[RU]

В заявке описаны фармацевтические препараты, прежде всего предназначенные для внутривенного введения, которые содержат {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту в комбинации по крайней мере с одним вспомогательным веществом, выбранным из циклодекстринов, лизина и аргинина, способы их получения, а также их применение для лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего их применения в качестве противовирусных средств, прежде всего против цитомегаловирусов.

(57) Реферат / Формула:

В заявке описаны фармацевтические препараты, прежде всего предназначенные для внутривенного введения, которые содержат {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту в комбинации по крайней мере с одним вспомогательным веществом, выбранным из циклодекстринов, лизина и аргинина, способы их получения, а также их применение для лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего их применения в качестве противовирусных средств, прежде всего против цитомегаловирусов.

---

121270
15 Заявка №201400963
Заявитель АИКУРИС ГМБХ УНД КО. КГ, DE
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИЗВОДНОЕ
20 ДИГИДРОХИНАЗОЛИНА С ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
В настоящем изобретении предлагается фармацевтическая композиция, которая содержит {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту или ее
25 соль, сольват или сольват ее соли.
Кроме того в настоящем изобретении предлагаются способы получения и применения композиции в способах лечения и/или профилактики вирусных инфекций, прежде всего применение для получения лекарственных средств, предназначенных для применения при лечении инфекций, опосредованных
30 цитомегаловирусом человека (HCMV) или другим представителем группы Herpes viridae.
{8-Фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота описана,
например, в заявке W0 2004/096778, которая включена в настоящее описание в полном объеме в качестве ссылки, в которой заявителями было установлено, что указанная кислота является перспективным агентом с противовирусной активностью, прежде всего для лечения инфекций, опосредованных 5 цитомегаловирусом человека. Однако в ходе разработки заявители столкнулись с проблемами, связанными с растворимостью и стабильностью указанного соединения, прежде всего наблюдались трудности при получении стабильных составов, предназначенных для внутривенного введения, или твердых легкорастворимых композиций, предназначенных для получения растворов,
10 пригодных для внутривенного введения.
Таким образом объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, предназначенная прежде всего для внутривенного введения, которая содержит {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
15 дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, и характеризуется долговременной
стабильностью, которую можно хранить, и которая кроме того характеризуется в значительной степени физиологически пригодным уровнем рН.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, которую можно перерабатывать простыми и надежными методами
20 для получения фармацевтических композиций для внутривенного введения,
которые содержат {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, и которые также остаются стабильными в течение приемлемого периода времени, например, более 24 ч.
25 Термин "стабильность", использованный в данном контексте, обозначает не
только стабильность компонентов фармацевтической композиции, но и стабильность раствора самого по себе. Композиция по настоящему изобретению должна прежде всего обладать стабильностью в отношении осаждения компонентов.
30 Термин "стабильность", использованный в данном контексте, обозначает,
что в диапазоне от 2°С до 8°С или при 25°С, или при 40°С минимальное содержание {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты в
фармацевтических композициях по настоящему изобретению составляет > 90% и прежде всего > 95% в течение по крайней мере двух, предпочтительно по крайней мере трех, более предпочтительно по крайней мере шести недель по данным анализа указанных жидких фармацевтических композиций одним из 5 методов 1-3 ЖХВР. Согласно настоящему изобретению указанная стабильность жидких фармацевтических композиций является достаточной.
Кроме того термин "стабильность" обозначает, что после разбавления или растворения композиции до конечной концентрации 0,8-10 мг/мл для вливания, при 2-8°С, минимальное содержание {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-
10 1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-
ил}уксусной кислоты согласно настоящему изобретению составляет 90%, предпочтительно по крайней мере 95%, при хранении в течение по крайней мере четырех часов, предпочтительно в течение по крайней мере шести часов, более предпочтительно в течение по крайней мере 24 ч, причем после разбавления или
15 растворения указанные жидкие фармацевтические композиции анализируют с использованием одного из методов 1-3 ЖХВР. Согласно настоящему изобретению стабильность жидких фармацевтических композиций после разбавления или растворения является достаточной.
Неожиданно было установлено, что фармацевтические композиции, прежде
20 всего композиции, используемые для внутривенного введения, которые содержат {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, а также воду, можно стабилизировать за счет добавления по крайней мере одного эксципиента, выбранного из циклодекстринов, лизина и аргинина. Кроме того
25 было установлено, что указанные композиции можно лиофилизировать, чтобы получить стабильную твердую фармацевтическую композицию, которую можно растворить для получения инъекционной формы простым способом, например, при добавлении воды, в результате чего в свою очередь можно получить стабильную фармацевтическую композицию, например, для внутривенного
30 введения.
Таким образом объектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, прежде всего предназначенные для внутривенного введения, которые включают следующие компоненты:
а) {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота или ее
соль, ее сольват или сольват ее соли,
б) по крайней мере один эксципиент, выбранный из циклодекстринов,
5 лизина и аргинина, и
в) вода.
Кроме того объектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, которые получают при лиофилизации фармацевтической композиции, указанной выше.
10 Следует понимать, что термин "соли", использованный в данном контексте,
включает физиологически приемлемые соли {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил} уксусной кислоты. Термин "физиологически приемлемые соли {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-
15 5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты"
включает кислотно-аддитивные соли неорганических кислот, угольных кислот и сульфоновых кислот, например, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой
20 кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.
Термин "физиологически приемлемые соли {8-фтор-2-[4-(3-
25 метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты" включает также соли "обычных" оснований предпочтительно, например, такие как соли щелочных металлов (например, соли натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и магния), соли аммония, полученные из аммиака или
30 органических аминов, содержащих 1-16 атомов углерода, предпочтительно, например, таких как моноэтиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, 2-амино-2-метил-1,3 -пропандиол,
прокаин, дибензиламин, N-метилморфолин, этилендиамин и N-метилпиперидин, а также соли щелочных аминокислот.
Термин "сольваты", использованный в данном контексте, обозначает такие
формы {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
5 (трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты, которые
представляют собой координационные комплексы, образующиеся при
взаимодействии молекул указанной кислоты с молекулами растворителя. Термин
"гидраты" обозначает специфическую форму сольватов, т.е. координационный
комплекс соединения с водой.
10 Специалисту в данной области техники представляется очевидным, что {8-
фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота содержит стереоцентр в дигидрохиназолиновом цикле в положении С4. Согласно настоящему изобретению наиболее предпочтительным является соединение, в 15 котором указанный атом углерода существует в S-конфигурации.
Следует понимать, что согласно настоящему изобретению термин "циклодекстрин" включает любой модифицированный или немодифицированный циклодекстрин. В этом случае, так как различные циклодекстрины характеризуются различными размерами цикла, 20 предпочтительными являются (3-циклодекстрины и прежде всего
модифицированные Р-циклодекстрины, например, такие как гидроксиалкил-(3-циклодекстрины, например, гидроксиметил-Р-циклодекстрин, гидроксиэтил-Р-циклодекстрин или гидроксипропил-Р-циклодекстрин, алкилгидроксиалкил-Р-циклодекстрины, например, метилгидроксипропил-Р-циклодекстрины или 25 этилгидроксипропилциклодекстрины или сульфоалкилциклодекстрины.
Согласно настоящему изобретению водой, используемой в работе, является вода, которую обычно используют для инъекций.
Согласно настоящему изобретению выражения "содержит" или "содержащий" используются для обозначения не исчерпывающего 30 перечисления, и наряду с указанными в явном виде компонентами или стадиями не исключают любые другие компоненты или стадии.
Согласно настоящему изобретению выражения "состоит" или "состоящий из" используются для обозначения исчерпывающего перечисления, и наряду с
указанными в явном виде компонентами или стадиями исключают любые другие компоненты или стадии.
Согласно настоящему изобретению выражения "в основном состоят из" или "в основном состоящий из" используются для обозначения частично 5 исчерпывающего перечисления, и обозначает способы или композиции, которые помимо указанных компонентов или стадий, могут содержать только такие другие компоненты и стадии, которые в значительной степени не изменяют характеристики композиции или способа по настоящему изобретению, или которые присутствуют в таких количествах, которые в значительной степени не
10 изменяют характеристики композиции или способа по настоящему изобретению. Согласно настоящему изобретению, если при описании композиции или способа используются выражения "содержит" или "содержащий", то они означают композиции или способы в явном виде, которые состоят из указанных компонентов или стадий или в основном состоят из указанных компонентов или
15 стадий.
В рамках настоящего изобретения предпочтительно, если фармацевтическая композиция по изобретению дополнительно содержит по крайней мере один буфер, который предпочтительно выбирают из фосфатных буферов, трис-буферов и цитратных буферов.
20 Добавление буфера прежде всего всегда обеспечивает получение
композиции с физиологическим значением рН. Предпочтительными являются буферы, указанные выше, прежде всего в связи с тем, что они характеризуются хорошей переносимостью.
Кроме того согласно настоящему изобретению предпочтительно, если
25 фармацевтическая композиция по изобретению содержит по крайней мере один сахар, и его предпочтительно выбирают из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, лактозы, мальтозы, трегалозы, сорбита и маннита.
Было установлено, что фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно также стабилизировать в значительной степени при
30 добавлении сахара, и прежде всего одного из Сахаров, указанных выше в явном виде. Кроме того было установлено, что добавление сахара может упростить получение твердой композиции при лиофилизации, а также повторного растворения указанной твердой композиции для получения фармацевтической
композиции, предназначенной прежде всего для внутривенного введения. Кроме того добавление по крайней мере одного сахара используется для контроля осмоляльности раствора и подавления любого проявления гемолиза.
Согласно настоящему изобретению предпочтительно, если содержание {85 фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли в фармацевтической композиции составляет от 1 мг до 100 мг, предпочтительно от 2 мг до 50 мг, более предпочтительно от 2 мг до 25 мг, и прежде всего от 5 мг до 20 мг чистого активного соединения на 1 10 мл композиции.
Было установлено, что для улучшения стабильности раствора, а также простоты хранения предпочтительно, чтобы {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота присутствовала в количествах в 15 указанных выше диапазонах.
Согласно настоящему изобретению предпочтительно, чтобы значение рН композиции находилось в диапазоне от 7,5 до 8,5.
Указанный выше диапазон значений рН является предпочтительным, так как соответствуют диапазону физиологических значений рН. Кроме того было 20 установлено, что растворимость фармацевтической композиции по изобретению значительно улучшается в слабощелочном диапазоне, т.е. в диапазоне значений рН выше 7,0, по сравнению с рН 7,0 или менее.
Согласно настоящему изобретению предпочтительно, чтобы по крайней мере один эксципиент присутствовал в фармацевтической композиции в 25 количестве от 1 экв. до 5 экв., предпочтительно от 2 экв. до 5 экв., более
предпочтительно от 2,5 экв. до 4,5 экв. по отношению к содержанию {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты.
Кроме того согласно настоящему изобретению предпочтительно, чтобы 30 указанная композиция содержала от 1 экв. до 10 экв., предпочтительно от 2 экв. до 7 экв. и прежде всего от 2,5 экв. до 5 экв. циклодекстрина, а также от 0 до 2,0 экв., предпочтительно от 0,5 экв. до 1,5 экв. и прежде всего от 0,75 экв. до 0,9 экв. NaOH по отношению к содержанию {8-фтор-2-[4-(3
метоксифенил)пиперазин-1 -ил] -3 - [2-метокси-5 -(трифторметил)фенил] -3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты.
Следует понимать, что термин "эквиваленты", использованный в данном
контексте, обозначает "молярные эквиваленты".
5 Было установлено, что добавление эксципиента в меньшем количестве, по
сравнению с указанным нижним пределом указанных выше диапазонов, приводит к недостаточному уровню стабилизации раствора. Добавление эксципиента в большем количестве, по сравнению с указанным верхним пределом уже не оказывает положительного действия на стабилизацию
10 композиции. Кроме того существуют опасения, что добавление большого
количества эксципиента будет также приводить к взаимодействию эксципиента с активным соединением, и таким образом, может привести к снижению эффективности композиции.
Согласно настоящему изобретению наиболее предпочтительной является
15 фармацевтическая композиция, которая содержит следующие компоненты в расчете на 100 мл композиции:
а) 0,25-2,0 г, предпочтительно 0,5-1,25 г {8-фтор-2-[4-(3-
метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее
20 соли,
б) 0,25-2,5 г, предпочтительно 0,5 г-1,5 г аргинина,
в) 1,5-9,5 г, предпочтительно 2,0-4,75 г глюкозы,
г) 0,5-4,0 г, предпочтительно 0,75-2,0 г ЫаНгРОд, и
д) вода,
25 при этом указанная композиция характеризуется значением рН в диапазоне
от 7,5 до 8,5, предпочтительно от 7,7 до 8,0.
Кроме того согласно настоящему изобретению наиболее предпочтительной
является фармацевтическая композиция, которая содержит следующие
компоненты в расчете на 100 мл композиции:
30 а) 0,5-2,5 г, предпочтительно 1,0-2,0 г {8-фтор-2-[4-(3-
метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее
соли,
б) 10,0-30,0 г, предпочтительно 12,5-22,5 г НР-|3-циклодекстрина,
в) 0,0-350 мг, предпочтительно 75-225 мг, прежде всего 100-125 мг NaOH, и
г) вода,
при этом указанная композиция характеризуется значением рН в диапазоне 5 от 7,5 до 8,5.
В последнем случае при получении композиции предпочтительно использовать NaOH в виде приблизительно 0,1 М водного раствора.
Было установлено, что полученные указанным способом композиции характеризуются наиболее предпочтительными преимуществами в отношении 10 клинической эффективности, а также стабильности.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению в основном
получают следующим образом: сначала получают водный раствор эксципиента,
а затем к указанному раствору добавляют {8-фтор-2-[4-(3-
метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
15 дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, затем при необходимости добавляют
другие добавки, такие как по крайней мере один сахар и/или по крайней мере
один буфер. После добавления всех компонентов рН фармацевтической
композиции доводят до требуемого уровня, при этом особое внимание уделяют
тому, чтобы при доведении рН от щелочного значения до физиологического
20 значения при добавлении кислоты или буфера, доведение рН происходило
медленно и осторожно, чтобы исключить любое осаждение {8-фтор-2-[4-(3-
метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты в результате избыточного локального
снижения уровня рН.
25 Кроме того на первой стадии можно получить все индивидуальные
растворы, при этом один раствор содержит эксципиент и {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, а другой раствор содержит другие эксципиенты, например, такие как по крайней мере один сахар и/или по крайней 30 мере один буфер, а на следующей стадии рН растворов доводят до требуемого уровня, и затем растворы смешивают друг с другом.
Кроме того возможен вариант, когда {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4
дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту растворяют по крайней мере частично в водном щелочном растворе, например, в растворе гидроксида щелочного металла, предпочтительно в растворе NaOH, а затем добавляют эксципиент, и при необходимости в раствор также добавляют другие 5 компоненты и при необходимости доводят значение рН раствора до требуемого уровня.
Кроме того для получения твердой фармацевтической композиции по изобретению растворы, полученные способами, описанными выше, можно лиофилизировать.
10 Таким образом объектом настоящего изобретения является также способ
получения фармацевтической композиции по изобретению, который включает следующие стадии:
A) растворение по крайней мере одного эксципиента в воде,
Б) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-15 метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли в раствор, полученный на стадии А),
B) при необходимости добавление по крайней мере одного сахара и/или по крайней мере буфера,
Г) доведение рН до требуемого значения для получения фармацевтической 20 композиции, и
Д) стерилизация раствора, полученного на стадии Г), фильтрованием и расфасовка в пригодные контейнеры,
Е) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на
стадии Д), нагреванием.
25 Объектом настоящего изобретения является также способ получения
фармацевтической композиции по изобретению, который включает следующие стадии:
I.) растворение по крайней мере одного эксципиента в части воды, И.) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-30 метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли в раствор, полученный на стадии I.), III.) при необходимости доведение рН раствора, полученного на стадии П.), до требуемого значения для получения первого раствора,
- и -
IV. ) растворение по крайней мере одного сахара и/или буфера в части воды,
V. ) при необходимости доведение рН раствора, полученного на стадии IV.), до требуемого значения для получения второго раствора,
VI. ) смешивание первого и второго раствора для получения
5 фармацевтической композиции и
VII. ) стерилизация раствора, полученного на стадии VI.), фильтрованием и расфасовка в пригодные контейнеры,
VIII. ) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на стадии VII.), нагреванием.
10 Объектом настоящего изобретения является также способ получения
фармацевтической композиции по изобретению, который включает следующие стадии:
а. ) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-
метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты
15 или ее соли, сольвата или сольвата ее соли в водный раствор NaOH,
предпочтительно в 0,1 М водный раствор NaOH для получения раствора или суспензии,
б. ) добавление воды в раствор или суспензию, полученную на стадии а.),
в. ) добавление циклодекстрина и NaCl в раствор или суспензию,
20 полученную на стадии б.),
г. ) стерилизация раствора, полученного на стадии в.), фильтрованием и
расфасовка в пригодные контейнеры,
д. ) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на
стадии г.), нагреванием.
25 Кроме того объектом настоящего изобретения является способ получения
твердой фармацевтической композиции, который заключается в том, что фармацевтическую композицию, полученную способами, описанными выше, лиофилизируют.
{8-Фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
30 (трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота или ее соли, сольваты и сольваты ее соли, которые используют для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению, являются
известными соединениями, и их можно получить способом, описанным, например, в заявке WO 2006/133822.
Указанные соединения получают прежде всего омылением сложного эфира соединения формулы (И)
в присутствие основания.
Соединение формулы (II) можно получить при взаимодействии соединения
в присутствие основания.
Соединение формулы (III) можно получить при взаимодействии соединения формулы (V)
(V),
с оксихлоридом фосфора, трихлоридом фосфора или пентахлоридом фосфора в присутствие основания.
Соединения формулы (V) можно получить при взаимодействии соединения формулы (VI)
(VI),
на первой стадии с метиловым эфиром акриловой кислоты в присутствие палладиевого катализатора и олеума, а на второй стадии с основанием.
Соединения формулы (IV) и (VI) в принципе известны специалисту в данной области техники, и могут быть получены стандартными способами, описанными в литературе.
Омыление сложного эфира соединения формулы (И), в результате которого получают {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту, происходит при взаимодействии соединения формулы (И) с основанием в инертном растворителе при нагревании от 18°С до температуры кипения растворителя, предпочтительно от 18°С до 50°С, более предпочтительно от 20°С до 30°С, при нормальном давлении, например, в течение 0,5-10 ч, предпочтительно в течение 1-5 ч.
В качестве оснований можно использовать, например, гидроксиды щелочных металлов, такие как гидроксид натрия, лития или калия, или карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат цезия, натрия или калия, или
алкоголяты, такие как метанолят натрия или калия, или этанолят натрия или калия, при этом основание может присутствовать в виде водного раствора.
В качестве инертных растворителей можно использовать, например, простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан, метил-шрет-бутиловый эфир 5 (МТВЕ), диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля или
диметиловый эфир диэтиленгликоля, спирты, такие как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол или т/?ет-бутанол, или воду, или смеси растворителей.
Предпочтительно использовать гидроксид натрия в воде и МТВЕ.
10 Синтез соединения формулы (II) из соединения формулы (III) и соединения
формулы (IV), в присутствие основания, проводят в инертном растворителе при
температуре в диапазоне от 40°С до tKHn. растворителя, предпочтительно при
1кип- растворителя при нормальном давлении, например, в течение 2-48 ч,
предпочтительно в течение 4-12 ч.
15 В качестве основания можно использовать, например, амины, такие как 1,8-
диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), 1-(3-метоксифенил)пиперазин или триэтиламин, или другие основания, такие как трет-бутилат калия.
В качестве инертных растворителей можно использовать, например, хлорбензол или простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан, диоксан, 20 диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля.
Предпочтительно использовать DBU в диоксане.
Превращение соединения формулы (V) в соединение формулы (III) проводят в ходе реакции соединения формулы (V) с оксихлоридом фосфора, трихлоридом фосфора или пентахлоридом фосфора, при этом оксихлорид 25 фосфора является предпочтительным, в присутствие основания в инертном растворителе при температуре в диапазоне от 40°С до tKHn. растворителя, предпочтительно при гкип. растворителя при нормальном давлении, например, в течение 1-48 ч, предпочтительно в течение 2-12 ч.
В качестве оснований можно использовать, например, амины, такие как 1,830 диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), пиридин или триэтиламин, или другие основания, такие как mpem-бутилат калия.
В качестве инертных растворителей можно использовать, например, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол или хлорбензол.
Предпочтительно использовать DBU в хлорбензоле.
Превращение соединения формулы (VI) в соединение формулы (V) проводят по последовательности реакций, в которой на первой стадии соединение формулы (VI) взаимодействует с метиловым эфиром акриловой 5 кислоты в присутствие палладиевого катализатора и олеума в растворителе, при температуре в диапазоне от 0°С до 40°С, предпочтительно при комнатной температуре, а на второй стадии при взаимодействии с основанием в инертном растворителе, при температуре в диапазоне от 40°С до tKHn. растворителя, предпочтительно при tKHtl. растворителя при нормальном давлении, например, в 10 течение 1-48 ч, предпочтительно в течение 2-12 ч.
В качестве палладиевого катализатора на первой стадии можно использовать, например, ацетат палладия (II), хлорид
бис(трифенилфосфин)палладия(П), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), хлорид бис(три(орто-толил)фосфин)палладия(П) или палладиевый катализатор,
15 полученный из бис(ацетонитрил)дихлорпалладия или ацетата палладия(П) и лиганда, например, такого как трис(орто-толил)фосфин, трифенилфосфин или дифенилфосфиноферроцен.
В качестве растворителей на первой стадии можно использовать, например, органические кислоты, такие как уксусная кислота или пропионовая кислота.
20 Предпочтительным катализатором является ацетат палладия(И).
В качестве оснований на второй стадии можно использовать, например, DBU, триэтиламин или диизопропилэтиламин.
В качестве инертного растворителя на второй стадии можно использовать, например, простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан, диоксан, диметиловый
25 эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, углеводороды, такие как бензол, ксилол или толуол, или другие растворители, такие как изобутиронитрил, ацетонитрил, ацетон, нитробензол, диметилформамид, диметилацетамид, диметилсульфоксид или N-метилпирролидон. Предпочтительно использовать DBU в ацетоне.
30 Более подробно получение {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-
3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты, используемой для получения фармацевтической композиции по настоящему изобретению, представлено ниже, например, на схеме синтеза 1.
Следует понимать, что указанная схема синтеза приводится в качестве примера и не ограничивает объем изобретения.
водн. - водный раствор
Как указано выше, {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту предпочтительно использовать в форме S-энантиомера. Указанный S-энантиомер можно получить по последовательности реакций, представленной ниже на схеме синтеза 2.
{8-Фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота, а также ее соли, сольваты и сольваты ее солей, которые входят в состав фармацевтической композиции, оказывают противовирусный эффект в отношении представителей
группы Herpes viridae (вирусы герпеса), прежде всего в отношении цитомегаловирусов (CMV), прежде всего в отношении цитомегаловируса человека (HCMV). Таким образом фармацевтические композиции по настоящему изобретению пригодны для применения в способах лечения и/или профилактики 5 заболеваний, прежде всего вирусных инфекционных заболеваний, прежде всего, опосредованных вирусами, описанными в данном контексте, и инфекционных заболеваний, вызванных ими. Следует понимать, что термин "вирусная инфекция" обозначает не только вирусные инфекционные заболевания, но и заболевание, опосредованное инфицированием вирусом.
10 Благодаря своим свойствам и характеристикам фармацевтические
композиции по изобретению можно использовать для получения лекарственных средств, пригодных для применения в способах профилактики и/или лечения заболеваний, прежде всего вирусных инфекций.
Ниже приведены типичные группы показаний к применению
15 фармацевтических композиций по изобретению:
1) лечение и профилактика инфекций HCMV у пациентов, страдающих от СПИД (ретинит, пневмония, желудочно-кишечные инфекции),
2) лечение и профилактика цитомегаловирусных инфекций костного мозга и у пациентов с трансплантированными органами, которые часто подвергаются
20 опасными для жизни пневмонии HCMV или энцефалиту, а также желудочно-кишечным и системным инфекциям HCMV,
3) лечение и профилактика инфекций HCMV у новорожденных и грудных детей,
4) лечение острой инфекции HCMV у беременных женщин,
25 5) лечение инфекции HCMV у пациентов с ослабленным иммунитетом,
страдающих от онкологического заболевания, проходящих курс противораковой терапии,
6) лечение HCMV-положительных пациентов, страдающих от рака, для снижения прогрессирования опухоли, опосредованного HCMV (см. статью J., 30 Cinatl и др., FEMS Microbiology Reviews, 28, 59-77 (2004)).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению предпочтительно использовать для получения лекарственных средств, которые пригодны для применения в способах профилактики и/или лечения инфекций,
опосредованных представителями Herpes viridae, прежде всего цитомегаловирусом, прежде всего цитомегаловирусом человека.
Благодаря своим фармакологическим свойствам и характеристикам
фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно использовать
5 в отдельности, а при необходимости также в комбинации с другими активными
веществами, прежде всего противовирусными препаратами, например, такими
как валганцикловир, ганцикловир, валацикловир, ацикловир, фоскарнет,
цидофовир и их производные, в способах лечения и/или профилактики вирусных
инфекций, прежде всего инфекций HCMV.
10 Еще одним объектом настоящего изобретения является применение
фармацевтических композиций по изобретению в способе лечения и/или
профилактики заболеваний, прежде всего вирусных инфекций, прежде всего
инфекционных заболеваний, опосредованных цитомегаловирусом человека
(HCMV) или другими вирусами представителями Herpes viridae.
15 Другим объектом настоящего изобретения является применение
фармацевтических композиций по изобретению в способе лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего заболеваний, описанных выше.
Еще одним объектом настоящего изобретения является применение фармацевтических композиций по изобретению для получения лекарственного 20 средства, предназначенного для применения в способах лечения и/или
профилактики заболеваний, прежде всего заболеваний, описанных выше.
Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего заболеваний, описанных выше, с использованием фармацевтических композиций по изобретению в 25 противовирусно эффективном количестве.
Термин "противовирусно эффективное количество" обозначает, что фармацевтические композиции по изобретению вводят в дозе по крайней мере 0,001 мг/кг.
В основном было установлено, что предпочтительно вводить 30 фармацевтические композиции таким образом, чтобы введенная доза включала от приблизительно 0,001 мг/кг до 10 мг/кг, предпочтительно от 0,01 мг/кг до 5 мг/кг {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5
(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (в расчете на массу тела).
Тем не менее, указанные количества могут быть при необходимости изменены, а именно в зависимости от массы тела, индивидуальной ответной 5 реакции субъекта на активное вещество, а также от продолжительности
применения и интервалов между введениями. Например, в некоторых случаях может оказаться достаточным введение меньшего количества, чем указанные выше минимальные пределы, в то время как в других случаях можно превысить указанные выше верхние пределы. При введении больших количеств 10 рекомендуется разделять их на несколько индивидуальных доз в течение дня.
Следует понимать, что примеры, описанные ниже, приводятся для более подробного ознакомления с изобретением, и не ограничивают его объем.
Если не указано иное, то проценты, представленные в следующих испытаниях и примерах, обозначают мас.%, мае. части и мае. доли, а 15 соотношение растворителей, степень разбавления и концентрации жидких растворов в каждом случае относятся к объему.
Список сокращений
ACN - ацетонитрил
API-ES-pos. - ионизация при атмосферном давлении, электроспрей, 20 положительные ионы (в МС)
API-ES-neg. - ионизация при атмосферном давлении, электроспрей, отрицательные ионы (в МС)
CI, NH3 - химическая ионизация (с аммиаком)
DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен
25 DMAP - 4-(диметиламино)пиридин
ДМСО - диметилсульфоксид
ESTD - внешний стандарт
ЖХВР - жидкостная хроматография высокого разрешения
МС - метод масс-спектроскопии
30 МТВЕ - метил-/я/?е/??-бутиловый эфир
ЯМР - ядерная магнитно-резонансная спектроскопия Rx - время удерживания (в ЖХВР)
Общие методы ЖХВР Метод 1 (ЖХВР)
Прибор: хроматограф HP 1050, оборудованный детектором с переменной длиной волны, колонка: Phenomenex Prodigy ODS (3) 100А, 150 мм x 3 мм, 3 5 мкм, элюент А: (1,0 г КН2РО4 + 1,0 мл Н3РО4У1 л воды, элюент Б: ацетонитрил, градиент: 0 мин 10% Б, 25 мин 80% Б, 35 мин 80% Б, скорость потока: 0,5 мл/мин, температура: 45°С, УФ-детекция: при 210 нм.
Метод 2 (ЖХВР)
Прибор: хроматограф HP 1050, оборудованный детектором с переменной 10 длиной волны, колонка: Chiral AD-H, 250 мм х 4,6 мм, 5 мкм, элюент А: н-
гептан + 0,2% диэтиламин, элюент Б: изопропанол + 0,2% диэтиламин, градиент: 0 мин 12,5% Б, 30 мин 12,5% Б, скорость потока: 1 мл/мин, температура: 25°С, УФ-детекция: при 250 нм.
Метод 3 (ЖХВР)
15 Прибор: хроматограф HP 1050, оборудованный детектором с переменной
длиной волны, колонка: Chiral AD-H, 250 мм х 4,6 мм, 5 мкм, 5 мкм, элюент А: н-гептан + 0,2% диэтиламин, элюент Б: изопропанол + 0,2% диэтиламин, градиент: 0 мин 25% Б, 15 мин 25% Б, скорость потока: 1 мл/мин, температура: 30°С, УФ-детекция: при 250 нм. 20 Примеры
А) Получение {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты Пример 1А
Н-(2-Фторфенил)-Н'-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]мочевина
2-Метокси-5-трифторметилфенилизоцианат (78 кг) расплавляли при приблизительно 35°С и растворяли в ацетонитриле (суммарный объем приблизительно 270 л), затем добавляли 2-фторанилин (39,9 кг) и промывали ацетонитрилом (приблизительно 25 л). Полученный прозрачный раствор
перемешивали в течение 4 ч при нагревании при ткип растворителя, а затем охлаждали приблизительно до 75°С. После достижения указанной температуры в раствор добавляли затравочные кристаллы требуемого конечного продукта (200 г), и дополнительно перемешивали в течение 15 мин, затем охлаждали до 0°С в 5 течение 3 ч. Полученный кристаллический продукт отделяли
центрифугированием, промывали холодным ацетонитрилом (дважды, используя приблизительно 13 л), и высушивали при 45°С в вакуум-сушильном шкафу, который продували азотом (приблизительно 3,5 ч), при этом получали N-(2-фторфенил)-№-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]мочевину в виде твердого 10 вещества (101,5 кг, выход 85,9% от теории).
'н ЯМР (300 МГц, de-ДМСО): 8 8,93 (s, 1Н), 8,84 (s, 1Н), 8,52 (d, 3J 2,3, 2Н), 7,55 (d, 2J 7,7, 1Н), 7,38-7,26 (m, 3H), 7,22 (d, 2J 8,5, 1H), 4,00 (s, 3H),
MC (API-ES-pos.): m/z = 409 [(M+H)+, 100%],
ЖХВР (метод 1): RT = 22,4 и 30,6 мин
15 Пример 2А
Метиловый эфир (27)-3-[3-фтор-2-({[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)фенил]акриловой кислоты
В первом реакторе в атмосфере азота растворяли Ы-(2-фторфенил)-Ы'-[2-20 метокси-5-(трифторметил)фенил]мочевину (51 кг) в уксусной кислоте
(приблизительно 430 л). В полученный раствор добавляли метилакрилат (20,1 кг), и полученную суспензию перемешивали до использования. Во второй реактор наливали уксусную кислоту (950 л), осторожно добавляли олеум (57 кг) и в полученной смеси растворяли ацетат палладия(П) (7 кг). Затем в течение 25 приблизительно 2 ч суспензию, полученную в первом реакторе, добавляли в смесь, содержащуюся во втором реакторе, реакционную смесь продували смесью, содержащей 96% азота и 4% кислорода, и полученную реакционную
смесь перемешивали в течение приблизительно 18 ч при комнатной температуре. Затем часть уксусной кислоты (приблизительно 900 л) отгоняли, к оставшейся реакционной смеси добавляли воду (приблизительно 500 л) в течение приблизительно 1 ч, и полученную суспензию перемешивали в течение 1 ч. 5 Полученные твердые частицы отделяли фильтрованием, один раз промывали смесью уксусной кислоты и воды (1:1) и дважды водой, полученный продукт высушивали при приблизительно 30 мбар и 50°С, при этом получали метиловый эфир (27)-3-[3-фтор-2-({[2-метокси-5-
(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)фенил]акриловой кислоты в виде 10 твердого вещества (44,8 кг, выход 65,0% от теории).
!Н ЯМР (300 МГц, (16-ДМСО): 5 9,16 (s, 1Н), 8,84 (s, 1Н), 8,45 (d, 1,7 Гц, 1Н), 7,73 (m, 2Н), 7,33 (m, ЗН), 7,22 (d, 8,6 Гц, 1Н), 6,70 (d, 16 Гц, 1Н), 3,99 (s, ЗН), 3,71 (s, ЗН),
МС (API-ES-pos.): m/z = 429,9 [(M+NH4)+], 412,9 [(М+Н)+],
15 ЖХВР: RT = 46,4 мин.
Прибор: хроматограф HP 1100, оборудованный детектором с переменной длиной волны, колонка: Phenomenex Prodigy ODS (3) 100А, 150 мм x 3 мм, 3 мкм, элюент А: (1,36 г КН2РО4 + 0,7 мл Н3РО4У1 л воды, элюент Б: ацетонитрил, градиент: 0 мин 20% Б, 40 мин 45% Б, 50 мин 80%) Б, 65 мин 80% 20 Б, скорость потока: 0,5 мл/мин, температура: 55°С; УФ-детекция: при 210 нм. Пример ЗА
Метиловый эфир (8-фтор-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты
25 Соединение, полученное в примере 2А (75 кг), суспендировали в ацетоне
(1600 л), и добавляли DBU (5,7 кг). Полученную суспензию нагревали при гкип. растворителя и перемешивали в течение 4 ч. Полученный раствор охлаждали до
температуры теплоносителя в рубашке (55°С) и фильтровали через кизельгур.
Часть растворителя (приблизительно 1125 л) отгоняли, а остаток охлаждали в
течение 2 ч до 0°С. Полученное твердое вещество отделяли
центрифугированием, дважды промывали холодным ацетоном (приблизительно
5 15 л), и высушивали (до постоянной массы) в течение ночи при 45°С при
пониженном давлении (систему продували азотом), при этом получали
метиловый эфир {8-фтор-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-2-оксо-1,2,3,4-
тетрагидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты в виде твердого вещества (58,3 кг,
выход 84,1% от теории).
10 ЖХВР (метод 1): RT = 19,4 мин.
Пример 4А
Соль (25,38)-2,3-бис[(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты и метилового эфира ((48)-8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил1-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (1:1) 15 Хлорирование/аминирование/кристаллизация
Раствор метилового эфира {8-фтор-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (пример ЗА, 129,2 кг) в хлорбензоле (800 л) нагревали до tKHn. растворителя и проводили
20 азеотропное высушивание. Затем добавляли оксихлорид фосфора (144 кг) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником (при гкип растворителя). Затем добавляли DBU (95 кг) и хлорбензол (45 л) и перемешивали в течение еще 9 ч при кипячении с обратным холодильником (при гкип растворителя). Реакционную смесь охлаждали до
25 комнатной температуры, продукт гидролизовали при добавлении воды,
разбавляли хлорбензолом (80 л), и нейтрализовали при добавлении водного раствора аммиака (25%). Фазы разделяли, органическую фазу промывали водой, и растворитель отгоняли. Полученный остаток растворяли в диоксане (170 л),
добавляли 3-метоксифенилпиперазин (66 кг), DBU (52 кг) и дополнительный объем диоксана (90 л), и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли этилацетат (1300 л), один раз промывали водой, три 5 раза 0,2н. НС1, один раз водным раствором NaCl, и растворитель отгоняли. Полученный остаток растворяли в этилацетате (800 л) и добавляли раствор (28,38)-2,3-бис[(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты (121 кг) в этилацетате (600 л). Полученную смесь перемешивали в течение приблизительно 60 мин при комнатной температуре, а затем добавляли затравку соли метилового эфира 10 ({(48)-8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (2S,3S)-2,3-бис[(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты и перемешивали в течение 3 сут при комнатной температуре, затем охлаждали до 0-5°С и перемешивали в течение еще 3 ч. Суспензию фильтровали, полученное твердое вещество 15 порциями снова промывали этилацетатом. При этом получали соль (в расчете на массу сухого вещества приблизительно 141 кг, выход приблизительно 46,2% от теории) в виде твердого вещества (в ходе трех стадий (хлорирование, аминирование и кристаллизация) по сравнению с рацематом).
!Н ЯМР (300 МГц, с1б-ДМСО): 5 7,90 (d, 2J 7,8, 4Н), 7,56 (d, 2J 8,3, 1Н), 7,40 20 (d, 2J 7,8, 4H), 7,28-7,05 (m, 4H), 6,91-6,86 (m, 2H), 6,45 (d, 2J 8,3, 1H), 6,39-6,36 (m, 2H), 5,82 (s, 2H), 4,94 (m, 1H), 4,03 (q, 2J 7,1, 2H), 3,83 (ушир. s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,47-3,36 (m, 8H и вода, 2H), 2,98-2,81 (m, 5H), 2,58-2,52 (m, 1H), 2,41 (s, 6H), 1,99 (s, 3H), 1,18 (t, 2J 7,2, 3H),
ЖХВР (метод 1): RT = 16,6 и 18,5 мин.
25 Пример 5А
Соль (28,38)-2,3-бис|"(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты и метилового эфира {(48)-8-фтор-2-Г4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-Г2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил) уксусной кислоты (1:1)
Перекристаллизация
30 Соль (28,38)-2,3-бис[(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты и метилового
эфира (8)-{(48)-8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (1:1, 141
кг в расчете на массу сухого вещества) суспендировали в этилацетате (1400 л) и растворяли при нагревании с обратным холодильником (77°С). Раствор фильтровали и медленно охлаждали до комнатной температуры, при этом наблюдалась самопроизвольная кристаллизация. Суспензию перемешивали в течение 16 ч при КТ, а затем охлаждали до 0-5°С и перемешивали в течение еще 3 ч. Суспензию фильтровали, полученное твердое вещество снова порциями промывали холодным этилацетатом. Кристаллы высушивали в течение 16 ч в вакууме при приблизительно 40°С, при этом получали соль в виде твердого вещества (131,2 кг, выход 93,0% от теории).
ЖХВР (метод 1): RT = 16,9 и 18,8 мин,
ЖХВР (метод 3): энантиомерный избыток 99,9%.
Пример 6А
(8)-{8-Фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота
Смесь соли (28,38)-2,3-бис[(4-метилбензоил)окси]янтарной кислоты и метилового эфира {(48)-8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (1:1, 30,8 кг), бикарбоната натрия (16,4 кг) и воды (315 л) смешивали с МТВЕ (160 л). Фазы разделяли и органическую фазу обрабатывали приблизительно 7% водным раствором бикарбоната натрия (35 л). Фазы разделяли и органическую фазу обрабатывали приблизительно 4% водным раствором гидроксида натрия (125 л). Реакционную смесь нагревали до tKHn растворителя, раствор упаривали досуха, а содержимое реактора перемешивали в течение еще 5 ч при 55-60°С. Затем реакционную смесь добавляли приблизительно при 22°С в смесь МТВЕ (160 л) и воды (65 л) и перемешивали. Фазы разделяли и органическую фазу
экстрагировали приблизительно 6% водным раствором хлорида натрия (30 л). Объединенные водные фазы смешивали с водой (25 л) и МТВЕ (160 л), значение рН доводили приблизительно до 6,5 при добавлении соляной кислоты (приблизительно 1н раствор). Органическую фазу отделяли, растворитель 5 упаривали досуха, а остаток растворяли в ацетоне (приблизительно 75 л). Растворитель заменяли на ацетон (6-кратная перегонка, каждый раз использовали приблизительно 130 л ацетона). Затем конечный продукт осаждали при добавлении воды, отделяли центрифугированием и высушивали в вакуум-сушильном шкафу, при этом получали (8)-{8-фтор-2-[4-(3-10 метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-(2-метокси-5-трифторметилфенил)-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусную кислоту в виде аморфного твердого вещества (16,5 кг, выход 96,4% от теории).
*Н ЯМР (300 МГц, с1б-ДМСО): 5 7,53 (d, 2J 8,4, 1Н), 7,41 (ушир. s, 1Н), 7,22 (d, 2J 8,5, 1H), 7,09-7,01 (m, 2H), 6,86 (m, 2H), 6,45 (dd, 2J 8,2, 3J 1,8, 1H), 6,3915 6,34 (m, 2H), 4,87 (t, 2J 7,3, 1H), 3,79 (ушир. s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,50-3,38 (m, 4H), 2,96-2,75 (m, 5H), 2,45-2,40 (m, 1H),
MC (API-ES-neg.): m/z = 571 [(M+H), 100%], ЖХВР (метод 1): RT = 15,1 мин,
ЖХВР (метод 2): энантиомерный избыток 99,8%, Pd (ICP): < 1 част./млн.
20 Б) Примеры получения фармацевтических композиций по настоящему
изобретению Пример 1
Получение фармацевтической композиции с использованием циклодекстрина
25 В трехгорлой колбе смешивали 30,03 г гидроксипропил-Р-циклодекстрина
НР5 (Kleptose НРВ, Roquette) с 68,365 г воды для инъекций, затем к полученной смеси добавляли 1 М раствор гидроксида натрия (6,6 г), добавляли соединение, полученное в примере 6А (5,005 г), и смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение 24 ч до образования прозрачного раствора. Раствор стерилизовали
30 фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и разливали в стерильных условиях в стерильные стеклянные контейнеры объемом 20 мл. Заполненные стеклянные контейнеры герметично укупоривали пробками для вливаний и обжимными крышками.
Получение первой фармацевтической композиции с использованием аргинина в качестве эксципиента
Для получения первого концентрированного раствора 262,38 мг L-аргинина 5 взвешивали в мерной колбе объемом 25 мл и растворяли приблизительно в 22 мл воды для инъекций. К полученному раствору аргинина добавляли 504,51 мг соединения, полученного в примере 6А, и смесь перемешивали в течение приблизительно 1 ч до получения прозрачного раствора. Затем объем раствора доводили до метки водой для инъекций.
10 Для получения второго концентрированного раствора 40,05 мг дигидрата
дигидрофосфата натрия взвешивали в мерной колбе объемом 50 мл и растворяли приблизительно в 48 мл воды для инъекций. Смесь перемешивали до получения прозрачного раствора, и объем раствора доводили до метки водой для инъекций. Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-
15 [2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (с концентрацией 10 мг/мл) смешивали 12,5 мл первого концентрированного раствора с 10 мл второго концентрированного раствора в мерной колбе объемом 25 мл, затем медленно и осторожно доводили рН раствора при добавлении 1 М НС1 (приблизительно 200 мкл). Затем объем
20 раствора доводили до метки вторым концентрированным раствором, при этом получали раствор с конечным значением рН 7,9.
Используя указанную методику, можно получить композиции с различными концентрациями {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной
25 кислоты, но только с использованием различных количеств первого
концентрированного раствора. Однако важно не допускать значительного изменения значения рН и прежде всего его смещения в кислотную область значений.
Полученные растворы стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 30 мкм) и разливали в стерильных условиях в стерильные контейнеры. Контейнеры герметично укупоривали пробками для вливаний и обжимными крышками.
Получение второй фармацевтической композиции с использованием аргинина в качестве эксципиента
Для получения первого концентрированного раствора 2,1 г L-аргинина 5 растворяли в 88,8 г воды для инъекций. К полученному раствору аргинина
добавляли 2 г соединения, полученного в примере 6А, и смесь перемешивали в течение приблизительно 1 ч до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 7,8 при добавлении по каплям 1 М НС1, при этом важно отметить, что НС1 необходимо добавлять медленно для исключения 10 осаждения соединения, полученного в примере 6А. Затем при необходимости объем раствора доводили до 100 мл.
Для получения второго концентрированного раствора 3,1 г дигидрата дигидрофосфата натрия и 8,4 г глюкозы взвешивали в соответствующем контейнере и растворяли приблизительно в 74,5 г воды для инъекций. Смесь 15 перемешивали до получения прозрачного раствора, и значение рН полученного раствора доводили до 7,8, используя 1 М NaOH. Затем при необходимости объем раствора доводили до 100 мл.
Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной 20 кислоты (с концентрацией 10 мг/мл) смешивали 50,5 г первого
концентрированного раствора с 53,0 г второго концентрированного раствора и перемешивали в течение 5 мин.
Используя указанную методику, можно получить композиции с различными концентрациями {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-25 [2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты, но только с использованием различных количеств первого концентрированного раствора.
Полученные растворы стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и разливали в стерильных условиях в стерильные контейнеры. Контейнеры 30 герметично укупоривали пробками для вливаний и обжимными крышками.
Получение третьей фармацевтической композиции с использованием аргинина в качестве эксципиента
Для получения первого концентрированного раствора 1,05 г L-аргинина и 1 5 г соединения, полученного в примере 6А, растворяли в мерной колбе объемом 100 мл приблизительно в 50,0 г воды для инъекций, и смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 7,8 при добавлении по каплям 0,1 М НС1 (приблизительно 43,5 мл), при этом важно отметить, что НС1 необходимо добавлять медленно для исключения 10 осаждения соединения, полученного в примере 6А. Затем при необходимости объем раствора доводили до 100 мл.
Для получения второго концентрированного раствора 1,56 г дигидрата дигидрофосфата натрия и 4,18 г глюкозы растворяли в мерной колбе объемом 100 мл приблизительно в 80,0 г воды для инъекций. Смесь перемешивали до 15 получения прозрачного раствора, и значение рН полученного раствора доводили до 7,8, используя 1 М NaOH (приблизительно 9,1 мл). Объем раствора доводили до 100 мл.
Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной 20 кислоты (с концентрацией 5 мг/мл) смешивали 50,24 г первого
концентрированного раствора с 51,35 г второго концентрированного раствора и перемешивали в течение 5 мин.
Используя указанную методику, можно получить композиции с различными концентрациями {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-25 [2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты, но только с использованием различных количеств первого концентрированного раствора.
Полученные растворы стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и разливали в стерильных условиях в стерильные контейнеры. Контейнеры 30 герметично укупоривали пробками для вливаний и обжимными крышками.
Получение четвертой фармацевтической композиции с использованием аргинина в качестве эксципиента
Для получения первого концентрированного раствора в мерной колбе 5 объемом 100 мл смешивали 2,11 г L-аргинина с 2,01 г соединения, полученного в примере 6А, и объем доводили до метки водой для инъекций, при этом значение рН указанного первого концентрированного раствора составляло 9,8.
Для получения второго концентрированного раствора 3,12 г дигидрата дигидрофосфата натрия, 8,35 г глюкозы и 0,50 г NaCl в мерной колбе объемом 10 100 мл растворяли приблизительно в 80,0 г воды для инъекций. Смесь
перемешивали до получения прозрачного раствора, и значение рН полученного раствора доводили до 6,5, используя 1 М NaOH (приблизительно 9,7 мл). Затем объем раствора доводили до 100 мл.
Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-15 [2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (с концентрацией 10 мг/мл) смешивали 50,50 г первого концентрированного раствора с 52,65 г второго концентрированного раствора и перемешивали в течение 5 мин.
Используя указанную методику, можно получить композиции с
20 различными концентрациями {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-
[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной
кислоты, но только с использованием различных количеств первого
концентрированного раствора, или при необходимости при доведении рН до
требуемого значения.
25 Полученные растворы стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22
мкм) и разливали в стерильных условиях в стерильные контейнеры. Контейнеры герметично укупоривали пробками для вливаний и обжимными крышками.
Пример 6
Получение фармацевтической композиции с использованием лизина в 30 качестве эксципиента
Для получения первого концентрированного раствора 217,24 мг лизина взвешивали в мерной колбе объемом 25 мл, и затем растворяли в 22 мл воды для инъекций. К полученному раствору добавляли 500,71 мг соединения,
полученного в примере 6А, и смесь перемешивали в течение приблизительно 1 ч до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 8, используя 1 М НС1 (приблизительно 460 мкл), при этом важно отметить, что следует избегать значительных локальных понижений рН, и 5 связанного с этим осаждения соединения, полученного в примере 6А. Затем объем раствора доводили до метки водой для инъекций, при этом получали первый концентрированный раствор.
Для получения второго концентрированного раствора 242,01 мг дигидрофосфата натрия взвешивали в мерной колбе объемом 50 мл, и затем
10 растворяли приблизительно в 48 мл воды для инъекций. Смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 8, используя 1 М NaOH (приблизительно 1,825 мкл), и объем раствора доводили до метки водой для инъекций.
Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)шшеразин-1-ил]-3-
15 [2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной
кислоты (с концентрацией 5 мг/мл) 6,5 мл первого концентрированного раствора выливали в мерную колбу объемом 25 мл и объем доводили до метки вторым концентрированным раствором, при этом получали раствор с конечным значением рН 8.
20 Фармацевтические композиции с различными концентрациями {8-фтор-2-
[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты можно получить, например, как описано выше в примере 2, но с использованием различных количеств первого концентрированного раствора.
25 Полученный раствор стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм)
и разливали в стерильных условиях в стерильные контейнеры. Пример 7
Получение твердой фармацевтической композиции, предназначенной для
получения раствора для вливания
30 Для получения первого концентрированного раствора 261,16 мг L-аргинина
взвешивали в мерной колбе объемом 25 мл и затем растворяли в 22 мл воды для инъекций. К полученному раствору добавляли 502,45 мг соединения, полученного в примере 6А, и смесь перемешивали в течение приблизительно 1 ч
до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора
доводили до 7,8, используя 1 М НС1 (приблизительно 660 мкл), важно отметить,
что необходимо избегать осаждения соединения, полученного в примере 6А.
Затем объем раствора доводили до метки водой для инъекций.
5 Для получения второго концентрированного раствора 240,05 мг
дигидрофосфата натрия взвешивали в мерной колбе объемом 50 мл и растворяли в приблизительно 48 мл воды для инъекций. Смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 7,8, используя 1 М NaOH (приблизительно 1,850 мкл), и объем раствора доводили до
10 метки водой для инъекций.
Для получения раствора {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты (с концентрацией 10 мг/мл) 12,5 мл первого концентрированного раствора выливали в мерную колбу объемом 25 мл и объем раствора доводили
15 до метки вторым концентрированным раствором, при этом получали раствор с конечным значением рН 7,8. В стеклянные контейнеры объемом 2 мл с пригодными крышками выливали прозрачный бесцветный раствор (по 1 мл в каждый контейнер), который лиофилизировали в сублимационной сушилке EPSILON 2-4 D (фирмы Martin Christ GmbH, Германия), при этом получали
20 бесцветный порошок, из которого можно получить раствор, пригодный для внутривенного введения, при добавлении 1 мл воды. Пример 8
Получение твердой фармацевтической композиции, предназначенной для получения раствора для вливания
25 Для получения первого концентрированного раствора смешивали 210,49 г
L-аргинина и 9665,8 г воды, смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. В полученный раствор при перемешивании небольшими порциями добавляли 199,23 г соединения, полученного в примере 6А, и смесь перемешивали по крайней мере в течение 30 мин до получения прозрачного
30 раствора.
Для получения второго концентрированного раствора 309,19 г дигидрата дигидрофосфата натрия, 827,47 г глюкозы, 49,55 г хлорида натрия и 7900,0 г воды для инъекций перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение
рН полученного раствора доводили до 6,55, используя 1 М NaOH, и в полученный раствор добавляли 1418,29 г воды для инъекций за вычетом количества раствора NaOH, которое использовали для доведения рН.
Для получения требуемого раствора в первый концентрированный раствор 5 при медленном перемешивании медленно небольшими порциями добавляли второй концентрированный раствор, и полученный раствор стерилизовали фильтрованием. В пригодные стерильные стеклянные контейнеры с пригодными крышками выливали прозрачный бесцветный раствор (по 15 мл в каждый контейнер) и лиофилизировали в сублимационной сушилке, при этом получали 10 бесцветный порошок.
Из полученного указанным способом лиофилизованного порошка можно
получить раствор, при добавлении, например, 30 мл воды для инъекций, а
полученный раствор затем при необходимости можно разбавлять для получения
растворов для вливания.
15 Пример 9
Получение второй фармацевтической композиции с использованием циклодекстрина
Взвешивали 2,00 г соединения, полученного в примере 6А, и добавляли 30 г 0,1 М раствора NaOH. Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин (при
20 этом нет необходимости полностью растворять соединение, полученное в
примере 6А). К полученной смеси добавляли 57,7 г воды для инъекций, а также 15,0 г гидроксипропил-р-циклодекстрина НР5 (Kleptose НРВ, Roquette) и 0,31 г NaCl, смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Раствор стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и разливали в стерильных
25 условиях в стерильные стеклянные контейнеры объемом 20 мл. Заполненные стеклянные контейнеры укупоривали пробками для инъекций и обжимными крышками. Полученные заполненные стеклянные контейнеры можно стерилизовать при нагревании. Пример 10
30 Получение третьей фармацевтической композиции с использованием
циклодекстрина
Взвешивали 2,00 г соединения, полученного в примере 6А, и добавляли 30 г 0,1 М раствора NaOH. Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин (при
этом нет необходимости полностью растворять соединение, полученное в
примере 6А). К полученной смеси добавляли 54,8 г воды для инъекций, а также
20,0 г гидроксипропил-Р-циклодекстрина НР5 (Kleptose НРВ, Roquette) и 0,205 г
NaCl, смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Раствор
5 стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и разливали в стерильных
условиях в стерильные стеклянные контейнеры объемом 20 мл. Заполненные
стеклянные контейнеры укупоривали пробками для инъекций и обжимными
крышками. Полученные заполненные стеклянные контейнеры можно
стерилизовать при нагревании.
10 Пример 11
Получение четвертой фармацевтической композиции с использованием циклодекстрина
Взвешивали 0,5 г соединения, полученного в примере 6А, и добавляли 8,75 г 0,1 М раствора NaOH. Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин (при 15 этом нет необходимости полностью растворять соединение, полученное в
примере 6А). К полученной смеси добавляли 12,45 г воды для инъекций и 5,0 г 2-О-метил-Р-циклодекстрина (Crysmeb, Roquette), смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 7,5, используя 1 М НС1, раствор стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 20 0,22 мкм) и выливали в стерильных условиях в стерильные стеклянные
контейнеры объемом 20 мл. Заполненные стеклянные контейнеры укупоривали пробками для инъекций и обжимными крышками. Полученные заполненные стеклянные контейнеры можно стерилизовать при нагревании.
Пример 12
25 Получение пятой фармацевтической композиции с использованием
циклодекстрина
Взвешивали 0,5 г соединения, полученного в примере 6А, и добавляли 13,125 г 0,1 М раствора NaOH. Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин (при этом нет необходимости полностью растворять соединение, 30 полученное в примере 6А). К полученной смеси добавляли 8,075 г воды для
инъекций и 5,0 г сульфоалкилового эфира Р-циклодекстрина (Captisol, фирмы CyDex Pharmaceuticals Inc.), и смесь перемешивали до получения прозрачного раствора. Значение рН полученного раствора доводили до 7,5, используя 1 М
НС1 (500 мкл), раствор стерилизовали фильтрованием (диаметр пор 0,22 мкм) и выливали в стерильных условиях в стерильные стеклянные контейнеры объемом 20 мл. Заполненные стеклянные контейнеры укупоривали пробками для инъекций и обжимными крышками. Полученные заполненные стеклянные 5 контейнеры можно стерилизовать при нагревании.
Перед розливом в контейнеры описанный раствор можно разбавить изотоническим раствором, например, изотоническим раствором для вливания.
В) Оценка стабильности
Для оценки стабильности растворы, полученные в примерах 1 -6, хранили в 10 течение двух, трех и шести недель при 2-8°С, 25°С, 40°С. Все растворы характеризовались приемлемой стабильностью.
Кроме того оценивали стабильность раствора, полученного при растворении состава, полученного в примере 7, при этом тестирование проводили в течение 24 ч при 2-8°С, 25°С и 40°С. Во всех условиях в течение 24 15 ч раствор оставался стабильным.
Г) Сравнительные испытания фиксированных фармацевтических композиций
Для демонстрации преимуществ твердых фармацевтических композиций, полученных в примере 7, по сравнению с другими твердыми композициями, 20 твердые вещества, содержащиеся в растворе, смешивали и проводили испытания для оценки их растворимости. Ни в одном из исследованных вариантов не удалось получить прозрачный раствор.
Д) Оценка физиологической эффективности
Влияние композиций по настоящему изобретению на репликацию HCMV 25 (цитомегаловирус человека) в условиях in vitro можно оценивать с
использованием противовирусных испытаний, описанных ниже: Е) Оценка по снижению флуоресценции HCMV При проведении испытаний использовали неразбавленный раствор,
полученный в примере 8. Композицию, полученную в примере 6А, использовали
30 в виде 50 мМ раствора в диметилсульфоксиде (ДМСО). В качестве композиций
(r)
для сравнения можно использовать коммерческие препараты ганцикловир , фоскарнет(r) или цидофовир(r). За день до проведения испытаний в лунки B2-G11 96-луночных планшетов (черные с прозрачным дном) добавляли 200 мкл
клеточной культуральной среды, содержащей фибробласты из крайней плоти
человека (NHDF клетки), при этом содержание клеток составляло 1,5 х 10 клеток на лунку. Для исключения краевых эффектов в лунки по краям каждого 96-луночного планшета добавляли по 200 мкл среды, которая не содержала 5 клеток. В день проведения испытаний клеточную культуральную среду из лунок B2-G11 каждого 96-луночного планшета удаляли в вакууме с использованием устройства для отсасывания и в лунки добавляли по 100 мкл вирусной суспензии (множественность заражения (MOI): 0,1-0,2). В качестве вируса использовали рекомбинантный штамм HCMV, который характеризуется тем, что в вирусный
10 геном была интегрирована кассета экспрессии зеленого флуоресцентного белка (GFP) (HCMV AD 169 RV-HG (см. статью Е. М. Borst, К. Wagner, A. Binz, В. Sodeik и М. Messerle, J. Virol., 82, 2065-2078 (2008)). После инкубации в течение 2 ч при 37°С в атмосфере 5% СОг, вирусный инокулят удаляли в вакууме с использованием устройства для отсасывания и во все лунки, за исключением
15 лунок столбца 3, добавляли по 200 мкл клеточной культуральной среды. В дальнейшем лунки столбца 2 не обрабатывали и использовали в качестве вирусного контроля. В каждую лунку столбца 3 добавляли по 300 мкл композиции или раствора исследуемого вещества (последний разбавляли клеточной культуральной средой), при этом анализ каждого образца повторяли
20 два раза. В лунках столбца 3 концентрация соответствующего противовирусного вещества в ~ 27 раз превышала концентрацию, предположительно соответствующую ЕС50. Готовили трехкратные серийные разведения (1:3) исследуемого вещества, содержащегося в лунках столбца 3 (8 концентраций) в 96-луночном планшете при переносе 100 мкл из каждого столбца в
25 соответствующий столбец, расположенный справа, где эти 100 мкл смешивались 200 мкл клеточной культуральной среды, которая было добавлена в эти лунки ранее. Таким образом анализировали три противовирусных вещества в двойном повторе. Планшеты инкубировали в течение 7 сут при 37°С в атмосфере 5%СОг-Затем все лунки планшета промывали 3 раза ФСБ (фосфатно-солевым буферным
30 раствором) и добавляли 50 мкл ФСБ. Интенсивность GFP в каждой лунке 96-луночного планшета определяли с использованием флуоресцентного сканера (сканер FluoBox, фирмы Bayer Technology Services GmbH, выбор параметров фильтра: зеленый флуоресцентный белок (GFP), возбуждение 480 нм,
испускание 520 нм). Полученные указанным способом значения можно использовать для определения ЕС50 веществ с противовирусной активностью в отношении HCMV.
ЕС50 (GFP-RA) = концентрация вещества в мкМ, при которой уровень 5 флуоресценции GFP снижается на 50% по сравнению с уровнем необработанного вирусного контроля.
Типичные значения эффективности в условиях in vitro для
фармацевтических композиций по настоящему изобретению приводятся ниже в
таблице 1
10 Таблица 1
Штамм вируса
Пример 6А ЕС50 [мкМ]
Пример 8 ЕС50 [мкМ]
Ганцикловир ЕС50 [мкМ]
AD169 RV-HG
0,0022 ± 0,0002
0,0026 ± 0,0005
2,5 ± 0,4
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Фармацевтическая композиция, прежде всего для внутривенного введения, которая содержит следующие компоненты:
5 а) {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-
(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота или ее соль, сольват или сольват ее соли,
б) по крайней мере один эксципиент, выбранный из циклодекстринов,
лизина и аргинина, и
10 с) вода.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, которая дополнительно содержит по крайней мере один буфер, предпочтительно выбранный из фосфатных буферов, трис-буферов и цитратных буферов.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или п. 2, которая дополнительно содержит по крайней мере один сахар, прежде всего выбранный из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, лактозы, мальтозы, трегалозы, сорбита и маннита.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-3, отличающаяся тем, что {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусная кислота или ее соль, сольват или сольват ее соли присутствует в количестве от 1 мг до
25 100 мг, предпочтительно от 2 мг до 50 мг, более предпочтительно от 2 мг до 25 мг, и прежде всего от 5 мг до 20 мг чистого активного соединения в 1 мл препарата.
5. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-4,
30 отличающаяся тем, что рН препарата находится диапазоне от 7,5 до 8,5.
6. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-5, отличающаяся тем, что по крайней мере один эксципиент присутствует в
6.
количестве от 1 экв. до 5 экв., предпочтительно от 2 экв. до 5 экв., и более предпочтительно от 2,5 экв. до 4,5 экв. по отношению к содержанию {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты.
7. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-6, отличающаяся тем, что 100 мл указанной композиции содержат следующие компоненты:
а) 0,2-2,0 г, предпочтительно 0,5-1,25 г {8-фтор-2-[4-(3-
10 метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли,
б) 2,5 г, предпочтительно 0,5-1,5 г аргинина,
в) 1,5-9,5 г, предпочтительно 2,0-4,75 г глюкозы,
15 г) 0,6-4,0 г, предпочтительно 0,75-2,0 г Nabi2P04 и
д) воду,
при этом рН указанной композиции находится в диапазоне от 7,5 до 8,5, предпочтительно от 7,7 до 8,0.
20 8. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-5,
отличающаяся тем, что эксципиент выбран из циклодекстринов, предпочтительно Р-циклодекстринов и модифицированных Р-циклодекстринов, прежде всего гидроксиалкил-Р-циклодекстринов, алкилгидроксиалкил-Р-циклодекстринов и сульфоалкилциклодекстринов.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что указанный препарат содержит от 1 экв. до 10 экв., предпочтительно от 2 экв. до 7 экв., и прежде всего от 2,5 экв. до 5 экв. циклодекстрина, а также от 0 до 2,0 экв., предпочтительно от 0,5 экв. до 1,5 экв., и прежде всего от 0,75 экв. до 0,9 30 экв. NaOH по отношению к количеству {8-фтор-2-[4-(3-
метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты.
10. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-5 или пунктов 8 или 9, отличающаяся тем, что 100 мл указанной композиции содержит следующие компоненты:
а) 0,5-2,5 г, предпочтительно 1,0-2,0 г {8-фтор-2-[4-(3-
5 метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-
дигидрохиназолин-4-ил} уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли,
б) 10,0-30,0 г, предпочтительно 12,5 г-22,5 г НР-Р-циклодекстрина,
в) 0,0-350 мг, предпочтительно 75-225 мг, прежде всего 100-125 MrNaOH, и
10 г) воду,
при этом рН указанного препарата находится в диапазоне от 7,5 до 8,5.
11. Твердая фармацевтическая композиция, полученная при лиофилизации фармацевтического препарата по любому из пунктов 1-10.
12. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-7, который включает следующие стадии:
A) растворение по крайней мере одного эксципиента в воде,
Б) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-20 метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты ее соли, ее сольвата или сольвата ее соли в раствор, полученный на стадии А),
B) при необходимости добавление по крайней мере одного сахара и/или по крайней мере одного буфера,
Г) доведение рН до требуемого значения для получения фармацевтической 25 композиции, и
Д) стерилизация раствора, полученного на стадии Г), фильтрованием и розлив в пригодные контейнеры,
Е) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на стадии Д), при нагревании.
13. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-7, который включает следующие стадии:
I.) растворение по крайней мере одного эксципиента в части воды,
П.) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты или ее соли, сольвата или сольвата ее соли в раствор, полученный на стадии I.),
III. ) при необходимости доведение рН раствора, полученного на стадии И.), до требуемого значения для получения первого раствора,
IV. ) растворение по крайней мере одного сахара и/или буфера в части воды,
V. ) при необходимости доведение рН раствора, полученного на стадии IV.), до требуемого значения для получения второго раствора,
VI. ) смешивание первого и второго растворов для получения фармацевтической композиции, и
VII. ) стерилизация раствора, полученного на стадии VI.), фильтрованием и розлив в пригодные контейнеры,
VIII. ) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на
стадии VII.), при нагревании.
14. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-5 или 8-10, который включает следующие стадии:
а. ) добавление {8-фтор-2-[4-(3-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-3-[2-
метокси-5-(трифторметил)фенил]-3,4-дигидрохиназолин-4-ил}уксусной кислоты
или ее соли, ее сольвата или сольват ее соли в водный раствор NaOH,
предпочтительно в водный 0,1 М раствор NaOH для получения раствора или
суспензии,
б. ) добавление воды в раствор или суспензию, полученные на стадии а.),
в. ) добавление циклодекстрина и NaCl в раствор или суспензию,
полученные на стадии б.),
г. ) стерилизация раствора, полученного на стадии в.), фильтрованием и
розлив в пригодные контейнеры,
д. ) при необходимости конечная стерилизация раствора, полученного на
стадии г.), при нагревании.
15. Способ получения твердой фармацевтической композиции по п. 11, который включает получение фармацевтической композиции способом по любому из пунктов 12-14, и последующую лиофилизацию полученной
15.
фармацевтической композиция, с получением твердой фармацевтической композиции.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пунктов 1-11, для 5 применения в способе лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего вирусных инфекций, предпочтительно инфекций, опосредованных цитомегаловирусом человека (HCMV), или инфекций, опосредованных другим представителем группы Herpes viridae.
10 17. Применение фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-11
в способе лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего вирусных инфекций, предпочтительно инфекций, опосредованных цитомегаловирусом человека (HCMV), или инфекций, опосредованных другим представителем группы Herpes viridae.
18. Применение фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-11 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики заболеваний, прежде всего вирусных инфекций, предпочтительно инфекций, опосредованных цитомегаловирусом человека (HCMV), или
20 инфекций, опосредованных другим представителем группы Herpes viridae.
19. Способ лечения вирусных инфекций, предпочтительно инфекций, опосредованных цитомегаловирусом человека (HCMV), или инфекций, опосредованных другим представителем группы Herpes viridae, у человека и
25 животных, который заключается в том, что человеку или животному,
нуждающемуся в таком лечении, вводят фармацевтическую композицию по любому из пунктов 1-11 или фармацевтическую композицию по любому из пунктов 12-15.
- 2 -
- 2 -
- 3 -
- 6 -
- 6 -
- 10 -
- 13 -
- 13 -
-16 -
- 15 -
- 18 -
- 18 -
- 20 -
- 19 -
- 22 -
- 22 -
- 27 -
Пример 2
- 27 -
Пример 2
- 28 -
Пример 3
- 28 -
Пример 3
- 29 -
Пример 4
- 29 -
Пример 4
- 30 -
Пример 5
- 30 -
Пример 5
- 31 -
- 31 -