[**]

Настоящее изобретение обеспечивает жидкие вирусные составы, пригодные для стабилизации и хранения вирусов, и способы получения указанных составов. Жидкие вирусные составы, описанные здесь, включают вирус (например, очищенный вирус), невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель. Указанные составы можно использовать, например, для сохранения инфекционности или иммуногенности вирусов в течение периода хранения.

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение обеспечивает жидкие вирусные составы, пригодные для стабилизации и хранения вирусов, и способы получения указанных составов. Жидкие вирусные составы, описанные здесь, включают вирус (например, очищенный вирус), невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель. Указанные составы можно использовать, например, для сохранения инфекционности или иммуногенности вирусов в течение периода хранения.

---

Евразийское (21) 201390810 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.09.30
(22) Дата подачи заявки
2011.12.02
(51) Int. Cl.
A61K39/15 (2006.01) A61K31/70 (2006.01) A61K48/00 (2006.01) A61K 9/08 (2006.01) A61P 31/12 (2006.01)
(54) ЖИДКИЕ ВИРУСНЫЕ СОСТАВЫ
(31) 61/419,032
(32) 2010.12.02
(33) US
(86) PCT/US2011/063040
(87) WO 2012/075379 2012.06.07
(88) 2012.08.16
(71) Заявитель:
ОНКОЛИТИКС БАЙОТЕК ИНК. (CA)
(72) Изобретатель:
Коффи Мэттью С. (US), Серл Сара (CA), Павлив Лео (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Настоящее изобретение обеспечивает жидкие вирусные составы, пригодные для стабилизации и хранения вирусов, и способы получения указанных составов. Жидкие вирусные составы, описанные здесь, включают вирус (например, очищенный вирус), невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель. Указанные составы можно использовать, например, для сохранения инфекционности или им-муногенности вирусов в течение периода хранения.
2420-197088ЕА/042
ЖИДКИЕ ВИРУСНЫЕ СОСТАВЫ
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА ПРИОРИТЕТНУЮ ЗАЯВКУ
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США № 61/419 032, поданной 2 декабря 2010 года, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Вирусы играют важную роль в нескольких вариантах терапевтического применения, в том числе, например, получении вирусных терапевтических средств и вакцин. Для указанных вариантов терапевтического применения может быть желательно, чтобы вирусы сохраняли свою инфекционность или иммуногенность. В то же время вирусы часто теряют инфекционность или иммуногенность после длительного периода вследствие неоптимальных составов или неподходящих условий хранения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение обеспечивает жидкие вирусные составы, пригодные для стабилизации и хранения вирусов, и способы получения указанных составов. Указанные составы можно использовать, например, для сохранения вирусов (т.е. для сохранения инфекционности или иммуногенности вирусов) в течение периода хранения. Указанные составы также можно использовать, например, для получения вирусных составов, характеризующихся пониженными уровнями твердых частиц и, следовательно, пригодных для введения путем парентерального вливания или инъекции.
Жидкие вирусные составы, описанные здесь, включают вирус (например, очищенный вирус), невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель. В некоторых примерах вирусные составы включают очищенный вирус и невирусную композицию, включающую маннит, сорбит в концентрации менее 3% от массы невирусной композиции, гистидин, Мд2+ и жидкий носитель. В указанных примерах невирусная композиция, за исключением жидкого носителя, может практически не содержать одновалентных катионных солей. В некоторых примерах суммарная
концентрация маннита и сорбита может составлять менее 10 масс.% от массы невирусной композиции.
В некоторых примерах вирусные составы содержат очищенный вирус и невирусную композицию, включающую маннит, сорбит, гистидин, Мд2+ и жидкий носитель. В указанных примерах концентрация Сахаров в невирусной композиции может быть менее 7,5 масс.% от массы невирусной композиции. В некоторых примерах суммарная концентрация маннита и сорбита может составлять менее
7 масс.% от массы невирусной композиции.
В некоторых примерах вирусный состав практически не содержит Zn2+ и/или трегалозы. Невирусная композиция необязательно дополнительно включает неионогенное поверхностно-активное вещество.
Вирусные составы, описанные здесь, могут включать очищенный вирус и невирусную композицию, включающую сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции, Мд2+, неионогенное поверхностно-активное вещество и жидкий носитель.
8 указанных примерах невирусные композиции, за исключением жидкого носителя, могут практически не содержать одновалентных катионных солей, полиолов, не являющихся сахарозой, и карбоксилатов. Кроме того, вирусные составы, представленные здесь, могут состоять главным образом из очищенного вируса и невирусной композиции, включающей сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции, Мд2+, неионогенное поверхностно-активное вещество и жидкий носитель.
Мд2+ необязательно присутствует в виде хлорида магния. Неионогенное поверхностно-активное вещество необязательно является полисорбатом 80. Жидкий носитель может являться водным носителем, например, водой. Вирус, включенный в вирусные составы, описанные здесь, может являться, например, онколитическим вирусом и/или безоболочечным вирусом. Настоящее изобретение обеспечивает состав, в котором вирус является реовирусом, например, реовирусом млекопитающих. Примером реовируса млекопитающих является реовирус человека, например, вирус 3 серотипа (например, реовирус штамма Dearing). Реовирус необязательно является рекомбинантным реовирусом, химерным
реовирусом или IDAC #190907-01.
Вирусные составы необязательно стабильны при
приблизительно комнатной температуре в течение определенного периода времени (например, по меньшей мере, одного дня). Вирусные составы необязательно стабильны при температуре около 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, трех месяцев (например, по меньшей мере, шести месяцев, по меньшей мере, двенадцати месяцев, по меньшей мере, восемнадцати месяцев или любого периода времени более трех месяцев). Вирусные составы необязательно пригодны для разбавления перед введением.
Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает способы получения вирусных составов. Указанные способы включают обеспечение вируса и объединение вируса м невирусной композицией, включающей вспомогательные вещества, как описано здесь, и жидкий носитель. Указанные способы необязательно дополнительно включают добавление неионогенного поверхностно-активного вещества к композиции. В некоторых примерах указанные способы, кроме того, включают разбавление вирусного состава для вливания. Вирусные составы, изготовленные в соответствии с этими способами, также описаны здесь.
Кроме того, здесь описаны способы консервации или стабилизации вируса. Указанные способы включают получение вирусного состава, как описано здесь, и хранение вирусного состава. В некоторых примерах вирус хранят при температуре, равной или ниже температуры окружающей среды. Например, температура может являться температурой окружающей среды или составлять от 2°С до 8°С (например, 4°С) . В некоторых примерах температура составляет -20°С или от -60°С до -80°С.
Кроме того, в настоящем документе описаны способы получения вирусных составов с низкими уровнями твердых частиц, например, неагрегирующих вирусных составов. Вирусные составы необязательно содержат менее 6000 частиц с размером 10 микрон или более на контейнер (например, менее 3000 частиц, менее 2000 частиц, менее 1000 частиц, менее 500 частиц, менее 300 частиц или менее 100 частиц с размером 10 микрон или более на контейнер). Вирусные составы необязательно содержат менее 600
частиц с размером 25 микрон или более на контейнер (например, менее 500 частиц, менее 400 частиц, менее 300 частиц, менее 200 частиц, менее 100 частиц, менее 50 частиц или менее 10 частиц с размером 2 5 микрон или более на контейнер). Указанные вирусные составы могут быть пригодны для введения путем парентерального вливания или инъекции.
Подробности одного или более аспектов изложены в прилагаемых рисунках и описании, приведенном ниже. Другие свойства, цели и преимущества очевидны из описания и рисунков, а также из формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 является гистограммой, показывающей среднюю инфицирующую дозу для тканевой культуры, выраженную в TCID50 на миллилитр для жидких составов реовируса перед хранением (t = 0) при комнатной температуре и после него через 3 (t = 3 мес), 6,5 (t = 6,5 мес), 12 (t = 12 мес.) и 18,5 (t = 18,5 мес.) месяцев при комнатной температуре, 2-8°С, -20°С и -80°С. Для каждого состава, слева направо: t = 0 при комнатной температуре; t = 18,5 мес. при -80°С; t = 3 мес. при -20°С; t = 6,5 мес. при -20°С; t = 12 мес. при -20 °С; t = 18,5 мес. при -20°С; t = 3 мес. при 2-8°С; t = 6,5 мес. при 2-8°С; t = 12 мес. при 2-8°С; t = 18,5 мес. при 2-8°С; t = 3 мес. при комнатной температуре; t = 6,5 мес. при комнатной температуре; t = 12 мес. при комнатной температуре. Для Контроля реовирус, элюированный физиологическим раствором с фосфатным буфером, разбавляли в физиологическом растворе с фосфатным буфером до титра вируса Зх1010 TCIDso/ъш. Для Состава 1 реовирус, элюированный физиологическим раствором с фосфатным буфером, разбавляли в 30 мг/мл маннита, 20 мг/мл гистидина, 0,01% (об/об) полисорбата 80, 20 мг/мл сорбита и 2 мМ МдС1г ДО титра вируса Зх1010 TCID5o/Mn. Для Состава 2 реовирус, элюированный физиологическим раствором с фосфатным буфером, разбавляли в 4 0 мг/мл сахарозы, 0,05% (об/об) полисорбата 80 и 2 мМ МдС1г ДО титра вируса 3> <1010 TCID50/Mn.
Фиг. 2 является гистограммой, показывающей восстановление инфекционных частиц в процентах от средней инфицирующей дозы
для тканевой культуры, выраженной в TCID50 на миллилитр для жидких составов реовируса перед хранением (t = 0) при комнатной температуре и после него через 3 (t = 3 мес), 6,5 (t = 6,5 мес), 12 (t = 12 мес) и 18,5 (t = 18,5 мес) месяцев при комнатной температуре, 2-8°С, -20°С и -80°С. Для каждого состава, слева направо: t = 0 при комнатной температуре; t = 18,5 мес при -80°С; t = 3 мес при -20 °С; t = 6,5 мес при -2 0°С; t = 12 мес при -2 0°С; t = 18,5 мес при -2 0°С; t = 3 ме с. при 2-8°С; t = 6,5 ме с. при 2-8°С; t = 12 ме с. при 2 - 8 ° С ; t = 18,5 мес при 2-8°С; t = 3 мес при комнатной температуре; t = 6,5 мес при комнатной температуре; t = 12 мес при комнатной температуре.
Фиг. 3 является гистограммой, показывающей эволюцию нормированных общих вирусных титров, измеренных с помощью ВЭЖХ, выраженных в вирусных частицах на мл, в жидком Контрольном составе реовируса перед хранением (t = 0) при комнатной температуре и через 2 недели (время = 2 нед.), 1 месяц (время = 1 мес), 2 месяца (время = 2 мес), 3 месяца (время = 3 мес), 6,5 месяца (время = 6,5 мес), 12 месяцев (время = 12 мес.) и 18,5 месяцев (время = 18,5 мес.) хранения при 37°С, комнатной температуре, 2-8°С, -20°С и -80°С. Для каждой температуры, слева направо: время = 0, время = 2 нед., время = 1 мес, время = 2 мес, время = 3 мес, время = 6,5 мес, время = 12 мес. и время = 18,5 мес.
Фиг. 4 является гистограммой, показывающей эволюцию нормированных общих вирусных титров, измеренных с помощью ВЭЖХ, выраженных в вирусных частицах на мл, в жидком Составе 1 реовируса перед хранением (t = 0) при комнатной температуре и через 2 недели (время = 2 нед.), 1 месяц (время = 1 мес), 2 месяца (время = 2 мес), 3 месяца (время = 3 мес), 6,5 месяца (время =6,5 мес), 12 месяцев (время = 12 мес.) и 18,5 месяцев (время = 18,5 мес.) хранения при 37°С, комнатной температуре, 2-8°С, -20°С и -80°С. Для каждой температуры, слева направо: время = 0, время = 2 нед., время = 1 мес, время = 2 мес, время = 3 мес, время = 6,5 мес, время = 12 мес. и время = 18,5 мес.
Фиг. 5 является гистограммой, показывающей эволюцию нормированных общих вирусных титров, измеренных с помощью ВЭЖХ, выраженных в вирусных частицах на мл, в жидком Составе 2 реовируса перед хранением (t = 0) при комнатной температуре и через 2 недели (время = 2 нед.), 1 месяц (время = 1 мес), 2 месяца (время = 2 мес), 3 месяца (время = 3 мес), 6,5 месяца (время =6,5 мес), 12 месяцев (время = 12 мес.) и 18,5 месяцев (время = 18,5 мес.) хранения при 37°С, комнатной температуре, 2-8°С, -20 °С и -80°С. Для каждой температуры, слева направо: время = 0, время = 2 нед., время = 1 мес, время = 2 мес, время = 3 мес, время = 6,5 мес, время = 12 мес. и время = 18,5 мес.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В настоящем документе описаны вирусные составы, пригодные для хранения вирусов, и способы получения указанных составов. Указанные составы можно использовать, например, для сохранения инфекционности или иммуногенности вирусов в течение периода хранения. Вирусные составы, описанные здесь, включают вирус, невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель.
Вирусы, используемые в составах, описанных здесь, включают оболочечные и необолочечные вирусы. Указанные оболочечные и необолочечные вирусы могут являться ДНК-содержащими вирусами, РНК-содержащими вирусами или ретровирусами. Вирус, используемый в составах, описанных здесь, необязательно является необолочечным вирусом. Необолочечные вирусы включают, например, вирусы, принадлежащие к семействам Adenoviridae (например, аденовирус), Picornaviridae (например, вирус полиомиелита), Reoviridae (например, реовирус), Papillomaviridae (например, вирус папилломы), Polyomaviridae (например, полиомавирус), Parvoviridae (например, вирус крыс Килхема), и Iridoviridae (например, иридовирус долгоножки).
Вирус необязательно является онколитическим вирусом. Подходящие вирусы для использования в композициях и способах, описанных здесь, включают вирусы семейств myoviridae, siphoviridae, podoviridae, tectiviridae, corticoviridae,
plasmaviridae, lipothrixviridae, fuselloviridae, poxviridae, iridoviridae, phycodnaviridae, baculoviridae, herpesviridae, adenoviridae, papovaviridae, polydnaviridae, inoviridae, microviridae, geminiviridae, circoviridae, parvoviridae, hepadnaviridae, retroviridae, cystoviridae, reoviridae, birnaviridae, paramyxoviridae, rhabdoviridae, filoviridae, orthomyxoviridae, bunyaviridae, arenaviridae, leviviridae, picornaviridae, sequiviridae, comoviridae, potyviridae, caliciviridae, astroviridae, nodaviridae, tetraviridae, tombusviridae, coronaviridae, flaviviridae, togaviridae, barnaviridae и bornaviridae, но не ограничиваются ими.
Составы необязательно включают реовирус. Как используется здесь, реовирус относится к любому вирусу, относящемуся к роду reovirus, в том числе природным и рекомбинантным реовирусам. Реовирусы являются вирусами с двуцепочечным сегментированным РНК-геномом. Диаметр вирионов составляет 60-80 нм; вирионы обладают двумя икосаэдрическими, концентрическими капсидными оболочками. Геном состоит из двухцепочечной РНК из 10-12 отдельных сегментов с общим размером 16-2 7 тысяч пар оснований (т.п.о.). Отдельные сегменты РНК различаются по размеру. Из многих видов выделены три отдельных, но родственных друг другу типа реовирусов. Все три типа обладают общим комплементсвязывающим антигеном. Реовирус человека состоит из трех серотипов: 1 типа (штамм Lang или T1L) , 2 типа (штамм Jones, T2J) и 3 типа (штамм Dearing или штамм Abney, T3D или ТЗА) .
Как описано выше, реовирус может являться рекомбинантным реовирусом, который может быть природным или не встречающимся в природе. Реовирус описывают как природный, если его можно выделить из природного источника, и если он не был намеренно модифицирован человеком в лаборатории. Например, реовирус может быть выделен из полевого источника (т.е. от человека, инфицированного реовирусом). Реовирус также можно отобрать или подвергнуть мутагенезу для получения повышенной активности (например, онколитической активности). Примеры конкретных реовирусов можно найти, например, в публикациях патентных
заявок США №№ 2008/0226602 и 2008/0292594.
Реовирус может быть модифицирован, но еще способен литически инфицировать клетки млекопитающего, характеризующиеся активным путем ras. Реовирус можно подвергнуть химической или биохимической предварительной обработке (например, обработке протеазой, например, химотрипсином или трипсином) перед введением в пролиферирующие клетки. Предварительная обработка протеазой удаляет внешний слой или капсид вируса и может увеличить инфекционность вируса. Реовирус можно заключить в липосому или мицеллу (Chandran and Nibert, Journal of Virology, 72(1):467-75 (1998)). Например, вирион можно обработать химотрипсином в присутствии мицеллообразующих концентраций алкилсульфатных поверхностно-активных соединений с целью получения новой инфекционной субвирусной частицы (ISVP).
Реовирус может быть рекомбинантным или химерным реовирусом, полученным в результате рекомбинации геномных сегментов из двух или более генетически различных реовирусов. Рекомбинация сегментов генома реовируса может происходить в природе после инфицирования организма-хозяина, по меньшей мере, двумя генетически различными реовирусами. Рекомбинантные вирионы также можно получить в культуре клеток, например, путем совместной инфекции пермиссивных клеткок-хозяев генетически различными реовирусами. Соответственно, рекомбинантный реовирус для использования в составах, описанных здесь, можно получить в результате рекомбинации сегментов генома двух или более генетически различных реовирусов, включая реовирус человека, например, 1 типа (например, штамм Lang), 2 типа (например, штамм Jones) и 3 типа (например, штамм Dearing или штамм Abney), реовирусы млекопитающих, не являющихся человеком, или реовирус приц, но не ограничиваясь этим. В некоторых примерах рекомбинантные реовирусы можно получить в результате рекомбинации сегментов генома двух или более генетически различных реовирусов, где, по меньшей мере, один исходный вирус получен с помощью генной инженерии, включает один или более химически синтезированных геномных сегментов, обработан химическими или физическими мутагенами, или сам по себе
является результатом события рекомбинации. Рекомбинантный реовирус можно подвергать рекомбинации, например, в присутствии химических мутагенов, включая диметилсульфат и этидий-бромид, но не ограничиваясь ими, или физических мутагенов, включая ультрафиолет и другие формы излучения, но не ограничиваясь ими.
Другие примеры подходящих рекомбинантных реовирусов включают реовирусы, включающие делеции или дупликации в одном или более сегментов генома, включащие дополнительную генетическую информацию в результате рекомбинации с геномом клетки-хозяина, или включающие синтетические гены. Реовирус также можно модифицировать путем внедрения мутированных белков оболочки, например, ol, во внешний капсид вириона. Белки можно мутировать путем замены, инсерции или делеции. Замена включает введение различных аминокислот вместо нативных аминокислот. Инсерции включают включение дополнительных аминокислотных остатков в белок по одному или более положений. Делеции включают удаление одного или нескольких аминокислотных остатков в белке. Такие мутации можно получить способами, известными в данной области техники. Например, олигонуклеотидный сайт-специфический мутагенез гена, кодирующего один из белков оболочки, может привести к получению желательного мутантного белка оболочки. В одном варианте воплощения реовирус является IDAC #190907-01.
Вирусы для использования в составах, описанных здесь, могут являться очищенными вирусами. Как используется здесь, очищенные вирусы относятся к вирусам, отделенным от клеточных компонентов, сопутствующих им в естественных условиях. Как правило, вирусы считаются очищенными, если они, по меньшей мере, на 70% (например, по меньшей мере, 75%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 95% или, по меньшей мере, на 99%) сухого веса свободны от белков и других клеточных компонентов, с которыми они связаны естественным образом. Вирусы можно очистить, например, согласно способам, описанным в публикациях патентных заявок США №№ 2002/0168764, 2004/0005693, 2 0 05/0095692, 2006/0088869 и 2007/0269856, полностью включенных в настоящий документ
посредством ссылок. Например, вирус можно отделить от других частиц, используя методики центрифугирования в градиенте плотности, ультрафильтрации, диафильтрации, ионообменной хроматографии, эксклюзионной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии или их комбинации.
Как обсуждалось выше, жидкие вирусные составы включают невирусную композицию, включающую вспомогательные вещества, и жидкий носитель. Невирусная композиция необязательно включает, по меньшей мере, два вспомогательных вещества (например, два, три или более вспомогательных веществ). Вспомогательные вещества для использования в невирусной композиции включают сахара, аминокислоты, двухвалентные катионы и поверхностно-активные вещества, но не ограничиваются ими. Эти вспомогательные вещества могут вносить вклад в стабильность вируса в жидком носителе. В некоторых примерах использование указанных вспомогательных веществ в невирусных композициях и, следовательно, в жидких вирусных составах обеспечивает длительное хранение вирусов (например, хранение в течение двенадцати месяцев или более) без потери инфекционности вируса.
Подходящие сахара для использования в невирусных композициях, описанных здесь, включают, например, моносахариды и дисахариды. В некоторых примерах невирусные композиции включают маннит, сорбит, сахарозу или их комбинации. Дополнительные примеры подходящих Сахаров включают лактозу, декстрозу, фруктозу, глюкозу и мальтозу. Невирусные композиции и/или вирусные составы необязательно практически не содержат трегалозы. "Практически не содержит" означает, что невирусная композиция и/или вирусный состав могут включать менее 0,1%, менее 0,01%, менее 0,001%, менее 0,0001% или 0% трегалозы от массы состава. В некоторых примерах невирусная композиция и/или вирусный состав практически не содержат Сахаров, кроме сахарозы (т.е. невирусная композиция и/или вирусный состав практически не содержат полиолов, не являющихся сахарозой).
Сахара для использования в невирусных композициях могут включать один сахар или комбинацию двух или более Сахаров. Например, невирусная композиция может включать сахарозу в
качестве сахара, присутствующего в составе, или может включать комбинацию маннита и сорбита в качестве Сахаров, присутствующих в составе. Общая концентрация сахара(ов), присутствующего(их) в невирусной композиции, может составлять 10 масс.% или менее от массы невирусной композиции. Например, общая концентрация Сахаров может составлять менее 7,5 масс.% от массы невирусной композиции (например, менее 7,4 масс.%, менее 7,3 масс.%, менее 7,2 масс.%, менее 7,1 масс.%, менее 7 масс.%, менее б масс.%, менее 5 масс.%, менее 4 масс.%, менее 3 масс.%, менее 2 масс.% или менее 1 масс.% от массы невирусной композиции). Например, сахароза может присутствовать в невирусной композиции в массовой концентрации от 0,1% до 5%, от 1% до 4,5%, или от 2% до 4% (например, 3%) от массы состава. Маннит и сорбит необязательно можно включать в невирусную композицию в суммарной концентрации менее 7,5% (например, 7%) от массы невирусной композиции. Например, маннит можно включать в концентрации от 0,01% до 7,4% (например, от 0,1% до 7%, от 1% до б%, от 2% до 5%, или от 3% до 4%), а сорбит можно включать в концентрации от 0,01% до 7,4% (например, от 0,1% до 7%, от 1% до б%, от 2% до 5%, или от 3% до 4%) , так что суммарная концентрация Сахаров составляет менее 7,5% от массы невирусной композиции.
Аминокислоты также можно включать в невирусные композиции, описанные здесь. Подходящие аминокислоты включают, например, гистидин, аргинин, лизин, метионин, глутаминовую кислоту или их смеси. Одна или более аминокислот могут присутствовать в невирусной композиции в концентрации 5% или менее от массы невирусной композиции. Например, концентрация аминокислот может составлять 4,5% или менее, 4,0% или менее, 3,5% или менее, 3,0% или менее, 2,5% или менее, 2,0% или менее, 1,5% или менее, 1,0% или менее или 0,5% или менее от массы невирусной композиции.
Двухвалентные катионы также можно включать в невирусные композиции, описанные здесь. Подходящий двухвалентный катион для использования в невирусной композиции включает катион магния (т.е. Мд2+) . Мд2+ можно ввести в невирусную композицию в комбинации с анионом в виде соли, например, МдС1г. Невирусные
композиции и/или вирусные составы необязательно практически не содержат Zn2+. Указанный двухвалентный катион может присутствовать в невирусной композиции в диапазоне концентраций от 0,01 мМ до 5 мМ. Например, Мд2+ может присутствовать в вирусном составе в виде МдС1г в концентрации от 0,1 мМ до 4,5 мМ, от 0,5 мМ до 4 мМ или от 1 мМ до 3 мМ (например, 2 мМ) . Вспомогательное вещество, присутствующее в невирусном составе, за исключением жидкого носителя, необязательно могут практически не содержать одновалентных катионных солей, например, натрий- (Na+) , литий- (Li+) , калий- (К+) и аммоний-(NH4+) содержащих солей.
Кроме того, вспомогательное вещество для использования в
невирусных композициях, описанных здесь, может включать,
например, поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное
вещество относится к веществу, содержащему комбинацию
гидрофильной и гидрофобной групп. Как используется здесь,
поверхностно-активные вещества включают, например, детергенты.
Подходящие поверхностно-активные вещества для использования в
невирусных композициях, описанных здесь, включают ионные и
неионогенные поверхностно-активные вещества. В некоторых
примерах невирусные композиции необязательно включают
полисорбат 80 в качестве неионогенного поверхностно-активного
вещества. Одно или несколько поверхностно-активных веществ
могут присутствовать в невирусных композициях, необязательно в
количестве менее 1 масс.% от массы невирусной композиции.
Например, поверхностно-активное(ые) вещество(а) может
присутствовать в невирусной композиции в количестве менее 0,5 масс.%, менее 0,1 масс.% или менее 0,05 масс.% (например, 0,01 масс.%).
Невирусные композиции и/или вирусные составы необязательно практически не содержат карбоксилатов. Примеры карбоксилатов включают сукцинат и цитрат.
Кроме того, невирусные композиции, описанные здесь, включают жидкий носитель. Подходящие жидкие носители могут являться водными или неводными носителями. Примеры подходящих неводных носителей включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль
и масла, включая масла нефти, растительного, животного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло, оливковое масло и т.п. Органические сложные эфиры, например, этилолеат также являются подходящими неводными носителями. Водные носители включают воду, этанол, глицерин, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевые и буферные среды. Вода или водный носитель является предпочтительным при внутривенном введении фармацевтической композиции. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также можно использовать в качестве жидких носителей, в частности, для инъекционных растворов. При необходимости композиция также может содержать увлажнители или эмульгаторы, смазывающие вещества, скользящие вещества, смягчители, смачивающие агенты, загустители, вкусоароматические добавки, консерванты или рН-буферы. рН-буферы можно включать для контроля рН невирусной композиции и, таким образом, вирусного состава. В некоторых примерах буфер включают для поддержания рН вирусного состава между 5 и 8,5. Например, буфер можно включить для поддержания рН вирусного состава от 6,8 до 8,0 или от 7,0 до 7,8 (например, 7,4) . Примеры подходящих буферов включают фосфатные буферы, например, физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS), например, 0,01-0,1 М, и, предпочтительно, 0,05 М фосфатный буфер, ацетатные буферы, бензоатные буферы, цитратные буферы, лактатные буферы, малеатные буферы и тартратные буферы. Можно использовать буферные носители, например, раствор Хэнкса, раствор Рингера, раствор декстрозы, 5% человеческий сывороточный альбумин, декстрозу Рингера, раствор декстрозы и хлорида натрия, раствор Рингера с лактатом и нелетучие масла, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон или лецитин. В качестве подходящих буферов также можно использовать растворы моноэтаноламина, диэтаноламина, трометамина и глицина. В качестве носителей также можно использовать липосомы и неводные носители, например, нелетучие масла. Дополнительные примеры подходящих носителей описаны Е. W. Martin в "Remington's Pharmaceutical Sciences". Состав должен соответствовать способу
введения.
Типичная комбинация вируса и невирусной композиции (включающей вспомогательные вещества и жидкий носитель) для образования вирусного состава включает очищенный вирус, маннит, сорбит, гистидин, Мд2+ и жидкий носитель. Сорбит может присутствовать в концентрации менее 3% от массы невирусной композиции. Например, сорбит может присутствовать в концентрации менее 2,9%, менее 2,8%, менее 2,7%, менее 2,6%, менее 2,5%, менее 2,4%, менее 2,3%, менее 2,2%, менее 2,1%, менее 2%, менее 1,9%, менее 1,8%, менее 1,7%, менее 1,6%, менее 1,5%, менее 1,4%, менее 1,3%, менее 1,2%, менее 1,1% или менее 1%. В некоторых примерах суммарная концентрация маннита и сорбита составляет менее 10% от массы невирусной композиции. Например, концентрация маннита может составлять 3%, а концентрация гистидина может составлять 2%, что обеспечивает суммарную концентрацию 5%. Состав также может включать неионогенное поверхностно-активное вещество, например, полисорбат 80, в количестве менее 0,1% от массы невирусной композиции (например, 0,01%). Кроме того, невирусная композиция и/или вирусный состав могут практически не содержать одновалентных катионных солей, Zn2+ и/или трегалозы.
Еще один подходящий вирусный состав включает очищенный вирус, сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции, Мд2+, неионогенное поверхностно-активное вещество и жидкий носитель. Сахароза необязательно присутствует в концентрации 4,5% или менее, 4% или менее, 3,5% или менее, 3% или менее, 2,5% или менее или 2% или менее от массы невирусной композиции. Кроме того, невирусная композиция и/или вирусный состав могут практически не содержать одновалентных катионных солей, полиолов, не являющихся сахарозой, и карбоксилатов (например, сукцината и цитрата).
Кроме того, в настоящем документе описаны способы получения жидких вирусных составов. Указанные способы включают обеспечение вируса (например, очищенного вируса) и объединение вируса и невирусной композиции, включающей вспомогательные вещества в жидком носителе. В некоторых примерах обеспечивается
подходящее количество вируса для получения вирусного состава с титром в диапазоне от 1> <105 до 4хЮ12 вирусных частиц на миллилитр (ВЧ/мл). В качестве альтернативы невирусную композицию, содержащую вспомогательные вещества в жидком носителе, можно добавлять к культуре клеток, инфицированных вирусом. Как используется здесь, культура клеток относится к популяции культивируемых клеток, находящихся в условиях культивирования (например, к клеткам, инфицированным вирусом, и культуральной среде). Кроме того, раствор или суспензию клеток, инфицированных вирусом, можно разбавить невирусной композицией, содержащей вспомогательные вещества в жидком носителе, с образованием жидкого вирусного состава.
Кроме того, в настоящем документе описаны способы получения вирусных составов с низкими уровнями твердых частиц, например, малоагрегирующих или неагрегирующих вирусных составов. Вирусные составы, полученные согласно указанным способам, таким образом, пригодны для введения путем парентерального вливания или инъекции. В некоторых примерах уровни частиц в указанных способах определяют, используя подсчет количества частиц в режиме светотени и/или микроскопический подсчет частиц в соответствии с USP <788> , полностью включенным в настоящий документ. Вирусные составы необязательно включают менее 6000 частиц размером 10 микрон или более на контейнер. Например, вирусные составы могут включать менее 5000 частиц, менее 4000 частиц, менее 3000 частиц, менее 2000 частиц, менее 1000 частиц, менее 900 частиц, менее 800 частиц, менее 700 частиц, менее 600 частиц, менее 500 частиц, менее 400 частиц, менее 300 частиц, менее 200 частиц, или менее 100 частиц размером 10 микрон или более на контейнер. Вирусные составы необязательно содержат менее 600 частиц с размером 25 микрон или более на контейнер (например, менее 500 частиц, менее 400 частиц, менее 300 частиц, менее 200 частиц, менее 100 частиц, менее 50 частиц или менее 10 частиц с размером 25 микрон или более на контейнер).
Жидкие вирусные составы, описанные здесь, можно использовать для хранения и стабилизации вируса в течение
определенного периода времени, в том числе длительного хранения. Например, вирус, полученный в соответствии с составами, описанными здесь, можно хранить до двенадцати месяцев (например, один день, одну неделю, один месяц, три месяца, шесть месяцев, девять месяцев или двенадцать месяцев) без потери инфекционности вируса. Жидкие вирусные составы, описанные здесь, являются стабильными при температуре окружающей среды и могут проявлять повышенную стабильность при температурах ниже приблизительно температуры окружающей среды. Как используется здесь, температура окружающей среды относится к температуре от приблизительно 10°С до приблизительно 30 °С. Вирусы можно хранить в вирусных составах при температуре, равной или ниже температуры окружающей среды без значительной потери инфекционности. В некоторых примерах жидкий вирусный состав хранят при температуре, приблизительно равной температуре окружающей среды. В других примерах жидкие вирусные составы хранят при температуре 9°С и ниже (например, 8°С и ниже, 7 ° С и ниже, б ° С и ниже, 5 ° С и ниже, 4 ° С и ниже, 3 ° С и ниже, 2°С и ниже, и 1°С и ниже. Например, температура хранения может находиться в диапазоне от 2°С до 8°С (например, 4°С) . Кроме того, жидкие вирусные составы можно хранить при температуре ниже 0°С, например, -20°С, или от -60°С до -80°С при сохранении инфекционности вируса.
Вирусные составы стабильны, например, при приблизительно комнатной температуре в течение определенного периода времени (например, по меньшей мере, одного дня) . В некоторых примерах вирусные составы стабильны при температуре приблизительно 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, трех месяцев (например, по меньшей мере, четырех месяцев, по меньшей мере, пяти месяцев, по меньшей мере, шести месяцев, по меньшей мере, семи месяцев, по меньшей мере, восьми месяцев, по меньшей мере, девяти месяцев, по меньшей мере, десяти месяцев, по меньшей мере, одиннадцати месяцев, по меньшей мере, двенадцати месяцев, по меньшей мере, тринадцати месяцев, по меньшей мере, четырнадцати месяцев, по меньшей мере, пятнадцати месяцев, по меньшей мере, шестнадцати месяцев, по меньшей мере, семнадцати месяцев, по
меньшей мере, восемнадцати месяцев, или любого количества времени более трех месяцев).
Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, включающие жидкие вирусные составы. Композиции, представленные здесь, можно вводить in vitro или in vivo с фармацевтически приемлемым носителем. Фармацевтически приемлемый носитель может являться твердым, полужидким или жидким материалом, который может действовать в качестве наполнителя, носителя или среды для жидкого вирусного состава. Так, жидкий вирусный состав может быть в виде мягких или твердых желатиновых капсул, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в жидкой среде) и стерильных растворов для инъекций. Жидкие вирусные составы необязательно пригодны для вливания. Например, неагрегирующие жидкие вирусные составы, характеризующиеся пониженными уровнями твердых частиц, как описано здесь, могут быть пригодны для введения путем парентерального вливания или инъекции. Жидкие вирусные составы, полученные согласно способам, описанным здесь, при необходимости необязательно можно дополнительно разбавить для вливания.
Фармацевтическая композиция дополнительно может включать, без ограничения, смазывающие агенты, например, тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, например, метил - и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и вкусоароматические добавки. Фармацевтические композиции можно составить с целью обеспечения быстрого, замедленного или отсроченного высвобождения вируса, включенного в жидкий вирусный состав, после введения, применяя процедуры, известные в данной области техники. Помимо типичных составов, описанных выше, другие составы, подходящие для использования в фармацевтической композиции, можно найти в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (21th ed.) ed. David B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, 2005.
Жидкие составы, включающие жидкие вирусные составы для перорального введения или для инъекций, обычно включают водные
растворы, надлежащим образом ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии пищевых масел, например, кукурузного масла, хлопкового масла, кунжутного масла, кокосового масла или арахисового масла, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические среды-носители.
Еще один состав, необязательно используемый в способах по настоящему описанию, включает устройства трансдермальной доставки (например, пластыри). Такую трансдермальную доставку можно использовать для обеспечения непрерывного или дискретного введения вируса, включенного в жидкие вирусные препараты, как описано здесь. Конструкция и использование трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в данной области техники. См., например, патент США № 5023252. Такие пластыри можно сконструировать для непрерывной, импульсной доставки или доставки вирусов по требованию.
В представленных способах жидкий вирусный состав вводят таким образом, что вирус может в конечном итоге контактировать с клетками-мишенями, например, системно. Путь введения жидкого вирусного состава зависит от расположения, а также от типа клеток-мишеней. Можно использовать разнообразные пути введения. Для вакцин вирус можно вводить системно, внутрикожно или подкожно, обеспечивая его доставку к антигенпрезентирующим клеткам для стимуляции иммунного ответа. Для онколитических вирусов, когда мишенью является доступная солидная опухоль, жидкий вирусный состав можно вводить путем инъекции непосредственно в опухоль или внутривенно. В случае гемопоэтической опухоли, например, жидкий вирусный состав можно вводить внутривенно или интраваскулярно. Для опухолей, не являющихся легкодоступными в пределах организма, например, метастазов, жидкий вирусный состав можно вводить таким образом, что он может транспортироваться системно в организме млекопитающего, и таким образом достигать опухоли (например, внутривенно или внутримышечно). В качестве альтернативы, жидкий вирусный состав можно ввести непосредственно в одиночную солидную опухоль, откуда он затем переносится системно через организм к метастазам. Для вакцины или онколитической терапии
жидкий вирусный состав также можно вводить подкожно, внутрибрюшинно, интратекально (например, для лечения опухоли головного мозга), местно (например, для лечения меланомы), перорально (например, для рака полости рта или пищевода), ректально (например, для рака ободочной и прямой кишки), вагинально (например, для рака шейки матки или влагалища), назально, за счет ингаляционного спрея или аэрозольного состава
(например, для рака легких).
Жидкий вирусный состав необязательно вводят субъекту непрерывно, по меньшей мере, раз в день или на протяжении дня в последующие дни, в течение определенного периода времени. Для введения вакцины обычно необходимы первичное и одно или более вторичных введений. Так, жидкий вирусный состав вводят, например, субъекту в любом фармакологически приемлемом растворк
(например, путем внутривенного введения или вливания) в течение определенного периода времени или периодически. Например, состав можно вводить системно путем инъекции (например, внутримышечно или подкожно) или перорально ежедневно, по меньшей мере, раз в день, или путем вливания таким образом, который приводит к ежедневной доставке в ткани или кровоток субъекта. Если жидкий вирусный состав вводят путем вливания в течение определенного периода времени, указанный период времени составляет, например, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 12 или 24 ч, или любое время от 1 до 24 часов включительно, или более. Указанный период времени необязательно составляет 5, 15, 30, 60, 90, 120, 150 или 18 0 минут, или любое время от 5 до 180 минут включительно, или более. Так, например, жидкий вирусный состав вводят путем вливания в течение 60 минут. Введение можно повторять ежедневно в течение 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 14, 21, 2 8 дней или любого количества дней между 2 и 2 8 дней включительно, или дольше.
Вирусный состав при использовании для стимуляции иммунного ответа необязательно включает адъювант. Адъюванты включают, например, соли алюминия, минеральное масло, твердые частицы, липополисахариды, сапонины и т.п. Состав необязательно пригоден для разбавления перед введением.
Жидкие вирусные составы, описанные здесь, можно вводить в количестве, достаточном (т.е. эффективном количестве) для лечения пролиферативного расстройства или для стимуляции иммунного ответа. Состав необязательно пригоден для разбавления перед введением. Пролиферативное расстройство лечат, если введение жидкого вирусного состава к пролиферирующим клеткам влияет на лизис (например, онколизис) пораженных клеток, что приводит к снижению количества аномально пролиферирующих клеток, уменьшению размеров новообразования и/или уменьшению или устранению симптомов (например, боли), связанных с пролиферативным расстройством. Как используется здесь, термин онколизис означает лизис, по меньшей мере, 10% пролиферирующих клеток (например, лизис, по меньшей мере, приблизительно 20%, 30%, 40%, 50% или 75% клеток). Процент лизиса можно определить, например, путем измерения снижения размера новообразования или количества пролиферирующих клеток у млекопитающего, либо путем количественного измерения лизиса клеток in vitro (например, в биоптате пролиферирующих клеток).
Эффективное количество жидкого вирусного состава определяют индивидуально, на основании, по меньшей мере, частично, конкретного вируса, используемого в жидком вирусном составе; размеров, возраста, пола индивидуума; цели лечения (например, для лечения пролиферативного заболевания или для индукции иммунного ответа), а также размера и других характеристик аномально пролиферирующих клеток-мишеней. Концентрацию вируса в жидких вирусных составах можно измерить путем определения количества бляшкообразующих единиц (БОЕ) в анализах, основанных на подсчете бляшек. Например, для лечения человека с пролиферативным заболеванием используют приблизительно от 103 до 1012 БОЕ вируса, содержащегося в вирусном составе, в зависимости от типа, размера и количества пролиферирующих клеток или присутствующих новообразований. Эффективное количество может составлять, например, от приблизительно 1,0 БОЕ/кг массы тела до приблизительно 1015 БОЕ/кг массы тела (например, от приблизительно 102 БОЕ/кг массы тела до приблизительно 1013 БОЕ/кг массы тела). Например,
эффективное количество вирусного состава, вводимое ежедневно, может составлять 1 * 1010 БОЕ, и вирусный состав можно вводить в течение пяти дней, что приводит к суммарному использованному количеству 5x1010' Концентрацию вируса в жидком вирусном составе необязательно можно измерить путем определения 50% инфицирующей дозы тканевой культуры (TCID50), являющейся количеством вируса, необходимым для получения цитопатического эффекта в 50% клеток, инфицированных вирусом. В некоторых примерах соотношение между TCID50 и БОЕ составляет приблизительно 3:1. Эффективное количество вирусного состава для лечения человека с пролиферативным заболеванием может составлять от приблизительно 1 х ю8 до приблизительно 1 х 1015 TCID50 в сутки. Эффективное количество вирусного состава можно вводить в течение периода времени, называемого здесь циклом. Цикл может представлять собой, например, один день, два дня, три дня, четыре дня, пять дней, шесть дней, семь дней, восемь дней, девять дней или десять дней, причем ежедневно можно вводить одинаковые или различные количества вирусного состава. Например, можно вводить ЗхЮ10 TCID50 в день в течение пяти дней, что приводит к общему количеству 1,5x1с11 TCID50 за цикл. Эффективное количество необязательно составляет приблизительно ЗхЮ10 TCID50 в сутки. Жидкий вирусный состав необязательно вводят в виде внутривенного вливания продолжительностью 1 час.
Оптимальные дозировки жидких вирусных составов зависят от множества факторов. Точное требуемое количество меняется от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста, массы и общего состояния субъекта, тяжести заболевания, подвергаемого лечению, конкретного вируса, используемого в жидком составе, и способа его введения. Таким образом, невозможно указать точное количество для каждого состава. В то же время соответствующее количество может определить специалист в данной области техники, используя обычные эксперименты с учетом указаний, представленных в данном документе.
Диапазоны дозировок для введения состава являются достаточными для получения желательного эффекта, влияющего на симптомы заболевания, или достаточными для стимуляции иммунного
ответа. Дозировка не должна быть настолько большой, чтобы вызывать появление побочных эффектов, например, нежелательных перекрестных реакций и анафилактических реакций. В случае противопоказаний дозировку может регулировать лечащий врач.
Дозировки меняют и вводят в один или более приемов ежедневно в течение одного или более дней. Представленный жидкий вирусный состав можно вводить в виде однократной дозы или в виде множественных доз (например, двух, трех, четырех, шести или более доз) . Например, при введении путем вливания указанное вливание может являться однократной непрерывной дозы или может быть доставлено путем множественных вливаний. Лечение может продолжаться от нескольких дней до нескольких месяцев или до ослабления заболевания.
Комбинации жидких вирусных составов можно вводить совместно (например, в виде смеси), раздельно, но одновременно (например, посредством раздельных капельниц одному и тому же субъекту) или последовательно (например, один из составов вводят первым, а затем вводят второй состав). Таким образом, термин комбинация используется для ссылки на совместное, одновременное или последовательное введение двух или более агентов.
Предполагается, что представленные вирусные составы можно объединять с другими видами терапии опухолей, например, химиотерапией, лучевой терапией, хирургией, гормональной терапией и/или иммунотерапией. Так, жидкие вирусные составы можно вводить в сочетании с хирургией или удалением новообразования. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает способы лечения солидного новообразования, включающие хирургическое удаление новообразования и введение жидкого вирусного состава в или поблизости от области новообразования.
Кроме того, предполагается, что жидкие вирусные составы в
предоставленных способах необязательно вводят в комбинации с
или в качестве дополнения к известным противораковым
соединениям или химиотерапевтическим агентам.
Химиотерапевтические агенты являются соединениями, которые
могут ингибировать рост опухолей. Такие агенты включают
противоопухолевые средства, например, ацивицин, акларубицина;
акодазола гидрохлорид; акронин; адозелезин; алдеслейкин;
алтретамин; амбомицин; аметантрона ацетат; аминоглутетимид;
амсакрин; анастрозол; антрамицин, аспарагиназу; асперлин;
азацитидин; азетепа; азотомицин; батимастат; бензодепа;
бикалютамид; бизантрена гидрохлорид; биснафида димезилат;
бизелезин; блеомицина сульфат; бреквинар натрия; бропиримин;
бусульфан; кактиномицин; калустерон; карацемид; карбетимер;
карбоплатин, кармустин; карубицина гидрохлорид; карзелезин;
цедефингол; хлорамбуцил; циролемицин; цисплатин; кладрибин;
криснатола мезилат; циклофосфамид; цитарабин; дакарбазин;
дактиномицин; даунорубицина гидрохлорид; децитабин;
дексормаплатин; дезагуанин; дезагуанина мезилат; диазиквон;
доцетаксел; доксорубицин; гидрохлорид доксорубицина;
дролоксифен; дролоксифена цитрат; дромостанолона пропионат;
дуазомицин; эдатрексат; эфлорнитина гидрохлорид; элсамитруцин;
энлоплатин; энпромат; эпипропидин; эпирубицин; эпирубицина
гидрохлорид; эрбулозол; эзорубицина гидрохлорид; эстрамустин;
эстрамустина фосфат натрия; этанидазол; этиодизированное масло
1-131; этопозида; этопозида фосфат; этоприн; фадрозола
гидрохлорид; фазарабин; фенретинид; флоксуридин; флударабина
фосфат; 5-фторурацил; флуроцитабин; фосквидон; фостриецин
натрий; гемцитабин; гемцитабина гидрохлорид, золото Аи-198;
гидроксимочевину; идарубицина гидрохлорид; ифосфамид;
илмофозин; интерферон альфа-2а, интерферон альфа-2Ь, интерферон
альфа-nl; интерферон альфа-пЗ; интерферон бета-la; интерферон
гамма-lb; ипроплатин; иринотекана гидрохлорид; ланреотида
ацетат; летрозол; лейпролида ацетат; лиарозола гидрохлорид;
лометрексол натрий; ломустин; лозоксантрон гидрохлорид;
мазопрокол; майтансин; мехлорэтамина гидрохлорид;
мегестролацетат; меленгестрола ацетат; мелфалан; меногарил; меркаптопурин; метотрексат, метотрексат натрия; метоприн; метуредепа; митиндомид; митокарцин; митокромин; митогиллин; митомалцин; митомицин С; митоспер; митотан; митоксантрон; митоксантрона гидрохлорид; микофеноловую кислоту; нокодазол;
ногаламицин; ормаплатин; оксисуран; паклитаксел; пегаспаргазу;
пелиомицин; пентамустин; пепломицина сульфат; перфосфамид;
пипоброман; пипосульфан; пироксантрона гидрохлорид; пликамицин;
пломестан; порфимер натрия; порфиромицин; преднимустин;
прокарбазина гидрохлорид; пуромицин; пуромицина гидрохлорид;
пиразофурин; рибоприн; роглетимид; сафингол; сафингола
гидрохлорид; семустин; симтразен; спарфозат натрия;
спарзомицин; спирогермания гидрохлорид; спиромустин;
спироплатин; стрептонигрин; стрептозоцин; хлорид стронция Sr-89; сулофенур; тализомицин; таксан; таксоид; текогалан натрия; тегафур; телоксантрона гидрохлорид; темопорфин; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепа; тиазофурин; тирапазамин; топотекана гидрохлорид; торемифена цитрат; трестолона ацетат; трицирибина фосфат; триметрексат ; триметрексата глюкуронат; трипторелин; тубулозола гидрохлорид; урациловый иприт; уредепа; вапреотид; вертепорфин; винбластина сульфат; винкристина сульфат; виндезин; виндезина сульфат; винепидина сульфат; винглицината сульфат; виндейпрозина сульфат; винорелбина тартрат; винрозидина сульфат; винзолидина сульфат; ворозол; зениплатин; зиностатин; зорубицина гидрохлорид, но не ограничиваются ими.
Дополнительные примеры противоопухолевых соединений включают 20-эпи-1,25 дигидроксивитамин D3; 5-этинилурацил; абиратерон; акларубицин; ацилфульвен; адеципенол; адозелезин; алдеслейкин; антагонисты ALL-TK; алтретамин; амбамустин; амидокс; амифостин; аминолевулиновую кислоту; амрубицин; амсакрин; анагрелид; анастрозол; андрографолид; ингибиторы ангиогенеза; антагонист D; антагонист G; антареликс; антрациклины; антидорсализирующий морфогенетический белок-1; антиандрогены карциномы предстательной железы; антиэстрогены; антинеопластоны; антисмысловые олигонуклеотиды; афидиколина глицинат; модуляторы генов апоптоза; регуляторы апоптоза; апуриновые кислоты; apa-CDP-DL-PTBA; аргининдезаминазу; ингибиторы ароматазы; асулакрин; атаместан; атримустин; аксинастатин 1; аксинастатин 2; аксинастатин 3; азасетрон; азатоксин; азатирозин; производные баккатина III; баланол;
батимастат; антагонисты BCR/ABL; бензохлорины;
бензоилставроспорин; производные бета-лактама; бета-алетин;
бетакламицин В; бетулиновую кислоту; ингибитор bFGF;
бикалутамид; бисантрен; бисазиридинилспермин; биснафид;
бистратен А; бизелезин; брефлат; бропиримин; будотитан;
бутионина сульфоксимин; кальципотриол; калфостин С; производные
камптотецина; канарипокс IL-2; капецитабин;
карбоксамидаминотриазол, карбоксиамидотриазол; CaRest МЗ; CARN
7 00; ингибитор хрящевого происхождения; карзелезин; ингибиторы
казеинкиназы (ICOS); кастаноспермин; цекропин В; цетрореликс;
хлорины; хлорхиноксалина сульфонамид; цикапрост; цис-порфирин;
кладрибин; аналоги кломифена; клотримазол; коллисмицин А;
коллисмицин В; комбретастатин А4; аналоги комбретастатина;
конагенин; крамбесцидин 816; криснатол; криптофицин 8;
производные криптофицина; курацин А; циклопентантрахиноны;
циклоплатам; ципемицин; цитарабина окфосфат; фактор цитолиза;
цитостатин; дакликсимаб; децитабин; дегидродидемнин В;
деслорелин; дексифосфамид; дексразоксан; дексверапамил;
диазиквон; дидемнин В; дидокс; диэтилнорспермин; дигидро-5-
азацитидин; дигидротаксол, 9-; диоксамицин; дифенилспиромустин;
докозанол; доласетрон; доксифлуридин, дролоксифен; дронабинол;
дуоканницин SA; эбселен; экомустин; эделфозин; эдреколомаб;
эфлорнитин; элемен; эмитефур; эпирубицин; эпристерид; аналог
эстрамустина; агонисты эстрогенов; антагонисты эстрогенов;
этанидазол; этопозид фосфат; экземестан; фадрозол; фазарабин;
фенретинид; филграстим; финастерид; флавопиридол; флезеластин;
флуастерон; флударабин; фтордаунорубицина гидрохлорид;
форфенимекс; форместан; фостриецин; фотемустин; гадолиния
тексафирин; нитрат галлия; галоцитабин; ганиреликс; ингибиторы
желатиназы; гемцитабин; ингибиторы глутатиона; гепсульфам;
герегулин; гексаметилена бисацетамид; гормональные
терапевтические средства; гиперицин; ибандроновую кислоту; идарубицин; идоксифен; идрамантон; илмофозин; иломастат; имидазоакридоны; имиквимод; иммуностимулирующие пептиды; ингибиторы рецептора инсулиноподобного фактора роста-1; агонисты интерферона; интерфероны; интерлейкины; йобенгуан;
иоддоксорубицин; ипомеанол, 4-, иринотекан; ироплакт;
ирсогладин; изобенгазол; изогомогаликондрин В; итасетрон;
джасплакинолид; кахалалид F; ламелларин-N триацетат; ланреотид;
лейнамицин; ленограстим; лентинана сульфат; лептолстатин;
летрозол; фактор ингибирования лейкоза; лейкоцитарный альфа-
интерферон; лейпролид + эстроген + прогестерон; лейпрорелин;
левамизол; аналоги ЛГРГ; лиарозол; аналог линейных полиаминов;
липофильный дисахаридный пептид; липофильные соединения
платины; лиссоклинамид 7; лобаплатин; ломбрицин; лометрексол;
лонидамин; лозоксантрон; ловастатин; локсорибин; луртотекан;
лютеция тексафирин; лизофиллин; литические пептиды; майтансин;
минностатин; маримастат; мазопрокол; маспин; ингибиторы
матрилизина; ингибиторы металлопротеиназы матрикса; меногарил;
мербарон; метерелин; метиониназу; метоклопрамид; ингибитор MIF;
мифепристон; милтефозин; миримостим; несовпадающую
двуцепочечную РНК; митогуазон; митолактол; аналоги митомицина;
митонафид; митотоксин - гибрид "фактор роста фибробластов-
сапорин"; митоксантрон; мофаротен; молграмостим; моноклональное
антитело хориогонадотропин человека; монофосфориллипид А +
скелетный компонент клеточной стенки микобактерий; мопидамол;
ингибитор гена множественной лекарственной устойчивости;
терапевтические средства на основе супрессора-1 множественных
опухолей; противораковый агент на основе иприта; микапероксид
В; экстракт клеточной стенки микобактерий; мириапорон; N-
ацетилдиналин; N-замещенные бензамиды; нафарелин; нагрестип;
налоксон + пентазоцин; напавин; нафтерпин; нартограстим;
недаплатин; неморубицин; неридроновую кислоту; нейтральную
эндопептидазу; нилутамид; низамицин, модуляторы оксида азота;
нитроксидный антиоксидант; нитруллин; Об-бензилгуанин;
октреотид; окиценон; олигонуклеотиды; онапристон; ондансетрон;
ондансетрон; орацин; пероральный индуктор цитокинов;
ормаплатин; озатерон; оксалиплатин; оксауномицин; аналоги
паклитаксела; производные паклитаксела; палауамин;
пальмитоилризоксин; памидроновую кислоту; панакситриол; паномифен; парабактин; пазеллиптин; пегаспаргазу; пелдезин; пентозана полисульфат натрия; пентостатин; пентрозол;
перфлуброн; перфосфамид; периллиловый спирт; феназиномицин;
фенилацетат; ингибиторы фосфатаз; пицибанил; пилокарпина
гидрохлорид; пирарубицин; пиритрексим; плацетин А; плацетин В;
ингибитор активатора плазминогена; комплексное соединение
платины; соединения платины; комплекс платина-триамин; порфимер
натрий; порфиромицин; преднизон; гестагенные агенты; пропил-
бис-акридон; простагландин J2; ингибиторы протеасом;
иммуномодулятор на основе белка А; ингибитор протеинкиназы С;
ингибиторы протеинкиназы С из микроводорослей; ингибиторы
протеинтирозинфосфатаз; ингибиторы фосфорилазы пуриновых
нуклеозидов; пурпурины; пиразолакридин; конъюгат
"пиридоксилированный гемоглобин - полиоксиэтилен"; антагонисты
raf; ралтитрексед; рамозетрон; ингибиторы
фарнезилпротеинтрансферазы ras; ингибиторы ras; ингибитор ras-
GAP; деметилированный ретеллиптин; рения Re 18 6 этидронат;
ризоксин; рибозимы; ретинамид RII; роглетимид; рохитукин;
ромуртид; рохинимекс; рубигинон В1; рубоксил; сафингол;
саинтопин; SarCNU; саркофитол; сарграмостим; имитаторы Sdi 1;
семустин; ингибитор-1, полученный из стареющих клеток;
смысловые олигонуклеотиды; ингибиторы передачи сигнала;
модуляторы передачи сигнала; одноцепочечный антиген-связывающий
белок; сизофиран; собузоксан; боркаптат натрия; фенилацетат
натрия; солверол; соматомедин-связывающий белок; сонермин;
спарфозовую кислоту; спикамицин D; спиромустин; спленопентин;
спонгистатин 1; скваламин; ингибитор стволовых клеток;
ингибиторы деления стволовых клеток; стипиамид; ингибиторы
стромелизина; сульфмозин; сверхактивный антагонист
вазоактивного интестинального пептида; сурадисту; сурамин;
свайнсонин; синтетические гликозаминогликаны; таллимустин;
тамоксифен; тамоксифена метиодид; тауромустин; тазаротен;
текогалан натрия; тегафур; теллурапирилий; ингибиторы
теломеразы; темопорфин; темозоломид; тенипозид;
тетрахлордекаоксид; тетразомин; талибластин; талидомид; тиокоралин; тромбопоэтин; имитатор тромбопоэтина; тималфазин; агонист рецептора тимопоэтина; тимотринан; тиреотропин; этилэтиопурпурин олова; тирапазамин; титаноцена дихлорид;
топотекан; топсентин; торемифен; фактор тотипотентных стволовых клеток; ингибиторы трансляции; третиноин; триацетилуридин; трицирибин; триметрексат; трипторелин; трописетрон; туростерид; ингибиторы тирозинкиназы; тирфостины; ингибиторы UBC; убенимекс; фактор ингибирования роста мочеполового синуса; антагонисты рецептора урокиназы; вапреотид; вариолин В; терапевтическое средство на основе векторной системы эритроцитарных генов; веларезол; верамин; вердины; вертепорфин; винорелбин; винксалтин; витаксин; ворозол; занотерон; зениплатин; зиласкорб; зиностатин стималамер.
Другие примеры химиотерапевтических агентов, пригодных для
использования в вирусных составах, описанных здесь, включают
противораковые вспомогательные стимулирующие агенты, включая
трициклические антидепрессанты (например, имипрамин,
дезипрамин, амитриптилин, кломипрамин, тримипрамин, доксепин, нортриптилин, протриптилин, амоксапин и мапротилин); нетрициклические антидепрессанты (например, сертралин, тразодон и циталопрам); агенты, распознающие или блокирующие ФРЭС
(например, авастин), антагонисты Са2+ (например, верапамил, нифедипин, нитрендипин и кароверин); ингибиторы кальмодулина
(например, прениламин, трифторперазин и кломипрамин);
амфотерицин В; аналоги трипаранола (например, тамоксифен),
антиаритмические препараты (например, хинидин);
антигипертензивные препараты (например, резерпин), антитела к рецепторам, например, герцептин; агенты, связывающие тиолы
(например, бутионин и сульфоксимин) и агенты, подавляющие множественную устойчивость к лекарствам, например, Cremaphor EL. Вирусные составы, описанные здесь, также можно вводить с цитокинами, например, гранулоцитарным колониестимулирующим фактором.
Как используется здесь, термин пролиферативное расстройство относится к любому клеточному заболеванию, при котором клетки пролиферируют быстрее, чем при нормальном росте ткани. Пролиферативные расстройства включают новообразования, также называемые опухолями, но не ограничиваются ими. Новообразование может включать рак поджелудочной железы, рак
молочной железы, рак головного мозга (например, глиобластому), рак легких, рак предстательной железы, рак ободочной и прямой кишки, рак щитовидной железы, рак почки, рак надпочечников, рак печени, нейрофиброматоз 1 и лейкоз, но не ограничивается ими. Новообразование может являться солидным новообразованием (например, саркомой или карциномой) или раковой опухолью, влияющей на кроветворную систему (например, лимфомой или лейкозом). Другие пролиферативные расстройства включают нейрофиброматоз, но не ограничиваются им.
Используемые здесь термины лечение, лечить или облегчение относятся к способу снижения действия заболевания или состояния или симптома заболевания или состояния. Так, в описанном способе лечение может относиться к 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%-ному снижению или облегчению тяжести установленного заболевания или состояния или симптома заболевания или состояния. Например, способ лечения рака считается лечением, если имеет место 10%-ное снижение одного или более симптомов заболевания у субъекта по сравнению с контролем. Так, снижение может составлять 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100% или любой процент снижения в пределах от 10 до 100 по сравнению с нативным или контрольным уровнями. Понятно, что лечение не обязательно относится к излечиванию или полному устранению заболевания, состояния или симптомов заболевания или состояния.
Как используется здесь, термин субъект может являться позвоночным, конкретнее, млекопитающим (например, человеком, лошадью, свиньей, кроликом, собакой, овцой, козой, приматом, не являющимся человеком, коровой, кошкой, морской свинкой или грызуном), рыбой, птицей или рептилией или амфибией. Указанный термин не указывает на конкретный возраст или пол. Таким образом, указанный термин охватывает взрослых и новорожденных субъектов, как самцов, так и самок. Как используется здесь, термины пациент или субъект могут использоваться на равных основаниях и относиться к субъекту, страдающему заболеванием или расстройством. Термин пациент или субъект включает субъектов-людей и животных.
В настоящей заявке приведены ссылки на различные публикации. Описание этих публикаций полностью включено в настоящую заявку посредством ссылок.
Описан ряд аспектов. В то же время следует понимать, что возможны их различные модификации. Более того, если описана характерная особенность или этап, их можно объединить с любой другой характерной особенностью или этапом, описанным в настоящем документе, даже если указанная комбинация не указана явным образом. Соответственно, другие аспекты находятся в рамках формулы изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Получение невирусной композиции
Композиции 1 и 2 получили путем смешивания компонентов, показанных в Таблице 1.
Использованный PBS содержал 0,20 мг/мл хлорида калия, 8,00 мг/мл хлорида натрия, 0,24 мг/мл одноосновного фосфата калия и 2,71 мг/мл семиводного двухосновного фосфата натрия. Пример 2: Получение жидкого вирусного состава Контрольный состав реовируса (контрольный состав) получали путем предоставления реовируса в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS) и дальнейшего разбавления смеси
дополнительным количеством PBS с целью получения желательного общего титра вирусных частиц ЗхЮ10 TCIDso/ъш. Состав 1 получали путем предоставления реовируса в PBS и разбавления смеси композицией 1 с целью получения желательного общего титра вирусных частиц ЗхЮ10 TCIDso/ъш. Состав 2 получали путем предоставления реовируса в PBS и разбавления смеси композицией 2 с целью получения желательного общего титра вирусных частиц ЗхЮ10 TCID5o/Mn. Коэффициенты разбавления для каждого из составов определяли с помощью аналитической ВЭЖХ.
Пример 3: Хранение жидкого вирусного состава
Титры инфекционных частиц (TCIDso/Mn) для Контрольного состава, Состава 1 и Состава 2, полученные в Примере 2, определяли при температуре окружающей среды. Составы хранили в течение 0, 3, 6,5, 12 и 18,5 месяцев при различных температурах, в том числе 37 °С, температуре окружающей среды, температуре в диапазоне от 2°С до 8°С, -20°С, -80°С. После хранения определяли значения TCID50 для каждого из составов при различных температурах в трех повторностях. Средние значения для Контрольного состава, Состава 1 и Состава 2 показаны на Фигуре 1. Восстановление титров инфекционных частиц для Контрольного состава, Состава 1 и Состава 2 показаны на Фигуре 2. Вирусные титры нормировали для учета изменчивости контрольных титров между анализами. Нормированные общие вирусные титры, измеренные с помощью ВЭЖХ, показаны на Фигуре 3 для Контрольного состава, на Фигуре 4 для Состава 1 и на Фигуре 5 для Состава 2.
Составы 1 и 2, хранившиеся при 2-8°С, демонстрировали стабильно меньшую потерю инфекционности по сравнению с Контрольным составом через 6,5, 12 и 18,5 месяцев. Составы 1 и 2, хранившиеся при -20°С, также демонстрировали стабильно меньшую потерю инфекционности по сравнению с Контрольным составом через 6,5, 12 и 18,5 месяцев. При -80°С Контрольный состав демонстрировал значительное снижение инфекционного титра через 18,5 месяцев, в то время как Составы 1 и 2 оставались стабильными практически без потери через 18,5 месяцев.
Пример 4: Неатретирующие вирусные составы
Образцы контрольного состава и состава 1, как описано выше, тестировали на содержание твердых частиц, используя подсчет количества частиц в режиме светотени USP <788> Light Obscuration Particle Count Test. Результаты, показанные в Таблице 2, указывают, что вирусные составы, полученные при использовании композиции 1, содержали значительно меньше частиц, чем вирусные составы, полученные с помощью контрольного состава.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Вирусный состав, включающий:
(а) очищенный вирус; и
(б) невирусную композицию, включающую:
(1) маннит;
(2) сорбит в концентрации менее 3% от массы невирусной композиции;
(3) гистидин;
(4) Мд2~; и
(5) жидкий носитель,
где невирусная композиция, за исключением жидкого носителя, практически не содержит одновалентных катионных солей.
2. Состав по п. 1, отличающийся тем, что объединенная
концентрация маннита и сорбита составляет менее 10 масс.% от
массы невирусной композиции.
3. Вирусный состав, включающий:
(а) очищенный вирус; и
(6) невирусную композицию, включающую:
(1) маннит;
(2) сорбит;
(3) гистидин;
(4) Мд2~; и
(5) жидкий носитель,
где концентрация Сахаров в невирусной композиции составляет менее 7,5 масс.% от массы невирусной композиции.
4. Состав по п. 3, отличающийся тем, что объединенная концентрация маннита и сорбита составляет менее 7 масс.% от массы невирусной композиции.
5. Состав по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что невирусная композиция дополнительно содержит неионогенное поверхностно-активное вещество.
6. Состав по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что вирусный состав практически не содержит Zn2+.
7. Состав по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что вирусный состав практически не содержит трегалозы.
4.
8. Вирусный состав, включающий:
(а) очищенный вирус; и
(б) невирусную композицию, включающую:
(1) сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции
(2) Мд2~;
(3) неионогенное поверхностно-активное вещество; и
(4) жидкий носитель,
где невирусная композиция, за исключением жидкого носителя, практически не содержит одновалентных катионных солей, полиолов, не являющихся сахарозой, и карбоксилатов.
9. Вирусный состав, состоящий главным образом из:
(а) очищенный вирус; и
(б) невирусную композицию, включающую:
(1) сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции
(2) Мд2~;
(3) неионогенное поверхностно-активное вещество; и
(4) жидкий носитель.
10. Состав по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанный вирус является онколитическим вирусом.
11. Состав по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанный вирус является необолочечным вирусом.
12. Состав по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что указанный вирус является реовирусом.
13.
Состав по п. 12, отличающийся
тем,
что
реовирус
является
реовирусом млекопитающих.
14 .
Состав по п. 13, отличающийся
тем,
что
реовирус
млекопит
ающих является реовирусом человека.
15.
Состав по п. 14, отличающийся
тем,
что
реовирус
человека
является вирусом 3 серотипа.
16.
Состав по п. 15, отличающийся
тем,
что
вирус 3
серотипа
является штаммом Dearing.
17 .
Состав по п. 12, отличающийся
тем,
что
реовирус
является
рекомбинантным или химерным реовирусом.
18 .
Состав по п. 12, отличающийся
тем,
что
реовирус
является IDAC #190907-01.
19. Состав по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что Мд2+ присутствует в виде хлорида магния.
20. Состав по любому из пп. 5, 8 или 9, отличающийся тем, что неионогенное поверхностно-активное вещество является полисорбатом 80.
21. Состав по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что жидкий носитель является водным носителем.
22. Состав по п. 21, отличающийся тем, что водный носитель является водой.
23. Состав по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре, приблизительно равной температуре окружающей среды.
24. Состав по любому из пп. 1-23, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре, приблизительно равной температуре окружающей среды, по меньшей мере, в течение дня.
25. Состав по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре приблизительно 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, трех месяцев.
26. Состав по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре приблизительно 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, шести месяцев.
27. Состав по любому из пп. 0-22, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре приблизительно 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, двенадцати месяцев.
28. Состав по любому из пп. 0-22, отличающийся тем, что вирусный состав стабилен при температуре приблизительно 4 °С или ниже в течение, по меньшей мере, восемнадцати месяцев.
29. Состав по любому из пп. 1-28, отличающийся тем, что пригоден для разбавления перед введением.
30. Способ получения вирусного состава, включающий этапы:
(а) обеспечения вируса; и
(б) объединения вируса и невирусной композиции,
включающей:
(1) маннит;
(2) сорбит в концентрации менее 3% от массы
(1)
невирусной композиции;
(3) гистидин;
(4) Мд2~; и
(5) жидкий носитель,
где невирусная композиция, за исключением жидкого носителя, практически не содержит одновалентных катионных солей,
с целью образования вирусного состава.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что объединенная
концентрация маннита и сорбита в невирусной композиции
составляет менее 10 масс.% от массы невирусной композиции.
32. Способ получения вирусного состава, включающий этапы:
(а) обеспечения вируса; и
(6) объединения вируса и невирусной композиции,
включающей:
(1) маннит;
(2) сорбит;
(3) гистидин;
(4) Мд2~; и
(5) жидкий носитель,
где концентрация Сахаров в невирусной композиции составляет менее 7,5 масс.% от массы невирусной композиции, с целью образования вирусного состава.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что объединенная концентрация маннита и сорбита в невирусной композиции составляет менее 7 масс.% от массы невирусной композиции.
34. Способ по любому из пп. 30-33, отличающийся тем, что дополнительно включает добавление неионогенного поверхностно-активного вещества в невирусную композицию.
35. Способ по любому из пп. 30-34, отличающийся тем, что вирусный состав практически не содержит Zn2+.
36. Способ по любому из пп. 30-35, отличающийся тем, что вирусный состав практически не содержит трегалозы.
37. Способ получения вирусного состава, включающий этапы:
(а) обеспечения вируса; и
(6) объединения вируса и невирусной композиции,
включающей:
(1) сахарозу в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции
(2) Мд2~;
(3) неионогенное поверхностно-активное вещество; и
(4) жидкий носитель,
где невирусная композиция, за исключением жидкого носителя, практически не содержит одновалентных катионных солей, полиолов, не являющихся сахарозой, и карбоксилатов,
с целью образования вирусного состава.
38. Способ получения вирусного состава, включающий этапы:
(а) обеспечения вируса; и
(б) объединения вируса и невирусной композиции, состоящей
главным образом из:
(1) сахарозы в концентрации менее 5% от массы невирусной композиции
(2) Мд2~;
(3) неионогенного поверхностно-активного вещества; и
(4) жидкого носителя,
с целью образования вирусного состава.
39. Способ по любому из пп. 30-38, отличающийся тем, что дополнительно включает разбавление вирусного состава для вливания.
40. Способ по любому из пп. 30-39, отличающийся тем, что указанный вирус является онколитическим вирусом.
41. Способ по любому из пп. 30-39, отличающийся тем, что указанный вирус является необолочечным вирусом.
42. Способ по любому из пп. 30-41, отличающийся тем, что указанный вирус является реовирусом.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что реовирус является реовирусом млекопитающих.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что реовирус млекопитающих является реовирусом человека.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что реовирус человека является вирусом 3 серотипа.
46. Способ по п. 45, отличающийся тем, что вирус 3
39.
серотипа является штаммом Dearing.
47. Способ по п. 42, отличающийся тем, что реовирус является рекомбинантным или химерным реовирусом.
48. Способ по п. 42, отличающийся тем, что реовирус является IDAC #190907-01.
49. Способ по любому из пп. 30-48, отличающийся тем, что Мд2+ присутствует в виде хлорида магния.
50. Способ по любому из пп. 34, 37 или 38, отличающийся тем, что неионогенное поверхностно-активное вещество является полисорбатом 80.
51. Способ по любому из пп. 30-50, отличающийся тем, что жидкий носитель является водным носителем.
52. Способ по п. 51, отличающийся тем, что водный носитель является водой.
53. Вирусный состав, полученный в соответствии со способом по любому из пп. 3 0-52.
54. Способ консервации или стабилизации вируса,
включающий:
получение вирусного состава по любому из пп. 1-2 8; и хранение вирусного состава.
55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что вирус хранят при температуре, равной температуре окружающей среды или ниже.
56. Способ по п. 54 или 55, отличающийся тем, что указанная температура является температурой окружающей среды.
57. Способ по п. 54 или 55, отличающийся тем, что температура составляет от 2°С до 8°С.
58. Способ по п. 57, отличающийся тем, что температура составляет 4°С.
59. Способ по п. 54 или 55, отличающийся тем, что указанная температура составляет -20°С.
60. Способ по п. 54 или 55, отличающийся тем, что температура составляет от -60°С до -80°С.
61. Способ получения неагрегирующего вирусного состава, включающий получение вирусного состава по любому из пп. 0-0.
62. Способ по п. 0, отличающийся тем, что состав пригоден для введения путем парентерального вливания или инъекции.
По доверенности
Ijt = 18,5м; -80 ?С ""jc = 6,5м; -20 ?С j|§t = 18,5м; -20 ?С \ ft = 6,5м; 2-8 ?С
It = 18,5м; 2-8 ?С
jt = Зм; ком. т-ра [. Jt = 6,5м; ком. т-ра jt = 12м; ком. т-ра
1.40Е+11Г 1.20E+1tf 1.00Е+11-}-
8.00Е+10-
Ь да(tm) f I
^ б.ооЕ+m f
гг |
I- I
? 4,00Е+10|-> < j
XI I
I I
1 2.0GE+10i-
zr i ^ s
-(c)¦ I
i O.OE+OOi
jM I I : j I \ ''/¦'¦¦".
Контроль
Состав 1
5 ^ff*
j4 ? H \ j "¦¦
\ \ \ \ \
Состав 2
о oo 00
¦¦jt = 0; ком. т-ра t = Зм; -20 ?С
;t = 12м; -20 ?С t = Зм; 2-8 ?С t = 12м; 2-8 ?С
|_ft = 18,5м; -80 ?С \JX = 6,5м; -20 ?С jKjt = 18,5м; -20 ?С
LJ1
it = 6,5м; 2-8 ?С It = 18,5м; 2-8 ?С
250%
200%
; ::
t = Зм; ком. т-ра j^Jt = 6,5м; ком. т-ра t = 12м; ком. т-ра
I-о го т
X XI
I I
ГГ II
m О
I ш с; m О
го I-о о О СО
- - ssss-rA 4чялл5 - - - hfs/flr- - -'sss/ts- - -
Контроль
•hs/sA1 i^ffM^~$rYmЈ 4wA/f}, ''/s/s/S ЙЙЯ"/5*
Состав 1
Состав 2
iвремя = О
1.00Е+12
'?время = 2 нед. 9.00Е+11
| ! время = 1 мес.
Lj время = 2 мес. 8.00Е+11
¦\ время = 3 мес. ^
|Увремя = 6,5мес. Д 7.0QE+11
: время = 12 мес. ^
:LJвремя = 18,5 мес. щ 6.00Е+11
го с;
-е-о
о. I
5.00Е+11
4.00Е+11-
З.ООЕ+11
2.00Е+11
1.00Е+11-
О.ООЕ+00
-20°С
2 "8'С
комнатная температура
Температура хранения
л _
время = О
| "1время = 2 нед.
;время = 1 мес.
|время = 2 мес.
,время = 3 мес.
|время = 6,5 мес.
\ ;время = 12 мес. ^
1*(tm)хвремя = 18,5 мес. щ
- i
го с;
-е-о
о. I
1.20Е+12
1.00Е+12-
8.С0Е+П
6.0QE+11
4.00Е+11-
2.00E+11J \
О.О0Е+0Ф
2"Й°(] комнатная v температура Температура хранения
: время = 6
f J время = 2 нед.
• время = 1 мес. | ,J время = 2 мес.
: время = 3 мес.
время = 6,5 мес.
время = 12 мес.
О время = 18,5 мес.
0) I О
140Е+12
-80 ^ С
-20Х
2-В'С
комнатная температура
Температура хранения
37°С
(19)
(19)
(19)
Фиг. 1
Фиг. 1
Фиг. 1
Фиг. 1
Фиг. 1
Фиг. 1
Фиг. 2
Фиг. 2
Фиг. 2
Фиг. 2
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 4
Фиг. 4
Фиг. 4
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 5