(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам лечения амиотрофического бокового склероза. Конкретнее, настоящее изобретение имеет отношение к новым комбинированным способам лечения амиотрофического бокового склероза или родственного заболевания.
1411678
НОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АМИОТРОФИЧЕСКОГО
БОКОВОГО СКЛЕРОЗА
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам лечения амиотрофического бокового склероза и родственных болезней. Конкретнее, настоящее изобретение'имеет отношение к новым видам комбинированной терапии для лечения амиотрофического бокового склероза и родственных болезней.
Предшествующий уровень техники
Амиотрофический боковой склероз (ALS), также известный как болезнь Лу Герига, является встречающейся у взрослых болезнью двигательных нейронов. Впервые он был описан в 1869 французским невропатологом Жаном-Мартеном Шарко. Эта болезнь характеризуется дегенерацией и смертью моторных нейронов, что приводит к общей слабости и атрофии мышц. Болезнь неотвратимо прогрессирует, причем 50% пациентов умирает в течение 3 лет от начала болезни. ALS считается редким заболеванием с распространенностью 4 - 6 на 100000 каждый год и с частотой возникновения заболевания 1 - 2 на 100000 каждый год.
Большинство случаев заболевания (90%) являются спорадическими случаями ALS (SALS), а оставшиеся 10% случаев заболевания являются наследственными и рассматриваются как семейный ALS (FALS) с менделевским наследованием. С клинической точки зрения случаи семейного (FALS) и спорадического (SALS) не отличаются друг от друга, за исключением возраста начала SALS, составляющего на 10 лет больше, чем возраст начала FALS (56 лет против 46 лет) [1]. Причины большинства случаев ALS неизвестны, а клиническое течение крайне изменчиво, что указывает на то, что в основе механизма болезни лежит множество факторов. Имеется незначительное количество вариантов лечения.
Отличительным признаком этой болезни является избирательная смерть моторных нейронов, расположенных в стволе головного мозга, двигательной области коры головного мозга и спинном мозге, приводящая к параличу произвольно сокращающихся мышц. Паралич начинается очагами, а способ его распространения указывает на то, что дегенерация распространяется среди пулов контактирующих моторных нейронов. Смерть в большинстве случаев происходит в результате ухудшения контроля за диафрагмой и потери дыхательной способности.
ALS характеризуется прогрессирующими проявлениями дисфункции как нижних, так и верхних двигательных нейронов. Нижние моторные нейроны соединяют ствол головного мозга и спинной мозг с мышечными волокнами. Их дисфункция приводит к атрофии мышц, спазмам и фаскуляциям (небольшим, очаговым, непроизвольным сокращениям мышечных волокон). Верхние моторные нейроны берут начало в двигательной области коры головного мозга или в стволе головного мозга и передают двигательную информацию вниз до моторных нейронов, которые несут непосредственную ответственность за стимулирование целевой мышцы. Их дисфункция приводит к спастичности (непрерывному мышечному сокращению, которое препятствует ходьбе, движению и речи) и патологическим рефлексам [2]. Другие родственные болезни мотонейронов обычно отличаются типом пораженных нервных клеток, т.е. верхними или нижними моторными нейронами: эти болезни известны как первичный латеральный склероз (PLS), прогрессирующая мышечная атрофия (РМА), псевдобульбарный синдром и прогрессирующий бульбарный синдром (РВР).
Диагностирование ALS основывается на клинических признаках, установленных невропатологом, исходя из истории болезни, топографического распространения потери нейронов и обнаружения некоторых характерных цитологических изменений. Однако не существует однозначного доступного диагностического теста для ALS. Клинические признаки классифицируются в соответствии с затронутыми неврологическими областями, представляющими собой бульбарную, цервикальную и люмбальную области.
Как уже было упомянуто, дегенерация при ALS преимущественно затрагивает двигательную систему. Однако, недавно сообщалось о когнитивных и поведенческих симптомах, а также симптомах нарушения чувствительности [3, 4], кроме того существует доказательство клинического и патологического частичного совпадения между лобно-височной деменцией (FTD) и ALS [17].
Некоторые слабые доказательства говорят о том, что начало ALS может инициироваться предполагаемыми факторами окружающей среды [5-6].
Сообщалось, что некоторые мутировавшие гены или участки генома вызывают или создают предрасположение к ALS, а также к ALS с лобно-височной деменцией (FTD) [79]. Например, около 20 - 25% всех случаев FALS и около 1% случаев SALS возникают вследствие мутаций супероксиддисмутазы SOD1 [10]. В одной и той же семье наблюдаются разнообразные клинические проявления при одинаковой мутации SOD1, которая необязательно вызывает гомогенный фенотип. Не существует явной корреляции между активностью фермента, клиническим течением и фенотипом болезни. Однако срок болезни является сходным независимо от того, имеется ли: мутация. Исторически
сложилось, что открытие мутаций SOD1 привело к созданию первых животных моделей ALS. Была создана болезнь двигательных нейронов близко похожая на ALS человека [1112]. В числе генов, вовлеченных в развитие ALS или родственных болезней двигательных нейронов, могут быть упомянуты алсин, меняющий фактор Rab5A [13], сенатаксин, возможно участвующий в процессинге РЖ, VAPB белок, регулирующий транспорт везикул, основной аксональный ретроградный моторный протеин динактин, митохондриальные гены для цитохром С оксидазы и изолейцин тРНК синтетазы [14-15], ангиогенные модуляторы VEGF и ангиогенин [16].
ALS является комплексной болезнью, при этом причины и точные механизмы, участвующие в патогенезе этой болезни, еще не установлены. Это стимулирует разработку эффективного фармакологического лечения. Клинические испытания показали, что рилузол незначительно увеличивает выживаемость (а не функциональную способность) при ALS [18]. Тем не менее, в настоящее время рилузол является единственным одобренным лекарственным средством и единственным видом лечения при ALS. Что касается тяжести болезни, он в результате вводится всем пациентам, страдающим от ALS, как соединение, модифицирующее болезнь,
WO 2009/133128, WO 2009/133141, WO 2009/133142, WO 2011/054759, WO 2009/068668 и WO 2009/153291 раскрывают возможные виды лечения некоторых нейродегенеративных заболеваний, в числе которых ALS.
Были сделаны первые попытки создания рекомендаций по нефармакологическому лечению. Однако стандарты по-прежнему основываются на мнении экспертов и различаются между странами.
Соответственно, все еще существует устойчивая необходимость в данной области в новых и эффективных видах терапии для лечения амиотрофического бокового склероза.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение предоставляет новые композиции и способы лечения ALS и родственных болезней. Изобретение, в частности, обусловливается установлением комбинаций лекарственных средств, обеспечивающих улучшенный терапевтический эффект и клиническую пользу субъектам с ALS.
Конкретнее, цель изобретения имеет отношение к композиции, предназначенной для использования при лечении ALS или родственных болезней, содержащей, по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или их композиции с замедленным высвобождением.
Дополнительной целью изобретения является способ лечения ALS или родственных болезней у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту, по меньшей мере, двух лекарственных средств, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или их композиции с замедленным высвобождением.
Предпочтительные примеры комбинаций лекарственных средств, предназначенных для использования в изобретении, включают, например, баклофен и акампросат; торасемид и баклофен; баклофен и цинакальцет; торасемид и сульфизоксазол; мексилетин и цинакальцет; или баклофен и акампросат и торасемид.
В отдельном варианте осуществления изобретения композиция дополнительно содержит рилузол, или соль, пролекарство, производное любой химической чистоты или его композицию с замедленным высвобождением.
Композиции в изобретении могут дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов, причем они могут вводиться субъекту многократно. Предпочтительные композиции вводятся перорально. Более того, лекарственные средства могут создаваться или вводиться вместе, по отдельности или последовательно.
Изобретение пригодно для лечения ALS у какого-либо млекопитающего, в частности у человека, на любой стадии болезни. Изобретение может использоваться для задержки развития болезни, для уменьшения, отсрочки или предотвращения паралича, дегенерации двигательных нейронов и/или боли и/или увеличения выживаемости.
Подписи к фигурам
Фигура 1: Действие комбинированного лечения баклофеном и акампросатом от токсичности глутамата на нейроны коры головного мозга. Интоксикация глутаматом в значительной степени предотвращается комбинацией баклофена (400 нМ) и акампросата (1,6 нМ), тогда как в тех же концентрациях баклофен и акампросат по отдельности не оказывают значительного влияния на интоксикацию. *: р <0,001, значимое отличие от интоксикации глутаматом; (ANOVA + апостериорный тест Дуннетта).
Фигура 2: Действие комбинированного лечения баклофеном и акампросатом от токсичности глутамата (GLU) на модели совместно культивируемых нервно-мышечных клеток на количество (А), площадь (В) и длину нейритов (С) моторных единиц. Независимо от рассматриваемой конечной точки, интоксикация глутаматом в значительной степени предотвращается комбинацией баклофена (BCL, 80 нМ) и
акампросата (АСР, 0,32 нМ), тогда как в тех же концентрациях баклофен и акампросат по отдельности не оказывают значительного влияния на интоксикацию. *: р <0.05, значимое отличие от интоксикации глутаматом; (ANOVA + апостериорный тест Дуннетта).
Фигура 3: Эффект комбинированного лечения цинакальцетом и мексилетином от токсичности глутамата на нейронах коры головного мозга. Интоксикация глутаматом в значительной степени предотвращается комбинацией цинакальцета (64 рМ) и мексилетина (25,6 рМ), тогда как в тех же концентрациях цинакальцет и мексилетин по отдельности не оказывают значительного влияния на интоксикацию. *:р <0,001, значимое отличие от интоксикации глутаматом; (ANOVA + апостериорный тест Дуннетта).
Фигура 4: Эффект комбинированной терапии сульфизоксазолом и торасемидом от токсичности глутамата на нейронах коры головного мозга. Интоксикация глутаматом в значительной степени предотвращается комбинацией сульфизоксазола (6,8 нМ) и торасемида (400 нМ), тогда как в тех же концентрациях сульфизоксазол и торасемид по отдельности не оказывают значительного влияния на интоксикацию. *: р <0,001, значимое отличие от интоксикации глутаматом; (ANOVA + апостериорный тест Дуннетта).
Фигура 5: Комбинация баклофена (BCL) и акампросата (АСР) действует как "усилитель" защитного эффекта рилузола (RIL) от токсичности глутамата на модели совместно культивируемых нервно-мышечных клеток на площадь (А) и длину нейритов (В) моторных единиц. Весьма сильный усиливающий эффект наблюдается при использовании минимальных концентраций АСР (0,14 нМ) BCL (36 нМ), по сравнению с эффектом, полученным при АСР (0,32 нМ) BCL (80 нМ).
Фигура 6: Баклофен (BCL) и акампросат (АСР) действуют синергетически с рилузолом при защите нервно-мышечных соединений от токсичности глутамата на модели совместно культивируемых нервно-мышечных клеток. Значительное улучшение защиты наблюдается при измерении количества, площади, а также длины нейритов моторных единиц. А) улучшение конечных критериев оценки от 2 до 5% наблюдается при сочетании АСР (0,14 нМ) и BCL (36 нМ); от 12 до 16% при использовании одного рилузола (0,04 мкМ); тогда как комбинация 3 лекарственных средств дает в результате улучшение от 39 до 43%. В) улучшение конечных критериев оценки от 2 до 5% наблюдается при сочетании АСР (0,14 нМ) и BCL (36 нМ); от 70 до 88% при использовании рилузола 5 мкМ; тогда как комбинация 3 лекарственных средств дает в результате улучшение от 131 до 165%. (*: р <0,001, значимое отличие от интоксикации глутаматом; 0:р <0,001, значимое отличие (ANOVA + апостериорный тест Дуннетта)).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение предоставляет новые терапевтические подходы для лечения ALS или родственных болезней. Конкретнее, настоящее изобретение раскрывает новые виды комбинированной терапии, обеспечивающие возможность эффективной коррекции подобных болезней, которые могут использоваться у любого млекопитающего.
В контексте изобретения термин "лечение" болезни включает лечение, предотвращение, профилактику, задержку или уменьшение боли, вызванной заболеванием. Термин лечение включает, в частности, контроль за развитием болезни и связанных с ней симптомов. В отношении ALS термин лечение также означает задержку или более позднее начало паралича, уменьшение или предотвращение дегенерации двигательных нейронов, уменьшение боли и/или увеличение выживаемости.
Термин "родственные ALS болезни" относится к болезням двигательных нейронов, таким как первичный латеральный склероз (PLS), прогрессирующая мышечная атрофия (РМА), псевдобульбарный синдром и прогрессирующий бульбарный синдром (РВР), а также лобно-височная деменция (FTD).
Термин "комбинация или комбинированное лечение/терапия" означает лечение, при котором, чтобы вызвать биологический эффект, субъекту вводят совместно, по меньшей мере, два или более лекарственных средств. При комбинированной терапии согласно этому изобретению, по меньшей мере, два лекарственных средства могут вводиться вместе или по отдельности в одно и то же время или последовательно. Кроме того, по меньшей мере, два лекарственных средства могут вводиться с использованием разных способов и протоколов. Более того, в то время как лекарственные средства могут вместе заключаться в один состав, они также могут быть отдельными лекарственными средствами.
Как обсуждалось выше, изобретение имеет отношение к композициям лекарственных препаратов и способам лечения ALS или родственных болезней у субъекта, нуждающегося в этом.
Конкретнее, изобретение имеет отношение к композиции, предназначенной для лечения амиотрофического бокового склероза (ALS) или родственных болезней, включающей, по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или солей или пролекарств или производных любой чистоты или их композиций с замедленным высвобождением.
Изобретатели неожиданно обнаружили, что эти соединения, в комбинации(ях), демонстрируют защитную активность от токсичности глутамата, которая является одной
из причин смерти нейронов, на in vitro модели ALS.
Конкретнее, изобретение показывает, что лекарственные средства изобретения продемонстрировали неожиданное защитное действие в отношении двигательных нейронов от токсичности глутамата, который является одной из этиологических причин нервной дегенерации при ALS. Более того, изобретатели обнаружили, что эти композиции, в низких дозах, эффективно защищают моторные единицы, действуя синергетически. Это является существенным преимуществом, в частности, позволяя избегать возможных побочных действий. Более того, как показано в экспериментальной части, такое комбинированное лечение может задерживать начало паралича in vivo на животных моделях ALS и увеличивать продолжительность жизни. Следовательно, такое комбинированное лечение представляет собой значительное улучшение лечения субъектов с ALS.
Соответственно, изобретение имеет отношение к композиции, предназначенной для лечения амиотрофического бокового склероза (ALS) или родственного заболевания и включающей, по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли(ей) или пролекарства(пролекарств) или производного(ых) любой чистоты или их композиций с замедленным высвобождением.
Изобретение также имеет отношение к способу лечения амиотрофического бокового склероза (ALS) или родственного заболевания у нуждающегося в этом субъекта, включающему введение субъекту, по меньшей мере, двух лекарственных средств, выбранных из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли(ей) или пролекарства(в) или производного(ых) любой чистоты или их композиций с замедленным высвобождением.
Изобретение также имеет отношение к соединению, выбранному из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли(ей) или пролекарства(в) или производного(ых) любой чистоты или их композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним вторым соединением, выбранным из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или соли(ей) или пролекарства(в) или производного(ых) любой чистоты или их композиций с замедленным высвобождением, для применения при лечении амиотрофического бокового склероза (ALS) или родственного заболевания путем комбинированного, отдельного или последовательного введения субъекту, нуждающемуся в этом.
Предпочтительные комбинации для применения в настоящем изобретении
включают, по меньшей мере, одну из следующих лекарственных комбинаций, предназначенных для одновременного, последовательного или раздельного введения:
баклофен и цинакальцет,
цинакальцет и акампросат,
баклофен и акампросат,
баклофен и акампросат и торасемид,
мексилетин и цинакальцет,
торасемид и баклофен, или
торасемид и сульфизоксазол, или соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) любой чистоты или их композиции с замедленным высвобождением для применения при лечении ALS или родственных болезней. Композиции, содержащие такие комбинации, также представляют собой конкретные цели изобретения.
Использованный в описании термин "пролекарство" имеет отношение к каким-либо функциональным производным (или предшественникам) соединения настоящего изобретения, которые, при введении в биологическую систему, порождают указанное соединение в результате, например, спонтанной химической реакции(ий), катализируемой ферментом химической реакции(ий) и/или метаболической химической реакции(ий). В большинстве случаев пролекарства являются неактивными или менее активными, чем получающееся в результате лекарственное средство, и могут использоваться, например, для улучшения физико-химических свойств лекарственного средства, для нацеливания лекарственного средства на конкретную ткань, для улучшения фармакокинетических и фармакодинамических свойств лекарственного средства и/или для уменьшения нежелательных побочных эффектов. Некоторые из обычных функциональных групп, которые используются при создании пролекарств, включают, но не ограничиваются этим, карбоксильную, гидроксильную, аминную, фосфатную/фосфонатную и карбонильную группы. Как правило, пролекарства, получаемые путем модификации этих групп, включают, но не ограничиваются этим, сложные эфиры, карбонаты, карбаматы, амиды и фосфаты. Специальные технические руководства по выбору подходящих пролекарств являются общедоступными (19 - 23). Кроме того, изготовление пролекарств может осуществляться обычными методами, известными специалистам в данной области техники. Методы, использующиеся для синтеза других пролекарств, описаны в многочисленных обзорах по данному предмету (20; 24 - 30). Например, арбаклофен плакарбил приведен в списке ChemID и базе данных Advance database (интернет-сайт: chem.sis.nlm.nih.gov/chemidplus/), арбаклофен плакарбил является хорошо известным
пролекарством баклофена (31-32). Конкретные примеры пролекарств баклофена приведены в Hanafi et al, 2011 (33), в частности сложные эфиры баклофена и карбаматы сложных эфиров баклофена, представляющие особый интерес для нацеливания на ЦНС. Следовательно, такие пролекарства являются пригодными, в частности, для композиций этого изобретения. Арбаклофен плакарбил, как уже было сказано выше, также представляет собой хорошо известное пролекарство и таким образом может использоваться вместо баклофена в композициях изобретения. Другие пролекарства баклофена можно найти в следующих патентных заявках: WO2010102071, US2009197958, WO2009096985, WO2009061934, WO2008086492, US2009216037, WO2005066122, US2011021571, WO2003077902, WO2010120370.
Подходящие пролекарства акампросата, такие кж сложные эфиры пантоевой кислоты, неопентил сульфониловые сложные эфиры, пролекарства неопентил сульфонил сложных эфиров или пролекарства акампросата скрытого карбоксилат неопентил сульфонилового сложного эфира перечислены, в частности, в WO2009033069, WO2009033061, WO2009033054 WO2009052191, WO2009033079, US 2009/0099253, US 2009/0069419, US 2009/0082464, US 2009/0082440 и US 2009/0076147.
Термин "производное" соединения включает любую молекулу, функционально
и/или структурно связанную с указанным соединением, такую как кислота, амид,
сложный эфир, простой эфир, ацетилированный вариант, гидроксилированный вариант
или алкилированный (С1-С6) вариант такого соединения. Термин "производное" также
включает структурно родственное соединение, утратившее один или более
перечисленных выше заместителей. Например, гомотаурин представляет собой
деацетилированное производное акампросата. Предпочтительными производными
соединений являются молекулы, имеющие существенную степень сходства с указанным
соединением, что определяется с помощью известных методов. Похожие соединения
вместе с их индексом сходства с исходной молекулой могут быть найдены во многих
базах данных, таких как PubChem (http://pubchem.ncbi.mm.nm.gov/search/) или DrugBank
(http://wvvw.dragbank.ca/). В более предпочтительном варианте осуществления
производные должны иметь индекс сходства Танимото больше, чем 0,4, предпочтительно
больше, чем 0,5, более предпочтительно больше, чем 0,6, даже более предпочтительно
больше, чем 0,7 с исходным лекарственным средством:. Индекс сходства Танимото
широко используется для измерения степени структурного сходства между двумя
молекулами. Индекс сходства Танимото может быть вычислен с помощью программного
обеспечения, такого как Small Molecule Subgraph Detector (34-35), доступного онлайн
(http://vmw.ebi.ac.mc/momton-srv/sofrware/S Предпочтительные производные
должны быть и структурно и функционально связанными с исходным соединением, т.е., они также должны сохранять, по меньшей мере, часть активности исходного лекарственного средства, более предпочтительно они должны демонстрировать защитную активность от токсичности глутамата в отношении моторных единиц (на примере экспериментальной части).
Термин производные также включает метаболиты лекарственного средства, например, молекулу, которая является результатом (биохимической) модификации(й) или обработки указанного лекарственного средства после введения в организм, обычно посредством специализированных систем ферментов, и которые проявляют или сохраняют биологическую активность лекарственного средства. Метаболиты раскрываются как ответственные за большую часть терапевтического действия исходного лекарственного средства. В отдельном варианте осуществления использованный в описании термин "метаболит" обозначает модифицированное или обработанное лекарственное средство, которое сохраняет, по меньшей мере, часть активности исходного лекарственного средства, более предпочтительно метаболиты должны обладать защитной активностью от токсичности глутамата в отношении моторных единиц (на примере экспериментальной части). Примеры метаболитов включают гидроксилированные формы торасемида, являющиеся результатом метаболизма лекарственного средства в печени (Drag bank database (36)).
Термин "соль" относится к фармацевтически приемлемой и относительно нетоксичной, неорганической или органической соли присоединения кислоты соединения настоящего изобретения. Образование фармацевтической соли заключается в соединении кислой, основной или цвиттер-ионной молекулы лекарственного средства с противоионом с целью создания солевой версии лекарственного средства. Большое число химических соединений может использоваться в реакции нейтрализации. Фармацевтически приемлемые соли изобретения, таким образом, включают соли, полученные путем взаимодействия главного соединения, выполняющего (функцию основания, с неорганической или органической кислотой с образованием соли, например, соли уксусной кислоты, азотной кислоты, винной кислоты, хлористоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты или лимонной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли изобретения также включают соли, в которых главное соединение выполняет функцию кислоты и реагирует с подходящим основанием с образованием, например, солей натрия, калия, кальция, магния, аммония или холиновых солей. Хотя большая часть солей данного активного компонента представляет
собой биоэквиваленты, некоторые могут обладать, среди прочего, повышенной растворимостью или биодоступностью. Выбор солей в настоящее время является обычной стандартной процедурой в процессе создания лекарственного средства, как указано в руководстве Н. Stahl and C.G Wermuth (37).
В предпочтительном варианте осуществления обозначение соединения подразумевает обозначение соединения как такового, а также любой его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, изомера или рацемата.
Таблица I ниже предоставляет номер CAS соединений для использования в изобретении, а также соли(ей), производных, метаболитов и/или пролекарств данных соединений.
Более предпочтительно лекарственные композиции изобретения включают 2, 3, 4 или 5 различных лекарственных средств, даже более предпочтительно 2, 3 или 4 различных лекарственных средств для основанного на комбинировании лечения ALS или родственного заболевания у нуждающегося в этом субъекта.
В отдельном варианте осуществления изобретение имеет отношение к композиции как таковой, содержащей баклофен и цинакальцет, или акампросат и цинакальцет, или соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) любой чистоты или их композиции с замедленным высвобождением.
В более конкретном варианте осуществления изобретение имеет отношение к композиции, содержащей акампросат и цинакальцет или соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) любой чистоты или их композиции с замедленным высвобождением, предназначенной для применения при лечении ALS или родственного заболевания, в которой ежедневная дозировка акампросата равна или меньше 10 мг.
Кроме того, в другом конкретном варианте осуществления композиции и способы изобретения дополнительно используют рилузол, или соль, пролекарство, производное любой чистоты или его композиции с замедленным высвобождением. Представленные результаты действительно неожиданно показывают, что при использовании в комбинации с рилузолом (СAS п° 1744-22-5) существенно увеличивается клиническая польза лечения пациентов композициями изобретения.
Соответственно, отдельной целью этого изобретения является композиция, содержащая i) по меньшей мере, одно лекарственное средство, выбранное из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, и ii) рилузол, предназначенный для одновременного, отдельного или последовательного применения при лечении ALS или родственного заболевания.
Другой конкретной целью этого изобретения является описанная выше композиция, содержащая i) по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, и ii) рилузол, предназначенный для одновременного, отдельного или последовательного применения при лечении ALS или родственного заболевания.
Предпочтительной целью этого изобретения является композиция, содержащая, по меньшей мере, одну из следующих лекарственных комбинаций: рилузол, баклофен и цинакальцет, рилузол, цинакальцет и акампросат, рилузол, баклофен и акампросат, рилузол, баклофен и акампросат и торасемид,
рилузол, мексилетин и цинакальцет,
рилузол, торасемид и баклофен, или
рилузол, торасемид и сульфизоксазол, или соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) любой чистоты или их композиции с замедленным высвобождением для одновременного, отдельного или последовательного применения при лечении ALS или родственного заболевания.
Другие дополнительные методы лечения, которые могут использоваться в сочетании с лекарственной комбинацией(ями) согласно настоящему изобретению, могут включать одно или более лекарственных средств, облегчающих симптомы ALS болезни, одно или более лекарственных средств, которые могут использоваться для паллиативного лечения ALS болезни или одно или более лекарственных средств, в настоящее время оцененных в рамках клинических испытаний в отношении лечения ALS болезни. Предпочтительно, указанное одно или более лекарственных средств выбирают из AEOL 10150, аримокломола, AVP-923, токсина ботулизма типа В (МуоЫос), цефтриаксона, целастазола, целекоксиба, гликозидов цистанхе, коэнзима Q10, копаксона, креатина, креатинина, дронабинола, эритропоэтина, эсциталопрама (Lexapro), глатирамер ацетата, колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF), гормона роста (соматотропина), GSK1223249, индинавира, инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-I), IGF-1-AAV, KNS-760704, летепринима, леупролида, леветирацетама, MCI-186, мекобаламина, миноциклина, модафинила, ингибитора нааладазы, N-ацетилцистеина, NBQX, нимесулида, нимодипина, оланзапина, олезоксима (TRO19622), ONO-2506, оксепы, пиоглитазона, R(+) прамипексол дигидрохлорид моногидрата, олесоксима, оксандролона, хинидина, фенилбутирата, SB-509, скриптаида, SNN0029, соматропина, талампанела, тамоксифена, тауроурсодеоксихолевой кислоты, ТСН346, тестостерона, талидомида, трегалозы, третиноина, витамина Е, YAM80 или из 17-бета-эстрадиола, 2-МРРА (2-(3-меркаптопропил)пентандиовой кислоты), 3,4-диаминопиридина, 5-гидрокситриптофана, 7-нитроиндазола, альфа-липоевой кислоты, AM 1241, аминофиллина, ангиоганина, антител анти-человек SOD1, антисмысловой пептид-нуклеиновой кислоты, направленной против p75(NTR), АР7, апоцинина, ВАРТА-АМ, BDNF, BN82451, каннабинола, кардиотрофина-1, антитела CD4, CNTF, коливелина, пищевой меди, кортикотропина, циклофосфамида, дельта(9)-тетрагидроканнабинола, DHEA, диазепама, пищевого цинка, дилтиазема, DMPO, DP-109, DP-460, эдаравона, EGCG, эпигалокатехин-галлата, этидроната, FeTCPP, флувоксамина, фолиевой кислоты, габапентина, галектина-1, GDNF, гинсенга, GPI-1046, гуанидина, HGF, хуманина, IFN-альфа, интерлейкина-3, ивермектина, L-745,870, L-карнитина, L-DOPA, лецитинизированной SOD, леналидомида, леупептина,
LIF, L-NAME, лизина ацетилсалицилата, мелатонина, мепивакаина, метамфетамина, метилкобаламина, МК-801, МпТВАР, модафинила, морфина, Neu2000, NGF, нордигидрогваяретовой кислоты, нортриптилина, NT3, олмесартана, пеницилламина, пентоксифиллина, пимозида, полиамин-модифицированной каталазы, прамипексола, преднизона, прогестерона, прометазина, путресцин-модифицированной каталазы, пирувата, разагилина, PvK35, Ro 28-2653, рофекоксиба, RPR 119990, RX77368, SB203580, селегилина, семапимода, сертралина, SS-31, SSR180575, стабилизированной siRNA против человеческой Си,2п-супероксиддисмутазы (SOD1), такролимуса, тамсулозина гидрохлорида, ТАТ-модифицированного Bcl-X(L), TGF-6eTa2, тианептина, триентина, TRO19622, U-74389F, VEGF, винкристина, WHI-P131, WIN55,212-2, WX-340, халипродена, ZK 187638 и zVAD-fmk.
Как было указано выше, предпочтительные методы лечения по изобретению содержат 2, 3, 4 или даже более различных активных соединений, которые могут быть необязательно дополнительно объединены или скомбинированы с другими видами (видом) лечения. В комбинированной терапии этого изобретения соединения или лекарственные средства могут заключаться в состав по отдельности или вместе и вводятся вместе, по отдельности или последовательно.
Изобретение также имеет отношение к способу лечения ALS болезни или родственного нарушения, причем данный способ включает одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту, нуждающемуся в этом, описанной выше лекарственной комбинации.
Лекарственные средства или композиции изобретения могут вводиться субъекту многократно.
Композиции изобретения в большинстве случаев содержат один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов.
Дополнительная цель этого изобретения имеет отношение к применению, по меньшей мере, двух лекарственных средств, выбранных из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида для производства медикамента для лечения ALS или родственного заболевания путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
Дополнительная цель этого изобретения имеет отношение к применению, по меньшей мере, одной из следующих лекарственных комбинаций: баклофен и цинакальцет, цинакальцет и акампросат,
баклофен и акампросат,
баклофен и акампросат и торасемид,
мексилетин и цинакальцет,
торасемид и баклофен, или
торасемид и сульфизоксазол, для производства медикамента для лечения ALS или родственного заболевания путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
В отдельном варианте осуществления изобретение также имеет отношение к применению, по меньшей мере, одного лекарственного средства, выбранного из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида в комбинации с рилузолом для производства медикамента для лечения ALS или родственного заболевания путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
Другой вариант осуществления имеет отношение к применению, по меньшей мере, двух лекарственных средств, выбранных из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида в комбинации с рилузолом для производства медикамента для лечения ALS или родственной болезни путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
В более конкретном варианте осуществления это изобретение имеет отношение к применению, по меньшей мере, одной из следующих лекарственных комбинаций:
баклофен и цинакальцет,
цинакальцет и акампросат,
баклофен и акампросат,
баклофен и акампросат и торасемид,
мексилетин и цинакальцет,
торасемид и баклофен, или
торасемид и сульфизоксазол, в комбинации с рилузолом для производства медикамента для лечения ALS или родственного заболевания путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
Дополнительной целью этого изобретения является способ приготовления фармацевтической композиции, данный способ включает смешивание вышеуказанных соединений в соответствующем эксципиенте или носителе.
Лечение согласно изобретению может предоставляться на дому, в кабинете врача, клинике, амбулаторном отделении больницы или лечебнице, чтобы врач мог всесторонне наблюдать за эффектами лечения и при необходимости делать корректировку терапии.
Продолжительность лечения зависит от стадии болезни, возраста и состояния пациента, и того, как пациент отвечает на лечение.
Кроме того, человек, имеющий повышенный риск развития дополнительного невропатического нарушения (например, человек, генетически предрасположенный к или имеющий, например, диабет, или проходящий курс лечения по поводу онкологического состояния, и т.д.), может получать профилактическое лечение, чтобы облегчить или отсрочить возможный невропатический ответ.
Дозировку, частоту и способ введения каждого лекарственного средства можно контролировать независимо. Комбинированное лечение может проводиться периодическими циклами, включающими периоды отдыха, чтобы организм пациента имел возможность восстановиться от любых до сих пор непредвиденных побочных эффектов. При этом лекарственные средства могут включаться в состав совместно, так что оба лекарственных средства доставляются пациенту во время одного введения.
Создание фармацевтических композиций
Введение каждого лекарственного средства комбинации может осуществляться любыми подходящими способами, дающими в результате такую концентрацию лекарственного средства, которая, в сочетании с другим компонентом, может улучшить состояние пациента.
Вместе с тем, что активные ингредиенты комбинации могут быть введены в виде химически чистых веществ, предпочтительным является их предоставление в виде фармацевтической композиции, в этом контексте называемой также фармацевтическим составом. Возможные композиции включают композиции, пригодные для перорального, ректального, местного (включая трансдермальное, защечное и подъязычное), или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введения.
Обычно эти фармацевтические композиции назначаются пациенту в "упаковке для пациента", содержащей некоторое количество единиц дозирования или других средств для введения отмеренных однократных доз для применения в течение определенного периода лечения в единой упаковке, обычно в блистерной упаковке. Упаковка для пациента имеет преимущество по сравнению с традиционными рецептами (когда фармацевт отделяет дозу фармацевтического препарата, предназначенную для пациента, от неупакованной партии), заключающееся в том, что пашиент всегда имеет доступ к
листку-вкладышу, содержащемуся в упаковке для пациента и обычно отсутствующему при использовании традиционных рецептов. Известно, что добавление листовки-вкладыша улучшает соблюдение пациентом назначений врача. Таким образом, изобретение дополнительно включает фармацевтическую композицию, как ранее описано в данном документе, вместе с упаковочным материалом, пригодным для указанных композиций. В такой упаковке для пациента предусмотренное применение композиции для комбинированного лечения может быть определено по инструкциям, приспособлениям, устройствам и/или другим средствам, предназначенным для помощи при использовании композиции наиболее подходящим для лечения образом. В частности, такие меры делают упаковку для пациента пригодной и приспособленной для применения при лечении комбинацией настоящего изобретения.
Лекарственное средство может содержаться в любом соответствующем количестве в любом подходящем веществе-носителе и может присутствовать в количестве 1 - 99% по весу от общего веса композиции. Композиция может предоставляться в лекарственной форме, подходящей для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного), ректального, кожного, назального, вагинального, окулярного введения, введения посредством ингаляции или кожного пластыря. Таким образом, композиция может находиться в форме, например, таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранул, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогели, паст, мазей, кремов, пластырей, пропитанных салфеток, осмотических средств доставки, суппозиториев, клизм, инъекционных средств, имплантируемых устройств, спреев или аэрозолей.
Фармацевтические композиции могут создаваться в соответствии с обычной фармацевтической практикой (смотри, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут создаваться так, чтобы высвобождать активное лекарственное средство сразу же после введения или в какое-либо предопределенное время или период времени после введения.
Композиции с контролируемым высвобождением включают (i) композиции, создающие практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени; (ii) композиции, которые после определенного периода задержки создают практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени; (ш) композиции, которые поддерживают действие лекарственного средства в течение заранее определенного
периода времени путем сохранения относительно постоянного эффективного уровня лекарственного средства в организме вместе с одновременной минимизацией нежелательных побочных эффектов, связанных с колебаниями з'ровня в плазме активного лекарственного вещества; (iv) композиции, которые определяют место действия лекарственного средства, например, посредством пространственного размещения композиции с контролируемым высвобождением рядом с или в больной ткани или органе; и (v) композиции, которые "нацеливают" лекарственное средство с помощью носителей или химических производных для доставки лекарственного средства в конкретный тип клеток-мишеней.
Введение лекарственных средств в форме композиций с контролируемым высвобождением особенно предпочтительно в тех случаях, когда лекарственное средство в комбинации имеет: (!) узкий терапевтический диапазон (т.е., различие между концентрацией в плазме, приводящей к вредным побочным эффектам или токсическим реакциям, и концентрацией в плазме, приводящей к терапевтическому эффекту, является небольшим; в общем, терапевтический индекс, TI, определяется как отношение средней летальной дозы (LD50) к средней эффективной дозе (ED50)); (ii) узкое окно поглощения в желудочно-кишечном тракте; или (Ш) очень короткий биологический период полужизни, такой, что в течение дня требуется частое дозирование для поддержания терапевтического уровня в плазме.
Может быть осуществлена любая из целого ряда стратегий, для того, чтобы получить контролируемое высвобождение, при котором скорость высвобождения превосходит уровень метаболизма рассматриваемого лекарственного средства. Контролируемое высвобождение может быть получено путем выбора различных параметров и ингредиентов композиции, включая, например, различные типы композиций с контролируемым высвобождением и покрытия. Таким образом, лекарственное средство заключается в состав фармацевтической композиции вместе с подходящими эксципиентами, при этом после введения композиция контролируемым образом высвобождает лекарственное средство (композиции в виде одной или множества таблеток или капсул, масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы, пластыри и липосомы).
Твердые лекарственные формы для перорального применения Предпочтительным способом введения цилостазола и рилузола является пероральный прием. Композиции для перорального применения включают таблетки, содержащие активный ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Эти эксципиенты могут быть, например, инертными
эксципиентами или наполнителями (основами) (например, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмалы, включая всукурузный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия, фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующими и разрыхляющими веществами (например, производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая кукурузный крахмал, кросскармелозу натрия, альгинаты или альгиновую кислоту); связывающими веществами {например, гуммиарабик, альгиновая кислота, альгинат натрия, желатин, крахмал, прежелатинизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль); и смазьшающими веществами, веществами, способствующими скольжению, и антиадгезионными веществами {например, стеариновая кислота, диоксид кремния или тальк). Другие фармацевтически приемлемые эксципиенты могут представлять собой красители, вкусовые вещества, пластификаторы, увлажняющие вещества, буферные вещества и тому подобное.
Таблетки могут быть таблетками без оболочки или они могут быть покрыты оболочкой при помощи известных методов, необязательно чтобы замедлить разрушение и всасывание в желудочно-кишечном тракте и таким образом обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода времени. Покрытие может быть выполнено так, чтобы высвобождать активное лекарственное вещество заранее определенным образом {например, чтобы получить композицию с контролируемым высвобождением) или оно может быть выполнено так, чтобы высвобождать активное лекарственное вещество только после прохождения желудка (энтеросолюбильное покрытие). Покрытие может представлять собой слой сахарной глазури, пленочную оболочку (например, на основе гидроксипропил метилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метил гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, акрилатных сополимеров, полиэтиленгликолей и/или поливинилпирролидона), или энтеросолюбильное покрытие {например, на основе сополимеров метакриловой кислоты, ацетатфталата целлюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетатсукцината гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилацетата фталат, шеллака и/или этилцеллюлозы). Могут использоваться материалы, обеспечивающие задержку во времени, такие как, например, глицерил моностеарат или глицерил дистеарат.
Твердые композиции в виде таблеток могут включать покрытия, приспособленные для защиты композиции от нежелательных химических изменений {например, химической деградации до высвобождения активного лекарственного вешества). Покрытие может
наноситься на твердую лекарственную форму таким способом, как описано в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.
Лекарственные средства могут быть смешаны вместе в таблетке или могут быть разделены. Например, первое лекарственное средство содержится на внутренней стороне таблетки, а второе лекарственное средство находится на внешней поверхности, так что значительная часть второго лекарственного средства высвобождается до высвобождения первого лекарственного средства.
Композиции для перорального применения также могут предоставляться в виде жевательных таблеток или твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивается с инертной твердой основой (например, картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбонатом кальция, фосфатом кальция и каолином), или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивается с водой или масляной средой, например, жидким парафином или оливковым маслом. Порошки и гранулы можно приготовить обычным образом, используя ингредиенты, упомянутые выше для таблеток и капсул.
Композиции с контролируемым высвобождением для перорального применения, могут, например, быть созданы так, чтобы высвобождение активного вещества контролировалось растворением и/или диффузией активной лекарственной субстанции.
Высвобождение, контролируемое растворением или диффузией, может быть достигнуто с помощью соответствующего покрытия таблеток, капсул, драже или гранул композиции лекарственных средств, или путем включения лекарственного средства в подходящую матрицу. Контролирующее высвобождение покрытие может включать один или более из покрывающих материалов, упомянутых выше и/или, например, шеллак, пчелиный воск, гликовоск, гидрированное касторовое масло, карнаубский воск, стеариновый спирт, глицерил моностеарат, глицерил дистеарат, глицерин пальмитостеарат, этилцеллюлозу, акриловые смолы, dl-полимолочную кислоту, ацетобутират целлюлозы, поливинил хлорид, поливинил ацетат, винилпирролидон, полиэтиленгликоль, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, метакрилатные гидрогели, 1,3 бутиленгликоль, этиленгликоль метакрилат и/или полиэтиленгликоли. В матричных композициях с контролируемым высвобождением материал матрицы также может включать, например, гидратированную метилцеллюлозу, карнаубский воск и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глицерил тристеарат, метил акрилат-метил метакрилат, поливинил хлорид, полиэтиленгликоль и/или галоидированный фторуглерод.
Композиция с контролируемым высвобождением, содержащая одно или более
лекарственных средств заявленных комбинаций, также может иметь форму "плавающей" таблетки или капсулы (т.е., таблетки или капсулы, которая после перорального введения, плавает на поверхности содержимого желудка в течение определенного периода времени). Композиция "плавающей" таблетки лекарственного средства(средств) может быть получена гранулированием смеси лекарственного средства(средств) с эксципиентами и гидроколлоидами 20-75% вес/вес, такими как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропил-метилцеллюлоза. Потом полученные гранулы могут быть спрессованы в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетка образует практически водонепроницаемый гелевый барьер вокруг своей поверхности. Этот гелевый барьер участвует в сохранении плотности, что позволяет таблетке плавать в желудочном соке.
Жидкости для перорального введения
Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, пригодные для приготовления водной суспензии путем добавления воды, являются удобными лекарственными формами для перорального введения. Композиция в виде суспензии предоставляет активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим веществом, суспендирующим веществом и одним или более консервирующими веществами. Подходящими суспендирующими веществами являются, например, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, альгинат натрия и тому подобное.
Парентеральные композиции
Хотя это и является менее предпочтительным, фармацевтическая композиция также может быть введена парентерально с помощью инъекции, инфузии (вливания) или имплантации (внутривенной, внутримышечной, подкожной или тому подобного) в готовых лекарственных формах, составах или посредством подходящих устройств для доставки или имплантатов, содержащих обычные, нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и адьюванты (вспомогательные вещества). Состав и приготовление таких композиций хорошо известны специалистам в области создания фармацевтических препаратов.
Композиции для парентерального введения могут предоставляться в стандартных лекарственных формах (например, в ампулах с однократной дозой), или во флаконах, содержащих несколько доз, в которые может быть добавлен подходящий консервант (смотри ниже). Композиция может иметь форму раствора, суспензии, эмульсии, инфузионного устройства или имплантируемого устройства или может иметь вид сухого порошка, предназначенного для восстановления водой или другим подходящим разбавителем перед применением. Кроме активного лекарственного средства (средств)
композиция может включать подходящие парентерально приемлемые носители и/или эксципиенты. Активное лекарственное средство (средства) может быть заключено в микросферы, микрокапсулы, микрочастицы, липосомы и тому подобное для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующие, стабилизирующие, регулирующие значение рН и/или диспергирующие вещества.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть в форме, пригодной для осуществления стерильного введения. Для получения такой композиции подходящее активное лекарственное средство (средства) растворяют или суспендируют в парентерально приемлемом жидком разбавителе. К числу приемлемых разбавителей и растворителей, которые можно использовать, относятся вода, вода с подходящим значением рН, отрегулированным путем добавления соответствующего количества соляной кислоты, гидроокиси натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водная композиция может также содержать одно или более консервирующих веществ (например, метил, этил или н-пропил р-гидроксибензоат). В тех случаях, когда лекарственное средство является умеренно или слаборастворимым в воде, может быть добавлен усиливающий растворение или солюбилизирующий агент, или растворитель может включать 10-60% вес/вес пропиленгликоля или тому подобного.
Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут иметь форму водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий или эмульсий. Альтернативно., активное лекарственное средство(а) может быть заключено (встроено) в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, имплантаты или инфузионные устройства. Материалами, используемыми при получении микросфер или и/или микрокапсул, являются, например, биодеградируемые/биоразлагаемые полимеры, такие как полигалактин, поли-(изобутил цианоакрилат), поли(2-гидроксиэтил-Ь-глютамин). Биосовместимыми носителями, используемыми при создании парентеральных композиций с контролируемым высвобождением, являются углеводы (например, декстраны), белки (например, альбумин), липопротеины или антитела. Используемые в имплантатах материалы могут быть небиодеградируемыми (например, полидиметилсилоксан) или биодеградируемыми (например, поли(капролактон), поли(гликолевая кислота) или поли(ортоэфиры)).
Альтернативные способы
Могут быть предусмотрены менее предпочтительные и менее удобные другие способы введения и, следовательно, другие композиции. В этом отношении
лекарственные формы, подходящие для ректального применения композиций, включают суппозитории (суспензионного или эмульсионного типа) и ректальные желатиновые капсулы (содержащие растворы или суспензии). В типичной композиции для суппозиториев активное лекарственное средство(а) комбинируется с подходящей фармацевтически приемлемой основой, такой как масло какао, этерифицированные жирные кислоты, желатин с глицерином и различные водорастворимые или диспергируемые основы, такие как полиэтиленгликоли. Могут включаться различные вспомогательные вещества, усилители или поверхностно-активные вещества.
Фармацевтические композиции также могут вводиться местно в кожу для впитывания через кожу в лекарственных формах или композициях, обычно содержащих нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, включая микросферы и липосомы. Такие композиции включают кремы, мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, контурные безъячейковые упаковки, спреи, пасты, пластыри и другие виды систем для чрескожной доставки лекарственных средств. Фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты могут включать эмульгирующие вещества, антиоксиданты, буферные вещества, консервирующие вещества, увлажняющие вещества, усиливающие проникновение вещества, хелатирующие агенты, гелеобразующие вещества, мазевые основы, ароматизирующие вещества и защищающие кожу вещества.
Эмульгирующие вещества могут быть камедями природного происхождения {например, гуммиарабиком или трагакантовой камедью).
Консервирующими веществами, увлажняющими веществами, усиливающими проникновение веществами могут быть парабены, такие как метил или пропил р-гидроксибензоат, и бензалконий хлорид, глицерин, пропиленгликоль, мочевина и т.д.
Фармацевтические композиции, описанные выше, предназначенные для местного применения на коже также могут использоваться вместе с местным введением в или близко с частью тела, которая подвергается лечению. Композиции могут быть приспособлены для непосредственного применения или применения с помощью специальных устройств для доставки лекарственного средства, таких как повязки или пластыри, подушечки, губки, контурные безъячейковые упаковки или другие формы из подходящего гибкого материала.
Позировки и продолжительность лечения
Следует понимать, что лекарственные средства комбинации могут вводиться одновременно, в одной и той же или в разных фармацевтических композициях, или последовательно. При последовательном введении отсрочка введения одного из активных
ингредиентов не должна приводить к потере положительного эффекта комбинации активных ингредиентов. Минимальное требование к комбинации согласно данному описанию заключается в том, что комбинация должна предназначаться для комбинированного применения с учетом пользы, получаемой от комбинации активных ингредиентов. Предусмотренное применение комбинации может быть определено по приспособлениям, устройствам и/или другим средствам, предназначенным для помощи при использовании комбинации согласно изобретению.
Терапевтически эффективное количество цилостазола является количеством, пригодным для предотвращения или уменьшения риска развития ALS болезни и остановки или замедления прогрессирования ALS болезни после того, как она становится клинически очевидной.
Предпочтительными примерами дозировок согласно изобретению являются:
мексилетин: примерно от 6 до 120 мг в день, предпочтительно менее чем 60 мг в день, более предпочтительно менее чем 30 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 15 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
торасемид: примерно от 0,05 до 4 мг в день, предпочтительно менее чем 2 мг в день, более предпочтительно менее чем 1 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 0,5 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
акампросат: примерно от 1 до 1000 мг в день, предпочтительно менее чем 400 мг в день, более предпочтительно менее чем 200 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 50 мг в день, или даже менее чем 10 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
баклофен: примерно от 0,01 до 150 мг в день, предпочтительно менее чем 100 мг в день, более предпочтительно менее чем 50 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 30 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
цинакальцет: примерно от 0,3 до 150 мг в день, более предпочтительно менее чем 100 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 36 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
сульфизоксазол: примерно от 20 до 800 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального введения,
рилузол: примерно от 0,01 до 100 мг в день, предпочтительно менее чем 75 мг в день, более предпочтительно менее чем 50 мг в день, даже более предпочтительно менее чем 25 мг в день, в частности, такие дозировки пригодны для перорального
введения.
Следует понимать, что количество фактически вводимого лекарственного средства будет определяться врачом в свете соответствующих обстоятельств, включая состояние или состояния, которые необходимо лечить, определенную вводимую композицию, возраст, вес и ответ отдельного пациента, тяжесть симптомов у пациента и выбранный способ введения. Кроме того, на используемую дозировку может влиять фармакогеномная информация о конкретном пациенте (действие генотипа на фармакокинетику, фармакодинамику и профиль эффективности терапевтического средства). Поэтому, указанные выше пределы дозировок предоставляются с целью обеспечения общего руководства и поддержки представленной в описании идеи, и не предназначаются для ограничения рамок изобретения.
Хотя активные лекарственные средства настоящего изобретения могут вводиться раздельными дозами, например, два или три раза в день, предпочтительной является одна ежедневная доза каждого лекарственного средства в комбинации, при этом одна ежедневная доза всех лекарственных средств в одной фармацевтической композиции (стандартная лекарственная форма) является наиболее предпочтительной. Термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически отдельным единицам (таким как капсулы, таблетки или заполненные цилиндры шприцов), пригодным в качестве однократных дозировок для человека, причем каждая единица содержит предопределенное количество активного средства или средств, вычисленное с целью получения желательного терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем.
Введение может осуществляться от одного до нескольких раз в день, в течение от нескольких дней до нескольких лет и даже в течение всей жизни пациента. Постоянное или, по меньшей мере, периодически повторяющееся длительное введение будет рекомендоваться в большинстве случаев.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления комбинации изобретения используются в сочетании с рилузолом, при этом все лекарственные средства вводят перорально. При использовании такого протокола рилузол предпочтительно вводится систематически, например, ежедневно, более предпочтительно в ежедневной дозировке 0,01 - 100 мг в день, даже более предпочтительно в ежедневной дозировке 0,1 - 100 мг в день, наиболее предпочтительно в пределах 0,1 - 50 мг в день, а другие лекарственные средства в указанных выше дозировках.
Лекарственные средства могут вводиться одновременно, т.е. приблизительно в одно и то же время, хотя необязательно точно в то же самое время или за счет
использования той же самой композиции. В частности, рилузол может заключаться в состав отдельно от других лекарственных средств, при этом все лекарственные средства пациент принимает приблизительно в одно и то же время дня, чтобы обеспечить их присутствие и действие в комбинации в организме. Также может быть установлен терапевтический протокол, когда рилузол вводится по очереди с комбинацией, содержащей, по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида (например, в один день вводится рилузол, на следующий день указанная комбинация и так далее). Следует отметить, что различные протоколы могут быть отрегулированы или установлены врачом, чтобы обеспечить наиболее эффективную для каждого пациента комбинированную терапию изобретения.
Следующие примеры предоставляются с целью иллюстрации, а не с целью ограничения.
Примеры
Защитное действие лекарственных комбинаций на моделях ALS.
Комбинированное лечение согласно настоящему изобретению тестировали in vitro, на клетках коры головного мозга крысы, на модели совместной нервно-мышечной культуры и на мышиной модели ALS in vivo. Протоколы и результаты представлены в этом разделе.
Все эксперименты на животных были проведены согласно рекомендациям Национального института здравоохранения (NIH) по уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены Национальным комитетом по использованию экспериментальных животных.
1. Защитный эффект от токсичности глутамата на первичных культурах нейронов.
Токсичность глутамата вовлечена в патогенез ALS. В этих экспериментах соединения-кандидаты были проверены в отношении их способности предотвращать или уменьшать токсические эффекты глутамата на нейроны. Лекарственные средства сначала проверили по отдельности, а затем исследовали их комбинированное действие.
Получение нейронов
Эффективность лекарственных комбинаций изобретения сначала оценивали на первичных кортикальных нейронах.
Кортикальные нейроны крыс культивировали, как описано Singer et al. (38). Коротко, беременных самок крыс (15-дневная беременность) забивали смещением шейных позвонков (Rats Wistar) и извлекали из матки плоды. Кору головного мозга
извлекали и помещали в охлажденную до 0° среду Leibovitz (L15), содержащую 2% пенициллина 10000 U/мл и стрептомицина 10 мг/мл и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Кору головного мозга диссоциировали трипсином в течение 30 минут при 37°С (0.05%). Реакцию останавливали добавлением среды Игла, модифицированной по способу Дульбекко (DMEM), содержащей ДНКазу1 II степени чистоты и 10% эмбриональной бычьей сывороткой (FCS). Затем клетки механически диссоциировали 3 серийными пассажами при помощи пипетки 10 мл и центрифугировали при 515 х g в течение 10 мин при +4°С. Супернатант отбросили, а клеточный осадок ресуспендировали в определенной культуральной среде, состоящей из Neurobasal с добавлением В27 (2%), L-глутамина (0,2 мМ), 2% раствора PS и 10 нг/мл BDNF. Живые клетки подсчитывали, используя тест вытеснения трепанового синего, на цитометре Neubauer. Клетки высевали при плотности 30000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты (лунки были предварительно покрыты поли-L-лизином (10 мкг/мл)) и культивировали при +37°С во влажной атмосфере (95%)/С02 (5%).
Исследование токсичности глутамата
Нейропротективное действие соединений оценивали с помощью количественного анализа сети нейритов (иммуноокрашивание нейрофиламентов (NF)), который специфически обнаруживает глутаматергические нейроны.
Через 12 дней культивирования нейронов в культуральной среде растворяли лекарственные средства комбинаций-кандидатов (+0,1% DMSO). Затем комбинации-кандидаты предварительно инкубировали с нейронами в течение 1 часа до повреждения глутаматом. После одного часа инкубации добавляли глутамат на 20 минут, до окончательной концентрации 40 мкМ, в присутствии комбинаций-кандидатов, для того чтобы избежать дополнительного разбавления лекарственных средств. В конце инкубации среду заменяли средой с комбинацией-кандидатом, но без глутамата. Культуру фиксировали через 4 часа после повреждения глутаматом, МК801 (дизоцилпингидроген малеат, 77086-22-7 - 20 мкМ) использовали в качестве положительного контроля.
После пермеабилизации сапонином (Sigma) клетки в течение 2 часов блокировали PBS, содержащим 10% козьей сыворотки, затем клетки инкубировали с мышиными моноклональными первичными антителами против нейрофиламентов (NF, Sigma). Это антитело было выявлено с помощью Alexa Fluor 488 козьего анти-мышь IgG.
Ядра клеток метили флуоресцентным маркером (раствор Хекста, SIGMA), и определяли количество нейритов. Использовали шесть лунок на точку для оценки выживаемости нейронов в 3 различных культурах.
Результаты
Все проверенные лекарственные комбинации демонстрировали защитньгй эффект от токсичности глутамата в отношении кортикальных нейронов. Результаты показаны в таблице 2 ниже.
Как проиллюстрировано на фигурах 1, 3 и 4, комбинации изобретения явно защищают нейроны от токсичности глутамата при описанных выше условиях эксперимента. Стоит отметить, что эффективная защита отмечается при использовании таких концентраций лекарственных средств, которые при раздельном применении лекарственных средств не демонстрируют значительного защитного эффекта или показывают более низкий защитный эффект.
Действительно, как проиллюстрировано на фигуре 3, комбинация мексилетин -цинакальцет эффективно защищает нейроны от токсичности глутамата, тогда как лекарственные средства по отдельности не обеспечивают защиту . Комбинация баклофен -акампросат (фигура 1) оказывает защитное действие от токсичности глутамата в отношении нейронов. Комбинация баклофена и акампросата вызывает улучшение более, чем на 200%, по сравнению с акампросатом в отдельности и более, чем на 47%, по сравнению с использованием баклофена в отдельности.
2. Защитный эффект от токсичности глутамата на первичных совместных нервно-мышечных культурах
Первичные совместные культуры нервных и мышечных клеток
Мышечную ткань человека получали в соответствии с ранее описанным методом из биопсийного материала здорового субъекта (39). Мышечные клетки получали из диссоциированных клеток (20000 клеток на лунку), высеянных в покрытые желатином 0,1% 48-луночные планшеты и выращенных в среде для пролиферации, состоящей из смеси 75% среды MEM со средой 25% Ml99 с добавлением глутамина 2 мМ, бычьего инсулина 10 мкг/мл, человеческого рекомбинантного эпидермапьного фактора роста 10 нг/мл, человеческого рекомбинантного основного фактора роста фибробластов 2 нг/мл,
эмбриональной бычьей сыворотки 10% (FCS) и 2% пенициллина 10000 U/мл и стрептомицина (10 мг/мл).
Сразу после слияния сателлитных клеток, целые поперечные срезы спинного мозга эмбрионов крыс Wistar 13-дневного возраста вместе с 4 прикрепленными дорсальными корешковыми ганглиями (DRG) помещали на мышечный монослой (один эксплантат на лунку, в центр поверхности). DRG необходимо достичь хорошей степени иннервации. Иннервированные культуры поддерживали в смешанной среде (75% MEM и 25% Ml99) с добавлением глутамина 2 мМ, 5% FCS, бычьего инсулина 5 мкг/мл и 2% пенициллина 10000 U/мл и стрептомицина (10 мг/мл).
Было видно, что через 24 часа совместного культивирования из эксплантатов спинного мозга прорастают нейриты. Они приходят в контакт с мышечными трубочками и вызывают первое сокращение примерно через 8 дней. Вскоре после этого иннервированные мышечные волокна, расположенные вблизи эксплантатов спинного мозга, практически постоянно сокращаются. Иннервированные волокна морфологически и пространственно отличаются от неиннервированных волокон, и их легко можно различить.
Повреждение глутаматом
На 27 день совместные культуры инкубировали с соединениями-кандидатами, их комбинациями или рилузолом за один час до интоксикации глутаматом (60 мкМ) в течение 20 мин. Затем, совместные культуры отмывали и добавляли соединения-кандидаты, их комбинации и/или рилузол на дополнительные 48 часов. После этого времени инкубации нефиксированные со-культуры инкубировали с а-бунгаротоксином в сочетании с Alexa 488 при концентрации 500 нмоль/л в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем, совместные культуры фиксировали PFA в течение 20 минут при комнатной температуре. После пермеабилизации 0,1% сапонином со-культуры инкубировали с мышиными моноклональными антителами к нейрофиламентам (NF, разведение 1/400).
Эти антитела обнаруживали с помощью Alexa Fluor 568 козьего анти-мышь IgG (молекулярный зонд, 1/400 разведение), ядра нейронов метили флуоресцентным маркером (раствор Хекста, 1 мкг/мл в том же растворе).
Конечными критериями оценки являются (1) общая длина нейрита, (2) число моторных единиц, (3) общая площадь моторных единиц, которые являются показателями выживаемости и функционирования мотонейронов.
В каждом состоянии делают изображения 2 х 10 на лунку, используя InCell AnalyzerTM 1000 (GE Healthcare) при увеличении 20х. Все изображения делаются в
одинаковых условиях.
Повреждение глутаматом с предварительной обработкой рилузолом На 23 день (т.е. 4 дня предварительной обработки) совместные культуры инкубировали с рилузолом. Через 4 дня (т.е. на день 27) за один час до добавления глутамата добавили лекарственные комбинации, а затем добавили глутамат (60 мкМ) на 20 минут. Затем совместные культуры обработали для проведения иммунофлуоресцентного анализа, как указано выше. Результаты
Значительная защита отмечается по всем трем критериям оценки при использовании в комбинации лекарственных средств в таких концентрациях, которые при использовании средств по отдельности эффекта не дают. Исследованные комбинации лекарств перечислены в таблице 3 и проиллюстрированы на фигуре 2. Это неожиданное синергическое действие позволяет использовать лекарственные средства в настолько низких дозах, что можно избежать возможных побочных эффектов.
Лекарственные комбинации изобретения увеличивают защитный эффект рилузола в отношении токсичности глутамата на модели in vitro по трем критериям оценки (таблица 4).
Изобретатели обнаружили, что комбинации изобретения усиливают защитное действие рилузола на модели совместной нервно/мышечной культуры. Действительно, добавление к рилузолу комбинации баклофен-акампросат при лечении подвергшихся интоксикации глутаматом клеток в результате приводит к ул> гчшению защиты клеток. Более того, как показано на фигуре 5, изобретатели установили концентрации лекарственных средств, при которых этот эффект является особенно значительным (акампросат 0,14 нМ и баклофен 36 нМ).
Как проиллюстрировано на фигуре 6, лекарственная комбинация изобретения действует синергически с рилузолом в отношении защиты нервно-мышечных соединений от токсичности глутамата. Особенно следует отметить, что добавление смеси баклофен-акампросат в едва эффективных дозах (36 нМ и 0,14 нМ баклофена и акампросата, соответственно) в культуральную среду клеток, обработанных рилузолом, дает в результате почти двойной (или даже более) защитный эффект рилузола от повреждения глутаматом.
Таким образом, композиции изобретения являются эффективными, в частности, в качестве вспомогательной терапии при других видах лечения ALS (в частности, рилузолом) или возможных видах лечения ALS.
3. Комбинированное лечение является эффективным на мышиной модели
ALS
В этой серии экспериментов, чтобы имитировать ALS, были выбраны трансгенные гетерозиготные мыши B6SJL-Tg(SODl-G93A)lGur/J и мыши WT (штамм 1012, JAX). У больных мышей наблюдалась экспрессия SOD1-G93A трансгена, созданного с использованием мутантного человеческого SOD1 гена (замена одной аминокислоты -глицина на аланин - в кодоне 93) под воздействием его эндогенного человеческого SOD1 промотора.
Животных содержали при стандартной температуре (22°С±1°С) в условиях регулируемого освещения (день от 7 am до 8 рт) со свободным доступом к пище и воде ad libitum. Начиная с возраста 100 дней все мыши G93A SOD1 получали влажную порошкообразную пищу (стандартная лабораторная диета, смешанная с водой для получения пасты), причем питательный гель помещали в клетки. Кроме того, водяные фонтанчики были оснащены расширениями на уровне пола для обеспечения легкого доступа.
Введение лекарственного препарата
Мышам вводили дозы разведенных в разбавителе лекарственных средств-кандидатов, начиная с 60ого дня после рождения до достижения 150-дневного возраста.
Разбавленные (водой) растворы лекарственных средств-кандидатов готовили при комнатной температуре непосредственно перед введением. И рилузол и лекарственные комбинации вводили per os. В качестве разбавителя использовали циклодекстрин в окончательной концентрации 5%, разведенный в воде при комнатной температуре из стокового раствора (циклодекстрин 20%). Обработку лекарственными комбинациями (10 мл/кг) и разбавителем начинали в 60-дневном возрасте и продолжали до достижения мышами 150-дневного возраста. Лекарственные комбинации вводили р.о. BID между 8-11 am и 4-7 рт.
Постановка эксперимента на мышах
При подготовке групп для исследования (т.е. групп, обрабатываемых тестируемым или контрольным веществом) трансгенных мышей случайным образом делили на группы так, что целые пометы мышей никогда не попадали в одну тестируемую группу, что давало возможность избежать 'эффектов одного помета' на окончательные результаты. Кроме того, в группах было уравновешено соотношение самцов и самок.
Самок мышей размещали в группах максимум по 5, а самцов содержали по одному. Мышам давали возможность привыкнуть к экспериментальной комнате, по меньшей мере, в течение одного часа до начала любого эксперимента. Мышей переносили в экспериментальные комнаты в их домашних клетках.
Вес тела
Показано, что потеря веса хорошо коррелирует с развитием болезни и легко подсчитывается в баллах вместе со стадиями болезни. Мышей взвешивали один раз в неделю в один и тот же день недели (понедельник) в возрасте 60-91 дней и три раза в неделю (понедельник-среда-пятница) после достижения возраста 91 день (13 недель).
Клиническая оценка в баллах
В оригинальной статье (40), описывающей получение SOD1-G93A мышей, сообщается о раннем начале болезни (-100 дней), быстром ухудшении и достижении конечной стадии у пораженных мышей в среднем в пределах 40 дней (обычная выживаемость 130-150 дней). Поэтому, мышей тщательно обследовали, используя клинический подсчет баллов, как описано ниже, один раз в неделю (понедельник) до 91-дневного возраста и три раза в неделю (понедельник-среда-пятница) после достижения 91-дневного возраста.
Ранними клиническими признаками являются тремор и дрожание конечностей, когда мышей ненадолго поднимают в воздух за хвост. Система клинического подсчета в баллах - это шкала от 1 до 5; 1 - конечная точка (эвтаназия), а 5 - это здоровое состояние с небольшими признаками или без признаков начала болезни. Животных оценивали в
баллах, аккуратно поднимая их за основание хвоста и регистрируя наличие тремора, скованности и их способность вытягивать конечности. Система подсчета баллов:
• 5 = здоровое животное
• 4-5 = в основном здоровое, минимальный тремор, очень активное животное, вытягивание всех конечностей
• 4 = видимый минимальный тремор, вытягивание всех конечностей, очень активное животное
• 3-4 = тремор, некоторая минимальная скованность, очень активное животное
• 3 = тремор, скованность конечностей, может быть минимальный паралич, активное животное
• 2-3 = тремор, частичный паралич, скованность, вытягивание конечностей затруднено, активное животное
• 2- паралич, в некоторой степени активное животное
• 1-2 = паралич задних конечностей, нет вытягивания конечностей, эвтаназия может быть осуществлена в зависимости от активности животного и его способности выпрямиться в течение 30 сек
• 1 = конечная точка, животное не способно выпрямиться.
Начало болезни регистрировали, когда счет очков достигал стадии болезни 4. Тестирование поведения
Все поведенческие тесты прекращали в возрасте 20 недель, когда приблизительно 70% мышей в группе с введением разбавителя TG умерло. Остальные мыши после достижения этого возраста слишком слабы для проведения двигательного тестирования, поэтому у этих мышей определяли только вес тела, стадию болезни и вели подсчет очков выживаемости.
Тест "открытое поле"
Тест "открытое поле" проводили до начала дозирования (исходный уровень) и примерно на 90 день (в возрасте 13 недель) и ПО день (в возрасте 16 недель). Мышей, родившихся в пределах 2-4 дней, объединяли для проведения теста "открытое поле". Камеры для регистрации активности (Med Associates Inc, St Albans, VT; 27 x 27 x 20,3 см) были снабжены РЖ-лучами. Мышей помещали в центр камеры и регистрировали их поведение в течение 10 минут. Регистрировали дистанцию перемещения, количество вертикальных вставаний на задние лапы и скорость передвижения.
Тест "вращающийся стержень"
Тест "вращающийся стержень" проводили до начала дозирования (исходный уровень) и примерно на 90 день (в возрасте 13 недель) и ПО день (в возрасте 16 недель). Мышей, родившихся в пределах 2-4 дней, объединяли для проведения теста "открытое поле". Однодневная сессия включала "обучающую пробу" в течение 5 минут при 4 RPM на стержне (AccuScan Instruments, Columbus, США). Через час животных тестировали в 3 следующих друг за другом пробах с ускорением в течение 6 минут с изменением скорости от 0 до 40 RPM в течение 360 секунд и интервалами между испытаниями, по меньшей мере, 30 минут. Регистрировали задержку до падения со стержня. Мышей, удержавшихся на стержне дольше 360 секунд, устраняли, а их время засчитывали как 360 секунд.
Результаты
Комбинированная терапия является эффективной на модели ALS in vivo.
Наблюдается улучшение состояния у больных животных, которых лечили лекарственными комбинациями изобретения. А именно, лекарственные комбинации изобретения эффективно улучшают клинический показатель этих животных в течение разных стадий болезни (таблица 5), а также выполнение приведенных выше поведенческих тестов (таблица 6).
Композиции изобретения также эффективно улучшают общий клинический показатель и течение болезни у животных, леченых рилузолом (таблица 7).
Ссылки
1. Camu W, Khoris J, Moulard B, Salachas F, Briolotti V, Rouleau GA, Meininger V,
Genetics of familial ALS and consequences for diagnosis. French ALS Research Group. J
Neurol Sci. 1999; 165 Suppl l(S21-26)
2. Mitchell JD, Borasio GD, Amyotrophic lateral sclerosis. Lancet 2007;
369(9578):2031-41.
3. Phukan J, Pender NP, Hardiman O, Cognitive impairment in amyotrophic lateral sclerosis. Lancet Neurol. 2007; 6(11):994-1003.
4. Hammad M, Silva A, Glass J, Sladky JT, Benatar M,Clinical, electrophysiologic, and pathologic evidence for sensory abnormalities in ALS. Neurology.2007; 69(24):2236-42.
5. Yoshida S, Kihira T, Yase Y, Etiology of Kii ALS/PDC, featuring a mineral hypothesis. Rinsho Shinkeigaku. 2007; 47(ll):970-3.
6. Waring SC, Esteban-Santillan C, Reed DM, Craig UK, Labarthe DR, Petersen RC, Kurland LT, Incidence of amyotrophic lateral sclerosis and of the parkinsonism-dementia complex of Guam, 1950-1989. Neuroepidemiology. 2004; 23(4): 192-200.
7. Sapp PC, Rosen DR, Hosier BA, Esteban J, McKenna-Yasek D, O'Regan JP, Horvitz HR, Brown RH Jr, Identification of three novel mutations in the gene for Cu/Zn superoxide dismutase in patients with familial amyotrophic lateral sclerosis. Neuromuscul Disord. 1995; 5(5):353-7.
8. Hentati A, Ouahchi K, Pericak-Vance MA, Nijhawan D, Ahmad A, Yang Y, Rimmler J, Hung W, Schlotter B, Ahmed A, Ben Hamida M, Hentati F, Siddique T, Linkage of a commoner form of recessive amyotrophic lateral sclerosis to chromosome 15ql5-q22 markers. Neurogenetics. 1998; 2(l):55-60.
9. Ruddy DM, Parton MJ, Al-Chalabi A, Lewis CM, Vance C, Smith BN, Leigh PN, Powell JF, Siddique T, Meyjes EP, Baas F, de Jong V, Shaw CE, Two families with familial amyotrophic lateral sclerosis are linked to a novel locus on chromosome 16q. Am J Hum Genet. 2003; 73(2):390-6.
10. Pasinelli P, Brown RH, Molecular biology of amyotrophic lateral sclerosis: insights from genetics. Nat Rev Neurosci. 2006; 7(9):710-23.
11. Gurney ME, Transgenic-mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. N Engl J Med. 1994; 331(25):1721-2.
12. Deng HX, Shi Y, Furukawa Y, Zhai H, Fu R, Liu E, Gorrie GH, Khan MS, Hung WY, Bigio EH, Lukas T, Dal Canto MC, O'Halloran TV, Siddique T, Conversion to the amyotrophic lateral sclerosis phenotype is associated with intermolecular linked insoluble aggregates of SOD1 in mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103(18):7142-7.
10.
13. Cai H, Lin X, Xie С, Laird FM, Lai C, Wen H, Chiang HC, Shim H, Farah MH, Hoke A, Price DL, Wong PC, Loss of ALS2 function is insufficient to trigger motor neuron degeneration in knock-out mice but predisposes neurons to oxidative stress. J Neurosci. 2005; 25(33):7567-74.
14. Comi GP, Bordoni A, Salani S, Franceschina L, Sciacco M, Prelle A, Fortunato F, Zeviani M, Napoli L, Bresolin N, Moggio M, Ausenda CD, Taanman JW, Scarlato G, Cytochrome с oxidase subunit I microdeletion in a patient with motor neuron disease. Ann Neurol. 1998; 43(l):110-6.
15. Borthwick GM, Taylor RW, Walls TJ, Tonska K, Taylor GA, Shaw PJ, Ince PG, Turnbull DM, Motor neuron disease in a patient with a mitochondrial tRNAIle mutation. Ann Neurol. 2006; 59(3):570-4.
16. Lambrechts D, Storkebaum E, Morimoto M, Del-Favero J, Desmet F, Marklund SL, Wyns S, Thijs V, Andersson J, van Marion I, Al-Chalabi A, Bornes S, Musson R, Hansen V, Beckman L, Adolfsson R, Pall HS, Prats H, Vermeire S, Rutgeerts P, Katayama S, Awata T, Leigh N, Lang-Lazdunski L, Dewerchin M, Shaw C, Moons L, Vlietinck R, Morrison KE, Robberecht W, Van Broeckhoven C, Collen D, Andersen PM, Carmeliet P, VEGF is a modifier of amyotrophic lateral sclerosis in mice and humans and protects motoneurons against ischemic death. Nat Genet. 2003; 34(4):383-94.
17. Bigio EH, Lipton AM, White CL 3rd, Dickson DW, Hirano A.Frontotemporal and motor neurone degeneration with neurofilament inclusion bodies: additional evidence for overlap between FTD and ALS. Neuropathol Appl Neurobiol. 2003 Jun;29(3):239-53.
18. Lacomblez L, Bensimon G, Leigh PN, Guillet P, Meininger V.Dose-ranging study of рилузол in amyotrophic lateral sclerosis. Lancet 1996;347:1425-1431.
19. Ettmayer P, Amidon GL, Clement B, Testa B, Lessons learned from marketed and investigational prodrugs. J Med Chem, 2004.47(10): p. 2393-404.
20. Beaumont K, Webster R, Gardner I, Dack К Design of ester prodrugs to enhance oral absorption of poorly permeable compounds: challenges to the discovery scientist. Curr Drug Metab, 2003. 4(6): p. 461-85.
21. Yang CY, Dantzig AH, and Pidgeon C, Intestinal peptide transport systems and oral drug availability. Pharm Res. 1999.16(9): p. 1331-43.
22. Steffansen, В., Nielsen CU, Brodin B, Eriksson AH, Andersen R, Frokjaer S, Intestinal solute carriers: an overview of trends and strategies for improving oral drug absorption. Eur J Pharm Sci, 2004. 21(1): p. 3-16.
23. Heimbach T, Oh DM, Li LY, Rodriguez-Hornedo N, Garcia G, Fleisher D, Enzyme-mediated precipitation of parent drugs from their phosphate prodrugs. Int J Pharm,
19.
2003. 261(1-2): p. 81-92.
24. Stella , BORCHARDT R, HAGEMAN M, OLIYAI R, MAAG H, TILLEY J, Prodrugs: Challenges and Rewards. Vol. Vol. 1-2. 2007, New York: AAPS Press and Springer.
25. Wermuth CG, Designing prodrugs and bioprecursors, in The Practice of Medicinal Chemistry, Hardbound, Editor. 2003.
26. Pezron I, Mitra AK, Duwuri S, Tirucherai GS, Пролекарство strategies in nasal drug delivery. Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2002. 12(3): pp. 331-340(10).
27. Stella, V.J., Prodrugs as therapeutics Expert Opinion on Therapeutic Patents,
2004. 14(3): p. pp. 277-280(4).
28. Higuchi T, Stella VJ, Prodrugs As Novel Drug Delivery Systems. ACS Symposium Series., ed. A.C. Society. 1975, Washington, DC.
29. Roche EB, Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs. 1977, Washington, DC American Pharmaceutical Association.
30. Stella VJ, Nti-Addae KW, Prodrugs strategies to overcome poor water solubility. Adv Drug Deliv Rev, 2007. 59(7): p. 677-94.
31. Lai R, Sukbuntherng J, Tai EH, Upadhyay S, Yao F, Warren MS, Luo W, Bu L, Nguyen S, Zamora J, Peng G, Dias T, Bao Y, Ludwikow M, Phan T, Scheuerman RA, Yan H, Gao M, Wu QQ, Annamalai T, Raillard SP, Roller K, Gallop MA, Cundy КС, Агбаклофен placarbil, a novel R-baclofen prodrug: improved absorption, distribution, metabolism, and elimination properties compared with R- baclofen. J Pharmacol Exp Ther, 2009. 330(3): p. 91121.
32. Xu F, Peng G, Phan T, Dilip U, Chen JL, Chernov-Rogan T, Zhang X, Grindstaff K, Annamalai T, Roller K, Gallop MA, Wustrow DJ, Discovery of a novel potent GABA(B) receptor agonist. Bioorg Med Chem Lett, 2011. 21(21): p. 6582-5.
33. Hanafi R, Mosad S, Abouzid K, Niess R, Spahn-Langguth H., Баклофен ester and carbamate prodrug candidates: a simultaneous chromatographic assay, resolution optimized with DryLab. J Pharm Biomed Anal, 2011. 56(3):569-76.
34. Leach AR, Gillet VJ, An Introduction to Chemomformatics. 2007: Springer.
35. Rahman SA, Bashton M, Holliday GL, Schrader R, Thornton JM, Small Molecule Subgraph Detector (SMSD) toolkit. J Cheminform, 2009. 1(1): p. 12.
36. Wishart DS, Knox C, Guo AC, Cheng D, Shrivastava S, Tzur D, Gautam B, Hassanali M, DrugBank: a knowledgebase for drugs, drug actions and drug targets. Nucleic Acids Res, 2008. 36(Database issue): p. D901-6.
37. Stahl, H. and CG. Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use. 2 ed. 2011: Wiley-VCH.
28.
38. Singer С A, Figueroa-Masot XA, Batchelor RH, and Dorsa DMMitogen-activated protein kinase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. J. Neuroscience, 1999.19(7):2455-2463.
39. Braun S, Croizatb B, Lagrangec MC, Wartera JM, Poindron P. Neurotrophins increase motoneurons' ability to innervate skeletal muscle fibers in rat spinal cord-human muscle cocultures. Volume 136, Issues 1-2, March 1996, Pages 17-23.
40. Gurney M, Pu H, Chiu A, Dal Canto M, Polchow C, Alexander D, Caliendo J, Hentati A, Kwon Y, Deng H, Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 1994 Jun 17;264(5166): 1772-5.
28.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция для использования при лечении ALS или родственного заболевания, содержащая, по меньшей мере, два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или их композиции с замедленным высвобождением.
2. Композиция для применения по п. 1, содержащая, по меньшей мере, одну из следующих лекарственных комбинаций:
баклофен и акампросат, баклофен и акампросат и торасемид, мексилетин и цинакальцет, торасемид и баклофен, баклофен и цинакальцет или торасемид и сульфизоксазол.
3. Композиция для применения по п. 1 или 2, дополнительно содержащая рилузол, или его соль, пролекарство, производное любой химической чистоты или композицию с замедленным высвобождением.
4. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов,
дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
5. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов, в которой соединения заключены в состав или вводятся вместе, отдельно или последовательно.
6. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов, согласно которому указанная композиция вводится субъекту многократно.
7. Композиция для применения по любому из пунктов 3-6, согласно которому рилузол вводится в дозировке от 0,1 до 50 мг в день.
8. Композиция для применения по любому из пунктов 1-7, согласно которому акампросат, в случае присутствия, вводится в дозировке менее чем 50 мг в день, более предпочтительно менее чем 10 мг в день.
9. Композиция для применения по любому из пунктов 1-8, согласно которому баклофен, в случае присутствия, вводится в дозировке менее чем 30 мг в день.
10. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов, согласно которому указанная композиция вводится перорально.
11. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов, согласно которому комбинацию, по меньшей мере, из двух лекарственных средств, выбранных из
5.
группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, вводят перорально и многократно через день при чередовании с рилузолом.
12. Композиция для применения по любому из предшествующих пунктов, в которой соединения включаются в состав вместе.
13. Рилузол или его соль, пролекарство, производное любой химической чистоты или их композиция с замедленным высвобождением для использования в комбинации с баклофеном или его солью, пролекарством, производным любой химической чистоты или их композицией с замедленным высвобождением и в дополвмтельной комбинации с соединением, выбранным из акампросата, цинакальцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или его соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или их композиции с замедленным высвобождением, для лечения ALS путем совместного, раздельного или последовательного введения нуждающемуся в этом субъекту.
12.
12.
Q. О
II II
Э" о
ц, а 200
180
160-]
140
120
100
4-°
о ш
Б Ф
| 200-1
I: 180-
| 140-
О 120-
| 100-
§ 200 о. 180
1 140-пз
| 1205 100
Фиг. 2
контроль сульфизоксазол торасемид сульфизоксазол
¦норасемид
Фиг. 4
х с; 3 Я о. !=•
g о
о *
со --О S
ё i
140-, 130 120 11010090 80 70 60 50J
150
110100 90 80 70 60 5QJ
0 к" 140 ё § 130 ? ? 120
1 о
lib
Фиг. 5
RIL(5|iM)
50 п
рилузол
BCL+ACP+ рилузол
BCL+ACP + рилузол
Фиг. 6
1/5
2/5
2/5
2/5
2/5
3/5
4/5
4/5
4/5
4/5
5/5
5/5
5/5
5/5
5/5
