYGFDSWGQGTLVTVSS
449
ESALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDIGTYNYVSWYQQHPGKAPKL MIYDDSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQSYDSQ SIVFGGGTKLTVL
Тяжелая цепь
450
EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGGGVSWIRQPPGKALE WLANIDDADIKDYSPSLKSRLTISKDTSKNQWLTMTNMDPVDTATYY CARGPYGFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
Легкая цепь
451
ESALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDIGTYNYVSWYQQHPGKAPKL MIYDDSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQSYDSQ SIVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYP GAVTVAWKAD S S PVKAGVE TTTPSKQS NNKYAAS SYLSLTPEQWKSHR SYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
кодирующий SEQ ID N0:44 8
452
GAGGTGACATTGAAAGAAAGCGGCCCGGCCCTGGTGAAACCGACCCAA ACCCTGACCCTGACCTGTACCTTTTCCGGATTTAGCCTGTCTACTTCT GGTGGTGGTGTGTCTTGGATTCGCCAGCCGCCTGGGAAAGCCCTCGAG T GGC T GGC TAATAT T GATGAT GC T GATAT TAAGGAT TAT TCTCCTTCT СTTAAGTСTСGTСTGACCATTAGСAAAGATACTTСGAAAAATСAGGTG GTGCTGACTATGACCAACATGGACCCGGTGGATACGGCCACCTATTAT TGCGCGCGTGGTCCTTATGGTTTTGATTCTTGGGGCCAAGGCACCCTG GTGACGGTTAGCTCA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:44 9
453
GAAAG С G СAC T GAC CCAGCCAGCTTCAGT GAG CGGCTCACCAGGTCAG AG CAT TAC CAT С T С G T G TAC G G G TAC TAG СAG С GATAT T G G TAC T TAT AATTATGTGTCTTGGTACCAGCAGCATCCCGGGAAGGCGCCGAAACTT ATGATTTATGATGATTCTAATCGTCCCTCAGGCGTGAGCAACCGTTTT AGCGGATCCAAAAGCGGCAACACCGCGAGCCTGACCATTAGCGGCCTG СAAG С G GAAGAC GAAG CGGATTATTATTGC СAG TCTTATGATTCT СAG TCTATTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:450
454
GAGGTGACATTGAAAGAAAGCGGCCCGGCCCTGGTGAAACCGACCCAA ACCCTGACCCTGACCTGTACCTTTTCCGGATTTAGCCTGTCTACTTCT GGTGGTGGTGTGTCTTGGATTCGCCAGCCGCCTGGGAAAGCCCTCGAG T GGC T GGC TAATAT T GATGAT GC T GATAT TAAGGAT TAT TCTCCTTCT СTTAAGTСTСGTСTGACCATTAGСAAAGATACTTСGAAAAATСAGGTG GTGCTGACTATGACCAACATGGACCCGGTGGATACGGCCACCTATTAT TGCGCGCGTGGTCCTTATGGTTTTGATTCTTGGGGCCAAGGCACCCTG GTGACGGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGC CTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCA GGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCC TCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC T T G G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СААС G Т GAAT СACAAG С С СAG СААС АС СAAG GTGGACAAGAGAG Т Т GAGС С САААТС Т Т GТ GACААААСТ САС ACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTC TTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC CCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAG С С G С G G GAG GAG СAG ТACААСAG CACGTACCGGGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATC T С СAAAG С СAAAG GGCAGCCCC GAGAAC CACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTG GTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTG CACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:451
455
GAAAG С G СAC T GAC CCAGCCAGCTTCAGT GAG CGGCTCACCAGGTCAG AG CAT TAC CAT С T С G T G TAC G G G TAC TAG СAG С GATAT T G G TAC T TAT AATTATGTGTCTTGGTACCAGCAGCATCCCGGGAAGGCGCCGAAACTT ATGATTTATGATGATTCTAATCGTCCCTCAGGCGTGAGCAACCGTTTT AGCGGATCCAAAAGCGGCAACACCGCGAGCCTGACCATTAGCGGCCTG СAAG С G GAAGAC GAAG CGGATTATTATTGC СAG TCTTATGATTCT СAG TCTATTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCC AAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTT CAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCG GGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCG G GAG T G GAGAC CAC СACAC С С T ССАААСAAAGСААСААСAAGТACGСG GCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGA AG С ТACAG С Т G С СAG G Т CAC G CAT GAAG G GAG CAC С G T G GAGAAGACA GTGGCCCCTACAGAATGTTCA
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:44 8
456
GAGGTGACCCTGAAGGAGAGCGGCCCAGCCCTGGTGAAGCCCACCCAG ACCCTGACCCTGACTTGCACCTTCAGCGGCTTCAGCCTGAGCACCAGC GGAGGGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCCCCAGGTAAGGCCCTGGAG TGGCTGGCCAATATCGACGACGCCGATATCAAGGACTACAGCCCCAGC С T GAAGAG СAG G С T GAC CAT СAG СAAG GACAC СAG СAAGAAC СAG G T G GTGCTGACCATGACCAATATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTACTAC TGCGCCAGAGGCCCCTACGGCTTCGACAGCTGGGGCCAGGGCACCCTG GTGACCGTCAGCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTG GCCCCCAGCAGCAAGAGCACCTCCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGC CTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGC GGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC AGCGGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTGCCCAGCAGCAGC С T G G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СААС G Т GAAC СACAAG С С СAG СААС АС СAAG G Т G GACAAGAGAG Т G GAG С С СAAGAG С Т G С GACAAGАС С САС ACCTGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAAGCTGCAGGCGGCCCTTCCGTG TTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACC CCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCAGAG GTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAG АС СAAG С С СAGAGAG GAGCAG ТACААСAG CAC С ТACAG GGTGGTGTCC GTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATC AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCC CCTTCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAC GGC СAG С С С GAGAACААС ТACAAGAC САС С С С С С СAG Т G С Т G GACAG С GAC GGCAGCTTCTTCCTGTACAG СAAG С Т GАС С G Т G GACAAGAG СAG G TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTG САСААС САС ТАСАС С СAGAAGAG ССТ GAG С С Т G Т САС С С G G СAAG
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:44 9
457
GAGAGCGCCCTGACCCAGCCCGCCAGCGTGAGCGGCAGCCCAGGCCAG Т С ТAT СACAAT СAG С Т G САС С G G САС С Т С СAG С GATAT С G G САС С ТАС AACTACGTGAGCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTG AT GAT С ТAC GAC GACAG СААСAG G С С СAG С G G С G Т GAG СААСAG G Т Т С AGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGCCTG СAG G С С GAG GAC GAG G С С GAC ТAC ТAC Т G С СAGAG С ТAC GACAG С СAG TCAATCGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTGCTGGGCCAGCCT AAGGCTGCCCCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAGCTG CAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTACCCA GGCGCCGTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCC G G С G Т G GAGAC САС САС С С С СAG СAAG СAGAG СААСААСAAG ТAC G С С GCCAGCAGCTACCT GAG ССТ GАС С С С С GAG СAG Т G GAAGAG С СACAG G TCCTACAGCTGCCAGGTGACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACC GTGGCCCCAACCGAGTGCAGC
Антитело 8113
Идентификатор последовательности (SEQ ID N0:) и последовательность или комментарии
CDRH1
SEQ ID N0:426
CDRH2
458
IIDPDDSYTRYSPSFQG
CDRH3
SEQ ID N0:428
CDRL1
SEQ ID N0:429
CDRL2
SEQ ID N0:430
CDRL3
459
ATWGSEDQV
460
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYISWVRQMPGKGLEWMG IIDPDDSYTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RYEYGGFDIWGQGTLVTVSS
461
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGNSYVHWYQQKPGQAPVLVIY KDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCATWGSEDQV FGGGTKLTVL
Тяжелая цепь
462
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYISWVRQMPGKGLEWMG IIDPDDSYTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RYEYGGFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSL GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
Легкая цепь
463
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGNSYVHWYQQKPGQAPVLVIY KDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCATWGSEDQV FGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYS CQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
кодирующий SEQ ID N0:460
464
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTAATTAT ATTTCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGC ATTATCGATCCGGATGATAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAG G GACAG G T GAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC CGCGTATCTT CAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCG CGTTATGAGTATGGTGGTTTTGATATTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:461
465
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTAATTCTTATGTT CATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GACGAAGCGGATTATTATTGCGCTACTTGGGGTTCTGAGGATCAGGTG TTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTA
PN,
кодирующий SEQ ID NO:4 62
466
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTAATTAT ATTTCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGC ATTATCGATCCGGATGATAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAG G GACAG G T GAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC CGCGTATCTT CAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCG CGTTATGAGTATGGTGGTTTTGATATTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTG ACGGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTG GTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGC GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCA GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAT СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T T GAG С С СAAAT С T T G T GACААААС Т САСАСА TGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTC CTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTC AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTC CTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCC AAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGG CAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGAC GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
PN,
кодирующий SEQ ID NO:4 63
467
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTAATTCTTATGTT CATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GACGAAGCGGATTATTATTGCGCTACTTGGGGTTCTGAGGATCAGGTG TTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCC CCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAAC AAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTG ACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAG AC CAC СACAC С С T С САААСAAAG СААСААСAAG ТAC G С G G С СAG СAG С ТAT С Т GAG ССТ GAC GCCTGAGCAGTG GAAG ТСС СACAGAAG С ТACAG С TGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCT ACAGAAT G Т Т СА
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID NO:4 62
468
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGTGAG AG С С Т GAAGAT СAG С Т G СAAG GGCAGCGGCTACAGCTTCAC СААС ТАС ATCAGCTGGGTGCGGCAGATGCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGC AT СAT С GAC С С С GAC GACAG С ТАСАС СAG G ТACAG С С С СAG С Т Т С СAG GGCCAGGT GAC CATCAGCGCC GACAAGAG CATCAGCACCGCCTACCTG CAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCCATGTACTACTGCGCC AGATACGAGTACGGCGGCTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACCGTCAGCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCC CCCAGCAGCAAGAGCACCTCCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTG GTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGA GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGC GGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTGCCCAGCAGCAGCCTG G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СAAC G T GAAC СACAAG С С СAG СAACAC С AAG G T G GACAAGAGAG T G GAG С С СAAGAG С T G С GACAAGAC С СACAC С TGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAAGCTGCAGGCGGCCCTTCCGTGTTC CTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCC GAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCAGAGGTG AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACC AAG С С СAGAGAG GAG СAG TACAACAG CAC С TACAG GGTGGTGTCCGTG CTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGC AAGGCCAAGGGCCAGCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCT TCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTG AAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGC СAG С С С GAGAACAAC TACAAGAC CAC С С С С С СAG Т G С Т G GACAG С GAC GGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCAC ААС САС ТАСАС С СAGAAGAG ССТ GAG С С Т G Т САС С С G G СAAG
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID NO:4 63
469
AGCTACGAGCTGACCCAGCCCCCCAGCGTGAGCGTGGCCCCAGGCCAG ACCGCCAGGATCAGCTGCAGCGGCGACAATATCGGCAACAGCTACGTG CACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC AAGGACAACGACAGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGGTTCAGCGGCAGC AACTCCGGCAACACCGCCACCCTGACAATCAGCGGCACCCAGGCCGAG GACGAGGCCGACTACTACTGCGCCACCTGGGGCTCAGAGGACCAGGTG TTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTGCTGGGCCAGCCTAAGGCTGCC CCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAGCTGCAGGCCAAC AAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTACCCAGGCGCCGTG ACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCCGGCGTGGAG AC CAC CAC С С С СAG СAAGCAGAG СAACAACAAG TACGCCGC СAG СAG С TAC С T GAG С С T GAC С С С С GAG СAG Т G GAAGAG CCACAGGTCCTACAGC TGCCAGGTGACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCCCCA ACCGAGTGCAGC
Антитело 8114
Идентификатор последовательности (SEQ ID NO:) и последовательность или комментарии
CDRH1
470 SYYIG
CDRH2
471
IIDPTDSQTAYSPSFQG
CDRH3
472
YMMRGFDH
CDRL1
473
SGDSLGDYYAY
CDRL2
474
KDNNRPS
CDRL3
475
QTWDTGESGV
476
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYYIGWVRQMPGKGLEWM GIIDPTDSQTAYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYC ARYMMRGFDHWGQGTLVTVSS
477
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLGDYYAYWYQQKPGQAPVLVIY KDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTWDTGESG VFGGGTKLTVL
Тяжелая цепь
478
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYYIGWVRQMPGKGLEWM GIIDPTDSQTAYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYC ARYMMRGFDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
Легкая цепь
479
SYELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLGDYYAYWYQQKPGQAPVLVIY KDNNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTWDTGESG VFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSY SCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
PN,
кодирующий SEQ ID N0:47 6
480
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTTCTTAT TATATTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATG GGCATTATTGATCCTACTGATTCTCAGACTGCTTATTCTCCTTCTTTT СAG G G T СAG G T GAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC С G С G TAT CTTCAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGC GCGCGTTATATGATGCGTGGTTTTGATCATTGGGGCCAAGGCACCCTG GTGACGGTTAGCTCA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:47 8
481
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTGGTGATTATTATGCT TATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATAATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GACGAAGCGGATTATTATTGCCAGACTTGGGATACTGGTGAGTCTGGT GTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:47 9
482
GAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAA AGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTTCTTAT TATATTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATG GGCATTATTGATCCTACTGATTCTCAGACTGCTTATTCTCCTTCTTTT СAG G G T СAG G T GAC CAT TAG С G С G GATAAAAG CAT TAG CAC С G С G TAT CTTCAATGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGC GCGCGTTATATGATGCGTGGTTTTGATCATTGGGGCCAAGGCACCCTG GTGACGGTTAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGC CTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCA GGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCC TCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC T T G G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СААС G Т GAAT СACAAG С С СAG СААС АС СAAG GTGGACAAGAGAG Т Т GAGС С САААТС Т Т GТ GACААААСТ САС ACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTC TTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC CCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAG С С G С G G GAG GAG СAG ТACААСAG CACGTACCGGGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATC T С СAAAG С СAAAG GGCAGCCCC GAGAAC CACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTG GTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTG CACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
PN,
кодирующий SEQ ID N0:480
483
AG T TAC GAAC T GAC С CAGCCGСС T T СAGT GAGСGT T GCACСAGGT СAG ACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTGGTGATTATTATGCT TATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTAT AAGGATAATAATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCC AACAG С G G СAACAC С G С GAC С С T GAC CATTAGCGGCACTCAGGCG GAA GACGAAGCGGATTATTATTGCCAGACTTGGGATACTGGTGAGTCTGGT GTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCT GCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCC AACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCC GTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTG GAGAC CAC СACAC С С T С CAAACAAAG СAACAACAAG TAC G С G G С СAG С AGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTAC AGCTGCCAGGTCACGCAT GAAG G GAG СAC С G T G GAGAAGACAG T G G С С С С ТACAGAAT G Т Т СА
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:47 9
484
GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGTGAG AGCCTGAAGATCAGCTGCAAGGGCAGCGGCTACAGCTTCACCAGCTAC TACATCGGCTGGGTGCGGCAGATGCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATG GGCATCATC GАС С С САС С GACAG С СAGAC CGCCTACAGCCCCAGCTTC СAG GGC СAG G Т GAC CAT CAG С G С С GACAAGAG CAT СAG CAC С G С С TAC CTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCCATGTACTACTGC GCCCGGTACATGATGAGGGGCTTCGACCACTGGGGTCAGGGCACCCTG GTGACCGTCAGCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTG GCCCCCAGCAGCAAGAGCACCTCCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGC CTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGC GGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC AGCGGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTGCCCAGCAGCAGC С T G G G CAC С СAGAC С TACAT С T G СААС G Т GAAC СACAAG С С CAG СААС АС СAAG G Т G GACAAGAGAG T G GAG С С СAAGAG С T G С GACAAGAC С СAC ACCTGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAAGCTGCAGGCGGCCCTTCCGTG TTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACC CCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCAGAG GTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAG AC СAAG С С СAGAGAG GAG CAG TACAACAG CAC С TACAG GGTGGTGTCC GTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATC AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCC CCTTCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAC GGC CAG С С С GAGAACAAC TACAAGAC CAC С С С С С CAG Т G С Т G GACAG С GAC GGCAGCTTCTTCCTGTACAG СAAG С T GAC С G Т G GACAAGAG СAG G TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTG СACAAC CAC TACAC С СAGAAGAG ССТ GAG С С T G ТСАСССGGСAAG
Оптимизированный PN, кодирующий SEQ ID N0:480
AGCTACGAGCTGACCCAGCCCCCCAGCGTGAGCGTGGCCCCAGGCCAG ACCGCCAGGATCAGCTGCAGCGGCGACAGCCTGGGCGACTACTACGCC TACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGATCTAC AAG GACAACAACAG G С С CAG CGGCATCCCC GAGAG GTTCAGCGGCAGC AACAG С G G СAACAC С G С CAC С С T GACAAT CAGCGGCACCCAGGCC GAG GACGAGGCCGACTACTACTGCCAGACCTGGGACACCGGCGAGTCAGGC GTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTGCTGGGTCAGCCTAAGGCT GCCCCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCCAGCAGCGAGGAGCTGCAGGCC AACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTCTACCCAGGCGCC GTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGACAGCAGCCCCGTGAAGGCCGGCGTG GAGAC CAC CAC С С С CAG CAAG СAGAG СAACAACAAG TAC G С С G С CAG С AGCTACCTGAGCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGAGCCACAGGTCCTAC AGCTGCCAGGTGACCCACGAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCC CCAACCGAGTGCAGC
Другие антитела по изобретению включают антитела, где аминокислоты или нуклеиновые кислоты, кодирующие аминокислоты, были мутированы, тем не менее, по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95% с последовательностями, описанными в таблице 1. Некоторые варианты осуществления включают мутантные аминокислотные последовательности, где не более чем 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот были мутированы в вариабельной области, по сравнению с вариабельными областями, представленными в последовательности, описанной в таблице 1, в то же время, сохраняя по существу такую же антигенсвязывающую активность.
Поскольку каждое из этих антител может связываться с фактором Р, последовательности VH, VL, легкой цепи полной длины и тяжелой цепи полной длины (аминокислотные последовательности и нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности) можно "смешивать и подбирать" для создания других связывающих фактор Р антител по изобретению. Такие "смешанные и подобранные" связывающие фактор Р антитела можно тестировать, используя анализы связывания, известные в данной области (например, ELISA и другие анализы, описанные в разделе "Примеры"). Когда эти цепи смешивают и подбирают, то последовательность VH из конкретного спаривания VH/VL должна быть заменена структурно сходной последовательностью VH. Аналогичным образом, последовательность тяжелой цепи полной длины из конкретного спаривания тяжелой цепи полной длины/легкой цепи полной длины следует заменить структурно
сходной последовательностью тяжелой цепи полной длины. Аналогичным образом, последовательность VL из конкретного спаривания VH/VL следует заменить структурно сходной последовательностью VL. Аналогичным образом, последовательность легкой цепи полной длины из конкретного спаривания тяжелой цепи полной длины/легкой цепи полной длины следует заменить структурно сходной последовательностью легкой цепи полной длины. Соответственно, в одном аспекте изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающей области, имеющим: вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и 273, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274, где антитело специфически связывается с фактором Р (например, фактором Р человека и/или яванского макака).
В другом аспекте изобретение относится к (i) выделенному антителу, имеющему: тяжелую цепь полной длины, содержащую аминокислотную последовательность, которая была оптимизирована для экспрессии в клетке млекопитающего, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 и 275, и легкую цепь полной цепи, содержащую аминокислотную последовательность которая была оптимизирована для экспрессии в клетке млекопитающего, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 и 276; или (ii) к функциональному белку, содержащему его антигенсвязывающую часть.
Используемые в настоящем описании термины "определяющая
комплементарность область" и "CDR" относятся к
последовательностям аминокислот в пределах вариабельных областей антител, которые придают антигенную специфичность и аффинность связывания. Как правило, имеется три CDR в каждой
вариабельной области тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2, HCDR3) и три CDR в каждой вариабельной области легкой цепи (LCDR1, LCDR2, LCDR3).
Точные границы аминокислотной последовательности данной CDR можно легко определить, используя любые хорошо известные схемы, включая схемы, описанные в публикациях Rabat et al.
(1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (сема нумерации "Rabat"), Al-Lazikani et al.,
(1997) JMB 273,927-948 (сема нумерации "Chothia").
Например, в соответствии со схемой нумерации Rabat, аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене тяжелой цепи
(VH) нумеруются 31-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3); и аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене легкой цепи
(VL) нумеруются 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3). В соответствии со схемой нумерации Chothia, аминокислоты CDR в VH нумеруются 26-32 (HCDR1), 52-56 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3); и аминокислотные остатки в VL нумеруются 26-32 (LCDR1), 50-52
(LCDR2) и 91-96 (LCDR3). Путем комбинирования определений CDR по обеим схемам Rabat и Chothia, CDR состоят из аминокислотных остатков 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3) в VH человека и аминокислотные остатки 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3) в VL человека.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему фактор Р антителу, которое включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и легкой цепи, как описано в таблице 1, или их комбинации. Аминокислотные последовательности VH CDR1 антител показаны в SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183, 197, 211, 225, 239, 253 или 267. Аминокислотные последовательности VH CDR2 антител показаны в SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86, 100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240, 254 или 268. Аминокислотные последовательности VH CDR3 антител показаны в SEQ ID N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171, 185, 199, 213, 227, 241, 255 или 269. Аминокислотные последовательности VL CDR1 антител показаны в SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88,
102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256 или 27 0. Аминокислотные последовательности VL CDR2 антител показаны в SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 257 или 271. Аминокислотные последовательности VL CDR3 антител показаны в SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 или 272. Эти области CDR установлены с использованием системы Rabat.
Альтернативно, как определено с использованием системы Chothia (Al-Lazikani et al. , (1997) JMB 273, 927-948), аминокислотные последовательности VH CDR1 антител показаны в SEQ ID N0:281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335,
341, 347, 353, 359, 365, 371, 377, 383, 389 или 395. Аминокислотные последовательности VH CDR2 антител показаны в SEQ ID N0:282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336,
342, 348, 354, 360, 366, 372, 378, 384, 390 или 396. Аминокислотные последовательности VH CDR3 антител показаны в SEQ ID N0:283, 289, 295, 301, 307, 313, 319, 325, 331, 337,
343, 349, 355, 361, 367, 373, 379, 385, 391 или 397. Аминокислотные последовательности CDR VL антител показаны в SEQ ID N0:284, 290, 296, 302, 308, 314, 320, 326, 332, 338, 344, 350, 356, 3 62, 368, 374, 380, 386, 3 92 или 3 98. Аминокислотные последовательности VL CDR2 антител показаны в SEQ ID N0:285,
291, 297, 303, 309, 315, 321, 327, 333, 339, 345, 351, 357,
363, 369, 375, 381, 387, 393 или 399. Аминокислотные
последовательности VL CDR3 антител показаны в SEQ ID N0:286,
292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358,
364, 370, 376, 382, 388, 394 или 400.
Учитывая то, что каждое из этих антител может связываться с фактором Р, и что специфичность связывания антигена обеспечивается, прежде всего, областями CDR1, 2 и 3, последовательности VH CDR1, 2 и 3 и последовательности VL CDR1, 2 и 3 могут "смешиваться и подбираться", т.е. могут смешиваться и подбираться CDR из различных антител, хотя каждое антитело предпочтительно содержит VH CDR1, 2 и 3 и VL CDR1, 2 и 3 для создания других связывающих фактор Р молекул по изобретению.
Такие "смешанные и подобранные" связывающие фактор Р антитела
можно тестировать, используя анализы связывания, известные в
данной области, и анализы, описанные в разделе "Примеры"
(например, ELISA, SET, Biacore). Когда смешиваются и
подбираются последовательности VH CDR, то последовательности
CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VH
следует заменить структурно сходной(ыми)
последовательностью(ями). Аналогичным образом, когда
смешиваются и подбираются последовательности VL CDR, то последовательности CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VL следует заменить структурно сходной(ыми) последовательностью(ями). Специалисту в данной области вполне понятно, что новые последовательности VH и VL могут быть созданы заменой одной или нескольких последовательностей области VH и/или VL CDR структурно сходными последовательностями из последовательностей CDR, показанных в настоящем описании для моноклональных антител по настоящему изобретению. В дополнение к описанному выше, в одном из вариантов осуществления антигенсвязывающие фрагменты описанных в настоящем описании антител могут содержать VH CDR1, 2 и 3, или VL CDR1, 2 и 3, где фрагмент связывается с фактором Р в виде одного вариабельного домена.
В определенных вариантах осуществления изобретения антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут иметь последовательности тяжелой и легкой цепи Fab, описанные в таблице 1. Более конкретно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может иметь последовательность тяжелой и легкой цепи Fab NVS962, NVS963, NVS964, NVS965, NVS966, NVS967, NVS805, NVS806, NVS807, NVS808, NVS809, NVS962-S, NVS962-Q, NVS962-S31A, NVS962-G, NVS962-T, NVS965-S, NVS965-T или NVS965-Q.
В других вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, специфически связывающий фактор Р, включает вариабельную область CDR1 тяжелой цепи, вариабельную область CDR2 тяжелой цепи, вариабельную область CDR3 тяжелой цепи, вариабельную область CDR1 легкой цепи, вариабельную область CDR2 легкой цепи и вариабельную область
CDR3 легкой цепи, как определено системой Rabat и описано в таблице 1. В еще одних вариантах осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывает фактор Р, включает вариабельную область CDR1 тяжелой цепи, вариабельную область CDR2 тяжелой цепи, вариабельную область CDR3 тяжелой цепи, вариабельную область CDR1 легкой цепи, вариабельную область CDR2 легкой цепи и вариабельную область CDR3 легкой цепи, как определено системой Chothia и описано в таблице 1.
В определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:1; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:2; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:3; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:4; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:5 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:6. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:15; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:16; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:17; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:18; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:19 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:20. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:29;
вариабельную
область
CDR2
тяжелой
цепи
SEQ
NO:
30;
вариабельную
область
CDR3
тяжелой
цепи
SEQ
NO:
31;
вариабельную
область
CDR1
легкой
цепи
SEQ
NO:
32;
вариабельную
область
CDR2
легкой
цепи
SEQ
ID NO
: 33
вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:34. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:43; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:44;
вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:45; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:46; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:47 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:48. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р,
содержащее вариабельную
область CDR1 тяжелой
цепи
SEQ ID
N0:
57;
вариабельную
область
CDR2
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
58;
вариабельную
область
CDR3
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
59;
вариабельную
область
CDR1
легкой
цепи
SEQ
N0:
60;
вариабельную
область
CDR2
легкой
цепи
SEQ
ID N0
: 61
вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:62. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р,
содержащее вариабельную
область CDR1 тяжелой
цепи
SEQ ID
NO:
71;
вариабельную
область
CDR2
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
72;
вариабельную
область
CDR3
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
73;
вариабельную
область
CDR1
легкой
цепи
SEQ
N0:
74;
вариабельную
область
CDR2
легкой
цепи
SEQ
ID N0
: 75
вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:76. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р,
содержащее вариабельную
область CDR1 тяжелой
цепи
SEQ ID
N0:
35;
вариабельную
область
CDR3
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
3 6;
вариабельную
область
CDR3
тяжелой
цепи
SEQ
N0:
37;
вариабельную
область
CDR1
легкой
цепи
SEQ
N0:
38;
вариабельную
область
CDR2
легкой
цепи
SEQ
ID N0
: 89
вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:90. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:99;
определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:113; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:114; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:115; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:116; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:117 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:118. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:127; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:128; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:129; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:130; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:131 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:132. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:141; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:142; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:143; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:144; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:145 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:146. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:155; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:156; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:157; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:158; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:159 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:160. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:169; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:170;
вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:171; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:172; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:173 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:174. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:183; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:184; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:185; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:18 6; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:187 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:188. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:197; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:198; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:199; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:200; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:201 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:202. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:21 1; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:212; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:213; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:214; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:215 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:216. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:225; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:226; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:227; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:22 8; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:22 9 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:230. В другом
определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:239; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:240; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:241; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:242; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:243 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:244. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:253; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:254; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:255; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:256; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:257 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:258. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:267; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:268; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:2 69; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:270; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:271 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:271.
В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:281; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:2 82; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:2 83; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:284; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:285 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:286. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:287; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:288;
вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:289; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:2 90; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:2 91 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:292. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:293; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:294; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:2 95; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:296; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:2 97 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:298. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:299; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:300; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:301; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:302; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:303 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:304. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:305; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:306; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:307; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:308; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:309 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:310. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:311; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:312; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:313; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:314; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:315 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:316. В другом
определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:317; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:318; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:319; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:320; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:321 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:322. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:323; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:324; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:325; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:326; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:327 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:328. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:329; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:330; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:331; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:332; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:333 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:334. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:335; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:33 6; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:337; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:338; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:339 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:340. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:341; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:342;
вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:343; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:344; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:345 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:346. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:347; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:348; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:349; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:350; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:351 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:352. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:353; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:354; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:355; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:356; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:357 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:358. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:359; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:3 60; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:3 61; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:3 62; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:3 63 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:364. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:365; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:366; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:3 67; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:3 68; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:3 69 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:370. В другом
определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:371; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:372; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:373; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:374; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:375 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:376. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:377; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:378; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:379; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:380; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:381 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:382. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:383; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:384; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:385; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:386; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:387 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:388. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:389; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:390; вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:391; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:392; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:393 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:394. В другом определенном варианте осуществления изобретение включает антитело, которое специфически связывается с фактором Р, содержащее вариабельную область CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:395; вариабельную область CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:396;
вариабельную область CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:397; вариабельную область CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:398; вариабельную область CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:399 и вариабельную область CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:400.
В определенных вариантах осуществления изобретение включает антитела или антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с фактором Р, как описано в таблице 1. В предпочтительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который связывает фактор Р, представляет собой Fab NVS9 62, NVS9 63, NVS9 64, NVS9 65, NVS966, NVS967, NVS804, NVS805, NVS806, NVS807, NVS808, NVS809, NVS962-S, NVS962-Q, NVS962-G, NVS962-T, NVS962-S31A, NVS965-T, NVS965-Q или NVS9 65-S.
Используемое в настоящем изобретении антитело человека
включает вариабельные области тяжелой или легкой цепей или
тяжелую или легкую цепи полной длины, которые представляют
собой "продукт" или "получены из" конкретной последовательности
зародышевой линии, если вариабельные области или цепи полной
длины антитела получены из системы, которая использует гены
иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Такие системы
включают иммунизацию трансгенной мыши, несущей гены
иммуноглобулинов человека, представляющим интерес антигеном или
скрининг генной библиотеки иммуноглобулинов человека,
проявляемой на фаге, представляющим интерес антигеном. Антитело
человека, которое представляет собой "продукт"
последовательности зародышевой линии иммуноглобулина человека или "получено из него", можно идентифицировать по существу сравнением аминокислотной последовательности антитела человека с аминокислотной последовательностью зародышевой линии иммуноглобулинов человека и выбором последовательности зародышевой линии иммуноглобулинов человека, которая представляет собой ближайшую последовательность (т.е. имеющую самый большой % идентичности) к последовательности антитела человека. Антитело человека, которое представляет собой "продукт" или "получено из" конкретной последовательности зародышевой линии иммуноглобулинов человека, может содержать
аминокислотные различия, по сравнению с последовательностью
зародышевой линии, вследствие, например, природно встречающихся
соматических мутаций или преднамеренного внесения сайт-
направленных мутаций. Однако в каркасных областях VH или VL,
выбранное антитело человека обычно по меньшей мере на 90%
идентично аминокислотной последовательности, кодируемой геном
иммуноглобулина зародышевой линии человека, и содержит
аминокислотные остатки, которые идентифицируют антитело
человека как являющееся человеческим, при сравнении с
аминокислотными последовательностями иммуноглобулина
зародышевой линии других видов (например, последовательностями
зародышевой линии мыши). В определенных случаях антитело
человека может быть по меньшей мере на 60%, 7 0%, 8 0%, 90% или
по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 9 6%, 97%,
98% или 99% идентичным по аминокислотной последовательности
аминокислотной последовательности, кодируемой геном
иммуноглобулина зародышевой линии. Обычно, рекомбинантное антитело человека проявляет отличие не более чем 10 аминокислот от аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии человека в каркасных областях VH или VL. В определенных случаях антитело человека может проявлять отличие не более чем 5 или даже не более чем 4, 3, 2 или 1 аминокислоты от аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии человека. Примеры генов иммуноглобулина зародышевой линии человека включают, но без ограничения, описанные ниже фрагменты зародышевой линии вариабельного домена, а также DP47 и DPK9. Гомологичные антитела
В еще одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему аминокислотные последовательности, которые гомологичны последовательностям, описанным в таблице 1, и антитело связывается с белком фактора Р (например, фактора Р человека и/или яванского макака) и сохраняет желаемые функциональные свойства тех антител, которые описаны в таблице 1.
Например, изобретение относится к выделенному антителу или его функциональному антигенсвязывающему фрагменту, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, где вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 8 0%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и 273; вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 8 0%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274; и антитело специфически связывается с фактором Р (например, фактором Р человека и/или яванского макака).
В других вариантах осуществления аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательностям, представленным в таблице 1. В других вариантах осуществления аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть идентичными, за исключением замены аминокислот не более чем в 1, 2, 3, 4 или 5 положениях аминокислот. Антитело, имеющее области VH и VL, с высокой (т.е. 8 0% или более) идентичностью областям VH и VL, которые описаны в таблице 1, может быть получено мутагенезом (например, сайт-направленным или ПЦР-опосредованным мутагенезом) молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273, и SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274, соответственно, с последующим тестированием кодированного измененного антитела для определения сохраненной функции с использованием описанных в настоящем описании функциональных анализов.
В других вариантах осуществления аминокислотные последовательности тяжелой цепи полной длины и/или легкой цепи полной длины могут быть на 50% 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательностям, представленным в таблице 1. Антитело, имеющее тяжелую цепь полной длины и легкую цепь полной длины, с высокой (т.е. 80% или более) идентичностью тяжелым цепям полной длины любой из SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и тяжелым цепям полной длины любой из SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, может быть получено мутагенезом (например, сайт-направленным или ПЦР-опосредованным мутагенезом) молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей такие полипептиды, с последующим тестированием кодированного измененного антитела для определения сохраненной функции с использованием описанных в настоящем описании функциональных анализов.
В других вариантах осуществления нуклеотидные последовательности тяжелой цепи полной длины и/или легкой цепи полной длины могут быть на 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательностям, представленным в таблице 1.
В других вариантах осуществления нуклеотидные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи могут быть на 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательностям, представленным в таблице 1.
Используемый в настоящем описании процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой функцию числа идентичных положений, разделяемых последовательностями (т.е. % идентичности равен числу идентичных положений, деленному на общее число положений, хЮО), принимая во внимание число гэпов и длину каждого гэпа, которые должны вноситься для оптимального совмещения двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между
двумя последовательностями можно осуществить с использованием математического алгоритма, как описано ниже в неограничивающих примерах.
Дополнительно или альтернативно, последовательности белка по настоящему изобретению можно дополнительно использовать в качестве "искомой последовательности" для выполнения исследования по сравнению с общедоступными базами данных, например, для идентификации родственных последовательностей. Например, такие исследования можно выполнять с использованием программы BLAST (версия 2.0), описанной в публикации Altschul, et al., 1990 J. Mol. Biol. 215:403-10.
Антитела с консервативными модификациями
В определенных вариантах осуществления, антитело по изобретению имеет вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где одна или более этих последовательностей CDR имеют аминокислотные последовательности, точно установленные на основании описанных в настоящем описании антител или их консервативных модификаций, и где антитела сохраняют желаемые функциональные свойства связывающих фактор Р антител по изобретению. Соответственно, изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, состоящему из вариабельной области тяжелой цепи, содержащей последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельной области легкой цепи, содержащей последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где: аминокислотные последовательности вариабельной области CDR1 тяжелой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183, 197,
211, 225, 239, 253 и 267, и их консервативных модификаций; аминокислотные последовательности вариабельной области CDR2 тяжелой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86, 100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198,
212, 226, 240, 254 и 268, и их консервативных модификаций; аминокислотные последовательности вариабельной области CDR3 тяжелой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:3, 17,
211,
31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171, 185, 199,
213, 227, 241, 255 и 269, и их консервативных модификаций;
аминокислотные последовательности вариабельной области CDR1
легкой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18,
32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200,
214, 228, 242, 256 и 270, и их консервативных модификаций;
аминокислотные последовательности вариабельной области CDR2
легкой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19,
33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201,
215, 229, 243, 257 и 271, и их консервативных модификаций;
аминокислотные последовательности вариабельной области CDR3
легкой цепи выбраны из группы, состоящей из SEQ ID N0:6, 20,
34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202,
216, 230, 244, 258 и 272, и их консервативных модификаций; и
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически
связывается с фактором Р.
В других вариантах осуществления антитело по изобретению,
оптимизированное для экспрессии в клетке млекопитающего, имеет
последовательность тяжелой цепи полной длины и
последовательность легкой цепи полной длины, где одна или более
этих последовательностей имеют аминокислотные
последовательности, точно установленные на основании описанных в настоящем описании антител или их консервативных модификаций, и где антитела сохраняют желаемые функциональные свойства связывающих фактор Р антител по изобретению. Соответственно, изобретение относится к выделенному антителу, оптимизированному для экспрессии в клетке млекопитающего, состоящему из тяжелой цепи полной длины и последовательность легкой цепи полной длины, где тяжелая цепь полной длины имеет аминокислотные последовательности, выбранные из группы SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 и 275, и их консервативных модификаций; и легкая цепь полной длины имеет аминокислотные последовательности, выбранные из группы SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 и 276, и их консервативных модификаций; и антитело специфически
связывается с фактором Р (например, фактором Р человека и/или яванского макака).
Антитела, которые связываются с одним и тем же эпитопом
Настоящее изобретение относится к антителам, которые связываются с тем же эпитопом, что и связывающие фактор Р антитела, описанные в таблице 1. Поэтому дополнительные антитела можно идентифицировать на основании их способности конкурировать (например, конкурентно ингибировать связывание статистически значимым образом) с другим антителом по изобретению в анализах связывания фактора Р (таких как анализы, описанные в разделе "Примеры"). Способность тестируемого антитела ингибировать связывание антител по настоящему изобретению с белком фактора Р демонстрирует, что тестируемое антитело может конкурировать с этим антителом за связывание с фактором Р; такое антитело может в соответствии с неограничивающей теорией связываться с тем же или родственным (например, структурно сходным или пространственно близким) эпитопом на белке фактора Р, что и антитело, с которым он конкурирует. В определенном варианте осуществления антитело, которое связывается с тем же эпитопом на факторе Р, что и антитело по настоящему изобретению, представляет собой моноклональное антитело человека. Такие моноклональные антитела человека могут быть получены и выделены, как описано в настоящем описании. Как использовано в настоящем описании, антитело "конкурирует" за связывание, когда конкурирующее антитело ингибирует связывание с фактором Р антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению более чем на 50%, в присутствии эквимолярной концентрации конкурирующего антитела.
В других вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению связывают домен повтора тромбоспондина типа 5 (TSR 5) фактора Р (SEQ ID N0:406). В других вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению связывают область домена TSR5 фактора Р, содержащую SEQ ID N0:407. Еще в одних вариантах осуществления область содержит SEQ ID N0:408.
В других вариантах осуществления изобретения выделенные антитела или антигенсвязывающие фрагменты связывают эпитоп, содержащий SEQ ID N0:407, и в других вариантах осуществления эпитоп содержит SEQ ID N0:408. В других вариантах осуществления изобретения антитела или антигенсвязывающие фрагменты связывают пептид в соответствии с SEQ ID N0:407, и в еще одних вариантах осуществления эпитоп фактора Р включает SEQ ID N0:408.
Полученные методами генной инженерии и модифицированные антитела
Антитело по изобретению дополнительно может быть получено с использованием антитела, имеющего одну или более последовательностей VH и/или VL, показанных в настоящем описании в качестве исходного материала для создания модифицированного антитела методами генной инженерии, где модифицированное антитело может обладать свойствами, измененными относительно исходного антитела. Антитело может быть создано методами генной инженерии путем модификации одного или нескольких остатков в пределах одной или обеих вариабельных областей (т.е. VH и/или VL) , например, в пределах одной или нескольких областей CDR и/или в пределах одной или нескольких каркасных областей. Дополнительно или альтернативно, антитело может быть создано методами генной инженерии путем модификации остатков в пределах константной области(ей), например, для изменения эффекторной функции(ий) антитела.
Один тип генной инженерии вариабельной области, которую
можно выполнить, представляет собой CDR-прививка. Антитела
взаимодействуют с антигенами-мишенями преимущественно через
аминокислотные остатки, которые расположены в шести
определяющих комплементарность областях (CDR) тяжелой и легкой
цепи. По этой причине, аминокислотные последовательности в
пределах CDR являются более многообразными между отдельными
антителами, чем последовательности вне CDR. Ввиду того, что
последовательности CDR ответственны за большинство
взаимодействий антитело-антиген, возможна экспрессия
рекомбинантных антител, которые имитируют свойства определенных природно встречающихся антител путем конструирования
экспрессионных векторов, которые включают последовательности CDR из определенных природно встречающихся антител, привитых в каркасные последовательности из другого антитела с другими свойствами (см., например, публикации Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad., U.S.A. 86:1002910033; патент США 5225539, выданный Winter, и патенты США 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370, выданные Queen et al.)
Соответственно, другой вариант осуществления изобретения
относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему
фрагменту, содержащему вариабельную область тяжелой цепи,
содержащую последовательности CDR1, имеющие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID
N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183,
197, 211, 225, 239, 253 и 267; последовательности CDR2, имеющие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86, 100, 114,
128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240, 254 и 268;
последовательности CDR3, имеющие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID
N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171,
185, 199, 213, 227, 241, 255 и 269, соответственно; и
вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательности
CDR1, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из
группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102,
116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256 и 270;
последовательности CDR2, имеющие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 257, и 271; и CDR3 последовательности, состоящие из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 и 272, соответственно. Таким образом, такие антитела содержат последовательности CDR VH и VL моноклональных антител, но при этом могут содержать другие каркасные последовательности из
этих антител.
Альтернативно, другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 365, 371, 377, 383, 389 и 395; последовательности CDR2, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 366, 372, 378, 384, 390 и 396; последовательности CDR3, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:283, 289, 295, 301, 307, 313, 319, 325, 331, 337, 343, 349, 355, 361, 367, 373, 379, 385, 391 и 397, соответственно; и вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательности CDR1, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:284, 290, 296, 302, 308, 314, 320, 326, 332, 338, 344, 350, 356, 362, 368, 374, 380, 386, 392 и 3 98; последовательности CDR2, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:285, 291, 297, 303, 309, 315, 321, 327, 333, 339, 345, 351, 357, 363, 369, 375, 381, 387, 393 и 399; и последовательности CDR3, состоящие из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 364, 370, 376, 382, 388, 394 и 400, соответственно. Таким образом, такие антитела содержат последовательности CDR VH и VL моноклональных антител, но при этом могут содержать другие каркасные последовательности из этих антител.
Такие каркасные последовательности могут быть получены из общедоступных баз данных ДНК или опубликованных ссылок, которые включают последовательности генов антитела зародышевой линии. Например, последовательности ДНК зародышевой линии для генов вариабельной области тяжелой и легкой цепи человека можно найти в базе данных последовательностей зародышевой линии человека
"Vbase" (доступной в сети интернете на сайте mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), а также в публикациях Rabat, Е. A., et al. , 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. , 1992 J. Mol. Biol. 227:776-798; и Cox, J. P. L. et al. , 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836, содержание каждой из которых специально включено в настоящее описание посредством ссылки.
Примерами каркасных последовательностей для использования в антителах по изобретению являются такие, которые структурно сходны с каркасными последовательности, используемыми выбранными антителами по изобретению, например, консенсусными последовательностями и/или каркасными последовательностями, используемыми моноклональными антителами по изобретению. Последовательности VH CDR1, 2 и 3, и последовательности VL CDR1, 2 и 3 можно прививать в каркасные области, которые имеют последовательность, идентичную обнаруживаемой в гене иммуноглобулина зародышевой линии, из которой происходит каркасная последовательность, или последовательности CDR можно прививать в каркасные области, которые содержат одну или несколько мутаций, по сравнению с последовательностями зародышевой линии. Например, было обнаружено, что в определенных случаях благоприятна мутация остатков в пределах каркасных областей для поддержания или усиления способности связывания антигена антитела (см., например, патенты США 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370, выданные Queen et al). Каркасы, которые можно использовать в качестве матиц для построения описанных в настоящем описании антител и антигенсвязывающих фрагментов, включают, но без ограничения, VH1A, VH1B, VH3, Vkl, VI2 и Vk2. Дополнительные каркасы известны в данной области и могут быть найдены, например, в базе данных vBase в сети интернета на сайте vbase.mrc-сре.cam.ас.uk/index.php? &MMN_position=l:1.
Соответственно, один вариант осуществления изобретения относится к выделенному связывающему фактор Р антителу или его антигенсвязывающим фрагментам, содержащим вариабельную область
тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 и 273, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений в каркасной области такой последовательности, и дополнительно содержащие вариабельную область легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 и 274, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений в каркасной области такой последовательности. Другим типом модификации вариабельной области является мутация аминокислотных остатков в пределах VH и/или VL CDR1, CDR2 и/или CDR3 областей для улучшения, посредством этого, одного или нескольких свойств связывания (например, аффинности) представляющего интерес антитела, известного как "созревание аффинности". Сайт-направленный мутагенез или ПЦР-опосредованный мутагенез можно осуществить для внесения мутации(ий) и воздействия на связывание антитела или другое представляющее интерес функциональное свойство можно оценить в анализах in vitro или in vivo, как описано в настоящем описании и представлено в разделе "Примеры". Можно внести консервативные модификации (как обсуждалось выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные замены, добавления или делеций. Кроме того, обычно изменяются не более чем один, два, три, четыре или пять остатков в пределах CDR области.
Соответственно, в другом варианте осуществления изобретение относится к выделенному связывающему фактор Р антителу или его антигенсвязывающим фрагментам, состоящим из вариабельной области тяжелой цепи, имеющей VH CDR1 область, состоящую из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, имеющей SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183, 197, 211, 225, 239, 253 и 267, или аминокислотной последовательности, имеющей одну, две, три,
четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений,
по сравнению с SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113,
127, 141, 155, 169, 183, 197, 211, 225, 239, 253 или 267; VH
CDR2 область, имеющую аминокислотную последовательность,
выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58,
72, 86, 100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240,
254 и 2 68, или аминокислотную последовательность, имеющую одну,
две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или
добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86,
100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240, 254 или
2 68; VH CDR3 область, имеющую аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171, 185, 199, 213, 227, 241, 2 55 и 269, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171, 185, 199, 213, 227, 241, 255 или 269; VL CDR1 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256 и 270, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172, 186, 200, 214, 228, 242, 256 или 270; VL CDR2 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 2 57 и 271, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243, 257 или 271; и VL CDR3 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 и 272, или аминокислотную
последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118, 132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 или 272.
Соответственно, в другом варианте осуществления изобретение относится к выделенному связывающему фактор Р антителу или его антигенсвязывающим фрагментам, состоящим из вариабельной области тяжелой цепи, имеющей VH CDR1 область, состоящую из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, имеющей SEQ ID N0:281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 365, 371, 377, 383, 389 и 395, или аминокислотной последовательности, имеющей одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 365, 371, 377, 383, 38 9 или 3 95; VH CDR2 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 366, 372, 378, 384, 390 и 396, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 366, 372, 378, 384, 390, или 396; VH CDR3 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:283, 289, 295, 301, 307, 313, 319, 325, 331, 337, 343, 349, 355, 361, 367, 373, 379, 385, 391 и 3 97, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:283, 289, 295, 301, 307, 313, 319, 325, 331, 337, 343, 349, 355, 361, 367, 373, 379, 385, 391 или 397; VL CDR1 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:284, 290, 296, 302, 308, 314, 320, 326, 332, 338, 344, 350, 356, 3 62, 368, 374, 380, 386, 3 92 и 398, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с
SEQ ID N0:284, 290, 296, 302, 308, 314, 320, 326, 332, 338, 344, 350, 356, 362, 368, 374, 380, 386, 392 или 398; VL CDR2 область имеющий аминокислота последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:285, 291, 297, 303, 309, 315, 321, 327, 333, 339, 345, 351, 357, 363, 369, 375, 381, 387, 393 и 399, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:285, 291, 297, 303, 309, 315, 321, 327, 333, 339, 345, 351, 357, 363, 369, 375, 381, 387, 3 93 или 399; и VL CDR3 область, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 364, 370, 376, 382, 388, 394 и 400, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений, по сравнению с SEQ ID N0:286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 364, 370, 376, 382, 388, 394 или 400.
Прививка антигенсвязывающих доменов в альтернативные каркасы или матрицы
Широкое разнообразие каркасов или матриц
антител/иммуноглобулинов можно использовать, пока полученный в результате полипептид включает по меньшей мере одну связывающую область, которая специфически связывается с Фактором Р. Такие каркасы или матрицы включают 5 основных изотипов иммуноглобулинов человека или их фрагментов и включают иммуноглобулины других видов животных, предпочтительно имеющие гуманизированные аспекты. Антитела с одной тяжелой цепью, такие как антитела, идентифицированные у верблюдовых, представляют в этом отношении особый интерес. Специалисты в данной области продолжают открывать и разрабатывать новые каркасы, матрицы и фрагменты.
В одном аспекте изобретение относится к получению антитела, не основанного на иммуноглобулине, с использованием неиммуноглобулиновых матриц, на которые можно прививать CDR по изобретению. Можно использовать известные или будущие неиммуноглобулиновые каркасы и матрицы, пока они включают
связывающую область, специфичную для белка-мишени фактора Р.
Известные неиммуноглобулиновые каркасы или матрицы включают, но
без ограничения, фибронектин (Compound Therapeutics, Inc.,
Waltham, MA) , анкирин (Molecular Partners AG, Zurich,
Switzerland), доменовые антитела (Domantis, Ltd., Cambridge,
MA, и Ablynx nv, Zwijnaarde, Belgium), липокаин (Pieris
Proteolab AG, Freising, Germany), мелкомодульные
иммунофармацевтические препараты (Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA) , макситела (Avidia, Inc., Mountain View, CA) , белок A (Affibody AG, Sweden) и аффилин (гамма-крисТаллин или убиквитин) (Scil Proteins GmbH, Halle, Germany).
Фибронектиновые матрицы основаны на домене фибронектина типа III (например, десятый модуль фибронектина типа III (домен 10Fn3)). Домен фибронектина типа III имеет 7 или 8 бета-цепей, распределенных между двумя бета-листками, которые сами упаковывают друг друга с образованием ядра белка, и дополнительно содержащих петли (аналогичные CDR), которые соединяют бета-нити друг с другом и подвержены воздействию растворителя. Имеются по меньшей мере три таких петли на каждом краю сэндвича бета-листков, где край представляет собой границу белка, перпендикулярную направлению бета-нитей (см. патент США 6818418) . Эти матрицы на основе фибронектина не являются иммуноглобулином, хотя складка в целом тесно связана с таковым наименьшего функционального фрагмента антитела, вариабельной области тяжелой цепи, которая включает весь антигенраспознающий блок в IgG верблюда и ламы. Ввиду этой структуры, неиммуноглобулиновое антитело имитирует антигенсвязывающие свойства, которые сходны по природе и аффинности со свойствами антител. Эти матрицы можно использовать при петельной рандомизации и стратегии перетасовки in vitro, которая сходна с процессом созревания аффинности антитела in vivo. Эти молекулы на основе фибронектина можно использовать в качестве матриц, где петельные области молекулы могут быть заменены CDR по изобретению с использованием стандартных технологий клонирования.
Анкириновая технология основана на использовании белков с
полученными из анкирина модулями повторов в качестве матриц для несения вариабельных областей, которые можно использовать для связывания с различными мишенями. Модуль анкириновых повторов представляет собой полипептид из 33 аминокислот, состоящий из двух антипараллельных а-спиралей и [3-витков. Связывание вариабельных областей главным образом оптимизируется использованием рибосомного дисплея.
Авимеры получают из природного А-домена, содержащего белок, такой как LRP-1. Эти домены используются в природе для межбелковых взаимодействий, и у человека более 250 белков структурно основаны на А-доменах. Авимеры состоят из ряда различных мономеров (2-10) "А-домена", связанных через аминокислотные линкеры. Можно создать авимеры, которые могут связываются с антигеном-мишенью с использованием методологии, описанной, например, в опубликованных патентных заявках США 20040175756; 20050053973; 20050048512 и 20060008844.
Лиганды аффинности аффитела представляют собой мелкие, простые белки, составленные из трехспирального пучка на основании матрицы одного из IgG-связывающих доменов Белка А. Белок А представляет собой поверхностный белок из бактерии Staphylococcus aureus. Этот матричный домен состоит из 58 аминокислот, 13 из которых рандомизированы для создания библиотек аффител с большим числом вариантов лигандов (см., например, патент США 5831012). Молекулы аффител имитируют антитела, они имеют молекулярную массу б кДа, по сравнению с молекулярной массой антитела, которая составляет 150 кДа. Несмотря на его малый размер, сайт связывания молекул аффитела сходен с сайтом связывания антитела.
Антикалины представляют собой продукты, разработанные компанией Pieris ProteoLab AG. Они получены из липокаинов, широко распространенной группы мелких и прочных белков, которые обычно задействованы в физиологическом транспорте или накоплении химически чувствительных или нерастворимых соединений. В тканях или биологических жидкостях человека встречаются несколько природных липокаинов. Белковая
архитектура напоминает иммуноглобулины, с гипервариабельными петлями, расположенными поверх жесткого каркаса. Однако в отличие от антител или их рекомбинантных фрагментов, липокаины составлены из одной полипептидной цепи, имеющей от 160 до 180 аминокислотных остатков, которая незначительно больше, чем один домен иммуноглобулина. Набор из четырех петель, который составляет связывающий "карман", проявляет выраженную структурную пластичность и переносит разнообразие боковых цепей. Таким образом, сайт связывания можно реконструировать в патентованном процессе для распознавания целевых молекул различной формы с высокой аффинностью и специфичностью. Один белок из семейства липокаина, билин-связывающий белок (ВВР) Pieris Brassicae, использовали для разработки антикалинов путем мутагенеза набора из четырех петель. Одним примером патентной заявки, описывающей антикалины, является опубликованная Международная патентная заявка WO 199916873.
Молекулы аффилина представляют собой мелкие
неиммуноглобулиновые белки, которые предназначены для специфической аффинности в отношении белков и малых молекул. Новые молекулы аффилина можно очень быстро выбрать из двух библиотек, каждая из которых основана на другом матричном белке человеческого происхождения. Молекулы аффилина не проявляют какой-либо структурной гомологии с белками иммуноглобулина. В настоящее время используют две матрицы аффилина, одна из которых представляет собой гамма-кристаллин, структурный белок хрусталика человека, и другая представляет собой белки суперсемейства "убиквитина". Обе человеческие матрицы являются очень мелкими, проявляют высокую температурную стабильность и почти устойчивы к изменениям рН и денатурирующим агентам. Эта высокая устойчивость главным образом определяется расширенной структурой бета листков белков. Примеры белков, полученных из гамма-крисТаллина, описаны в опубликованной Международной патентной заявке WO200104144, и примеры "подобных убиквитину" белков описаны в опубликованной Международной патентной заявке WO2004106368.
Миметики эпитопов белков (РЕМ) представляют собой имеющие
средний размер, циклические, подобные пептидам молекулы (ММ (молекулярная масса) 1-2 кДа), имитирующие вторичные структуры белков в виде бета-шпильки, основную вторичную структуру, задействованную в межбелковых взаимодействиях.
Настоящее изобретение относится к полностью человеческим антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р. По сравнению с химерными или гуманизированными антителами, связывающие фактор Р антитела человека по изобретению имеют дополнительно сниженную антигенность при введении людям.
Антитела верблюдовых
Белки антител, полученные от членов семейства двугорбых и одногорбых верблюдов (Camelus bactrianus и Calelus dromaderius), включая членов из нового света, таких как вид лама (Lama paccos, Lama glama и Lama vicugna), были охарактеризованы в отношении размера, структурной сложности и антигенности для людей. Определенные IgG антитела из этого семейства млекопитающих, обнаруживаемые в природе, лишены легких цепей и, таким образом, структурно отличаются от типичной четырехцепочечной четвертичной структуры, имеющей две тяжелых и две легких цепи, для антител других животных. См. Европейскую патентную заявку РСТ/ЕР93/02214 (Международную патентную заявку W0 94/04678, опубликованную 3 марта 1994 г).
Область антитела верблюдовых, которая представляет собой малый одиночный вариабельный домен, идентифицированный как VHH, может быть получена методом генной инженерии для выхода мелкого белка, имеющего высокую аффинность в отношении мишени, приводя к получению происходящего из антитела белка с низкой молекулярной массой, известного как "наноантитело верблюдовых". См. патент США 5759808, выданный 2 июня 1998 г; см. также публикации Stijlemans, В. et al. , 2004 J Biol Chem 279: 12561261; Dumoulin, M. et al. , 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, M. et al. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamozo, V. et al. 2002 Int J Cancer 89: 456-62; и Lauwereys, M. et al. 1998 EMBO J 17: 3512-3520. Полученные методами генной инженерии библиотеки антител верблюдовых и фрагменты антител коммерчески доступны, например, от компании
Ablynx, Ghent, Belgium. Как и с другими антителами не
человеческого происхождения, аминокислотную последовательность
антитела верблюдовых можно изменить рекомбинантно для получения
последовательности, которая более тесно напоминает
последовательность человека, т.е. нанотело может быть "гуманизировано". Таким образом, природно-низкая антигенность антител верблюдовых для людей может быть дополнительно снижена.
Нанотело верблюдовых имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно одну десятую часть от молекулярной массы молекулы IgG человека, и белок имеет физический диаметр только несколько нанометров. Одним последствием малого размера является способность нанотел верблюдовых связываться с антигенными сайтами, которые являются функционально невидимыми для более крупных белков антител, т.е. нанотела верблюдовых полезны в качестве реагентов для детектирования антигенов, которые в иных случаях являются криптическими, с использованием классических иммунологических методик, и в качестве возможных терапевтических средств. Таким образом, еще одним последствием малого размера является то, что нанотело верблюдовых может ингибировать в результате связывания со специфическим сайтом в бороздке или узкой щели белка-мишени и, следовательно, может служить в объеме, который больше напоминает функцию классического лекарственного средства с низкой молекулярной массой, чем молекулярная масса классического антитела.
Низкая молекулярная масса и компактный размер дополнительно приводит к тому, что нанотела верблюдовых являются крайне термо стабильными, стабильными при крайних значениях рН и протеолитическом переваривании и слабо антигенными. Другое последствие заключается в том, что нанотела верблюдовых легко перемещаются из системы кровообращения в ткани и даже через гематоэнцефалический барьер и могут подвергать лечению расстройства, которые воздействуют на нервную ткань. Нанотела могут дополнительно содействовать транспорту лекарственных средств через гематоэнцефалический барьер. См. патентную заявку США 20040161738, опубликованную 19 августа 2004 г. Эти признаки в комбинации с низкой
антигенностью для людей указывают на большой терапевтический потенциал. Кроме того, эти молекулы могут быть полностью экспрессированы в прокариотических клетках, таких как Е. Coli, и экспрессируются в виде слитых белков с бактериофагом и являются функциональными.
Соответственно, задачей настоящего изобретения является антитело или нанотело верблюдовых, имеющее высокую аффинность в отношении фактора Р. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения антитело или нанотело верблюдовых в природных условиях продуцируется у верблюдового животного, т.е. продуцируется верблюдовыми после иммунизации фактором Р или его пептидным фрагментом с использованием методик, описанных в настоящем описании для других антител. Альтернативно, связывающее фактор Р нанотело верблюдовых получают методами генной инженерии, т.е. продуцируют выбором, например, из библиотеки фага, проявляющего соответственно мутагенизированные белки нанотел верблюдовых с использованием процедур "паннинга" с фактором Р в качестве мишени, как описано в настоящем описании в примерах. Полученные методами генной инженерии нанотела могут быть дополнительно получены в соответствии с конкретными требованиями методами генной инженерии для того, чтобы иметь период полужизни в организме реципиента от 4 5 минут до двух недель. В определенном варианте осуществления антитело или нанотело верблюдовых получают прививкой последовательностей CDR тяжелой или легкой цепи антител человека по изобретению в нанотело или каркасные последовательности однодоменного антитела, как описано, например, в Европейской патентной заявке РСТ/ЕР93/02214.
Биспецифические молекулы и мультивалентные антитела В другом аспекте настоящее изобретение относится к биспецифическим или мультиспецифическим молекулам, содержащим связывающее фактор Р антитело или его фрагмент по изобретению. Антитело по изобретению или его антигенсвязывающие области могут быть дериватизированы или связаны с другой функциональной молекулой, например, с другим пептидом или белком (например, другим антителом или лигандом рецептора) для создания
биспецифической молекулы, которая связывается по меньшей мере с двумя различными сайтами связывания или молекулами-мишенями. Антитело по изобретению в действительности может быть дериватизировано или связано с несколькими другими функциональными молекулами для создания мультиспецифических молекул, которые связываются более чем с двумя различными сайтами связывания и/или молекулами-мишенями; такие мультиспецифические молекулы также предназначены для охвата используемым в настоящем описании термином "биспецифическая молекула". Для создания биспецифической молекулы по изобретению антитело по изобретению может быть функционально связано (например, химическим соединением, генетическим слиянием, нековалентным связыванием или иным образом) с одной или несколькими другими связывающими молекулами, такими как другое антитело, фрагмент антитела, пептид или связывающий миметик, так что в результате образуется биспецифическая молекула.
Соответственно, настоящее изобретение включает
биспецифические молекулы, имеющие по меньшей мере одну первую специфичность связывания в отношении фактора Р и вторую специфичность связывания в отношении второго эпитопа-мишени. Например, второй эпитоп-мишень представляет собой другой эпитоп фактора Р, отличающийся от первого эпитопа-мишени.
Кроме того, для изобретения, в котором биспецифическая молекула является мультиспецифической, молекула может дополнительно включать третью специфичность связывания, в дополнение к первому и второму эпитопу-мишени.
В одном из вариантов осуществления биспецифические молекулы по изобретению содержат в качестве специфичности связывания по меньшей мере одно антитело или фрагмент антитела, включая, например, Fab, Fab', F(ab')2/ Fv или одноцепочечный Fv. Антитело может также представлять собой димер легкой цепи или тяжелой цепи или его любой минимальный фрагмент, такой как Fv или одноцепочечный конструкт, как описано в патенте США 4946778, выданном Ladner et al.
Диатела представляют собой бивалентные, биспецифические молекулы, в которых домены VH и VL экспрессированы на одной
полипептидной цепи, соединены линкером, который является слишком коротким для обеспечения возможности спаривания между двумя доменами на одной и той же цепи. Домены VH и VL спариваются с комплементарными доменами другой цепи, посредством этого, создавая два антигенсвязывающих сайта (см., например, публикации Holliger et al, 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak et al., 1994 Structure 2:1 121-1 123). Продукцию диател можно осуществить экспрессированием двух полипептидных цепей со структурой или VHA-VLB и VHB-VLA (конфигурации VH-VL), или VLA-VHB и VLB-VHA (конфигурации VL-VH) внутри той же клетки. Большинство из них могут быть экспрессированы в растворимой форме в бактериях. Одноцепочечные диатела (scDb) продуцируются соединением двух образующих диатело полипептидных цепей линкером приблизительно из 15 аминокислотных остатков (см. публикации Holliger and Winter, 1997 Cancer Immunol. Immunother., 45(3-4) :128-30; Wu et al. , 1996 Immunotechnology, 2(1) :21-36) . scDb могут быть экспрессированы в бактериях в растворимой, активной мономерной форме (см. публикации Holliger and Winter, 1997 Cancer Immunol. Immunother., 45(34) : 128-30; Wu et al. , 1996 Immunotechnology, 2(1) : 21-36; Pluckthun and Pack, 1997 Immunotechnology, 3(2) : 83-105; Ridgway et al., 1996 Protein Eng., 9(7):617-21). Диатело может быть слито с Fc для создания "ди-диатела" (см. публикацию Lu et al., 2004 J. Biol. Chem., 279 (4) :2856-65) .
Другие антитела, которые можно использовать в биспецифических молекулах по изобретению, представляют собой мышиные, химерные и гуманизированные моноклональные антитела.
Биспецифические молекулы могут быть получены конъюгацией составляющих специфичностей связывания с использованием способов, известных в данной области. Например, каждая специфичность связывания биспецифической молекулы может создаваться отдельно и затем конъюгироваться друг с другом. Когда специфичности связывания представляют собой белки или пептиды, то для ковалентной конъюгации можно использовать разнообразные соединяющие и поперечно сшивающие агенты. Примеры поперечно сшивающих агентов включают белок А, карбодиимид, N
сукцинимидил-Э-ацетилтиоацетат (SATA), 5,5'-дитиобис(2-
нитробензойную кислоту) (DTNB), о-фенилендималеимид (oPDM), N-
сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP) и
сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-SMCC) (см., например, публикации Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MA et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648). Другие способы включают такие, как описано в публикациях Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83) и Glennie et al. , 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375) . Конъюгирующие агенты представляют собой SATA и сульфо-SMCC, которые оба выпускаются компанией Pierce Chemical Co. (Rockford, IL).
Когда специфичности связывания представляют собой антитела, то они могут быть конъюгированы сульфгидрильным связыванием С-концевых шарнирных областей двух тяжелых цепей. В конкретном варианте осуществления шарнирную область модифицируют для содержания нечетного числа сульфгидрильных остатков, например, одного, перед конъюгацией.
Альтернативно, обе специфичности связывания могут быть кодированы в одном и том же векторе и экспрессироваться и подвергаться сборке в одной и той же клетке-хозяине. Этот способ особенно полезен, где биспецифическая молекула представляет собой mAbxmAb, mAbxFab, FabxF(ab')2 или слитый белок лигандхЕаЬ. Биспецифическая молекула по изобретению может представлять собой одноцепочечную молекулу, содержащую одно одноцепочечное антитело и детерминанту связывания, или одноцепочечную биспецифическую молекулу, содержащую две детерминанты связывания. Биспецифические молекулы могут содержать по меньшей мере две одноцепочечные молекулы. Способы получения биспецифических молекул описаны, например, в патентах США 5260203; 5455030; 4881175; 5132405; 5091513; 5476786; 5013653; 5258498 и 5482858.
Связывание биспецифических молекул с их специфическими мишенями может быть подтверждено, например, ферментным иммуносорбетным анализом (ELISA), радиоиммуноанализом (REA),
FACS-анализом (проточной цитометрией), биоанализом (например, ингибированием роста) или вестерн блот анализом. Каждый из этих анализов в целом выявляет присутствие представляющих особый интерес комплексов белок-антитело путем использования меченого реагента (например, антитела), специфичного для представляющего интерес комплекса.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к мультивалентным соединениям, содержащим по меньшей мере две идентичных или различных антигенсвязывающих частей антител по изобретению, связывающихся с фактором Р. Антигенсвязывающие части могут быть связаны вместе посредством слияние белков или ковалентного или нековалентного связывания. Альтернативно, способы связывания были описаны для биспецифических молекул. Четырехвалентные соединения могут быть получены, например, поперечной сшивкой антител по изобретению с антителом, которое связывается с константными областями антител по изобретению, например, Fc или шарнирной областью.
Тримеризующие домены описаны, например, в Европейском патенте ЕР 1012280В1, выданном Вогеап. Пентамеризующие модули описаны, например, в Европейской патентной заявке РСТ/ЕР97/05897.
Антитела с продленным периодом полужизни
Настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с белком фактора Р, имеющим продленный период полужизни in vivo.
Многие факторы могут воздействовать на период полужизни
белка in vivo, например, почечная фильтрация, метаболизм в
печени, разрушение протеолитическими ферментами (протеазами) и
иммуногенные реакции (например, нейтрализация белка антителом и
захват макрофагами и дендритными клетками). Разнообразные
стратегии можно использовать для продления периода полужизни
антител по настоящему изобретению. Например, химическим
связыванием с полиэтиленгликолем (ПЭГ), reCODE ПЭГ, матрицей
антитела, полисиаловой кислотой (PSA), гидроксиэтиловым
крахмалом (HES), альбуминсвязывающими лигандами и
углеводородными экранами; генетическим слиянием с белками,
связывающимися с сывороточными белками, такими как альбумин, IgG, FcRn, и переносом; соединением (генетически или химически) с другими связывающими составляющими, которые связываются с сывороточными белками, такими как нанотела, Fab, БАКРины (сконструированные белки, имеющие анкириновые повторы), авимеры, аффитела и антикалины; генетическим слиянием с гПЭГ, альбумином, доменом альбумина, альбуминсвязывающими белками и Fc; или включением в наноносители, препаративные формы медленного высвобождения или медицинские устройства.
Для продления циркуляции в сыворотке антитела in vivo
молекулы инертного полимера, такого как ПЭГ с высокой
молекулярной массой, можно присоединить к антителам или их
фрагменту многофункциональным линкером или без него или
посредством сайт-специфической конъюгации ПЭГ к N- или С-концу
антител, или через эпсилон-аминогруппы, присутствующие на
лизиновых остатках. Для пегилирования антитела, антитело или
его фрагмент обычно подвергают взаимодействию с
полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособный сложный
эфир или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, в которых
одна или более групп ПЭГ присоединяются к антителу или
фрагменту антитела. Пегилирование можно осуществлять реакцией
ацилирования или реакцией алкилирования с реакционноспособной
молекулой ПЭГ (или аналогичным реакционноспособным растворимым
в воде полимером). Используемый в настоящем описании термин
"полиэтиленгликоль" предназначен для включения любой из форм
ПЭГ, которые используются для получения других белков, такой
как моно(С1-С10)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или
полиэтиленгликольмалеимид. В определенных вариантах
осуществления подлежащее пегилированию антитело представляет собой агликозилированное антитело. Следует использовать получение линейных или разветвленных полимеров, которое приводит к минимальной потере биологической активности. Тщательный мониторинг степени конъюгации может осуществляться SDS-PAGE (электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) и масс-спектрометрией для обеспечения должной конъюгации молекул ПЭГ антителами. Непрореагировавший
ПЭГ можно отделить от конъюгатов антитело-ПЭГ исключением по размеру или ионообменной хроматографией. ПЭГ-полученные антитела можно тестировать в отношении активности связывания, а также в отношении эффективности in vivo с использованием способов, хорошо известных специалистам в данной области, например, описанными в настоящем описании иммуноанализами. Способы пегилирования белков известны в данной области и могут применяться к антителам по изобретению. См., например, Европейский патент ЕР 0154316, выданный Nishimura et al. , и Европейский патент ЕР 0401384, выданный Ishikawa et al.
Другие модифицированные технологии пегилирования включают
технологию восстанавливающей химически ортогонально
направленной инженерии (ReCODE ПЭГ), которая включает химически определенные боковые цепи в биосинтетические белки через восстановленную систему, которая включает тРНК-синтетазу и тРНК (транспортную РНК) . Эта технология обеспечивает возможность включения более чем 3 0 новых аминокислот в биосинтетические белки в Е. coli, дрожжи и клетки млекопитающих. тРНК включает ненативную аминокислоту в любое место, где располагается амбер-кодон, превращая амбер-кодон из стоп-кодона в тот, который сигнализирует о включении химически определенной аминокислоты.
Рекомбинантную технологию пегилирования (гПЭГ) также можно
использовать для удлинения периода полужизни в сыворотке. Эта
технология включает генетическое слияние хвоста
неструктурированного белка из 300-600 аминокислот с существующим фармацевтическим белком. Ввиду того, что видимая молекулярная масса такой неструктурированной белковой цепи примерно в 15 раз больше, чем ее действительная молекулярная масса, полужизнь белка в сыворотке значительно увеличивается. В отличие от традиционного пегилирования, которое требует химической конъюгации и повторной очистки, процесс производства в значительной степени упрощается, и продукт является однородным.
Полисиалирование представляет собой другую технологию, в которой используется природная полимерная полисиаловая кислота (PSA) для удлинения активной жизни и улучшения стабильности
терапевтических пептидов и белков. PSA представляет собой полимер сиаловой кислоты (сахар). При использовании для доставки белка и терапевтического пептидного лекарственного средства полисиаловая кислота обеспечивает защитную микросреду после конъюгации. Это увеличивает активную жизнь терапевтического белка в циркулирующей крови и препятствует его распознаванию иммунной системой. Полимер PSA обнаруживается в природных условиях в организме человека. Он был воспринят определенными бактериями, которые развились в течение миллионов лет, для покрытия ею их стенок. Эти природно полисиалированные бактерии затем стали способными, в силу молекулярной мимикрии, дезориентировать защитную систему организма. PSA, уникальную технологию "стеле" природы, можно легко осуществлять из таких бактерий в больших количествах и с заданными физическими характеристиками. Бактериальная PSA является полностью неиммуногенной, даже при соединении с белками, поскольку она химически идентична PSA в организме человека.
Другая технология включает использование производных гидроксиэтилкрахмала ("HES"), связанных с антителами. HES представляет собой модифицированный природный полимер, полученный из восковидного крахмала маиса, и может метаболизироваться ферментами организма. Растворы HES обычно вводят для замещения недостаточного объема крови и для улучшения реологических свойств крови. Гесилирование антитела обеспечивает возможность удлинения периода полужизни в циркулирующей крови увеличением стабильности молекулы, а также снижением почечного клиренса, приводя к увеличенной биологической активности. Путем варьирования различных параметров, таких как молекулярная масса HES, можно на заказ получить широкий диапазон конъюгатов HES-антитело.
Антитела, имеющие увеличенный период полужизни in vivo, можно также создать внесением одной или нескольких модификаций аминокислот (т.е. замен, вставок или делеций) в IgG константный домен или его фрагмент, связывающий FcRn (предпочтительно, Fc или шарнир Fc-фрагмента домена). См., например, опубликованную Международную патентную заявку W0 98/23289; опубликованную
Международную патентную заявку W0 97/34 631 и патент США 6277375.
Дополнительно, антитела можно конъюгировать с альбумином (например, сывороточным альбумином человека; HSA) для того, чтобы сделать антитело или фрагмент антитела более стабильным in vivo, или иметь их более длинный период полужизни in vivo. Методики хорошо известны в данной области, см., например, опубликованные Международные патентные заявки W0 93/15199, W0 93/15200 и WO 01/77137; и Европейский патент ЕР 413622. Кроме того, в контексте биспецифического антитела, как описано выше, специфические характеристики антитела можно сконструировать так, чтобы один связывающий домен антитела связывался с фактором Р, в то время как второй связывающий домен антитела связывался с сывороточным альбумином, предпочтительно, HSA.
Стратегии увеличения периода полужизни особенно полезны в нанотелах, связывающих агентах на основе фибронектина и других антителах или белках, для которых желательно увеличение периода полужизни in vivo.
Конгьюгаты антител
Настоящее изобретение относится к антителам или их фрагментам, которые специфически связываются с белком фактора Р, рекомбинантно слитым или химически конъюгированным (включая как ковалентную, так и нековалентную конъюгации) с гетерологичным белком или полипептидом (или их фрагментом, предпочтительно, с полипептидом по меньшей мере из 10, по меньшей мере из 20, по меньшей мере из 30, по меньшей мере из 40, по меньшей мере из 50, по меньшей мере из 60, по меньшей мере из 70, по меньшей мере из 80, по меньшей мере из 90 или по меньшей мере из 100 аминокислот) для создания слитых белков. В частности, изобретение относится к белкам, содержащим антигенсвязывающий фрагмент описанного в настоящем описании антитела (например, фрагмент Fab, фрагмент Fd, фрагмент Fv, фрагмент F(ab)2/ домен VH, VH CDR, домен VL или VL CDR) и гетерологичный белок, полипептид или пептид. Способы слияния или конъюгации белков, полипептидов или пептидов с антителом или фрагментом антитела известны в данной области. См.,
например, патенты США 5336603, 5622929, 5359046, 5349053, 5447851 и 5112946; Европейские патенты ЕР 307434 и ЕР 367166; опубликованные Международные патентные заявки WO 96/04388 и WO 91/06570; публикации Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539; Zheng et al, 1995, J. Immunol. 154:5590-5600 и Vil et al. , 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1 1337-11341.
Дополнительные слитые белки можно создать с использованием технологий перетасовки генов, перетасовки мотивов, перетасовки эксонов и/или перетасовки кодонов (совместно называемых "перетасовкой ДНК"). Перетасовку ДНК можно использовать для изменения активностей антитела по изобретению или его фрагментов (например, антитела или его фрагментов с более высокой аффинностью и более низкими скоростями диссоциации). См. как правило, патенты США 5605793, 5811238, 5830721, 5834252 и 5837458; публикации Patten et al. , 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson, et al. , 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76 и Lorenzo и Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-313 (каждый из этих патентов и каждая из этих публикаций полностью включены в настоящее описание посредством ссылки). Антитела или их фрагменты или кодированные антитела или их фрагменты можно изменить, подвергая их случайному мутагенезу, склонной к ошибкам ПЦР, случайной вставке нуклеотида или другим способам перед рекомбинацией. Полинуклеотид, кодирующий антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с белком фактора Р, можно рекомбинировать одним или более компонентами, мотивами, отрезками, частями, доменами, фрагментами и подобными одной или нескольких гетерологичных молекул.
Кроме того, антитела или их фрагменты могут быть слиты с маркерными последовательностями, такими как пептид, для облегчения очистки. В предпочтительных вариантах осуществления маркерная аминокислотная последовательность представляет собой гексагексидиновый пептид, такой как метка, обеспеченная, наряду с другими, в векторе pQE (QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311), многие из которых коммерчески доступны.
Как описано в публикации Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824, например, гексагистидин обеспечивает удобную очистку слитого белка. Другие пептидные метки, полезные для очистки, включают, но без ограничения, гемагглютининовую ("НА") метку, которая соответствует эпитопу, полученному из белка гемагглютинина вируса гриппа (Wilson et al., 1984, Cell 37:767), и "флажковую" метку.
В других вариантах осуществления антитела по настоящему
изобретению или их фрагменты конъюгированы с диагностическим
или детектируемым агентом. Такие антитела могут быть полезны
для мониторинга или прогнозирования начала, развития,
прогрессирования и/или тяжести заболевания или расстройства в
виде части процедуры клинического тестирования, такого как
определение эффективности конкретного лечения. Такую
диагностику и детектирование можно осуществлять соединением
антитела с выявляемыми веществами, включая, но без ограничения,
различные ферменты, такие как, но без ограничения, пероксидаза
хрена, щелочная фосфотаза, бета-галактозидаза или
ацетилхолинэстераза; простетические группы, такие как, но без
ограничения, стрептавидин/биотин и авидин/биотин;
121
флуоресцентные материалы, такие как, но без ограничения, умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламин флуоресцеин, дансилхлорид или фикоэритрин; люминесцентные материалы, такие как, но без ограничения, луминол; биолюминесцентные материалы, такие как, но без ограничения, люцифераза, люциферин и экворин; радиоактивные материалы, такие как, но без ограничения, йод ( 1311 , 1251 , 1231 и I), углерод (14С) , сера (35S), тритий (3Н) , индий (115In, 1131п,
1121п и 1111п) , технеций (99Тс) , таллий (201Ti), галлий (68Ga,
/Zr~l -I л Q QQ 1 "3 "3
Ga) , палладий ( Pd) , молибден ( Mo) , ксенон ( Хе) , фтор (18F), 153sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn и 117Tin; и испускающие позитроны металлы с использованием различных позитронно-эмиссионных томографий и нерадиоактивные ионы парамагнитных металлов.
Настоящее изобретение дополнительно охватывает виды
применения антител или их фрагментов, конъюгированных с терапевтической составляющей. Антитело или его фрагмент могут быть конъюгированы с терапевтической составляющей, такой как цитотоксин, например, цитостатическим или цитоцидным средством, терапевтическим средством или ионом радиоактивного металла, например, альфа-излучатели. Цитотоксин или цитотоксическое средство включает любое средство, которое повреждает клетки.
Дополнительно, антитело или его фрагмент могут быть конъюгированы с терапевтической составляющей или лекарственной составляющей, которая модифицирует данную биологическую реакцию. Терапевтические составляющие или лекарственные составляющие не следует рассматривать как ограничиваемые классическими химическими терапевтическими средствами. Например, лекарственное составляющее может представлять собой белок, пептид или полипептид, обладающий желаемой биологической активностью. Такие белки могут включать, например, токсин, такой как абрин, рицин А, экзотоксин Pseudomonas, холерный токсин или дифтерийный токсин; белок, такой как фактор некроза опухолей, а-интерферон, р-интерферон, фактор роста нервной ткани, тромбоцитарный фактор роста, активатор тканевого плазминогена, апоптозное средство, антиангиогенное средство или модификатор биологической реакции, такой как, например, лимфокин.
Кроме того, антитело может быть конъюгировано с
терапевтическими составляющими, такими как ион радиоактивного
металла, такой как альфа-излучатель, такой как 213Bi, или
макроциклические хелаторы, полезные для конъюгации ионов
радиоактивных металлов, включая, но без ограничения, 1311п,
131LU, 131Y, 131Но, 131Sm, с полипептидами. В определенных
вариантах осуществления макроциклический хелатор представляет
собой 1,4,7,1О-тетраазациклодекан-N,N',N",N"'-тетрауксусную
кислоту (DOTA), которая может быть присоединена к антителу посредством молекулы линкера. Такие молекулы линкера общеизвестны в данной области и описаны в публикациях Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10) :2483-90; Peterson et al.,
1999, Bioconjug. Chem. 10 (4) : 553-7; и Zimmerman et al. , 1999, NucI. Med. Biol. 26(8) :943-50, каждая из которых полностью включена в настоящее описание посредством ссылки.
Технологии конъюгации терапевтических составляющих с антителами хорошо известны, см., например, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al. , "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, " Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Антитело In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), и Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58.
Антитела можно также прикреплять к твердым подложкам, которые, в частности, полезны для иммуноанализов или очистки антигена-мишени. Такие твердые подложки включают, но без ограничения, стекло, целлюлозу, полиакриламид, нейлон, полистирол, поливинилхлорид или полипропилен.
Способы получения антител по изобретению
Нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела
Изобретение относится к по существу очищенным молекулам
нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептиды, содержащие
сегменты или домены описанных выше цепей антитела, связывающего
фактор Р. Некоторые из нуклеиновых кислот по изобретению
содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую
вариабельную область тяжелой цепи, показанную в SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273, и/или нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи, показанную в SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274.
В определенном варианте осуществления молекулы нуклеиновой
кислоты представляют собой молекулы, идентифицированные в
таблице 1. Некоторые другие молекулы нуклеиновой кислоты по
изобретению содержат нуклеотидные последовательности, которые
по существу идентичны (например, по меньшей мере на 65%, 80%,
95% или 99%) нуклеотидным последовательностям,
идентифицированным в таблице 1. При экспрессии из соответствующих экспрессионных векторов полипептиды, кодируемые этими полинуклеотидами, могут проявлять способность связывания антигена фактора Р.
Изобретение также относится к полинуклеотидам, которые кодируют по меньшей мере одну CDR область и обычно все три CDR области из тяжелой или легкой цепи представленного выше антитела, связывающего фактор Р. Некоторые другие полинуклеотиды кодируют всю или по существу всю последовательность вариабельной области тяжелой цепи и/или легкой цепи представленного выше антитела, связывающего фактор Р. Ввиду дегенерации кода, разнообразные нуклеиновые кислоты последовательности кодируют каждую из аминокислотных последовательностей иммуноглобулина.
Молекулы нуклеиновых кислот по изобретению могут
кодировать как вариабельную область, так и константную область
антитела. Некоторые из последовательностей нуклеиновых кислот
по изобретению содержат нуклеотиды, кодирующие
последовательность зрелой тяжелой цепи, которая по существу идентична (например, по меньшей мере на 8 0%, 90% или 99%) последовательности зрелой тяжелой цепи, представленной в SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275. Некоторые другие последовательности нуклеиновых кислот содержат нуклеотид, кодирующий последовательность зрелой легкой цепи, которая по существу идентична (например, по меньшей мере на 8 0%, 90% или 99%) последовательности зрелой легкой цепи, представленной в SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276.
Полинуклеотидные последовательности можно получить
твердофазным синтезом ДНК de novo или ПЦР мутагенезом существующей последовательности (например, последовательности, описанной ниже в разделе "Примеры"), кодирующей антитело, связывающее фактор Р, или его связывающий фрагмент. Прямой химический синтез нуклеиновых кислот можно осуществлять способами, известными в данной области, такими как фосфотриэфирный способ Narang et al. , 1979, Meth. Enzymol. 68:90; фосфодиэфирный способ Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979; диэтилфофсорамидатный способ Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981 и способ на твердой подложке по патенту США 4458 0 66. Внесение мутаций в полинуклеотидную последовательность ПЦР можно выполнять, как описано, например, в публикациях PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990; Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991 и Eckert et al. , PCR Methods and Applications 1:17, 1991.
Изобретение также относится к экспрессионным векторам и клеткам-хозяевам для получения описанного выше антитела, связывающего фактор Р. Различные экспрессионные векторы можно использовать для экспрессии полинуклеотидов, кодирующих цепи или связывающие фрагменты антитела, связывающего фактор Р. Как основанные на вирусах, так и невирусные экспрессионные векторы можно использовать для продукции антитела в клетке-хозяине млекопитающих. Невирусные векторы и системы включают плазмиды, эписомальные векторы, обычно, с экспрессионной кассетой для экспрессии белка или РНК, и искусственные хромосомы человека (см., например, Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997). Например, невирусные векторы, полезные для экспрессии связывающих фактор Р полинуклеотидов и полипептидов в клетках млекопитающих (например, человека), включают pThioHis А, В и С, pcDNA3.1/His, pEBVHis А, В и С, (Invitrogen, San Diego, CA) , векторы MPSV и многочисленные другие векторы, известные в данной области, для экспрессии других белков. Полезные вирусные векторы включают векторы на основе ретровирусов, аденовирусов,
аденоассоциированных вирусов, герпесвирусов, векторы на основе SV4 0, вируса папилломы, вируса НВР (высокого артериального давления) Эпштейна-Барра, векторы на основе вируса осповакцины и вируса леса Семлики (SFV). См. публикации Brent et al., выше; Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995; и Rosenfeld et al. , Cell 68:143, 1992.
Выбор экспрессионного вектора зависит от предполагаемых клеток-хозяев, в которых предстоит экспрессия вектора. Обычно, экспрессионные векторы содержат промотор и другие регуляторные последовательности (например, энхансеры), которые функционально связаны с полинуклеотидами, кодирующими цепь или фрагмент антитела, связывающего фактор Р. В некоторых вариантах осуществления индуцируемый промотор используют для предотвращения экспрессии вставленной последовательности, за исключением индуцирующих условий. Индуцируемые промоторы включают, например, арабинозу, lacZ, промотор металлотионеина или промотор теплового шока. Культуры трансформированных организмов можно наращивать в не индуцирующих условиях без смещения популяции для кодирования последовательностей, чьи экспрессионные продукты лучше переносятся клетками-хозяевами. В дополнение к промоторам, для эффективной экспрессии цепи или фрагмента связывающего фактор Р антитела могут также потребоваться или быть желаемыми другие регуляторные элементы. Эти элементы обычно включают кодон инициации трансляции ATG и соседний сайт связывания рибосом или другие последовательности. Кроме того, эффективность экспрессии можно повысить включением энхансеров, соответствующих используемой клеточной системе (см., например, публикации Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994; и Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987). Например, энхансер SV40 или энхансер CMV можно использовать для увеличения экспрессии в клетках-хозяевах млекопитающих.
Экспрессионные векторы могут также обеспечивать положение сигнальной последовательности секреционной кассеты для образования слитого белка с полипептидами, кодируемыми вставленными последовательностями антитела, связывающего фактор
Р. Чаще, вставленные последовательности антитела, связывающего фактор Р, связываются с сигнальными последовательностями перед включением в вектор. Векторы, используемые для приема последовательностей, кодирующих вариабельные домены легкой и тяжелой цепи связывающего фактор Р антитела, иногда также кодируют константные области или их части. Такие векторы обеспечивают возможность экспрессии вариабельных областей как слитых белков с константными областями, приводя посредством этого, к продукции интактного антитела или его фрагментов. Обычно, такие константные области являются человеческими.
Клетки-хозяева для помещения и экспрессии цепей связывающего фактор Р антитела могут быть или прокариотическими, или эукариотическими. Е. coli является одним из прокариотических хозяев, полезных для клонирования и экспрессии полинуклеотидов по настоящему изобретению. Другие микробные хозяева, пригодные для применения, включают бациллы, такие как Bacillus subtilis, и другие кишечные бактерии, такие как Salmonella, Serratia, и различные виды Pseudomonas. В этих прокариотических хозяевах также можно получать экспрессионные векторы, которые обычно содержат регулирующие экспрессию последовательности, совместимые с клеткой-хозяином (например, происхождение репликации). Кроме того, присутствует любое число разнообразных хорошо известных промоторов, таких как система промоторов лактозы, система промоторов триптофана (trp), система промоторов бета-лактамазы или система промоторов из фага лямбда. Промоторы обычно регулируют экспрессию, необязательно с операторной последовательностью, и имеют последовательности сайта связывания рибосом и подобных для инициации и завершения транскрипции и трансляции. Другие микробы, такие как дрожжи, можно также использовать для экспрессии связывающих фактор Р полипептидов по изобретению. Можно также применять клетки насекомых в комбинации с бакуловирусными векторами.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления клетки-хозяева млекопитающих используют для экспрессии и продукции связывающих фактор Р полипептидов по настоящему
изобретению. Например, они могут представлять собой или линию
клеток гибридомы, экспрессирующих эндогенные гены
иммуноглобулина (например, клон гибридомы миеломы 1D6.C9, как
описано в разделах "Примеры"), или линию клеток млекопитающих,
содержащих экзогенный экспрессионный вектор (например,
приведенные ниже в качестве примера клетки миеломы SP2/0). Они
включают любую нормальную смертную или аномальную бессмертную
клетку животного или человека. Например, был разработан ряд
пригодных линий клеток-хозяев, способных секретировать
интактные иммуноглобулины, включая линии клеток СНО (яичников
китайского хомячка), различные линии клеток Cos (африканской
зеленой мартышки), клеток HeLa (линий "бессмертных" клеток) ,
линий клеток миеломы, трансформированных В-клеток и гибридом.
Использование культуры клеток тканей млекопитающих обсуждается
в целом, например, в монографии Winnacker, FROM GENES ТО
CLONES, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987. Экспрессионные
векторы для клеток-хозяев млекопитающих могут включать
регулирующие экспрессию последовательности, такие как
происхождение репликации, промотор и энхансер (см., например,
публикацию Queen, et al. , Immunol. Rev. 89:49-68, 1986), и
необходимые сайты обработки информации, такие как сайты,
связывающие рибосомы, сайты сплайсинга РНК, сайты
полиаденилирования и транскрипционные терминаторные
последовательности. Эти экспрессионные векторы обычно содержат промоторы, полученные из генов млекопитающих или из вирусов млекопитающих. Подходящие промоторы могут быть конститутивными, специфичными для типа клеток, специфичными для стадии и/или модулируемыми или регулируемыми. Полезные промоторы включают, но без ограничения, промотор металлотионеинов, конститутивный аденовирусный основной поздний промотор, индуцируемый дексаметазоном промотор MMTV (вируса опухоли мышиных молочных желез, промотор MRP pollll, конститутивный промотор MPSV (миелопролиферативного вируса саркомы мышей), индуцируемый тетрациклином промотор CMV (цитомегаловируса) (такой как промежуточный-ранний промотор CMV человека), конститутивный промотор CMV и комбинации промотора-энхансера, известные в
данной области.
Способы внесения экспрессионных векторов, содержащих
представляющие интерес полинуклеотидные последовательности,
варьируются, в зависимости от типа клеточного хозяина.
Например, трансфекцию хлоридом кальция обычно используют для
прокариотических клеток, в то время как обработку фосфатом
кальция или электропорацию можно использовать для других
клеточных хозяев. (См. в целом публикацию Sambrook, et al.,
выше) . Другие способы включают, например, электропорацию,
обработку фосфатом кальция, опосредованную липосомами
трансформацию, инъекцию и микроинъекцию, баллистические
способы, виросомы, иммунолипосомы, конъюгаты
поликатион:нуклеиновая кислота, депротеинизированную ДНК, искусственные вирионы, слитые со структурным белком герпесвируса VP22 (Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997), усиленный агентами захват ДНК и трансдукцию ex vivo. Для долгосрочной продукции рекомбинантных белков с высоким выходом часто желательна стабильная экспрессия. Например, линии клеток, которые стабильно экспрессируют цепи или связывающие фрагменты антитела, связывающего фактор Р, можно получить, используя экспрессионные векторы по изобретению, которые содержат вирусные точки начала репликации или эндогенные экспрессионные элементы и селектируемый маркерный ген. После внесения вектора, клеткам можно предоставить возможность роста в течение 1-2 дней в обогащенной среде перед тем как их переключат на селективную среду. Назначением такого селектируемого маркера является придание устойчивости к селекции, и его присутствие позволяет расти клеткам, которые успешно экспрессируют внесенные последовательности в селективной среде. Полученные в результате стабильно трансфицированные клетки могут быть подвергнуты пролиферации с использованием методик тканевой культуры, соответствующих типу клеток.
Создание моноклональных антител по изобретению Моноклональные антитела (mAb) можно продуцировать разнообразными технологиями, включая обычную методологию получения моноклональных антител, например, стандартной
технологии гибридизации соматических клеток Kohler и Milstein, 1975 Nature 256: 495. Можно использовать много технологий для продукции моноклональных антител, например, вирусную или онкогенную трансформацию В лимфоцитов.
Системы для получения гидридом на животных включают мышиные, крысиные и кроличьи системы. Продукция гибридомы у мышей представляет собой надежно отработанную процедуру. Протоколы и технологии иммунизации для выделения иммунизированных спленоцитов для слияния известны в данной области. Партнеры слияния (например, клетки мышиной миеломы) и процедуры слияния также известны.
Химерные или гуманизированные антитела по настоящему
изобретению можно получать на основе последовательности
мышиного моноклонального антитела, полученного как описано
выше. ДНК, кодирующая иммуноглобулины тяжелой и легкой цепи,
может быть получена из представляющей интерес мышиной гибридомы
и подвергнута генной инженерии для содержания
последовательности не мышиного (например, человеческого)
иммуноглобулина, с использованием стандартных
молекулярнобиологических технологий. Например, для создания химерного антитела мышиные вариабельные области можно связать с человеческими константными областями с использованием способов, известных в данной области (см. например, патент США 4816567, выданный Cabilly et al. ) . Для создания гуманизированного антитела, мышиные CDR области можно вставить в человеческий каркас, используя способы, известные в данной области. См., например, патент США 5225539, выданный Winter, и патенты США 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370, выданных Queen et al.
В определенном варианте осуществления антитела по изобретению представляют собой моноклональные антитела человека. Такие моноклональные антитела человека, направленные против фактора Р, можно создать, используя трансгенных или трансхромосомных мышей, несущих части человеческой иммунной системы, а не мышиной системы. Эти трансгенные и трансхромосомные мыши включают мышей, называемых в настоящем описании мышами HuMAb и мышами КМ, соответственно, и
коллективно называются в настоящем описании "мышами с Ig человека".
Мышь HuMAb(r) (Medarex, Inc.) содержит минилокусы гена иммуноглобулина человека, которые кодируют нереанжированные последовательности тяжелой (\х и у) и к-легкой цепи иммуноглообулина человека, вместе с прицельными мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы дик цепей (см., например, публикацию Lonberg, et al., 1994 Nature 368(6474) :856-859) . Соответственно, мыши проявляют сниженную
экспрессию мышиного IgM или к, и, в ответ на иммунизацию, внесенные трансгены тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина человека подвергаются переключению класса и соматической мутации для генерирования высоко аффинного моноклонального IgGk человека (Lonberg, N. et al., 1994 supra; обзор в руководстве Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113:49101; Lonberg, N. and Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, и Harding, F. and Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 7 64:53 6-54 6). Получение и использование мышей, и геномные модификации, которые несут такие мыши, дополнительно описаны в публикациях Taylor, L. et al., 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et at., 1993 International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. , 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3720-3724; Choi et al. , 1993 Nature Genetics 4:1 17-123; Chen, J. et al. , 1993 EMBO J. 12: 821 -830; Tuaillon et al. , 1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al., 1994 International Immunology 579-591; и Fishwild, D. et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851, все содержания которых полностью специально включены в настоящее описание посредством ссылки. См., кроме того, патенты США 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; все выданные Lonberg и Кау; патент США 5545807, выданный Surani et al.; опубликованные Международные патентные заявки РСТ №№ WO 92103918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97113852, WO 98/24884 и WO 99/45962, все на имя Lonberg и Кау; и опубликованная Международная патентная заявка РСТ № WO 01/14424 Korman et al.
В другом варианте осуществления антитела человека по изобретению можно продуцировать с использованием мыши, которая несет последовательности иммуноглобулина человека на трансгенах и трансхромосомах, такой как мышь, которая несет трансген человеческой тяжелой цепи и трансхромосому человеческой легкой цепи. Такие мыши, называемые в настоящем описании "КМ мышами", подробно описаны в опубликованной Международной патентной заявке РСТ W0 02/43478, на имя Ishida et al.
Кроме того, альтернативные системы трансгенных животных, экспрессирующие гены иммуноглобулина человека, доступны в данной области и могут использоваться для выработки связывающего фактор Р антитела по изобретению. Например, можно использовать альтернативную трансгенную систему, называемую ксеномышью (Abgenix, Inc.). Такие мыши описаны, например, в патентах США 5939598; 6075181; 6,114598; 6150584 и 6162963, выданных Kucherlapati et al.
Более того, альтернативные системы трансхромосомных животных, экспрессирующие гены иммуноглобулина человека, доступны в данной области и могут использоваться для выработки связывающих фактор Р антител по изобретению. Например, можно использовать мышей, несущих как трансхромосому человека тяжелой цепи, так и трансхромосому человека легкой цепи, называемых "ТС мышами"; такие мыши описаны в публикации Tomizuka et al., 2 000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727. Кроме того, в данной области были описаны коровы, несущие трансхромосомы человека тяжелой и легкой цепи (Kuroiwa et al., 2002 Nature Biotechnology 20:889-894), и их можно использовать для выработки связывающих фактор Р антител по изобретению.
Моноклональные антитела человека по изобретению можно также получить, используя способы представления фага для скрининга библиотек генов иммуноглобулина человека. Такие способы фагового дисплея для выделения антител человека обоснованы в данной области или описаны в приведенных ниже примерах. См., например: патенты США 5223409; 5403484 и 5571698, выданные Ladner et al.; патенты США 5427908 и 5580717, выданные Dower et al. ; патенты США 5969108 и 6172197, выданные
McCafferty et al.; и патенты США 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081, выданные Griffiths et al.
Моноклональные антитела человека по изобретению можно также получить, используя мышей SCID (с тяжелым комбинированным иммунодефицитом), в которых были восстановлены иммунные клетки человека с тем, чтобы после иммунизации можно было вызвать ответ антитела человека. Такие мыши описаны, например, в патентах США 5476996 и 5698767, выданных Wilson et al.
Генная инженерия каркасной или Fc областей
Созданные методами генной инженерии антитела по изобретению включают такие, в которых модификации были внесены в каркасные остатки в пределах VH и/или VL, например, для улучшения свойств антитела. Обычно, такие модификации каркаса производят для уменьшения иммунодефицита антитела. Например, один подход состоит в "обратной мутации" одного или нескольких каркасных остатков в соответствующую последовательность зародышевой линии. Более конкретно, антитело, которое было подвергнуто соматической мутации, может содержать каркасные остатки, которые отличаются от остатков последовательности зародышевой линии, из которой получено антитело. Такие остатки можно идентифицировать сравнением каркасных последовательностей антитела с последовательностями зародышевой линии, из которой получено антитело. Для возврата последовательностей каркасной области в конфигурацию их зародышевой линии, соматические мутации могут быть подвергнуты "обратной мутации" в последовательность зародышевой линии, например, сайт-направленным мутагенезом. Предполагается, что такие "обратно мутированные" антитела также включены в изобретение.
Другой тип каркасной модификации включает мутацию одного или нескольких остатков в пределах каркасной области или даже в пределах одной или нескольких CDR областей для удаления Т клеточных эпитопов для снижения, посредством этого, потенциальной иммуногенности антитела. Этот подход также называется "деиммунизацией" и более подробно описан в опубликованной патентной заявке США 20030153043, поданной Сап et al.
В дополнение или альтернативно модификациям в пределах каркасно или CDR областей, в антитела по изобретению можно методами генной инженерии включать модификации в пределах области Fc, обычно, для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела, таких как период полужизни, фиксация комплемента, связывание Fc рецептора и/или антигензависимая клеточная цитотоксичность. Кроме того, антитело по изобретению может быть химически модифицировано (например, к антителу может быть присоединена одна или более химических частей) или модифицировано для изменения его гликозилирования, опять же для изменения одного или более функциональных свойств антитела. Каждый из этих вариантов осуществления более подробно описан ниже. Нумерация остатков в Fc области представляет собой нумерацию каталога EU Rabat.
В одном из вариантов осуществления шарнирная область СН1 модифицируется таким образом, чтобы было изменено число остатков цистеина в шарнирной области, например, увеличено или уменьшено. Этот подход дополнительно описан в патенте США 5677425, выданном Bodmer et al. Число остатков цистеина в шарнирной области СН1 изменено, например, для содействия сборке легкой и тяжелой цепей или для увеличения или уменьшения стабильности антитела.
В другом варианте осуществления шарнирная область Fc антитела подвергают мутации для уменьшения времени биологической полужизни антитела. Более конкретно, одну или более аминокислотных мутаций вносят в область поверхности раздела доменов СН2-СНЗ фрагмента Fc-шарнир с тем, чтобы антитело имело нарушенное связывание стафилококкового белка А (SpA) относительно связывания SpA нативным Fc-шарнирным доменом. Этот подход более подробно описан в патенте США 6165745, выданном Ward et al.
В другом варианте осуществления антитело модифицируют для увеличения его биологического времени полужизни. Возможны различные подходы. Например, можно внести одну или более следующих мутаций: T252L, T254S, T256F, как описано в патенте США 6277375, выданном Ward. Альтернативно, для увеличения
биологического времени полужизни антитело может быть изменено в пределах области СН1 или CL для содержания эпитопа связывания рецептора реутилизации, взятого из двух петель домена СН2 Fc области IgG, как описано в патентах США 5869046 и 6121022, выданных Presta et al.
В еще одних вариантах осуществления Fc область изменяется заменой по меньшей мере одного аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком для изменения эффекторных функций антитела. Например, одна или более аминокислот могут быть заменены другим аминокислотным остатком с тем, чтобы антитело имело измененную аффинность в отношении эффекторного лиганда, но сохраняло антигенсвязывающую способность родительского антитела. Эффекторный лиганд, аффинность в отношении которого изменяется, может представлять собой, например, Fc рецептор или С1 компонент комплемента. Этот подход более подробно описан в патенте США 5624821 и 5648260, обоих выданных Winter et al.
В другом варианте осуществления одна или более аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков, могут быть заменены другим аминокислотным остатком с тем, чтобы антитело имело измененное связывание Clq и/или сниженную или устраненную комплементзависимую цитотоксичность (CDC). Этот подход более подробно описан в патенте США 6194551, выданном Idusogie et al.
В другом варианте осуществления один или более аминокислотных остатков изменены для изменения, посредством этого, способности антитела фиксировать комплемент. Этот подход более подробно описан в опубликованной Международной патентной заявке РСТ WO 94/29351, поданной Bodmer et al.
В еще одном из вариантов осуществления Fc область модифицируют для увеличения способности антитела опосредовать антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и/или для увеличения аффинности антитела в отношении Fey рецептора путем модификации одной или более аминокислот. Этот подход более подробно описан в опубликованной Международной патентной заявке РСТ WO 00/42072, поданной Presta. Кроме того, было проведено картирование сайтов связывания на IgGl человека для FcyRI, FcyRII, FcyRIII и FcRn, и были описаны варианты с улучшенным
связыванием (см. публикацию Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chem. 276:6591-6604).
В еще одном из вариантов осуществления модифицируют
гликозилирование антитела. Например, может быть создано
агликозилированное антитело (т.е. антитело лишено
гликозилирования). Гликозилирование может быть изменено,
например, для увеличения аффинности антитела в отношении
"антигена". Такие углеводородные модификации могут
осуществляться, например, изменением одного или более сайтов гликозилирования в пределах последовательности антитела. Например, можно осуществить замену одной или более аминокислот, которые приводят к устранению одного или более сайтов гликозилирования каркаса вариабельной области для устранения, посредством этого, гликозилирования в этом сайте. Такое гликозилирование может увеличивать аффинность антитела в отношении антигена. Такой подход более подробно описан в патентах США 5714350 и 6350861, выданных Со et al.
Дополнительно или альтернативно, может создаваться
антитело, которое имеет измененный тип гликозилирования, такое
как гипофукозилированное антитело, имеющее сниженные количества
фукозиловых остатков, или антитело, имеющее повышенные
количества двурассекающих структур GlcNac. Было
продемонстрировано, что такие измененные типы гликозилирования увеличивают способность антитела опосредовать ADCC. Такие углеводородные модификации могут осуществляться, например, экспрессированием антитела в клетке-хозяине с измененным механизмом гликозилирования. Клетки с измененным механизмом гликозилирования были описаны в данной области и могут использоваться в качестве клеток-хозяев, в которых можно экспрессировать рекомбинантные антитела по изобретению для продукции, посредством этого, антитела с измененным гликозилированием. Например, в Европейском патенте ЕР 1176195, выданном Hang et al., описана клеточная линия с функционально разрушенным геном FUT8, который кодирует фукозил трансферазу, с тем, чтобы антитело, экспрессированное в такой клеточной линии, проявляло гипофукозилирование. В опубликованной Международной
патентной заявке РСТ WO 03/035835, поданной Presta, описана
вариантная линия клеток СНО, клетки Lecl3, с пониженной
способностью присоединять фукозу к связанным с Asn(2 97)
углеводородам, также приводя к гипофукозилированию антитела,
экспрессированным в этой клетке-хозяине (см. также публикацию
Shields, R.L. et al. , 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740). В
опубликованной Международной патентной заявке РСТ WO 99/54342,
поданной Umana et al. описаны клеточные линии, созданные
методами генной инженерии, для экспрессии модифицирующих
гликопротеин-гликозил-трансфераз (например, бета(1,4)-N-
ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII)) с тем, чтобы антитела, экспрессированные в полученных методами генной инженерии клеточных линиях, проявляли увеличенное количество двурассекающих структур GlcNac, что приводит к повышенной активности ADCC антитела (см. также публикацию Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180).
Способы создания измененных антител методами генной инженерии
Как обсуждено выше, связывающие фактор Р антитела, имеющие показанные в настоящем описании последовательности VH и VL или последовательности полной длины тяжелой и легкой цепи, можно использовать для создания новых связывающих фактор Р антител путем модификации последовательностей полной длины тяжелой и/или легкой цепи, последовательностей VH и/или VL или константной области(ей), присоединенным к ним. Таким образом, в другом аспекте изобретения структурные признаки связывающего фактор Р антитела по изобретению используют для создания структурно родственных связывающих фактор Р антител, которые сохраняют по меньшей мере одно функциональное свойство антитела по изобретению, такое как связывание с фактором Р человека, а также ингибирование одного или более функциональных свойств фактора Р (например, ингибирование отложения MAC в анализе отложения MAC, ингибирование лизиса эритроцитов в гемолитическом анализе).
Например, одну или несколько областей CDR антител по настоящему изобретению или их мутации можно рекомбинантно
комбинировать с известными каркасными областями и/или другими
CDR для создания дополнительных, рекомбинантно созданных
методами генной инженерии связывающих фактор Р антител по
изобретению, как обсуждено выше. Другие типы модификаций
включают такие, которые описаны в предыдущем разделе. Исходным
материалом для способа генной инженерии является одна или более
писанных в настоящем описании последовательностей VH и/или VL
или одна или более их областей CDR. Для создания антитела
методами генной инженерии необходимо действительно получить
(т.е. экспрессировать в качестве белка) антитело, имеющее одну
или более описанных в настоящем описании последовательностей VH
и/или VL, или их одну или более областей CDR. Скорее,
информация, содержащаяся в последовательности(ях), используется
в качестве исходного материала для создания
последовательности(ей) "второго поколения", полученных из оригинальной последовательности(ей), и затем получают и экспрессируют последовательность(и) "второго поколения" в виде белка.
Соответственно, в другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения связывающего фактор Р антитела, состоящего из последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела, имеющей последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 113, 127, 141, 155, 169, 183, 197, 211, 225, 239, 2 53 и 2 67, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:2, 16, 30, 44, 58, 72, 86, 100, 114, 128, 142, 156, 170, 184, 198, 212, 226, 240, 254 и 268, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:3, 17, 31, 45, 59, 73, 87, 101, 115, 129, 143, 157, 171,
185, 199, 213, 227, 241, 255 и 269; и последовательность вариабельной области легкой цепи антитела, имеющую последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:4, 18, 32, 46, 60, 74, 88, 102, 116, 130, 144, 158, 172,
186, 200, 214, 228, 242, 256 и 270, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:5, 19, 33, 47, 61, 75, 89, 103, 117, 131, 145, 159, 173, 187, 201, 215, 229, 243,
185,
2 57 и 271, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0:6, 20, 34, 48, 62, 76, 90, 104, 118,
132, 146, 160, 174, 188, 202, 216, 230, 244, 258 и 272;
изменения по меньшей мере одного аминокислотного остатка в
пределах последовательности вариабельной области тяжелой цепи
антитела и/или последовательности вариабельной области легкой
цепи антитела для создания по меньшей мере одной измененной
последовательности антитела; и экспрессирования
последовательности антитела в виде белка.
Соответственно, в другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения связывающего фактор Р антитела, состоящего из последовательности, состоящей из последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела, имеющей последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 365, 371, 377, 383, 389 и 395, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342,
348, 354, 360, 366, 372, 378, 384, 390 и 396, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:283, 289, 295, 301, 307, 313, 319, 325, 331, 337, 343,
349, 355, 361, 367, 373, 379, 385, 391 и 397; и последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, имеющей последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:284, 290, 296, 302, 308, 314, 320, 326, 332, 338, 344, 350, 356, 362, 368, 374, 380, 386, 392 и 398, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:285, 291, 297, 303, 309, 315, 321, 327, 333, 339, 345,
351, 357, 363, 369, 375, 381, 387, 393 и 399, и/или
последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ
ID N0:286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346,
352, 358, 364, 370, 376, 382, 388, 394 и 400; изменения по
меньшей мере одного аминокислотного остатка в пределах
последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела
и/или последовательности вариабельной области легкой цепи
антитела для создания по меньшей мере одной измененной
последовательности антитела; и экспрессии измененной последовательности антитела в виде белка.
Соответственно, в другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения связывающего фактор Р антитела, оптимизированного для экспрессии в клетке млекопитающего, состоящего из: последовательности тяжелой цепи полной длины антитела, имеющей последовательность, выбранную из группы SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 и 275; и последовательности легкой цепи полной длины антитела, имеющей последовательность, выбранную из группы SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 и 276; изменения по меньшей мере одного аминокислотного остатка в пределах последовательности тяжелой цепи полной длины антитела и/или для создания по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и экспрессии измененной последовательности антитела в виде белка. В одном из вариантов осуществления изменение тяжелой или легкой цепи происходит в каркасной области тяжелой или легкой цепи.
Измененную последовательность антитела можно также получить скринингом библиотек антител, имеющих фиксированные последовательности CDR3 или минимальные основные детерминанты связывания, как описано в патентной заявке США 20050255552, и разнообразие на последовательностях CDR1 и CDR2. Скрининг можно выполнять в соответствии с любой из технологий скрининга, целесообразной для скрининга антител из библиотек антител, такой как технология фагового дисплея.
Стандартные молекулярно-биологические методики можно использовать для получения и экспрессии измененной последовательности антитела. Антитело, кодируемое измененной последовательностью(ями) антитела, представляет собой такое, которое сохраняет одно, некоторые или все функциональные свойства описанного в настоящем описании антитела, связывающего фактор Р, где эти функциональные свойства включают, но без ограничения, специфическое связывание с фактором Р человека и/или яванского макака; и антитело ингибирует лизис эритроцитов
в гемолитическом анализе.
В определенных вариантах осуществления способов создания методами генной инженерии антитела по изобретению мутации можно внести случайно или селективно вдоль всей или части последовательности, кодирующей связывающее фактор Р антитело, и можно провести скрининг полученного в результате модифицированного связывающего фактор Р антитела в отношении активности связывания и/или других функциональных свойств, как описано в настоящем описании. Мутационные способы описаны в данной области. Например, в опубликованной Международной патентной заявке РСТ № W0 02/092780, поданной Short, описаны способы создания и скрининга мутаций антител с использованием насыщающего мутагенеза, сборки синтетическим лигированием или их комбинации. Альтернативно, в опубликованной Международной патентной заявке РСТ № WO 03/074679, поданной Lazar et al., описаны способы применения методов компьютеризированного скрининга для оптимизации физико-химических свойств антител.
В определенных вариантах осуществления изобретения антитела модифицировали методами генной инженерии для удаления сайтов деаминирования. Известно, что деаминирование вызывает структурные и функциональные изменения в пептиде или белке. Деаминирование может привести к сниженной биологической активности, а также к изменениям фармакокинетики и антигенности белкового фармацевтического препарата. (Anal Chem. 2005 Mar 1;77 (5) : 1432-9) .
Функциональные свойства измененных антител можно оценить, используя стандартные анализы, доступные в данной области и/или описанные в настоящем описании, такие как анализы, представленные в разделе "Примеры" (например, иммуноферментные анализы).
Профилактические и терапевтические применения
Описанные в настоящем описании антитела, которые связывают фактор Р, можно применять в терапевтически полезной концентрации для лечения заболевания или расстройства, связанного с повышенной активностью комплемента, введением нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества антитела
или его антигенсвязывающих фрагментов по изобретению. В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения возрастной дегенерации желтого пятна (AMD) введением нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества антител по изобретению.
Антитела по изобретению можно применять, наряду с другими показаниями, для предотвращения прогрессирования сухой AMD во влажную AMD, для замедления и/или предотвращения прогрессирования географической атрофии, для лечения или предотвращения отека желтого пятна, для снижения частоты инъекции луцентис и для улучшения зрения, потерянного в результате прогрессирования сухой и влажной AMD. Его можно также применять в комбинации со средствами против VEGF для лечения пациентов с влажной AMD.
Лечение и/или профилактику глазного заболевания, такого как AMD, может определить офтальмолог или квалифицированный врач с использованием клинически релевантных измерений зрительной функции и/или анатомии сетчатки. Лечение AMD означает любое действие (например, введение описанного в настоящем описании антитела против фактора Р) , предусмотренное для улучшения или сохранения зрительной функции и/или анатомии сетчатки. Кроме того, профилактика в отношении AMD означает любое действие (например, например, введение описанного в настоящем описании антитела против фактора Р) , которое предотвращает или замедляет ухудшение зрительной функции, анатомии сетчатки и/или патологического параметра AMD, как определено в настоящем описании, у пациента с риском указанного ухудшения.
Зрительная функция может включать, например, остроту зрения, остроту зрения при низком освещении, поле зрения, центральное поле зрения, периферическое зрение, контрастную чувствительность, темновую адаптацию, восстановление после фотостресса, различение цветов, скорость чтения, зависимость от вспомогательных устройств (например, крупного печатного шрифта, увеличивающих устройств, телескопов), распознавание по чертам лица, профессиональные навыки при управлении транспортным
средством, способность выполнять один или несколько видов деятельности повседневной жизни и/или отмеченное пациентом удовлетворение, связанное со зрительной функцией. Таким образом, можно сказать, что лечение AMD происходит, когда у индивида имеется уменьшение по меньшей мере на 10% или отсутствие увеличения на 10% или более времени до предварительно определенной степени темновой адаптации. Кроме того, можно сказать, что лечение AMD происходит, когда у индивида проявляется уменьшение по меньшей мере на 10% или отсутствие увеличения на 10% или более общей площади центральной скотомы зрительного нерва, выражающейся в виде угла зрения, определяемого квалифицированным врачом (т.е. офтальмологом).
Иллюстративные показатели зрительной функции включают остроту зрения по Снеллену, остроту зрения по шкале ETDRS (шкале Раннего лечения диабетической ретинопатии), остроту зрения при низкой освещенности, решетку Амслера, остроту зрения по Голдманну, остроту зрения по Хамфри, микропериметрию, карты Пелли-Робсона, карту SKILL (карту института Смита-Кеттлвелла для определения остроты зрения при низкой освещенности), цветные пластины Ишихары, тест цветового восприятия Farnsworth D15 или D100 и утвержденные тесты на скорость чтения, распознавание людей по чертам лица, имитации вождения транспортных средств и сообщения пациентов об удовлетворении лечением. Таким образом, можно сказать, что успех лечения AMD достигнут, после прибавки или отсутствия потери 2 или более строчек (или 10 букв) на шкале измерения зрительной функции ETDRS. Кроме того, можно сказать, что произошло лечение AMD, если у индивида проявляется увеличение по меньшей мере на 10% или отсутствие уменьшения на 10% скорости чтения (слов в минуту). Кроме того, можно сказать, что произошло лечение AMD, если у индивида проявляется увеличение по меньшей мере на 2 0% или отсутствие уменьшения на 2 0% доли правильно идентифицированных пластин в тесте Ишихары или последовательно соединенных дисков в тесте Фарнсворса.
Нежелательные аспекты анатомии сетчатки, которые можно
лечить или предотвращать, включают, например, друзы, мягкие
друзы, твердые друзы, кутикулярные друзы, друзы базальной
пластинки, сливающиеся друзы, крупные друзы (например,
диаметром больше чем 125 мкм), атрофию RPE (пигментного
эпителия сетчатки), атрофию фоторецепторов, географическую
атрофию, хороидальную неоваскуляризацию, субретинальную
неоваскуляризацию, ретинальную неоваскуляризацию, классическую
хороидальную неоваскуляризацию, скрытую хороидальную
неоваскуляризацию, ангиоматозную пролиферацию сетчатки,
хориоретинальный анастомоз, аномалию анатомии сосудистой
оболочки, субретинальное кровоизлияние, внутреннее
кровоизлияние сетчатки, кровоизлияние в стекловидное тело, рубец желтого пятна, подсетчаточный фиброз и фиброз сетчатки. Таким образом, успешное лечение, например, географической атрофии можно определить как уменьшение на 2 0% или более скорости роста поражения, по сравнению с контролем, или ранее документированной скоростью роста у того же индивида в том же глазу.
Иллюстративные средства оценки анатомии сетчатки включают фундоскопию, фотографию глазного дна, флуоресцеиновую ангиографию, ангиографию с индоцианином зеленым, глазную когерентную томографию (ОСТ) , спектральную доменную глазную когерентную томографию, сканирующую лазерную офтальмоскопию, конфокальную микроскопию, адаптивную оптику, аутофлюоресценцию глазного дна, биопсию, некропсию и иммуногистохимию. Таким образом, можно сказать, что лечение AMD у индивида было успешным, после уменьшения на 10% измеренной толщины желтого пятна, по данным определения ОСТ, и/или уменьшения гиперфлюоресценции, по данным определения флюоресцеиновой ангиографией.
Иллюстративные параметры анатомии сетчатки включают площадь друз, объем друз, площадь географического атрофического поражения, скорость роста географической атрофии и площадь неоваскулярной мембраны.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения связанного с комплементом
заболевания или расстройства введением нуждающемуся в этом
индивиду эффективного количества антител по изобретению.
Примеры известных связанных с комплементом заболеваний или
расстройств включают: неврологические расстройства, рассеянный
склероз, инсульт, синдром Гийена-Барре, травматическое
повреждение мозга, болезнь Паркинсона, расстройства в виде
неадекватной или нежелательной активации комплемента,
осложнения гемодиализа, сверхострое отторжение
аллотрансплантата, отторжение ксенотрансплантата, вызванную интерлейкином-2 токсичность во время терапии IL-2, воспалительные расстройства, воспаление при аутоиммунных заболеваниях, болезнь Крона, респираторный дистресс синдром взрослых (ARDS), термическое повреждение, включая ожоги или отморожения, постишемические реперфузионные состояния, инфаркт миокарда, баллонную ангиопластику, постперфузионный синдром при экстракорпоральном кровообращении или гемодиализе, гемодиализ, почечную ишемию, реперфузию брыжеечной артерии после акротической реконструкции, инфекционное заболевание или сепсис, расстройства иммунного комплекса и аутоиммунные заболевания, ревматоидный артрит, системную красную волчанку (SLE), нефрит при SLE, пролиферативный нефрит, гемолитическую анемию и тяжелую миастению. Кроме того, другие известные, связанные с комплементом заболевания представляют собой легочные заболевания и расстройства, такие как диспноэ, кровохарканье, ARDS, астму, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), эмфизему, эмболию легочной артерии и инфаркт легких, пневмонию, заболевания, вызванные фиброгенной пылью, инертные виды пыли и минералы (например, диоксид кремния, угольная пыль, бериллий и асбест), легочный фиброз, заболевания, вызванные органической пылью, химическое повреждение (вследствие раздражающих газов и химических веществ, например, хлора, фосгена, диоксида серы, гидросульфида, диоксида азота, аммиака и хлористоводородной кислоты), повреждение дымом, термическое повреждение (например, ожог, обморожение), астму, аллергию, сужение бронхов, пневмонит вследствие гиперчувствительности, паразитарные заболевания,
синдром Гудпасчура, легочный васкулит и воспаление, связанное с иммунным комплексом.
В определенном варианте осуществления настоящее
изобретение относится к способам лечения связанного с
комплементом заболевания или расстройства введением
нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества антител по
изобретению, где указанное заболевание или расстройство
представляет собой астму, артрит (например, ревматоидный
артрит), аутоиммунное заболевание сердца, рассеянный склероз,
воспалительное кишечное заболевание, ишемические-реперфузионные
повреждения, синдром Барракера-Симонса, гемодиализ, системную
красную волчанку, псориаз, рассеянный склероз, трансплантацию,
заболевания центральной нервной системы, такие как болезнь
Альцгеймера и другие нейродегенеративные состояния, aHUS
(атипичный гемолитический уремический синдром),
гломерулонефрит, буллезную пузырчатку или MPGN II (мембранопролиферативный гломерулонефрит).
В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гломерулонефрита введением нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества композиции, содержащей антитело по настоящему изобретению. Симптомы гломерулонефрита включают, но без ограничения, протеинурию; сниженную скорость клубочковой фильтрации (GFR); изменения электролитов в сыворотке, включая азотемию (уремию, избыточное содержание азота мочевины-BUN) и задержку соли, ведущие к задержке воды, приводящей к гипертонии и отеку; гематурию и патологические мочевые осадки, включая эритроцитарные цилиндры; гипоальбуминемию; гиперлипидемию и липидурию. В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) введением нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества композиции, содержащей антитело по настоящему изобретению.
В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам уменьшения дисфункции иммунной т гемостатической систем, связанной с экстракорпоральным
кровообращением (ЕСС) введением нуждающемуся в этом индивиду эффективного количества композиции, содержащей антитело по настоящему изобретению. Антитела по настоящему изобретению можно использовать в любой процедуре, которая включает циркуляцию крови пациента из кровеносного сосуда пациента, через трубку и назад в кровеносный сосуд пациента, где трубка имеет поверхность просвета, состоящую из материала, способного вызывать по меньшей мере одно из активации комплемента, активации тромбоцитов, активации лейкоцитов или адгезии тромбоцитов-лейкоцитов. Такие процедуры включают, но без ограничения, все формы ЕСС, а также процедуры, включающие внесение искусственного или инородного органа, ткани или сосуда в систему циркуляции крови пациента.
Индивидам, подлежащим лечению терапевтическими средствами
по настоящему изобретению, можно также вводить другие
терапевтические средства в соответствии с известными способами
лечения состояний, связанных с дегенерацией желтого пятна,
такими как лечение антибиотиками, как описано в патенте США
6218368. При других способах лечения иммуносуппрессивные
средства, такие как циклоспорин, представляют собой средства,
способные подавлять иммунные ответы. Эти средства включают
цитотоксические средства, кортикостероиды, нестероидные
противовоспалительные лекарственные средства (NSAID),
специфические иммуносуппрессанты Т-лимфоцитов и их антитела или фрагменты (см. врачебный справочник Physicians' Desk Reference, 53rd edition, Medical Economics Company Inc., Montvale, N.J.
(1999). Иммуносуппрессивное лечение обычно продолжают через интервалы в течение периода времени длительностью одна неделя, месяц, три месяца, шесть месяцев или один год. У некоторых пациентов лечение проводят в течение всей его оставшейся жизни.
Когда терапевтические средства по настоящему изобретению вводят вместе с другим средством, то эти два средства можно вводить последовательно в любом порядке или одновременно. В некоторых аспектах антитело по настоящему изобретению вводят индивиду, который также получает лечение вторым средством
(например, вертепорфином). В других аспектах связывающую
молекулу вводят в сочетании с хирургическими способами лечения.
Подходящие средства для комбинированного лечения со связывающим фактор Р антителом включают средства, известные в данной области, которые способны модулировать активность компонентов комплемента (см., например, патент США 5808109) . Сообщалось, что другие средства уменьшают опосредованную комплементом активность. Такие средства включают: аминокислоты (Takada, Y. et al. Immunology 1978, 34, 509); сложные фосфонатные эфиры (Becker, L. Biochem. Biophy. Acta 1967, 147, 289); полианионные вещества (Conrow, R. B. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 242); сульфонилфториды (публикация Hansch, С; Yoshimoto, M. J. Med. Chem. 1974, 17, 1160, и приведенные там ссылки); полинуклеотиды (DeClercq, P. F. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 67, 255); пимаровые кислоты (Glovsky, M. M. et al. J. Immunol. 1969, 102, 1); порфины (Lapidus, M. и Tomasco, J. Immunopharmacol. 1981, 3, 137); несколько противовоспалительных средств (Burge, J. J. et al. J. Immunol. 1978, 120, 1625); фенолы (Muller-Eberhard, H. J. 1978, in Molecular Basis of Biological Degradative Processes, Berlin, R. D. et al., eds. Academic Press, New York, p. 65); и бензамидины (Vogt, W. et al Immunology 1979, 36, 138). Некоторые из этих средств функционируют общим ингибированием протеаз и эстераз. Другие не специфичны для любой конкретной промежуточной стадии на пути активации комплемента, но скорее, ингибируют несколько стадий активации комплемента. Примеры последних соединений включают бензамидины, которые блокируют утилизацию CI, С4 и СЗЬ (см., например, Vogt et al. Immunol. 1979, 36, 138).
Дополнительные средства, известные в данной области, которые могут ингибировать активность компонентов комплемента, включают К-7 6, грибковый метаболит из Stachybotrys (Corey et al. , J. Amer. Chem. Soc. 104: 5551, 1982) . Было показано, что как К-7 6, так и К-7 6 СООН ингибируют комплемент главным образом на стадии СЗЬ (Hong et al., J. Immunol. 122: 2418, 1979; Miyazaki et al., Microbiol. Immunol. 24: 1091, 1980), и предотвращают генерирование хемотаксического фактора из
нормального человеческого комплемента (Bumpers et al., Lab. Clinc. Med. 102: 421, 1983). При высоких концентрациях К-76 или К-7 6 СООН проявляется некоторое ингибирование реакций С2, СЗ, Сб, С7 и С9 с их соответствующими предшествующими промежуточными продуктами. Сообщалось также, что К-7 6 или К-7 6 СООН ингибируют СЗЬ инактиваторную систему комплемента (Hong et al. , J. Immunol. 127: 104-108, 1981) . Другие подходящие средства для реализации способов по настоящему изобретению включают гризеофульвин (Weinberg, in Principles of Medicinal Chemistry, 2d Ed., Foye, W. 0., ed., Lea & Febiger, Philadelphia, Pa., p. 813, 1981), изопаннарин (Djura et al. , Aust. J. Chem.36: 1057, 1983) и метаболиты губки Siphonodictyon coralliphagum (Sullivan et al., Tetrahedron 37: 979, 1981).
Схема комбинированного лечения может быть аддитивной или она может давать синергические результаты (например, большее снижение активности пути комплемента, чем ожидавшееся для комбинированного применения двух средств). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к комбинированному лечению для профилактики и/или лечения AMD или другого связанного с комплементом заболевания, как описано выше, связывающим фактор Р антителом по изобретению и антиангиогенным средством, таким как средство против VEGF, или другим антителом против комплемента, таким как антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с фактором 5 комплемента (С5).
Комбинация антикомплементарных антител
В одном аспекте изобретение относится к комбинациям любого одного или нескольких антител против фактора Р с дополнительным антителом, которое связывается с другим компонентом пути активации комплемента и ингибирует его активность. В частности, изобретение включает любое одно или более антител против фактора Р или его антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящем описании, в комбинации с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, которые связываются с фактором 5 комплемента (С5) . Примеры антитела или его антигенсвязывающих фрагментов, которые связываются с С5 и ингибируют активацию
комплемента, можно найти, например, в патенте США 8241628 (включенном в настоящее описание посредством ссылки). Более конкретно, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с С5 и ингибируют пути активации комплемента, показаны и описаны в таблице 2. В одном аспекте изобретение включает комбинацию антитела против фактора Р или его антигенсвязывающего фрагмента, как показано и описано в таблице 1, с анти-С5 антителом 8109 из таблицы 2. Более конкретно, один аспект изобретения относится к комбинации антитела NVS9 62 из таблицы 1 (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антителом 8109 из таблицы 2 (или его антигенсвязывающего фрагмента).
В одном аспекте описанные в настоящем описании комбинации
антител против фактора Р и против С5 демонстрируют
синергическое ингибирование пути активации комплемента, в
частности, альтернативного пути комплемента. Такое
ингибирование можно продемонстрировать, например, используя анализы гемолиза или поли-IC (полиинозиновой-полицитидиловой кислоты), описанные ниже в разделе "Примеры". Синергию при ингибировании альтернативного пути комплемента, достигнутую при использовании описанной в настоящем описании комбинации антител против фактора Р и против С5, можно определить, используя способы, которые хорошо известны в данной области. Например, синергический эффект комбинации антитела против фактора Р и антитела против С5 можно определить относительно просто аддитивного эффекта, используя определенное программное обеспечение, такое как Chalice Analyzer.
Кратко, программное обеспечение Chalice Analyzer (Lehar et al, Nature Biotechnology 2009, 7:659) можно использовать для определения того, действует ли синергически комбинация ингибирующих комплемент антител (например, в отношении фактора Р и в отношении С5) для блокировки активации комплемента. Эффекты комбинации можно характеризовать сравнением ингибирования в каждой точке данных с ингибированием на контрольной модели комбинации, которая была выведена из кривых отдельных средств (Greco, Bravo, Parsons (1995). The search for
synergy: a critical review from a response surface perspective. Pharmacol Rev 47(2): 331-85). На модели аддитивности Loewe
(Loewe (1928), Die quantitativen Probleme der Pharmakologie.
Erqebn. Physiol. 27: 47-187), Iboewe (Cx, CY) обозначает
ингибирование, которое удовлетворяет уравнению
(Сх//Сх) + (CY//CY) =1, и ICx,y обозначают эффективные концентрации при Iboewe для построенных по точкам кривых отдельных средств. Аддитивность Loewe представляет собой общепринятый эталон для синергии (Greco et al.), поскольку она представляет комбинированную реакцию, генерированную, если X и Y обозначают одно и то же соединение.
Сдвиг активности обычно показывается с использованием изоболограммы (Greco et al.), которая показывает, насколько меньше лекарственного средства требуется в комбинации для достижения желаемого уровня эффекта, по сравнению с дозами одного средства, необходимыми для достижения этого эффекта. Выбор уровня эффекта для представления изоболограммы и расчеты показателя аддитивности можно или вручную, или автоматически выбрать в программном обеспечении Chalice Analyzer. Алгоритм автоматического выбора изоуровня находит наблюдаемые I data л где
Самые бОЛЬШИе ЗНачеНИЯ Idata_lLoewe/ ИСКЛЮЧаЛИ Такие ТОЧКИ С I data л
которые превышали меньшие Imax одного средства. Это исключение применяют для обеспечения того, чтобы изоболограмма отражала наилучшую синергию на уровнях, охватываемых обоими отдельными средствами. Выбрав уровень изоболограммы 1Сиы изоболограмму чертят идентификацией геометрического места точек концентраций, которые соответствуют пересечению выбранного изоуровня. Изоболограмма показывает стандартный изоболографический анализ синергии, по сравнению со стандартом аддитивного эффекта дозы "самого лекарственного средства". Для определенного уровня изоболограммы, наблюдаемый контур изоэффекта (например, изогнутая линия на фиг.З) проявляется теоретическим контуром аддитивной дозы (например, прямой линией на фиг.З), на нормализованной по ICeffect линейной шкале концентрации для обоих веществ в комбинации. Эталон аддитивной дозы всегда представляет собой линию, соединяющую две концентрации ICeffect-
Точки пересечения ICeffect находят интерполяцией построенных по точкам сигмоидальных кривых доза-ответ.
Сдвиг активности оценивают в баллах в виде показателя аддитивности (Chou, Talalay (1984). Это подробно описано в публикации Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors (Количественный анализ связей доза-эффект: комбинированные эффекты множественных лекарственных средств или ингибиторов ферментов). Adv Enzyme Regul 22: 27-55) CI. Для выбранного уровня изоэффекта Icut, CIi= (СХ/ЕСХ) i+ (CY/ECY) i, где (Cx/ECx)i для конкретной точки данных представляет собой отношение измеренной концентрации соединения X к его эффективной концентрации при выбранном уровне ингибирования. CI можно считать грубым показателем того, сколько лекарственного средства требуется в комбинации относительно доз отдельных средств, требуемых для достижения выбранного уровня эффекта, и величина 0,1 означает, что только десятая часть эквивалентных количеств отдельных средств требовалась в комбинации для достижения такого же уровня эффекта. Величины CI в диапазоне 0,5-0,7 типичны для измерений in vitro современных клинических комбинаций (Greco et al.). Величина CI 1,0 указывает на аддитивный эффект комбинации антитела, в то время как величина CI меньше чем 0,5 указывает на сильный синергический эффект в результате применения комбинации антител. В программном обеспечении Chalice Analyzer наилучший CI регистрируется по многим величинам показателей аддитивности, рассчитанным для каждой концентрации пересечения Icut- Среди всех измеренных величин CI величина с самым большим уровнем сигнала-шума регистрируется в качестве наилучшего показателя аддитивности.
Описанные в настоящем описании комбинации антител против фактора Р и против С5 можно вводить отдельно или в виде одной композиции. Кроме того, относительная доза антитела против фактора Р и антитела против С5 может составлять диапазон 1:1 или может быть в другом соотношении. Конкретную дозу антитела против фактора Р относительно антитела против С5 может, в конечном счете, определить лечащий врач или медицинский
работник для достижения терапевтического эффекта у пациента, получающего лечение по поводу патологического состояния. Например, когда описанная в настоящем описании комбинация применяется для лечения AMD, то врач или медицинский работник может подобрать относительные дозы антитела против фактора Р и антитела против С5 с тем, чтобы достичь оптимальной терапевтической выгоды, по данным определения с использованием описанных в настоящем описании измерений и критериев. Фармацевтические композиции
Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим связывающие фактор Р антитела (интактные или их связывающие фрагменты), включенные в состав вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Композиции могут дополнительно содержать одно или несколько других терапевтических средств, которые пригодны для лечения или профилактики, например, патологического ангиогенеза или роста опухоли. Фармацевтически приемлемые носители усиливают или стабилизируют композицию или могут использоваться для облегчения получения композиции. Фармацевтически приемлемые носители включают растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и задерживающие всасывание агенты и подобные, которые являются физиологически совместимыми.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить разнообразными способами, известными в данной области. Путь и/или способ введения варьируются в зависимости от желаемых результатов. Предпочтительно, чтобы введение осуществлялось в стекловидное тело, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно или подкожно или введение вблизи участка мишени. Фармацевтически приемлемый носитель должен быть пригоден для введения в стекловидное тело, внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, инъекцией или инфузией). В зависимости от пути введения, активное соединение, т.е. антитело, биспецифическая и мультиспецифическая молекула, может быть покрыто в материале для защиты соединения от действия кислот и
других естественных условий, которые могут инактивировать соединение.
Композиция должна быть стерильной и жидкой. Должная текучесть может поддерживаться, например, использованием покрытия, такого как лецитин, поддержанием требуемого размера частиц в случае дисперсии и использованием поверхностно-активных веществ. Во многих случаях предпочтительно включение в композицию изотонических агентов, например, Сахаров, полиспиртов, таких как маннит или сорбит, и хлорида натрия. Длительное всасывание инъецируемых композиций может быть обеспечено включением в композицию средства, которое задерживает всасывание, например, моностеарат алюминия или желатин.
Фармацевтические композиции по изобретению могут быть получены согласно способам, хорошо известным и обычно практикуемым в данной области. См., например, руководства Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., 20th ed., 2000; и Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978. Фармацевтические композиции предпочтительно производят в условиях GMP (должной медицинской практики). Обычно, в фармацевтических композициях по изобретению используется терапевтически эффективная доза или эффективная доза связывающего фактор Р антитела. Связывающие фактор Р антитела составляют в фармацевтически приемлемые лекарственные формы обычными способами, известными специалистам в данной области. Схемы введения подбирают для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Например, можно ввести один болюс, можно ввести несколько дробных доз в течение периода времени или доза может быть пропорционально снижена или увеличена, в соответствии с показаниями с учетом потребностей терапевтической ситуации. Особенно предпочтительно составление парентеральных композиций в единичную дозированную форму для облегчения введения и однородности дозировки. Используемый в настоящем описании термин "единичная дозированная форма" относится к физически
дискретным единицам, пригодным в качестве стандартной дозировки для подлежащих лечению индивидов; каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное для вызова желаемого терапевтического эффекта, в ассоциации с требуемым фармацевтическим носителем.
Действительная дозировка активных ингредиентов в фармацевтических композициях по настоящему изобретению может варьироваться с тем, чтобы получить количество активного ингредиента, которое эффективно для достижения желаемого ответа на лечение для конкретного пациента, композиции и способа введения без токсичности для пациента. Выбранный уровень дозировки зависит от разнообразных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций по настоящему изобретению или сложного эфира, соли или амида активного соединения, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, длительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в комбинации с конкретными используемыми композициями, возраста, пола, массы тела, состояния, общего состояния здоровья и предыдущего медицинского анамнеза получающего лечение пациента и подобных факторов.
Врач или ветеринар может начать лечение с доз антител по изобретению, используемых в фармацевтической композиции, на уровнях, более низких, чем те, которые требуются для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно увеличивать дозировку до тех пор, пока ни будет достигнут желаемый эффект. В целом, эффективные дозы композиций по настоящему изобретению для лечения описанного в настоящем описании аллергического воспалительного расстройства варьируются в зависимости от многих различных факторов, включая средство введения, целевой участок, физиологическое состояние пациента, то, является ли пациент человеком или животным, других вводимых медикаментозных средств и того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Лечебные дозировки должны титроваться для оптимизации безопасности и эффективности. Для системного введения антитела дозировка составляет диапазон примерно от
0, 0001 до 100 мг/кг, и обычно, от 0,01 до 15 мг/кг массы тела хозяина. Для введения антитела в стекловидное тело дозировка
может находиться в диапазоне от
0,1
мг/глаз до
5 мг/глаз.
Например,
0, 1 мг/мл,
0,2 мг/мл,
0,3
мг/мл, 0, 4
мг/мл, 0, 5
мг/мл, 0, б
мг/мл, 0,7
мг/мл, 0, 8
мг/мл,
0, 9 мг/мл,
1, 0 мг/мл,
1, 1 мг/мл,
1, 2 мг/мл,
1, 3 мг/мл
, Ь4
мг/мл, 1, 5
мг/мл, 1, б
мг/мл, 1,7
мг/мл, 1,8
мг/мл, 1,9
мг/мл,
2, 0 мг/мл,
2, 1 мг/мл,
2, 2 мг/мл,
2, 3 мг/мл,
2, 4 мг/мл
, 2,5
мг/мл, 2, б
мг/мл, 2, 7
мг/мл, 2,8
мг/мл, 2,9
мг/мл, 3,0
мг/мл,
3, 1 мг/мл,
3, 2 мг/мл,
3, 3 мг/мл,
3, 4 мг/мл,
3, 5 мг/мл
, 3, б
мг/мл, 3, 7
мг/мл, 3, 8
мг/мл, 3,9
мг/мл, 4,0
мг/мл, 4,1
мг/мл,
4, 2 мг/мл,
4, 3 мг/мл,
4, 4 мг/мл,
4, 5 мг/мл,
4, б мг/мл
, 4,7
мг/мл, 4, 8
мг/мл, 4, 9
мг/мл, или 5,0 мг/мл. Иллюстративная схема лечения предусматривает системное введение один раз в две недели или один раз в месяц или один раз в З-б месяцев.
Антитело обычно вводят многократно. Интервалы между отдельными дозировками может составлять одну неделю, один месяц или один год. Интервалы могут также быть неодинаковыми, в соответствии с показаниями по данным измерения уровней в крови связывающего фактор Р антитела у пациента. Кроме того, альтернативные интервалы между вводимыми дозами может определить врач, и введение может осуществляться один раз в месяц или по мере необходимости для обеспечения эффективности его применения. Суждение об эффективности основано на оценке роста очага поражения, частоты экстренной терапии препаратом "луцентис", толщины сетчатки, определенной спектральной доменно-оптической когерентной томографией (SD-0CT) и вторичной остроты зрения. В некоторых способах системного введения дозировку подбирают для достижения концентрации антитела в плазме 1-1000 мкг/мл и в некоторых способах 25-500 мкг/мл. Альтернативно, антитело можно вводить в виде препаративной формы длительного высвобождения, где при этом требуется менее частое введение. Дозировка и частота варьируются в зависимости от периода полужизни антитела у пациента. Как правило, гуманизированные антитела проявляют более длинный период полужизни, чем химерные антитела и нечеловеческие антитела.
Дозировка и частота введения могут варьироваться в зависимости от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. При профилактических применениях относительно низкая дозировка вводится через относительно нечастые интервалы в течение длительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают получать лечение в течение всей своей оставшейся жизни. При терапевтических применениях иногда требуется относительно высокая дозировка через относительно короткие интервалы до тех пор, пока ни уменьшится или прекратится прогрессирование заболевания, и предпочтительно, до тех пор, пока у пациента ни проявится частичное или полное облегчение симптомов заболевания. Затем пациенту может быть назначена профилактическая схема.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры предоставлены для дополнительной иллюстрации изобретения, но не ограничения его объема. Другие варианты изобретения будут вполне очевидны для специалиста в данной области, и они охватываются прилагаемой формулой изобретения.
Пример 1: Создание аффинности зрелого антитела против фактора Р
Полностью человеческую библиотеку представления фага использовали для создания описанного в настоящем описании связывающего фактор Р антитела.
Биотинилированный и небиотинилированный фактор Р человека и яванского макака использовали в "пэннинг"-методах в растворе и в твердой фазе. Осуществляли стандартный "пэннинг"-метод, а также использовали подходы RapMAT (Prassler et al. , (2009) Immunotherapy 1 (4) : 571-583) . После созревания аффинности (Knappik et al., (2000) J.Mol.Biol., 296:57-86), набор из 10 антител в последующем выбирали для преобразования в соединенный дисульфидным мостиком Fab формат. Полученные в результате Fab с дисульфидными мостиками показаны в таблице 1 (NVS9 62, NVS9 63, NVS964, NVS965, NVS966, NVS967).
Пример 2: Дополнительная оптимизация антитела
В следующем примере описаны способы, которые можно использовать для дополнительной оптимизации описанного в
настоящем описании антитела.
Удаление сайтов деаминирования
Сайты деаминирования идентифицировали картированием пептидов и хроматографией с исключением по размеру (SEC), проводимой в восстанавливающих условиях. Деамидированный материал имеет сниженную активность в анализе отложения MAC и сниженную аффинность в отношении FP (фактора Р) человека и яванского макака, по данным измерения Biacore и SET. Степень деамидирования увеличивалась с течением времени (3 недели), при более высоких температурах (5 дней при 37°С) и в восстанавливающих условиях. Деамидирование можно выявить, используя ионообменную колонку, по полученным множественным пикам и наблюдению дополнительного, деамидированного пика. Аминокислотными последовательностями, которые наиболее склонны к деамидированию, являются: SNG, LNG, LNN, ELN (Daugherty, А. и Mrsny, R. (2010) Current Trends in Monoclonal Abtibody Development and Manufacturing. Springer. pl03-129.). Соответственно, авторы провели серию исследований для удаления сайтов деамидирования и тестирования модифицированных антител в отношении сохраненной функции.
Деамидированные Fab
Дополнительный Fab, который был создан заменой серина 31 аланином в Fab NVS962, создавая Fab NVS962-S31A.
Два Fab, NVS962 и NVS965, повторно подвергали генной инженерии для замены сайта деамидирования на тяжелой цепи, в частности, встречающегося у аспарагина в положении 30. Следующие новые Fab были созданы для удаления сайта деамидирования и соответствующих аминокислотных замен, показанных в таблице 2.
Последовательности модифицированных Fab показаны в таблице 1. Удаление сайтов расщепления
Дополнительную оптимизацию проводили на NVS962-S и NVS965-
S для удаления сайта расщепления в CDR3 тяжелой цепи. В
частности, тяжелую цепь расщепляли у Y102S103. В следующей
таблице описаны аминокислотные замены, которые были внесены для
разрушения сайта расщепления. Последовательности
Модифицированные Fab
модифицированных Fab показаны в таблице 1.
В следующем примере описаны способы, которые можно использовать для измерения аффинности антител. Эти и другие способы измерения аффинности связывания известны в данной области.
Определение аффинности
Аффинность антител в отношении фактора Р измеряли поверхностным плазмонным резонансом (SPR), используя прибор Biacore Т200 (Biacore) и титрование раствора до равновесной концентрации (SET). Объяснения каждой технологии и соответствующие средние результаты по связыванию фактора Р описаны ниже. Предполагаемые моделирования принимали во внимание концентрации фактора Р в системе, кинетику биосинтеза и период полужизни фактора Р, а также желаемую схему введения, и предполагая, что Fab с аффинностью больше, чем 500 нМ в отношении фактора Р, достаточна для снижения уровней свободного фактора Р.
Определение биосенсором Biacore
Кинетику взаимодействия, т.е. скорости образования (ка) и диссоциации (kd) комплекса, можно определить по информации в
сенсограмме. Если связывание происходит по мере того как образец проходит по поверхности полученного датчика, то ответ на сенсограмме увеличивается. Если достигается равновесие, то наблюдается постоянный сигнал. Замена образца буфером вызывает диссоциацию связанных молекул и уменьшение ответа. Программное обеспечение оценки с использованием биосенсора Biacore генерирует величины ка и kd подгонкой данных к моделям взаимодействия (таблица 4).
Эксперименты по кинетике, определяемой биосенсором Biacore, проводили прибором BIAcore Т100 (GE Healthcare) с использованием сенсорных чипов СМ5 (GE Healthcare, BR-1005-30) при 25°С. Текущий буфер представлял собой HBS-EP(+) (GE Healthcare, BR-1001-88). Кратко, для определения аффинности связывания проводили следующие стадии:
Получение иммобилизованного сенсорного чипа анти-FP IqG: Мышиное моноклональное антитело против FP (Quidel, А235) (30 мкг/мл в ацетатном соединительном буфере с рН 5,0 (GE Healthcare, BR-1003-51)) присоединяли к двум различным проточным ячейкам (Fcl и 2) на чипе СМ5 при скорости потока 10 мкл/мин в течение 60 0 секунд использованием процедуры аминосоединения в соответствии с инструкцией поставщика (GE Healthcare, BR-1000-50). Конечный иммобилизованный уровень должен составить > 7000 RU.
Захват FP на второй проточной ячейке: 1 мкг/мл FP в текущий буфере инжектировали со скоростью 10 мкл/мин на второй проточной ячейке (Fc2) для достижения уровня захвата ~2 0 RU для Fab или ~7 RU для анализа кинетики IgG.
Инжекция анти-FP Fab или IqG в различной концентрации на обеих проточных ячейках: Инжектировали раствор анти-FP (0,3125 нМ~10 нМ в текущем буфере; при серийных разведениях 1:2) на обеих проточных ячейках (Fcl и 2) при 60 мкл/мин в течение 240 секунд.
Диссоциация: Инжектировали текущий буфер HBS-EP(+) при 60 мкл/мин на обеих проточных ячейках для мониторинга диссоциации между FP и анти-FP Fab/lgG. Время диссоциации устанавливали
через 2400 секунд для концентраций Fab/lgG 5 нМ и 2,5 М и через 300 секунд для всех других концентраций, включая еще одну концентрацию 5 нМ Fab/lgG.
Регенерация: Регенерацию выполняли в конце каждого цикла на обеих проточных ячейках 10 мМ глицина-HCl с рН 1,7 (поставляемого GE Healthcare+0,05% ПАВ Р20 (GE Healthcare, BR-1000-54) при скорости потока 60 мкл/мин дважды в течение 15 секунд.
Анализ кинетики: Константы кинетической скорости получали применением модели связывания 1:1 программным обеспечением BIAevaluation 1.1, где величины Rmax подбирали локально.
Результаты кинетики связывания, определенной биосенсором Biacore, показаны в таблице 4. Как показано, описанные в настоящем описании антитела проявляют высокую аффинность связывания с фактором Р человека, при величинах KD, обычно равных 1 нМ или меньше, и во многих случаях равных 2 00 нМ или меньше. Эти антитела также проявляют очень высокую аффинность в отношении фактора Р яванских макак (аффинность связывания менее чем 500 нМ).
Определение SE Т
В отличие от кинетических анализов с использованием поверхностей датчика, таких как SPR, SET представляет собой способ, который определяет величины аффинности в растворе. Он представляет собой измерение в равновесном состоянии, которое не обеспечивает получение кинетических данных.
При SET постоянное количество антитела инкубируют с различными концентрациями антигена до тех пор, пока ни достигается равновесие. Концентрацию свободного антитела в уравновешенном растворе определяют нанесением раствора на покрытый антигеном планшет MSD(tm) с последующей инкубацией с меченым ECL вторичным антителом и измерением интенсивности сигнала. При низких концентрациях антигена достигается сильный сигнал (высокая концентрация свободного антитела, которое связывается с антигеном на планшете), в то время как для высокой концентрации антигена антитело полностью захватывается антигеном, приводя к низкому сигналу. Если достаточное число
концентраций антигена доступно в соответствующем диапазоне, то кривая титрования обеспечивает возможность приемлемого определения аффинности с использованием соответствующей подобранной модели. Для полного титрования нужно применять концентрации антигена по меньшей мере в 10 раз выше, чем ожидаемая KD. Постоянная концентрация антитела, применяемая в анализе, должна находиться в диапазоне KD или ниже нее (таблица 4) .
Для определения KD титрованием раствора до равновесной концентрации (SET) использовали мономерные фракции белка антитела (содержание мономера по меньшей мере 90%, анализированное аналитической SEC; Superdex75 (Amersham Pharmacia) для Fab или Tosoh G3000SWXL (Tosoh Bioscience) для IgG, соответственно).
Определение аффинности в растворе в основном выполняли, как описано в литературе (Friguet et al. 305-19). Для улучшения чувствительности и точности способа SET его перенесли с классического ELISA на технологию на основе ECL (Haenel et al., 2005).
1 мг/мл фрагмента (Fab)2 козьих античеловеческих специфических антител (Dianova) метили MSD Sulfo-TAG(tm) NHS-Ester
(Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD, USA), в соответствии с инструкциями производителя.
Фактором Р человека (Complement Technology cat#: А139) и фактором Р яванских макак, очищенным из сыворотки яванских макак (протокол, адаптированный из публикации Nakano, et al.,
(1986) J Immunol Methods 90:77-83), покрывали стандартные планшеты связывания MSD (Meso-Scale Discovery, 384-луночные: MSD cat#: L21XA, 96-well: MSD cat#: L15XA) в концентрации 0,20,3 г/мл в 25 мкл PBS (забуференного фосфатом солевого раствора) и инкубировали в течение ночи при 4°С. Ингибиторы фактора Р разводили до фиксированной концентрации (1 нМ или 10 нМ) в инкубационном буфере (PBS с 2% BSA (бычьим сывороточным альбумином) (Sigma cat#: А4503) и 1% Tween 20 и 1% Triton-X
(Sigma cat#: 234729)) и добавляли к серийному разведению
фактора Р (человека или яванского макака) в инкубационном буфере. Образцам давали возможность достичь равновесия инкубацией при RT (комнатной температуре, КТ) в течение ночи. Планшеты промывали 3 раза в промывном буфере (PBS с 0,05% Tween2 0) и блокировали 100 мкл инкубационного буфера при КТ в течение 2 часов. Планшеты промывали 3 раза в промывном буфере. Образцы, содержащие ингибиторы фактора Р, и титрованный фактор Р добавляли на планшет (25 мкл) и инкубировали при КТ в течение 15 мин. Планшеты промывали 3 раза в промывном буфере. Добавляли 25 мкг детектирующего антитела (античеловеческого (козьего) Sulfo-TAG, 1:1000 в инкубационном буфере, MSD cat#: R32AJ-1) и инкубировали при КТ в течение 60 мин. Планшеты промывали 3 раза в промывном буфере и добавляли 50 мкл lxMSD буфера считывания Т (с ПАВ, MSD cat#: R92TC-1). Планшеты считывали на приборе MSD Spector Imager 6000. Данные анализировали, используя программное обеспечение GraphPad Prism в версии 4, с вычитанием фона (средней величины по лункам, не содержащим Fab) из каждой величины. Величины оси X (концентрации фактора Р в растворе) трансформировали в log 10х. Величины KD (KD) подбирали из следующей модели: Fab:
Y=(Top- ( (Тор/(2xFab) )х ( ( ( (10лх)+Fab)+KD)-( ( ( ( (10лх) +Fab) +KD) х ( ( (10лх) +Fab) +KD) ) -( (4х(10лх) )xFab) )л0,5) ) ) ) ; Тор = сигнал при концентрации антигена = 0; х = концентрация фактора Р в растворе;
Fab = концентрация нанесенного моновалентного аналита (Fab) .
Пример 4: Антитела к фактору Р ингибируют альтернативный путь
комплемента
Анализ гемолиза
В гемолитических методиках все компоненты комплемента должны присутствовать и быть функциональными. Поэтому гемолитические методики могут осуществлять скрининг и функциональной целостности, и недостаточностей системы комплемента (van et al. , 1980; Minh et al., 1983; Tanaka et al., 1986). Для измерения функциональной способности классического пути бараньи эритроциты, покрытые гемолизином (кроличьим IgG к овечьим эритроцитам), или куриные эритроциты, которые сенсибилизированы кроличьими антикуриными антителами, используют в качестве клеток-мишеней (сенсибилизированных клеток). Эти комплексы Ag-Ab активируют классический путь и приводят к лизису клеток-мишеней, когда компоненты являются функциональными и присутствуют в адекватной концентрации. Для определения функциональной способности альтернативного пути в сыворотках человека и яванского макака используют кроличьи эритроциты в качестве клеток-мишеней (см. патент США 6087120).
Гемолитический анализ представляет собой основной функциональный анализ, который тестирует активацию комплемента, и используется для оценки способности молекул mAb и Fab против
FP человека блокировать лизис эритроцитов (RBC) путями активации комплемента. Ингибирование in vitro и in vivo активности комплемента одноцепочечным фрагментом Fv, распознающим С5 человека, можно измерить, используя гемолитический анализ (Thomas et al., 1996; Rinder et al., 1995; Rinder et al. , 1995) . Блокада генерирования C5a и C5b-9 ингибирует активацию лейкоцитов и тромбоцитов во время экстракорпорального кровообращения. Кратко, для анализов классического пути, сенсибилизированные эритроциты (например, куриные RBC) используют в качестве мишеней для лизиса белками комплемента, присутствующими в сыворотке. Следующий анализ представляет интерес для характеристики и скрининга антител против фактора Р в отношении ингибирования ими альтернативного пути активации комплемента.
Эта процедура была адаптирована из публикаций (Rinder et al., 1995; Thomas et al., 1996).
Реагенты:
Кроличьи эритроциты (Rb RBC) - Lampire, Cat# 7246408.
Сыворотка человека - Novartis Blood Research Program; или сыворотка яванских макак - Alpha Genesis.
Желатинвероналовый буфер (GVB) - Boston BioProducts, Cat# IBB-300.
EGTA (этиленгликоль тетрауксусная кислота) - Boston BioProducts, Cat# BM-151. MgCl2.
U-донный 9б-луночный планшет - Corning, Cat# 3795. Плоскодонный 9б-луночный планшет - Corning, Cat# 3370. NP-40 - Sigma, Cat# 74385. Последовательность операций:
Кроличьи эритроциты (RBC) промывали и доводили до концентрации 8, 33x107 клеток/мл в GVB/EGTA/Mg++. 50 мкл Fab, разведенного в GVB, добавляли в лунки 9б-луночного круглодонного планшета. Затем добавляли 50 мкл сыворотки, разбавленной в GVB с EGTA и Мд++. Контрольные лунки готовили следующим образом: сыворотка без Fab (отрицательный контроль) и
клетки плюс 0,1% NP-40 (контроль со 100% лизисом) и контрольные
лунки с NP-40. Сыворотку с Fab и без него и контроли
инкубировали при комнатной температуре в течение 3 0 минут. В
этот момент к образцу и в контрольные лунки добавляли 3 0 мкл
кроличьих RBC и 3 0 мкл буфера добавляли в контрольные лунки.
Клетки в целом инкубировали в течение 30 минут при 37°С, и
планшет центрифугировали при 2 000 об/мин в течение 5 мин.
Супернатант собирали и переносили в плоскодонный планшет.
Спектральную поглощательную способность считывали при
оптической плотности OD415 и OD570. Гемолиз в процентах
рассчитывали, используя представленную ниже формулу.
(ООобразца-СШсыворотки .контроль)-(ОО0%лизис-ОЭбуфер.контроль)
%Гемолиза= .
(СШЮО^лизис-СЮЫР 40 .контроль)- (СЮ0%лизис-ООбуфер.контроль )
В таблице 5 проиллюстрирована способность антитела против фактора Р и антигенсвязывающих фрагментов ингибировать гемолиз в 10% сыворотке человека или 2 0% сыворотке яванского макака. Каждое из описанных в настоящем описании антител против фактора Р ингибировали гемолиз при IC50 или меньше, равной 50 нМ.
Напротив, когда анализ выполняли, используя
сенсибилизированные эритроциты для исследования активации классического пути активации комплемента, то было обнаружено, что описанные в настоящем описании антитела против фактора Р не ингибировали классический путь активации комплемента (данные не показаны).
Анализ отложения СЗЬ
Одним способом измерения активности ингибитора против комплемента СЗ в альтернативном пути является измерение продукта его распада, СЗЬ, откладывающегося на зимозане. Этот анализ на основе ELISA выполняли в соответствии со следующими стадиями: 25 мкл 1 мг/мл зимозана A (Sigma Z4250) в карбонатном буфере, рН 9,6 (Pierce Cat# 28382) наносили в виде покрытия на 384-луночный планшет ELISA Maxisorp (Nunc 464718) в течение ночи при 4°С. На следующий день аспирировали содержимое покрытого зимозаном планшета и блокировали 100 мкл на лунку блокирующего ELISA буфера, Synblock (AbD Serotec BUF034C) в
течение 2 ч при комнатной температуре. В отдельной реакции ингибиторы, серийно разведенные в желатинвероналовом буфере (Boston Bioproducts IBB320-10 мМ барбитала, 145 мМ NaCl, 0,1% желатин, 0,5 мМ МдС1г, 10 мМ EGTA), добавляли к 10% сыворотке с добавлением МдС1г и EGTA для конечной общей реакционной концентрации 1 мМ МдС1г и 10 мМ EGTA. Положительный контроль не содержал ингибитор, и отрицательный контроль имел 25 мМ EDTA. Смеси давали возможность достичь равновесия инкубацией при комнатной температуре в течение 3 0 мин. Для удаления блокирующего буфера буфер аспирировали, и планшет однократно промывали TBS/0,05% Tween-20. 25 мкл на лунку 10% сыворотки, содержащей ингибиторы, или контроли добавляли в планшет и инкубировали при 37°С в течение 30 мин (по данным предварительного динамического определения, они находились в пределах линейного диапазона отложения СЗЬ на зимозане). После 30 мин инкубации планшет промывали три раза TBS/0,05% Tween-20. Для выявления отложения СЗЬ на зимозане, 25 мкл на лунку куриного античеловеческого конъюгированного C3-HRP (пероксидаза хрена) поликлонального антитела (Immunology Consultants Laboratory, Inc. Cat# CC3-80P-1), разведенного в соответствии с инструкциями производителя в PBS, с 2% фракцией V BSA (Fisher Cat# ICN 16006980), 0, 1% Tween20 (Sigma Cat# P1379) и 0,1% TritonX-100 (Sigma Cat# P234729) добавляли в планшет и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем планшет промывали три раза TBS/0,05% Tween-20 и затем добавляли 25 мкл субстратного раствора Ultra ТМВ (3,3',5, 5'-тетраметилбензидин) (Pierce Cat#34028.) Когда раствор в лунке приобретал синий цвет, реакцию останавливали 15 мкл 2н. серной кислоты. Планшет считывали при 4 50 нМ, используя Spectготах с коррекцией на пластиковый планшет при 57 0 нМ (считывание при OD 450-570 нМ) . Процентную долю отложения СЗЬ на зимозане рассчитывали, используя следующую формулу:
[(ООбез ингибитора-СЮ25 мМ EDTA)-
(ODo6pa3ua-OD25 мМ EDTA)]
% Отложения СЗЬ=100-100*
(СЮбез ингибитора - 0D 25 мМ EDTA)
Было показано, что каждое из тестированных антител
ингибирует отложение СЗЬ при IC5 0 по меньшей мере равной 10 нМ или меньше (таблица 5).
Анализ отложения MAC
Другим анализом, который использовали для определения способности антител к фактору Р ингибировать альтернативный путь активации комплемента, представлял собой измерение способности антител ингибировать образование комплекса мембранной атаки (MAC), который находится ниже по ходу транскрипции от СЗ конвертазы, и активность фактора Р. Кратко, зимозан A (Sigma) наносили в виде покрытия на планшет в концентрации 1 мг/мл в карбонатном буфере, рН 9,5, для активации альтернативного пути. Fab предварительно инкубировали с сывороткой (20% сыворотка, 5 мМ МдС1г, 10 мМ EDTA) , затем добавляли в планшет и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. После трехразового промывания планшета TBST, MAC выявляли инкубацией с анти-С5Ь-9-АЪР (Diatec) в течение 1 ч с последующими тремя промываниями TBST и инкубацией с 4-метилумбеллиферилфосфатом (Fisher) с добавлением 2 мМ МдС1г в течение 3 0 минут. Реакцию останавливали 0,2М EDTA, и планшет считывали при ех (возбуждении)=355 нМ, em (эмиссии)=460 нМ. Ингибирование отложения MAC рассчитывали для каждого образца относительно исходного уровня (сыворотка человека, обработанная EDTA) и положительного контроля (сыворотка человека) и использовали для построения кривой IC50 программным обеспечением PRISM.
В таблице 5 показаны данные, демонстрирующие способность антител против фактора Р ингибировать отложение MAC, таким образом, указывая на то, что антитела ингибировали альтернативный путь активации комплемента. В частности, антитела ингибировали отложение MAC при IC50 равной 25 нМ или меньше.
Анализ отложения СЗа
Другим способом, который использовали для оценки способности антител против фактора Р ингибировать альтернативный путь активации комплемента, представляет собой измерение способности антител ингибировать продукцию СЗа после
расщепления СЗ СЗ-конвертазой. Анализ проводили на покрытых зимозаном планшетах Maxisorp в концентрации 10 мг/мл, и 10% и 2 0% сыворотку человека предварительно инкубировали с Fab против пропердина, разведенного 2П сериями. Сыворотку добавляли в планшеты в течение 3 0 минут, и в это время сыворотку собирали для оценки продукции СЗа.
Планшеты Maxisorp покрывали антителом анти-СЗа des-arg пео (1 мкг/мл) в течение ночи, промывали три раза и блокировали разбавителем в течение двух часов при комнатной температуре. После аспирации разбавителя сыворотку добавляли в течение одного часа. Планшеты промывали три раза и добавляли 100 мкл/лунка антитела выявления, мышиного античеловеческого СЗа-биотина, разведенного 1:1000 в разбавителе. После инкубации еще в течение одного часа в лунки в течение одного часа при комнатной температуре добавляли стрептавидин-HRP вторичное антитело, разбавленное 1:5000 в разбавителе. Планшеты промывали четыре раза перед добавлением детектирующего субстрата ТМВ. Реакцию останавливали, используя стандартный стоп-реагент, и спектральную поглощательную способность считывали при 450-570 нМ.
Параллельно добавлению сыворотки, строили стандартную кривую, используя очищенный СЗа des-arg, разведенный в сыворотке. Начиная с 5 мкг/мл, СЗа des-arg серийно разводили 1:4 для построения 7-точечной кривой. Лунки стандартной кривой обрабатывали, промывали и считывали, как описано выше.
Функциональный анализ антител против фактора Р
Антитело
против фактора Р
Вид фактора Р
Ф 9 °
| 0 3
О N
П н (в
и ^ "
I в
Л S ft
so i о
Р и
" и
о ф
Ю # (К U О й Н И Е(
5 S - О
8 к ~ о (С -
& я
о -
0 л
1 g
о и о
вi S *> Е
В В4 о ф
S ffl N *
Человек
18,79
13, 18
78,42
NVS9 62
Яванский макак
12, 08
16, 14
Человек
17, 32
7, 527
31,33
NVS9 65
Яванский макак
22, 17
13,20
Человек
Н.Д.
10, 11
65, 08
NVS9 63
Яванский макак
Н.Д.
14, 53
Н.Д.
Человек
Н.Д.
7, 154
41, 11
NVS 9 6 6
Яванский макак
Н.Д.
13, 00
Н.Д.
Человек
Н.Д.
9,26
42, 18
NVS9 64
Яванский макак
Н.Д.
13,41
Н.Д.
Человек
Н.Д.
9, 61
43, 53
NVS9 67
Яванский макак
Н.Д.
14, 01
Н.Д.
Человек
23, 12
15, 27
Н.Д.
NVS962-Q
Яванский макак
20,
14,7
Н.Д.
Человек
6, 53
8,21
Н.Д.
NVS962-S
Яванский макак
15, 57
12, 02
Н.Д.
Человек
6, 61
9, 31
Н.Д.
NVS962-T
Яванский макак
5, 42
12, 54
Н.Д.
Человек
12, 68
13,39
Н.Д.
NVS962-G
Яванский макак
9, 27
14,23
Н.Д.
Человек
9, 96
12,79
Н.Д.
NVS962-S31A
Яванский макак
7,86
11, 61
Н.Д.
Человек
15,40
9,71
Н.Д.
NVS965-Q
Яванский макак
9, 39
14,71
Н.Д.
Человек
7, 32
7, 89
Н.Д.
NVS965-S
Яванский макак
8, 12
12, 02
Н.Д.
Для определения того, будет ли связываться описанное в настоящем описании антитело против фактора Р с фактором Р из других видов, в дополнение к фактору Р человека и яванского макака, проводили анализы отложения MAC и гемолиза, как описано выше. Анализ с использованием биосенсора BIAcore или гемолитические анализы проводили, как описано выше. Использовали следующие сывороточные концентрации для каждого вида: 10 и 20% для кроликов, 10 и 20% для яванских макак и 10 и 2 0% для сывороток человека. Связывание крысиного фактора Р оценивали анализом BIAcore. Как показано ниже в таблице б, антитела против фактора Р были способны к перекрестной реакции с несколькими видами, включая кролика, крысу и яванского макака.
Пример 6: Картирование эпитопов
Фактор Р состоит из нескольких повторов тромбоспондиновых доменов (TSR 0-6). Домен TSRO также называется N-концевым доменом. Картирование эпитопов Fab фактора Р выполняли созданием мышиных и человеческих химер для каждого TSR. Предыдущие функциональные анализы показали, что Fab не связываются с мышиным фактором Р (гемолитические анализы), хотя каждая из химер была функциональной в сыворотке, лишенной фактора Р. С использованием этого способа было определено, что все Fab связываются с TSR 5 (SEQ ID N0:406). На фиг.1С показано, что антитела связывают область В TSR5. Было показано, что коммерчески доступное антитело, А233, не связывается в этой области. Связывание можно оценить анализами ELISA или биосенсором Biacore, используя стандартные способы. По одному Ab, NVS4 87, данные не были заключительными вследствие перекрестной реактивности с мышиным фактором Р. Выравнивание последовательностей между доменом TSR5 мыши и фактора Р человека показывает, что эпитоп включает аминокислоты SEQ ID N0:408.
Пример 7: Ингибирование in vivo альтернативного пути активации
комплемента
Эксперименты выполняли у яванского макака с антителами по изобретению для определения их способности ингибировать альтернативный путь активации комплемента.
Тестируемое антитело, NVS9 62, вводили на уровнях доз, показанных в таблице 7. Путь введения был или в стекловидное тело (IVT), или внутривенный (IV).
Растворы тестируемого объекта и носителя (носитель: 10 мМ His/His-HCl; 10% трегалоза; 0,02% Tween 20; рН 5,5) вводили в стекловидное тело и внутривенно в 1, 15 и 29 дни исследования, как указано в таблице 7.
Оценка токсичности была основана на смертности,
клинических наблюдениях, массе тела, фармакодинамике (анализе
гемолиза), офтальмологических обследованиях, измерениях
внутриглазного давления, электроретинографии, гематологии,
клинической биохимии, массе органов и данных
патоморфологических исследований.
Во время исследования не было случаев смерти и не
наблюдали связанных с исследуемым антителом данных после оценки
клинических признаков, величин массы тела, офтальмологических
исследований, измерений внутриглазного давления,
электроретинографии, гематологии, клинической биохимии, массы органов и патоморфологических данных.
Опосредованную комплементом гемолитическую активность измеряли, используя описанный выше гемолитический анализ (см. пример 4) . Анализ данных гемолитического анализа показал, что
IV введение NVS962 привело к полному или почти полному, но кратковременному ингибированию гемолитической активности комплемента непосредственно после введения. При введении путем IVT в дозе 1 мг/глаз, тестируемый продукт оказывал небольшой или отсутствующий эффект на гемолитическую активность комплемента в сыворотке. В дозе 5 мг/глаз ив 10% сыворотке яванского макака наблюдали полное или почти полное ингибирование гемолитической активности комплемента.
Пример 8: Синергическое ингибирование альтернативного пути активации комплемента комбинациями антител Анализ гемолиза
Гемолитические анализы с использованием вариантов Fab антитела к С5 8109 из таблицы 2 и антитела NVS9 62 против фактора Р из таблицы 1 выполняли, как описано в примере 4.
На фиг.2 проиллюстрирована способность антитела против фактора Р и антигенсвязывающих фрагментов в комбинации с антителами к С5 и антигенсвязывающими фрагментами ингибировать гемолиз в 20% человеческой сыворотке. 500 нМ Fab против фактора Р и 500 нМ Fab против С5 отдельно не демонстрируют ингибирование гемолиза при инкубации в течение 60 мин. Напротив, комбинация антител против фактора Р и против С5 в одинаковой концентрации и в концентрациях, составляющих только 167 нМ, демонстрирует почти полное ингибирование гемолиза. Кроме того, почти полное ингибирование гемолиза длится до 250 минут.
Данные, полученные в гемолитическом анализе, использовали с программным обеспечением Chalice Analyzer для определения, действовала ли комбинация ингибирующих комплемент антител синергически для блокировки активации комплемента. Эффекты комбинации можно охарактеризовать сравнением ингибирования в каждой точке данных с ингибированием в эталонной модели комбинации, которое было получено по кривым одиночных средств (Greco, Bravo, Parsons (1995). The search for synergy: a critical review from a response surface perspective. Pharmacol Rev 47(2): 331-85). В Loewe аддитивной модели (Loewe (1928). Die quantitativen Probleme der Pharmakologie. Erqebn. Physiol.
27: 47-187), ILoewe (Cx, CY) представляет собой ингибирование, которое удовлетворяет уравнению (Cx/ICx) + (CY/ICY) =1, и ICX,Y представляют собой эффективные концентрации при Iboewe для подобранных по точкам кривых одиночных средств. Аддитивность Loewe представляет собой общепринятый эталон для синергии (Greco et al.) , поскольку он представляет ответ на применение комбинации, если X и Y представляют собой одно и то же соединение.
Сдвиг активности обычно показывают, используя изоболограмму (Greco et al.), которая показывает, насколько меньше требуется лекарственного средства в комбинации для достижения желаемого уровня эффекта, по сравнению с дозами одного средства, требуемыми для достижения этого эффекта. Выбор уровня эффекта для представления изоболограммы и расчеты показателя аддитивности можно производить вручную, или они могут выбираться автоматически в программном обеспечении Chalice Analyzer. Алгоритм автоматического выбора изоуровня
НаХОДИТ НабЛЮДаеМЫе Idate С НаибОЛЬШеЙ раЗНОСТЬЮ Idate- Iboewe,
исключая те точки, в которых Idate превышают меньшую Imax отдельного средства. Это исключение применяют для обеспечения того, чтобы изоболограмма отражала наилучшую синергию на уровнях, охватываемых обоими отдельными средствами. Выбрав уровень изоболограммы ICut, изоболограмму чертят путем идентификации точки концентраций, которые соответствуют пересечению выбранного изоуровня. Изоболограмма показывает стандартный изоболографический анализ синергии, по сравнению со стандартом аддитивного эффекта дозы "лекарственного средства в сравнении с ним самим" по Loewe. Для определенного уровня изоболограммы контур наблюдаемого изоэффекта (например, изогнутая линия на фиг.З) проявляется теоретическим контуром аддитивного эффекта дозы (например, прямая линия на фиг.З), на нормализованной по ICeffect линейной шкале концентрации для обоих веществ в комбинации. Эталон аддитивного эффекта дозы всегда представляет собой линию, соединяющую две концентрации ICeffect-Точки пересечения ICeffect находят интерполяцией нанесенных по точкам сигмоидальных кривых доза-ответ.
Сдвиг эффекта оценивают в баллах в виде показателя аддитивности (Chou, Talalay (1984) . Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs ИЛИ enzyme inhibitors. Adv Enzyme Requl 22: 27-55) CI. Для выбранного уровня изоэффекта I cut л CIi= (CX/ECX) ±+ (CY/ECY) i, где (Cx/ECx)i для конкретной точки данных представляет собой отношение измеренной концентрации соединения X к его эффективной концентрации на выбранном уровне ингибирования. CI можно считать грубым показателем того, сколько лекарственного средства необходимо в комбинации относительно доз одного средства, требуемых для достижения выбранного уровня эффекта, и величина 0,1 означает, что только десятая часть эквивалентных количеств отдельных средств была необходима для комбинации с целью достижения того же уровня эффекта. Величины CI в диапазоне 0,5-0,7 типичны для измерений in vitro современных клинических комбинаций (Greco et al. ) . Величина CI 1,0 указывает на аддитивный эффект комбинации антител, тогда как величина CI меньше чем 0,5 указывает на синергический эффект в результате применения комбинации антител. В программном обеспечении Chalice Analyzer наилучший CI регистрируется по многим величинам показателя аддитивности, рассчитанным для каждой пересекающей Icut концентрации. Среди всех измеренных величин CI величина с наибольшим уровнем соотношения сигнал-шум регистрируется как наилучший показатель аддитивности.
Данные гемолитического анализа выражали в виде % ингибирования и загружали в таблицу 8x8 в формате Excel, в которой концентрации антител выражали в виде величин в мкМ. Матрицу Excel загружали в программное обеспечение Chalice (Lehar et al. 2009), и показатель аддитивности получали созданием кривой изоболограммы с использованием IC20 для каждого антитела (CI=CX/ICX+CY/ICY, где 1СХ и 1СУ представляют собой, соответственно, концентрации антитела против фактора Р и антитела против С5 отдельно, которые приводят к эффекту ингибирования на 2 0%, и Сх и Су представляют собой концентрации каждого лекарственного средства в смеси, которая обеспечивала
ингибирование на 2 0%) . Показатель аддитивности при ингибировании на 20% составляет 0,36, указывая на синергию между антителом против фактора Р и антителом против С5 (фиг.З). Инфильтрация макрофагами
Эффект Fab анти-fP и анти-С5 отдельно или в комбинации оценивали in vivo, используя мышиную модель поли-IC глазного воспаления. Мышам внутривенно инъецировали синтетический аналог дсРНК (двухцепочечной РНК), поли 1:С в 0,1 мл PBS системно мышам C57BL/6 наряду с антителами против fP (антителом NVS9 62 из таблицы 1) и против С5 (антитело 8 019 из таблицы 2) отдельно или в комбинации. Мышей подвергали эвтаназии в указанные точки времени. Производили забор глаз и сетчаток, и белковые экстракты получали для анализа цитокина и хемокина с использованием мультиплексного анализа (Pierce). Для определения лейкоцитарной инфильтрации сетчатки глаза фиксировали в 4% параформальдегиде и окрашивали конъюгированным с Alexa Fluor-488 антителом F4/80 к макрофагам. Сетчатки распластывали с сосудистой сетью сетчатки, ориентированной кверху, на предметное стекло и покрывали покровным стеклом с каплей среды для помещения препарата Vectashield (Vector Laboratories Inc, Burtingame, CA) . Флуоресцентные изображения пяти (500 мкм) областей на каждой сетчатке захватывали, используя камеру Axiocam MR3, на микроскопе Axio.lmageMI (Zeiss). Число нейтрофилов и макрофагов количественно анализировали программным обеспечением Axiovision (версия 4.5 Zeiss). Используя оптическую когерентную томографию (ОСТ), получали изображения сетчаток и анализировали у мышей, леченных поли 1:С. Эти результаты (фиг. 4) демонстрируют, что при самой высокой тестированной концентрации (20 мкг) наблюдали ингибирование макрофагов не более чем на 45%. Напротив, комбинации антител против фактора Р и против С5 в концентрациях, составляющих только 2 мкг, продемонстрировали ингибирование на 7 9%, и увеличение концентрации достигло ингибирования 100% (по сравнению с ингибирование только на 13% и 32%, соответственно, для антител против С5 и против фактора Р отдельно).
Данные, полученные на модели поли-IC in vivo (инфильтрация макрофагами), описанной в предыдущем абзаце, были выражены в виде ингибирования в % и загружали в таблицу 4x4 Excel, в которой дозы антитела были выражены в мкг. Матрицу Excel загружали в анализатор Chalice (описанный выше), и показатель аддитивности получали созданием кривой изоболограммы, используя IC50 для каждого антитела (CI=CX/ICX+CY/ICY, где 1СХ и 1СУ представляют собой, соответственно, концентрации антитела против фактора Р и антитело против С5 отдельно, которые привели к эффекту ингибирования на 50%, а Сх и Су представляют собой концентрации каждого лекарственного средства в смеси, которая обеспечивает ингибирование на 50%). Показатель аддитивности при ингибировании на 50% составляет 0,42 (см. фиг.5), указывая на синергию между антителом против фактора Р и антителом против С5.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:408.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:407.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1 или 2, которое связывает фактор Р с KD, равным 1,2 нМ или меньше, по данным измерения титрованием раствора до равновесной концентрации.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-3, которое связывает фактор Р с KD, равным 500 нМ или меньше.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-4, которое связывает фактор Р с KD, равным 200 нМ или меньше.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-5, где указанное антитело связывает фактор Р человека.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-6, которое также связывает фактор Р яванского макака, кролика или крысы.
8. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-7, которое дополнительно ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по данным измерения гемолитическим анализом in vitro, при IC50, равном 25 нМ или меньше.
9. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-8, где указанное антитело связывает фактор Р человека и ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по данным измерения гемолитическим анализом in vitro, при IC50, равном 16 нМ или меньше.
10. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент по любому из п.п.1-9, которое дополнительно ингибирует
альтернативный путь активации комплемента, по данным измерения
анализом отложения СЗЬ in vitro, при IC50, равном 10 нМ или
меньше.
11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 10,
где указанное антитело связывает фактор Р человека и ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по данным измерения анализом отложения СЗЬ in vitro, при IC50, равном 3 нМ или меньше.
12. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент по любому из п.п.1-11, которое дополнительно
ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по данным
измерения анализом отложения MAC in vitro, при IC50, равном 25
нМ или меньше.
13. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому
из п.п.1-12, где указанное антитело связывает фактор Р человека
и ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по
данным измерения анализом отложения MAC in vitro, при IC50,
равном 2 5 нМ или меньше.
14. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-13, которое дополнительно ингибирует альтернативный путь активации комплемента, по данным измерения гемолитическим анализом in vitro, при IC50, равном 25 нМ или меньше, анализом отложения СЗЬ in vitro, при IC50, равном 10 нМ или меньше, и анализом отложения MAC in vitro, при IC50, равном 25 нМ или меньше.
15. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает фактор Р и конкурирует с антителом, описанным в таблице 1.
16. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает фактор Р, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 в SEQ ID N0:4, 5 и 6, соответственно;
b) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:15, 16 и 17, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:18, 19 и 20, соответственно;
c) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3
SEQ ID N0:29, 30 и 31, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:32, 33 и 34, соответственно;
d) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:43, 44 и 45, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:46, 47 и 48, соответственно;
e) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:57, 58 и 59, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:60, 61 и 62, соответственно;
f) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:71, 72 и 73, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:74, 75 и 7 6, соответственно;
д) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:85, 86 и 87, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:88, 89 и 90, соответственно;
h) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3
SEQ ID N0:99, 100 и 101, соответственно, и вариабельную область
легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:102, 103 и 104,
соответственно;
i) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3
SEQ ID N0:113, 114 и 115, соответственно, и вариабельную
область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:116, 117 и
118, соответственно;
j) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:127, 128 и 129, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:130, 131 и 132, соответственно;
к) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:141, 142 и 143, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:144, 145 и 146, соответственно;
1) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3
SEQ ID N0:155, 156 и 157, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:158, 159 и 160, соответственно;
т) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:169, 170 и 171, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:172, 173 и 174, соответственно;
п) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:183, 184 и 185, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:186, 187 и 188, соответственно;
о) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:197, 198 и 199, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:200, 201 и 202, соответственно;
р) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:211, 212 и 213, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:214, 215 и 216, соответственно;
q) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:225, 226 и 227, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:228, 229 и 230, соответственно;
г) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:239, 240 и 241, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:242, 243 и 244, соответственно;
s) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:253, 254 и 255, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:256, 257 и 258, соответственно; или
t) вариабельную область тяжелой цепи HCDR1, HCDR2 и HCDR3 SEQ ID N0:267, 268 и 269, соответственно, и вариабельную область легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:270, 271 и 272, соответственно.
17. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому
из п.п.1-16, содержащее вариабельные области тяжелой и легкой цепей с аминокислотными последовательностями, которые по меньшей мере на 90% идентичны SEQ ID N0:7 и 8; SEQ ID N0:21 и 22; SEQ ID N0:35 и 36; SEQ ID N0:49 и 50; SEQ ID N0:63 и 64; SEQ ID N0:77 и 78; SEQ ID N0:91 и 92; SEQ ID N0:105 и 106; SEQ ID N0:1 19 и 120; SEQ ID N0:133 и 134; SEQ ID N0:147 и 148; SEQ ID N0:161 и 162; SEQ ID N0:175 и 176; SEQ ID N0:189 и 190; SEQ ID N0:203 и 204; SEQ ID N0:217 и 218; SEQ ID N0:231 и 232; SEQ ID N0:245 и 246; SEQ ID N0:259 и 260 или SEQ ID N0:273 и 274, соответственно.
18. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи,
содержащую SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133,
147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273, и
дополнительно содержащую вариабельную область легкой цепи, где
указанную вариабельную область тяжелой цепи и указанную
вариабельную область легкой цепи комбинируют с образованием
антигенсвязывающего сайта с фактором Р.
19. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент, которое содержит вариабельный домен легкой цепи,
содержащий SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134,
148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274, и
дополнительно содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где
вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой
цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с
фактором Р.
20. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент по любому из п.п.1-19, где область указанного
вариабельного домена легкой цепи содержит SEQ ID N0:8, 22, 36,
50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218,
232, 246, 260 или 274.
21. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент, которое содержит тяжелую цепь SEQ ID N0:9, 23, 37,
51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219,
233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержит легкую цепь,
где тяжелую цепь и легкую цепь комбинируют с образованием
антигенсвязывающего сайта с фактором Р.
22. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит легкую цепь SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 2 62 или 27 6, и дополнительно содержит тяжелую цепь, где легкую цепь и тяжелую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р.
23. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-22, где указанная легкая цепь содержит SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276.
24. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает фактор Р, содержащее тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержащее легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276.
25. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает фактор Р, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9 и 10, 23 и 24, 37 и 38, 51 и 52, 65 и 66, 79 и 80, 93 и 94, 107 и 108, 121 и 122, 135 и 136, 149 и 150, 163 и 164, 177 и 178, 191 и 192, 205 и 206, 219 и 220, 233 и 234, 247 и 248, 261 и 262 или 275 и 276.
26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-25, где указанное антитело представляет собой антитело человека, химерное антитело, моноклональное антитело, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-26, где указанное антитело представляет собой изотип IgG.
28. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотид, кодирующий антитело или фрагмент по любому из п.п.1-
26.
29. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, содержащий вариабельную область тяжелой цепи по любому из п.п.1-27.
30. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.2 8 или 29, где указанная нуклеиновая кислота по меньшей мере на 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID N0:11, 25, 39, 53, 67, 81, 95, 109, 123, 137, 151, 165, 179, 193, 207, 221, 235, 249, 263 и 277.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, содержащий вариабельную область легкой цепи по любому из п.п.1-27.
32. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.28-31, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты на 95% идентична последовательности SEQ ID N0:12, 26, 40, 54, 68, 82,
96, 110, 124, 138, 152, 166, 180, 194, 208, 222, 236, 250, 264
и 278.
33. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, содержащий тяжелую цепь по любому из п.п.1-27
34. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.28-33, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты на 95% идентична последовательности SEQ ID N0:13, 27, 41, 55, 69, 83,
97, 111, 125, 139, 153, 167, 181, 195, 209, 223, 237, 251, 265
и 279.
35. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, содержащий легкую цепь по любому из п.п.1-27.
36. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из п.п.28-35, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты на 95% идентична последовательности SEQ ID N0:14, 28, 42, 56, 70, 84,
98, 112, 126, 140, 154, 168, 182, 196, 210, 224, 238, 252, 266
и 280.
37. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из п.п.28-36.
38. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.37.
39. Композиция, содержащая антитело или его
антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27, и
фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.
40. Способ лечения возрастной дегенерации желтого пятна у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27.
41. Способ по п.40, где индивидом является человек.
42. Способ ингибирования альтернативного пути активации комплемента у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27.
43. Способ по п.42, где индивидом является человек.
44. Способ ингибирования опосредованной комплементом гибели клеток, включающий приведение в контакт клетки с композицией, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27.
45. Способ ингибирования образования СЗЬ в клетке, включающий приведение в контакт клетки с композицией, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27.
46. Способ ингибирования образования комплекса мембранной атаки в клетке, включающий приведение в контакт клетки с композицией, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27
47. Способ ингибирования альтернативного пути активации комплемента в клетке, включающий приведение в контакт клетки с композицией, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27, и измерение активности указанного пути гемолитическим анализом in vitro, анализом отложения СЗЬ in vitro или анализом отложения MAC in vitro, где уменьшение активности пути определяется уменьшением гемолиза, отложения СЗЬ и/или отложения MAC на 10%.
48. Композиция, содержащая первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывают фактор Р, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывают С5, где указанная комбинация ингибирует альтернативный путь активации комплемента.
46.
49. Композиция по п.48, где указанная комбинация ингибирует воспаление глаза.
50. Композиция по любому из п.п.48-49, где указанное воспаление глаза определяют измерением накопления нейтрофилов и/или рекрутирования макрофагов в сетчатке.
51. Комбинация по любому из п.п.48-50, где указанная комбинация ингибирует накопление нейтрофилов в сетчатке.
52. Комбинация по любому из п.п.48-51, где указанная комбинация ингибирует рекрутирование макрофагов в сетчатке.
53. Композиция по любому из п.п.4 8-52, где указанное антитело, которое связывает фактор Р, связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:408.
54. Композиция по любому из п.п.4 8-52, где указанное антитело, которое связывает фактор Р, связывает область фактора Р, содержащую SEQ ID N0:407.
55. Композиция по любому из п.п.4 8-54, где указанное первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой антитело, выбранное из таблицы 1, и указанное второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранные из таблицы 2.
56. Композиция по любому из п.п.48-55, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает тот же эпитоп, что и антитело, описанное в таблице 1, и второе антитело или его антигенсвязывающ фрагмент связывает тот же эпитоп, что и антитело, описанное в таблице 2.
57. Композиция по любому из п.п.48-56, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR1, 2, 3 тяжелой цепи и CDR1, 2, 3 легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
a) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:1, 2 и 3, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:4, 5 и 6, соответственно;
b) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:15, 16 и 17, соответственно, и вариабельной области
a)
легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:18, 19 и 20, соответственно;
c) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:29, 30 и 31, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:32, 33 и 34, соответственно;
d) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:43, 44 и 45, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:46, 47 и 48, соответственно;
e) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:57, 58 и 59, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:60, 61 и 62, соответственно;
f) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:71, 72 и 73, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:74, 75 и 7 6, соответственно;
д) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:85, 86 и 87, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:88, 89 и 90, соответственно;
h) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи
SEQ ID N0:99, 100 и 101, соответственно, и вариабельной области
легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:102, 103 и 104,
соответственно;
i) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи
SEQ ID N0:113, 114 и 115, соответственно, и вариабельной
области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:116, 117 и
118, соответственно;
j) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:127, 128 и 129, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:130, 131 и 132, соответственно;
к) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:141, 142 и 143, соответственно, и вариабельной
области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:144, 145 и 146, соответственно;
1) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:155, 156 и 157, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:158, 159 и 160, соответственно;
т) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:169, 170 и 171, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:172, 173 и 174, соответственно;
п) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:183, 184 и 185, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:186, 187 и 188, соответственно;
о) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:197, 198 и 199, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:200, 201 и 202, соответственно;
р) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:211, 212 и 213, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:214, 215 и 216, соответственно;
q) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:225, 226 и 227, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:228, 229 и 230, соответственно;
г) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:239, 240 и 241, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:242, 243 и 244, соответственно;
s) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:253, 254 и 255, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:256, 257 и 258, соответственно; и
t) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:267, 268 и 269, соответственно, и вариабельной
области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:270, 271 и 272, соответственно,
и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR1, 2, 3 тяжелой цепи и CDR1, 2, 3 легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
a) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:410, 411 и 412, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:413, 414 и 415, соответственно;
b) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:426, 427 и 428, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:429, 430 и 431, соответственно;
c) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:442, 443 и 444, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:445, 446 и 447, соответственно;
d) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:426, 458 и 428, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:429, 430 и 459, соответственно; и
e) вариабельной области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:470, 471 и 472, соответственно, и вариабельной области легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 SEQ ID N0:473, 474 и 475, соответственно.
58. Композиция по любому из п.п.48-57, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей с аминокислотными последовательностями, которые по меньшей мере на 90% идентичны SEQ ID N0:7 и 8; SEQ ID N0:21 и 22; SEQ ID N0:35 и 36; SEQ ID N0:49 и 50; SEQ ID N0:63 и 64; SEQ ID N0:77 и 78; SEQ ID N0:91 и 92; SEQ ID N0:105 и 106; SEQ ID N0:1 19 и 120; SEQ ID N0:133 и 134; SEQ ID N0:147 и 148; SEQ ID N0:161 и 162; SEQ ID N0:175 и 176; SEQ ID N0:189 и 190; SEQ ID N0:203 и 204; SEQ ID N0:217 и 218; SEQ ID N0:231 и 232; SEQ ID N0:245 и 246; SEQ ID N0:259 и 260 или SEQ ID N0:273 и 274, соответственно, и где второе
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей, имеющие аминокислотные последовательности по меньшей мере на 90% идентичные SEQ ID N0:416 и 417; SEQ ID N0:432 и 433; SEQ ID N0:448 и 449; SEQ ID N0:460 и 461 или SEQ ID N0:476 и 477, соответственно.
59. Композиция по любому из п.п.48-58 где (а) первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID N0:7, 21, 35, 49, 63, 77, 91, 105, 119, 133, 147, 161, 175, 189, 203, 217, 231, 245, 259 или 273, и дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, где указанную вариабельную область тяжелой цепи и указанную вариабельную область легкой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID N0:416, 432, 448, 460 или 476, и дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, где указанную вариабельную область тяжелой цепи и указанную вариабельную область легкой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5.
60. Композиция по любому из п.п.48-59, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (а) содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 260 или 274, и дополнительно содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, которая содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID N0:417, 433, 449, 461 или 477, и дополнительно содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи и вариабельный домен тяжелой цепи комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с С5.
61. Композиция по п.59, где первое антитело или его
антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID N0:8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 190, 204, 218, 232, 246, 2 60 или 274, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID N0:417, 433, 449, 461 или 477.
62. Композиция по любому из п.п.48-61, где (а) первое
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую
цепь SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149,
163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275 и дополнительно
содержит легкую цепь, где тяжелую цепь и легкую цепь
комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором
Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент содержит тяжелую цепь SEQ ID N0:418, 434, 450, 462 или
47 8 и дополнительно содержит легкую цепь, где тяжелую цепь и
легкую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего
сайта с С5.
63. Композиция по любому из п.п.4 8-62, где (а) первое
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую
цепь SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150,
164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276 и дополнительно
содержит тяжелую цепь, где легкую цепь и тяжелую цепь
комбинируют с образованием антигенсвязывающего сайта с фактором
Р, и (Ь) где второе антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или
47 9 и дополнительно содержит тяжелую цепь, где легкую цепь и
тяжелую цепь комбинируют с образованием антигенсвязывающего
сайта с С5.
64. Композиция по п.62, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или 479.
65. Композиция по п.п.4 8-64, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь с
64.
аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9, 23, 37, 51, 65, 79, 93, 107, 121, 135, 149, 163, 177, 191, 205, 219, 233, 247, 261 или 275, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:10, 24, 38, 52, 66, 80, 94, 108, 122, 136, 150, 164, 178, 192, 206, 220, 234, 248, 262 или 276, и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:418, 434, 450, 462 или 478, и дополнительно содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:419, 435, 451, 463 или 479.
66. Композиция по любому из п.п.4 8-65, где первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:9 и 10, 23 и 24, 37 и 38, 51 и 52, 65 и 66, 79 и 80, 93 и 94, 107 и 108, 121 и 122, 135 и 136, 149 и 150, 163 и 164, 177 и 178, 191 и 192, 205 и 206, 219 и 220, 233 и 234, 247 и 248, 261 и 262 или 275 и 276, соответственно; и где второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь и легкую цепь с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID N0:418 и 419, 434 и 435, 450 и 451, 462 и 463 или 478 и 479, соответственно.
67. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую первое антитело или фрагмент по любому из п.п.48-66.
68. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.48-66.
69. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.6 7 или б 8.
70. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.69.
71. Способ лечения возрастной дегенерации желтого пятна у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного
66.
количества композиции по любому из п.п.48-66.
72. Способ по п.71, где индивидом является человек.
73. Способ ингибирования альтернативного пути активации комплемента у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции по любому из п.п.48-66.
74. Способ по п. 73, где индивидом является человек.
75. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 для применения в качестве лекарственного препарата.
76. Композиция по п.4 8 для применения в качестве
лекарственного препарата.
77. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27 для применения при лечении возрастной дегенерации желтого пятна.
78. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27 для применения при ингибировании альтернативного пути активации комплемента.
79. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27 для применения при ингибировании опосредованной комплементом гибели клеток.
80. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27 для применения при ингибировании образования СЗЬ в клетке.
81. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из п.п.1-27 для применения при ингибировании образования комплекса мембранной атаки в клетке.
82. Композиция по любому из п.п.48-66 для применения для лечения возрастной дегенерации желтого пятна.
83. Композиция по любому из п.п.48-66 для применения для ингибирования альтернативного пути активации комплемента у индивида.
84. Способ лечения возрастной дегенерации желтого пятна у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного количества композиции по п.48.
85. Способ по п.84, где индивидом является человек.
86. Способ ингибирования альтернативного пути активации комплемента у индивида, включающий введение указанному индивиду
77.
эффективного количества композиции по п.48.
87. Способ по п.86, где индивидом является человек.
По доверенности
со CD
оЗ ?
"5 \ О)
?14
: <•>
4v .
CL CD m a: со i-
CL Ф
ФИГ.2
Изоболограмма
\ CI 0.36
Антитело к С5 (мкМ)
ФИГ.З
ФИГ.4
Изоболограмма
Антитело к С5 (мкМ)
ФИГ.5
485
180
181
Таблица 4
183
183
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
1 <
Таблица 5
187
190
Таблица 6
190
Таблица 6
191
Таблица 7
191
Таблица 7
192
192
202
203
27 .
205
205
1/6
1/6
2/6
2/6
6/6
6/6