|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[**] Представлены соединения, характеризующиеся inter alia хорошей продолжительностью действия, высокой активностью и/или удобными режимами дозирования, включая введение один раз в неделю. Соединения представляют собой сконструированные полипептиды, которые содержат домен связывания с альбумином в комбинации с одним или несколькими биологически активными полипептидами. Также представлены фармацевтические композиции и способы лечения заболеваний и нарушений, включая липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гитопаламическую аменорею, болезнь Альцгеймера, недостаточность лептина, жировую болезнь печени или сахарный диабет (включая I тип и II тип). Дополнительные заболевания и нарушения, которые могут поддаваться лечению с помощью описанных в настоящем документе соединений и способов включают в себя неалкогольный стеатогепатит (NASH) и неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Представлены соединения, характеризующиеся inter alia хорошей продолжительностью действия, высокой активностью и/или удобными режимами дозирования, включая введение один раз в неделю. Соединения представляют собой сконструированные полипептиды, которые содержат домен связывания с альбумином в комбинации с одним или несколькими биологически активными полипептидами. Также представлены фармацевтические композиции и способы лечения заболеваний и нарушений, включая липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гитопаламическую аменорею, болезнь Альцгеймера, недостаточность лептина, жировую болезнь печени или сахарный диабет (включая I тип и II тип). Дополнительные заболевания и нарушения, которые могут поддаваться лечению с помощью описанных в настоящем документе соединений и способов включают в себя неалкогольный стеатогепатит (NASH) и неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
(21) 201390497 (13) A1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.09.30
(22) Дата подачи заявки 2011.09.28
(51) Int. Cl.
C07K14/00 (2006.01) A61K38/22 (2006.01)
(54) СКОНСТРУИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕСЯ УВЕЛИЧЕННОЙ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬЮ ДЕЙСТВИЯ
(31) 61/387,402; 61/422,091
(32) 2010.09.28; 2010.12.10
(33) US
(86) PCT/US2011/053786
(87) WO 2012/050930 2012.04.19
(88) 2012.06.14
(71) Заявитель:
АМИЛИН ФАРМАСЬЮТИКАЛС,
ЛЛК; АСТРАЗЕНЕКА
ФАРМАСЬЮТИКАЛС ЛП (US)
(72) Изобретатель:
Эриксон Мэри, Литзингер Дэвид С., Гуо Зиджиан, Рот Джонатан Дэвид, Гхош Сумитра С. (US)
(74) Представитель: Лыу Т.Н. (RU)
(57) Представлены соединения, характеризующиеся inter aliaхорошей продолжительностью действия, высокой активностью и/или удобными режимами дозирования, включая введение один раз в неделю. Соединения представляют собой сконструированные полипептиды, которые содержат домен связывания с альбумином в комбинации с одним или несколькими биологически активными полипептидами. Также представлены фармацевтические композиции и способы лечения заболеваний и нарушений, включая липодистрофию, дис-липидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гитопаламическую аменорею, болезнь Альцгеймера, недостаточность лептина, жировую болезнь печени или сахарный диабет (включая I тип и II тип). Дополнительные заболевания и нарушения, которые могут поддаваться лечению с помощью описанных в настоящем документе соединений и способов включают в себя неалкогольный стеатогепатит (NASH) и неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона.
СКОНСТРУИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕСЯ УВЕЛИЧЕННОЙ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬЮ ДЕЙСТВИЯ
ОПИСАНИЕ
Ссылки на родственные заявки
[0001] По данной заявке испрашивается приоритет по заявке на выдачу патента США №. 61/387402, поданной 28 сентября 2010 года, и по заявке на выдачу патента США №. 61/422091, поданной 10 декабря 2010 года, описания которых включены в настоящий документе посредством ссылок.
Перечень последовательностей
[0001.1] Заявка, рассматриваемая в данный момент, содержит перечень последовательностей, который представлен в формате ASCII через EFS-Web и включен, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия в формате ASCII, созданная 27 октября 2011 года, называется 1317W02.txt и имеет размер 273.524 байт.
Уровень техники
[0002] Настоящая заявка относится к соединениям, характеризующимся оптимальной продолжительностью действия, высокой эффективностью и/или удобными режимами дозирования, включая пероральное введение, и к способу их применения. В настоящем документе описаны полипептиды, которые несут в себе связывающий альбумин домен в комбинации с биологически активным пептидом. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что поскольку сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, могут связываться с альбумином, данные соединения могут депонироваться (например, могут связываться с альбумином), в то время как находятся в кровообращении, приводя к увеличенной продолжительности действия, например, вследствие уменьшения почечного клиренса и/или деградации. Заболевания, поддающиеся такому лечению, включают в себя липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, ожирение, избыточную массу тела, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени, сахарный диабет (включая тип
I и тип II), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD), метаболический синдром X, болезнь Хантингтона или их сочетание. [0003] Существует необходимость в создании полипептидов, применимых при описанных выше метаболических заболеваниях, состояниях и нарушениях. Таким образом, цель настоящего изобретения заключается в том, что предложить сконструированные полипептиды с увеличенным периодом полувыведения, применимые для лечения указанных выше состояний, и способы их получения и применения.
[0004] Каждый патент, патентная заявка и публикация, цитируемая в настоящем документе, таким образом, включена в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях.
[0005] Предлагаются сконструированные полипептидные соединения,
характеризующиеся аффинностью связывания в отношении альбумина и дополнительным терапевтическим применением. Соединения представляют собой сконструированные полипептиды, которые содержат полипептид связывающего альбумин домена (ABD), способного связываться с альбумином, и полипептид гормонального домена (HD), в котором полипептиды HD могут быть биологически активны и могут проявлять благоприятную биологическую реакцию при ковалентной связи с ABD. Любые из полипептидов ABD или HD, описываемых в настоящем документе, могут, необязательно, ковалентно связываться с сконструированным полипептидом посредством линкера L, например, L1, как описано в настоящем документе. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что поскольку сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, могут связываться с альбумином, соединения могут депонироваться у субъекта, приводя к увеличенной продолжительности действия у субъекта. [0006] Согласно первому аспекту представлен описанный в настоящем документе сконструированный полипептид. Сконструированный полипептид включает в себя полипептид домена связывания с альбумином (ABD) и гормональный домен (HD1). Гормональный домен включает в себя полипептид, который представляет собой лептин, аналог лептина или его активный фрагмент.
[0007] В другом аспекте предлагается способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, нуждающегося в лечении. Способ охватывает введение сконструированного полипептида, как описано в настоящем документе, субъекту.
[0008] В еще одном аспекте предлагается фармацевтическая композиция, которая включает в себя сконструированное полипептидное соединение, описываемое в настоящем документе, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем. [0009] Еще одним аспектом являются полинуклеотиды, кодирующие сконструированный полипептид, и их промежуточные продукты, экспрессирующие векторы, несущие такие полинуклеотиды, клетки-хозяева, экспрессирующие такие полинуклеотиды, и способы для их экспрессии, синтеза, посттрансляционных модификаций и выделения.
Краткое описание чертежей
[0010] На фиг. 1А-1В проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на потребление пищи и массу тела при введении тощим крысам, как описано в примере 3. Фигура 1А: потребление пищи. Фигура 1В: изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель). Легенда: инертный носитель (квадрат); Соединение 1 в дозе 2,6 мг/кг (треугольник вершиной вверх); Соединение 2 в дозе 2,7 мг/кг (треугольник вершиной вниз); Соединение 4 в дозе 2,7 мг/кг (ромб); Соединение С2 в дозе 10 мг/кг (круг).
[ООН] На фиг. 2А-2В проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на потребление пищи и массу тела при введении тощим крысам, как описано в примере 4. Фиг. 2А: потребление пищи. Фиг. 2В: изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель). Легенда: инертный носитель (квадрат); Соединение 2 в дозе 0,3 мг/кг (треугольник вершиной вверх); Соединение 2 в дозе 1,0 мг/кг (треугольник вершиной вниз); Соединение 2 в дозе 3,0 мг/кг (ромб).
[0012] На фиг. ЗА-ЗВ проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на потребление пищи и массу тела при введении тощим крысам, как описано в примере 5. Фиг. ЗА: потребление пищи. Фиг. ЗВ: изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель). Легенда: инертный носитель (квадрат); Соединение С2 в дозе 1,1 мг/кг (круг); Соединение С2 в дозе 3,3 мг/кг (квадрат); Соединение С2 в дозе 11,1 мг/кг (треугольник вершиной вверх). [0013] На фиг. 4А-4В проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов и контрольного соединения на
потребление пищи и массу тела при введении тощим крысам, как описано в примере 6. Фиг. 4А: потребление пищи. Фиг. 4В: изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель). Легенда: инертный носитель (квадрат); Соединение С6 в дозе 2,2 мг/кг (треугольник вершиной вниз).
[0014] На фиг. 5 проиллюстрированы эффекты еженедельного введения SEQ ID NO: 54 на массу тела (в % от исходного уровня) при введении крысам DIO, как описано в примере 7. Легенда: инертный носитель (квадрат); Соединение 2 в дозе 1,3 мг/кг при инъекции (треугольник вершиной вверх).
[0015] На фиг. 6А-6В проиллюстрированы детекция и количественное определение содержания в плазме SEQ ID NO: 33 (фиг. 6А) и SEQ ID NO: 54 (фиг. 6В) при введении крысам DIO, как описано в примере 8.
[0016] На фиг. 7 проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе указанных сконструированных полипептидов на изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении тощим крысам, как описано в примере 9.
[0017] На фиг. 8 проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе указанных сконструированных полипептидов на изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении тощим крысам, как описано в примере 10.
[0018] На фиг. 9А-9В проиллюстрированы эффекты однократного введения описанных в настоящем документе указанных сконструированных полипептидов на потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении тощим крысам, как описано в примере 11. Фиг. 9А: потребление пищи. Фиг. 9В: изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель).
[0019] На фигуре 10 проиллюстрированы эффекты однократного введения указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении тощим крысам, как описано в примере 12.
[0020] На фигурах ПА - 11В проиллюстрированы эффекты однократного введения указанных сконструированных полипептидов, описанных в настоящем документе, на
суммарное потребление пищи (фигура ПА) и процентное изменение массы тела (фигуры 11В и 11С) при введении тощим крысам, как описано в примере 13.
[0021] На фиг. 12 проиллюстрирована функциональная активность лептина, созданная Соединением 2 в присутствии альбумина, как описано в примере 15.
[0022] На фиг. 13 проиллюстрирован пролонгированный профиль зависимости концентрации в плазме от времени Соединения 2 у крыс после подкожной инъекции согласно примеру 16.
[0023] На фиг. 14 проиллюстрирован пролонгированный профиль зависимости концентрации в плазме от времени Соединения 15 у крыс после подкожной инъекции согласно примеру 16.
[0024] На фиг. 15 проиллюстрированы эффекты однократного введения указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении тощим крысам (фиг. 15А) и крысам ZDF (фиг. 15В), как описано в примере 17.
[0025] На фиг. 16 проиллюстрированы эффекты сокращения дозы путем введения один раз в неделю Соединения 2 на массу тела (% от исходного уровня) при введении тощим крысам, как описано в примере 18.
[0026] На фиг. 17 представлен график, изображающий эффект на массу тела от введения лептина (125 мкг/кг/день) и амилина (1500 мкг/кг/день), либо отдельно, либо в комбинации, в двух группах крыс: одна группа очень тучных крыс и другая группа, ограниченная по калориям до диапазона умеренного ожирения.
[0027] На фиг. 18А представлен график, изображающий эффект на массу тела от введения Соединения 2 (120 нмоль/кг) и введенного с помощью инфузии крысиного амилина (50 мкг/кг/день), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель. На фиг. 18В представлен график, изображающий эффект на массу тела от введения Соединения 2 (120 нмоль/кг) и PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-крысиного амилина (SEQ ID NO: 148) (125 нмоль/кг), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель.
[0028] На фиг. 19 проиллюстрирован эффект на потребление пищи (фигура 19А) и массу тела (фигура 19В) от введения Соединения 15 (120 нмоль/кг) и амилина (50 мкг/кг/день), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель.
[0029] На фиг. 20 представлен график, изображающий эффект на массу тела от введения Соединения 15 (120 нмоль/кг) и PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-крысиного амилина (SEQ ID NO: 148) (125 нмоль/кг), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель.
[0030] На фиг. 21А проиллюстрирован эффект на массу тела от введения лептина и амилина, либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель, у крыс с умеренным ожирением. На фиг. 21В изображено отсутствие эффекта на массу тела от введения лептина и амилина, либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель, у крыс с тяжелым ожирением. На фиг. 21С изображен эффект на массу тела введения Соединения 2 (120 нмоль/кг) и PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-KpbiCHHoro амилина (SEQ ID NO: 148) (125 нмоль/кг), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель, у крыс с тяжелым ожирением.
[0031] На фиг. 22 проиллюстрирован эффект на массу тела от введения: (А) Соединения 15 (120 нмоль/кг) или (В) Соединения 2 (120 нмоль/кг) и амилина (50 мкг/кг/день), либо отдельно, либо в комбинации в течение четырех недель, у крыс с тяжелым ожирением. [0032] На фиг. 23 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе конструированных полипептидов на содержание глюкозы в крови при введении мышам с индуцированным STZ (стрептозоцином )T1DM (сахарным диабетом 1 типа), как описано в примере 30.
[0033] На фиг. 24 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на гемоглобин А1С при введении мышам с индуцированным STZ T1DM, как описано в примере 30.
[0034] На фиг. 25 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов на потребление пищи и массу тела при введении мышам с индуцированным STZ T1DM, как описано в примере 30. [0035] На фиг. 26 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов, с низкой дозой инсулина или без нее, на содержание глюкозы в крови при введении мышам с индуцированным STZ T1DM, как описано в примере 30.
[0036] На фиг. 27 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов, с низкой дозой инсулина или без нее, на
гемоглобин А1С при введении мышам с индуцированным STZ T1DM, как описано в примере 30.
[0037] На фиг. 28 проиллюстрированы эффекты указанных описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов, с низкой дозой инсулина или без нее, на потребление пищи (%, скорректированный на инертный носитель) и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) при введении мышам с индуцированным STZ T1DM, как описано в примере 30.
Подробное описание изобретения I. Определения
[0038] Термины "ожирение" и "избыточная масса тела" относятся к млекопитающим, имеющим более высокую массу тела, чем обычно ожидаемая, и они могут быть определены, например, по физическому состоянию, индексу массы тела (ВМГ), как известно в данной области, по соотношениям окружности талии к окружности бедер, толщине кожной складки, окружности талии и тому подобное. Центры контроля и профилактики заболеваний (CDC) определяют наличие избыточной массы тела, когда у взрослого человека ВМГ от 25 до 29,9; и определяют наличие ожирения, когда у взрослого человека ВМГ от 30 или выше. Существуют дополнительные показатели для определения ожирения. Например, CDC установили, что человек с соотношением окружности талии к окружности бедра, больше, чем 1,0, характеризуется избыточной массой тела. [0039] Термин "безжировая масса тела" обозначает массу тела без жира, то есть, общая масса тела за вычетом массы жировой ткани представляет собой безжировую массу тела. Безжировую массу тела можно измерить такими способами, как гидростатическое взвешивание, применение компьютеризированных камер, двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия, применение калиперов для измерения кожных складок, магнитно-резонансная томография (MRI) и биоэлектрический импедансный анализ (BIA), как известно в данной области.
[0040] Термин "млекопитающее" обозначает теплокровных животных, которые, как правило, имеют мех или волосы, которые дают жизнь своему потомству при родах, и которые вскармливают своё потомство молоком. Млекопитающие включают в себя людей; домашних животных (например, собак, кошек); сельскохозяйственных животных
(например, коровы, лошади, овцы, свиньи, козы); диких животных; и тому подобное. В одном из вариантов осуществления млекопитающее представляет собой особь женского пола. В одном из вариантов осуществления млекопитающее является женщиной. В одном из вариантов осуществления млекопитающее представляет собой кошку или собаку. В одном из вариантов осуществления млекопитающее представляет собой страдающее сахарным диабетом млекопитающее, например, человека, страдающего сахарным диабетом 2 типа. В одном из вариантов осуществления млекопитающее представляет собой млекопитающее, страдающее сахарным диабетом тучных, например, страдающее ожирением млекопитающее с сахарным диабетом второго типа. Термин "субъект" в контексте способов, описываемых в настоящем документе, относится к млекопитающему. [0041] Термин "фрагмент" в контексте полипептидов обозначает в настоящем документе в общепринятом химическом смысле часть полипептида. Например, фрагмент может быть результатом N-концевой делеции или С-концевой делеции одного или нескольких остатков исходного полипептида, и/или фрагмент может быть результатом внутренней делеции одного или нескольких остатков исходного полипептида. Термин "фрагмент" в контексте антитела обозначает часть антитела, которое может быть связано с биологически активной молекулой для регуляции растворимости, распределения внутри субъекта и тому подобное. Например, описанный в настоящем документе лептин А200 представляет собой конъюгат Fc-фрагмента антитела с лептином, известный из предшествующего уровня техники. См., например, W098/28427 и US2007/002084. Термин "исходный" в контексте полипептидов в обычном смысле относится к полипептиду, который служи в качестве структуры сравнения до модификации, например, вставки, делеции и/или замены. Термин "конъюгат" в контексте сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, относится к ковалентной связи между составляющими полипептидами, например, ABD, HD1 и тому подобное. Термин "слитый" в контексте сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, относится к ковалентной связи между составляющими полипептидами, например, ABD, HD1 и тому подобное, посредством одной из или обеих концевых амино- или карбоксифункциональной групп пептидного остова. Сконструированные полипептиды можно изготовить синтетически или рекомбинантно. Типично, слияния проводят, используя рекомбинантную биотехнологию,
однако, его можно также достичь химическим синтезом и способами конъюгации, известными из предшествующего уровня техники.
[0042] Термин "аналог", используемый в настоящем документе, в контексте полипептидов обозначает соединение, которое содержит вставки, делеции и/или замены аминокислот, относительно исходного соединения. Аналог может характеризоваться лучшей стабильностью, растворимостью, эффективностью, временем полужизни и тому подобным. В некоторых вариантах осуществления аналог представляет собой соединение, характеризующееся, по меньшей мере, 50%, например 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже большей идентичностью последовательности в отношении исходного соединения.
[0043] Термины "идентичность", "идентичность последовательности" и тому подобное в контексте сравнения двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидов обозначают две или более последовательности или подпоследовательности, которые являются одинаковыми или содержат определенный процент аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми (то есть, приблизительно 50% идентичности, предпочтительно 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичности на определенном участке при сравнении и выравнивании для максимального соответствия на протяжении окна сравнения или специально выделенного участка), как определяют, применяя алгоритмы сравнения последовательностей, как известно в данной области, например BLAST или BLAST 2,0. Данное определение включает в себя последовательности, которые содержат делеции и/или присоединения, а также последовательности, которые содержат замены, а также, встречающиеся в природе, например, полиморфные или аллельные варианты, и созданные человеком варианты. В предпочтительных алгоритмах, производится подсчет пропусков и тому подобного, как известно в данной области. Для сравнения последовательности, типично, одна последовательность выступает в качестве последовательности сравнения, с которой сравниваются исследуемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательности исследуемые последовательности и последовательность сравнения вводят в компьютер, при необходимости определяют координаты подпоследовательности и устанавливают параметры программы алгоритма для последовательности. Предпочтительно, можно использовать параметры программы по
умолчанию или можно установить альтернативные параметры. Алгоритм сравнения последовательности затем вычисляет процент идентичность последовательности для исследуемых последовательностей относительно последовательности сравнения на основе параметров программы. Оптимальное выравнивание последовательности при сравнении можно проводить, например, посредством алгоритма локальной гомологии Смита и Уотермана, \98\,Adv. Appl. Math. 2.482, алгоритма гомологичного выравнивания Нидлмана и Вунша, 1970, J. Mol. Biol. 48:443, способа поиска сходства Пирсона и Липмана, 1988, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, при помощи компьютерной реализации данных алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), или посредством ручного выравнивания и визуальной проверки. Смотри, например, Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al, eds. 1995 приложение)). Предпочтительные примеры алгоритмов, которые подходят для определения процента идентичности последовательности и сходства последовательности, включают в себя алгоритмы BLAST и BLAST 2,0, которые описаны у Altschul et al, 1977, Nuci. Acids Res. 25:3389-3402 и Altschul et al, 1990, J. Mol. Biol. 215:403410. BLAST и BLAST 2,0 применяют, как известно в данной области, для определения процента идентичности последовательности нуклеиновых кислот и белков по изобретению. Программное обеспечение для проведения анализов BLAST является общедоступным через веб-сайт National Center for Biotechnology Information. Данный алгоритм охватывает первоначальную идентификацию пар последовательностей с максимальным сходством (HSP), определяя короткие слова длиной W в последовательности запроса, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторым положительным пороговым оценкам Т при выравнивании со словом такой же длины в последовательности из базы данных. Т обозначают в качестве порога оценки соседнего слова (Altschul et al., Id.). Данные первоначальные совпадения соседних слов действуют как начальная точка для инициализации поиска, чтобы обнаружить более длинные их содержащие HSP. Совпадения слов продлевается в обоих направлениях по каждой последовательности по мере того, как возрастает совокупная оценка выравнивания. Совокупные оценки вычисляют, используя, например, для нуклеотидных последовательностей параметры М (вознаграждающая оценка для пары совпавших остатков; всегда > 0) и N (штрафная оценка за несовпадающие остатки; всегда < 0). Для аминокислотных последовательностей, для вычисления
совокупной оценки применяют матрицу замен. Продление совпадений слов в каждом направлении останавливается, если: совокупная оценка выравнивания уменьшается на величину X от его максимально достигнутого значения; совокупная оценка приближается к нулю или ниже, вследствие накопления одного или нескольких выравниваний остатков с отрицательной оценкой; или если достигли конца последовательности. Параметры алгоритма BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программу BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) применяют , как установлено по умолчанию с длиной слова (W) 11, ожиданием (Е) 10, М=5, N=-4 и со сравнением обеих нитей. Для аминокислотных последовательностей, применяют программу BLASTP, как установлено по умолчанию с длиной слова 3 и ожиданием (Е) 10 и матрицей замен BLOSUM62 (смотри Henikoff & Henikoff, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915), выравнивание (В) 50, ожидание (E) 10, M=5, N=-4, и сравнение обеих нитей. [0044] Термин "приблизительно" в контексте численного значения обозначает +/- 10% от численного значения, если только явно не указано иное.
[0045] Термины "пептид" и "полипептид" в контексте компонентов сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, являются синонимичными.
П. Соединения
[0046] Согласно первому аспекту представлены сконструированные полипептидные соединения, которые включают в себя полипептид домена связывания с альбумином (ABD) и по меньшей мере один полипептидный гормональный домен (HD1). Термины "домен связывания с альбумином", "ABD" и подобные относятся к полипептидвм, способным связываться с описанным в настоящем документе альбумином. Термины "гормональный домен", "полипептид гормонального домена" и подобные относятся к полипептиду, способному вызывать биологический ответ у субъекта. Иллюстративные гормональные домены включают в себя без ограничения лептин, аналог лептина или его активный фрагмент, но могут быть производным лептина, таким как пегилированное производное. [0047] Неожиданно было обнаружено, что лептин, его лептиновый аналог, активный лептиновый фрагмент или лептиновое производное может быть слит с очень высокоаффинным доменом связывания с альбумином (ABD), полученным из доменов связывания с альбумином описанных в настоящем документе бактериальных белков, при
этом сохраняя достаточную биологическую активность лептина и характеризуясь увеличенной продолжительностью действия, например, по меньшей мере 3 дня и даже 5 дней у грызуна, что переводится как по меньшей мере продолжительность в течение одной недели или более у субъекта-человека. В некоторой мере это было удивительно, потому что не было широко продемонстрировано, что такие пептиды ABD являются надежной платформой в качестве терапевтического белкового носителя, они являются относительно гидрофобными, что могли неблагоприятно взаимодействовать с прикрепленным терапевтическим пептидом, и не были способны действовать в качестве носителя по меньшей мере для одного семейства пептидных гормонов. Например, соединения крысиного амилина (например, SEQ ID N0:108) в случае, когда они конъюгированы или слиты с описанными в настоящем документе ABD, не проявляли какой-либо значительной или длительно действующей активности in vivo в тех же моделях на грызунах, в которых было обнаружено, что различные лептиновые сконструированные полипептидные конструкты настоящего изобретения являлись активными и характеризовались длительной продолжительностью действия.
[0048] Биологически активные компоненты. Биологически активные компоненты соединений, предполагаемые для применения в соединениях и способах, описываемых в настоящем документе, включают в себя лептины. Термины "биологически активное соединение" и тому подобное относятся в обычном смысле к соединениям, например, полипептидам и тому подобному, которые могут вызывать биологический ответ. [0049] Лептины. "Лептины" и "лептин" обозначают: лептины, активные фрагменты лептина, аналоги лептина и производные лептина; и лептин, активный фрагмент лептина, аналог лептина и производное лептина; соответственно. Таким образом, если не указано иначе, упоминание "лептины", как подразумевают, охватывает лептины, активные фрагменты лептина, аналоги лептина, и производные лептина, как описано в настоящем документе. Схожим образом, если не указано иначе, упоминание "лептин" ", как подразумевают, охватывает лептин, активный фрагмент лептина, аналог лептина и производное лептина, как описано в настоящем документе. Такие иллюстативные лептины, которые можно применять при конструировании, получении и применении сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, включают в себя лептины, которые вызывают один или несколько биологических ответов, известных в
данной области, вызываемых при введении субъектам лептинов (смотри, например, опубликованную патентную заявку США №№ US 2007/0020284 и US 2008/0207512, патенты США №№ 6309853 и US 7183254 и опубликованную заявку РСТ №№ WO 96/005309, WO 98/28427 и WO 2009/064298), таких как: сокращение потребления пищи, снижение массы тела, замедление увеличения массы тела, стимулирование чувства сытости, снижение усвояемости калорий, снижение процента использования калорий, снижение метаболического плато, увеличение чувствительности к инсулину, снижение гиперлипидемии, коррекция дислипидемии, снижение гипертриглицеридемии, улучшение состояния при ожирении, улучшение состояния при избыточной массе тела, улучшение состояния при сахарном диабете (включая сахарный диабет I типа, сахарный диабет II типа и гестационный сахарный диабет), улучшение состояния при резистентность к инсулину, улучшение состояния при состояниях липодистрофии ассоциированных с ними, а также другие биологические ответы, известные в данной области, вызываемые при введении лептина (смотри, например, опубликованную патентную заявку США №№ US 2007/0020284 и US 2008/0207512, патенты США №№ 6309853 и US 7183254 и опубликованную заявку РСТ №№ WO 96/005309, WO 98/28427 и WO 2009/064298). [0050] Типичные лептины, которые можно применять при конструировании, получении и применении сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, включают в себя в качестве неограничивающих примеров соединения, описанные в патентах США №№ US 5594101, US 5851995, US 5691309, US 5580954, US 5554727, US 5552523, US 5559208, US 5756461, US 6309853, опубликованной патентной заявке США № US 2007/0020284 и опубликованной заявке РСТ №№ WO 96/23517, WO 96/005309, WO 98/28427, WO 2004/039832, WO 98/55139, WO 98/12224 и WO 97/02004, каждая из которых в полном объеме и во всех отношениях включена в настоящий документ. Способы анализа активностей и биологических ответов лептина in vitro и in vivo, включающих в себя чувство насыщения, ингибирующую активность в отношении потребления пищи и активность снижения массы тела, известны в данной области и описаны в настоящем документе и также в указанных ссылках и других ссылках, приведенных в настоящем документе.
[0051] Любой лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина, известное из уровня техники, может быть использовано для того чтобы получить
и применить раскрытые в настоящем документе сконструированные полипептиды. Репрезентативные лептины, аналоги лептина, активные фрагменты лептина и производные лептина, предусмотренные для применения в описанных в настоящем документе сконструированных полипептидах и способах также включают в себя следующее: [0052] Зрелые мышиные лептины:
VPIQKVQDDmTLIKTIVTPJNDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAV
YQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLH\a.AFSKSCF^PQASGLETLESLGGVLEASGYST
EWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC, где Хаа в позиции 28 представляет собой Q или
отсутствует (SEQ ID NO: 1).
[0053] Форма 1 зрелого мышиного лептина:
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQ QVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:143). [0054] Форма 2 зрелого мышиного лептина:
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQ
VLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEW
ALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:144).
[0055] Зрелые мышиные лептины с N-концевым метионином:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLA VYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CHLPQ AS GLETLESLGGVLE AS GYS TEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC, где Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:2).
[0056] Форма 1 зрелого мышиного лептина с N-концевым метионином:
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTmNDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVY QQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:145).
[0057] Форма 2 зрелого мышиного лептина с N-концевым метионином:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQ QVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:146). [0058] Зрелый свиной лептин:
WIWTlVQDDmTLIKTIVTmSDISF^QSVSSKQRVTGLDFIPGLOTVLSLSKMDQTLAIYQ
QILTSLPSPvNVIQISNDLENLRDLLF^LASSKSCPLPQAI^ETLESLGGVLEASLYSTEVV
ALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ ID N0:3).
[0059] Зрелый свиной лептин с N-концевым метионином:
MWIWRVQDDmTLIKTIVTmSDISF^QSVSSKQRVTGLDFIPGLOTVLSLSKMDQTLAIY QQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEV VALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ ID N0:4). [0060] Зрелые бычьи лептины:
WICKVQDDTKTLIKTIVTmNDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLIffLLSLSKMDQTLAI YQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC, где Хаа в положении 28 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:5).
[0061] Зрелые бычьи лептины с N-концевым метионином:
MVPICKVQDDTKTLIKTI VTRINDISHT-Xaa- SVS SKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLA IYQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYST EWALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC, где Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:6).
[0062] Непроцессированный полноразмерный лептин человека (то есть, включает в себя N-концевую сигнальную последовательность из 21-остатка):
MHWGTLCGFLWbWPYLFYVQAVPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGL DFIPGLOTILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPW ASGLETLDSLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 7) [0063] Зрелые лептины человека (с удаленной N-концевой сигнальной последовательностью из 21 аминокислот):
WIQKVQDDmTLIKTIVTmNDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTL AVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASG YSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC, где: Хаа в положении 27 представляет собой Т или А; и Хаа в положении 28 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:8). [0064] Зрелые лептины человека с N-концевым метионином:
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTMNDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLFiPILTLSKMDQT LAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASG
YSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC, где: Хаа в положении 28 представляет собой Т или А; и Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:9). [0065] Зрелый лептин макаки-резус:
VPIQKVQ SD ЖТЫКТ1VTRINDISHTQ S VS SKQRVTGLDFIPGLHPVLTLS QMDQ TL Al YQ
QILINLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESLGDVLEASLYSTEVVA
LSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:10).
[0066] Зрелый лептин макаки-резус с N-концевым метионином:
MVPIQKVQSDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIY QQILINLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESLGDVLEASLYSTEVV ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:11). [0067] Зрелый лептин крысы:
WIF^VQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQ
QILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTEV
VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:12).
[0068] Зрелый лептин крысы с N-концевым метионином:
MWIF^VQDDTKTLIKTIVTmNDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLOTILSLSKMDQTLAVY QQILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:13).
[0069] Зрелый лептин утконоса: Зрелая последовательность лептина утконоса следует ниже:
ISIEKIQADmTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMDQTLAVYQ QILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEW TLDRLRKSLKNIEKQLDHIQG (SEQ ID N0:14).
[0070] Непроцессированный полноразмерный лептин утконоса (то есть, включает в себя N-концевую сигнальную последовательность из 21 остатка): Полноразмерная последовательность лептина утконоса, включающая в себя N-концевую сигнальную последовательность из 21 остатка, следует ниже:
MRCILLYGFLCVWQHLYYSHPISIEKIQADTKTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFI PGNQQFQNLADMDQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSD GLDTMEIWGGIVEESLYSTEWTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQG (SEQ ID NO: 15). [0071] Форма 1 зрелого лептина человека:
WIQKVQDDmTLIKTIVTmNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 16). [0072] Форма 2 зрелого лептина человека:
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 17). [0073] Форма 3 зрелого лептина человека:
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQI LTSMP SRNVTQISNDLENLRDLLFiVLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:18). [0074] Форма 4 зрелого лептина человека:
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQ ILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVV ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:19).
[0075] Форма 1 зрелого лептина человека с N-концевым метионином (также известная как метрелептин, или А100):
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY
QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE
WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO:20).
[0076] Форма 2 зрелого лептина человека с N-концевым метионином:
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY
QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE
WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:21).
[0077] Форма 3 зрелого лептина человека с N-концевым метионином:
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ
QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV
VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:22).
[0078] Форма 4 зрелого лептина человека с N-концевым метионином:
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTmNDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:23). [0079] Лептин нерпы:
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQI LTSLQSRSWQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVV ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:24).
[0080] Лептин нерпы с аминокислотами 71-92, замененными на аминокислоты 73-94 (спираль 3) метрелептина, соответственно:
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQI LTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVA LSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:25).
[0081] Лептин нерпы с аминокислотами 30 и 71-92, замененными на аминокислоты 32 и 73-94 (спираль 3) метрелептина, соответственно:
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQI LTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVA LSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:26). [0082] Лептин нерпы с N-концевым метионином:
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQ QILTSLQSRSWQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEV VALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:27).
[0083] Лептин нерпы с N-концевым метионином и с аминокислотами 71-92, замененными на аминокислоты 73-94 (спираль 3) метрелептина, соответственно:
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQ QILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CP VPRARGSDTIKGLGNVLRAS VHS ТЕ V VALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:28).
[0084] Лептин нерпы с N-концевым метионином и с аминокислотами 30 и 71-92, замененными на аминокислоты 32 и 73-94 (спираль 3) метрелептина, соответственно:
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQ ILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVV ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:29).
[0085] Лептин А200: Лептин А200 представляет собой продукт конденсации Fc-фрагмента антитела с лептином, как известно в данной области. Смотри, например, Lo et al., 2005, Protein Eng. Design & Selection, 18:1-10. Аминокислотная последовательность A200 представлена ниже: MDKTHTCPPCPAPELLOKJPSWLF
DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELmNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKVPIQKVQDDT KTLIKTIVTmNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNV IQISNDLENLRDLLHVLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQ DMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO:30)
[0086] Лептин A300: Лептин A300 представляет собой метрелептин с заменами W101Q и W139Q (N-концевой xMet считается как остаток 1):
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:31).
[0087] Лептин А400: Лептин А400 представляет собой метрелептин с остатком серина в положении 78, замененным на остаток цистеина, как приведено ниже:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQICNDLENLRDLLH VLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS ТЕ WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 32); к которому присоединена группа ПЭГ 20 килодальтон (кДа) через остаток цистеина в положении 78.
[0088] Лептин А500: Изыскания множества исследователей, включая авторов изобретения, сосредоточены на влиянии на агрегацию замены остатков в лептине. Смотри, например, главу Ricci et al., 2006. "Mutational approach to improve physical stability of protein therapeutics susceptible to aggregation: Role of altered conformation in irreversible осаждение," Book Chapter. In: MISBEHAVING PROTEINS: PROTEIN (MIS)FOLDING, AGGREGATION, И STABILITY, Murphy RM, Tsai AM, Eds., New York. Springer, pp. 331-350, включенную в настоящий документ в качестве ссылки и во всех отношениях. Таким образом, лептин А500 со следующей ниже последовательностью использовали в определенных соединениях и способах, описываемых в настоящем документе:
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:33).
[0089] Варианты лептина A100: Варианты лептина A100 со следующими ниже заменами остатков представлены ниже:
D41E, H98S, W101Q, D109E, G113E, Ml 371, W139Q и G146E: MWIQKVQDDTKTLIKT1VTMNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 664). H98S, W101Q, А102Т, G113E, M137I, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 665). H98S, W101Q, G113E, M137I, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 666). W101Q, G113E, Ml371, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 667). H98S, W101Q, M137I, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 668). W101Q, G113E, Ml371, W139Q, LI43V и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 669). H98S, W101Q, A102T, M137I, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTXIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 670). H98S, W101Q, D109E, Gl 13E и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 671). W101Q, Ml371, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 672). W101Q, Ml 371, W139Q, L143V и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 673). H98S, W101Q, A102T, Ml 371, W139Q, L143V и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 674). H98S, W101Q, A102T, G113E и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 675). W101Q, G113EH W139Q:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID NO: 676). W101Q, G113E, W139Q и G146E:
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 677).
[0090] Любой из указанных выше лептинов, аналогов лептинов или их активных фрагментов, равно как и лептинов, описанных ниже, пригодны для использования в настоящих сконструированных полипептидов с применением или без применения линкера к ABD.
[0091] Пептиды связывающего альбумин домена (ABD). Пептиды связывающего альбумин домена (ABD) для применения по изобретению представляют собой пептиды со сравнительно высокой аффинностью к альбумину, и они происходят из связывающих альбумин доменов бактериального G-белка штамма G148 Streptococcus. В этом качестве пептиды ABD, рассматривающиеся для сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, включают в себя пептиды, содержащие связывающие альбумин мотивы, как описано у Jonsson et al. (Protein Eng. Design & Selection, 2008, 21:515-527), a также пептиды ABD, описываемые там, и такие мотивы и пептиды ABD, дополнительно описанные в опубликованной заявке РСТ № WO2009/016043, а также их аналоги, в особенности, аналоги, характеризующиеся, по меньшей мере, 85% аминокислотной идентичностью. В одном из вариантов осуществления пептид ABD может включать в себя связывающий альбумин мотив ("АВМ"), который состоит из аминокислотной последовательности
GVSD Х5 YK Х8 Х91 Хп Хи А Хм TVEGV Х20 AL Х23 Х24 Х251 (SEQ ID N0:34)
где, независимо друг от друга,
Х5 выбран из Y и F;
Х§ выбран из N, R и S;
Х9 выбран из V, I, L, М, F и Y;
Хп выбран из N, S, Е и D;
Х12 выбран из R, К и N;
Х14 выбран из К и R;
Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S, R и К;
Х2з выбран из К, I и Т;
Х24 выбран из A, S, Т, G, Н, L и D; и
Х25 выбран из Н, Е и D.
[0092] Согласно определенным вариантам осуществления Х5 представляет собой Y. Согласно определенным вариантам осуществления Х8 представляет собой N. Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х23
представляет
собой
Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х23
представляет
собой
Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х24
представляет
собой
Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х24
представляет
собой
Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х25
представляет
собой
Согласно
определенным
вариантам
осуществления
Х25
представляет
собой
Согласно
определенным вариантам осуществления независимо друг от друга Х5 представляет собой Y, и/или Х8 представляет собой N, и/или Х23 представляет собой Т или I, и/или Х24 представляет собой S или L, и/или Х25 представляет собой Е. Согласно определенным вариантам осуществления мотив связывания с альбумином ("АВМ") представляет собой GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLm (SEQ ID N0:114). Согласно определенным вариантам осуществления мотив связывания с альбумином ("АВМ") представляет собой GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEI (SEQ ID N0:115).
[0093] Предпочтительно пептиды ABD связывают альбумин с величиной KD взаимодействия, которая составляет не более чем 1 х Ю"° М, и даже более предпочтительно, не более чем 1 х 10"9 М (даже более высокой аффинностью). Более предпочтительна величина KD взаимодействия, которая составляет не более чем 1 х 10"10 М, даже более предпочтительно, составляет не более чем 1 х Ю"11 М, еще более предпочтительно, составляет не более чем 1 х Ю"12 М, и даже дополнительно составляет не более чем 1 х Ю"13 М. Например, величина Kd 1 х Ю"14М представляет собой величину KD взаимодействия, которая составляет не более чем 1 х Ю"13 М. Величину Ко можно определить, как описано в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043, предпочтительно в отношении сывороточного альбумина человека. В одном из вариантов осуществления рассматривают упомянутый выше род с условием, что последовательность аминокислот не представляет собой GVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEI (SEQ ID N0:35).
[0094] Как продемонстрировано в настоящее документе и в цитируемых ссылках, способность связывать альбумин пептида ABD может сохраняться, несмотря на аминокислотные изменения при условии, что такие изменения сохраняют достаточную третичную структуру пептида ABD. Такие изменения включают в себя, например, замену, где аминокислотный остаток, принадлежащий определенной функциональной группе
аминокислотных остатков (например, гидрофобные, гидрофильные, полярные и так далее) заменяют на другой аминокислотный остаток из той же самой функциональной группы. Таким образом, в одном таком варианте осуществления пептида ABD, мотив Х5 представляет собой Y. В одном из вариантов осуществления ABD Х8 выбран из N и R, и может, в частности, представлять собой R. В одном из вариантов осуществления Х9 представляет собой L. В одном из вариантов осуществления Хп выбран из N и S, и может, в частности, представлять собой N. В одном из вариантов осуществления Х12 выбран из R и К, так что Х12 представляет собой R или Х12 представляет собой К. В одном из вариантов осуществления Хм представляет собой К. В одном из вариантов осуществления Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S и R, и может, в частности, представлять собой Е. В одном из вариантов осуществления Х23 выбран из К и I, и может, в частности, представлять собой К. В одном из вариантов осуществления Х24 выбран из A, S, Т, G, Н и L. В более определенном варианте осуществления Х24 представляет собой L. В еще более определенном варианте осуществления "Х23 Х24" представляет собой KL. В другом даже более определенном варианте осуществления "Х23 Х24" представляет собой TL. В одном из вариантов осуществления Х24 выбран из A, S, Т, G и Н. В более определенном варианте осуществления Х24 выбран из A, S, Т, G и Н и Х23 представляет собой I. В одном из вариантов осуществления Х25 представляет собой Н.
[0095] Последовательности отдельных связывающих альбумин мотивов с указанной выше формулой, включают в себя последовательности, представленные как SEQ ID NO:№l-257 в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043, включенной в настоящий документ в качестве ссылки. В определенных вариантах осуществления связывающего альбумин полипептида связывающий альбумин мотив состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID N0:1-257. В более определенном варианте осуществления данного аспекта по изобретению последовательность мотива выбрана из SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:46, SEQ ID N0:49, SEQ ID N0:53, SEQ ID N0:54, SEQ ID N0:55, SEQ ID N0:1 55, SEQ ID N0:239, SEQ ID N0:240, SEQ ID N0:241, SEQ ID N0:242, SEQ ID N0:243, SEQ ID N0:244 и SEQ ID N0:245 из опубликованной заявки РСТ № WO 2009/016043. В еще более определенных вариантах осуществления данного аспекта по изобретению, последовательность мотива выбрана из SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:53 и SEQ ID N0:239 из
опубликованной заявки РСТ № WO 2009/016043. Связывающие альбумин полипептиды, содержат связывающие альбумин мотивы и, таким образом, подходящие для конъюгации или слияния с гормональным доменом, как описано в настоящем документе, дополнительно описаны в настоящем документе и ниже и проиллюстрированы в таблице 1 и в примерах. Не связываясь теорией, но полагают, что связывающий альбумин мотив может происходить из части белкового домена трехспирального пучка. Например, мотив, по существу, может состоять из или являться частью из двух альфа-спиралей с соединяющей петлей внутри указанного белкового домена трехспирального пучка. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретения, такой белковый домен трехспирального пучка выбран из группы, состоящей из трехспиральных доменов бактериального рецепторного G-белка из штамма G148 Streptococcus. В различных вариантах данного варианта осуществления, белковый домен трехспирального пучка, частью которого является мотив, выбран из группы, состоящей из домена GA1, домена GA2 и домена GA3 G-белка из штамма G148 Streptococcus, в особенности, домен GA3. [0096] В вариантах осуществления настоящего изобретения, где мотив "является частью белкового домена трехспирального пучка",это означает, как понимают, что последовательность связывающего альбумин мотива "встроена" или "привита" "слита" с последовательностью встречающегося в природе (или в иных случаях исходного) трехспирального домена пучка, так что мотив замещает схожий структурный мотив в исходном домене. Например, и, не желая быть связанными с теорией, мотив, как полагают, представляет собой две из трех спиралей трехспирального пучка и может заменить такой двухспиральный мотив внутри любого трехспирального пучка. Замену двух спиралей домена трехспирального пучка двумя спиралями мотива, описываемого в настоящем документе, проводят так, чтобы не повлиять на основную структуру полипептида. Таким образом, общая укладка основной цепи полипептида по данному варианту осуществления изобретения будет, по существу, той же самой, что и укладка белкового домена трехспирального пучка, частью которого он является, например, содержащим такие ж элементы вторичной структуры в том же самом порядке и так далее. Таким образом, мотив, применимый в сконструированных полипептидах в настоящем документе, может "являться частью" домена трехспирального пучка, если полипептид по данному варианту осуществления характеризуется такой же укладкой, что и исходный домен, подразумевая,
что основные структурные свойства сохранены, те свойства, например, которые приводят в схожим спектрам CD.
[0097] Соответственно, согласно одному варианту осуществления полипептид домена связывания с альбумином представляет собой белковый домен в виде трехспирального пучка, который содержит мотив связывания с альбумином, как определено выше, и дополнительные последовательности, образующие остаток трехспиральной конфигурации. Такой полипептид домена связывания с альбумином может быть слит с лептином, его лептиновым аналогом, активным лептиновым фрагментом или лептиновым производным для создания описанных в настоящем документе сконструированных полипептидов. Полипептид домена связывания с альбумином, подходящий для конъюгации или слияния с лептином, его лептиновым аналогом, активным лептиновым фрагментом или лептиновым производным, может содержать аминокислотную последовательность:
LAEAK Ха Xb А Хс Xd EL Хе KY -[АВМ]- LAALP (SEQ ID N0:36)
где
[АВМ] представляет собой мотив связывания с альбумином, как определено выше, и,
независимо друг от друга,
Ха выбран из V и Е;
Хъ выбран из L, Е и D;
Хс выбран из N, L и I;
Xd выбран из R и К; и
Хе выбран из D и К.
[0098] Согласно определенным вариантам осуществления Ха представляет собой Е.
Согласно определенным вариантам осуществления Хъ представляет собой D. Согласно
определенным вариантам осуществления Хс представляет собой I. Согласно определенным
вариантам осуществления Xd представляет собой К. Согласно определенным вариантам
осуществления Ха независимо представляет собой Е, и/или независимо Хъ представляет
собой D, и/или независимо Хс представляет собой I, и/или независимо Xd представляет
собой К. Согласно определенным вариантам осуществления лейцин в положении 45
присутствует или отсутствует. Согласно определенным вариантам осуществления пролин в
положении 46 отсутствует. Согласно определенным вариантам осуществления полипептид
домена связывания с альбумином представляет собой
L А Е А К E D АIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V EALTLHILAALP (SEQ ID NO: 50). Согласно определенным вариантам осуществления полипептид домена связывания с альбумином представляет собой
LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP (SEQ ID N0:51). [0099] Согласно дополнительному варианту осуществления ABD содержит одну или несколько N-концевых кэппирующих спираль аминокислот, и согласно дополнительному варианту осуществления кэппирующая спираль аминокислота может представлять собой серии, или может представлять собой глицин-серин. Соответственно, для каждого домена связывания с альбумином последовательность, раскрытая в настоящем документе, включая таковые на фигурах и в списке последовательностей, также специально предусмотренных для всех аспектов, раскрытых в настоящем документе в сконструированном полипептиде, представляют собой домены связывания с альбумином, их последовательности Ser-ABD, Gly-Ser-ABD, Gly-ABD, Ala-ABD и их des-C-концевой-пролин.
[0100] Благодаря наличию связывающего альбумин мотива, пептид ABD связывается с альбумином с величиной KD взаимодействия, которая составляет не более чем 1 х 10"6 М и, даже более предпочтительно, не более чем 1 х 10"9 М (даже большей аффинностью). Более предпочтительна величина Ко взаимодействия, которая составляет не более чем 1 х Ю"10 М, даже более предпочтительно, составляет не более чем 1 х Ю"11 М, даже еще более предпочтительно, составляет не более чем 1 х Ю"12 М, и, даже дополнительно, составляет не более чем 1 х Ю"13М.
[0101] В одном из вариантов осуществления данного полипептида, связывающего альбумин, Ха представляет собой V. В одном из вариантов осуществления данного полипептида Хъ представляет собой L. В одном из вариантов осуществления данного полипептида Хс представляет собой N. В одном из вариантов осуществления данного полипептида Xd представляет собой R. В одном из вариантов осуществления данного полипептида Хе представляет собой D.
[0102] Последовательности отдельных полипептидов связывающего альбумин домена, подходящие для слияния с активными пептидами гормонального домена, как описано в настоящем документе, представлены у Jonsson et al. (Id.) и в виде SEQ ID NO:№258-514 в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043, включенной в настоящий документ в качестве ссылки. Выбранные соединения описаны ниже в таблице 1. Также охваченными
настоящим изобретением является связывающий альбумин полипептид, имеющий аминокислотную последовательность с 85% или большей идентичностью по отношению к последовательности, выбранной из SEQ ID NO:№ 258-514. В конкретных вариантах осуществления последовательность связывающего альбумин полипептида выбрана из SEQ ID N0:259, SEQ ID N0:260, SEQ ID N0:266, SEQ ID N0:272, SEQ ID N0:282, SEQ ID N0:284, SEQ ID N0:303, SEQ ID N0:306, SEQ ID N0:310, SEQ ID N0:311, SEQ ID N0:312, SEQ ID N0:412, SEQ ID N0:496, SEQ ID N0:497, SEQ ID N0:498, SEQ ID N0:499, SEQ ID N0:500, SEQ ID N0:501 и SEQ ID N0:502 в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043, и последовательности, характеризующиеся 85% или большей идентичностью к ним. В еще дополнительных вариантах осуществления последовательность связывающего альбумин полипептида выбрана из SEQ ID N0:260, SEQ ID N0:270, SEQ ID N0:272, SEQ ID N0:291, SEQ ID N0:294, SEQ ID N0:298, SEQ ID N0:299, SEQ ID N0:300, SEQ ID N0:400, SEQ ID N0:484, SEQ ID N0:485, SEQ ID N0:486, SEQ ID N0:487, SEQ ID N0:488, SEQ ID N0:489 и SEQ ID N0:490 в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043 и последовательностей, характеризующихся 85% или большей идентичностью к ним. В еще более определенных вариантах осуществления последовательность связывающего альбумин полипептида выбрана из SEQ ID N0:260, SEQ ID N0:310 и SEQ ID N0:496 в опубликованной заявке РСТ № W0 2009/016043 и последовательностей, характеризующихся 85% или большей идентичностью к ним.
[0103] Согласно одному варианту осуществления полипептид связывания с альбумином дополнительно содержит одну или несколько дополнительных аминокислотных остатков, расположенных на N- и/или С-конце последовательности, определенной в SEQ ID N0:36. Эти дополнительные аминокислотные остатки могут играть роль в усилении связывания альбумина полипептидом, и улучшении конформационной стабильности уложенного домена связывания с альбумином, но могут в равной степени хорошо служить для других целей, связанных, например, с одним или несколькими из следующего: продукция, очищение, стабилизация in vivo или in vitro, связывание, мечение или обнаружение полипептида, а также в качестве любой их комбинации. Такие дополнительные аминокислотные остатки могут содержать один или несколько аминокислотных остатков(ка), добавленных для целей химического связывания, например, с HD1.
[0104] Аминокислоты, непосредственно предшествующие или следующие за альфа-спиралью на N-или С-конце аминокислотной последовательности в SEQ ID N0:36, могут, таким образом, согласно одному варианту осуществления, воздействовать на конформационную стабильность. Один пример аминокислотного остатка, который может вносить вклад в улучшенную конформационную стабильность, представляет собой остаток серина, расположенный на N-конце SEQ ID N0:36, как определено выше. N-концевой остаток серина может в некоторых случаях формировать канонический кэппирующий бокс S-X-X-E, путем вовлечения водородной связи между гамма-кислородом боковой цепи серина и полипептидным скелетом NH остатка глутаминовой кислоты. Это N-концевое кэппирование может вносить вклад в стабилизацию первой альфа-спирали трехспирального домена, составляющего полипептид связывания с альбумином согласно первому аспекту настоящего раскрытия.
[0105] Таким образом, согласно одному варианту осуществления дополнительные аминокислоты содержат по меньшей мере один остаток серина на N-конце полипептида. Аминокислотной последовательности, иными словами, предшествует один или несколько остатков серина. Согласно другому варианту осуществления полипептида связывания с альбумином дополнительные аминокислоты содержат остаток глицина на N-конце полипептида. Понятно, что аминокислотной последовательность SEQ ID N0:36 может предшествовать один, два, три, четыре или любое подходящее число аминокислотных остатков. Таким образом, аминокислотной последовательности может предшествовать один остаток серина, один остаток глицина или комбинация из двух, такая как комбинация глицин-серин (GS) или комбинация глицин-серин-серин (GSS). Согласно еще одному варианту осуществления дополнительные аминокислотные остатки содержат глутаминовую кислоту на N-конце полипептида, как определено последовательностью SEQ ID N0:36.
[0106] Иллюстративные виды ABD включают в качестве неограничивающих примеров соединения, указанные в следующей ниже таблице 1 и примерах. Смотри также опубликованную заявку РСТ № WO 2009/016043, включенную в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях. Пептид ABD, применимый в соединениях, способах и фармацевтических композициях, описываемых в настоящем документе, может представлять собой фрагмент или аналог пептида ABD, описываемой в
настоящем документе или известной в данной области при условии, что он содержит связывающий альбумин мотив и связывает альбумин с аффинностью, описываемой в настоящем документе. Таблица 1. Выбранные пептиды ABD
Последовательность пептида ABD
SEQ Ш NO:
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVNALTHHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNIINPvAKTVEGVRALKLHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVDALIAHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVINKAKTVEGVEALIADILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLHILAALP
LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKA К TV Е G V EALTLHILAALP
LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP
LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP
[0107] Связывание с альбумином. Сывороточный альбумин является наиболее распространенным белком в сыворотке млекопитающих (40 г/л; приблизительно 0,7 мМ у людей), где он связывает разнообразные молекулы, включая без ограничения липиды и билирубин (Peters Т, 1985, Advances in Protein Chemistry 37:161). Обнаружили, что время полураспада сывороточного альбумина прямопропорционально размеру животного, где, например, сывороточный альбумин человека (HSA) характеризуется временем полураспада 19 дней и сывороточный альбумин кролика характеризуется временем полураспада приблизительно 5 дней (McCurdy TR et al, J. Lab. Clin. Med. 143:115,2004). Сывороточный альбумин человека широко распространен по всему организму, в особенности, в кишечнике
и компартментах крови, где он, в основном, вовлечен в поддержание осмолярности. Структурно, альбумины представляют собой одноцепочечные белки, содержащие три гомологичных домена и суммарно 584 или 585 аминокислот (Dugaiczyk L et al., 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:71). Альбумины содержат 17 дисульфидных мостиков и один реакционный тиол, С34, но не содержат N-связанные и О-связанные углеводные фрагменты (Peters, 1985, Id.; Nicholson JP et al., 2000, Br J Anaesth 85:599). Отсутствие гликозилирования облегчает рекомбинантную экспрессию альбумина. Это свойство альбумина вместе с тем фактом, что его трехмерная структура является известной (смотрите, например, Не ХМ & Carter DC, 1992, Nature 358:209), сделало его привлекательным кандидатом для применения в рекомбинантных слитых белках. Такие слитые белки, как правило, комбинируют терапевтический белок (который будет быстро выводится из организма при введении белка per se) и белок плазмы (который проявляет естественный медленный клиренс) в одной полипептидной цепи. Смотрите, например, Sheffield WP, 2001, Curr. Drug Targets Cardiovacs. Haematol. Disord. 1:1). Такие белки могут обеспечивать клинические преимущества в необходимости менее частой инъекции и более высоких уровней терапевтического белка in vivo. Тем не менее, сконструированные полипептиды в настоящем документе не конъюгируются с альбумином, но вместо этого содержат мотивы, которые обеспечивают нековалентное связывание с альбумином. [0108] Дополнительные варианты осуществления. Понятно, что предусматривается, что каждый из раскрытых в настоящем документе полипептидов также включает в себя (необязательно) метионин на N-конце в рамке с его встречающейся в природе первой аминокислотой. Например, метрелептин (лептин А100) состоит из зрелого лептина человека, к которому был добавлен N-концевой метионин, как раскрыто в SEQ ID N0:20. Аналогично, остаток метионина может быть включен на N-конце любой из аминокислотных последовательностей и формул, раскрытых в настоящем документе. Дополнительно следует понимать, что когда С-концевой Gly имеет место в сконструированной полипептидной последовательности, представленной в настоящем документе, то остаток может быть утерян в ходе последующего амидирования. [0109] Согласно некоторым вариантам осуществления лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина может характеризоваться по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более
высокой идентичностью последовательностей относительно исходного лептина. Согласно некоторым вариантам осуществления исходный лептин представляет собой лептин, представленный в SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 или SEQ ID N0:146. Соответственно, согласно некоторым вариантам осуществления лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина может характеризоваться по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью последовательностей относительно любого лептина, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22 и SEQ ID N0:23. Согласно некоторым вариантам осуществления лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина может характеризоваться по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:20. Согласно некоторым вариантам осуществления лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина может характеризоваться по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью последовательностей относительно любого лептина, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID N0:24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID N0:29. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:20. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 или SEQ ID N0:146. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может
характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 или SEQ ID N0:146. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:14 или SEQ ID N0:15. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:14 или SEQ ID N0:15. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0: 32. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:32. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID NO: 33. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:33. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:10 или SEQ ID N0:11. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:10 или SEQ ID N0:11. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 50% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:12 или SEQ ID N0:13. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина может характеризоваться по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей относительно лептина, представленного в SEQ ID N0:12 или SEQ ID N0:13. Кроме того, лептины могут быть разработаны, получены и использованы в соответствии с настоящим изобретением, в котором 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или даже 21 аминокислота лептина, выбранного из группы, состоящей
из: SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145, и SEQ ID N0:146; замещена/замещены другой аминокислотой, такой как консервативная аминокислота или неконсервативная аминокислота или изменена/изменены иным образом. Как принято в настоящей области техники, термин "консервативный" в контексте аминокислотных замен относится к замене, которая сохраняет свойства типа заряда (например, анионные, катионные, нейтральные, полярные и подобное), гидрофобности или гидрофильности, объема (например, ван-дер-ваальсовы взаимодействия и подобное) и/или функциональности (например, группы гидрокси, амин, сульфгидрил и подобное). Термин "неконсервативный" относится к аминокислотной замене, которая не является консервативной.
[ОНО] Кроме того, как принято в настоящей области техники, например, каждый из следующего: мышиные лептины, крысиные лептины, бычьи лептины, свиные лептины и лептины макака-резуса, такие, как раскрытые в настоящем документе, являются, по сути, гомологичными лептинам человека; в частности, зрелые формы этих лептинов являются, по сути, гомологичными зрелым лептинам, и кроме того, особенно вблизи N-концевой части белка. Можно получить аналоги таких лептинов, таких как зрелый лептин человека формы 1 (SEQ ID N0:16) и метрелептин (SEQ ID N0:20), например, с помощью замещения или изменения иным образом аминокислотных остатков в одном или нескольких положениях в таких последовательностях, где наблюдается отличие в соответствующем зрелом лептине мыши, крысы, быка, свиньи или макака-резуса. Например, зрелые лептины человека (например, SEQ ID N0:20) проявляют биологические ответы, например, у мыши, крысы и обезьяны). Смотрите, например, публикации международных заявок W0 98/28427,WO 2009/064298, заявки на выдочу патентов США №№ US2007/0020284, US2008/0207512 и Murakami et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm. 209: 944-952. Поскольку зрелые лептины человека характеризуются биологической активностью, например, в таких видах, могут быть разработаны и получены лептины, в которых одна или
несколько аминокислот в положениях, которые отличаются в соответствующем положении(ях) в лептине из одного или нескольких таких видов, заменены на аминокислоту(ы) в таких соответствующих отличающихся положениях. [0111] Например, применяя белок зрелого лептина человека согласно SEQ ID N0:16, где первая аминокислота представляет собой валин и аминокислота в положении 146 представляет собой цистеин, можно заменить другой аминокислотой одну или несколько аминокислот в положениях 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145 с помощью соответствующей аминокислоты(аминокислот), обнаруженной в соответствующем положении(ях) в SEQ ID N0:143) для того чтобы разработать, получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению. Кроме того, также можно заменить другую аминокислоту, такую как консервативная аминокислота или неконсервативная аминокислота, в одном или нескольких из положений 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145, например, SEQ ID N0:16 для того чтобы разработать, получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению.
[0112] Можно дополнительно получить дополнительные лептины, основанные на белковой последовательности зрелого крысиного лептина (SEQ ID N0:12). Смотрите, например, публикацию международной заявки WO 98/28427, заявку на выдачу патента США № US2007/0020284 и Murakami et al, 1995, Id., включенные в настоящий документ посредством ссылки в их полноте и для всех целей. Зрелый крысиный лептин отличается от зрелого лептина человека формы 1 (SEQ ID N0:16) в следующих положениях: 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138 и 145. Соответственно, на одном или нескольких таких положениях в SEQ ID N0:16, можно заменить аминокислоту, обнаруженную на соответствующем положении(ях), обнаруженном в зрелом крысином лептине (SEQ ID N0:12) для того чтобы разработать, получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению. Кроме того, также можно заменить другую аминокислоту, такую как консервативная аминокислота или неконсервативная аминокислота, в одном или нескольких из положений 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138 и 145, например, SEQ ID N0:16, для того чтобы разработать,
получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению.
[0113] Положения как из зрелого крысиного лептина (SEQ ID N0:12), так и зрелого мышиного лептина формы 1 (SEQ ID N0:143), которые отличаются от зрелого лептина человека формы 1 (SEQ ID N0:16), представляют собой: 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145. Соответственно, на одном или нескольких из таких положений в SEQ ID N0:16, можно заменить аминокислоту, обнаруженную на соответствующем положении(ях), обнаруженном в последовательности зрелого крысиного лептина (SEQ ID N0:12) или последовательности зрелой мышиной формы 1 (SEQ ID N0:143) для того чтобы разработать, получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению. Кроме того, также можно заменить другую аминокислоту, такую как консервативная аминокислота или неконсервативная аминокислота, в одном или нескольких из положений 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142, и 145 для того чтобы разработать, получить и применить сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению.
[0114] Кроме того, аминокислоты, обнаруженные в зрелом лептине макака-резуса (SEQ ID N0:10), которые отличаются от зрелого лептина человека формы 1 (SEQ ID N0:16), представляют собой (с аминокислотными остатками, помеченных в круглых скобках с помощью однобуквенного сокращения аминокислот): 8 (S), 35 (R), 48(V), 53(Q), 60(1), 66(1), 67(N), 68((L), 89(L), 100(L), 108(E), 112 (D) и 118 (L). Поскольку зрелые лептины человека проявляют биологические ответы обезьян, то такой лептин, как зрелый лептин человека формы 1 (SEQ ID N0:16), характеризующийся одним или несколькими из отличающимися от макака-резуса аминокислотами, замещенными другой аминокислотой, такой как аминокислоты в круглых скобках, может быть использован в разработке, получении и применении сконструированных полипептидов согласно настоящему изобретению. Следует отметить, что определенные отличающиеся аминокислоты макака-резуса являются также такими, которые обнаруживают, например, в описанном выше зрелом мышином лептине формы 1 (положения 35, 68, 89, 100 и 112). Таким образом, можно получить лептины, в которых одну или несколько аминокислот в положениях 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136,
138, 142 и 145, например, зрелого лептина человека формы 1 (SEQ ID N0:16) заменили соответствующей аминокислотой(ами) в таком положении(ях) в лептинах мыши или макака-резуса (например, SEQ ID N0:143 и/или SEQ ID N0:10).
[0115] Другие лептины могут быть получены путем делеции части аминокислотной последовательности лептина, при условии, что такая аминокислотная последовательность лептина может проявлять биологический ответ. Такие аминокислотные последовательности лептина представляют собой активные фрагменты лептина. Например, у всех из перечисленного: зрелые мышиные лептины, зрелые лептины макака-резуса, зрелые лептины человека и зрелые крысиные лептины и другие лептины, отсутствует N-концевая 21 аминокислотная сигнальная последовательность, которая присутствует в непроцессированных полноразмерных формах такого лептина.
[0116] Можно получить следующие активные фрагменты лептина таких зрелых лептинов:
(a) аминокислоты 98-146
(b) аминокислоты 1-32
(c) аминокислоты 40-116
(d) аминокислоты 1-99 и (соединенные с) 112-146
(e) аминокислоты 1-99 и (соединенные с) 112-146, характеризующися одной или несколькими из аминокислот 100-111, помещенными между аминокислотами 99 и 112. [0117] Кроме того, также могут быть получены такие активные фрагменты лептина, в которых одна или несколько аминокислот в положениях, например, в зрелом лептине человека формы 1, которые замещены аминокислотами, обнаруженными в соответствующем положении(ях), обнаруживаются, например, в крысином, мышином, обезьяньем, свином и/или бычьем зрелых лептинах, как раскрыто выше. Более того, любые замены или изменения могут иметь место в форме измененных аминокислот, таких как пептидомиметики или D-аминокислоты.
[0118] Кроме того, настоящее изобретение охватывает сконструированные полипептиды, которые содержат лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина, как описано выше, при этом лептин, аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина выбраны из следующего:
(a) аминокислотная последовательность 1-146 лептина, выбранного из группы, состоящей из: SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:10, SEQIDNO:12.SEQIDNO:13, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:143 и SEQ ID N0:144; в которой отличающаяся аминокислота замещена в одном или нескольких из следующих положений и сохраняя аналогичную нумерацию (даже при отсутствии остатка глутаминила в положении 28): 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145;
(b) аминокислотная последовательность подпункта (а), в которой остаток глутаминила в положении 28 отсутствует;
(c) аминокислотная последовательность подпунктов (а) или (Ь), в которой остаток метионила добавлен на N-конце;
(d) лептин, состоящий из фрагмента аминокислотной последовательности (а), (Ь) или (с), выбранной из группы, состоящей из следующего:
(i) аминокислоты 98-146
(ii) аминокислоты 1-32
(iii) аминокислоты 40-116
(iv) аминокислоты 1-99 и 112-146
(v) аминокислоты 1-99 и 112-146, в которых одна или несколько аминокислот 100-111 помещены между аминокислотами 99 и 112; и,
(vi) аминокислотная последовательность подпункта (i), где одна или несколько из аминокислот 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145 замещены другой аминокислотой;
(vii) аминокислотная последовательность подпункта (ii), где одна или несколько из аминокислот 4, 8 и 32 замещены другой аминокислотой;
(viii) аминокислотная последовательность подпункта (iii), где одна или несколько из аминокислот 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 и 112 замещены другой аминокислотой;
(ix) аминокислотная последовательность подпункта (iv), где одна или несколько из аминокислот 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142 и 145 замещены другой аминокислотой; и
(vi)
(x) аминокислотная последовательность подпункта (v), где одна или
несколько из аминокислот 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106,
107, 108, 111, 118, 136, 138, 142, и 145 замещены другой аминокислотой;
(xi) лептин по любому из подпунктов (i)-(x), где метионин был добавлен на
N-конце; и
(e) лептин по любому из подпунктов (а) - (е), к которому прикреплен химический фрагмент;
(f) лептин подпункта (g), где указанный химический фрагмент представляет собой водорастворимый полимерный фрагмент;
(g) лептин подпункта (f), где указанный водорастворимый полимерный фрагмент представляет собой полиэтиленгликоль;
(h) лептин подпункта (f), где указанный водорастворимый полимерный фрагмент представляет собой полиаминокислотный фрагмент; и
(i) лептин по любому одному из подпунктов (е) - (h), где указанный фрагмент
прикреплен только на N-конец указанного белкового фрагмента.
[0119] В отношении вышесказанного, лептины, к которым прикреплен химический фрагмент, являются производными лептина. Было обнаружено, что дериватизация лептинов путем прикрепления одного или нескольких химических фрагментов обеспечивает некоторое преимущество при определенных обстоятельствах, такое как повышение стабильности и времени циркуляции терапевтического белка и снижение иммуногенности и предрасположенность, например, к созданию нейтрализирующих антител и/или возникновению реакций в месте инъекции. Смотрите, например, публикацию международной заявки WO 98/28427, заявку на выдачу патента США № US2007/0020284, патент США № 4179337, Davis et al, выданный 18 декабря 1979. Для обзора смотрите Abuchowski et al, в ENZYMES AS DRUGS, (под редакцией S. Holcerberg и J. Roberts, стр. 367383 (1981)); Francis et al, Id. Соответственно, при использовании дериватизированного лептина и АВМ или ABD, можно предпочтительно создать сконструированные полипептиды настоящего изобретения, обладающие преимуществами, обеспеченными обоими соединениями.
[0120] Производные лептина могут представлять собой лептины, в которых была произведена химическая модификация одной или нескольких ее аминокислотных боковых
групп, а-углеродных атомов, концевой аминогруппы или концевой группы карбоновой кислоты. Химическая модификация включает в себя без ограничения прикрепление одного или нескольких химических фрагментов, создание новых связей и удаление одного или нескольких химических фрагментов. Модификации на аминокислотных боковых группах включают в себя без ограничения алкилирование, ацилирование, образование сложных эфиров, образование амидов, связывание с малеимидом, ацилирование г-аминогрупп лизина, N-алкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование групп глутаминовой или аспарагиновой карбоновых кислот и деамидирование глутамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают в себя без ограничения модификации дезамино, N-низшего алкила, N-ди-низшего алкила и N-ацила. Модификации концевой аминогруппы включают в себя без ограничения модификации дезамино, N-низшего алкила, N-ди-низшего алкила и N-ацила, такого как алкилацилы, разветвленные алкилацилы, алкиларил-ацилы. Модификации концевой карбоксигруппы включают в себя без ограничения модификации амида, низшего алкиламида, диалкиламида, ариламида, алкилариламида и сложного эфира низшего алкила. Низший алкил представляет собой Ci-С4 алкил. Более того, одна или несколько боковых групп, или концевых групп, могут быть защищены с помощью защитных групп, известных специалисту в области синтетической химии, а-углерод аминокислоты может быть моно- или диметилированным. [0121] Такие производные включают в себя лептины, конъюгированные с одной или несколькими водорастворимыми полимерными молекулами, такими как полиэтиленгликоль ("PEG") или жирнокислотные цепи различной длины (например, стеарил, пальмитоил, октаноил), путем добавления полиаминокислот, таких как поли-гистидин, поли-аргинин, поли-лизин и поли-аланин или путем добавления низкомолекулярных заместителей, которые включают в себя короткоцепочечные алкилы и ограниченные алкилы (например, разветвленные, циклические, слитые, адамантил) и ароматические группы. Согласно некоторым вариантам осуществления водорастворимые полимерные молекулы будут характеризоваться молекулярной массой в диапазоне от приблизительно 500 дальтон до приблизительно 60000 дальтон.
[0122] Такие конъюгации с полимером могут происходить в единичном случае на N- или С-конце или на боковых цепях аминокислотных остатков в пределах раскрытой в настоящем документе последовательности лептина. Альтернативно, может существовать
многочисленные сайты дериватизации вдоль аминокислотной последовательности такого лептина. Замещение одной или нескольких аминокислот лизином, аспарагиновой кислотой, глутаминовой кислотой или цистеином может обеспечивать дополнительные сайты дериватизации. Смотрите, например, патенты США №№ 5824784 и 5824778. Согласно некоторым вариантам осуществления лептин может быть конъюгирован с одной, двумя или тремя полимерными молекулами.
[0123] Согласно некоторым вариантам осуществления водорастворимые полимерные молекулы соединены с амино, карбоксильной или тиольной группой и могут быть соединены с помощью N или С-концов, или на боковых цепях лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина. Альтернативно, водорастворимые полимерные молекулы могут быть соединены с диамином и дикарбоксильными группами. Согласно некоторым вариантам осуществления лептин конъюгирован с одной, двумя или тремя молекулами PEG посредством эпсилон-аминогруппы на аминокислоте лизин. [0124] Производные лептина также включают в себя лептины с химическими изменениями в одном или нескольких аминокислотных остатках. Такие химические изменения включают в себя амидирование, гликозилирование, ацилирование, сульфатацию, фосфорилирование, ацетилирование и циклизацию. Химические изменения могут происходить в единичном случае на N- или С-конце или на боковых цепях аминокислотных остатков в пределах последовательности лептина. Согласно одному варианту осуществления С-конец этих пептидов может характеризоваться свободной -ОН или -NH2 группой. Согласно другому варианту осуществления N-конец может быть кэппирован с помощью изобутилоксикарбонильной группы, изопропилоксикарбонильной группы, n-бутилоксикарбонильной группы, этоксикарбонильной группы, изокапроильной группы ("isocap"), октанильной группы, октилглициновой группы (обозначенной как "G(Oct)" или "octylGly"), 8-аминооктановокислой группы, дансильной и/или Fmoc группы. Согласно некоторым вариантам осуществления циклизация может быть осуществлена посредством образования дисульфидных мостиков. Альтернативно, могут иметь место многочисленные сайты химического изменения вдоль аминокислотной последовательности лептина.
[0125] Согласно определенным вариантам осуществления лептины подвергаются химически изменению, чтобы включать в себя группу Болтон-Хантер. Реагенты Болтон-
Хантер известны из уровня техники ("Radioimmunoassay and related methods," A. E. Bolton and W. M. Hunter, Глава 26 в HANDBOOK OF EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY, Том I, IMMUNOCHEMISTRY, под редакцией M. Weir, Blackwell Scientific Publications, 1986), и они могут быть использованы для введения тирозиноподобных фрагментов с нейтральной связью, посредством амино-концевых а-аминогрупп или s-аминогрупп лизина. Согласно некоторым вариантам осуществления N-конец лептина модифицирован с помощью группы Болтон-Хантер. Согласно некоторым вариантам осуществления внутренний остаток лизина модифицирован с помощью группы Болтон-Хантер. Согласно некоторым вариантам осуществления могут иметь место многочисленные сайты модификации Болтон-Хантер вдоль аминокислотной последовательности лептина. Используемые для полипептидной модификации реагенты Болтон-Хантер являются коммерчески доступными и могут включать в себя без ограничения водорастворимый реагент Болтон-Хантер, сульфосукцинимидил-3-[4-гидрофенил]пропионат (Pierce Biotechnology, Inc., Рокфорд, Иллинойс) и реагент Болтон-Хантер-2, N-сукцинимидил 3-(4-гидрокси-3-йодфенил) приопионат (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Япония, № по каталогу 199-09341). Иллюстративная группа Болтон-Хантер, конъюгированная посредством амидной связи с лептином проиллюстрирована ниже, где пунктирная линия проходит через амидную связь:
[0126] Лептины могут быть йодированы (например, меченые радиоактивным изотопом
125
I) до или после модификации типа Болтон-Хантер. [0127] Для получения сконструированных полипептидов согласно настоящему изобретению производное лептина для применения в его получении может включать в себя одну или несколько модификаций "заменимого" аминокислотного остатка. В контексте настоящего изобретения "заменимый" аминокислотный остаток представляет собой остаток, который может быть изменен, например, дериватизирован, без устранения или, по сути, снижения активности (например, активности в качестве агониста) лептина. Сконструированные полипептиды настоящего изобретения могут включать в себя дериватизации 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислотных остатков фрагмента
лептина; из которых, один или несколько аминокислотных остатков могут быть заменимыми аминокислотными остатками. Кроме того, полипептиды настоящего изобретения могут быть дериватизированы так, чтобы они включали в себя добавления по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот фрагмента лептина без устранения или, по сути, снижения активности полипептида. Кроме того, такие заменимые аминокислотные остатки могут быть замещены аминокислотным остатком, который поддается дериватизации, как описано в настоящем документе.
[0128] Используемые в настоящем документе термины "аминокислота", "аминокислотный остаток" и подобное относятся к природным аминокислотам, неприродным аминокислотам и модифицированным аминокислотам. Если не указано обратное, любая ссылка на аминокислоту, в общем или специально в названии, включает в себя ссылку как на D, так и L стереоизомеры, если их структура позволяет такие стереоизомерные формы. Природные аминокислоты включают в себя аланин (Ala), аргинин (Arg), аспарагин (Asn), аспарагиновую кислоту (Asp), цистеин (Cys), глутамин (Gin), глутаминовую кислоту (Glu), глицин (Gly), гистидин (His), изолейцин (Не), лейцин (Leu), лизин (Lys), метионин (Met), фенилаланин (Phe), пролин (Pro), серии (Ser), треонин (Thr), триптофан (Тгр), тирозин (Туг) и валин (Val). Неприродные аминокислоты включают в себя без ограничения гомолизин, гомоаргинин, гомосерин, азетидинкарбоновую кислоту, 2-аминоадипиновую кислоту, 3-аминоадипиновую кислоту, бета-аланин, аминопропионовую кислоту, 2-аминомасляную кислоту, 4-аминомасляную кислоту, 6-аминокапроновую кислоту, 2-аминогептановую кислоту, 2-аминоизомасляную кислоту, 3-аминоизомасляную кислоту, 2-аминопимелиновую кислоту, третичный бутилглицин, 2,4-диаминоизомасляную кислоту, десмозин, 2,2'-диаминопимелиновую кислоту, 2,3-диаминопропионовую кислоту, N-этилглицин, N-этил аспарагин, гомопролин, гидроксилизин, алло-гидроксилизин, 3-гидроксипролин, 4-гидроксипролин, изодесмозин, алло-изолейцин, N-метилаланин, N-метилглицин, N-метилизолейцин, N-метилпентилглицин, N-метилвалин, нафталанин, норвалин, норлейцин, орнитин, пентилглицин, пипеколиновую кислоту и тиопролин. Дополнительные неприродные аминокислоты включают в себя модифицированные аминокислотные остатки, которые являются химически блокированными, обратимо или необратимо, или химически модифицированными на их N-концевой аминогруппе или их группах боковой цепи, как
например, N-метилированные D и L аминокислоты или остатки, где функциональные группы боковой цепи химически модифицированы до другой функциональной группы. Например, модифицированные аминокислоты включают в себя метионинсульфоксид; метионинсульфон; бета-метиловый сложный эфир аспарагиновой кислоты, модифицированную аминокислоту аспарагиновой кислоты; N-этилглицин, модифицированную аминокислоту глицина; или аланинкарбоксамид, модифицированную аминокислоту аланина. Дополнительные остатки, которые могут быть включены, описаны в Sandberg etal, J. Med. Chem. 41: 2481-91, 1998.
[0129] Как упоминалось выше, химические фрагменты, подходящие для такой дериватизации лептинов и других полипептидов, включают в себя, например, различные водорастворимые полимеры. Предпочтительно, для терапевтического применения препарата конечного продукта полимер будет фармацевтически приемлемым. Специалист в настоящей области техники будет способен выбрать необходимый полимер на основании таких соображений, как будет ли конъюгат полимер/белок использоваться терапевтически, и если это так, то на основании необходимой дозировки, времени циркуляции, устойчивости к протеолизу и других соображений. Для сконструированных полипептидов и лептинов эффективность дериватизации может быть установлена путем введения дериватизированного лептина или дериватизированного сконструированного полипептида, в необходимой форме (т.е., с помощью осмотического насоса или более предпочтительно путем инъекции или инфузии или дополнительно составлен, например, для пероральной, пульмонарной или назальной доставки) и наблюдения за описанными в настоящем документе биологическими эффектами и биологическими ответами.
[0130] Такой водорастворимый полимер может быть выбран из группы, состоящей, например, из следующего: полиэтил енгликоль, сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпиролидон, поли-1, 3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена и малеинового ангидрида, полиаминокислоты (или гомополимеры, или случайные сополимеры) и декстран или поли(п-винилпиролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры полипропиленоксида и этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы и поливиниловый спирт. Пропиональдегид
полиэтиленгликоля может обладать преимуществами в производстве из-за его стабильности в воде. Также может быть использован сукцинат и стирен. [0131] Производные лептина, используемые в разработке и получении сконструированных полипептидов согласно настоящему изобретению, могут быть получены с помощью прикрепления полиаминокислот или разветвленных аминокислот к фрагменту лептина. Например, полиаминокислота может быть дополнительным белком-носителем, таким как Fc фрагмент, который может служить, чтобы также увеличивать полупериод циркуляции лептина или сконструированного полипептида, в дополнение к преимуществам, достигаемым путем прикрепления АВМ или ABD. Кроме того, такие полиаминокислоты могут быть выбраны из группы, состоящей из сывороточного альбумина (такого как сывороточный альбумин человека), дополнительного антитела или его части (например, участок Fc) или других полиаминокислот, например, полилизинов. Как указано ниже, расположение места прикрепления полиаминокислоты может находиться на N-конце фрагмента лептина, или С-конце, или других местах между ними, а также она может быть соединена с помощью химического "линкерного" фрагмента с лептином, таким как пептидный линкер или непептидный линкер.
[0132] Полимер может характеризоваться любой молекулярной массой и может быть разветвленным или неразветвленным. Для полиэтиленгликоля предпочтительная молекулярная масса составляет от приблизительно 2 килодальтонов (кДа) до приблизительно 100 кДа (термин "приблизительно", указывающее, что в препаратах полиэтиленгликоля некоторые молекулы будут иметь массу больше, немного меньше, чем указанная молекулярная масса) для простоты манипуляции и производства. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 2 кДа до приблизительно 60 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 2 кДа до приблизительно 40 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 5 кДа до приблизительно 40 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 10 кДа до приблизительно 40 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 5 кДа до приблизительно 30 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления
полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 5 кДа до приблизительно 20 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления полиэтиленгликоль характеризуется от приблизительно 10 кДа до приблизительно 20 кДа. Могут быть использованы другие размеры в зависимости от необходимого терапевтического профиля (например, продолжительность необходимого замедленного высвобождения, характеристик растворимости, эффектов, если они имеют место, на биологическую активность, простоты в обращении, степени или отсутствии антигенности и других известных эффектов полиэтиленгликоля, прикрепленного к лептину и/или к сконструированному полипептиду настоящего изобретения). Дополнительные соображения, которые могут иметь влияние на выбор PEG конкретной молекулярной массы, который может быть прикреплен к лептину для создания производного лептина согласно настоящему изобретению, включают в себя степень, с которой PEG с такой молекулярной массой может: уменьшать агрегацию и/или увеличивать растворимость лептина и/или сконструированного полипептида, когда он присутствует в фармацевтически приемлемой композиции или составе, или при его воздействии на физиологические жидкости или ткани при введении субъекту (например, путем инъекции); уменьшать возникновение реакций в месте инъекции, вызванных введением лептина или сконструированного полипептида при введении субъекту путем инъекции; уменьшать образование нейтрализирующих антител, которые могут возникать к лептину или сконструированному полипептиду в результате введения такого лептина или сконструированного полипептида субъекту; и подобное.
[0133] Число прикрепленных таким образом полимерных молекул может варьировать, и специалист в настоящей области техники будет способен установить полученный эффект на функцию. Можно произвести монодериватизацию или можно обеспечить ди-, три-, тетра- или некоторую комбинацию дериватизации с одинаковыми или различными химическими фрагментами (например, полимеры, такие как различные массы полиэтил енгликол ей). Пропорция полимерных молекул к молекулам лептина или молекулам сконструированного полипептида, подлежащего дериватизации, будет варьировать, как и их концентрации в реакционной смеси. В общем, оптимальное соотношение, с точки зрения эффективности реакции, в которой отсутствует избыток непрореагированного лептина (или сконструированного полипептида, в зависимости от конкретного случая) или полимера, будет определяться такими факторами, как
необходимая степень дериватизации (например, моно-, ди-, три- и т.д.), молекулярная масса выбранного полимера, является ли полимер разветвленным или неразветвленным и условия реакции.
[0134] Химические фрагменты должны быть прикреплены к лептину и/или сконструированному полипептиду с учетом эффектов на функциональные или антигенные домены лептина и/или на сконструированный полипептид. Существует ряд способов прикрепления, доступных специалистам в настоящей области техники. Например, европейский патент № ЕР 0 401 384, включенный в настоящий документ посредством ссылки (связывание PEG с G-CSF), смотрите также Malik et al, 1992, Exp. Hematol. 20:10281035 (сообщающую о пегилировании GM-CSF с применением трезил хлорида). Например, полиэтиленгликоль может быть ковалентно связан посредством аминокислотных остатков через реактивную группу, такую как, свободная амино или карбоксильная группа. Реактивные группы представляют собой группы, к которым может быть прикреплена активированная молекула полиэтиленгликоля. Аминокислотные остатки, характеризующиеся свободной аминогруппой, могут включать в себя остатки лизина и N-концевой аминокислотный остаток. Остатки, характеризующиеся свободной карбоксильной группой, могут включать в себя остатки аспарагиновой кислоты, остатки глутаминовой кислоты и С-концевой аминокислотный остаток. Сульфгидрильные группы могут также быть использованы в качестве реактивной группы для прикрепления молекулы(молекул) полиэтиленгликоля. Предпочтительным для терапевтических целей является прикрепление на аминогруппу, например, прикрепление на N-конец или группу лизина. Прикрепления на остатки, важные для связывания с рецептором, нужно избегать, если необходимо связывание с рецептором.
[0135] В частности, может быть необходимым разработать и получить химически модифицированный на N-конце лептин для применения в получении сконструированных полипептидов настоящего изобретения. Используя полиэтиленгликоль в качестве иллюстрации настоящих композиций, можно выбрать из разнообразных молекул полиэтиленгликоля (по молекулярной массе, разветвлению и т.д.), пропорцию молекул полиэтиленгликоля к молекулам лептина или сконструированного полипептида, в зависимости от конкретного случая, в реакционной смеси, тип реакции пегилирования, которую необходимо провести и способ получения выбранного пегилированного на
N-конце белка. Способ получения пегилированного на N-конце препарата (т.е., отделение этого фрагмента от других монопегилированных фрагментов при необходимости) может быть осуществлено путем очищения пегилированного на N-конце материала от популяции пегилированных белковых молекул. Селективная N-концевая химическая модификация может быть осуществлена путем восстановительного алкилирования, которое использует отличающуюся реактивность различных типов первичных аминогруппы (лизин в сравнении с N-концом), доступных для дериватизации в конкретном белке. При соответствующих условий реакции достигается, по сути, селективная дериватизация белка на N-конце с содержащим карбонильную группу полимером. Например, можно селективно пегилировать белок на N-конце путем проведения реакции при рН, который позволяет воспользоваться преимуществом различий в рКа между s-аминогруппой остатков лизина и а-аминогруппой N-концевого остатка белка. С помощью такой селективной дериватизации прикрепление водорастворимого полимера к белку является контролируемым: конъюгация с полимером имеет место преимущественно на N-конце белка и не возникает существенная модификация других реактивных групп, таких как аминогруппы боковой цепи лизина. Используя восстановительное алкилирование, водорастворимый полимер может быть такого типа, как описан выше, и должен содержать один реактивный альдегид для связывания с белком. Может быть использован пропиональдегид полиэтиленгликоля, содержащий один реактивный альдегид.
[0136] Согласно некоторым вариантам осуществления представлены соединения, содержащие линкер, например, описанный в настоящем документе L1, ковалентно соединяющий полипептидный гормональный домен с пептидом ABD. Согласно некоторым вариантам осуществления первый линкер (L1) ковал ентно соединяет HD1 в сконструированном полипептиде. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептидный гормональный домен (например, описанный в настоящем документе HD1) может быть ковалентно соединен с пептидом ABD посредством пептидного линкера. Любой линкер является необязательным, т.е., любой линкер может быть просто связью. Если он присутствует, то химическая структура линкера не является критической, поскольку он выполняет, главным образом, спейсерную функцию. Согласно одному варианту осуществления линкер содержит от 1 до 30 или меньше аминокислот, соединенных пептидными связями. Аминокислоты могут быть выбраны из 20 природных
аминокислот. Альтернативно, неприродные аминокислоты могут быть включены либо путем химического синтеза, посттрансляционной химической модификации, либо путем встраивания in vivo с помощью рекомбинантной экспрессии в клетку хозяина. Некоторые из этих аминокислот могут быть гликозилированы.
[0137] Согласно определенным вариантам осуществления от 1 до 30 или меньше аминокислот выбирают из глицина, аланина, пролина, аспарагина, глутамина, лизина, аспартата и глутамата. Согласно дополнительному варианту осуществления линкер состоит из большей части аминокислот, которые являются стерически незатрудненными, таких как глицин, аланин и/или серии. Полиглицины являются особенно применимыми, например, (Gly)3, (Gly)4 (SEQ ID N0:116), (Gly)5 (SEQ ID N0:117), равно как и полиаланины, поли(С1у-А1а), поли(01уп-8ег), поли (Glyn -Glu), поли(С1уп -Lys), поли(01уп -Asp), и поли(01уп-А^) мотивы. Другие конкретные примеры линкеров представляют собой (Gly)3Lys(Gly)4 (SEQ ID N0:118); (Gly)3AsnGlySer(Gly)2 (SEQ ID N0:119); (Gly)3Cys(Gly)4 (SEQ ID N0:120); и GlyProAsnGlyGly (SEQ ID N0:121). Комбинации Gly и Ala являются особенно применимыми, равно как и комбинация Gly и Ser. Таким образом, согласно дополнительному варианту осуществления пептидный линкер выбран из группы, состоящей из обогащенного глицином пептида, например, Gly-Gly-Gly; последовательностей [Gly-Ser]n (SEQ ID N0:122), [Gly- Gly- Ser]n (SEQ ID N0:123), [Gly-Gly-Gly- Ser]n (SEQ ID N0:124) и [Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]n (SEQ ID N0:125), где n составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, например, [Gly-Gly-Gly Ser]i (SEQ ID NO: 149), [Gly-Gly-Gly-Gly Ser]i (SEQ ID NO: 150), [Gly-Gly-Gly Ser]4 (SEQ ID NO: 151), или [Gly-Gly-Gly-Gly Ser]3 (SEQ ID NO: 152).
[0138] Согласно определенным вариантам осуществления могут быть использованы заряженные линкеры. Такие заряженные линкеры могут содержать значительное число кислотных остатков (например, Asp, Glu и подобное) или могут содержать значительное число основных остатков (например, Lys, Arg и подобное), так чтобы линкер характеризовался pi ниже чем 7 или больше чем 7, соответственно. Как понятно специалисту в настоящей области техники и при прочих равных условиях, чем больше относительное количество кислотных или основных остатков в данном линкере, тем ниже или выше, соответственно, будет pi линкера. Такие линкеры могут обеспечивать преимущества раскрытым в настоящем документе сконструированным полипептидам,
например, улучшение характеристик растворимости и/или стабильности таких полипептидов при конкретном рН, таком как физиологический рН (например, от рН 7,2 до рН 7,6 включительно), или рН фармацевтической композиции, содержащей такие полипептиды.
[0139] Например, "кислотный линкер" представляет собой линкер, который характеризуется pi меньше чем 7; от 6 до 7, включительно; от 5 до 6, включительно; от 4 до 5, включительно; от 3 до 4, включительно; от 2 до 3, включительно; или от 1 до 2, включительно. Аналогично, "основный линкер" представляет собой линкер, который характеризуется pi больше чем 7; от 7 до 8, включительно; от 8 до 9, включительно; от 9 до 10, включительно; от 10 до 11, включительно; от 11 до 12 включительно, или от 12 до 13, включительно. Согласно определенным вариантам осуществления кислотный линкер будет содержать последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из [Gly-Glu]n (SEQ ID N0:126); [Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID N0:127); [Gly-Gly-Gly- Glu]" (SEQ ID N0:128); [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID N0:129), [Gly-Asp] " (SEQ ID N0:130); [Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID N0:131); [Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID N0:132); [Gly-Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID N0:133), где n представляет собой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше; например, [Gly-Gly-Glu]6 (SEQ ID NO: 153). Согласно определенным вариантам осуществления основный линкер будет содержать последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из [Gly-Lys]n (SEQ ID N0:134); [Gly-Gly- Lys]n (SEQ ID N0:135); [Gly-Gly-Gly- Lys]n (SEQ ID N0:136); [Gly-Gly-Gly-Gly- Lys]" (SEQ ID N0:137), [Gly- Arg]" (SEQ ID N0:138); [Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID N0:139); [Gly-Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID N0:140); [Gly-Gly-Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID N0:141), где n представляет собой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше; например, [Gly-Gly-Lys]6 (SEQ ID NO: 154)
[0140] Кроме того, могут быть получены линкеры, которые обладают определенными структурными мотивами или характеристиками, такими как а спираль. Например, такой линкер может содержать последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]n (SEQ ID N0:142), где п представляет собой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и больше; например, [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]3 (SEQ ID NO: 155), [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]4 (SEQ ID NO: 156), или [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]5 (SEQ ID NO: 157).
[0141] Кроме того, непептидный линкер может быть использован, чтобы служить в качестве L1 фрагмента описанного в настоящем документе сконструированного
полипептида. Например, как понимают в настоящей области техники, иллюстративный непептидный линкер, такой как PEG линкер, может быть использован совместно. Смотрите, например, публикацию международной заявки WO2000024782. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 1000 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 500 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 100 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 50 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 10 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 5 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 1 кДа. Согласно определенным вариантам осуществления такой PEG линкер характеризуется молекулярной массой от 100 Да до 500 Да.
[0142] Также понятно, что подходящие для применения согласно настоящему изобретению линкеры могут обладать одной или несколькими описанными выше характеристиками и мотивами. Например, линкер может содержать кислотный линкер, а также такой структурный мотив, как альфа-спираль. Аналогично, линкер может содержать основный линкер и такой структурный мотив, как альфа-спираль. Линкер может содержать кислотный линкер, основный линкер и такой структурный мотив, как а-спираль. Кроме того, также понятно, что сконструированные полипептиды согласно настоящему изобретению могут обладать больше чем одним линкером, и каждый такой линкер может обладать одной или несколькими описанными выше характеристиками. [0143] Описанные в настоящем документе линкеры являются иллюстративными, и линкеры в пределах объема настоящего изобретения могут быть намного длиннее и могут включать в себя другие остатки. Согласно одному варианту осуществления явным образом исключены сконструированные полипептиды, в которых соединение лептина соединено напрямую с ABD без линкера.
[0144] Согласно некоторым вариантам осуществления сконструированный полипептид включает в себя ABD на N-конце и HD1 на С-конце. Наоборот, согласно некоторым
вариантам осуществления сконструированный полипептид содержит ABD на С-конце и HD1 на N-конце. Согласно некоторым вариантам осуществления либо N-концевым, либо С-концевым является лептин, фрагмент лептина или аналог лептина. Предпочтительно, ABD находится на N-конце соединения лептина. Дополнительно к вариантам осуществления, которые включают в себя ABD и HD1, сконструированный полипептид может характеризоваться структурой ABD-HD1 или HD1-ABD (обе читаемые в ориентации с N-конца до С-конца).
[0145] Понятно, что в отсутствие прямого указания N-конца и/или С-конца представленного в настоящем документе сконструированного полипептида, сконструированный полипептид следует читать в ориентации с N-конца до С-конца. Например, если HD1 представляет собой лептин или его аналог, термины HD1-ABD, HD1-Ll-ABD, HD1-ABD и подобное, в отсутствие прямого указания N-конца и/или С-конца, означают, что соединение лептина находится на N-конце сконструированного полипептида, и ABD находится на С-конце. Наоборот, если N-конец и/или С-конец точно указаны, то сконструированный полипептид следует читать согласно прямому указанию концов. Например, термины ШМс-концевой-АВБ, HDl-Ll-ABDN-концевой и подобное означает, что ABD находится на N-конце сконструированного полипептида, a HD1 находится на С-конце.
[0146] Согласно некоторым вариантам осуществления описанных выше сконструированных полипептидов HD1 представляет собой лептин человека или метрелептин. Согласно некоторым дополнительным вариантам осуществления HD1 представляет собой описанный в настоящем документе аналог лептина. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина представляет собой лептин А100, А300 или А500.
[0147] Согласно некоторым вариантам осуществления описанный в настоящем документе сконструированный полипептид характеризуется аффинностью к сывороточному альбумину, которая отличается от аффинности полипептида ABD отдельно, т.е., в отсутствие конъюгированного гормонального домена. Для получения эффективной ассоциации сконструированный полипептид может характеризоваться аффинностью связывания с сывороточным альбумином, так чтобы константа диссоциации KD составляла, например, меньше чем приблизительно 10"6 М, 10"7 М, 10"8 М, 10"9 М, 10"10 М, 10"11 М, 10"12
М, 10"13 М, 10"14 М или даже 10"15 М. Согласно некоторым вариантам осуществления аффинность не является чрезмерно сильной, так чтобы сконструированный полипептид может диссоциироваться от альбумина и вызывает биологический ответ, например, связывание с рецептором, например, рецептором лептина. Аффинность может быть измерена, как описано в опубликованной заявке РСТ № WO 2009/016043, предпочтительно к сывороточному альбумину человека.
[0148] Согласно некоторым вариантам осуществления описанный в настоящем документе сконструированный полипептид превосходит соответствующее соединение, содержащее отличный фрагмент, который может увеличивать время полужизни в плазме (например, PEG или Fc или альбумина), конъюгированный с гормональным доменом(ами). В настоящем контексте, термин "превосходящий" относится к разнообразным функциональным свойствам, которые могут рассматриваться в оценке заболевания или нарушения. Например, описанный в настоящем документе сконструированный полипептид может нуждаться в менее биологически активном (гормональном домене) компоненте, например, в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз или даже менее, чем соответствующее соединение, содержащее отличный фрагмент, конъюгированный с гормональным доменом(ами). В качестве дополнительного примера, описанный в настоящем документе сконструированный полипептид может характеризоваться более высокой активностью, например, в 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз или даже более высокой активностью.
[0149] Предусмотренные в настоящем документе сконструированные полипептидные соединения включают в себя соединения, представленные в таблице 2 ниже.
Соединение
Последовательность
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALK LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:54)
22509,0
MVPIQKVQDD TKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKVL ANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V EALKLHILAALP (SEQ ID N0:55)
21734,3
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSG GGSASLAEAK V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V EALKLHILAALP (SEQ ID N0:56)
22509,0
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALK
LHILAALPTGGGGSGGGSGGGSGGGSASISIEKIQADTKTL
TKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADM
DQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKN
CPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEWTLDRLRKSLKNI
EKQLDHIQGC (SEQ ID N0:57)
22984,4
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALK LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:58)
22597,1
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLD FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVL AF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS ТЕ WALSRLQ GSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGS GGGS GGGS GGGSASLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEG VEALKLHILAALP (SEQ ID N0:59)
22597,1
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALK LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDDTKTLI KTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQ ILATYQQILTSLQSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPV P R A R G S D TIК G L G N V L R A S V H S T E V V ALSRLKAALQDML RQLDRNPGC (SEQ ID N0:60)
22592,9
Соединение
Последовательность
М L А Е А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V Е G V Е A L К LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDDTKTLI KTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQI L AT YQQILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CP VP RARGSD TTKGLGNVLRAS VHS ТЕ WALSRLK AALQDMLR QLDRNPGC (SEQ ID N0:61)
22576,7
M L A E А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V E A L К LHILAALPTGPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSPR VAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQIS NDLENLRDLLHVL AF SKS CP VPRARGSD TTKGLGNVLRAS VHSTEWALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:62)
21332,7
MLAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNIINRAKTVEGVRALK LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:63)
22624,7
MLAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNIINRAKTVEGVRALK LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:64)
22536,6
M L A E А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V E A L К LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:65)
22480,95
M L A E А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V E A L К LHILAALPTGLAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKA AAASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVT GLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISND LENLRDLLH VLAF SKS CHLPQ AS GLETLESLGGVLEAS GY STEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:66)
24224,6
M L A E А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V E G V E A L К LHILAALPTGGEGGEGGEGGEGGEGGEASVPIQKVQDDTK TLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQD MLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:67)
22876,9
Соединение
Последовательность
М L А Е А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V Е G V Е A L К LHILAALPTGGKGGKGGKGGKGGKGGKASVPIQKVQDDT KTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSK MDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFS KS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEVYALSRLQGSL QDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:68)
22871,2
М L А Е А К V LANRELDKYG V SDFYKRLINKAKT V Е G V Е A L К LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC SLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDIL QQLDLSPEC (SEQ ID N0:69)
22583,6
M L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A L T LHILAALPTGGGGASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT QSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSM PSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESL GGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:70)
21597,02
M L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A L T LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:71)
22458,80
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKED AIKELDKYG V SDYYKNLINKAK TV E G V EALTLHILAALP (SEQ ID N0:72)
21684,10
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE
FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN
LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE
WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSG
GGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGV
EALTLHILAALP (SEQ ID N0:73)
22458,80
M L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A L T
LHILAALPTGGGGSGGGSGGGSGGGSASISIEKIQADTKTL
TKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADM
DQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKN
CPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEWTLDRLRKSLKNI
EKQLDHIQGC (SEQ ID N0:74)
22934,18
Соединение
Последовательность
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:75)
22546,92
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLD FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVL AF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS ТЕ WALSRLQ GSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGS GGGS GGGS GGGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEG VEALTLHILAALP (SEQ ID N0:76)
22546,92
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDDTKTLI KTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQ ILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPV PRARGSDTTKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDML RQLDRNPGC (SEQ ID N0:77)
22544,03
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDDTKTLI KTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQI L AT YQQILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CP VP RARGSD TTKGLGNVLRAS VHS ТЕ WALSRLK AALQDMLR QLDRNPGC (SEQ ID N0:78)
22527,96
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LfflLAALPTGPIQRVQDDTKTLIKTTITRINDISPPQGVCSPR VAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQIS NDLENLRDLLHVL AF SKS CP VPRARGSD TTKGLGNVLRAS VHSTEWALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:79)
21196,74
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:80)
22546,92
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:81)
22458,80
Соединение
Последовательность
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:82)
22430,75
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHILAALPTGLAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKA AAASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVT GLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVTQISND LENLRDLLH VLAF SKS CHLPQ AS GLETLESLGGVLEAS GY STEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:83)
24175,99
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHILAALPTGGEGGEGGEGGEGGEGGEASVPIQKVQDDTK TLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQD MLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:84)
22828,13
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHILAALPTGGKGGKGGKGGKGGKGGKASVPIQKVQDDT KTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSK MDQTLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFS KS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSL QDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:85)
22836,51
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALT LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC SLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDIL QQLDLSPEC (SEQ ID N0:86)
22534,83
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EILAALPTGGGGASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMP SRNVTQISNDLENLRDLLHVLAF SKS CHLPQ AS GLETLESL GGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:87)
21574,96
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCH LPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDML QQLDLSPGC (SEQ ID N0:88)
22436,75
Соединение
Последовательность
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE
FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN
LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE
WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKED
AIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP
(SEQ ID N0:89)
21662,04
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLE
FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN
LRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE
WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSG
GGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGV
EALISEILAALP (SEQ ID N0:90)
22436,75
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASISIEKIQ ADTKTLT KTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMD QTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNC PFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEWTLDRLRKSLKNIE KQLDHIQGC (SEQ ID N0:91)
22912,13
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTrVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:92)
22524,86
MVPIQKVQDD TKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLD FIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLEN LRDLLHVL AF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS ТЕ WALSRLQ GSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGS GGGS GGGS GGGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEG VEALISEILAALP (SEQ ID N0:93)
22524,86
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDD TKTLIK TIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQIL ATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVP RARGSD TTKGLGNVLRAS VHS ТЕ WALSRLK AALQDMLR QLDRNPGC (SEQ ID N0:94)
22521,97
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS ASPIQRVQDD TKTLIK TIITRINDISPPQGVS SRPRVAGLDFIPRVQ S VRTLSGMDQIL ATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVP RARGSD TTKGLGNVLRAS VHS ТЕ WALSRLK AALQDMLR QLDRNPGC (SEQ ID N0:95)
22505,91
Соединение
Последовательность
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EILAALPTGPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSPRV AGLDFIPRVQ S VRTLS GMDQIL ATYQ QILTSLQ SRNVIQISN DLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASV HS TEW ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:96)
21174,68
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTrVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEV VALSRLQGSLQD MLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:97)
22524,86
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCH LPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDML QQLDLSPGC (SEQ ID N0:98)
22436,75
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTrVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:99)
22408,70
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EILAALPTGLAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAA AASWIQKVQDDTKTLIKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGL EFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLE NLRDLLHVL AF SKS CHLPQ AS GLETLESLGGVLEAS GYS T EWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:100)
24153,93
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS
EILAALPTGGEGGEGGEGGEGGEGGEASVPIQKVQDDTKT
LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD
QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC
HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM
LQQLDLSPGC (SEQ ID N0:101)
22806,08
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EILAALPTGGKGGKGGKGGKGGKGGKASVPIQKVQDDTK TLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQD MLQQLDLSPGC (SEQ ID NO: 102)
22800,43
Соединение
Последовательность
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCS LPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDILQ QLDLSPEC (SEQ ID N0:103)
22512,78
M L A E А К V LANRELDKYG V SDYYKNLINKAK TV E G V E A L TLHILAALPTGGGGSGGGSGGGSGGGSASVPIQKVQDDTK TLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKS CHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQD MLQQLDLSPGC (SEQ ID NO: 104)
22455,85
MLAEAKED AIKELDK YGVSD Y YKRLISKAKT VEGVKALIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCH LPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDML QQLDLSPGC (SEQ ID N0:105)
22450,87
M L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A L T LHIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDDTKT LIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSC HLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDM LQQLDLSPGC (SEQ ID NO: 106)
22458,80
M L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A LIS EIL AALPTGGGGS GGGS GGGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTL IKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCH LPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDML QQLDLSPGC (SEQ ID N0:107)
22436,75
[0150] Особо предусмотрены соединения описанных выше последовательностей, в которых отсутствует N-концевой метионин, например, где N-конец начинается с VPIQKV (SEQ ID N0: 158) или LAEAK (SEQ ID N0: 159) например, для соединений лептина. N-концевой метионин присутствует, в первую очередь, как возможность для бактериальной экспрессии. Тем не менее, конъюгированные пептиды настоящего изобретения могут быть эскпрессированы в эукариотической клетке хозяина (например, дрожжевой (например, Pichia), клетке млекопитающего, бакуловируса) или другой клетке хозяина, характеризующейся посттрансляционным N-концевым протеолитическим процессингом для получения N-концевой аминокислоты, в том виде, в каком она обнаруживается в
природных зрелом пептидном аналоге необходимого гормона или последовательности ABD. Альтернативно, N-концевая последовательность, используемая для экспрессии и/или секреции, может быть последовательностью, которая может быть удалена посттрансляционно, например, путем применения такой протеазы, как TEV.
III. Способы конструирования и получения
[0151] Создание конструкций. Сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, можно сконструировать на аминокислотном уровне. Данные последовательности затем можно обратно транслировать, применяя множество продуктов программного обеспечения, известных в данной области, так что нуклеотидная последовательность оптимизируется в отношении требуемого хозяина экспрессии, основываясь, например, на экспрессии белка, оптимизации кодонов, составе участка рестрикции. Например, можно оптимизировать нуклеотидную последовательность для экспрессии белка на основе Е. coli и для состава участка рестрикции. На основе интересующей нуклеотидной последовательности, можно предложить перекрывающиеся олигонуклеотиды для многостадийной ПНР, как известно в данной области. Данные олигонуклеотиды можно использовать в множественных реакциях ПТ TP в условиях, хорошо известных в данной области, чтобы сконструировать кДНК, кодирующую интересующий белок. В качестве одного примера служит IX буфер Amplitaq, 1,3 мМ MgCb, 200 мкМ dNTP, 4 ед. Amplitaq Gold, 0,2 мкМ каждого праймера (AmpliTaq Gold, ABI), с параметрами для циклов: (94С:30с, 58С:1 мин, 72С:1 мин), 35 циклов.
[0152] Участки рестрикции можно добавлять к концам продуктов ПТ TP для применения в лигировании вектора, как известно в данной области. Специфические участки могут включать в себя Ndel и Xhol, так что кДНК может тогда находиться в надлежащей рамке считывания в экспрессирующем векторе pET45b (Novagen). Используя данные участки, любую N-концевую His-метку, которая находится в данном векторе, можно удалить, поскольку участок начала трансляции был бы тогда ниже метки. Как только завершается экспрессия конструктов, можно провести проверку секвенированием, применяя, например, праймер к Т7-промотору, праймер к Т7-терминатору и стандартные протоколы ABI BigDye Term v3.1, как известно в данной области. Информацию о последовательности можно получать, например, при помощи ДНК-анализатора ABI 3730 и можно проанализировать,
используя программное обеспечение Vector NTI v. 10 (Invitrogen). Экспрессирующие конструкции можно конструировать модульным образом так, что последовательности линкеров легко можно вырезать или изменять, как известно в данной области. [0153] Участки распознавания протеаз, известные в данной области или описываемые в настоящем документе, можно встраивать в конструкции, применимые для разработки, конструирования, манипуляции и получения рекомбинантных сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе.
[0154] Основные способы получения. Сконструированные полипептидные соединения, описываемые в настоящем документе, можно получать, применяя биологические, химические способы и/или способы рекомбинантной ДНК, которые известны в данной области. Иллюстративные способы описаны в настоящем документе и в патенте США № 6872700; WO 2007/139941; WO 2007/140284; WO 2008/082274; WO 2009/011544; и публикации США № 2007/0238669, описания которых полностью и во всех отношениях включено в настоящий документ в качестве ссылки. Другие способы получения соединений приведены в настоящем документе.
[0155] Сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, можно получать, применяя стандартные методики твердофазного пептидного синтеза, такие как для автоматизированного или полуавтоматизированного пептидного синтезатора. Типично, применяя такие методики, защищенную альфа-К-карбамоилом аминокислоту и аминокислоту, прикрепленную к растущей пептидной цепи на смоле, связывают при RT в инертном растворителе (например, в диметилформамиде, N-метилпирролидиноне, метиленхлориде и тому подобном) в присутствие связывающих агентов (например, дициклогексилкарбодиимида, 1 -гидроксибензотриазола и тому подобного) в присутствие основания (например, диизопропилэтиламина и тому подобного). Альфа-М-карбамоильную защитную группу удаляют с полученного пептида на смоле, применяя реагент (например, трифторуксусную кислоту, пиперидин и тому подобное), реакцию связывания повторяют со следующей требуемой N-защищенной аминокислотой, которую необходимо добавить к пептидной цепи. Подходящие N-защитные группы хорошо известны в данной области, такие как трет-бутилоксикарбонил (tBoc), флуоренилметоксикарбонил (Fmoc) и тому подобное. Растворители, производные аминокислот и 4-метилбензгидриламиновую смолу,
применяемые в пептидном синтезаторе можно приобрести в Applied Biosystems Inc. (Foster City, CA).
[0156] В отношении химического синтеза твердофазный пептидный синтез можно использовать для сконструированных полипептидов, так как в основном твердофазный синтез является эффективным подходом с превосходной возможностью наращивания производства до коммерческого масштаба, и, как правило, подходит для относительно длинных сконструированных полипептидов. Твердофазный пептидный синтез можно выполнить при помощи автоматизированного пептидного синтезатора (модель 43 OA, Applied Biosystems Inc., Foster City, CA), используя систему NMP/HOBt (опция 1) и tBoc-или Fmoc-химию (Смотри APPLIED BIOSYSTEMS USER'S MANUAL FOR THE ABI 43OA PEPTIDE SYNTHESIZER, Version 1.3B Jul. 1, 1988, section 6, pp. 49-70, Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) с использованием кэппирования. Комплекс Вос-пептид-смола можно расщепить с использованием HF (от -5°С до 0°С, 1 час). Пептид можно экстрагировать из смолы при использовании попеременно воды и уксусной кислоты и фильтраты можно лиофилизировать. Комплекс Fmoc-пептид-смола можно расщепить согласно стандартным способам (например, Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc., 1990, pp. 6-12). Пептиды можно также собрать, используя синтезатор Advanced Chem Tech Synthesizer (модель MPS 350, Louisville, Ky).
[0157] Соединения, описываемые в настоящем документе, можно также получить, применяя способы рекомбинантной ДНК, используя известные в данной области способы, такие как Sambrook et al., 1989, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2d Ed., Cold Spring Harbor. Непептидные соединения можно получать известными в данной области способами. Например, содержащие фосфат аминокислоты и пептиды, содержащие такие аминокислоты, можно получать, используя известные в данной области способы, такие, как описано у Bartlett et al, 1986, Biorg. Chem. 14:356-377.
[0158] Сконструированные полипептиды можно альтернативно получать рекомбинантными способами, хорошо известными в данной области. Смотри, например, Sambrook et al., 1989 (Id.). Такие сконструированные полипептиды, получаемые рекомбинантными способами, можно экспрессировать из полинуклеотида. Специалист в данной области определит, что полинуклеотиды, включая ДНК и РНК, которые кодируют такие сконструированные полипептиды, можно получить из кДНК дикого типа, например,
лептина человека, принимая во внимание вырожденность частоты использования кодона, и можно дополнительно сконструировать, как требуется для того, чтобы встроить указанные замены. Такие полинуклеотидные последовательности могут содержать кодоны, способствующие транскрипции и трансляции мРНК в микробиальном хозяине. Такие промышленно производимые последовательности можно легко сконструировать согласно способам, хорошо известным в данной области. Смотри, например, WO 83/04053, включенную в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях. Указанные выше полинуклеотиды также могут необязательно кодировать N-концевой остаток метионила. Непептидные соединения, применимые в настоящем изобретении можно получать известными в данной области способами. Например, содержащие фосфат аминокислоты и пептиды, содержащие такие аминокислоты можно получать, применяя известные в данной области способы. Смотри, например, Bartlett и Landen, 1986, Bioorg. Chem. 14: 356-77.
[0159] Множество систем экспрессирующий вектор/хозяин можно применять, чтобы они включали в себя и экспрессировали кодирующую последовательность сконструированного полипептида. Такие системы включают в себя в качестве неограничивающих примеров микроорганизмы, такие как бактерии, трансформированные рекомбинантными бактериофагами, плазмидными или космидными ДНК-экспрессирующими векторами; дрожжи, трансформированные дрожжевыми экспрессирующими векторами; системы из клеток насекомых, инфицированный вирусными экспрессирующими векторами (например, бакуловирус); системы из растительных клеток, трансфицированные вирусными экспрессирующими векторами (например, вирус мозаики цветной капусты, CaMV; вирус табачной мозаики, TMV) или трансформированные бактериальными экспрессирующими векторами (например, плазмиды Ti или pBR322); или системы из клеток животных. Клетки млекопитающих, которые применимы для рекомбинантного получения белков включают в себя в качестве неограничивающих примеров клетки VERO, клетки HeLa, клеточные линии яичника китайского хомячка (СНО), клетки COS (такие как COS-7), клетки WI 38, ВНК, HepG2, ЗТЗ, RIN, MDCK, А549, PC 12, К562 и 293. Иллюстративные протоколы для рекомбинантной экспрессии белка описаны в настоящем документе и/или известны в данной области.
[0160] Как таковые, полинуклеотидные последовательности применимы при создании новых и применимых вирусных и плазмидных ДНК-векторов, новых и применимых трансформированных и трансфицированных прокариотических и эукариотических клеток-хозяев (включая бактериальные, дрожжевые и клетки млекопитающих, растущих в культуре), и новых и применимых способов для роста в культуре таких клеток-хозяев, способных экспрессировать настоящие сконструированные полипептиды. Полинуклеотидные последовательности, кодирующие сконструированные полипептиды в настоящем документе, можно применять для генотерапии в случаях, где недостаточное производство сконструированных полипептидов было бы уменьшено, или была бы обеспечена необходимость в их повышенном уровне.
[0161] Настоящее изобретение также относится к способам получения рекомбинантной ДНК настоящих сконструированных полипептидов. Предлагается способ получения сконструированных полипептидов из клетки-хозяина, содержащей нуклеиновые кислоты, кодирующие сконструированный полипептид, предусматривающий: (а) культивирование клетки-хозяина, содержащей полинуклеотиды, кодирующие сконструированный полипептид в условиях, способствующих экспрессии молекулы ДНК; и (Ь) получение сконструированного полипептида.
[0162] Клетки-хозяева могут быть прокариотическими или эукариотическими и включают в себя бактерии, клетки млекопитающих (такие как клетки яичника китайского хомяка (СНО), клетки обезьяны, клетки почки новорождённого хомяка, злокачественные клетки или другие клетки), дрожжевые клетки и клетки насекомых.
[0163] Системы клеток-хозяев млекопитающих для экспрессии рекомбинантного белка тоже хорошо известны специалистам в данной области. Линии клеток-хозяев можно выбирать в отношении определенной способности процессировать экспрессируемый белок или производить определенные пост-трансляционные модификации, которые буду полезны при обеспечении активности белка. Такие модификации полипептида включают в качестве неограничивающих примеров, ацетилирование, карбоксилирование, гликозилирование, фосфорилирование, липидизацию и ацилирование. Посттрансляционный процессинг, при котором расщепляется "препро" форма белка, может также быть важным для правильного встраивания, укладки и/или функции. Разные клетки-хозяева, такие как СНО, HeLa, MDCK, 293, WI38 и тому подобное, обладают специфичным клеточным аппаратом и особенными
механизмами для таких посттрансляционных активностей, и их можно выбирать, чтобы гарантировать правильную модификацию и процессинг введенного чужеродного белка. [0164] Альтернативно, дрожжевые системы можно применять для создания сконструированных полипептидов по настоящему изобретению. Кодирующую область ДНК сконструированных полипептидов амплифицируют ПТ TP ДНК, кодирующую дрожжевую препро-альфа лидирующую последовательность амплифицируют из дрожжевой геномной ДНК в реакции ПНР, применяя один праймер, содержащий нуклеотиды 1-20 гена фактора альфа-спаривания и другой праймер, комплементарный нуклеотидам 255-235 данного гена (Kurjan и Herskowitz, 1982, Cell, 30: 933-43). Препро-альфа-лидирующую кодирующую последовательность и фрагменты кодирующей последовательности сконструированного полипептида лигируют в плазмиду, содержащую промотор дрожжевой алкогольдегидрогеназы (ADH2), так что промотор управляет экспрессией слитого белка, содержащего препро-альфа-фактор, слитый со зрелым сконструированным полипептидом. Как указано у Rose и Broach, Meth. Enz. 185: 234-79, Goeddel ed., Academic Press, Inc., San Diego, California (1990), вектор дополнительно включает в себя терминатор транскрипции ADH2 ниже сайта клонирования, "2-микронный" участок начала репликации дрожжей, ген leu-2d дрожжей, гены REP1 и REP2 дрожжей, ген бета-лактамазы Е. coli и участок начала репликации Е. coli. Гены бета-лактамазы и leu-2d обеспечивают селекцию в бактериях и дрожжах, соответственно. Ген leu-2d также способствует увеличению количества копий плазмиды в дрожжах для индукции более высоких уровней экспрессии. Гены REP1 и REP2 кодируют белки, вовлеченные в регуляцию количества копий плазмиды.
[0165] Конструкции ДНК, описанные в предыдущем абзаце, трансформируют в дрожжевые клетки, применяя известный способ, например, обработку ацетатом лития (Steams et al., 1990,. Meth. Enz. 185: 280-297). Промотор ADH2 индуцируется при истощении глюкозы в средах для выращивания (Price et al, 1987, Gene 55:287). Препро-альфа-последовательность влияет на секрецию слитого белка из клеток. Наряду с этим, дрожжевой белок КЕХ2 отщепляет препропоследовательность от зрелых сконструированных полипептидов (Bitter et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:53305334).
[0166] Сконструированные полипептиды по изобретению можно также рекомбинантно экспрессировать в дрожжах, например в Pichia, используя коммерчески доступную экспрессирующую систему, например, Pichia Expression System (Invitrogen, San Diego, CA), по инструкциям производителя. Данная система также основана на препро-альфа-последовательности для контроля секрецией, но интересующая транскрипция управляется промотором алкогольоксидазы (АОХ1) при индукции метанолом. Секретированный сконструированный полипептид очищают от дрожжевой среды для выращивания, например, способами, применяемыми для очистки указанного сконструированного полипептида из бактериальной надосадочной жидкости и надосадочной жидкости клеток млекопитающего.
[0167] Альтернативно, ДНК, кодирующую сконструированный полипептид, можно клонировать в экспрессирующий вектор бакуловируса, например, pVL1393 (PharMingen, San Diego, CA). Данный кодирующий сконструированный полипептид вектор затем применяют согласно указаниям производителя (PharMingen) или по известным методикам для инфицирования клеток Spodoptera frugiperda, растущих, например, в безбелковых средах sF9, и для получения рекомбинантного белка. Белок очищают и концентрируют из среды, применяя известные в данной области способы, например, на колонке гепарин-сефарозы (Pharmacia, Piscataway, New Jersey) и на последовательных колонках с молекулярными ситами (Amicon, Beverly, Massachusetts), и ресуспендируют в подходящем растворе, например PBS. Для того чтобы охарактеризовать белок можно использовать анализ SDS-PAGE, например, демонстрируя одну полоску, которая подтверждает размер требуемого сконструированного полипептида, также можно использовать анализ полной аминокислотной последовательности, например, секвенирование по Эдману на пептидном секвенаторе Proton 2090, или подтверждение его N-концевой последовательности. [0168] Например, последовательность ДНК, кодирующую предсказанный зрелый сконструированный полипептид, можно клонировать в плазмиду, содержащую необходимый промотор и, необязательно, лидирующую последовательность (смотри, например, Better et al., 1988, Science 240:1041-1043). Последовательность такой конструкции можно подтвердить при автоматическом секвенировании. Затем плазмиду трансформируют в Е. coli, штамм МС1061, используя стандартные процедуры, применяющие инкубацию в СаС12 и воздействие тепловым шоком на бактерии (Sambrook
et al, Id.). Трансформированные бактерии выращивают в среде LB, дополненной карбенициллином, и продукцию экспрессированного белка индуцируют выращиванием в подходящей среде. При наличии, лидирующая последовательность будет влиять на секрецию зрелого сконструированного полипептида и будет отщепляться во время секреции. Секретированный рекомбинантный сконструированный полипептид очищают от бактериальной среды для культивирования способом, описываемым в настоящем документе.
[0169] Альтернативно, сконструированные полипептиды можно экспрессировать в системе насекомых. Системы насекомых для экспрессии белка хорошо известны специалистам в данной области. В одной такой системе, Autographa californica вирус ядерного полиэдроза (AcNPV) применяют в качестве вектора для экспрессии чужеродных генов в клетках Spodoptera frugiperda или в Trichoplusia larvae. Кодирующую последовательность сконструированного полипептида клонируют в несущественный участок вируса, такой как ген полиэдрина, и размещают под контролем промотора полиэдрина. Успешное встраивание сконструированного полипептида приведет к неактивному состоянию гена полиэдрина и к получению рекомбинантных вирусов без белковой оболочки. Рекомбинантные вирусы затем применяют для инфицирования S. frugiperda cells или Trichoplusia larvae, в которых экспрессируется сконструированный полипептид по настоящему изобретению (Smith et al.,1983, J. Virol. 46:584; Engelhard et al, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3224-3227).
[0170] В другом примере последовательность ДНК, кодирующую сконструированные полипептиды, можно амплифицировать при ПТ TP и клонировать в подходящий вектор, например, pGEX-3X (Pharmacia, Piscataway, New Jersey). Вектор pGEX создан для продукции слитого белка, включающего в себя глутатион-8-трансферазу (GST), кодируемую вектором, и белок, кодируемый фрагментом ДНК, встроенным в сайт клонирования вектора. Праймеры для ПЦР можно сконструировать так, чтобы включить, например, подходящий сайт расщепления. Рекомбинантный слитный белок можно затем отщепить от части GST в слитом белке. Конструкцию pGEX-ЗХ/сконструированный полипептид трансформируют в клетки XL-1 Blue Е. coli (Stratagene, La Jolla, CA), и отдельные трансформанты выделяют и выращивают при 37°С в среде LB (дополненной карбенициллином) до оптической плотности 0,4 при длине волны 600 нм, после чего
следует дальнейшая инкубация в течение 4 часов в присутствие 0,5 мМ изопропил-бета-D-тиогалактопиранозида (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri). ДНК плазмиды из отдельных трансформантов очищают и частично секвенируют, применяя автоматические секвенаторы, чтобы подтвердить наличие встраивания требуемого гена, кодирующего сконструированный полипептид, в правильной ориентации.
[0171] Слитый белок, когда ожидается, что он будет получен в виде нерастворимого тельца включения у бактерий, можно очистить, как описано выше или как следует ниже. Клетки получают посредством центрифугирования; промывают в 0,15 М NaCl, 10 мМ Tris, рН 8, 1 мМ ЭДТА; и обрабатывают 0,1 мг/мл лизоцимом (Sigma Chemical Со.) в течение 15 мин при RT. Лизат очищают озвучиванием и клеточные инородные вещества осаждают при центрифугировании в течение 10 мин. при 12 000 х g. Содержащий слитый белок осадок ресуспендируют в 50 мМ Tris, рН 8, и 10 мМ ЭДТА, нанесенными слоями над 50% глицерином и центрифугируют в течение 30 мин. при 6000xg. Осадок ресуспендируют в стандартном фосфатно-солевом буферном растворе (PBS), не содержащем Mg++ и Са++. Слитый белок далее очищают при фракционировании ресуспендированного осадка в денатурирующем полиакриламидном геле с SDS (Sambrook et al, выше). Гель выдерживают в 0,4 М КС1 для визуализации белка, который вырезают и осуществляют электроэлюцию в буфере для проведения электрофореза без SDS. Если слитый белок GST/сконструированный полипептид получают в бактериях в качестве растворимого белка, его можно очищать, применяя GST Purification Module (Pharmacia Biotech). [0172] Слитый белок можно подвергнуть расщеплению для удаления GST от зрелого сконструированного полипептида. Реакционную смесь для расщепления (20-40 мкг слитого белка, 20-30 единиц тромбина человека (4000 Ед./мг (Sigma) в 0,5 мл PBS) инкубируют 1648 ч. при RT и загружают в гель для SDS-PAGE в денатурирующих условиях для разделения продуктов реакции. Гель выдерживают в 0,4 М КС1 для визуализации белковых полос. Идентичность белковых полос, соответствующих ожидаемой молекулярной массе сконструированного полипептида, можно подтвердить частичным анализом аминокислотной последовательности, применяя автоматический секвенатор (Applied Biosystems Model 473A, Foster City, CA).
[0173] В особенно иллюстративном способе рекомбинантной экспрессии сконструированных полипептидов по настоящему изобретению, клетки 293 можно
совместно трансфицировать с плазмидами, содержащими кДНК сконструированных полипептидов кДНК в векторе pCMV (5' промотор CMV, 3' полиА последовательность HGH) и pSV2neo (содержащем ген устойчивости пео) фосфаткальциевым способом. В одном из вариантов осуществления векторы следует линеаризовать для трансфекции при помощи Seal. Схожим образом, можно использовать альтернативные конструкции, использующие подобный вектор pCMV с встроенным геном пео. Подходящие клеточные линии выбирают из клонов от одной клетки, ограничивая разведение в средах для выращивания, содержащих 0,5 мг/мл G418 (подобного неомицину антибиотика) в течение 10-14 дней. Клеточные линии проверяют в отношении экспрессии сконструированных полипептидов при помощи ELISA или вестерн-блоттинга, и клеточные линии с высокой экспрессией наращивают для крупномасштабного роста.
[0174] Предпочтительно, что трансформированные клетки применяют для продолжительной высокопроизводительной продукции белка, и как таковая устойчивая экспрессия является необходимой. Как только такие клетки трансформируются векторами, которые содержат селективные маркеры совместно с необходимой экспрессирующей кассетой, клеткам можно позволить расти в течение 1-2 дней в обогащенной среде до переноса на селективные среды. Селективный маркер конструируют так, чтобы придать устойчивость к селекции и его присутствие позволяет вырастить и выделить клетки, которые успешно экспрессируют встроенные последовательности. Устойчивые очаги стабильно трансформированных клеток можно размножить, применяя культуральные методики, подходящие для клеток.
[0175] Можно использовать множество систем селекций, чтобы извлечь клетки, которые трансформированы в отношении продукции рекомбинантного белка. Такие системы селекции включают в качестве неограничивающих примеров, тимидинкиназу HSV, гены гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазы и аденинфосфорибозилтрансферазы, в tk-, hgprt- или aprt-клетках, соответственно. Также, устойчивость к метаболитам можно использовать как основу для селекции к dhfr, который придает устойчивость к метотрексату; gpt, который придает устойчивость к микофеноловой кислоте; пео, который придает устойчивость к аминогликозиду G418; также, который придает устойчивость к хлорсульфурону; и hygro, который придает устойчивость к гигромицину. Дополнительные гены пригодные для селекции, которые можно применять, включают в себя trpB, который
позволяет клеткам использовать индол вместо триптофана, или hisD, который позволяет клеткам использовать гистинол вместо гистидина. Маркеры, которые придают видимые признаки для определения трансформантов, включают в себя антоцианины, бета-глюкуронидазу и ее субстрат, GUS, и люциферазу и ее субстрат, люциферин. [0176] Сконструированные полипептиды настоящего изобретения могут быть получены с использованием комбинации как автоматизированного пептидного синтеза, так и рекомбинантных техник. Например, любой или оба из следующего: лептин; аналог лептина, активный фрагмент лептина или производное лептина; и ABD; и необязательно линкер; используемые в получении сконструированных полипептидов, как раскрыто в настоящем документе, могут быть получены синтетически или рекомбинантно и затем лигированы вместе с использованием известных из уровня техники способов, таких как "нативное химическое лигирование" и известных его вариантов, в которых образуется амидная связь, соединяя исходные соединения. Смотрите, например, патент США № 6326468, который включен в настоящий документ посредством ссылки для всех целей. Альтернативно, например, сконструированный полипептид настоящего изобретения может содержать комбинацию модификаций, включая делецию, замещение, вставку и дериватизацию с помощью пегилирования (или другой фрагмент, например, полимер, жирную ацильную цепь, С-концевое амидирование). Такой сконструированный полипептид может быть получен постадийно. На первой стадии промежуточный сконструированный полипептид, содержащий модификации делеции, замещения, вставки и любой их комбинации, может быть получен с помощью описанных рекомбинантных техник. Затем после описанной в настоящем документе необязательной стадии очищения промежуточный сконструированный полипептид пегилируют (или подвергают другой химической дериватизации, например, ацилированию, С-концевому амидированию) посредством химической модификации с соответствующим пегилирующим реагентом (например, от NeKtar Transforming Therapeutics, Сан-Карлос, Калифорния) для получения необходимого производного сконструированного полипептида. Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что вышеописанная процедура может быть обобщена для применения по отношению к сконструированному полипептиду, содержащему комбинацию модификаций, выбранных из делеции, замещения, вставки, дериватизации и
других средств модификации, хорошо известных из уровня техники и предусмотренных настоящим изобретением.
[0177] С-концевое амидирование можно осуществить, применяя предшественник с добавленной с С-конца аминокислотой глицином, синтезированным, например в дрожжах (например, Pichia) в качестве слитого белка с альфа-фактором, который будет секретироваться в среду для культивирования. После очистки С-концевой глицин предшественника сконструированного полипептида можно превратить амид ферментативным амидированием, например пептидилглицин-альфа-амидирующая монооксигеназа (РАМ). Смотри например, Cooper et al, 1989, Biochem. Biophys. Acta, 1014:247-258. Смотри также патент США 6319685, который включен в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях, в котором сообщают о способах ферментативного амидирования, включающих в себя альфа-амидирующий фермент из крысы, являющийся достаточно чистым в альфа-амидирующим ферменте, чтобы проявлять специфическую активность, по меньшей мере, приблизительно 25 мЕд на мг белка, и в достаточной степени не содержащим протеолитические примеси, чтобы быть пригодным для использования с субстратами, очищенными из природных источников или получаемых способами рекомбинантной ДНК.
[0178] Пептиды можно очищать любым количеством известных в данной области способов, включающих в себя способы, как описано в настоящем документе. В одном способе очищают при помощи ОФ-ВЭЖХ (препаративной и аналитической), применяя систему Waters Delta Prep 3000. Препаративную колонку С4, С8 или С18 (Юц, 2,2X25 см; Vydac, Hesperia, CA) можно использовать для выделения пептидов, и чистоту можно определить, применяя аналитическую колонку С4, С8 или С18 (5ц,, 0,46X25 см; Vydac). Растворители (А=0,1% TF А/вода и В=0,1% TFA/CH3CN) можно доставлять к аналитической колонке при скорости потока 1,0 мл/мин и к препаративной колонке при 15 мл/мин. Аминокислотный анализ можно проводить на системе Waters Pico Tag и обрабатывая данные, используя программу Maxima. Пептиды можно гидролизовать при кислотном гидролизе в газовой фазе (115°С, 20-24 ч). Гидролизаты можно дериватизировать и анализировать стандартными способами (Cohen et al, THE PICO TAG METHOD: A MANUAL OF ADVANCED TECHNIQUES FOR AMINO ACID ANALYSIS, pp. 11-52, Millipore Corporation, Milford, Mass. (1989)). Анализ с бомбардировкой ускоренными
атомами можно осуществлять при помощи M-Scan, Incorporated (West Chester, Pa.). Калибровку масс можно проводить, применяя йодид цезия или йодид цезия/глицерин. Анализ методом плазменной десорбционной ионизации с использованием времяпролетной детекции можно проводить на масс-спектрометре Applied Biosystems Bio-Ion 20. [0179] Анализ экспрессии сконструированного полипептида. Доступны способы для анализа уровня экспрессии белка клеткой-хозяином. Способы, применимые для анализа уровня экспрессии белка клеткой-хозяином приведены в качестве примеров в следующем ниже типичном протоколе. Приблизительно 25 мкл клеток BL21 Е. coli трансформируют 2 мкл плазмидной ДНК (экспрессирующий вектор для сконструированного полинуклеотида). Клетки можно высевать и инкубировать в течение ночи при 37 градусах С или при комнатной температуре (RT) в течение периода времени 48-ч. Единичную колонию можно выделить и применить для роста стартовой культуры в 4 мл среды LB с подходящим антибиотиком в течение ~6 ч. Глицериновые маточные растворы можно приготовить, добавляя 100 мкл 80% стерильного глицерина к 900 мкл маточного раствора, который можно затем осторожно перемешать и хранить при -80С. 250 мкл образца можно удалить для неиндуцированного TCP образца. Аликвоты, например, 2 мл среды Magic Media, содержащей подходящий антибиотик, можно инокулировать 5 мкл стартовой культурой, которые можно затем инкубировать в течение ночи (вплоть до 24 ч) при 37С, 300 об./мин. Как известно в данной области, среда Magic Media является самоиндуцируемой. Альтернативно, 60 мл Magic Media, содержащей подходящий антибиотик, можно инокулировать 60 мкл стартовой культурой в колбе Томпсона объемом 250 мл или 125 мл, которую затем можно инкубировать в течение ночи (вплоть до 24 ч) при 30С, 300 об./мин. После инкубирования 250 мкл культуры можно удалить из каждой пробирки и клетки осадить. Клетки можно ресупендировать в 1 мл 50 мМ Tris рН 8, 150 мМ NaCl, к которому можно добавлять 0,1 объем (100 мкл) реагента для культивирования POP и 1 мкл г-лизоцима (разведение в r-лизоцимовом буфере 1:750). Смесь можно хорошо перемешать и инкубировать, по меньшей мере, 10 мин при RT. Препараты можно затем центрифугировать 10 мин при 14000 х G. Надосадочную жидкость (растворимую фракцию) можно удалить и сохранить и образцы можно приготовить для анализа в геле (15 мкл + 5 мкл LDS). Оставшийся осадок с тельцами включения можно ресуспендировать в 1 мл 1% SDS при обработке ультразвуком. Образец можно приготовить для анализа в геле (15мкл +
5 мкл LDS). Для неиндуцированных образцов можно добавить 1,0 объём реагента для культивирования POP и 1 мкл г-лизоцима (1:750 разведение в r-лизоцимовом буфере 1:750). Смесь можно хорошо перемешать и инкубировать, по меньшей мере, 10 мин при RT. Данные образцы, возможно, не следует центрифугировать. Образец затем можно приготовить для анализа в геле (15мкл + 5 мкл LDS). Гели NU-PAGE (4-12%), невосстановленные в буфере 1XMES можно прогнать и окрасить по протоколу с микроволновой печью SimplyBlue. Обесцвечивание можно проводить в течение ночи, как известно в данной области. Изображение геля сохраняют и анализируют для того, чтобы определить уровни экспрессии белка.
[0180] Получение телец включения. Для сконструированных полипептидов, которые обнаруживают во фракции теле включения, может оказаться полезной следующая ниже процедура. Клеточный осадок ресуспендируют как минимум в 100 мл лизирующего буфера для каждых 50 мл культуры. При добавлении 30 мл, можно использовать пипетки на 10 мл для ресуспендирования, затем пробирки можно промыть дополнительными 70 мл. Раствор ресуспендированных клеток может многократно проходить, например, 4 прогона, обработку в микрофлюидизаторе@ при 100 фунт/дюйм2 (мин), позаботившись о том, чтобы держать камеру в ледяной воде во время всего процесса. Псевдоожиженную смесь можно центрифугировать при 14000 х п, 20 мин (например, JLA 10,5, 10000 об./мин., используя бутылки фирмы Nalgene(r) объемом 250 мл). Осадок с тельцами включения можно ресуспендировать на льду в охлажденном лизирующем буфере с магнитным элементом мешалки и пластиной для смешивания в течение 1 часа при 4С после разрушения носиком пипетки. Осадок можно ресуспендировать второй раз в дистиллированной НгО с магнитным элементом мешалки и пластиной для смешивания в течение 1 часа при 4С после разрушения носиком пипетки, после чего следует центрифугирование при 14000 х g, 15 мин. Надосадочную жидкость можно удалить и выбросить. Полученный продукт можно хранить при -8ОС.
[0181] Очистка белка. Как описано в настоящем документе, известно множество способов для выделения экспрессированных полипептидов. Ниже описан один пример. Осадки с тельцами включения можно растворить в подходящем объеме растворяющего буфера (8М мочевина или 8М гуанидин, 50 мМ Tris, 10 мМ DTT, рН 7,75) в течение 1 часа при RT. Растворенный осадок можно центрифугировать в течение 20 мин при 27000 g.
Отфильтрованную (например, 0,4 мкм) надосадочную жидкость можно перенести капля за каплей в подходящий объем буфера для повторного сворачивания (50 мМ Tris-HCl, 1 М мочевина, 0,8 М аргинин, 4 мМ цистеин, 1 мМ цистамин; рН 8) при RT. Полученный в результате раствор можно затем поместить в окружающую среду при 4°С в течение ночи или дольше при осторожном перемешивании. Образцы можно сконцентрировать и прогнать на колонке для гель-фильтрации (Superdex(tm) 75 26/60) при 1-2 мл/мин в окружающей среде 4С, применяя AKTAFPLC(tm) GE Healthsciences. Фракции, содержащие соответствующий белок, можно идентифицировать при SDS-PAGE, объединить и прогнать на второй колонке для гель-фильтрации. Объединенный белок можно затем концентрировать на фильтре Amicon до соответствующей концентрации и анализировать в отношении уровней эндотоксина, применяя, например, Endosafe(r) PTS Reader (Charles River), как известно в данной области. Если образец белка удовлетворяет критериям для эндотоксина, его можно стерильно отфильтровать, разделить на аликвоты и подвергнуть анализу контроля качества. Анализы контроля качества могут включать в себя аналитическую эксклюзионную ВЭЖХ, невостанавливающий SDS PAGE и ОФ-ВЭЖХ -МС для получения соответствующей массы. Белки можно получать в lxPBS (137 мМ хлорида натрия, 2,7 мМ хлорида калия, 4,3 мМ дифосфата натрия, 1,4 мМ дигидрофосфат калия, рН7,2), разделять на аликвоты и быстро замороживать для хранения при от -70 до -80 °С.
IV. Способы применения и лечения заболевания
[0182] Показания к применению. Множество заболеваний и нарушений, как предусмотрено, благоприятно лечится полипептидными соединениями и способами, описываемыми в настоящем документе.
[0183] Ожирение и избыточная масса тела. Ожирение и связанные с ним нарушения, включающие в себя избыточную массу тела, являются распространенными и серьезными проблемами здравоохранения в Соединенных Штатах и во всем мире. Ожирение верхней части тела является наиболее сильным известным фактором риска развития сахарного диабета 2 типа и сильным фактором риска для развития сердечно-сосудистого заболевания. Ожирение является признанным фактором риска для развития гипертонии, атеросклероза, застойной сердечной недостаточности, инсульта, заболевания желчного пузыря, остеоартрита, внезапной остановки дыхания во сне, репродуктивных нарушений, таких как
синдром поликистозных яичников, раковые образования в груди, простате и толстой кишке, и повышенная частота возникновения осложнений при общем наркозе. Смотри, например, Kopelman, 2000, Nature 404:635-43.
[0184] Ожирение снижает продолжительность жизни и влечет за собой серьезный риск возникновения упомянутых выше сопутствующих заболеваний, а также таких нарушений, как инфекции, варикозное расширение вен, акантокератодермия, экзема, непереносимость физической нагрузки, резистентность к инсулину, гиперхолестеринемия при гипертонии, желчнокаменная болезнь, повреждение опорно-двигательного аппарата и тромбоэмболическая болезнь. Смотри, например, Rissanen et al, 1990, Br. Med. J., 301:8357. Ожирение также является фактором риска развития группы состояний, называемой синдром резистентности к инсулину, или "синдром X" и метаболический синдром. Во всем мире стоимость медицинского обслуживания больных ожирением и связанными нарушениями огромна.
[0185] Патогенез ожирения, как полагают, является многофакторным. Проблема состоит в том, что у пациентов с ожирением, усваиваемость питательных элементов и потребление энергии не приходит к равновесию, пока имеет место избыток жировой ткани. Центральная нервная система (ЦНС) контролирует энергетический баланс и координирует множество поведенческих, автономных и эндокринных действий, соответствующих метаболическому статусу. Механизмы или системы, которые контролируют такие действия, во многом распределены по всему переднему мозгу (например, гипоталамус), заднему мозгу (например, ствол головного мозга) и спинного мозга. В конечном счете, метаболическая (то есть, усваиваемость калорий) и познавательная (то есть, приобретенные предпочтения) информация от таких систем объединяется и решение о вступлении в поведение, связанное со стремлением к пище (поиск пищи) и консуматорное поведение (прием пищи) либо принимается (приобретение и принятие пищи), либо не принимается (окончание приема пищи). Гипоталамус, как думают, принципиально ответственен за объединение данных сигналов и за передачу затем команды к стволу мозга. Ядра ствола мозга, которые управляют элементами консуматорной двигательной контролирующей системы (например, мышцы, ответственные за жевание и глотание). В силу этого такие ядра ЦНС дословно обозначали, как представляющие собой "конечный общий путь" для пищевого поведения.
[0186] Нервно-анатомические и фармакологические доказательства поддерживают идею, что сигналы об энергетическом и питательном гомеостазе объединяются в ядрах переднего мозга, и что консуматорные двигательные контролирующие системы расположены в ядрах ствола мозга, вероятно, в областях, окружающих тригеминальные двигательные ядра. Существует глубокая взаимообратная связь между гипоталамусом и стволом мозга. Множество терапевтических средств против ожирения, направленных на ЦНС (например, низкомолекулярные соединения и пептиды), преимущественно фокусируются на субстратах переднего мозга, располагающихся в гипоталамусе и/или на субстратах заднего мозга, располагающихся в стволе мозга.
[0187] Ожирение остается трудноизлечимым, хроническим, по существу, неискоренимым метаболическим нарушением. Таким образом, существует необходимость в новых способах лечения, применимых для снижения массы тела и/или поддержания массы тела у пациента. Такие способы лечения привели бы к сильному положительному воздействию на здоровье пациента. Способы и схемы лечения, применяющие сконструированные пептиды, описываемые в настоящем документе, или в отдельности, или в сочетании с другими средствами от ожирения(смотри, например, WO 2009064298 и US 20080207512) могут оказать такое положительное воздействие.
[0188] Лептиновая недостаточность. Лептиновая недостаточность, как было показано, является результатом ожирения. Одна форма лептиновой недостаточности представляет собой врожденную лептиновую недостаточность, редкое генетическое нарушение. Смотри Montaque et al, 1997, Nature 387: 903-908. Тяжелая лептиновая недостаточность может быть результатом неконтролируемого сахарного диабета с недостаточность инсулина, который появляется в результате разрушения секретирующих инсулин [3-клеток. Существует теория о том, что недостаток инсулина приводит к синтезу и накоплению триглицеридов в жировой ткани, которая предотвращает увеличение массы тела, и в свою очередь значительно снижает уровни лептина в плазме крови, поскольку лептин синтезируется в жировой ткани. Данную и другие лептиновые недостаточности и заболевания и нарушения, которые проистекают из таких недостаточностей, можно лечить заместительной лептиновой терапией, такой как посредством ежедневных инъекций лептина или агониста лептина. Сконструированные полипептиды, описываемые в
настоящем документе, могут обеспечить более удобное и эффективное терапевтическое лечение таких заболеваний и нарушений.
[0189] Сахарный диабет и сердечно-сосудистое заболевание. Сахарный диабет признан сложным, хроническим заболеванием, при котором от 60% до 70% всех случаев смертности среди страдающих сахарным диабетом пациентов являются результатом сердечно-сосудистых осложнений. Сахарный диабет не только считают равным по риску ишемической болезни сердца, но также идентифицируют в качестве независимого прогнозирующего параметра для неблагоприятных событий, включая рецидивирующий инфаркт миокарда, застойную сердечную недостаточность и смерть после сердечнососудистого эпизода. Внедрение более строгого контроля за уровнем глюкозы и интенсивной терапии в отношении сердечно-сосудистых факторов риска, как ожидают, снизили бы риск возникновения осложнений при ишемической болезни сердца и улучшили общую выживаемость среди страдающих сахарным диабетом пациентов. Все же страдающие сахарным диабетом пациенты, в два - три раза более вероятно будут страдать острым инфарктом миокарда, чем не страдающие сахарным диабетом пациенты, и страдающие сахарным диабетом пациенты живут на восемь - тринадцать лет меньше, чем не страдающие сахарным диабетом пациенты.
[0190] Понимая природу высокого риска для пациентов, страдающих сахарным диабетом/острым инфарктом миокарда, в руководстве по клинической практике Американской кардиологической коллегии/Американской ассоциации кардиологов ("АСС/АНА") по уходу за госпитализированными пациентами с нестабильной стенокардией или инфарктом миокарда "без увеличения ST" (коллективно обозначаемый как "ACS") недавно признали, что госпитализированные страдающие сахарным диабетом пациенты представляют собой определенную популяцию, требующую энергичной лечебной тактики в отношении гипергликемии. Конкретнее, в рекомендациях заявляют, что снижающая уровень глюкозы терапия для госпитализированных страдающих сахарным диабетом/ACS пациентов должна быть направлена на достижение значений для глюкозы перед приемом пищи менее чем 10 мг/дл, максимального суточного количества 180 мг/дл и для гемоглобина А1с после госпитализации менее чем 7%.
[0191] Для общенациональной выборочной совокупности пожилых пациентов с ACS было продемонстрировано, что увеличение 30-дневной смертности страдающих диабетом
пациентов соответствовало пациентам, характеризующимся более высокими значениями уровня глюкозы при стационарном лечении. Смотри "Diabetic Coronary Artery Disease & Intervention," Coronary Therapeutics 2002, Oak Brook, IL, 20 September 2002. Имеется все больше указаний на то, что длительная гипергликемия, а не временное увеличение глюкозы при стационарном лечении, связано с серьезными побочными действиями. Хотя идеальный показатель для гипергликемии и сосудистого риска для пациента не известен, кажется, что средняя величина уровня глюкозы во время госпитализации является наиболее предсказательной в отношении смертности. В отдельном исследовании пациентов с ACS, взятых из более чем сорока больниц в Соединенных Штатах, было обнаружено, что постоянная гипергликемия, в противоположность случайным значениям глюкозы при стационарном лечении, была более прогнозирующей в отношении смертности в больнице. Смотри Acute Coronary Syndrome Summit: A State of the Art Approach, Kansas City, MO, 21 September 2002. По сравнению с величинами уровня глюкозы при приеме в стационар, регрессионная логистическая модель уровня глюкозы, контролируемого за весь период госпитального лечения, была самой прогнозирующей в отношении смертности. Имел место почти в два раза больший риск смертности во время стационарного лечения для каждого увеличения глюкозы на 10 мг/дл свыше 120 мг/дл. В меньшей группе следующих пациентов с сахарным диабетом/ACS, имело место постепенное увеличение смертности за один год с увеличением уровней глюкозы при стационарном лечении. В больничной обстановке в рекомендациях АСС/АНА предлагается интенсивная инсулиновая терапия для того, чтобы достичь меньших уровней глюкозы в крови во время стационарного лечения. [0192] Сообщалось, что лептин может характеризоваться непосредственным благоприятным действием при лечении сахарного диабета, особенно, сахарного диабета I типа и сахарного диабета II типа, при наличии или без ожирения, и, более конкретно, при состояниях с низким уровнем лептина в сыворотке. Сообщалось, что восстановление уровня лептина снижало или предотвращало развитие гиперинсулинемии, резистентности к инсулину и гипергликемии в различных моделях сахарного диабета 1 и 2 типа с сопутствующим ожирением или без него на животных. Например, высокие уровни лептина в плазме, достигаемые либо при фармакологическом введении лептина, либо при генотерапии с использоанием аденовирусов, снижали гипергликемию и ассоциированное
повышение уровня глюкагона в плазме при STZ-индуцируемом сахарном диабете, несмотря на постоянно низкие уровни инсулина.
[0193] Заболевания, связанные с регуляцией липидов. Как известно в данной области, липодистрофия характеризуется ненормальными или дегенеративными состояниями жировой ткани организма. Дислипидемия представляет собой нарушение нормального липидного состава в крови. Полагают, что продолжительное повышение уровней инсулина может приводить к дислипидемии. Гиперлипидемия представляет собой наличие повышенных или аномальных уровней липидов и/или липопротеинов в крови. Гипоталамическая аменорея представляет собой состояние, при котором менструация останавливается на несколько месяцев вследствие проблемы, влияющей на гипоталамус. Было обнаружено, что заместительная терапия лептина у женщин с гипоталамической аменореей улучшает состояние осей репродуктивного, тиреодиного гормона и гормона роста и маркеров костеобразования, не вызывая неблагоприятных воздействий. Смотри, например, Oral etal., N EnglJ Med. 2004, 351: 959-962, 987-997. Жировая дистрофия печени, например, заболевание неалкогольного ожирения печени (NAFLD), относится к широкому спектру заболеваний печени в диапазоне от простой жировой инфильтрации печени (стеатоз) до неалкогольного стеатогепатита (NASH), до цирроза (необратимое, прогрессирующее рубцевание печени). Для всех стадий NAFLD характерно, в общем, накапливание жиров (жировая инфильтрации) в клетках печени (гепатоцитах). Полагают, что лептин является одним из ключевых регуляторов воспаления и прогрессирования фиброза при различных хронических заболеваний печени, включая NASH. Смотри например, Ikejima et al., Hepatology Res. 33:151 -154.
[0194] Дополнительно, не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что относительная недостаточность инсулина при сахарном диабете 2 типа, токсичность глюкозы и увеличение содержания печёночной свободной жирной кислоты из-за увеличенной доставки из внутрибрюшной жировой ткани через воротную вену, вовлечены в качестве возможных причин в развитие нарушений при жировой дистрофии печени. Действительно, предполагалось, что пищевое поведение является ключевым фактором, доводящим до метаболического синдрома ожирения с его множеством последствий, включая NASH. Соответственно, лечение, целью которого является снижение потребления пищи и увеличение числа приема небольшого количества пищи, как уже
продемонстрировали при сахарном диабете 2 типа, может эффективно лечить и предотвращать NASH. Лекарственные средства, которые стимулируют секрецию инсулина и снижение массы тела, и замедляют освобождение желудка, также эффективны в улучшении толерантности к глюкозе и, таким образом, могут улучшить состояние жировой дистрофии печени сопутствующей ей гиперинсулинемии. Таким образом, использование эксендинов, агонистов аналогов лептина, лептинового аналога, например, метрелептина, или его активного фрагмента, может хорошо подойти в качестве способа лечения для данного состояния. Таким образом, сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, которые включают в себя лептин, лептиновый аналог или его активный фрагмент, можно применять при лечении нарушений с жировой дистрофией печени.
[0195] Болезнь Альцгеймера. Болезнь Альцгеймера (AD), как известно в данной области, связана с бляшками и сплетениями в головном мозге, которые включают в себя дисрегуляцию белка А-бета. Полагают, что липиды мозга сложным образом вовлечены в А-бета-связанные пути патогенеза и что важным модулятором липидного гомеостаза является лептин. Таким образом, лептин может модулировать двунаправленную активность А-бета, снижая его уровни внеклеточно. На самом деле, было продемонстрировано, что хроническое введение лептина AD-трансгенным животным снижали избыток А-бета в мозге, обуславливая его терапевтический потенциал. Смотри Fewlass et al., 2004, FASEB J., 18:1870-1878. Дополнительно, сахарный диабет 2 типа и AD характеризуются общими эпидемиологическими и биохимическими особенностями в том, оба характеризуются нерастворимыми белковыми агрегатами с фибриллярной конфигурацией - амилин в панкреатических островках при DM 2 типа и Ар при AD в мозге. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что схожие токсичные механизмы могут характеризовать DM 2 типа и AD. Смотри Lim et al, FEBSLett., 582:2188-2194. [0196] Метаболический синдром X. Метаболический синдром X характеризуется резистентностью к инсулину, дислипидемией, гипертензией и висцеральным распространением жировой ткани и играет ключевую роль в патофизиологии сахарного диабета 2 типа. Также было обнаружено, что он сильно коррелирует с NASH, фиброзом и циррозом печени. Таким образом, сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документ, могут быть применимы в лечении метаболического синдрома X.
[0197] Болезнь Хантингтона. Болезнь Хантингтона представляет собой аутосомно-доминантное нейродегенеративное заболевание. Особенности заболевания включают в себя двигательные нарушения, слабоумие, психиатрические проблемы и непреднамеренную уменьшение массы тела. Химерные полипептиды, описываемые в настоящем документе, могут быть применимы при лечении болезни Хантингтона.
[0198] Таким образом, в одном из аспектов предлагается способ лечения заболевания или нарушения у субъекта. Субъект нуждается в лечении заболевания или расстройства. Заболевание или нарушение может представлять собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменорею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени или сахарный диабет (включая тип I и тип II). Дополнительные заболевания и нарушения, которые можно лечить соединениями и способами, описываемыми в настоящем документе, включают в себя неалкогольный стеатогепатит (NASH) и заболевание неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона. Способ лечения включает в себя введение субъекту химерного полипептида, как описано в настоящем документе в количестве, эффективном для лечения заболевания или нарушения. Сконструированный полипептид будет содержать в качестве HD1 лептин, лептиновый фрагмент или лептиновый аналог. Соответственно, сконструированный полипептид может характеризоваться только одной из следующих структур: ABD-HD1, HD1-ABD, ABD-L1-HD1 илиНОЫЛ-АВБ.
[0199] Во всех описанных в настоящем документе вариантах осуществления лечения лептин может представлять собой лептин человека или метрелептин. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина характеризуется по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью с лептином человека. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина характеризуется по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью с мышиным лептином. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина характеризуется по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью с крысиным лептином. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина характеризуется
по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью с лептином утконоса. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина характеризуется по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или даже более высокой идентичностью с лептином тюленя. Согласно некоторым вариантам осуществления аналог лептина представляет собой лептин А100, А300 или А500. V. Анализы
[0200] Способы получения и анализа сконструированных полипептидов, описываемых в настоящем документе, как правило, доступны специалистам в данной области. Дополнительно, специальные способы описываются в настоящем документе, а также в патентных публикациях и других ссылках, цитируемых в настоящем документе, которые включены в качестве ссылки с такой дополнительной целью.
[0201] Потребление пищи. Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что потребление пищи применимо для оценки пригодности соединения, как описано в настоящем документе. Например, известно, что множество метаболических патологий связаны с потреблением пищи (например, сахарный диабет, ожирение). Таким образом, можно провести первоначальный скрининг, чтобы определить степень, в которой модулируется потребление пищи при введении соединений, описываемых в настоящем документе, и положительный первоначальный скрининг может быть применим в последующей разработке соединения.
[0202] Специалисту в настоящей области техники доступны разнообразные анализы потребления пищи. Например, в так называемой "модели домашней клетки" потребления пищи, субъектов (например, крыс) содержат в их домашней клетке, и потребление пищи наряду с общей массой субъекта измеряют после инъекции исследуемого соединения. В так называемой "модели профилей кормления" анализа потребления пищи, субъектов (например, крыс) приучают к камере для кормления и к инъекциям перед исследованием. После введения исследуемого соединения субъектов немедленно помещают в камеру для кормления, и потребление пищи автоматически определяют как функцию от времени (например, 1-мин. интервалы). Для обоих испытаний пища представляет собой стандартный корм или любой из разнообразия кормов (например, корм с высоким содержанием жира), известный из уровня техники. В так называемом анализе "потребления
пищи мышами", исследуемое соединение может быть исследовано в отношении подавления аппетита или эффекта на прирост массы тела у мышей с алиментарным ожирением (DIO). В типичном анализе потребления пищи мышами самок NIH/Swiss мышей (возрастом 8-24 недель) помещают в группы с циклом света-темноты 12:12 часов с лампами по 0600. Вода и диета в виде стандартного пеллетированного корма для мышей доступны ad libitum с указанным исключением. Животные голодали, начиная приблизительно с 1500 часов, 1 день перед экспериментом. Утром в день эксперимента животных делили на экспериментальные группы. В типичном исследовании п=4 клеток по 3 мыши/клетка. Во время=0 мин всем животным вводили интраперитонеальную инъекцию инертного носителя или соединения, как правило, в количестве в диапазоне от приблизительно 10 нмоль/кг до 75 нмоль/кг, и немедленно давали предварительно взвешенное количество (10-15 г) стандартного корма. Пищу убирали и взвешивали в различные временные точки, как правило, 30, 60 и 120 минут, для определения количества потребленной пищи. Смотрите, например, Morley et al, 1994, Am. J. Physiol. 267:R178-R184). Потребление пищи рассчитывали путем вычитания массы пищи, оставшейся, например, в момент времени 30, 60, 120, 180 и/или 240 минут, от массы пищи, предоставленной вначале во время=0. Достоверные эффекты лечения определяли с помощью ANOVA (р <0,05). Если существовала достоверная разница, исследуемые средства сравнивали с контрольным средством с применением критерия Дуннетта (Prism v. 2.01, GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния). Для любого описанного в настоящем документе анализа введение исследуемого соединения может быть осуществлено с помощью любого средства, включая инъекцию (например, подкожную, интраперитонеальную и подобное), пероральный или другие известные из уровня техники способы введения.
[0203] Анализы in vitro. Не желая быть связанными какой-либо теорией или механизмом действия, полагают, что существует корреляция между результатами анализов in vitro (например, рецепторный), и пригодностью средств для лечения метаболических заболеваний и нарушений. Таким образом, анализы in vitro (например, клеточные анализы) применимы в качестве стратегии скрининга для возможных метаболических средств, таких как описано в настоящем документе. Множество анализов in vitro известны в данной области, включая анализы, описанные, как представлено ниже.
[0204] Анализ связывания лептина. Связывание лептина можно определить по эффективности тестируемого соединения при перемещении 1251-рекомбинантного-лептина (мышиного) из поверхностной мембраны, экспрессирующей химерный лептиновый (Ни) -ЕРО (Ми) рецептор, присутствующий в клеточной линии 32D ОВЕСА (J Biol Chem 1998; 273(29): 18365-18373). Очищенные клеточные мембраны можно приготовить гомогенизацией из собранных культур сливающихся клеток из клеток 32D ОВЕСА. Мембраны можно инкубировать с 1251-рек-мышиным-лептином и с увеличивающимся концентрациями тестируемого соединения в течение 3 часов при температуре окружающей среды в 96-луночном полистироловом планшете. Связавшиеся и несвязавшиеся фракции лиганда можно затем разделить быстрой фильтрацией на 96-луночных планшетах GF/B, предварительно заблокированные 0,5% PEI (полиэтиленимином) в течение, по меньшей мере, 60'. Планшеты со стекловолоконным фильтром можно затем высушить, добавить сцинтилляционную жидкость и определить СРМ при считывании на многолуночном сцинтилляционном счётчике, способном считывать радиомеченный йод. [0205] Функциональный анализ лептина. Увеличенные уровни фосфорилированного STAT5 (переносчик сигнала и активатор транскрипции 5) можно измерить после обработки клеток 32D-Keptin, эктопически экспрессирующих химерный рецептор Ни-лептин/Ми-ЕРО, тестируемым соединением. Клетки 32D-Keptin (идентичные клеткам 32D-OBECA, но поддерживаемые в культуре с лептином) можно лишить лептина в течение ночи и затем обработать тестируемыми соединениями в 96-луночных планшетах в течение 30 минут при 37°С, после чего следует экстракция клеток. Уровни pSTAT5 в клеточном лизате можно определить, используя набор для анализа Perkin Elmer AlphaScreen(r) SureFire(r) pSTAT5 в 384-луночном формате (Proxiplate(tm) 384 Plus). Эффективность тестируемых соединений можно определить в отношении максимального сигнала в клеточных лизатах из клеток, обработанных лептином человека. VI. Фармацевтические композиции
[0206] В одном из аспектов предлагаются фармацевтические композиции, включающие в себя соединения, описываемые в настоящем документе, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем (например, носителем). Термин "фармацевтически приемлемый носитель", используемый в настоящем документе, относится к фармацевтическим наполнителям, например, фармацевтически, физиологически
приемлемым органическим или неорганическим веществам-носителям, подходящим для энтерального или паренетрального применения, которые не вступают неблагоприятным образом в реакцию с активным средством. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают в себя воду, растворы солей (например, раствор Рингера и тому подобное), спирты, масла, желатины и углеводы, такие как лактоза, амилоза или крахмал, сложные эфиры жирных кислот, гидроксиметицеллюлозу и поливинилпирролидин. Такие препараты можно стерилизовать и, при желании, смешивать со вспомогательными средствами, такими как смазывающие вещества, консерванты, стабилизаторы, увлажнители, эмульгирующие вещества, соли для регуляции осмотического давления, буферы, красящие и/или ароматические вещества и тому подобное, которые не вступают неблагоприятным образом в реакцию с соединениями по изобретению. [0207] В дополнительном аспекте предлагается фармацевтическая композиция, которая включает в себя сконструированный полипептид, как описано в настоящем документе, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем. В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию для перорального введения, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой длительно действующую фармацевтическую композицию. Термин "длительно действующий" в контексте введения фармацевтической композиции относится к продолжительности действия. Таким образом, длительно действующую фармацевтическую композицию можно вводить через интервалы, например, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделя, 2 недели, 3 недели, 1 месяц или доже дольше. В предпочтительном варианте осуществления введение осуществляют однажды в день (то есть, "один раз в день").
А. Способы
[0208] Сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, можно вводить отдельно или можно совместно вводить субъекту. Совместное введение, как подразумевают, включает в себя одновременное или последовательное введение соединений, отдельно или в сочетании (более чем одно соединение). Например, было обнаружено, что ожирение можно благоприятным образом лечить при комбинированном лечении, включающем в себя лептин (например, метрелептин) и определенные другие
соединения против ожирения. Смотри, например, опубликованную заявку США № 2008/0207512. Таким образом, сконструированный полипептид, описываемые в настоящем документе, содержащий ABD и лептин, может быть применим для лечения ожирения. Альтернативно, отдельные сконструированные полипептиды могут вводиться совместно с другими средствами против ожирения, такими как эксенатид или лираглютид. [0209] Препараты можно также совместно вводить, при необходимости, с другими активными веществами (например, для снижения метаболического разрушения), как известно в данной области, или с другими терапевтически активными средствами. [0210] Амилины. Амилин представляет собой пептидный гормон, синтезируемый Р-клетками поджелудочной железы, который совместно секретируется с инсулином в ответ на поглощение питательных веществ. Последовательность амилина высоко консервативна среди видов млекопитающих с структурным сходством к генетически родственному кальцитонину пептиду (CGRP), кальцитонинам, к интермединам и адреномедуллину, как известно в данной области. Глюкорегулирующие действия амилина дополняют действия инсулина при регуляции скорости появления глюкозы в кровотоке посредством подавления стимулируемой питательными веществами секреции глюкагона и замедления освобождения желудка. У страдающих сахарным диабетом пациентов, получающих лечение инсулином, прамлинтид, синтетический и равнозначный по эффективности аналог амилина человека, снижает изменения глюкозы после приема пищи, подавляя несоответствующим образом увеличивающуюся после приема пищи секрецию глюкагона и замедляя освобождение желудка. Последовательности амилина крысы, амилина человека и прамлинтида приведены ниже:
амилин крысы: KCNTАТСATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY (SEQ ID N0:108); амилин человека: KCNTATC ATQRLANFLVHS SNNFGAILS STNVGSNTY (SEQ ID N0:109);
прамлинтид: KCNTATC ATQRLANFLVHS SNNFGPILPPTNVGSNTY (SEQ ID NO:110). [0211] Давалинтид. Давалинтид, также известный как "АС-2307" представляет собой мощный агонист амилина, применимый в лечении множества симптомов заболевания. Смотри WO 2006/083254 и WO 2007/114838, каждая из которых в полном объеме и во всех отношениях включена в настоящий документ в качестве ссылки. Давалинтид представляет собой химерный пептид, содержащий участок N-концевой петли амилина или
кальцитонина и их аналогов, альфа-спиральный участок, по меньшей мере, части альфа-спирального участка кальцитонина или его аналогов, или альфа-спиральный участок, содержащий часть альфа-спирального участка амилина и альфа-спирального участка кальцитонина или его аналога, и участок С-концевого хвоста амилина или кальцитонина. Последовательности кальцитонина человека, кальцитонина лосося и давалинтида приведены ниже:
кальцитонин человека: CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP (SEQ ID N0:111); кальцитонин лосося: CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID N0:112); давалинтид: KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID N0:113). [0212] Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что для амилинов и давалинтида, и их фрагментов и аналогов, может потребоваться С-концевое амидирование, чтобы вызвать полный биологический ответ. Понятно, что соединения амилина, такие как соединения, описываемые в настоящем документе, которые включают в себя амилины и/или давалинтид и их фрагмент и аналоги, могут быть амидированы на С-конце. [0213] "Соединения агонистов амилина" включают в себя природные пептиды амилина, пептиды аналогов амилина и другие соединения (например, низкомолекулярные соединения), которые характеризуются активностью агониста амилина. "Соединения агонистов амилина" можно получить из природных источников, можно синтезировать или можно получить способами рекомбинантной ДНК. Соединения агонистов амилина характеризуются активностью связывания с рецептором агониста амилина и могут включать в себя аминокислоты (например, природные, неприродные или их сочетание), пептидомиметики, химические группы и тому подобное. Специалисты в данной области распознают соединения агонистов амилина, используя анализ связывания амилинового рецептора или измеряя активность агониста амилина в анализах на камбаловидной мышце. В одном из вариантов осуществления соединения агонистов амилина будут характеризоваться IC50 приблизительно 200 нМ или меньше, приблизительно, 100 нМ или меньше, или приблизительно 50 нМ или меньше в анализе связывания рецептора амилина, таком как анализ, описываемый в настоящем документе, в патенте США № 5686411 и в публикации США № 2008/0176804, описания которых полностью и во всех отношениях включены в настоящий документ в качестве ссылки. В одном из вариантов осуществления соединения агонистов амилина будут характеризоваться ЕС50 приблизительно 20 нМ или
меньше, приблизительно нМ 15 или меньше, приблизительно нМ 10 или меньше, или приблизительно нМ 5 или меньше в анализе с применением камбаловидной мышцы, таком как анализ, описываемый в настоящем документе и в патенте США № 5686411. В одном из вариантов осуществления соединение агониста амилина характеризуется, по меньшей мере,
25 28 29
90% или 100% идентичностью последовательности к ' ' Pro-амилину человека. В одном из вариантов осуществления соединение агониста амилина является пептидной химерой амилина (например, амилина человека, амилина крысы и тому подобное) и кальцитонина (например, кальцитонина человека, кальцитонина лосося и тому подобное). Подходящие и иллюстративные соединения агонистов амилина описаны также в публикации США № 2008/0274952, описание которого в полном объеме и во всех отношениях включено в настоящий документ в качестве ссылки.
[0214] Под "аналогом амилина", как применяют в настоящем документе, подразумевают агонист амилина, который характеризуется, по меньшей мере, 50% идентичностью последовательности, предпочтительно, по меньшей мере, 70% идентичностью последовательности к встречающейся в природе форме амилина, либо крысы, либо человека, либо из любых других видов, и который получают из них при модификации, включающей в себя вставки, замены, продления и/или делеции аминокислотной последовательности сравнения.
[0215] Последовательность аналога амилина может характеризоваться, по меньшей мере, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, или 95% идентичностью аминокислотных последовательностей с амилином сравнения. В одном из аспектов аналог содержит 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или даже 16 замен аминокислот, вставок, продлений, и/или делеций относительно соединения сравнения. В одном из вариантов осуществления аналог амилина может содержать консервативные или неконсервативные аминокислотные замены (включающие в себя неприродные аминокислоты и L- и D-формы). Данные аналоги предпочтительно представляют собой пептиды, производные пептидов или имитаторы пептидов. Типичные аналоги амилина будут представлять собой пептиды, особенно, из 3237 аминокислот, например, от 27 до 45, особенно от 28 до 38 и даже 31-36 аминокислот. [0216] Аналоги амилина с идентичностью к амилину крысы и человека включают в себя 25,28,29pro_h_aMHjiHH (прамлинтид) (SEQ ID NO: ПО); дез^Ьуэ-п-амилин (SEQ ID NO: 161); 25Рго,26Уа1,28'29Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 162); 18Arg,2528Pro-h-aMmiHH (SEQ ID NO: 163);
дез-^уэ/Чг^^Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 164); 18Arg,25'28'29Pro-h-aMmiHH (SEQ ID NO:
165); Ae3-1Lys,18Arg,25'28'29Pro-h-aMHnHH (SEQ ID NO: 166); дез-1,Ьуз25'28'29Рго-11-амилин (SEQ
ID NO: 167); 25Рго,26Уа1,28,29Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 168); 28Рго-п-амилин, 2,7-цикло-
[2Asp,7Lys]-h-aMmiHH (SEQ ID NO: 169); 2"37п-амилин (SEQ ID NO: 170); Чк-Ь-амилин
(SEQ ID NO: 171); 2А1а-п-амилин (SEQ ID NO: 172); 27А1а-п-амилин (SEQ ID NO: 173);
^ег-Ь-амилин (SEQ ID NO: 174); 29Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 175); 2528Рго-п-амилин (SEQ
ID NO: 176); дез-^уэ^^Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 177); 23Ьеи,25Рго,26Уа1,2829Рго-11-амилин
(SEQ ID NO: 178); 23Ьеи25Рго26Уа128Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 179); дез-
1Ьуз,23Ьеи,25Рго,26Уа1,28Рго-11-амилин (SEQ ID NO: 180); 18Arg,23Leu,25Pro,26Val,28Pro-h-
амилин (SEQ ID NO: 181); 18Аг^23Ьеи,25'28,29Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 182);
18А^23Ьеи,25'28Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 183); 1711е,23Ьеи,25'28,29Рго-п-амилин (SEQ ID NO:
184); 1711е,25'28'29Рго-п-амилин (SEQ ID NO: 185); Re3-%s,17Ile,2\eu,25 2*29Vro-h-
aмилин(SEQ ID NO: 186); 1711е,18Аг^23Ьеи-11-амилин (SEQ ID NO: 187);
1711е,18Агё,23Ьеи,26Уа1,29Рго-11-амилин (SEQ ID NO: 188); 17Ile,18Arg,23Leu,25Pro,26Val,2829Pro-
h-амилин (SEQ ID NO: 189); 13ТЬг,21Н18,23Ьеи,26А1а,28Ьеи,29Рго,31Азр-11-амилин (SEQ ID NO:
190); 13ТЬг,21Н18,23Ьеи,26А1а,29Рго,31Азр-11-амилин (SEQ ID NO: 191); дез-
^уз^ТЬг^Шз^Ьеи^Ак^Рго^Азр-Ь-амилин (SEQ ID NO: 192);
13ТЬг,18Агё,21Н18,23Ьеи,26А1а,29Рго,31А8р-11-амилин (SEQ ID NO: 193); 13ТЬг,18Агё,21Н18,23Ьеи,28'29Рго,31А8р-11-амилин (SEQ ID NO: 194); и 13ТЬг,18Агё,21Н18,23Ьеи,25Рго,26А1а,28'29Рго,31А8р-11-амилин (SEQ ID NO: 195). [0217] Подходящие и иллюстративные соединения-агонисты амилина также описаны в патентной публикации РСТ WO2010/085700.
[0218] Аналоги амилина включают в себя аминокислотные последовательности из остатков 1-37 формулы (I), следущей ниже, где вплоть до 25% аминокислот, указанных в формуле (I) могут быть удалены или замещены другой аминокислотой: X'-Xaa1-Cys2-Asn3-Thr4-Ala5-Thr6-Cys7-Ala8-Thr9-Gln10-Arg11-Leu12-Ala13-Asn14-Phe15-Leu16-Val17-His18-Ser19-Ser20- Xaa21-Asn22-Phe23- Хаа24- Хаа25- Хаа26- Хаа27- Хаа28- Xaa29-Thr30-Xaa31-Val32-Gly33-Ser34-Asn35-Thr36-Tyr37-X (SEQ ID NO:800) (I). В формуле (I), X' представляет собой водород, N-концевую кэппирующую группу или линкер к группе увеличения продолжительности действия. Хаа1 представляет собой Lys или связь, Хаа21 представляет собой Lys, Cys или Asn, Хаа24 представляет собой Lys, Cys
или Gly, Хаа25 представляет собой Lys, Cys или Pro, Хаа26 представляет собой Lys, Cys или
27 28
Не, Хаа представляет собой Lys, Cys или Leu, Хаа представляет собой Lys, Cys, или Pro,
29 31
Хаа представляет собой Lys, Cys или Pro и Хаа представляет собой Lys, Cys или Asn. Далее говоря о формуле (I), переменная X представляет собой С-концевую функциональную группу (например, С-концевую кэппирующую группу). X представляет собой замещенную или незамещенную амино-, замещенную или незамещенную алкиламино-, замещенную или незамещенную диалкиламино-, замещенную или незамещенную циклоалкиламино-, замещенную или незамещенную ариламино-, замещенную или незамещенную аралкиламино-, замещенную или незамещенную алкилокси-, замещенную или незамещенную арилокси-, замещенную или незамещенную аралкилоксигруппу или гидроксил. Если С-конец полипептидного компонента с последовательностью из остатков 1-37 формулы (I) кэппирован функциональной группой X, то X предпочтительно представляет собой амин, тем самым образуя С-концевой амид. В некоторых вариантах осуществления вплоть до 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% или даже 50% аминокислот из остатков 1-37 формулы (I) удалены или заменены в полипептидном компоненте согласно формуле (I). В некоторых вариантах осуществления компонент аналога амилина содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или даже 16 замен аминокислот относительно аминокислотной последовательности, указанной в формуле (I). В некоторых вариантах осуществления аналог амилина содержит последовательность, которая характеризуется определенной идентичностью последовательности в отношении остатков 1-37 из аминокислотной последовательности согласно формуле (I). В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательности между аналогом амилина, описываемым в настоящем документе, и остатками 1-37 формулы (I) составляет 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или даже больше. В некоторых вариантах осуществления вплоть до 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или даже меньше аминокислот, указанных в остатках 1-37 формулы (I) могут быть удалены или заменены на другую аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательности находится в диапазоне 75%-100%. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательности находится в диапазоне 75%-90%. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательности находится в диапазоне 80%-90%. В некоторых вариантах
осуществления идентичность последовательности составляет, по меньшей мере, 75%. В некоторых вариантах осуществления аналог амилина analog содержит последовательность остатков 1-37 формулы (I).
[0219] В некоторых вариантах осуществления аналоги амилина, включающие в себя аналоги формулы (I), образуют основу полипептидного компонента, к которому присоединена одна или несколько групп, увеличивающих продолжительность действия, чтобы получить конъюгат полипептида амилина. Таким образом, полипептидный компонент служит в качестве шаблона ("полипептидного шаблона"), к которому присоединяют, предпочтительно ковалентным связыванием, одну или несколько групп, увеличивающих продолжительность действия. Связывание увеличивающей продолжительность действия группы с полипептидным компонентом может происходить через линкер, как описано в настоящем документе. Альтернативно, связывание увеличивающей продолжительность действия группы с полипептидным компонентом может происходить посредством прямой ковалентной связи. Группа, увеличивающая продолжительность действия может представлять собой водорастворимый полимер, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления множество групп, увеличивающих продолжительность действия, присоединяют к полипептидному компоненту, при этом каждый линкер к каждой группе, увеличивающей продолжительность действия независимо выбран из линкеров, описываемых в настоящем документе.
[0220] Аналоги амилина, применимые в качестве полипептидных компонентов, описываемых в настоящем документе, включают в себя в качестве неограничивающих примеров, соединения, указанные в остатках 1-37 формулы (I), приведенные ниже в таблице 3. Если не указано иначе, все пептиды, описываемые в настоящем документе, включая пептиды, содержащие явным образом предлагаемую последовательность, рассматриваются в свободных и карбоксилированной и амидированной форме. Таблица 3. Полипептиды компонентов, применимых в соединениях, описываемых в настоящем документе.
Соединение
Описание (последовательность)
101
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID NO: 160)
102
CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID NO:801)
Соединение
Описание (последовательность)
([дезЬуБ^-Стрс! 101)
103
KCNTATCATQRLANFLVRSSKNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:802)
104
CNTATCATQRLANFLVRSSKNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2(SEQ Ш N0:803) ([AesLys^-Cmpd 103)
105
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPKLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:804)
106
CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPKLPPTNVGSNTY-NH2(SEQ ID N0:805) ([AesLys^-Cmpd 105)
107
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTKVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:806)
108
CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPmVGSNTY-NH2(SEQ ID N0:807) ([AesLys^-Cmpd 107)
109
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:808)
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:809) ([AesLys^-Cmpd 109)
111
CNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:810)
112
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPKLPPTNVGSNTY-NH2(SEQ ID N0:811)
113
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTKVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:812)
114
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFKPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:813)
115
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:814)
116
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPIKPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:815)
117
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILKPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:816)
118
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:817)
[0221] Термины "линкер" и тому подобное в контексте присоединения групп, увеличивающих продолжительность действия, к полипептидному компоненту в конъюгате амилинового полипептида, описываемом в настоящем документе, означает двухвалентную группу (-L-), ковалентно связанный в свою очередь с полипептидным компонентом, характеризующимся валентностью, доступной для образования связи, и с группой, увеличивающей продолжительность действия, характеризующейся валентностью, доступной для образования связи. Доступный сайт для образования связи в полипептидном компоненте в целях удобства представляет собой боковую цепь остатка (например, лизин, цистеин, аспарагиновая кислота и их гомологи). В некоторых вариантах осуществления
доступный сайт для образования связи в полипептидном компоненте представляет собой боковую цепь остатка лизина или цистеина. В некоторых вариантах осуществления доступный сайт для образования связи в полипептидном компоненте представляет собой N-концевой амин. В некоторых вариантах осуществления доступный сайт для образования связи в полипептидном компоненте представляет собой С-концевой карбоксил. В некоторых вариантах осуществления доступный сайт для образования связи в полипептидном компоненте представляет собой атом его основной цепи. Как применяют в настоящем документе, термин "связывающий аминокислотный остаток" обозначает аминокислоту среди остатков 1-37 формулы (I), к которой присоединена группа, увеличивающая продолжительность действия.
[0222] В некоторых вариантах осуществления предлагаются соединения, содержащие линкер, ковалентно связывающий полипептидный компонент с группой, увеличивающей продолжительность действия. Линкер является необязательным, то есть, любой линкер может представлять собой просто связь. В некоторых вариантах осуществления линкер присоединен к боковой цепи полипептидного компонента. В некоторых вариантах осуществления линкер присоединен к атому основной цепи полипептидного компонента. [0223] В другом аспекте предлагается конъюгат полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и аминокислотный остаток в положении от 2 до 37 был заменен на остаток лизина или остаток цистеина, и где указанный остаток лизина или остаток цистеина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер, где нумерация аминокислоты соответствует номеру аминокислоты в SEQ ID NO: 110.
[0224] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в любом положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0225] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в любом положении 21, 24-29 или 31 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0226] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 21 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0227] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 24 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0228] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 25 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0229] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 26 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0230] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 27 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0231] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 28 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0232] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 29 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0233] В другом аспекте изобретение относится к конъюгату полипептида амилина, который представляет собой производное прамлинтида с последовательностью SEQ ID N0:110 или его аналог, где аминокислотный остаток в положении 1 отсутствует (т.е., дез-Lys1) и где аминокислотный остаток в положении 31 заменен на остаток лизина, и где указанный остаток лизина связан с полиэтиленгликолевым полимером, необязательно через линкер.
[0234] В некоторых вариантах осуществления группа, увеличивающая продолжительность действия представляет собой водорастворимый полимер. "Водорастворимый полимер" обозначает полимер, который в достаточной степени растворим в воде при физиологических условиях, например, температуре, ионной концентрации и тому подобном, как известно в данной области, чтобы быть применимым в способах, описываемых в настоящем документе. Водорастворимый полимер может увеличить растворимость пептида или другой биомолекулы, к которой такой присоединен такой
водорастворимый полимер. Действительно, такое присоединение было предложено как
средство для того, чтобы улучшить период циркуляции в крови, растворимость в воде
и/или антигенность вводимых белков in vivo. Смотри, например, патент США № 4179337;
опубликованную заявку США № 2008/0032408. Множество различных водорастворимых
полимеров и химий присоединения использовались для данной цели, такие как
полиэтиленгликоль, сополимеры этиленгликоль/пропиленгликоль,
карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилен/малеиновый ангидрид, полиаминокислоты (либо гомополимеры, либо статистические сополимеры) и тому подобное.
[0235] В некоторых вариантах осуществления присоединяемая группа, увеличивающая продолжительность действия включает в себя полиэтиленгликоль. Полиэтиленгликоль ("ПЭГ") использовали в попытке получить терапевтически применимые полипептиды. Смотри например, Zalipsky, S., 1995, Bioconjugate Chemistry, 6:150-165; Mehvar, R., 2000, J. Pharm. Pharmaceut. Sci., 3:125-136. Как признается специалистом в данной области, основная цепь ПЭГ [(СН2СН2-0-)п, п:количество повторяющихся мономеров] является гибкой и амфифильной. Не желая быть связанными какой-либо теорией или механизмом действия, длинная, подобная цепи молекула или группа ПЭГ, как полагают, в большой степени гидратируется и находится в быстром движении, когда присутствует в водной среде. Такое быстрое движение, как полагают, заставляет ПЭГ проносить большой объем и предотвращает приближение и вмешательство других молекул. В результате, при присоединении к другому химическому соединению (такому как пептид), цепи полимера ПЭГ могут защитить такое химическое соединение от иммунного ответа и других механизмов выведения. В результате, ПЭГилирование может приводить к улучшенной эффективности лекарственного средства и безопасности, оптимизируя фармакокинетику, увеличивая биодоступность и снижая иммуногенность и частоту дозирования. "ПЭГилирование" обозначает в обычном смысле конъюгацию группы ПЭГ с другим соединением. Например, присоединение ПЭГ, как было показано, защищает от протеолиза. Смотри например, Blomhoff, Н. К. et al., 1983, Biochim Biophys Acta, 757:202-208. Если явным образом не указано иначе, термины "ПЭГ", "полиэтиленгликолевый полимер" и
тому подобное относятся к полимеру полиэтиленгликоля и его производным, включающим в себя метокси-ПЭГ (мПЭГ).
[0236] Известно множество способов для присоединения групп полимеров, таких как ПЭГ и родственные полимеров, к реакционноспособным группам, обнаруженным в белке. Смотри например, патент США № 4179337; патент США № 4002531; Abuchowski et al., 1981, in "Enzymes as Drugs," J. S. Holcerberg and J. Roberts, (Eds.), pp. 367-383; Zalipsky, S., 1995, Bioconjugate Chemistry, 6:150-165. Обсуждается применение ПЭГ и других полимеров для модификации белков. Смотри например, Cheng, T.-L. et al, 1999m, Bioconjugate Chem., 10:520-528; Belcheva, N. et al.,1999, Bioconjugate Chem., 10:932-937; Bettinger, T. et al., 1998, Bioconjugate Chem., 9:842-846; Huang, S.-Y. et al., 1998, Bioconjugate Chem., 9:612-617; Xu, B. et al. 1998, Langmuir, 13:2447-2456; Schwarz, J. B. et al, 1999, J. Amer. Chem. Soc, 121:2662-2673; Reuter, J. D. et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10:271-278; Chan, T.-H. et al, 1997, J. Org. Chem., 62:3500-3504. Типичные сайты присоединения в белках включают в себя первичную аминогруппу, такую как аминогруппы остатков лизина или на N-конце, тиоловые группы, такие как группы боковой цепи цистеина, и карбоксильные группы, такие как карбоксильные группы остатков глутамата или аспартата или на С-конце. Общеизвестными сайтами для присоединения являются остатки Сахаров гликопротеинов, цистеины или N-конец и лизины целевого полипептида. Термины "ПЭГилированный" и тому подобное относятся к ковалентному присоединению полиэтиленгликоля к полипептиду или другой биомолекуле, необязательно через линкер, как описано в настоящем документе и/или как известно в данной области.
[0237] В некоторых вариантах осуществления группа ПЭГ в конъюгате полипептида амилина, описываемом в настоящем документе, имеет номинальную молекулярную массу в пределах определенного диапазона. Как обычно в данной области, размер группы ПЭГ указывают ссылкой на номинальную молекулярную массу, обычно приводимую в килодальтонах (кДа). Молекулярная масса рассчитывается множеством способов, известных в данной области, включая количество, массу, вязкость и среднее значение молекулярной массы "Z". Известно, что полимеры, такие как ПЭГ и тому подобное, существует в виде распределения масс молекул около номинального среднего значения. [0238] Иллюстративный из терминологии молекулярных масс для ПЭГ термин "мПЭГ40 кДа" относится к полимеру метоксиполиэтиленгликоля, имеющего номинальную
молекулярную массу 40 килодальтон. Обозначения ПЭГ других молекулярных масс следуют данного правилу. В некоторых вариантах осуществления группа ПЭГ характеризуется номинальной молекулярной массой в диапазоне 10-100 кДа, 20-80 кДа, 2060 кДа или 20-40 кДа. В некоторых вариантах осуществления группа ПЭГ характеризуется номинальной молекулярной массой 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или даже 100 кДа. Предпочтительно, группа ПЭГ характеризуется молекулярной массой 20, 25, 30, 40, 60 или 80 кДа.
[0239] Молекулы ПЭГ, применимые для получения производных полипептидов типично классифицируют на классы линейных, разветвленных и Warwick (т.е., полиПЭГ(r)) ПЭГ, как известно в данной области. Если явным образом не указано иначе, группы ПЭГ, описываемые в настоящем документе, представляют собой линейные ПЭГ. Кроме того, термины "разветвленный на две части", "Y-образный" и тому подобное относятся к разветвленным группам ПЭГ, как известно в данной области. Термин "Warwick" в контексте ПЭГ, также известный как "гребенчатый" или "гребенчатого типа" ПЭГ, относится к ряду разветвленных на множество частей ПЭГ, присоединенных к основе, типично поли(метакрилату), как известно в данной области. Относительно номенклатуры, включающей в себя правила, применяемые в представленной ниже таблице в настоящем документе, при отсутствие указания на иное, группа ПЭГ присоединена к основной цепи пептида. Например, Cmpd 119 является результатом конъюгации мПЭГ40кДа к N-концевому азоту Cmpd 101. Схожим образом, Cmpd 120 является результатом конъюгации мПЭГ40кДа к N-концевому азоту Cmpd 102. Можно использовать стандартные однобуквенные сокращения для аминокислот, как могут быть и стандартные трехбуквенные сокращения. Например, Cmpd 124 является аналогом Cmpd 110, где остаток в положении 26 из Cmpd 109 заменен на лизин, и функциональная группа амин боковой цепи лизина 26 (то есть, К26) конъюгирует с группой ПЭГ40кДа. Иллюстративные соединения приведены ниже в таблице 4.
Cmpd
SEQ Ш NO:
Описание
122
199
[К21(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1104
123
200
[К2б(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1105
124
201
[К2б(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1106
125
202
[К31(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1107
126
203
[К31(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1108
127
204
[К26(У-образный-мПЭГ40 кДа)]-Стр(1105
128
205
[К21(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1111
129
206
[К26(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1112
130
207
[К31(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1113
131
208
[К26(У-образный-мПЭГ40 кДа)]-Стр(1112
132
209
[К24(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1114
133
210
[К25(мПЭГ40 кДа)]-Стрс1115
134
211
[К27(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1116
135
212
[К28(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1117
136
213
[К29(мПЭГ40 кДа)]-Стр(1118
[0240] Амилины и аналоги амилина, к которым прикреплен химический фрагмент, представляют собой производные амилина. Производные амилина могут представлять собой амилины, в которых была произведена химическая модификация одной или нескольких ее аминокислотных боковых групп, а-углеродных атомов, концевой аминогруппы или концевой группы карбоновой кислоты. Химическая модификация включает в себя без ограничения прикрепление одного или нескольких химических фрагментов, создание новых связей и удаление одного или нескольких химических фрагментов. Модификации на аминокислотных боковых группах включают в себя без ограничения алкилирование, ацилирование, образование сложных эфиров, образование амидов, связывание с малеимидом, ацилирование s-аминогрупп лизина, N-алкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование групп глутаминовой или аспарагиновой карбоновых кислот и деамидирование глутамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают в себя без ограничения модификации дезамино, N-низшего алкила, N-ди-низшего алкила и N-ацила. Модификации концевой аминогруппы включают в себя
без ограничения модификации дезамино, N-низшего алкила, N-ди-низшего алкила и N-ацила, такого как алкилацилы, разветвленные алкилацилы, алкил арил-ацилы. Модификации концевой карбоксигруппы включают в себя без ограничения модификации амида, низшего алкиламида, диалкиламида, ариламида, алкилариламида и сложного эфира низшего алкила. Низший алкил представляет собой С1-С4 алкил. Более того, одна или несколько боковых групп, или концевых групп, могут быть защищены с помощью защитных групп, известных специалисту в области синтетической химии, а-углерод аминокислоты может быть моно- или диметилированным.
[0241] Производные амилина включают в себя амилины и аналоги амилина, конъюгированные с одной или несколькими водорастворимыми полимерными молекулами, такими как полиэтиленгликоль ("PEG"), как описано выше, или жирнокислотные цепи различной длины (например, стеарил, пальмитоил, октаноил), путем добавления полиаминокислот, таких как поли-гистидин, поли-аргинин, поли-лизин и поли-аланин или путем добавления низкомолекулярных заместителей, которые включают в себя короткоцепочечные алкилы и ограниченные алкилы (например, разветвленные, циклические, слитые, адамантил) и ароматические группы. Согласно некоторым вариантам осуществления водорастворимые полимерные молекулы будут характеризоваться молекулярной массой в диапазоне от приблизительно 500 дальтон до приблизительно 60000 дальтон. Смотрите, например, патентные публикации РСТ WO 2007/104789, WO 2009/034119 и WO 2010/046357 для производных амилина, подходящих для применения в качестве средств против ожирения в комбинации со сконструированными полипептидами настоящего изобретения.
[0242] Такие конъюгации с полимером могут происходить в единичном случае на N- или С-конце или на боковых цепях аминокислотных остатков в пределах раскрытой в настоящем документе последовательности амилина или аналога амилина. Альтернативно, могут иметь место многочисленные сайты дериватизации вдоль аминокислотной последовательности такого амилина или аналога амилина. Замещение одной или нескольких аминокислот лизином, аспарагиновой кислотой, глутаминовой кислотой или цистеином может обеспечивать дополнительные сайты для дериватизации. Согласно некоторым вариантам осуществления амилин или аналог амилина может быть конъюгированы с одной, двумя или тремя полимерными молекулами.
[0243] Согласно некоторым вариантам осуществления водорастворимые полимерные молекулы соединены с амино, карбоксильной или тиольной группой и могут быть соединены с помощью N или С-концов, или на боковых цепях лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина. Альтернативно, водорастворимые полимерные молекулы могут быть соединены с диамином и дикарбоксильными группами. Согласно некоторым вариантам осуществления амилин или аналог амилина конъюгирован с одной, двумя или тремя молекулами PEG посредством эпсилон-аминогруппы на аминокислоте лизин.
[0244] Было неожиданно обнаружено, что сконструированные полипептиды настоящего изобретения обеспечивают благоприятные синергические эффекты против ожирения как у субъектов с умеренным ожирением (BMI, равное или больше чем 30), так и с тяжелым ожирением (BMI, равное или больше чем 3 5) при введении в комбинации с определенными другими соединениями против ожирения. Как описано ранее, например, в опубликованной заявке на выдачу патента США № 2008/0207512, было обнаружено, что у субъектов с ожирением существует состояние устойчивости к лептину. Смотрите также, например, Tenenbaum, D., HHMIBulletin, pp. 25-27 (март 2003); Chicurel, М., Nature, Vol. 404, pp. 538540 (2000); Scarpace et al., Diabetalogia, Vol. 48, pp. 1075-1083 (2005); и Bays et al, Obesity Research, Vol. 12,(8), pp. 1197-1211 (2004). Эта устойчивость к лептину, характризующаяся по меньшей мере частично присутствием аномально высоких уровней лептина в сыворотке у субъектов с ожирением, делает эти субъекты неспособными эффективно реагировать на лептин, либо эндогенный, либо введенный экзогенно. Ранее было обнаружено, что эта устойчивость к лептину могла быть преодолена у субъектов с умеренным ожирением с помощью комбинированной терапии, включая лептин (например, метрелептин) и определенные другие соединения против ожирения. Смотрите, например, опубликованную заявку на выдачу патента США № 2008/0207512. Было дополнительно обнаружено, что синергические эффекты против ожирения комбинированной терапии лептина отсутствуют у субъектов с тяжелым ожирением с высоким BMI, преимущественно вследствие тяжелой устойчивости к лептину. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что сконструированные соединения настоящего изобретения способны преодолеть даже тяжелую устойчивость к лептину при введении в комбинации с определенными другими соединениями против ожирения. Соответственно, в настоящем изобретении также
представлены способы лечения ожирения и связанных с ожирением состояний, нарушений и заболеваний у субъектов, включая субъектов с высоким BMI путем введения по меньшей мере двух различных средств против ожирения, где одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид настоящего изобретения и другое средство против ожирения представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина (т.е. средство амилин).
[0245] Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения ожирения у субъектов, нуждающихся в этом, включающим введение первого средства против ожирения, выбранного из сконструированного полипептида настоящего изобретения, в комбинации со вторым средством против ожирения, выбранным из амилина, аналога амилина, агониста амилина или производного амилина, где введение средств приводит к синергическому эффекту по сравнению с введением любого средства отдельно.
[0246] Согласно одному аспекту способы настоящего изобретения обеспечивают синергический эффект против ожирения среди введенных средств. Соответственно, согласно определенным вариантам осуществления введение комбинации средств против ожирения приводит к эффекту, например, снижению доступности питательных веществ, снижению массы тела, снижению потребления пищи, увеличение метаболизма, который больше, чем комбинация результатов введения средства против ожирения отдельно (монотерапия).
[0247] Термин "сниженная доступность питательных веществ" включает в себя любые средства, с помощью которых организм снижает питательные вещества, доступные для запасания организмом в качестве жира. Другими словами, снижение доступности питательных веществ может осуществляться с помощью средств, которые включают в себя без ограничения снижение аппетита, увеличение насыщения, воздействие на выбор пищи/вкусовое отвращение, увеличение метаболизма и/или снижение или ингибирование всасывания пищи. Иллюстративные механизмы, которые могут подвергаться воздействию, включают в себя замедление эвакуации содержимого желудка или сниженное всасывание пищи в кишечнике.
[0248] Используемый в настоящем документе термин "нуждающийся в этом субъект включает в себя субъектов, которые имеют избыточную массу, ожирение или желающих
похудеть. Субъекты с ожирением включают в себя как популяцию с умеренным ожирением с низким BMI, так и популяцию с тяжелым ожирением с высоким BMI. Кроме того, субъекты, которые являются устойчивыми к инсулину, характеризуются непереносимостью к глюкозе или имеют любую форму сахарного диабета (например, 1, 2 типа или гестационный сахарный диабет) могут получить пользу от способов настоящего изобретения.
[0249] Под термином "скорость метаболизма" понимают количество энергии, высвободившейся/израсходованной в единицу времени. Метаболизм в единицу времени может оцениваться путем потребления пищи, высвобожденной в виде тепла энергии или кислорода, используемого в метаболических процессах. В общем, необходимо иметь более высокую скорость метаболизма, когда кто-либо хочет похудеть. Например, субъект с высокой скоростью метаболизма может быть способен расходовать больше энергии (например, организм сжигает больше калорий) для осуществления активности, чем субъект с низкой скоростью метаболизма для этой активности.
[0250] Используемый в настоящем документе термин "тощая масса" или "тощая масса тела" относится к мышцам и костям. Тощая масса тела не обязательно означает безжировую массу. Тощая масса тела содержит небольшое процентное соотношение жира (примерно 3%) в центральной нервной системе (мозге и спинном мозге), костном мозге и внутренних органах. Тощую массу тела измеряют в единицах плотности. Способы измерения жировой массы и тощей массы включают в себя без ограничения подводное взвешивание, плетизмограф вытеснения воздуха, рентгенографию, изображения DEXA (двухфотонной рентгеновской асборбциометрии), изображения MRI (магнитно-резонансной томографии) и СТ (компьютерной томографии). Согласно определенным вариантам осуществления жировую массу и тощую массу измеряют с использованием подводного взвешивания, как известно из уровня техники.
[0251] Под термином "распределением жировой клетчатки" понимают расположение жировых отложений в организме. Такие места расположения жирового отложения включают в себя, например, подкожные, висцеральные и эктопические жировые отложения.
[0252] Под термином "подкожная жировая клетчатка" понимают отложение липидов сразу под поверхностью кожи. Количество подкожной жировой клетчатки у субъекта может быть
измерено с использованием любого способа, доступного для измерения подкожной жировой клетчатки. Способы измерения подкожной жировой клетчатки известны из уровня техники, например, описаны в патенте США № 6530886, полнота которого включена в настоящий документ посредством ссылки.
[0253] Под термином "висцеральный жир" понимают отложение жира в виде внутрибрюшной жировой ткани. Висцеральный жир окружает жизненно важные органы и может метаболизироваться печенью для получения холестерина крови. Висцеральный жир был связан с повышенным риском таких состояний, как синдром поликистоза яичников, метаболический синдром и сердечнососудистые заболевания.
[0254] Под термином "эктопическое жировое депо" понимают липидные отложения в тканях и органах и вокруг них, которые составляют тощую массу тела (например, скелетные мышцы, сердце, печень, поджелудочная железа, почки, кровеносные сосуды). В общем, эктопическое жировое депо представляет собой накопление липидов за пределами классических депо жировой ткани в организме.
[0255] Используемый в настоящем документе и хорошо известный в настоящей области техники термин "лечение" представляет собой подход для получения благоприятных или желательных результатов, включая клинические результаты. "Лечение" или "временное облегчение" заболевания, нарушения или состояния означает, что степень и/или нежелательные клинические проявления состояния, нарушения или болезненного состояния уменьшены и/или динамика прогрессирования во времени замедлена или пролонгирована, по сравнению с отсутствием лечения нарушения. Например, при лечении ожирения, снижение массы тела, например, по меньшей мере 5% снижение массы тела, представляет собой пример желательного результата лечения. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают в себя без ограничения облегчение или улучшение одного или нескольких симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (т.е., не ухудшающееся) состояние заболевания, задержка или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение болезненного состояния и ремиссию (частичную или полную), обнаруживаемую или не обнаруживаемую. "Лечение" может также означать пролонгирование выживаемости по сравнению с предполагаемой выживаемостью при отсутствии получения лечения. Кроме того, лечение не обязательно происходит путем
введения одной дозы, но часто происходит при введении серии доз. Таким образом, терапевтические эффективное количество, количество, достаточное для временного облегчения, или количество, достаточное для лечения заболевания, нарушения или состояния, может быть введено за одно или несколько введений.
[0256] Используемый в настоящем документе термин "терапевтически эффективное количество" означает количество активных соединений в композиции, которая будет проявлять биологический или медицинский ответ в ткани, системе, субъекте или человеке, которого пытается добиться исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, который включает в себя облегчение симптомов подлежащего лечению нарушения. Новые способы лечения настоящего изобретения предусмотрены для нарушений, известных специалистам в настоящей области техники.
[0257] Используемый в настоящем документе термин "профилактически эффективное количество" означает количество активных соединений в композиции, которая будет проявлять биологический или медицинский ответ в ткани, системе, субъекте или человеке, которого пытается добиться исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, для предотвращения возникновения ожирения или связанного с ожирением нарушения, состояния или заболевания у субъектов, у которых возможен риск ожирения или связанного с ожирением нарушения, состояния или заболевания.
[0258] Согласно другому аспекту настоящего изобретения представлены способы для снижения риска развития метаболических нарушений, где способ предусматривает введение субъекту комбинации средств против ожирения в эффективных количествах для снижения массы субъекта.
[0259] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения способы настоящего изобретения применяют для увеличения скорости метаболизма у субъекта, уменьшения снижения скорости метаболизма у субъекта или сохранения скорости метаболизма у субъекта. Согласно определенным вариантам осуществления скорость метаболизма может включать в себя предпочтительное использование жира организма в качестве источника энергии по сравнению с безжировой тканью организма. Согласно одному аспекту тощая масса тела не уменьшается после введения комбинации средств против ожирения. Согласно другому аспекту снижение тощей массы тела уменьшается или предотвращается после введения комбинации средств против ожирения. Согласно еще
одному аспекту тощая масса тела увеличивается после введения комбинации средств против ожирения. Такое предпочтение в отношении жира в качестве источника энергии может быть определено путем сравнения количества жировой ткани с безжировой тканью организма, определенного путем измерения общей массы тела и содержания жира в начале и конце периода лечения. Увеличение скорости метаболизма представляет собой более высокий уровень использования калорий или другого источника энергии субъектом за период времени по сравнению с уровнем использования калорий или другого источника энергии субъектом за другой период времени, по сути, при аналогичных или идентичных условиях без введения комбинации средств против ожирения. Согласно определенным вариантам осуществления скорость метаболизма увеличивается по меньшей мере приблизительно на 5% у субъекта, согласно другим вариантам осуществления скорость метаболизма увеличивается по меньшей мере приблизительно на 10%, 15%, 20% 25%, 30% или 35% у субъекта по сравнению с уровнем использования калорий или другого источника энергии субъектом за другой период времени, по сути, при сходных или идентичных условиях без введения комбинации средств против ожирения. Увеличение скорости метаболизма может быть измерено с применением, например, респираторного калориметра. Эффективное количество используемых в настоящих вариантах осуществления средств против ожирения представляет собой количество каждого средства, эффективное для увеличения скорости метаболизма у субъекта при введении в комбинации по сравнению с субъектом, не получающим средства или только одно из средств. [0260] Согласно другому варианту осуществления представлен способ снижения уменьшения скорости метаболизма у субъекта. Такое уменьшение скорости метаболизма может быть результатом любого состояния или режима питания или физической нагрузки, который приводит к снижению скорости метаболизма, например, вследствие низкокалорийной диеты, строгой диеты или потери массы тела. Строгая диета включает в себя разрешения или запреты, либо на типы пищи, либо на количества пищи или на то и другое, разрешенное в диете, не обязательно на основании калорий. Например, в случае индивидуальных диет организм компенсирует сниженную скорость метаболизма на основании меньшего потребления калорий. По существу, организм отрицательно регулирует потребность в пище, тем самым потребляя меньше пищи. С продолжением диеты пороговое значение для потребления калорий снижается. При окончании диеты
индивидуум, как правило, набирает массу, продолжая находиться на нормальной диете, вследствие сниженного порогового значения потребления калорий и сниженной основной скорости метаболизма (NIH Technology Assessment Conference Panel (1992) Ann. Intern. Med. 116:942-949; Wadden (\99Ъ) Ann. Intern. Med. 119:688-693). Согласно одному аспекту представлен способ снижения потери скорости метаболизма у субъекта, где потеря скорости метаболизма является результатом низкокалорийной диеты или потери массы тела. Путем применения такого способа снижение скорости метаболизма субъекта уменьшается по меньшей мере приблизительно на 10%, 15%, 20% 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95% у субъекта. Для таких способов может быть желательно вводить комбинацию средств против ожирения во время, когда инициируется состояние или режим питания или физической нагрузки, приводящий к потере или снижению скорости метаболизма. Тем не менее, также предусматривается, что введение средств начинают перед тем, как инициируют состояние или режим питания или физической нагрузки. В одном случае скорость метаболизма измеряют с применением респираторного калориметра. Эффективное количество средств против ожирения, используемых в настоящем варианте осуществления, представляет собой количество каждого средства, эффективное для уменьшения снижения скорости метаболизма у субъекта при введении в комбинации.
[0261] Согласно другому аспекту представлены способы снижения метаболических плато, где способ предусматривает введение эффективных количеств средств против ожирения в комбинации субъекту. Согласно определенным вариантам осуществления субъект теряет массу тела или потерял массу тела, например, вследствие низкокалорийной диеты, увеличенной физической нагрузки или их комбинации. Под "метаболическим плато" понимают временные интервалы стабильной скорости метаболизма, в то время как организм адаптируется к изменениям в потреблении калорий или энергии. Изменения в потреблении или расходе калорий могут быть результатом, например, низкокалорийных диет или увеличенной физической активности. Такие плато могут наблюдаться, например, в ходе режима потери массы тела, когда потеря массы тела замедляется или останавливается. Согласно определенным вариантам осуществления способ настоящего изобретения снижает продолжительность метаболического плато у субъекта по сравнению с продолжительностью метаболических плато в остальном идентичного субъекта за такой
же период времени, по сути, при аналогичных или идентичных условиях без введения комбинаций средств против ожирения. Согласно другим вариантам осуществления способ настоящего изобретения снижает частоту метаболических плато по сравнению с частотой метаболических плато в остальном идентичного субъекта за такой же период времени, по сути, при аналогичных или идентичных условиях без введения комбинации средств против ожирения. Согласно другим вариантам осуществления способ настоящего изобретения замедляет появление метаболического плато по сравнению с появлением метаболического плато в остальном идентичного субъекта за такой же период времени, по сути, при аналогичных или идентичных условиях без введения комбинации средств против ожирения. Согласно определенным вариантам осуществления метаболические плато определяют с помощью составления диаграммы периодов сниженной потери массы тела и ее отсутствия. Согласно определенным вариантам осуществления по меньшей мере одно метаболическое плато снижается. Согласно другим вариантам осуществления по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять метаболических плато снижаются. Согласно другому аспекту метаболические плато замедляются на один день по сравнению с субъектом, которому не вводили комбинацию средства против ожирения при идентичных или аналогичных состояниях. Согласно другим аспектам метаболические плато у субъекта замедляются на 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю, 10 дней, 2 недели или 3 недели.
[0262] Согласно другим вариантам осуществления представлен способ сохранения скорости метаболизма у субъекта. Согласно определенным вариантам осуществления субъект может быть подвержен риску потери скорости метаболизма, например, вследствие начала низкокалорийной диеты, строгой диеты или предполагаемой потери массы тела. Сохранение скорости метаболизма представляет собой поддержание уровня использования калорий или другого источника энергии субъектом за период времени по сравнению с уровнем использования калорий или другого источника энергии в остальном идентичным субъектом за такой же период времени, по сути, при аналогичных или идентичных условиях без введения комбинации средств против ожирения. Согласно одному аспекту скорость метаболизма поддерживается в пределах 15% скорости метаболизма субъекта до начала события, которое приводит к уменьшению скорости метаболизма. Согласно другим аспектам скорость метаболизма поддерживается в пределах 10%, в пределах 7%, в пределах
5%, в пределах 3% или менее скорости метаболизма субъекта. Согласно одному аспекту комбинацию средств против ожирения вводят в начале низкокалорийной диеты, строгой диеты или режима физической нагрузки.
[0263] Скорости метаболизма можно оценить с применением любого способа, доступного для определения таких скоростей, например, путем применения респираторного калориметра. Такие способы и устройства для оценки скоростей метаболизма известны из уровня техники и описаны, например, в патентах США №№ 4572208, 4856531, 6468222, 6616615, 6013009 и 6475158. Альтернативно, скорость метаболизма животного можно оценить путем измерения количества безжировой ткани по сравнению с жировой тканью, которую катаболизирует животное после периода диеты. Таким образом, общую массу тела и содержание жира можно измерить в конце периода диеты. У крыс часто используемый способ для определения общего количества жира организма представляет собой хирургическое удаление и взвешивание забрюшинного жирового тела, жирового тела, расположенного в забрюшинном пространстве, области между задней брюшной стенкой и задней париетальной брюшиной. Считается, что масса жирового тела напрямую связана с процентным количеством жира животного. Поскольку взаимосвязь между массой тела и количеством жира в организме у крыс является линейной, животные с ожирением характеризуются соответственно более высоким процентным отношением жира в организме и массой забрюшинного жирового тела.
[0264] Согласно другому аспекту настоящего изобретения представлены способы снижения жировой массы путем увеличения скорости метаболизма у субъекта, где способы предусматривают введение комбинации средств против ожирения в количествах, эффективных для снижения жировой массы путем увеличения скорости метаболизма субъекта. Жировая масса может быть выражена как процент от общей массы тела. Согласно некоторым аспектам жировая масса снижается по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20% или по меньшей мере на 25% в течение курса лечения. Согласно одному аспекту тощая масса субъекта не уменьшается в течение курса лечения. Согласно другому аспекту тощая масса субъекта сохраняется или увеличивается в течение курса лечения. Согласно другому аспекту субъект находится на низкокалорийной диете или строгой диете. Под термином "низкокалорийная диета" понимают, что субъект принимает внутрь меньше
калорий в день по сравнению с нормальной диетой этого же субъекта. В одном случае субъект потребляет по меньшей мере на 50 калорий в день меньше. В других случаях субъект потребляет по меньшей мере на 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 калорий в день меньше.
[0265] Согласно определенным вариантам осуществления настоящего изобретения представлен способ изменения распределения жировой клетчатки у субъекта, где способ предусматривает введение комбинации средств против ожирения в количествах, эффективных для изменения распределения жировой клетчатки у субъекта. Согласно одному аспекту изменение является результатом увеличенного метаболизма висцерального или эктопического жира или обоих показателей у субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает метаболизм висцерального или эктопического жира или и обоих показателей со скоростью по меньшей мере приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% или 50% больше, чем для подкожной жировой клетчатки. Согласно одному аспекту способы приводят к благоприятному распределению жировой клетчатки. Согласно определенным вариантам осуществления благоприятное распределение жировой клетчатки представляет собой увеличенное соотношение подкожной жировой клетчатки к висцеральному жиру, эктопическому жиру или к обоим показателям. Согласно одному аспекту способ предусматривает увеличение тощей массы тела, например, как результат увеличения массы мышечных клеток.
[0266] Согласно другим вариантам осуществления представлены способы снижения количества подкожной жировой клетчатки у субъекта, где способ предусматривает введение нуждающемуся в этом субъекту комбинации средств против ожирения в количествах, эффективных для снижения количества подкожной жировой клетчатки у субъекта. В одном случае количество подкожной жировой клетчатки снижается у субъекта по меньшей мере приблизительно на 5%. В других случаях количество подкожной жировой клетчатка снижается по меньшей мере приблизительно на 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 40% или 50% по сравнению с субъектом до введения средств против ожирения. [0267] Описанные в настоящем документе способы могут быть использованы для снижения количества висцерального жира у субъекта. В одном случае висцеральный жир снижается у субъекта по меньшей мере приблизительно на 5%. В других случаях висцеральный жир снижается у субъекта по меньшей мере приблизительно на 10%, 15%,
20%, 25%, 30% 40%, или 50% по сравнению с субъектом до введения комбинации средств против ожирения. Висцеральный жир может быть измерен посредством любого средства, доступного для определения количества висцерального жира у субъекта. Такие способы включают в себя, например, абдоминальную томографию посредством СТ сканирования и MRI. Другие способы для определения висцерального жира описаны, например, в патентах США №№ 6864415, 6850797 и 6487445.
[0268] Согласно определенным вариантам осуществления представлен способ предотвращения накопления эктопического жира или снижения количества эктопического жира у субъекта, где способ предусматривает введение нуждающемуся в этом субъекту комбинации средств против ожирения в количествах, эффективных для предотвращения накопления эктопического жира или для снижения количества эктопического жира у субъекта. В одном случае количество эктопического жира снижается у субъекта по меньшей мере приблизительно на 5% по сравнению с субъектом до введения комбинации средств против ожирения. В других случаях количество эктопического жира снижается у субъекта по меньшей мере приблизительно на 10%, или по меньшей мере приблизительно на 15%, 20%, 25%, 30% 40% или 50%. Альтернативно, количество эктопического жира пропорционально снижается на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с подкожной жировой клетчаткой у субъекта. Эктопический жир может быть измерен у субъекта с применением любого способа, доступного для измерения эктопического жира.
[0269] Согласно другим вариантам осуществления представлены способы получения более благоприятного распределения жировой клетчатки у субъекта, где способ предусматривает введение субъекту комбинации средств против ожирения в количествах, эффективных для получения благоприятного распределения жировой клетчатки. Согласно определенным вариантам осуществления введение комбинации средств против ожирения снижает количество висцерального жира или эктопического жира или обоих показателей у субъекта. Например, введение комбинации средств против ожирения, где по меньшей мере одно средство против ожирения, которое действует на структуры переднего мозга, вовлеченные в модулирование потребления пищи или массы тела или обоих показателей, в комбинации с введением по меньшей мере одного средства против ожирения, которое действует на структуры заднего мозга, вовлеченные в модулирование потребления пищи
или массы тела или обоих этих показателей. Согласно определенным вариантам осуществления способы предпочтительно снижают количество висцерального или эктопического жира или их комбинацию, по сравнению со снижением подкожной жировой клетчатки. Такие способы приводят к более высокому соотношению подкожной жировой клетчатки к висцеральному жиру или эктопическому жиру. Такие улучшенные соотношения могут приводить к сниженному риску развития сердечнососудистых заболеваний, синдрома поликистоза яичников, метаболического синдрома или любых их комбинаций. Согласно определенным вариантам осуществления эктопический или висцеральный жир метаболизируется со скоростью на 5% больше, чем подкожная жировая клетчатка. Согласно другим вариантам осуществления эктопический или висцеральный жир метаболизируется со скоростью по меньшей мере на 10% 15%, 20%, 25%, 30% 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% больше, чем подкожная жировая клетчатка. [0270] Согласно другому аспекту способы настоящего изобретения предусматривают применение терапевтически эффективного количества комбинации средств против ожирения, введенной в комбинации с глюкокортикостероидами. Глюкокортикостероиды характеризуются неблагоприятным эффектом увеличения жировой массы и уменьшения тощей массы. Соответственно, предусматривается, что комбинация средств против ожирения может быть использована вместе с глюкокортикостероидами при состояниях, когда применение глюкокортикостероида является целесообразным.
[0271] Согласно еще одному аспекту способы настоящего изобретения предусматривают применение терапевтически эффективного количества одного средства против ожирения или комбинации средств против ожирения, введенных в комбинации с терапевтическим средством, выбранным из орлистата, фентермина, топирамата, CONTRAVE и QNEXA. Согласно некоторым вариантам осуществления способы настоящего изобретения предусматривают применение терапевтически эффективного количества сконструированного полипептида настоящего изобретения в комбинации с терапевтическим средством, выбранным из орлистата, фентермина, топирамата, CONTRAVE и QNEXA. Согласно другим вариантам осуществления способы настоящего изобретения предусматривают применение терапевтически эффективного количества амилина, аналога амилина, агониста амилина или производного амилина в комбинации с терапевтическим средством, выбранным из орлистата, фентермина, топирамата,
CONTRA VE и QNEXA. Согласно другим вариантам осуществления способы настоящего изобретения предусматривают применение терапевтически эффективного количества сконструированного соединения настоящего изобретения в комбинации с амилином, аналогом амилина, агонистом амилина или производным амилина и терапевтическим средством, выбранным из орлистата, фентермина, топирамата, CONTRAVE и QNEXA. [0272] Также представлены способы снижения массы у субъекта с болезненным ожирением путем снижения вначале массы субъекта до уровня ниже, чем таковой при болезненном ожирении, затем введения субъекту комбинации средств против ожирения в эффективных количествах для дополнительного снижения массы субъекта. Способы снижения массы субъекта до уровня, ниже чем при болезненном ожирении, предусматривают снижение потребление калорий, увеличение физической активности, лекарственную терапию, бариатрическую хирургию, такую как операция шунтирование желудка, или любые комбинации предшествующих способов. Согласно одному аспекту введение комбинации средств против ожирения дополнительно снижает массу субъекта. Согласно другим вариантам осуществления представлены способы снижения индекса массы тела у субъекта, характеризующегося индексом массы тела, равным 40 или менее, путем введения комбинации средств против ожирения в эффективных количествах для дополнительного снижения массы субъекта.
[0273] Под снижением массы понимают, что субъект теряет часть его/ее общей массы тела в течение курса лечения, вне зависимости от того, составляет ли курс лечения дни, недели, месяцы или годы. Альтернативно, снижение массы может быть определено как уменьшение соотношения жировой массы к тощей массе (другими словами, субъект снижает жировую массу, но сохраняет или набирает тощую массу без обязательной соответствующей потери общей массы тела). Эффективное количество средств против ожирения, вводимых в комбинации согласно настоящим вариантам осуществления, представляет собой количество, эффективное для снижения массы субъекта тела в течение курса лечения, или альтернативно количество, эффективное для снижения процентного соотношения жировой массы субъекта в течение курса лечения. Согласно определенным вариантам осуществления масса тела субъекта снижается в течение курса лечения по меньшей мере приблизительно на 1%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15% или по
меньшей мере приблизительно на 20%. Альтернативно, процентное соотношение жировой массы субъекта снижается в течение курса лечения по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20% или по меньшей мере на 25%.
[0274] Согласно определенным вариантам осуществления способы снижения массы предусматривают улучшенное соблюдение поддержания массы тела. Не желая быть связанным с какой-либо теорией, восстановление восприимчивости к лептину, достигаемое путем введения описанных в настоящем документе средств против ожирения, преодолевает ключевую проблему для субъектов с ожирением. В существующих ранее способах потери массы тела уровни лептина могли все еще быть выше, чем нормальные, даже при сниженной массе тела, усложняя для субъектов поддержание потери массы тела. Описанные в настоящем документе способы предусматривают не только способы снижения массы, но также компонент улучшенного соблюдения поддержания массы тела. [0275] Согласно определенным вариантам осуществления способы снижения доступности питательных веществ, например, снижения массы, у субъекта предусматривают введение субъекту эффективного количества средств против ожирения в болюсной дозе один или несколько раз в день. Болюсная доза представляет собой прерывистую дозировку лекарственного препарата (в отличие от непрерывной инфузии). Субъекту может быть введена одна или несколько болюсных доз в день. Болюсная доза может быть одинаковой, независимо от того, когда ее вводят субъекту, или может быть отрегулирована так, чтобы субъекту вводили большую болюсную дозу в определенные моменты времени дня по сравнению с другими. Осуществляя введение средства в определенных составах, например, составах с замедленным высвобождением, болюсная доза может быть введена менее часто, например, раз в три дня, один раз в неделю, два раза в месяц, один раз в месяц. Более того, время между болюсными дозами предпочтительно является достаточно продолжительным, чтобы обеспечить очищение из кровотока субъекта лекарства, введенного в предыдущей болюсной дозе.
[0276] Согласно другим вариантам осуществления способы снижения доступности питательных веществ, например, снижения массы, у субъекта предусматривают введение субъекту эффективного количества средств против ожирения в непрерывных дозах. Под непрерывной дозой подразумевают нерперывную инфузию лекарственного средства,
например, с помощью внутривенной инъекции или трансдермального пластыря. Альтернативно, непрерывная доза может быть введена перорально в форме капсулы или таблетки с контролируемым высвобождением, которая высвобождает лекарственное средство в систему субъекта в течение определенного периода времени. При введении с помощью непрерывной дозы лекарственное средство высвобождается за период приблизительно 1 час, в некоторых случаях лекарственное средство высвобождается за период приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 или 24 часа.
[0277] Под термином "введенный в комбинации" понимают, что средства против ожирения вводят в виде одного введения, одновременно в виде отдельных доз или в виде последовательных введений. Последовательное введение относится к введению одного из средств против ожирения или до, или после средства против ожирения. Согласно определенным вариантам осуществления первое средство против ожирения вводят приблизительно за 30 минут до или после по меньшей мере одного другого средства против ожирения, согласно другим вариантам осуществления приблизительно за 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 часов до или после по меньшей мере одного другого средства против ожирения. Любое из введенных средств против ожирения может быть введено в виде болюсной дозы или непрерывной дозы.
[0278] Более того, согласно определенным вариантам осуществления введение индуцирующих массу средств в комбинации приводит к синергическому эффекту в любом из аспектов настоящего изобретения. Кроме того, согласно определенным вариантам осуществления введение индуцирующие массу средства в комбинации приводят к сниженной потребности в дозе по меньшей мере для одного из средств, с тем же эффектом. [0279] Соответственно, согласно одному варианту осуществления представлен способ лечения ожирения или снижения массы тела у нуждающегося в этом субъекта предусматривающий периферическое введение терапевтически эффективных количеств по меньшей мере двух различных средств против ожирения, где по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина и по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид, содержащий: полипептид домена связывания с альбумином (ABD); и первый пептидный гормональный домен (HD1), выбранный из
лептина, аналога лептина или его активного фрагмента, и субъект снижает массу тела по
меньшей мере на 10%, 12%, 15%, 20%, 30%, 40% или даже 50%.
[0280] Дополнительные варианты осуществления включают в себя следующее:
Вариант осуществления 1. Способ лечения ожирения у субъекта, предусматривающий периферическое введение терапевтически эффективных количеств по меньшей мере двух различных средств против ожирения, причем по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина (т.е. амилиновое средство) и по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего альбумин домена (ABD); и первый пептидный горональный домен (HD1), выбранный из лептина, аналога лептина или их активного фрагмента.
Вариант осуществления 2. Способ снижения массы тела у субъекта, предусматривающий периферическое введение терапевтически эффективных количеств по меньшей мере двух различных средств против ожирения, причем по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина (т.е. амилиновое средство) и по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего альбумин домена (ABD); и первый пептидный горональный домен (HD1), выбранный из лептина, аналога лептина или их активного фрагмента.
Вариант осуществления 3. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 или 2, в котором по меньшей мере одно амилиновое средство против ожирения представляет собой агонист амилина.
Вариант осуществления 4. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
3, в котором агонист амилина содержит аналог или производное амилина.
Вариант осуществления 5. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
4, в котором аналог или производное амилина содержит прамлинтид.
Вариант осуществления 6. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
5, в котором аналог или производное амилина содержит соединение, раскрытое в таблице 4.
Вариант осуществления 7. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
6, в котором аналог или производное амилина содержит Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-
прамлинтид (SEQ ID NO: 214).
Вариант осуществления 8. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
7, в котором ABD содержит любой из пептидов, выбранных из группы, состоящей из LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGinLAALP (SEQ ID N0:38), L А Е А К VL А N R Е L D К YG VSDFYKRLINKAK TVЕG VNALTHHILAALP (SEQ ID N0:39), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDHILAALP (SEQ ID N0:40), L А Е А К V LANRELDKYGVSDYYKNIINRAK TV Е G V RALKLHILAALP (SEQ ID N0:41), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGHILAALP (SEQ ID N0:42), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:43), L A E А К V LANRELDKYGVSDFYKNLINRAKT VEG VD A LIA HIL A A L P (SEQ ID N0:44), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP (SEQ ID N0:45), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSHILAALP (SEQ ID N0:46), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVINKAKTVEGVEALIADILAALP (SEQ ID N0:47), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP (SEQ ID N0:48), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLHILAALP (SEQ ID N0:49), LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:50), LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP (SEQ ID N0:51), и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP (SEQ ID N0:52).
Вариант осуществления 9. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 -
8, в котором HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID NO: SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146.
Вариант осуществления 10. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 - 9, в котором HD1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:29.
Вариант осуществления 11. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 10, в котором сконструированный полипептид содержит соединение, раскрытое в таблице 2.
Вариант осуществления 12. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
11, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:53, SEQ ID N0:54, SEQ ID N0:55, SEQ ID N0:56, SEQ ID N0:57, SEQ ID N0:58, SEQ ID N0:59, SEQ ID N0:60, SEQ ID N0:61, SEQ ID N0:62, SEQ ID N0:63, SEQ ID N0:64, SEQ ID N0:65, SEQ ID N0:66, SEQ ID N0:67, SEQ ID N0:68, SEQ ID N0:69, SEQ ID N0:70, SEQ ID N0:71, SEQ ID N0:72, SEQ ID N0:73, SEQ ID N0:74, SEQ ID N0:75, SEQ ID N0:76, SEQ ID N0:77, SEQ ID N0:78, SEQ ID N0:79, SEQ ID N0:80, SEQ ID N0:81, SEQ ID N0:82, SEQ ID N0:83, SEQ ID N0:84, SEQ ID N0:85 SEQ ID N0:86, SEQ ID N0:87, SEQ ID N0:88, SEQ ID N0:89, SEQ ID N0:90, SEQ ID N0:91, SEQ ID N0:92, SEQ ID N0:93, SEQ ID N0:94, SEQ ID N0:95, SEQ ID N0:96, SEQ ID N0:97, SEQ ID N0:98, SEQ ID N0:99, SEQ ID N0:100, SEQ ID N0:101, SEQ ID N0:102, SEQ ID N0:103, SEQ ID N0:104, SEQ ID N0:105, SEQ ID N0:106 и SEQ ID N0:107.
Вариант осуществления 13. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
12, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:54.
Вариант осуществления 14. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1 12, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:61.
Вариант осуществления 15. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 14, в котором эффективное количество амилинового средства и эффективное количество сконструированного полипептида содержит количество, обеспечивающее большее уменьшение массы тела при введении указанному субъекту амилинового средства в сочетании с сконструированным полипептидом, нежели уменьшение массы тела при введении любого из средств по отдельности.
Вариант осуществления 16. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 15, в котором два средства вводят одновременно.
Вариант осуществления 17. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 16, в котором два средства смешивают вместе.
Вариант осуществления 18. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 17, в котором значение BMI субъекта составляет более 25.
Вариант осуществления 19. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 18, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 35.
Вариант осуществления 20. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 19, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 40.
Вариант осуществления 21. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 20, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 45.
Вариант осуществления 22. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 21, в котором значение BMI субъекта составляет 35 - 45.
Вариант осуществления 23. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 22, в котором значение BMI субъекта снижено до менее чем 30.
Вариант осуществления 24. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 23, в котором значение BMI субъекта снижено до менее чем 25.
Вариант осуществления 25. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 24, в котором значение BMI субъекта снижено до нормы.
Вариант осуществления 26. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 25, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 4 недель лечения.
Вариант осуществления 27. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 26, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 8 недель лечения.
Вариант осуществления 28. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 27, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 12 недель лечения.
Вариант осуществления 29. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 28, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 20 недель лечения.
Вариант осуществления 30. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 29, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 24 недель лечения.
Вариант осуществления 31. Способ согласно любому из вариантов осуществления
- 30, в котором субъект представляет собой человека.
Вариант осуществления 32. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 31, в котором субъект представляет собой страдающего ожирением человека.
Вариант осуществления 33. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 32, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 10%.
Вариант осуществления 34. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 33, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 12%.
Вариант осуществления 35. Способ согласно любому из вариантов осуществления 1
- 34, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 15%.
В. Составы
[0281] Фармацевтические соединения согласно изобретению можно приготовить с фармацевтически приемлемыми носителями или растворителями, а также любыми другими известными вспомогательными веществами и наполнителями согласно общепринятым способам, таким как способы, описанные в Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin. Смотри также Wang et al. (1988) J. of Parenteral Sci. и Tech., Technical Report No. 10, Supp. 42:2 S.
[0282] В основном, сконструированные полипептиды можно приготовить в стабильную безопасную фармацевтическую композицию для введения. Фармацевтические препараты, рассматриваемые для применения в способах по изобретению, могут включать в себя приблизительно от 0,01 до 1,0% (масс/об.), в определенных случаях от 0,05 до 1,0%, сконструированного полипептида, приблизительно от 0,02 до 0,5% (масс/об.) ацетатного, фосфатного, цитратного или глутаматного буфера, позволяющего доводить рН готовой композиции до величины приблизительно от 3,0 до приблизительно 7,0; приблизительно от 1,0 до 10% (масс/об.) вспомогательного вещества из углевода или многоатомного спирта и, необязательно, приблизительно от 0,005 до 1,0% (масс/об.) консерванта, выбранного из группы м-крезола, бензилового спирта, метил-, этил-, пропил- и бутилпарабенов и фенола. Такой консервант, как правило, включают, если приготовленный пептид необходимо включить в продукт для многократного применения.
[0283] В конкретных вариантах осуществления фармацевтический препарат настоящих сконструированных полипептидов может содержать диапазон концентраций соединения(ий), например, приблизительно от 0,01% до приблизительно 98% масс/масс,
или приблизительно от 1 до приблизительно 98% масс/масс, или предпочтительно, от 80% до 90% масс/масс, или, предпочтительно приблизительно, от 0,01% до приблизительно 50% масс/масс, или, более предпочтительно, приблизительно от 10% до приблизительно 25% масс/масс, в данных вариантах осуществления. Достаточное количество воды для инъекций можно использовать, чтобы получить необходимую концентрацию раствора. [0284] Дополнительные увеличивающие тоничность вещества, такие как хлорид натрия, а также другие известные наполнители, могут также присутствовать, при желании. В некоторых случаях, такие наполнители применимы для поддержания общей тоничности соединения. Наполнители можно включать в состав описываемых в настоящем документе препаратов в различных концентрациях. Например, наполнитель можно включать в диапазоне концентрации приблизительно от 0,02% до приблизительно 20% масс/масс, предпочтительно, приблизительно от 0,02% и 0,5% масс/масс, приблизительно от 0,02% до приблизительно 10% масс/об., или приблизительно от 1% до приблизительно 20% масс/масс. Кроме того, похожие на сами настоящие препараты, наполнители можно включать в твердом (включая порошковый), жидком, полутвердом или гелевом виде. [0285] Фармацевтические препараты можно составить в различных формах, например, твердой, жидкой, полутвердой или жидкой. Термин "твердый", используемый в настоящем документе, предназначен для того, чтобы охватывать все нормальные применения данного термина, включая, например, порошки и лиофилизированные препараты. Описываемые в настоящем документе препараты могут быть лиофилизированными.
[0286] Термины буфер, буферный раствор и забуференный раствор, когда применяются в отношении концентрации иона водорода или величины рН, относятся к способности системы, особенно, водного раствора, проявлять устойчивость к изменению величины рН при добавлении кислоты или щелочи, или при растворении с растворителем. Особенностью забуференных растворов, которые подвергаются небольшим изменениям величины рН при добавлении кислоты или основы, является присутствие или слабой кислоты и соли слабой кислоты, или слабого основания и соли слабого основания. Примером последней системы является уксусная кислота и ацетат натрия. Изменение величины рН фактора является небольшим, пока количество добавленного иона гидрония, или гидроксильного иона, не превышает способность буферной системы его нейтрализовать.
[0287] Как описано в настоящем документе, множество жидких носителей пригодно для использования в препаратах сконструированных полипептидов, например, вода или смесь водного/органического растворителя или суспензии.
[0288] Стабильность препарата сконструированного полипептида для применения, как описано в настоящем документе, увеличивают, поддерживая величину рН препарата в диапазоне, определяемом известными в данной области способами. В определенных вариантах осуществления величину рН препарата поддерживают в диапазоне приблизительно от 3,5 до 5,0, или приблизительно от 3,5 до 6,5, в некоторых вариантах осуществления приблизительно от 3,7 до 4,3, или приблизительно от 3,8 до 4,2. В некоторых вариантах осуществления величина рН может составлять приблизительно 4,0, приблизительно 5,0, приблизительно 6,0, приблизительно 7,0, приблизительно 8,0, приблизительно 9,0 или даже выше. В некоторых вариантах осуществления рН может находиться в физиологическом диапазоне, рН 6-8, предпочтительно рН 7-7,6. [0289] В определенных вариантах осуществления буфер со сконструированным полипептидом представляет собой ацетатный буфер (предпочтительно, при конечной концентрации препарата приблизительно от 1-5 до приблизительно 60 мМ), фосфатный буфер (предпочтительно, при конечной концентрации препарата приблизительно от 1-5 до приблизительно 30 мМ) или глутаматный буфер (предпочтительно при конечной концентрации препарата приблизительно от 1-5 до приблизительно 60 мМ). В некоторых вариантах осуществления буфер представляет собой ацетат (предпочтительно при конечной концентрации препарата приблизительно от 5 до приблизительно 30 мМ). [0290] Стабилизатор можно включать в состав препаратов, но он не является обязательно необходимым. Если включен, тем не менее, стабилизатор, применимый в практике по настоящему изобретению, представляет собой углевод или многоатомный спирт. Походящий стабилизатор, применимый в практике по настоящему изобретению, составляет приблизительно от 1,0 до 10% (масс/об.) углевода или многоатомного спирта. Многоатомные спирты и углеводы характеризуются одними и теми же характеристиками своих основных цепей, то есть, --СНОН--СНОН--, которые ответственны за стабилизацию белков. Многоатомные спирты включают в себя такие соединения, как сорбит, маннит, глицерин и полиэтиленгликоли (PEG). Данные соединения представляют собой молекулы с неразветвлённой цепью. Углеводы, такие как манноза, рибоза, сахароза, фруктоза,
трегалоза, мальтоза, инозитол и лактоза, с другой стороны, являются циклическими молекулами, которые могут содержать кето- или альдегидную группу. Данные два класса соединений, как продемонстрировали, являются эффективными при стабилизации белка от денатурации, вызванной повышенной температурой и в результате процессов замораживания-оттаивания или замораживания-высушивания. Подходящие углеводы включают в себя: галактозу, арабинозу, лактозу или любой другой углевод, который не оказывает побочного действия на страдающего сахарным диабетом пациента, то есть, углевод не метаболизируется до формы образования неприемлемо больших концентраций глюкозы в крови. Такие углеводы хорошо известны в данной области, как подходящие для диабетиков. Сахароза и фруктоза пригодны для использования с соединением в применениях, не относящихся к сахарному диабету (например, лечение ожирения). [0291] В определенных вариантах осуществления, если включают в состав стабилизатор, соединение стабилизируется многоатомным спиртом, таким как сорбит, маннит, инозитол, глицерин, ксилит и сополимер полипропилен/этиленгликоль, а также различными полиэтиленгликолями (PEG) молекулярной массы 200, 400, 1450, 3350, 4000, 6000, 8000 и даже больше). Маннит является предпочтительным многоатомным спиртом в некоторых вариантах осуществления. Другой применимой особенностью лиофилизированных препаратов по настоящему изобретению является поддержание тоничности лиофилизированных препаратов, описываемых в настоящем документе, с тем же самым компонентом препарата, который служит для поддержания его стабильности. В некоторых вариантах осуществления маннит является предпочтительным многоатомным спиртом, применимым для данной цели.
[0292] Фармакопея Соединённых Штатов (USP) утверждает, что противомикробные средства в бактериостатических или фунгистатических концентрациях следует добавлять к препаратам, содержащихся в контейнерах для многократных доз. Они должны присутствовать в соответствующей концентрации во время использования, чтобы предотвратить размножение микроорганизмов, неосторожно введенных в препарат при заборе части содержимого шприцем с иглой для подкожных инъекций, или применяя другие инвазивные способы доставки, такие как шприцы-ручки. Противомикробные средства следует оценить, чтобы гарантировать совместимость со всеми другими компонентами препарата, и их активность следует оценить в полном препарате, чтобы
гарантировать, что определенное средство, которое эффективно в одном препарате, не оказалось неэффективно в другом. Нередко случается обнаружить, что определенное противомикробное средство будет эффективно в одном препарате, но не эффективно в другом препарате.
[0293] Консервант, в общем фармацевтическом смысле, представляет собой вещество, которое предотвращает или ингибирует рост микроорганизмов и которое можно добавлять в фармацевтические препараты с данной целью, чтобы избежать последующей порчи препарат микроорганизмами. В то время как количество консерванта не велико, он, все-таки, может влиять на общую стабильность пептида.
[0294] При этом консервант для применения в фармацевтических композициях может находиться в диапазоне от 0,005 до 1,0% (масс/об.), в некоторых вариантах осуществления диапазон для каждого консерванта, одного или в сочетании с другими, составляет: бензиловый спирт (0,1-1,0%), или т-крезол (0,1-0,6%), или фенол (0,1-0,8%) или комбинация метил- (0,05-0,25%) и этил- или пропил- или бутилпарабенов (0,005%-0,03%). Парабены представляют собой сложные эфиры низших алкилов парагидроксибензойной кислоты. Подробное описание каждого консерванта приведено в Remington's Pharmaceutical Sciences (Id.)
[0295] Сконструированные полипептиды могут не характеризоваться тенденцией адсорбироваться на стекле в стеклянных контейнерах, когда находятся в жидкой форме, поэтому поверхностно-активное вещество не требуется для дополнительной стабилизации фармацевтического препарата. Однако в отношении соединений, которые имеют такую тенденцию, когда находятся в жидкой форме, в их препарате следует использовать поверхностно-активное вещество. Данные препараты можно затем лиофилизировать. Поверхностно-активные вещества часто вызывают денатурацию белка как вследствие гидрофобного разрушения, так и путем разделения солевых мостиковых связей. Относительно низкие концентрации поверхностно-активного вещества могут характеризоваться сильной денатурирующей активностью ввиду сильных взаимодействий между частями поверхностно-активного вещества и реакционноспособными участками белков. Однако целесообразное использование данного взаимодействия может стабилизировать белки в отношении межповерхностной или поверхностной денатурации. Поверхностно-активные вещества, которые могут дополнительно стабилизировать
сконструированный полипептид, могут необязательно, присутствовать в диапазоне приблизительно от 0,001 до 0,3% (масс/об.) всего препарата и включают полисорбат 80 (то есть, полиоксиэтилен(20)сорбитанмоноолеат), CHAPS(r) (то есть, 3-[(холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат), Brij(r) (например, Brij 35, который представляет собой (простой лауриловый эфир полиоксиэтилена (23)), полоксамер или другое неионогенное поверхностно-активное вещество.
[0296] Также может быть желательным добавление хлорида натрия или другой соли для регулирования тоничности фармацевтического препарата в зависимости от выбранного регулятора тоничности. Однако это необязательно и зависит от конкретного выбранного препарата. Парентеральные препараты обычно могут быть изотоничными или по существу изотоничными.
[0297] Предпочтительным носителем для парентеральных продуктов является вода. Воду подходящего качества для парентерального введения можно приготовить или дистилляцией, или обратным осмосом. Вода для инъекций представляет собой предпочтительный водный носитель для применения в фармацевтических препаратах. [0298] Возможно, что другие ингредиенты могут присутствовать в фармацевтических препаратах. Такие дополнительные ингредиенты могут включать в себя, например, увлажнители, эмульгаторы, масла, антиоксиданты, наполнители, модификаторы тоничности, хелатообразующие средства, ионы металлов, маслянистые носители, белки (например, человеческий сывороточный альбумин, желатин или белки) и цвиттерион (например, аминокислота, такая как бетаин, таурин, аргинин, глицин, лизин и гистидин). Дополнительно, растворы полимеров или смеси с полимерами обеспечивают возможность контролируемого высвобождения пептида. Такие дополнительные ингредиенты, конечно же, не должны неблагоприятно воздействовать на общую стабильность фармацевтического препарата по настоящему изобретению.
[0299] Контейнеры также представляют собой неотъемлемую часть препарат для инъекций и могут считаться компонентом, потому что нет контейнера, который является полностью инертным или каким-либо образом не воздействует на содержащуюся в нем жидкость, особенно, если жидкость является водной. Следовательно, выбор контейнера для определенной инъекции должен исходить из оценки состава материала контейнера, а также раствора и обработки, которой она будет подвергнута. Адсорбцию пептида на стеклянную
поверхность флакона также можно, при необходимости, минимизировать, применяя борсиликатное стекло, например, борсиликатное стекло Wheaton Type I #33 (Wheton Type I-33) или его эквивалента (Wheton Glass Co.). Другие продавцы флаконов и кассет из похожего борсиликатного стекла, приемлемых для промышленного производства, включают в себя Kimbel Glass Co., West Co., Bunder Glass GMBH и Form a Vitrum. Биологические и химические свойства соединения можно стабилизировать приготовлением и лиофилизацией в сывороточном флаконе из борсиликата Wheton Туре 1-33 до конечной концентрации 0,1 мг/мл и 10 мг/мл соединения в присутствии 5% маннита и 0,02% Tween 80.
[0300] Для препаратов, которые необходимо доставить инъекцией, для того чтобы позволить осуществить введение иглы от шприца для подкожных инъекций во флакон с многократными дозами и обеспечить его повторную герметизацию, как только удаляется игла, открытый конец каждого флакона обычно закупоривают крышкой в виде резиновой пробки, удерживаемой на месте алюминиевой лентой.
[0301] Пробки для стеклянных флаконов, такие как West 4416/50, 4416/50 (с тефлоновым покрытием) и 4406/40, Abbott 5139, или любую эквивалентную пробку можно использовать в качестве крышки для фармацевтического препарата для инъекций. Для препаратов, включающих в себя пептидные средства против ожирения, данные пробки совместимы с пептидом, а также другими компонентами препарата. Авторы изобретения также обнаружили, что данные пробки проходят тест на целостность при тестировании с использованием паттернов применения пациентами, например, пробка может выдержать, по меньшей мере, приблизительно 100 инъекций. Альтернативно, пептид можно лиофилизировать во флаконах, шприцах или кассетах для последующего растворения. Жидкими препаратами по настоящему изобретению можно заполнить одно-или двухкамерные кассеты, или одно-или двухкамерные шприцы.
[0302] Каждый из компонентов фармацевтического препарата, описанных выше, известен в данной области и описан в Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Vol. 1, 2nd ed., Avis et al. Ed., Mercel Dekker, New York, N.Y. 1992, который в полном объеме включен в настоящий документ в качестве ссылки для любых целей.
[0303] Способ промышленного производства указанных выше жидких препаратов, как правило, включает в себя стадии приготовления смеси, стерилизационной фильтрации и
заполнения. Процедура приготовления смеси включает в себя растворение ингредиентов в определенном порядке (консервант, после чего следуют стабилизирующие средства/средства, регулирующие тоничность, буферы и пептид) или растворение в одно и то же время.
[0304] Альтернативные препараты, например, непарентеральные, могут не требовать стерилизации. Однако, если стерилизация желательна или необходима, то можно использовать любой подходящий способ стерилизации при разработке пептидного фармацевтического препарата по настоящему изобретению. Типичные способы стерилизации включают в себя фильтрацию, обработку паром (влажным жаром), обработку сухим жаром, газами (например, этиленоксидом, формальдегидом, диоксидом хлора, пропиленоксидом, бета-пропиолактоном, озоном, хлорпикрином, перуксусной кислотой, метилбромидом и тому подобным), воздействием источником излучения и асептической обработкой. Фильтрация представляет собой предпочтительный способ стерилизации для жидких препаратов по настоящему изобретению. Стерилизационная фильтрация включает в себя фильтрацию через фильтры с размером пор 0,45 мкм и 0,22 мкм (1 или 2), которые могут быть соединены в серию. После фильтрации раствором заполняют соответствующие флаконы или контейнеры.
[0305] В определенных вариантах осуществления сконструированные полипептиды, описываемые в настоящем документе, периферически вводятся субъектам. В некоторых вариантах осуществления жидкие фармацевтические препараты по настоящему изобретению предназначены для парентерального введения. Подходящие способы введения включают в себя внутримышечное, внутривенное, подкожное, внутрикожное, внутрисуставное, подоболочечное введение и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления подкожный способ введения является предпочтительным. В определенных вариантах осуществления доставка через слизистые оболочки также является предпочтительной. Данные способы включают в качестве неограничивающих примеров, пероральный, интраназальный, сублингвальный, легочный и буккальный способы, которые могут включать в себя введение пептида в жидкой, полутвердой или твердой форме. Для препаратов, включающих в себя сконструированные полипептиды, введение такими путями может потребовать существенно больше соединения, чтобы получить требуемые биологические эффекты вследствие сниженной биодоступности по сравнению с
парентеральной доставкой. Кроме того, парентеральную доставку с контролируемым высвобождением можно осуществить посредством образования полимерных микрокапсул, матриц, растворов, имплантатов и устройств и введением их парентерально или хирургическими способами. Примеры препаратов с контролируемым высвобождением описаны в патентах США №№ 6368630, 6379704, и 5766627, которые включены в настоящий документ в качестве ссылки. Данные лекарственные формы могут характеризоваться более низкой биодоступностью вследствие захвата некоторой части пептида в полимерной матрице или устройстве. Смотри, например, патенты США №№ 6379704, 6379703 и 6296842, каждый из которых включен в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях.
[0306] Соединения могут предлагаться в стандартной лекарственной форме, содержащей количество сконструированного полипептида, которое будет эффективно в одно- или многократных дозах.
[0307] Как будет хорошо понятно специалистам в данной области, эффективное количество сконструированного полипептида будет меняться в зависимости от многих факторов, включающих в себя возраст и массу тела пациента, физического состояния пациента, подлежащего лечению состояния и других факторов, известных в данной области. Эффективное количество сконструированных полипептидов будет также меняться в зависимости от определенной вводимой комбинации. Как описано в настоящем документе, введение сконструированных полипептидов в комбинации может позволить снизить количество любого из вводимых сконструированных полипептидов до эффективного количества.
[0308] Присущая сконструированному полипептиду большая продолжительность действия может обеспечивать требуемую увеличенную продолжительность действия, такую как обеспечивающую введение один раз в день или один раз в неделю. Продолжительность действия можно выбрать, например, выбирая ABD и его аффинность к альбумину. Не желая быть связанными теорией, полагают, что более высокая аффинность к альбумин приведет в более длительному времени циркуляции, обеспечивая более длительную продолжительность действия. Любую из двух или обе вместе фармакодинамику (терапевтические эффекты) и фармакокинетику (свойства лекарственного средства) можно измерить в течение времени после доставки, такую как
уровни лекарственного средства в плазме, острое или хроническое снижение глюкозы и/или HbAlc, уровни инсулина в плазме, ингибирование потребления пищи или уменьшение массы тела. С. Эффективные дозировки
[0309] Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем документе, включают в себя композиции, где активный ингредиент содержится в терапевтически эффективном количестве, то есть, в количестве, эффективном для достижения его предусмотренной цели. Фактическое количество, эффективное для определенного применения будет зависеть, inter alia, от состояния, требующего лечения. Например, при введении в способах для лечения сахарного диабета такие композиции будут содержать количество активного ингредиента, эффективное, чтобы достичь требуемого результата (например, снижение у субъекта уровня глюкозы в крови натощак). При введении в способах для лечения ожирения, такие композиции будут содержать количество активного ингредиента, эффективное, чтобы достичь требуемого результата (например, снижение массы тела).
[0310] Дозировка и частота приема (однократная или многократные дозы) вводимого соединения может изменяться в зависимости от различных факторов, включающих в себя способ введения; размер, возраст, пол, состояние здоровья, массу тела, индекс массы тела и диету пациента; природу и степень выраженности симптомов заболевания, требующего лечения (например, заболевание, поддающееся лечению соединениями, описываем в настоящем документе); наличие других заболеваний или других связанных со здоровьем проблем; тип параллельного лечения; и осложнений от любого заболевания или схемы лечения. Другие схемы лечения или средства можно использовать в сочетании со способами и соединениями по изобретению.
[0311] Терапевтически эффективные количества для применения у людей можно определить в моделях на животных. Например, дозу для человека можно приготовить, чтобы получить концентрацию, которая, как было обнаружено, является эффективной для животных. Дозировку у людей можно подгонять при помощи мониторинга одного или нескольких физиологических параметров, включая в качестве неограничивающих примеров уровень сахара в крови и массу тела, и меняя дозировку в большую или в меньшую сторону, как описано выше и известно в данной области.
[0312] Дозировки могут меняться в зависимости от потребностей пациента и от применяемого соединения. Доза, вводимая пациенту в контексте настоящего изобретения, должна быть достаточной, чтобы вызвать с течением времени благоприятный терапевтический ответ у пациента. Величину дозы также будут определять наличием, природой и степенью любых неблагоприятных побочных эффектов. Как правило, лечение начинают с меньших дозировок, которые меньше, чем оптимальная доза соединения. После этого дозировку увеличивают небольшими приращениями, пока не достигнут оптимального эффекта при данных обстоятельствах. В одном из вариантов осуществления изобретения диапазон дозировки составляет от 0,001% до 10% масс/об. В другом варианте осуществления диапазон дозировки составляет от 0,1% до 5% масс/об. [0313] Однако, типичные дозы могут составлять величину от нижнего предела приблизительно от 0,1 мг до верхнего предела приблизительно 200 мг фармацевтического соединения в день. Также предусмотрены другие диапазоны доз, такие как от 1 мг до 100 мг соединения в составе дозы и от 3 мг до 70 мг в составе дозы. Как правило, дозы сконструированных полипептидов с продолжительным периодом действия вводят, например, ежедневно или даже один раз в неделю. Дневные дозы можно доставлять дискретными стандартными дозами, вводимыми непрерывно в течение 24-часового периода либо любой части 24-часового периода.
[0314] Величины дозы и интервалы можно подобрать индивидуально, чтобы обеспечить уровни вводимого соединения, эффективные для определенного клинического признака, подвергаемого лечению. Это обеспечит схема лечения, которая соразмерна с серьезностью течения заболевания у человека.
[0315] Применяя идеи, описанные в настоящем документе, можно запланировать эффективную профилактическую или терапевтическую схему лечения, которая не вызывает существенную токсичность и, все же, полностью эффективна для лечения клинических симптомов, проявляющихся у конкретного пациента. Такое планирование должно включать тщательный выбор активного соединения с учетом факторов, таких как эффективность соединения, относительная биодоступность, масса тела пациента, наличие и серьезность неблагоприятных побочных эффектов, предпочтительный способ введения и профиль токсичности выбранного средства.
[0316] Удивительное свойство снижения дозы сконструированных полипептидов, описанных в настоящем документе, наряду с их удивительно долгим периодом полувыведения из плазмы и продолжительностью фармакологического действия, обеспечивает получение более совершенного фармацевтического средства. Более совершенные свойства, включающие в себя снижение дозы, позволяют получить более низкое дозирование, благодаря этому меньшее количество или менее серьезные побочные эффекты и лучшую стоимость товаров и/или более рентабельные и более простые препараты для введения один раз в день или один раз в неделю, в настоящее время недостижимые одними только исходными соединениями. D. Токсичность
[0317] Соотношение между токсичностью и терапевтическим эффектом определенного соединения является его терапевтическим индексом и его можно выразить в качестве соотношения между LD50 (количество соединения, летального для 50% популяции) и ED50 (количество соединения, эффективное для 50% популяции). Соединения, которые проявляют высокий терапевтический индекс, являются предпочтительными. Данные о терапевтическом индексе, получаемые из анализов на клеточных культурах и/или исследованиях на животных, можно использовать в определении диапазона дозировок для применения у людей. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в пределах диапазона концентраций в плазме, который включает ED50 с невысокой токсичностью или с ее отсутствием. Дозировка может меняться в пределах данного диапазона в зависимости от применяемой лекарственной формы и используемого способа введения. Смотри, например Fingl et al, In: THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch.l, p.l, 1975. Правильный препарат, способ введения и дозировку может выбрать лечащий врач, принимая во внимание состояние пациента и конкретный способ, в котором применяют соединение. [0318] Не желая быть связанными какой-либо теорией, полагают, что конъюгат связывающего альбумин домена ABD с гормональным доменом, как описано в настоящем документе, может обеспечить снижение иммуногенности, как оценили по снижению иммунного ответа в отношении гормонального домена без конъюгата с ABD. Смотри, например, WO 2009/016043, включенный в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме и во всех отношениях.
Пример 1: Получение сконструированного полипептида [0319] Последовательность белка конструировали и, используя коммерческое программное обеспечение, обратно транслировали в последовательность ДНК для клонирования в экспрессирующий вектор Е. coli. Последовательности получали либо как олигонуклеотиды и сшивали, применяя стандартные методики амплификации ПТ TP либо их расщепляли из существующих экспрессирующих конструкций, используя стандартные рестрикционные ферменты, и затем лигировали друг с другом. Последовательности, экспрессирующие интересующий белок, вводили в плазмиду рЕТ45 под промотором Т7 для индуцируемой экспрессии. После того как конструкции подтверждали секвенированием, вектор ДНК очищали и переносили в клетку-хозяна для экспрессии, типично BL21(DE3). Единичную колонию выделяли для роста стартовой культуры в 4 мл среды LB в течение ~6 ч. Глицериновые маточные растворы приготавливали, добавляя ЮОмкл 80% глицерина к 900 мкл маточного раствора, и хранили при -80С. Необязательно, 500 мкл неиндуцированного образца сохраняли для анализа в геле. 60 мл культуры (magic media) инокулировали, используя 60 мкл стартовой культуры в колбе Томпсона объемом 125 мл и инкубировали при 30 градусах С в течение ночи. Удаляли 250 мкл образца для анализа. Клеточный осадок осаждали центрифугированием и замораживали для дальнейшей обработки.
[0320] Бактериальные клетки собирали и впоследствии лизировали для выделения телец включения. Поскольку белок находился в тельцах включения, их растворяли и белок повторно сворачивали при 4С. Белки затем отделяли, применяя эксклюзионную хроматографию, пока не оставалась только одна полоска, и уровни эндотоксинов были приемлемыми для тестирования in vivo. Аналитическую ВЭЖХ, ОФ-ЖХ-МС и гель SDS-PAGE прогоняли как показатели контроля качества для конечного белка. Белок распределяли на предварительно определенные аликвоты и хранили при -80С. [0321] Типичные уровни выделения сконструированного полипептида для описанных в настоящем документе способов представлены в таблице 5 ниже. Неожиданно, уровни выделения, наблюдаемые для соединений и описанных выше способов получения, могут быть существенно выше, чем уровни выделения, наблюдаемые с ранее описанными конъюгированными видами, например, Fc-лептина и подобного. Более того, чужеродный
домен ABD не воздействовал неблагоприятно на экспрессию, выделение, переукладку, выход или растворимость выделенных сконструированных полипептидов, особенно для конъюгатов лептина, несмотря на общепризнанные трудности в выделении и обращении с лептином.
Пример 2: Функциональная активность лептина in vitro.
[0322] Способ. В настоящем анализе измеряют рецепторную передачу сигнала после
обработки клеток, экспрессирующих модифицированный рецептор лептина. Исследуемые
образцы принимали при 100% чистоте и заново растворяли до 10Х концентрации для
анализа в буфере для стимуляции. Общее количество 90 мкл каждого 10Х соединения
переносили в планшет ПП с глубокими лунками и серийно разводили (3-кратные серии) с
помощью буфера для стимуляции с применением Perkin Elmer Multiprobe(r) II и программы
"MSV_Lep_Func_3-Fold_Dil-Deepwell_96.MPT." Серийно разведенный планшет соединяли
с 96-луночным планшетом для стимуляции, содержащим 2,5 х 105 осажденных
выдержанных в течение 18 часов без лептина клеток Keptin, как известно из уровня
техники, с применением программы диагностики MultiMek
"MSV_Lep_Func_200ul_Transfer", которая переносит 200 мкл каждого из разведенных соединений и смешивает клетки. В это время планшет герметично закрывали с помощью адгезивной пленки для закрывания планшетов и помещали при 37С в течение 30 минут для обеспечения стимуляции pSTAT5. Смотрите, например, Crouse et al., 1998, J. Biol. Chem., 273:18365-18373. После инкубации планшет для стимуляции центрифугировали для повторного осаждения клеток, супернатант удаляли и оставшиеся клеточные осадки замораживали при -80С (> 30 минут). Клеточные лизаты получали путем добавления 100 мкл 1х лизата к размороженным клеточным осадкам (набор для анализа Perkin Elmer pSTAT5) с вращением при окружающей КТ в течение 20 минут. Лизаты очищали при 2500
об/мин в течение 20 минут и исследовали в наборе для анализа pSTAT5 как 4 мкл/лунка в 384-луночном Proxiplate(tm) согласно инструкциям производителя. Сигнал pSTAT5 (RFU) определяли с применением сканирующего спектрофотометра для прочтения планшетов Packard Fusion a-FP НТ, установленного на параметр альфа-считывания. Анализ завершали в 384-луночных планшетах Proxiplate(tm) при 11 мкл общего объема с репрезентативным средним значений п = 4 анализируемых лунок на показание дозы.
[0323] Ссылаясь на таблицу 6 ниже, Соединения С1-С6 представляют собой описанные в настоящем документе иллюстративные лептины, аналоги лептина и производные лептина. В частности, Соединение С1 представляет собой описанную в настоящем документе SEQ ID N0:20. Соединение С2 представляет собой SEQ ID N0:30 (т.е., А200). Соединение СЗ представляет собой SEQ ID N0:32, к которой один фрагмент 20 кДа полиэтиленгликоля (PEG) был прикреплен через остаток цистеина в положении 78. Способы конъюгации пептидов и белков с PEG известны из уровня техники. Соединение С4 представляет собой пегилированное производное SEQ ID N0:20, в котором один 20 кДа PEG был прикреплен через N-конец SEQ ID N0:20. Соединение С5 представляет собой двойное пегилированное PEG производное SEQ ID N0:32, в котором один фрагмент 20 кДа PEG был прикреплен через остаток цистеина в положении 78 и один фрагмент 20 кДа PEG был прикреплен через N-конец. Соединение С6 представляет собой пегилированное производное, в котором один 40 кДа PEG был прикреплен через N-конец.
[0324] Результаты. Как представлено в таблице 6 ниже, описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды (например, Соединения 1-4) характеризуются сравнимой и даже превосходящей функциональной активностью в анализе Obeca STAT5 по сравнению с разнообразными конъюгированными лептинами.
Соединение
Молекула или тип сконструированного полипептида
EC50 нМ (анализ Obeca STAT5)
SEQ ID N0:32 двойной пегелированный (20 кДа PEG через 78С и 20 кДа PEG через N-конец)
2,262
SEQ ID N0:20- один PEG 40 кДа через N-конец
0,355
SEQ ID N0:53
0,628
SEQ ID N0:54
0,530
SEQ ID N0:55
0,095
SEQ ID N0:56
0,103
SEQ ID N0:57
0,185
SEQ ID N0:58
1,052
SEQ ID N0:59
0,116
SEQ ID N0:60
0,406
SEQ ID N0:61
0,427
SEQ ID N0:62
0,411
SEQ ID N0:63
0,468
SEQ ID N0:64
0,322
Пример 3: Изменение массы тела после однократного введения. [0325] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 319 граммов в начале исследования. Животных разделяли на шесть групп (п=6/группа). Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; Соединение 1 в концентрации 2,6 мг/кг в инертном носителе; Соединение 2 в дозе 2,7 мг/кг в инертном носителе; Соединение 4 в дозе 2,7 мг/кг в инертном носителе; Соединение 2 в дозе 10 мг/кг в инертном носителе. Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигуры 1А - 1В). Введенные соединения: инертный носитель (квадрат); Соединение 1 в концентрации 2,6 мг/кг (треугольник вершиной вверх); Соединение 2 в дозе 2,7 мг/кг
(треугольник вершиной вниз); Соединение 4 в дозе 2,7 мг/кг (ромб); Соединение С2 в дозе 10 мг/кг (круг).
[0326] Результаты. Как изображено на фигурах 1А - 1В, введение каждого сконструированного полипептида приводило к сниженному потреблению пищи и массе тела. Все соединения вводили в эквимолярной дозе по общей массе соединения; все соединения вводили в концентрации 120 нмоль/кг (т.е., Соединение 1 в концентрации 2,6 мг/кг; Соединение 2 и Соединение 4 в дозе 2,7 мг/кг; Соединение С2 в дозе 10 мг/кг). Следует отметить, что Соединение С2 (т.е., А200) представляет собой димер двух фрагментов, где каждый фрагмент состоит из области FC IgGl, слитого с лептином человека. Соединение 1 и Соединение 2 характеризуются активностью, сходной с Соединением С2, которое, поскольку оно представляет собой димер, фактически содержит два лептина на молекулу. В то время как эффективность (самая низкая масса тела) кажется сходной, ясно, что характер изменения является более благоприятным для обоих сконструированных полипептидов по сравнению с Соединением С2. Если посмотреть с точки зрения количества молей лептина, то сконструированные полипептиды являются превосходными в отношении ингибирования как потребления пищи, так и массы тела, поскольку Соединение С2 содержит 2 молей лептина в каждом димерном комплексе Fc-лептин, тогда как каждый моль фрагмента ABD-лептина содержит только 1 моль лептина. [0327] Предыдущие результаты показали, что необходимо приблизительно 500 мкг/кг/день соединения А500, чтобы привести к 9-10% потере массы тела через 7 дней при введении с помощью непрерывной инфузии тощей крысе. Это дает в результате 2,5 мг соединения лептина А500 через 5 дней и 3,5 мг соединения через 7 дней. Поскольку само по себе соединение А500 содержит 16067,68 мг/моль и молекулярная масса Соединения 2 составляет -22,510 мг/моль, то можно было бы ожидать, что необходимо в 1,4 раза больше слитого белка ABD в течение 5 дней. На самом деле вводили только в 1,08 раза (2,7 мг/2,5 мг) больше соединения, что указывает на удивительное свойство сокращения дозы.
Пример 4: Изменение массы тела после однократного введения Соединения 2. [0328] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 324 граммов в начале исследования. Животных делили на четыре группы (п=6/группа). Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; Соединение 2 в дозе 0,3 мг/кг в инертном
носителе; Соединение 2 в дозе 1,0 мг/кг в инертном носителе; Соединение 2 в дозе 3,0 мг/кг в инертном носителе. Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигуры 2А - 2В). Введенные соединения: инертный носитель (квадрат); Соединение 2 в дозе 0,3 мг/кг (треугольник вершиной вверх); Соединение 2 в дозе 1,0 мг/кг (треугольник вершиной вниз); Соединение 2 в дозе 3,0 мг/кг (ромб). [0329] Результаты. Как изображено на фигурах 2А - 2В, введение в каждой концентрации сконструированного полипептидного Соединения 2 приводило к сниженному потреблению пищи и массе тела. Эффект дозы наблюдается на фигуре 2В.
Пример 5: Изменение массы тела после однократного введения Соединения С2. [0330] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 324 граммов в начале исследования. Животных делили на четыре группы (п=6/группа). Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; Соединение С2 в дозе 1,1 мг/кг в инертном носителе; Соединение С2 в дозе 3,3 мг/кг в инертном носителе; Соединение С2 в дозе 11,1 мг/кг в инертном носителе. Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигуры ЗА - ЗВ). Введенные соединения: инертный носитель (квадрат); Соединение С2 в дозе 1,1 мг/кг (круг); Соединение С2 в дозе 3,3 мг/кг (квадрат); Соединение С2 в дозе 11,1 мг/кг (треугольник вершиной вверх). [0331] Результаты. Как изображено на фигурах ЗА - ЗВ, введение в каждой концентрации контрольного Соединения С2 приводило к сниженному потреблению пищи и массе тела.
Пример 6: Изменение массы тела после однократного введения Соединения Сб. [0332] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 324 граммов в начале исследования. Животных делили на две группы (п=6/группа). Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; Соединение С6 в концентрации 2,2 мг/кг в инертном носителе. Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во
время=0. Потребление пищи и изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) подвергали мониторингу, и результаты записывали, как показано (фигуры 4А -4В)). Введенные соединения: инертный носитель (квадрат); Соединение С6 в концентрации 2,2 мг/кг (треугольник вершиной вниз).
[0333] Результаты. Как изображено на фигурах 4А - 4В, введение в каждой концентрации контрольного Соединения С6 приводило к сниженному потреблению пищи и массе тела.
Пример 7: Изменение массы тела у крыс DIO: [0334] Способ. Крысам Спраг-Доули, предрасположенным к алиментарному ожирению (DIO), со средней массой приблизительно 500 граммов вводили с помощью IP инъекции исследуемые и контрольные соединения на день 0 и день 7 (п=6 на соединение). Исследуемое соединение представляло собой SEQ ID N0:54, которое вводили в концентрации 1,3 мг/кг/неделя в инертном носителе. Массу тела и потребление пищи измеряли в многочисленных точках (0, 4, 7, 12 и 14 дней) в течение периода исследования. Введенные соединения: инертный носитель (квадрат); SEQ ID N0:54 в дозе 1,3 мг/кг в инертном носителе (треугольник вершиной вверх).
[0335] Результаты. Результаты, изображенные на фигуре 5, показывают, что IP инъекция с интервалом в одну неделю приводит к 3% потере массы тела через 7 дней, как наблюдалось ранее при этой дозе. При второй инъекции крысы продолжали терять массу, приводя к суммарной потере массе тела, скорректированной на инертный носитель -7-8% через 14 дней. Напротив и неожиданно обнаружили, что предыдущие исследования с FC-лептином (лептин А200) приводили лишь приблизительно к 4% потере массы тела через 14 дней после введения дозы 5 мг/кг/неделя с инъекциями на день 0 и день 7 в аналогичной модели DIO.
Пример 8: Обнаружение сконструированных полипептидов в плазме [0336] Способ. Крыс Спраг-Доули с алиментарным ожирением (DIO) со средней массой приблизительно 483 граммов делили на пять групп, двум из которых имплантировали осмотические насосы. Одна из двух групп с осмотическими насосами получала непрерывную подкожную инфузию (CSI) только инертного носителя; другая получала CSI SEQ ID N0:33 (т.е., А500) в инертном носителе в дозе 250 мкг/кг/день. Остальные три группы получали следующее лечение: одна группа получала один раз в неделю подкожные
инъекции только инертного носителя в дни 0, 7, 14 и 21 исследования; другая группа получала один раз в неделю подкожные инъекции SEQ ID N0:54 (ABD-A500 сконструированный полипептид) в дозе 1,3 мг/кг в инертном носителе в дни 0, 7, 14 и 21 исследования; оставшаяся группа получала один раз в неделю подкожные инъекции SEQ ID N0:54 в дозе 3,0 мг/кг в инертном носителе в дни 0, 7, 14 и 21 исследования. Образцы крови забирали от каждого животного в день 27, который был днем, когда заканчивали исследование.
[0337] Результаты. Результаты, изображенные на фигуре 6, показывают, что инъекции один раз в неделю SEQ ID N0:54 в дозе 1,3 мг/кг приводили к уровням в плазме, которые были слегка ниже по сравнению с таковыми, достигнутыми с помощью непрерывной инфузии SEQ ID N0:33, и инъекции один раз в неделю SEQ ID N0:54 в дозе 3,0 мг/кг приводили к уровням в плазме, которые были значительно больше, чем таковые, достигнутые путем непрерывной инфузии SEQ ID N0:33 (сравните левую панель с правой панелью; примите во внимание разницу в шкалах Y-оси на каждой панели). Пример 9: Изменение массы тела после однократного введения сконструированных полипептидов
[0338] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 330 граммов в начале исследования. Каждое исследуемое животное (п=5/группа) получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Животных делили на пять групп. Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; SEQ ID NO: 54 в инертном носителе; SEQ ID N0:56 в инертном носителе; SEQ ID NO: 58 в инертном носителе; SEQ ID NO: 59 в инертном носителе. Каждую из SEQ ID NOS; 54, 56, 58 и 59 доставляли в дозе 120 нмоль/кг. Процентное изменение массы тела для каждой группы подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигура 7).
[0339] Результаты. Как изображено на фигуре 7, каждая группа животных, которая получала однократную инъекцию одной из исследуемых SEQ ID NOS, проявляла значительную и непрерывную потерю массы тела в течение 14-дневного исследования относительно группы, которая получала только инертный носитель.
Пример 10: Изменение массы тела после однократного введения сконструированных полипептидов
[0340] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 330 граммов в начале исследования. Животных делили на шесть групп (п=5/группа). Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; SEQ ID N0:54 в инертном носителе; SEQ ID N0:57 в инертном носителе; SEQ ID N0:60 в инертном носителе; SEQ ID N0:61 в инертном носителе; SEQ ID N0:62 в инертном носителе. Каждую из SEQ ID NOS: 54, 57, 60, 61 и 62 доставляли в дозе 120 нмоль/кг. Процентное изменение массы тела для каждой группы подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигура 8).
[0341] Результаты. Как изображено на фигуре 8, каждая группа животных, которая получала однократную инъекцию одной из исследуемых SEQ ID NOS, проявляла значительное и непрерывное снижение массы тела относительно группы, которая получала только инертный носитель.
Пример 11: Изменение массы тела и потребления пищи после однократного введения сконструированных полипептидов
[0342] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 317 граммов в начале исследования. Каждое исследуемое животное (п=7/группа) получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Животных делили на четыре группы. Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; SEQ ID NO: 54 в инертном носителе; SEQ ID N0:63 в инертном носителе; SEQ ID N0:64 в инертном носителе. Каждую из SEQ ID NOS: 54, 63 и 64 доставляли в дозе 120 нмоль/кг. Потребление пищи и процентное изменение массы тела для каждой группы подвергали мониторингу в течение 14 дней, и результаты записывали, как показано (фигуры 9А и 9В, соответственно).
[0343] Результаты. Как изображено на фигурах 9А и 9В, каждая группа животных, которая получала однократную инъекцию одной из исследуемых SEQ ID NOS, проявляла значительное и непрерывное снижение потребления пищи (фигура 9А) и массы тела (фигура 9В) относительно получавшей только инертный носитель.
Пример 12: Изменение массы тела после однократного введения сконструированных полипептидов
[0344] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла 330 г в начале исследования. Животных делили на шесть групп. Каждое исследуемое животное (п=5/группа) получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; SEQ ID NO: 54 в инертном носителе; SEQ ID N0:67 в инертном носителе; SEQ ID NO: 68 в инертном носителе; и SEQ ID N0:69 в инертном носителе. Каждую из SEQ ID NOS: 54, 67, 68 и 69 доставляли в дозе 120 нмоль/кг. Процентное изменение массы тела для каждой группы подвергали мониторингу в течение 10 дней, и результаты записывали, как показано (фигура 10).
[0345] Результаты. Как изображено на фигуре 10, каждая группа животных, которая получала однократную инъекцию одной из исследуемых SEQ ID NOS, проявляла значительное и непрерывное снижение массы тела относительно группы, которая получала только инертный носитель.
Пример 13: Изменение массы тела после однократного введения сконструированных полипептидов
[0346] Способ. Тощих крыс Спраг-Доули содержали на безжировой диете в течение исследования. Средняя масса тела составляла320 граммов в начале исследования. Животных делили на шесть групп. Каждое исследуемое животное (п=5/группа) получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; SEQ ID NO: 54 в инертном носителе; SEQ ID N0:104 в инертном носителе; SEQ ID N0:105 в инертном носителе; SEQ ID N0:106 в инертном носителе; и SEQ ID N0:107 в инертном носителе. Каждую из SEQ ID NOS: 54, 104, 105, 106 и 107 доставляли в дозе 120 нмоль/кг. Изменение массы тела для каждой группы подвергали мониторингу в течение 9 дней, и результаты записывали, как показано (фигуры ПА - ПС).
[0347] Результаты. Как изображено на фигуре 11, каждая группа животных, которая получала однократную инъекцию одной из исследуемых SEQ ID NOS, проявляла значительное и непрерывное снижение потребления пищи (фигура ПА) и массы тела (фигуры 11В и ПС) относительно получавшей только инертный носитель.
Материал и способы
[0349] Все исследования проводили на системе BioRad ProteOn XPR36 с применением сенсорного чипа GLC при 25 градусах С. Для связывания с амином чип GLC активировали в течение 5 минут с применением смеси 1:1 сульфо-NHS/EDC, разведенной в 30 раз из исходного маточного раствора в воде, как показано ниже. Каждый образец альбумина разводили до 25 мкг/мл в 10 мМ ацетате Na рН 5,0 и впрыскивали в течение 5 минут на отдельные поверхности сенсора. Каждую поверхность затем блокировали с помощью 1 М этаноламина с рН 8,5. Каждый альбумин присоединяли с плотностью 2000-5000 в резонансных единицах.
[0350] Связывание сконструированного полипептида исследовали с применением 5 нМ в качестве самой высокой концентрации в серии трехкратного разведения. Подвижный буфер содержал 10 мМ HEPES рН 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA и 0,005% твин-20. Все образцы исследовали с применением серии 3-кратного разведения. Каждую серию концентраций исследовали в двух повторностях. Фазу диссоциации для самой высокой концентрации подвергали мониторингу в течение 3 часов.
Результаты
[0351] Относительные Ко, измеренные для сконструированных полипептидов представлены в таблице 7 ниже. Результаты показывают, что связывающие альбумин полипептиды связываются с сывороточными альбуминами (SA) с высокой аффинностью.
Пример 15: Функциональная активность лептина in vitro в присутствии альбумина.
[0352] В настоящем анализе использовали способ, описанный в примере 2, за исключением того, что альбумин добавляли к буферу для стимуляции для исследования лептиновой функции Соединения 2 в присутствии альбумина. Исследуемые альбумины включали в себя 0,1% или 1% бычий сывороточный альбумин (BSA), 1% крысиный сывороточный альбумин (RSA) или 1% сывороточный альбумин человека (HSA). Контрольный образец представлял собой лептин А100 с 0,1% BSA.
[0353] Результаты. Как показано на фигуре 12, не наблюдалось эффектов 1% альбумина быка/крысы/человека на ЕС50 активность, созданную Соединением 2 в Анализе функции лептина. Результаты являются неожиданными и показывают, что терапевтические соединения являются активными даже будучи связанными с альбумином.
Пример 16: Пролонгированные фармакокинетические профили, доставленные с помощью сконструированных полипептидов после подкожных инъекций крысам
[0354] Настоящее исследование проводили для оценки Соединения 2 и Соединения 15 у крыс путем сравнения их концентрации в крови в зависимости от временных профилей, т.е. фармакокинетических профилей.
[0355] Крыс помещали в группы лечения. Соединение 2 вводили подкожно в дозе 30 нмоль/кг, 60 нмоль/кг или 120 нмоль/кг. Образцы крови забирали перед введением, через 12, 24, 48, 96 и 144 часа после введения из латеральной хвостовой вены. Концентрацию Соединения 2 в плазме измеряли с помощью способа иммуноферментного анализа. [0356] Соединение 15 вводили подкожно в дозе 120 нмоль/кг. Образцы крови забирали перед введением, через 0,5, 1, 2, 4, 6, 24, 48, 72, 96, 120 и 144 часа после введения из латеральной хвостовой вены. Концентрацию Соединения 15 в плазме измеряли с помощью способа иммуноферментного анализа.
[0357] Как Соединение 2 (фигура 13), так и Соединение 15 (фигура 14) проявляли пролонгированные профили зависимости концентрации в плазме от времени.
[0358] Способ. Для настоящего исследования использовали тощих крыс Спраг-Доули и крыс ZDF. Крысы ZDF содержали мутацию (fa), которая приводит к укороченному рецептору лептина, который не взаимодействует эффективно с лептином. Средняя масса тела составляла 225 граммов в начале исследования. Животных делили на две группы (п=5/группа). Каждой группе назначали получение одного из следующего: инертный носитель; Соединение 2 в дозе 2,7 мг/кг в инертном носителе. Каждое исследуемое животное получало однократную подкожную инъекцию во время=0. Изменение массы тела (%, скорректированный на инертный носитель) подвергали мониторингу, и результаты записывали, как показано (фигуры 15А, 15В)). Введенные соединения: инертный носитель (заштрихованный круг); Соединение 2 в дозе 2,7 мг/кг (заштрихованный квадрат). [0359] Результаты. Как изображено на фигурах 15А и 15В, Соединение 2 не является эффективным у крыс ZDF, указывая на то, что его эффекты опосредуются рецепторами лептина.
Пример 18: Сокращение дозы с помощью сконструированных полипептидов [0360] В настоящем исследовании сравнивали дозы А500 (SEQ ID N0:33) и Соединения 2 (SEQ ID N0:54), необходимые для достижения сходного значения потери массы тела у тощих чувствительных к лептину крыс. Результаты показаны на фигуре 16. Соединение 2, дозированное в количестве 120 нмоль/кг/неделя, достигало -18% скорректированной на инертный носитель потери массы тела. Для достижения такого же значения потери массы тела с помощью А500 требовалась BID доза 120 нмоль/кг/день или 1680 нмоль/кг (120 на каждую инъекцию х 2 для BID х 7 дней) в течение недельного курса. Не желая быть связанным с какой-либо теорией, это "сокращение дозы" может быть по меньшей мере частично объясняться улучшенным РК профилем Соединения 2 по сравнению с А-500.
Пример 19: Растворимость сконструированных полипептидов [0361] Как представлено в таблице 8 ниже, описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды характеризуются неожиданно высокой растворимостью при нейтральном рН.
[0362] Растворимость измеряли с помощью следующего анализа: 6-10 мг очищенных белков концентрировали при 4°С с помощью устройств центрифужного фильтра (Amicon
Ultra-15 или Ultra-4, с границей пропускания фильтра 3 кДа MM; Millipore) до объема меньше чем 0,5 мл. Их центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 минут при 4°С для удаления осадков и супернатант переносили в новую пробирку. Белки эквилибровали в течение ночи при комнатной температуре в темноте, затем фильтровали с помощью 0,22 микронных шприцевых фильтров (Milex GV; Millipore) для удаления осадков. Поглощение при ОП280 измеряли с помощью спектрофотометра NanoDrop и концентрацию рассчитывали с применением теоретического молярного коэффициента экстинкции белка. Таблица 8. Растворимость сконструированных полипептидов
Соединение
pi*
Суммарный заряд при рН 7,4*
Растворимость в PBS, рН 7,4
(мг/мл)**
А100
6,2
-2,8
2,1
ABD1-A100 (SEQIDNO.:147)
-0,7
А-500
6,2
-2,8
42,9
ABD1-A500 (Соединение 2)
-0,7
10,8
ABDl-HuSeal (Соединение 15)
10,0
+9,1
> 80
Пример 20: Стабильность сконструированных полипептидов [0363] Как представлено в таблице 9 ниже, описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды являются химически стабильными. Соединения составляли в концентрации 1 мг/мл в буферах при различном рН. Как показано в таблице 9, химерные полипептиды характеризовались хорошей активностью (таблица 9А) и чистотой (Таблица 9В) через две недели при 40°С, что определяли путем обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Таблица 9А. Активность сконструированных полипептидов
Соединение % активности*, определенный с помощью обращенно-фазовой
Соединение
% чистоты, определенный с помощью обращенно-фазовой HPLC, 14 дней при 40°С
рНЗ,0
рН4,0
рН5,0
рН6,0
рН7,0
рН 8,0
рН9,0
PBS, рН
7,4
ABDl-HuSeal
96,7
98,0
98,5
99,8
97,6
93,8
95,1
97,1
ABD1-A500
94,9
96,2
96,8
97,3
96,9
97,5
82,7
97,4
ABD1-A100
70,0
79,4
85,4
86,5
86,8
86,8
70,9
87,8
Пример 21: Стабильность сконструированных полипептидов [0364] Как представлено в таблице 10 ниже, описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды являются химически стабильными. Соединение 15 составляли в трех различных концентрациях в следующем буфере: 10 мМ глутаминовая кислота, 2% глицин, 1% сахароза, 0,01% Твин 20, рН 4,25 и хранили при 5°С, 15°С или 25°С. Как показано в таблице 10, Соединение 15 является химически стабильным в
Концентрация
(мг/мл)
Условие хранения (°С)
% активности, определенной с помощью RP-HPLC в момент времени (неделя)
103,1
103,6
103,1
103,1
102,7
102,0
103,1
103,8
104,0
102,0
103,6
103,7
102,0
103,6
104,1
102,0
103,2
103,8
104,1
104,1
103,3
104,1
103,7
104,0
104,1
102,6
103,4
Концентрация
(мг/мл)
Условие хранения (°С)
% чистоты, определенный с помощью SCX-HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография с применением сильного катионообменника) в момент времени (неделя)
97,6
97,3
97,7
97,6
97,6
97,5
97,6
97,4
96,0
97,9
97,7
97,6
97,9
97,6
97,7
97,9
97,4
96,4
97,7
97,6
97,7
97,7
97,7
97,6
97,7
97,3
97,2
Пример 22: Стабильность сконструированных полипептидов [0365] Как представлено в таблице 11 ниже, описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды являются физически стабильными. Соединение 15 составляли в трех различных концентрациях в следующем буфере: 10 мМ глутаминовая кислота, 2% глицин, 1% сахароза, 0,01% Твин 20, рН 4,25 и хранили при 37°С. Как показано в таблице 11, Соединение 15 является физически стабильным в концентрации 10, 20 и 30 мг/мл в течение по меньшей мере 1 месяца, что определяли путем визуального анализа.
Таблица 11. Стабильность сконструированных полипептидов
РкЗ = олигомер (тример/тетрамер)
Способ SEC:
[0366] Описанные в настоящем документе сконструированные полипептиды являются физически стабильными. В таблице 12 показаны результаты эксклюзионной хроматографии (SEC), проведенной на А100, ABDl-HuSeal и ABD1-A500. Сконструированные полипептиды продемонстрировали от небольшой до отсутствия самоассоциации в димер/олигомер по сравнению с А100.
Колонка - Tosoh TSK Gel G3000 SWxl 7,8 мм x 30 см (#08541)
Подвижная фаза - 10 мМ фосфата натрия, рН 7,4 + 238 мМ NaCl + 2,7 мМ КС1
Время хроматографирования - 22 мин
Скорость потока - 0,8 мл/мин
Температура колонки - 25°С
Температура образца - 5°С
Загрузка образца - 40 мкг
Обнаружение - 214 нм
Пример 24: Синергизм амилина и лептина отсутствует у субъектов с высоким
BMI
[0367] Предыдущие исследования описывали синергизм амилина и лептина у крыс с массой 500-550 граммов. После того, как заметили обратную зависимость эффективности и BMI, мы оценили эффекты комбинации крыс с очень сильным ожирением (750 граммов) и крыс с очень сильным ожирением, которых ограничили в питании до диапазона умеренного ожирения (500-550 г) до начала лечения лекарственным средством. [0368] Согласно настоящему исследованию одной группе крыс с очень сильным ожирением (750 г) разрешали питаться ad-libitum и им вводили амилин, лептин или комбинацию амилин+лептин. Несмотря на то, что амилин был эффективен, не наблюдалось выраженного синергизма с добавлением лептина. Во второй группе крыс с очень сильным ожирением (750 г) производили ограничение калорий до диапазона 500-550 г, в котором ранее был продемонстрирован синергизм. Эти животные затем начинали лечение с помощью амилина / лептина и им разрешали питаться ad-libitum. На фигуре 17 показаны результаты исследования. Быстрое восстановление массы тела было выраженным у крыс, получающих инертный носитель и монотерапию с помощью лептина. Определенное поддержание массы тела достигали с помощью монотерапии амилином. С помощью комбинации не достигали дополнительного поддержания массы тела. Эти данные показывают, что отсутствие синергизма у грызунов с "высоким BMI" невозможно устранить простым способом путем диеты в качестве ведущего фактора.
[0369] В настоящем исследовании изучали, будет ли достаточным введение один раз в неделю PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)] -крысиный амилин (SEQ ID NO: 148), Соединение 124) для синергизма при совместном введении с ABD1-A500 (Соединение 2). Для сравнения ABD1-A500 также совместно вводили с неслитым крысиным амилином (фигура 18А). На фигуре 18В показано, что хотя PEG-крысиный амилин вызывает потерю массы тела несколько медленнее и с меньшей величиной, но общее значение потери массы тела (и синергизма) качественно аналогично таковому, достигнутому с помощью неслитого крысиного амилина. Амилин вводили в дозе 50 мкг/кг/день с помощью SC (подкожного) осмотического мининасоса, PEG-крысиный амилин вводили в дозе 125 нмоль/кг один раз в неделю и ABD1-A500 вводили в дозе 120 нмоль/кг один раз в неделю самцам крыс Гарлан Спраг-Доули (HSD) с алиментарным ожирением (DIO) со средней массой 500 г.
Пример 26: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина
[0370] В настоящем исследовании показано, что введение один раз в неделю ABDl-HuSeal (Соединение 15) является достаточным для синергизма при совместном введении с неслитым крысиным амилином. На фигуре 19 показано, что комбинация сконструированного полипептида и неслитого амилина приводила к более низкому потреблению пищи (фигура 19А) и большей потере массы тела (фигура 19В), чем результаты, наблюдаемые для каждого средства отдельно. ABDl-HuSeal вводили в дозе 120 нмоль/кг и амилин вводили в дозе 50 мкг/кг/день с помощью SC осмотического мининасоса самцам крыс DIO HSD со средней массой 500 г.
Пример 27: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина
[0371] В настоящем исследовании показано, что введение один раз в неделю ABDl-HuSeal (Соединение 15) является достаточным для синергизма при совместном введении с введение дважды в неделю PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-крысиный амилин (SEQ ID NO: 148), Соединение 124). На фигуре 20 показано, что комбинация сконструированного полипептида и PEG-крысиного амилина приводила к
Пример 28: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина в популяции с высоким BMI
[0372] На фигуре 21А показаны результаты предыдущих исследований, описывающие синергизм амилина/лептина у крыс с массой 500-550 граммов. На фигуре 21В показано, что указанный синергизм не наблюдается в популяции крыс с высоким BMI (средняя масса 700 г). На фигуре 21С показано введение один раз в неделю ABD1-A500 (Соединение 15) является достаточным для синергизма при совместном введении с введение дважды в неделю PEG-крысиного амилина (Des-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]-KpbiCHHbm амилин (SEQ ID NO: 148), Соединение 124) у крыс с высоким BMI. ABD1-A500 вводили в дозе 120 нмоль/кг и PEG-амилин вводили в дозе 125 нмоль/кг самцам крыс DIO HSD со средней массой 700 г.
Пример 29: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина в популяции с высоким BMI
[0373] В настоящем исследовании показано, что введение один раз в неделю ABDl-HuSeal (Соединение 15) или ABD1-A500 (Соединение 2) является достаточным для синергизма при совместном введении с неслитым крысиным амилином крысам с высоким BMI. ABDl-HuSeal (фигура 22А) или ABD1-A500 (фигура 22В) вводили в дозе 120 нмоль/кг и амилин вводили в дозе 50 мкг/кг/день с помощью SC осмотического мининасоса самцам крыс DIO HSD со средней массой 700 г.
Пример 30: Противодиабетические эффекты сконструированных полипептидов у мышей с сахарным диабетом 1 типа, не страдающих ожирением
[0374] Целью настоящего исследования было оценить in vivo эффекты сконструированных полипептидов на ключевые диабетические и метаболические критерии оценки эффективности на мышиной модели сахарного диабета 1 типа (T1DM), индуцированного высокой дозой STZ. Самцам мышей С57 BL/6 вводили однократную интраперитонеальную инъекцию STZ в дозе 200 мг/кг, чтобы вызвать сахарный диабет 1 типа. Соединения вводили дважды в неделю подкожно в дозе 120 нмоль/кг в течение двух
недель. Измеренные критерии оценки эффективности включали в себя уровни HbAlc, уровни глюкозы, массу тела и потребление пищи.
[0375] На фигуре 23 показано, что как Соединение 15, так и Соединение 2 нормализовали содержание глюкозы в крови у мышей с индуцированным STZ сахарным диабетом. Оба сконструированных полипептида также снижали уровни гемоглобина А1с, как показано на фигуре 24, и снижали массу тела и суммарное потребление пищи, как показано на фигуре 25.
[0376] Чтобы убедиться в том, что эффекты терапии на снижение содержания глюкозы не являются следствием эффектов инсулина, провели другое исследование, чтобы комбинировать терапию с помощью лептина с низкой дозой инсулина. Соединение 15 вводили с добавлением или без дозы инсулина 0,05 Ед/день на мышиной модели индуцированного высокой дозой STZ T1DM. Самцам мышей С57 BL/6 вводили однократную интраперитонеальную инъекцию STZ в дозе 175 мг/кг, чтобы вызвать сахарный диабет 1 типа. Соединения вводили дважды в неделю подкожно в дозе 60 нмоль/кг в течение двух недель. Измеренные критерии оценки эффективности результаты включали в себя уровни HbAlc, уровни глюкозы, массу тела и потребление пищи. [0377] На фигуре 26 показан эффект снижения содержания глюкозы, усиленный низкой дозой инсулина аддитивным способом для Соединения 15. Также снижены уровни гемоглобина А1с, как показано на фигуре 27, и снижена масса тела и суммарное потребление пищи, как показано на фигуре 28. П. Варианты осуществления
[0378] Ниже представлены дополнительные варианты осуществления сконструированных полипептидов, способ их применения и фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе:
Вариант осуществления 1. Сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего альбумин домена (ABD) и первый пептидный гормональный домен (HD1), выбранный из лептина, лептинового аналога или их активного фрагмента.
Вариант осуществления 2. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 1, дополнительно содержащий первый линкер (L1), ковалентно связанный с указанным HD1.
Вариант осуществления 3. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 1 или 2, в котором указанный сконструированный полипептид содержит указанный ABD в качестве N-концевого фрагмента и указанный HD1 в качестве С-концевого фрагмента.
Вариант осуществления 4. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 1 или 2, в котором указанный сконструированный полипептид содержит указанный ABD в качестве С-концевого фрагмента и указанный HD1 в качестве N-концевого фрагмента.
Вариант осуществления 5. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 3, содержащий структуру: ABD-HD1.
Вариант осуществления 6. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 3, содержащий структуру: ABD-L1-HD1.
Вариант осуществления 7. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 4, содержащий структуру: HD1-ABD.
Вариант осуществления 8. Сконструированный полипептид согласно варианту осуществления 4, содержащий структуру: HD1-L1-ABD.
Вариант осуществления 9. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 8, в котором указанный HD1 представляет собой указанный лептин, лептиновый аналог, активный фрагмент лептина или производное лептина.
Вариант осуществления 10. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 9, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33.
Вариант осуществления 11. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 10, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей
мере 90%-ной идентичностью относительно аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33.
Вариант осуществления 12. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 11, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина человека.
Вариант осуществления 13. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 12, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 90%-ной идентичностью относительно лептина человека.
Вариант осуществления 14. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 13, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно SEQ ID N0:20.
Вариант осуществления 15. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 14, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 90%-ной идентичностью относительно SEQ ID N0:20.
Вариант осуществления 16. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 15, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина утконоса.
Вариант осуществления 17. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 16, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина нерпы.
Вариант осуществления 18. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 17, в котором указанный HD1 содержит 1-5 аминокислотных модификаций, выбранных независимо из одной или сочетания инсерции, делеции, добавления и замены.
Вариант осуществления 19. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32 и SEQ ID N0:33.
Вариант осуществления 20. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 19, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32 и SEQ ID N0:33.
Вариант осуществления 21. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:1.
Вариант осуществления 22. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:2.
Вариант осуществления 23. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:3.
Вариант осуществления 26. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:6.
Вариант осуществления 27. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:7.
Вариант осуществления 28. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:8.
Вариант осуществления 29. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:9.
Вариант осуществления 30. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:10.
Вариант осуществления 31. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:11.
Вариант осуществления 32. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:12.
Вариант осуществления 33. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:13.
Вариант осуществления 36. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:16.
Вариант осуществления 37. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:17.
Вариант осуществления 38. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:18.
Вариант осуществления 39. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:19.
Вариант осуществления 40. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:20.
Вариант осуществления 41. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:21.
Вариант осуществления 42. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:22.
Вариант осуществления 43. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:23.
Вариант осуществления 46. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 26.
Вариант осуществления 47. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:27.
Вариант осуществления 48. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:28.
Вариант осуществления 49. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:29.
Вариант осуществления 50. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:30.
Вариант осуществления 51. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:31.
Вариант осуществления 52. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:32.
Вариант осуществления 53. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:33.
Вариант осуществления 54. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 53, в котором указанный ABD содержит связывающий альбумин мотив (АВМ), состоящий из аминокислотной последовательности
GVSD Х5 YK Х8 Х91 Хп Хи А Хм TVEGV Х20 AL Х23 Х24 Х251 (SEQ ID N0:34)
в которой независимо один от другого
Х5 выбран из Y и F;
Х§ выбран из N, R и S;
Х9 выбран из V, I, L, М, F и Y;
Хп выбран из N, S, Е и D;
Х12 выбран из R, К и N;
Х14 выбран из К и R;
Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S, R и К;
Х2з выбран из К, I и Т;
Х24 выбран из A, S, Т, G, Н, L и D; и
Х25 выбран из Н, Е и D.
Вариант осуществления 55. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 54, в котором, независимо один от другого, Х5 представляет собой Y; Х8 представляет собой N; Х23 представляет собой Т или I; Х24 представляет собой S или L; и Х25 представляет собой Е или Н.
Вариант осуществления 56. Сконструированный полипептид согласно любому из
вариантов осуществления 1 - 55, в котором связывающий альбумин мотив содержит
аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHI (SEQ ID N0:114) и
GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEI (SEQ ID N0:115).
Вариант осуществления 57. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 56, в котором указанный ABD содержит связывающий альбумин мотив (АВМ), который не является GVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEI (SEQ ID N0:35).
Вариант осуществления 58. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 57, в котором указанный ABD содержит АВМ, описанный в таблице 1.
Вариант осуществления 59. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 58, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность:
LAEAK Ха Xb А Хс Xd EL Хе KY -[АВМ]- LAALP (SEQ ID N0:36),
в которой
[АВМ] представляет собой связывающий альбумин мотив, и
независимо один от другого,
Ха выбран из V и Е;
Хъ выбран из L, Е и D;
Хс выбран из N, L и I;
Xd выбран из R и К;
Хе выбран из D и К;
лейцин в положении 45 присутствует или отсутствует; и пролин в положении 46 присутствует или отсутствует.
Вариант осуществления 60. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 59, в котором, независимо один от другого, Ха представляет собой Е; Хъ представляет собой D; Хс представляет собой I; и Xd представляет собой К.
Вариант осуществления 61. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 60, в котором полипептид связывающего альбумин домена (ABD) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
L А Е А К Е D АIК Е L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV Е G V Е A L Т L НIL A A L Р (SEQ ID N0:50); и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP (SEQ ID N0:51).
Вариант осуществления 62. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 61, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность:
LAEAK Ха Xb А Хс Xd EL Хе KY -[АВМ]- LAALP (SEQ ID N0:36),
в которой
независимо один от другого,
Ха выбран из V и Е;
Хъ выбран из L, Е и D;
Хс выбран из N, L и I;
Xd выбран из R и К;
Хе выбран из D и К;
лейцин в положении 45 присутствует или отсутствует;
пролин в положении 46 присутствует или отсутствует; и
в котором АВМ состоит из аминокислотной последовательности:
GVSD Х5 YK Х8 Х91 Хп Хи А Хм TVEGV Х20 AL Х23 Х24 Х251 (SEQ ID N0:34),
в которой, независимо один от другого,
Х5 выбран из Y и F;
Х§ выбран из N, R и S;
Х9 выбран из V, I, L, М, F и Y;
Хп выбран из N, S, Е и D;
Х12 выбран из R, К и N;
Х14 выбран из К и R;
Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S, R и К;
Х2з выбран из К, I и Т;
Х24 выбран из A, S, Т, G, Н, L и D; и
Х25 выбран из Н, Е и D.
Вариант осуществления 63. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 62, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 85%-ной идентичностью относительно аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID N0:39, SEQ ID N0:40, SEQ ID N0:41, SEQ ID N0:42, SEQ ID N0:43, SEQ ID N0:44, SEQ ID N0:45, SEQ ID N0:46, SEQ ID N0:47, SEQ ID N0:48, SEQ ID N0:49, SEQ ID N0:50, SEQ ID N0:51 и SEQ ID N0:52.
Вариант осуществления 64. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 63, в котором указанный ABD содержит любой из пептидов, выбранных из группы, состоящей из
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGinLAALP (SEQ ID N0:38), LAEAK VL A N R E L D К YG VSDFYKRLINKAK TVEG VNALTHHILAALP (SEQ ID N0:39), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDHILAALP (SEQ ID N0:40), LAEAK V L A N R E L D К Y G V S D Y Y К N11N R А К TV E G V RALKLHILAALP (SEQ ID N0:41), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGHILAALP (SEQ ID N0:42), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:43), LAEAK V L A N R E L D К YG VS D F YК N LIN R А КT VEG VD A LIA HIL A A L P (SEQ ID N0:44), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP (SEQ ID N0:45), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSHILAALP (SEQ ID N0:46), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVINKAKTVEGVEALIADILAALP (SEQ ID N0:47), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP (SEQ ID N0:48), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLHILAALP (SEQ ID N0:49), L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V EALTLHILAALP (SEQ ID N0:50), LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALP (SEQ ID N0:51), и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP (SEQ ID N0:52).
Вариант осуществления 65. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 64, в котором указанный линкер L1 представляет собой пептид, состоящий из 1 - 30 аминокислот или менее чем 30 аминокислот.
Вариант осуществления 66. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 65, в котором указанный линкер L1 выбран из 20 природных аминокислот.
Вариант осуществления 67. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 66, в котором указанный линкер L1 представляет собой неприродную аминокислоту, включенную в ходе химического синтеза, посттрансляционной химической модификации или путем in vivo включения при рекомбинантной экспрессии в клетке-хозяине.
Вариант осуществления 68. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 67, в котором аминокислоты указанного линкера L1 выбраны из серина, глицина, аланина, пролина, аспарагина, глутамина, глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и лизина.
Вариант осуществления 69. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 68, в котором указанный линкер L1 содержит большинство стерически незатрудненных аминокислот.
Вариант осуществления 70. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 69, в котором указанный линкер L1 содержит один или несколько из следующего: кислого линкера, основного линкера и структурного мотива.
Вариант осуществления 71. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 70, в котором указанный линкер L1 содержит полиглицин, полиаланины, поли(01у-А1а) или поли(01у-8ег).
Вариант осуществления 72. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 71, в котором указанный линкер L1 содержит полиглицин (Gly)3, (Gly)4 (SEQ ID NO: 116) или (Gly)5 (SEQ ID NO: 117).
Вариант осуществления 73. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 72, в котором указанный линкер L1 содержит (Gly)3Lys(Gly)4 (SEQ ID NO: 118); (Gly)3AsnGlySer(Gly)2 (SEQ ID NO: 119); (Gly)3Cys(Gly)4 (SEQ ID NO: 120); и GlyProAsnGlyGly (SEQ ID NO: 121).
Вариант осуществления 74. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 73, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Ala.
Вариант осуществления 75. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 74, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Ser.
Вариант осуществления 77. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 76, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Lys.
Вариант осуществления 78. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 77, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Ser]n (SEQ ID NO: 122), [Gly- Gly- Ser]" (SEQ ID NO: 123), [Gly-Gly-Gly- Ser]" (SEQ ID NO: 124) и [Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]n (SEQ ID NO: 125); где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.
Вариант осуществления 79. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 78, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 126); [Gly-Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 127); [Gly-Gly-Gly- Glu]" (SEQ ID NO: 128); [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID NO: 129), [Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 130); [Gly-Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 131); [Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 132); [Gly-Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 133), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Вариант осуществления 80. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 79, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 126); [Gly-Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 127); [Gly-Gly-Gly- Glu]" (SEQ ID NO: 128); [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID NO: 129), [Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 130); [Gly-Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 131); [Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 132); [Gly-Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 133), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Вариант осуществления 81. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 80, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Lys] n (SEQ ID NO: 134); [Gly-Gly- Lys] " (SEQ ID NO: 135); [Gly-Gly-Gly- Lys]" (SEQ ID NO: 136); [Gly-Gly-Gly-Gly-Lys]" (SEQ ID NO: 137), [Gly- Arg] " (SEQ ID NO: 138); [Gly-Gly- Arg] " (SEQ ID NO: 139);
[Gly-Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID NO: 140); [Gly-Gly-Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID NO: 141), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Вариант осуществления 82. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 81, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]n (SEQ ID NO: 142), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Вариант осуществления 83. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 81, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Gly-Glu] 6 (SEQ ID NO: 153) [Gly-Gly-Lys] е. (SEQ ID NO: 154) [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]3 (SEQ ID NO: 155),, [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]4 (SEQ ID NO: 156) или [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]5 (SEQ ID NO: 157).
Вариант осуществления 84. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 83, в котором указанный линкер L1 содержит N-концевой дипептид TG.
Вариант осуществления 85. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 84, в котором указанный линкер L1 содержит С-концевой дипептид AS.
Вариант осуществления 86. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 85, в котором указанный линкер L1 содержит N-концевой дипептид TG и С-концевой дипептид AS.
Вариант осуществления 87. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 86, в котором указанный линкер L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из TG-(GGGS)i (SEQ ID NO: 215), TG-(GGGS)2 (SEQ ID NO: 216), TG-(GGGS)3 (SEQ ID NO: 217), TG-(GGGS)4 (SEQ ID NO: 218), TG-(GGGS)5 (SEQ ID NO: 219), (GGGS)i-AS (SEQ ID NO: 220), (GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 221), (GGGS)3-AS (SEQ ID NO: 222), (GGGS)4-AS (SEQ ID NO: 223), (GGGS)5-AS (SEQ ID NO: 224), TG-(GGGS)rAS (SEQ ID NO: 225), TG-(GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 226), TG-(GGGS)3-AS (SEQ ID NO: 227), TG-(GGGS)4-AS (SEQ ID NO: 228) и TG-(GGGS)5-AS (SEQ ID NO: 229).
Вариант осуществления 88. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 87, в котором указанный дипептид TG и/или указанный дипептид AS отсутствуют или заменены парой аминокислот, выбранных из Т, A, S и G.
Вариант осуществления 89. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 88, в котором указанный полипептид дополнительно содержит один или несколько дополнительных линкеров.
Вариант осуществления 90. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 89, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:53, SEQ ID N0:54, SEQ ID N0:55, SEQ ID N0:56, SEQ ID N0:57, SEQ ID N0:58, SEQ ID N0:59, SEQ ID N0:60, SEQ ID N0:61, SEQ ID N0:62, SEQ ID N0:63, SEQ ID N0:64, SEQ ID N0:65, SEQ ID N0:66, SEQ ID N0:67, SEQ ID N0:68, SEQ ID N0:69, SEQ ID N0:70, SEQ ID N0:71, SEQ ID N0:72, SEQ ID N0:73, SEQ ID N0:74, SEQ ID N0:75, SEQ ID N0:76, SEQ ID N0:77, SEQ ID N0:78, SEQ ID N0:79, SEQ ID N0:80, SEQ ID N0:81, SEQ ID N0:82, SEQ ID N0:83, SEQ ID N0:84, SEQ ID N0:85 SEQ ID N0:86, SEQ ID N0:87, SEQ ID N0:88, SEQ ID N0:89, SEQ ID N0:90, SEQ ID N0:91, SEQ ID N0:92, SEQ ID N0:93, SEQ ID N0:94, SEQ ID N0:95, SEQ ID N0:96, SEQ ID N0:97, SEQ ID N0:98, SEQ ID N0:99, SEQ ID N0:100, SEQ ID N0:101, SEQ ID N0:102, SEQ ID N0:103, SEQ ID N0:104, SEQ ID N0:105, SEQ ID N0:106 и SEQ ID N0:107.
Вариант осуществления 91. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:53.
Вариант осуществления 92. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:54.
Вариант осуществления 93. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:55.
Вариант осуществления 94. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:56.
Вариант осуществления 95. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:57.
Вариант осуществления 96. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:58.
Вариант осуществления 97. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:59.
Вариант осуществления 98. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:60.
Вариант осуществления 99. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:61.
Вариант осуществления 100. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:62.
Вариант осуществления 101. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:63.
Вариант осуществления 102. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:64.
Вариант осуществления 103. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:65.
Вариант осуществления 104. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:66.
Вариант осуществления 105. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:67.
Вариант осуществления 106. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:68.
Вариант осуществления 107. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:69.
Вариант осуществления 108. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:70.
Вариант осуществления 109. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:71.
Вариант осуществления 110. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:72.
Вариант осуществления 111. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:73.
Вариант осуществления 112. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:74.
Вариант осуществления 113. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:75.
Вариант осуществления 114. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:76.
Вариант осуществления 115. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:77.
Вариант осуществления 116. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:78.
Вариант осуществления 117. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:79.
Вариант осуществления 118. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:80.
Вариант осуществления 119. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:81.
Вариант осуществления 120. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:82.
Вариант осуществления 121. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:83.
Вариант осуществления 122. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:84.
Вариант осуществления 123. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:85.
Вариант осуществления 124. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:86.
Вариант осуществления 125. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:87.
Вариант осуществления 126. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:88.
Вариант осуществления 127. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:89.
Вариант осуществления 128. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:90.
Вариант осуществления 129. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:91.
Вариант осуществления 130. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:92.
Вариант осуществления 131. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:93.
Вариант осуществления 132. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:94.
Вариант осуществления 133. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:95.
Вариант осуществления 134. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:96.
Вариант осуществления 135. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:97.
Вариант осуществления 136. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:98.
Вариант осуществления 137. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:99.
Вариант осуществления 138. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:100.
Вариант осуществления 139. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:102.
Вариант осуществления 140. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:102.
Вариант осуществления 141. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:103.
Вариант осуществления 142. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:104.
Вариант осуществления 143. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:105.
Вариант осуществления 144. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:106.
Вариант осуществления 145. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:107.
Вариант осуществления 146. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 145, характеризующийся аффинностью к сывороточному альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10"6 моль/л.
Вариант осуществления 147. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 146, характеризующийся аффинностью к сывороточному альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10"9 моль/л.
Вариант осуществления 148. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 147, характеризующийся аффинностью к сывороточному
альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10" моль/л.
Вариант осуществления 149. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 148, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 1 день.
Вариант осуществления 150. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 149, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 3 дня.
Вариант осуществления 151. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 150, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 5 дней.
Вариант осуществления 152. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 151, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия в организме человека, составляющей по меньшей мере 5 дней.
Вариант осуществления 153. Способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту сконструированного полипептида согласно любому из вариантов осуществления 1 - 152 b 170 - 192 в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения.
Вариант осуществления 154. Способ согласно варианту осуществления 153, причем указанное заболевание или нарушение могут представлять собой липодистрофию,
дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени, сахарный диабет (включая тип I и тип II), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона.
Вариант осуществления 155. Способ согласно варианту осуществления 153 или варианту осуществления 154, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени или сахарный диабет.
Вариант осуществления 156. Способ согласно любому из вариантов осуществления 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой сахарный диабет типа I или сахарный диабет типа П.
Вариант осуществления 157. Способ согласно любому из вариантов осуществления 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой ожирение.
Вариант осуществления 158. Способ согласно любому из вариантов осуществления 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию или лептиновую недостаточность.
Вариант осуществления 159. Фармацевтическая композиция, содержащая сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 152 и фармацевтически приемлемый наполнитель.
Вариант осуществления 160. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 159, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой инъецируемую фармацевтическую композицию.
Вариант осуществления 161. Фармацевтическая композиция согласно любому из вариантов осуществления 159 - 160, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию замедленного высвобождения или длительного действия.
Вариант осуществления 162. Фармацевтическая композиция согласно любому из вариантов осуществления 159 - 161, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой вводимую один раз в день фармацевтическую композицию.
Вариант осуществления 163. Фармацевтическая композиция согласно любому из вариантов осуществления 159 - 161, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой вводимую один раз в неделю фармацевтическую композицию.
Вариант осуществления 164. Фармацевтическая композиция согласно любому из вариантов осуществления 159 - 163 для лечения заболевания или нарушения у субъекта.
Вариант осуществления 165. Фармацевтическая композиция согласно любому из вариантов осуществления 159 - 164, причем указанное заболевание или нарушение могут представлять собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени, сахарный диабет (включая тип I и тип II), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD) и метаболический синдром X.
Вариант осуществления 166. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 164 или варианту осуществления 165, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени или сахарный диабет.
Вариант осуществления 167. Способ согласно любому из вариантов осуществления 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой сахарный диабет типа I или сахарный диабет типа П.
Вариант осуществления 168. Способ согласно любому из вариантов осуществления 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой ожирение.
Вариант осуществления 169. Способ согласно любому из вариантов осуществления 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию или лептиновую недостаточность.
Вариант осуществления 170. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18, в котором указанный HD1 выбран из группы, состоящей из
(а) аминокислотной последовательности 1-146 лептина, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID
N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой аминокислота заменена на отличную в одном или нескольких из следующих положений при сохранении прежней нумерации (даже в отсутствие глутаминильного остатка в положении 28): 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145;
(b) аминокислотной последовательности согласно подразделу (а), в которой глутаминильный остаток в положении 28 отсутствует;
(c) аминокислотной последовательности согласно подразделам (а) или (Ь), в которой метонильный остаток добавлен на N-конце;
(d) лептина, состоящего из фрагмента аминокислотной последовательности (а), (Ь)
или (с), выбранного из группы, состоящей из
(i) аминокислот 98-146;
(ii) аминокислот 1-32;
(iii) аминокислот 40-116;
(iv) аминокислот 1-99 и 112-146;
(v) аминокислот 1-99 и 112-146, в которых одна или несколько из аминокислот 100111 расположены между аминокислотами 99 и 112;
(vi) аминокислотной последовательности согласно подразделу (i), в которой одна или несколько из аминокислот 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145 заменены другой аминокислотой;
(vii) аминокислотной последовательности согласно подразделу (ii), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 8 и 32 заменены другой аминокислотой;
(viii) аминокислотной последовательности согласно подразделу (iii), в которой одна или несколько из аминокислот 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 и 112 заменены другой аминокислотой;
(ix) аминокислотной последовательности согласно подразделу (iv), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142, и 145 заменены другой аминокислотой; и
(vi)
(x) аминокислотной последовательности согласно подразделу (v), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142, и 145 заменены другой аминокислотой;
(xi) аминокислотной последовательности согласно любому из подразделов (i)-(x), в которой метионин добавлен на N-конце;
(e) аминокислотной последовательности согласно любому из подразделов (а) - (d),
причем указанная аминокислотная последовательность присоединена к химическому
фрагменту;
(f) аминокислотной последовательности согласно подразделу (е), в которой указанный химический фрагмент представляет собой фрагмент растворимого в воде полимера;
(g) аминокислотной последовательности согласно подразделу (f), в которой
указанный фрагмент растворимого в воде полимера выбран из группы, состоящей из
полиэтиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля,
карбоксиметилцеллюлозы, декстрана, поливинилового спирта, поливинилпиролидона,
поли-1,3-диоксолана, поли-1,3,6-триокеана, сополимера этилена и малеинового ангидрида,
гомополимера полиаминокислоты, случайного сополимера полиаминокислоты, альбумина,
Fc-белка, поли(п-винилпирролидон)полиэтиленгликоля, гомополимера пропиленгликоля,
сополимера полипропиленоксида и этиленоксида, полиоксиэтилированного полиола,
поливинилового спирта, полиэтиленгликольпропионового альдегида, сукцината и стирола;
(h) аминокислотной последовательности согласно подразделу (g), в которой указанный фрагмент растворимого в воде полимера представляет собой полиэтиленгликоль; и
(i) аминокислотной последовательности согласно подразделу (g), в которой
указанный растворимый в воде полимер представляет собой полиаминокислоту, альбумин,
антитело, Fc-белок и полилизиновый фрагмент.
Вариант осуществления 171. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 170, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ
ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны одна или несколько аминокислотных замен.
Вариант осуществления 172. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой была сделана одна аминокислотная замена.
Вариант осуществления 173. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны две аминокислотные замены.
Вариант осуществления 174. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19,
SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны три аминокислотные замены.
Вариант осуществления 175. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны четыре аминокислотные замены.
Вариант осуществления 176. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны пять аминокислотных замен.
Вариант осуществления 177. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID
N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны шесть аминокислотных замен.
Вариант осуществления 178. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны семь аминокислотных замен.
Вариант осуществления 179. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны восемь аминокислотных замен.
Вариант осуществления 180. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ
ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны девять аминокислотных замен.
Вариант осуществления 181. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны десять аминокислотных замен.
Вариант осуществления 182. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 11 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 183. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ
ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 12 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 184. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 13 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 185. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 14 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 186. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ
ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 15 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 187. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 16 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 188. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 17 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 189. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ
ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 18 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 190. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 19 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 191. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 20 аминокислотных замен.
Вариант осуществления 192. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ
ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой была сделана 21 аминокислотная замена.
Вариант осуществления 193. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:143.
Вариант осуществления 194. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:144.
Вариант осуществления 195. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:145.
Вариант осуществления 196. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:146.
[0379] В то время как вышеизложенное описание раскрывает настоящее изобретение с помощью примеров, представленных с целью иллюстрации, будет понятно, что практическое осуществление настоящего изобретения предусматривает все из обычных вариантов, адаптаций или модификаций, подпадающих под объем заявленного изобретения. Следовательно, описания и примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения, который определяется приложенной формулой изобретения.
IX. Перечень последовательностей без соблюдения формальных требований
[0380] Перечень раскрытых в настоящем документе последовательностей без соблюдения
формальных требований таков:
WIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLE ASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC , где Хаа в положении 28 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID NO: 1);
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLA VYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLH\a.AFSKSCF^PQASGLETLESLGGVLEASGYS TEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC , где Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:2);
WIWRVQDDmTLIKTIVTmSDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIYQ QILTSLPSPvNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEVV ALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ ID N0:3);
MWIWRVQDDmTLIKTlVTOSDISI^QSVSSKQRVTGLDFIPGLOTVLSLSKMDQTLAIY QQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEV VALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ ID N0:4);
WICKVQDDTKTLIKTlVTmNDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAI YQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC , где Хаа в положении 28 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:5);
MVPICKVQDDTKTLIKTI VTRINDISHT-Xaa- SVS SKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLA IYQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYST EWALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC , где Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:6);
MHWGTLCGFLWLWPYLFYVQAVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGL DFIPGLOTILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIAa.AFSKSCHLPW AS GLETLD SLGGVLEAS GY STEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 7); WIQKVQDDmTLIKTIVTmNDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTL AVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASG YSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC , где Хаа в положении 27 представляет собой Т или А ; а Хаа в положении 28 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:8); MWIQKVQDDTKTLIKTTVTIUNDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQT LAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASG YSTEVV ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC , где Хаа в положении 28 представляет собой Т или А, а Хаа в положении 29 представляет собой Q или отсутствует (SEQ ID N0:9);
WIQKVQSDmTLIKTIVTmNDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIYQ QILINLPSRNVIQISNDLENLPJ)LLHLLAFSKSCF^PLASGLETLESLGDVLEASLYSTEVVA LSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:10);
MVPIQKVQSDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIY QQILINLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESLGDVLEASLYSTEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 11);
VPIHKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQ QILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:12);
MWIffiVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVY QQILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:13);
ISIEKIQADmTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMDQTLAVYQ QILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEW TLDRLRKSLKNIEKQLDHIQG (SEQ ID NO: 14);
MRCILLYGFLCVWQHLYYSHPISIEKIQADTKTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFI PGNQQFQNLADMDQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSD GLDTMEIWGGIVEESLYSTEVVTbDRLRKSLKNIEKQLDHIQG (SEQ ID NO: 15); VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 16);
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 17);
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQI LTSMP SRNVTQISNDLENLRDLLFiVLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 18);
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQ ILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLHVLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLE AS GYS ТЕVV ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:19);
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:20);
MWIQKVQDDTKTLIKT1VTMNDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:21);
MWIQKVQDDTKTLIKT1VTRINDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:22);
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQ QILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:23);
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQ GVCSRPRVAGLDFIPRVQ S VRTLS GMDQIL ATYQ QI LTSLQSRSWQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVV ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:24);
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQI LTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVA LSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:25);
PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTXSGMDQILATYQQI LTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVA LSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:26);
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQ QILTSLQSRSWQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEV VALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:27);
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQ QILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CPVPRARGSDTIKGLGNVLRAS VHS TEV VALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:28);
MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQ ILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEW ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:29);
MDKTHTCPPCPAPELLOKJPSW
DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELmNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKVPIQKVQDDT KTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNV IQISNDLENLRDLLHVLAF SKS CHLPWAS GLETLD SLGGVLEAS GYS TEV VALSRLQGSLQ DMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:30);
MWIQKVQDDTKTblKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:31);
MWIQKVQDDTKTblKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQICNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 32); к которой через цистеиновый остаток в положении 78 присоединен фрагмент ПЭГ массой 20 килодальтон (кДа); MWIQKVQDDTKTLIKTTVTMNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:33);
GVSD X5 YKXg X9IX11 X12 A XM TVEGV X20 AL X23 X24 X25 1 (SEQ ID N0:34), где X5, X8, X9, Хп, X12, X14, X2o, X23, X24 и X25 описаны в настоящем документе; GVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEI (SEQ ID N0:35);
LAEAK Xa Xb A Xc Xd EL Xe KY -[ABM]- LAALP (SEQ ID N0:36), где ABM, Xa, Xb, Xc, Xd и Xe описаны в настоящем документе;
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEILAALP (SEQ ID N0:37); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGHILAALP (SEQ ID N0:38); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVNALTHHILAALP (SEQ ID N0:39); LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDHILAALP (SEQ ID N0:40); LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKMINRAKTVEGVRALKLHILAALP (SEQ ID N0:41); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGHILAALP (SEQ ID N0:42); LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:43); LAEAK V L A N R E L D К Y G V S D F Y К N LIN R А К T V E G V D A LIA HIL A A L P (SEQ ID N0:44); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP (SEQ ID N0:45);
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSHILAALP (SEQ ID N0:46); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVINKAKTVEGVEALIADILAALP (SEQ ID N0:47); LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP (SEQ ID N0:48); LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALP (SEQ ID N0:49); L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V EALTLHILAALP (SEQ ID N0:50); LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALP (SEQ ID N0:51); LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP (SEQ ID N0:52); MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGASVPIQK VQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTS MPSRNVIQISNDLENLRDLLH\O.AFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALS^ LQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:53);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLH\a.AFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:54);
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINK A KT VEGVE A LKLHIL A A LP (SEQ ID N0:55);
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKVLANRELDK YGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLHILAALP (SEQ ID N0:56);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASISIEKIQADmTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMD QTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEE SLYSTEVVTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQGC (SEQ ID N0:57);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEWALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:58);
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKVLANRELDK YGVSDFYKRLINKAKT VEGVEALKLHILAALP (SEQ ID N0:59);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASPIQRVQDDmTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMD QIL AT YQQILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CPVPRARGSDTIKGLGNVLRAS VHSTEVYALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:60);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASPIQRVQDDmTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQ ILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASV HSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:61);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGPIQRVQDDm TLIKTIITRINDISPPQGVCSPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQI SNDLENLRDLLIIAa.AFSKSCPWRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQD MLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:62);
ML AE AKVL ANRELDKYGVSD YYKNIINRAKTVEGVRALKLFIILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEWALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:63);
ML AE AKVL ANRELDKYGVSD YYKNIINRAKTVEGVRALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETbESLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:64);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETbDSLGGVLE ASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:65);
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGLAEAAAKEAA AKEAAAKEAAAKEAAAKAAAASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTG
LEFIPGLOTILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCffl.PQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:66); MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFIILAALPTGGEGGEGGEGG EGGEGGEASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLH\O.AFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLE ASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:67);
MLAEAKWANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGKGGKGGKG GKGGKGGKASVPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLS KMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHWAFSKSCHLPQASGLETLESLGG VLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:68);
MLAEAKWANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEAS GYSTEWALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:69);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLFnLAALPTGGGGASVPIQK VQDDTKTblKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTS MPSRNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSR LQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:70);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:71);
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINK AKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:72);
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKEDAIKELDKY G V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A LT L HIL A A L P (SEQ ID N0:73);
ML AEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKWEGVEALTLHILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASISIEKIQADmTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMD QTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEE SLYSTEVVTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQGC (SEQ ID N0:74);
ML AEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:75);
MWIQKVQDDTKTblKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKEDAIKELDK YGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:76);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMD QIL AT YQQILTSLQ SRNVTQISNDLENLRDLLHVL AF SKS CPVPRARGSDTIKGLGNVLRAS VHSTEVYALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:77);
ML AEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASPIQRVQDDmTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQ ILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASV HSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:78);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLFnLAALPTGPIQRVQDDmT LIKTIITRINDISPPQGVCSPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQIS NDLENLRDLLIWLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDM LRQLDRNPGC (SEQ ID N0:79);
ML AE AKED AIKELDKYGVSD YYKNLINKAKTVEGVE ALTLHILA ALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTTVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:80);
ML AEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD
QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISND^
SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:81);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVXAFSKSCffl^PQASGLETXDSLGGVLE ASGYSTEW ALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:82);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLFnLAALPTGLAEAAAKEAA AKEAAAKEAAAKEAAAKAAAASVPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTG LEFIPGLOTILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIWLAFSKSCHLPQ ASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:83); MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLFnLAALPTGGEGGEGGEGG EGGEGGEASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLE ASGYSTEW ALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:84);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLrNKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGKGGKGGKG GKGGKGGKASVPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLS KMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGG VLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:85);
ML AEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGS GGGS GG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEAS GYSTEWALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:86);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGASVPIQKVQ DDTKTblKTIVTmNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPS RNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQG SLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:87);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASWIQKVQDDTKTLIKTIVTmNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TbAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIWAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEAS GYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:88);
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSASLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINK AKTVEGVEALiselLAALP (SEQ ID N0:89);
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKEDAIKELDKY GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALP (SEQ ID N0:90);
M L A E А К E D AIК E L D К YG V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A LIS EIL A A L PTGGGGS GGGS GG GSGGGSASISIEKIQADmTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMD QTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEE SLYSTEVVTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQGC (SEQ ID N0:91);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:92);
MWIQKVQDDTKTblKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGCTGGGGSGGGSGGGSGGGSASLAEAKEDAIKELDK YGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALP (SEQ ID N0:93);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQI LATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASV HSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:94);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASPIQRVQDDmTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQI LATYQQILTSLQSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASV HS TEV V ALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID N0:95);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGPIQRVQDDTKTL IKTIITRINDISPPQGVCSPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISN
DLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDML RQLDRNPGC (SEQ ID N0:96);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEA SGYSTEVYALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:97);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASWIQKVQDDTKTLIKTIVTmNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TXAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETXESLGGVLEAS GYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:98);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLirVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:99);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGLAEAAAKEAAA KEAAAKEAAAKEAAAKAAAASVPIQKVQDDmTLIKTlVTRINDISHTQSVSSKQKVTGL EFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQA SGLETLESLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:100); MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGEGGEGGEGGE GGEGGEAS VPIQKVQDDTKTLIKTI VTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQDMLQ QLDLSPGC (SEQ ID N0:101);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGKGGKGGKGGK GGKGGKASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQDMLQ QLDLSPGC (SEQ ID N0:102);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALiselLAALPTGGGGSGGGSGGG SGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASG YSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID N0:103);
ML AE AKVL ANRELDKYGVSD YYKNLINKAKWEGVEALTXfflLAALPTGGGGS GGGS G GGS GGGS AS VPIQKVQDD TKTXIKTIVTRINDISHTQ S VS SKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVbAFSKSCffl^PQASGLETXESLGGVLE AS GYS TEV VALSRLQGSLQDMLQ QLDLSPGC (SEQ ID N0:104);
ML AEAKED AIKELDK YGVSD YYKRLISKAKT VEGVKALISEILAALPTGGGGS GGGS GGG SGGGSASWIQKVQDDTKTLIKTIVTMNDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTbSKMDQ TbAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETbESLGGVLEAS GYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:105);
MLAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLrNKAKTVEGVEALTLHILAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD QTLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETbESLGGVLEA SGYSTEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:106);
M L A E А К E D AIК E L D К YG V S D Y Y К N LIN К А К TV E G V E A LIS EIL A A L PTGGGGS GGGS GG
GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMD
QTLAVYQQILTSMPSRNVTQISNDLENLRDLLFlVbAFSKSCFiLPQASGLETbESLGGVLEA
SGYSTEW ALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID N0:107);
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY (SEQ ID N0:108);
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY (SEQ ID N0:109);
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY (SEQ ID NO: 110).
CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP (SEQ ID NO: 111);
CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID N0:112);
KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID N0:113).
GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHI (SEQ ID NO: 114);
GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEI (SEQ ID NO: 115);
GGGG(SEQIDN0:116);
GGGGG (SEQ ID NO: 117);
GGGKGGGG (SEQ ID NO: 118);
GGGNGSGG (SEQ ID N0:119);
GGGCGGGG (SEQ ID NO: 120);
GPNGG (SEQ ID NO: 121);
[GS]" (SEQ ID N0:122), где n равно 1-10;
[GGS]" (SEQ ID NO: 123),где n равно 1-10; [GGGS]" (SEQ ID N0:124), где n равно 1-10; [GGGGS]n (SEQ ID N0:125), где n равно 1-10; [GE]n (SEQ ID N0:126), где n равно 1-10; [GGE]" (SEQ ID N0:127), где n равно 1-10; [GGGE]n (SEQ ID N0:128), где n равно 1-10; [GGGGEJn (SEQ ID N0:129), где n равно 1-10; [GD]n (SEQ ID N0:130), где n равно 1-10; [GGD]" (SEQ ID N0:131), где n равно 1-10; [GGGD]n (SEQ ID N0:132), где n равно 1-10; [GGGGDJn (SEQ ID N0:133), где n равно 1-10; [GK]n (SEQ ID N0:134), где n равно 1-10; [GGK]" (SEQ ID N0:135), где n равно 1-10; [GGGK]n (SEQ ID N0:136), где n равно 1-10; [GGGGKJn (SEQ ID N0:137), где n равно 1-10; [GR]" (SEQ ID N0:138), где n равно 1-10; [GGR]n (SEQ ID N0:139), где n равно 1-10; [GGGR]" (SEQ ID N0:140), где n равно 1-10; [GGGGRJn (SEQ ID N0:141), где n равно 1-10; [GAAAK]n (SEQ ID N0:142), где n равно 1-10;
VPIQKVQDDmTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQ QVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:143);
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQ VLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEW ALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 144);
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVY QQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:145); и
MWIQKVQDDTKTLIKTIVTONDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLOTILSLSKMDQTLAVYQ QVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID N0:146).
MLAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALPTGGGGSGGGSGG GSGGGSASVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKM DQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLIIYLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEW ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:147).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTONDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLOTILTbSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 664).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 665).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 666).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 667).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 668).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 669).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 670).
MWIQKVQDDTKTLIKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLIfflLTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 671).
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCF^PQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 672).
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 673).
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVLAFSKSCSLPQTSGLETXDSLGGVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 674).
MWIQKVQDDTKTLIKTlVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLOTILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLFlVLAFSKSCSLPQTSGLETXDSLGEVLEASGYSTEV VALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 675).
MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQ SVS SKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID NO: 676).
MWIQKVQDDTKTblKTTVTraNDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVY QQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTE WALSRLQGSLQDMLQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 677). X'-Xaa1-Cys2-Asn3-Thr4-Ala5-Thr6-Cys7-Ala8-Thr9-Gln10-Arg11-Leu12-Al^^ Val17-His18-Ser19-Ser20- Xaa21-Asn22-Phe23- Хаа24- Хаа25- Хаа26- Хаа27- Xaa28- Xaa29-Thr30-Xaa31-Val32-Gly33-Ser34-Asn35-Thr36-Tyr37-X (SEQ ID N0:800) CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:801) KCNTATCATQRLANFLVRSSKNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:802) CNTATCATQRLANFLVRSSKNLGPVLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:803) KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPKLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:804) CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPKLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:805) KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTKVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:806) CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPmVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:807) KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:808) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:809) CNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:810)
CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPKLPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:811) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTKVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:812) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFKPILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:813) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:814) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPIKPPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:815) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILKPTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:816) CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY-NH2 (SEQ ID N0:817)
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> АМИЛИН ФАРМАСЬЮТИКАЛС ИНК
<12 0> СКОНСТРУИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕСЯ УВЕЛИЧЕННОЙ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬЮ ДЕЙСТВИЯ
<130> 1317WO2
<140> PCT/US2011/053786 <141> 2011-09-28
<150> 61/387,402 <151> 2010-09-28
<150> 61/422,091 <151> 2010-12-10
<160> 817
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1 <211> 146 <212> PRT
<213> Mus sp.
<220>
<221> MOD_RES <222> (28)..(28)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 1
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 2 <211> 147
<212> PRT <213> Mus sp.
<220>
<221> MOD_RES <222> (29)..(29)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 2
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 3 <211> 146 <212> PRT
<213> Sus sp.
<400> 3
Val Pro Ile Trp Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Ser Asp Ile Ser His Met Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Leu Pro Gln Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
Leu Gln Gly Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 4 <211> 147
<212> PRT
<213> Sus sp.
<400> 4
Met Val Pro Ile Trp Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Ser Asp Ile Ser His Met Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Val Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Pro Leu Pro Gln Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 5 <211> 146 <212> PRT
<213> Bos sp.
<220>
<221> MOD_RES <222> (28)..(28)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 5
Val Pro Ile Cys Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Leu
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Val Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Leu Pro Gln Val Arg Ala Leu Glu Ser Leu Glu Ser Leu Gly Val
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
<210> 6 <211> 147
<212> PRT
<213> Bos sp.
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 6
Met Val Pro Ile Cys Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Leu Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Val Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Pro Leu Pro Gln Val Arg Ala Leu Glu Ser Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Val Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
<210> 7 <211> 167 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met His Trp Gly Thr Leu Cys Gly Phe Leu Trp Leu Trp Pro Tyr Leu
1 5 10 15
Phe Tyr Val Gln Ala Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys
20 25 30
Thr Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr
35 40 45
Gln Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro
50 55 60
Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala
65 70 75 80
Val Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln
85 90 95
Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala
100 105 110
Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu
115 120 125
Asp Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val
130 135 140
Val Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln
145 150 155 160
Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys
165
<210> 8 <211> 146 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MOD_RES <222> (27)..(27)
<223> Thr or Ala <220>
<221> MOD_RES <222> (28)..(28)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 8
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
<210> 9 <211> 147
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28) <223> Thr or Ala
<220>
<221> MOD_RES <222> (29)..(29)
<223> Может присутствовать или нет
<400> 9
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys
<400> 10
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Ser Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Gln Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Ile Asn Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Asp
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
130
135
140
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
ion IOC 1 л n
Gly Cys
145
<211> 147
<212> PRT
<213> Macaca mulatta
<400> 11
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Ser Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Val Leu Thr Leu Ser Gln Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Ile Asn Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Asp Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 12 <211> 146 <212> PRT
<213> Rattus sp.
<400> 12
Val Pro Ile His Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ala
Arg Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala His Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Ser Leu Pro Gln Thr Arg Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Glu Cys 145
<210> 13
<211> 147 <212> PRT
<213> Rattus sp.
<400> 13
Met Val Pro Ile His Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ala Arg Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala His Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Thr Arg Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 14
<211> 145 <212> PRT
<213> Ornithorhynchus anatinus
<400> 14
Ile Ser Ile Glu Lys Ile Gln Ala Asp Thr Lys Thr Leu Thr Lys Thr
1 5 10 15
Ile Ile Thr Arg Ile Ile Gln Leu Ser Thr Gln Asn Gly Val Ser Thr
20 25 30
Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Asn Gln Gln Phe
35 40 45
Gln Asn Leu Ala Asp Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Ser Ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala Thr Leu Lys Asn Cys
85 90 95
Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met Glu Ile Trp Gly Gly
100 105 110
Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Thr Leu Asp Arg
115 120 125
Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gln Leu Asp His Ile Gln
130 135 140
Gly 145
<210> 15 <211> 166
<212> PRT
<213> Ornithorhynchus anatinus
<400> 15
Met Arg Cys Ile Leu Leu Tyr Gly Phe Leu Cys Val Trp Gln His Leu
1 5 10 15
Tyr Tyr Ser His Pro Ile Ser Ile Glu Lys Ile Gln Ala Asp Thr Lys
20 25 30
Thr Leu Thr Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Ile Gln Leu Ser Thr Gln
35 40 45
Asn Gly Val Ser Thr Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro
50 55 60
Gly Asn Gln Gln Phe Gln Asn Leu Ala Asp Met Asp Gln Thr Leu Ala
65 70 75 80
Val Tyr Gln Gln Ile Leu Ser Ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gln
85 90 95
Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala
100 105 110
Thr Leu Lys Asn Cys Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met
115 120 125
Glu Ile Trp Gly Gly Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val
130 135 140
Val Thr Leu Asp Arg Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gln
145 150 155 160
Leu Asp His Ile Gln Gly
165
<210> 16 <211> 146 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 17 <211> 146
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Ala Gln Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 18 <211> 145 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu
35 40 45
Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile Leu
50 55 60
Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His
85 90 95
Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Val
100 105 110
Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro Gly
130 135 140
Cys
145
<210> 19 <211> 145 <212> PRT
<400> 19
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
-i rz -in -1С
10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Ala Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu
35 40 45
Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile Leu
50 55 60
Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His
85 90 95
Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Val
100 105 110
Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro Gly
130 135 140
Cys
145
<210> 20 <211> 147 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 21
<211> 147 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Ala Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 22
<211> 146 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 23 <211> 146
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Ala Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 24
неизвестная
<211> 145 <212> PRT
<213>
<220>
<223> Описание неизвестного: полипептид лептина тюленя
<400> 24
Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile
1 5 10 15
Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser Arg
20 25 30
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
35 40 45
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
50 55 60
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Ser Val Val Gln Ile Ala Asn Asp Leu Ala
65 70 75 80
Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro
85 90 95
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
100 105 110
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
130 135 140
Cys 145
<210> 25
<211> 145 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 25
Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile
1 5 10 15
Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser Arg
20 25 30
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
35 40 45
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
50 55 60
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro
85 90 95
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
100 105 110
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
130 135 140
<210> 26 <211> 145 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 26
Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile
1 5 10 15
Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Ser Ser Arg
20 25 30
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
35 40 45
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
50 55 60
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro
85 90 95
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
100 105 110
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
130 135 140
<210> 27
<211> 146
<212> PRT
<213>
<220>
<223> Описание неизвестного: полипептид лептина тюленя
<400> 27
Met Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser
20 25 30
Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val
35 40 45
Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Ser Val Val Gln Ile Ala Asn Asp Leu
65 70 75 80
Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn
100 105 110
Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<211> 146 <212> PRT
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 28
Met Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser
20 25 30
Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val
35 40 45
Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn
100 105 110
Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 29 <211> 146 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 29
Met Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Ser Ser
20 25 30
Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val
35 40 45
Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn
100 105 110
Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro
130 135 140
Gly Cys 145
<210> 30 <211> 374 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 30
Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
225 230 235 240
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
245 250 255
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly
260 265 270
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
275 280 285
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
290 295 300
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
305 310 315 320
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp
325 330 335
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
340 345 350
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu
355 360 365
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
370
<210> 31
<211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 31
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 32 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (78)..(78)
<223> Cys-PEG20K <400> 32
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Cys Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 33
<211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 33
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<210> 34 <211> 26 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (5)..(5)
<223> Tyr or Phe <220>
<221> MOD_RES <222> (8)..(8)
<223> Asn, Arg or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Val, Ile, Leu, Met, Phe or Tyr
<220>
<221> MOD_RES <222> (11)..(11)
<223> Asn, Ser, Glu or Asp
<220>
<221> MOD_RES <222> (12)..(12)
<223> Arg, Lys or Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14) <223> Lys or Arg
<220>
<221> MOD_RES <222> (20)..(20)
<223> Asp, Asn, Gln, Glu, His, Ser, Arg or Lys
<220>
<221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Lys, Ile or Thr
<220>
<221> MOD_RES <222> (24)..(24)
<223> Ala, Ser, Thr, Gly, His, Leu or Asp <220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> His, Glu or Asp
<400> 34
Gly Val Ser Asp Xaa Tyr Lys Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Ala Xaa Thr Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Xaa Ala Leu Xaa Xaa Xaa Ile 20 25
<210> 35
<211> 26
<212> PRT
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 35
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Asn Ala Lys Thr Val
-i iz -in -1С
10 15
Glu Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile 20 25
<210> 36 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (6)..(6)
<223> Val or Glu <220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Leu, Glu or Asp
<220>
<221> MOD_RES <222> (9)..(9)
<223> Asn, Leu or Ile
<220>
<221> MOD_RES <222> (10)..(10)
<223> Arg or Lys
<220>
<221> MOD_RES <222> (13)..(13)
<223> Asp or Lys
<220>
<221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Tyr or Phe
<220>
<221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Asn, Arg or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Val, Ile, Leu, Met, Phe or Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Asn, Ser, Glu or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27) <223> Arg, Lys or Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29) <223> Lys or Arg
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> Asp, Asn, Gln, Glu, His, Ser, Arg or Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> Lys, Ile or Thr <220>
<221> MOD_RES <222> (39)..(39)
<223> Ala, Ser, Thr, Gly, His, Leu or Asp <220>
<221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> His, Glu or Asp
<400> 36
Leu Ala Glu Ala Lys Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Glu Leu Xaa Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Xaa Tyr Lys Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Ala Xaa Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Хаа Ala Leu Хаа Хаа Xaa Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 37 <211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 37
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Asn Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 38
<211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 38
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Ser Tyr Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val His Thr Leu Ile Gly His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 39
<211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 39
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Asn Ala Leu Thr His His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 40
<211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 40
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Arg Ala Arg Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val His Ala Leu Ile Asp His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 41 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 41
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Ile Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Arg Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 42 <211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 42
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Ser Ser Leu Lys Gly His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 43 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 43
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 44 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 44
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Asp Ala Leu Ile Ala His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 45
<211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 45
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Ser Leu Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Asp Ala Leu Thr Ser His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 46 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 46
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Asn Ser Leu Thr Ser His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 47 <211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 47
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Asn Val Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Ile Ala Asp Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 48
<211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 48
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Gln Ala Leu Ile Ala His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 49
<211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 49
Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 50
<211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 50
Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 51 <211> 46 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 51
Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 52 <211> 46
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 52
Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Arg Leu Ile Ser Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Lys Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 53 <211> 200 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 53
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr
50 55 60
Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His
65 70 75 80
Thr Gln Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile
85 90 95
Pro Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu
100 105 110
Ala Val Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile
115 120 125
Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu
130 135 140
Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr
145 150 155 160
Leu Glu Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu
165 170 175
Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln
180 185 190
Gln Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys
195 200
<210> 54
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 54
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 55 <211> 201 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 55
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Phe Tyr
165 170 175
Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu
180 185 190
Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
195 200
<210> 56 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 56
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn
165 170 175
Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 57 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 57
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Ile Ser Ile Glu Lys Ile Gln Ala Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Thr Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Ile Gln Leu Ser Thr Gln Asn Gly
85 90 95
Val Ser Thr Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Asn
100 105 110
Gln Gln Phe Gln Asn Leu Ala Asp Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Ser Ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala Thr Leu
145 150 155 160
Lys Asn Cys Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met Glu Ile
165 170 175
Trp Gly Gly Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Thr
180 185 190
Leu Asp Arg Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gln Leu Asp
195 200 205
His Ile Gln Gly Cys
210
<210> 58
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 58
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 59
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 59
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn
165 170 175
Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 60 <211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
полипептид
<400> 60
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Cys Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
100 105 110
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Asn Pro Gly Cys
210
<210> 61
<211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 61
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Ser Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
100 105 110
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Asn Pro Gly Cys 210
<210> 62 <211> 193
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 62
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
50 55 60
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser
65 70 75 80
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
85 90 95
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
115 120 125
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro
130 135 140
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
145 150 155 160
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
165 170 175
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
180 185 190
Cys
<210> 63
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 63
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Ile Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Arg Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 64 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 64
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Glu Gly Val Arg Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 65
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 65
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 66 <211> 227
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 66
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Leu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala
50 55 60
Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala
65 70 75 80
Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
85 90 95
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
100 105 110
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
115 120 125
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
145 150 155 160
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
165 170 175
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
180 185 190
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
195 200 205
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Cys
225
<210> 67
<211> 214 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 67
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly
50 55 60
Gly Glu Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
85 90 95
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
130 135 140
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 68
<211> 214 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 68
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly
50 55 60
Gly Lys Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
65 70 75 80
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
85 90 95
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
130 135 140
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 69 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 69
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Glu Cys
210
<210> 70
<211> 200 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 70
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr
50 55 60
Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His
65 70 75 80
Thr Gln Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile
85 90 95
Pro Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu
100 105 110
Ala Val Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile
115 120 125
Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu
130 135 140
Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr
145 150 155 160
Leu Glu Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu
165 170 175
Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln
180 185 190
Gln Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 195 200
<210> 71 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 71
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 72
<211> 201 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 72
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys
145 150 155 160
Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr
165 170 175
Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu
180 185 190
Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro 195 200
<210> 73
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 73
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile
165 170 175
Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 74 <211> 213 <212> PRT
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 74
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Ile Ser Ile Glu Lys Ile Gln Ala Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Thr Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Ile Gln Leu Ser Thr Gln Asn Gly
85 90 95
Val Ser Thr Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Asn
100 105 110
Gln Gln Phe Gln Asn Leu Ala Asp Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Ser Ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala Thr Leu
145 150 155 160
Lys Asn Cys Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met Glu Ile
165 170 175
Trp Gly Gly Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Thr
180 185 190
Leu Asp Arg Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gln Leu Asp
195 200 205
His Ile Gln Gly Cys
210
<210> 75 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 75
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 76 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 76
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile
165 170 175
Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 77
<211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 77
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Cys Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
100 105 110
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Asn Pro Gly Cys 210
<210> 78 <211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 78
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Ser Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
100 105 110
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
<210> 79 <211> 193 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 79
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
50 55 60
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser
65 70 75 80
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
85 90 95
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
115 120 125
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro
130 135 140
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
145 150 155 160
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
180 185 190
Cys
<210> 80 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 80
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 81
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 81
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 82
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 82
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 83 <211> 227 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 83
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Leu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala
50 55 60
Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala
65 70 75 80
Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
85 90 95
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
100 105 110
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
115 120 125
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
130 135 140
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
145 150 155 160
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
165 170 175
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
180 185 190
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Cys
225
<210> 84 <211> 214
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 84
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly
50 55 60
Gly Glu Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
65 70 75 80
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
85 90 95
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 85
<211> 214 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 85
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly
50 55 60
Gly Lys Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
65 70 75 80
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
130 135 140
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 86
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 86
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Glu Cys
210
<210> 87 <211> 200 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 87
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr
50 55 60
Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His
65 70 75 80
Thr Gln Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile
85 90 95
Pro Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu
100 105 110
Ala Val Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile
115 120 125
Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu
130 135 140
Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr
145 150 155 160
Leu Glu Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu
165 170 175
Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln
180 185 190
Gln Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys
<210> 88 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 88
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 89
<211> 201 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 89
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys
145 150 155 160
Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr
165 170 175
Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu
180 185 190
Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro 195 200
<210> 90
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 90
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile
165 170 175
Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 91
<211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 91
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Ile Ser Ile Glu Lys Ile Gln Ala Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Thr Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Ile Gln Leu Ser Thr Gln Asn Gly
85 90 95
Val Ser Thr Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Asn
100 105 110
Gln Gln Phe Gln Asn Leu Ala Asp Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Ser Ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala Thr Leu
145 150 155 160
Lys Asn Cys Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met Glu Ile
165 170 175
Trp Gly Gly Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Thr
180 185 190
Leu Asp Arg Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gln Leu Asp
195 200 205
His Ile Gln Gly Cys 210
<210> 92 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 92
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 93 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 93
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile
165 170 175
Lys Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile
180 185 190
Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Pro
210
<210> 94
<211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 94
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Cys Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Asn Pro Gly Cys 210
<210> 95
<211> 212 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 95
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
Ser Ala Ser Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile
65 70 75 80
Lys Thr Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val
85 90 95
Ser Ser Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln
100 105 110
Ser Val Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln
115 120 125
Gln Ile Leu Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn
130 135 140
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Ser Cys Pro Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu
165 170 175
Gly Asn Val Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu
180 185 190
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Asn Pro Gly Cys 210
<210> 96 <211> 193 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 96
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Pro Ile Gln Arg Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
50 55 60
Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gln Gly Val Cys Ser
65 70 75 80
Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gln Ser Val Arg
85 90 95
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Leu Gln Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu Glu
115 120 125
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro
130 135 140
Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val
145 150 155 160
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
165 170 175
Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg Asn Pro Gly
180 185 190
Cys
<210> 97
<211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 97
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 98 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 98
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 99 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 99
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 100 <211> 227
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 100
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Leu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala
50 55 60
Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala
65 70 75 80
Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
85 90 95
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
100 105 110
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
115 120 125
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
130 135 140
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
145 150 155 160
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
165 170 175
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
180 185 190
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
195 200 205
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Cys 225
<210> 101 <211> 214 <212> PRT
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 101
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly
50 55 60
Gly Glu Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
65 70 75 80
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
85 90 95
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
130 135 140
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 102
<211> 214
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 102
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly
50 55 60
Gly Lys Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr
65 70 75 80
Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln
85 90 95
Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly
100 105 110
Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val
115 120 125
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
130 135 140
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu
165 170 175
Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val
180 185 190
Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu
195 200 205
Asp Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 103 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 103
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Glu Cys
210
<210> 104 <211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 104
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 105 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 105
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Arg Leu Ile Ser Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Lys Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
<210> 106 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 106
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 107
<211> 213
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 107
Met Leu Ala Glu Ala Lys Glu Asp Ala Ile Lys Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp
195 200 205
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<210> 108 <211> 37 <212> PRT
<213> Rattus sp.
<400> 108
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 109 <211> 37 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 109
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 110
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 110
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 111 <211> 32 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 111
Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe
1 5 10 15
Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro
20 25 30
<210> 112 <211> 32 <212> PRT
<213> Oncorhynchus sp.
<400> 112
Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu
His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro
20 25 30
<210> 113
<211> 32 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 113
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu
1 5 10 15
His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr
20 25 30
<210> 114
<211> 26
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 114
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile 20 25
<210> 115 <211> 26 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 115
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Ala Leu Ile Ser Glu Ile
20 25
<210> 116 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 116
Gly Gly Gly Gly
<210> 117
<211> 5 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 117
Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 118 <211> 8
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 118
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 119
<211> 8 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
Gly Gly Gly Asn Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 120
<211> 8 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 120
Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 121 <211> 5 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 121
Gly Pro Asn Gly Gly
1 5
<210> 122 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<220>
<221> misc_feature <222> (1).Т(20)
<223> This region may encompass 1-10 "Gly Ser" repeats
Gly Ser Gly Ser 20
<210> 123 <211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(30)
<223> This region may encompass 1-10 "Gly Gly Ser" repeats
<400> 123
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 124 <211> 40 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
<223> This region may encompass 1-10 "Gly Gly Gly Ser" repeats
<400> 124
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 35 40
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак <222> (1).Т(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Gly
Ser"
повторы
<400> 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
-1 IT -in 1 IT
10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser 50
<210> 126
<211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(20)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Glu" повторы
<400> 126
Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu
1 5 10 15
<210> 127
<211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(30)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Glu"
повторы
<400> 127
Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly
-1 IT -in -1 IT
10 15
Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu
20 25 30
<210> 128
<211> 40 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(40)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Glu"
повторы
<400> 128
Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu 35 40
<210> 129
<211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Gly
Glu"
повторы
<400> 129
Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly
-1 IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Glu 50
<210> 130 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(20)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Asp" повторы
<400> 130
Gly Asp Gly Asp Gly Asp Gly Asp Gly Asp Gly Asp Gly Asp Gly Asp
1 5 10 15
Gly Asp Gly Asp 20
<210> 131 <211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(30)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Asp"
повторы
<400> 131
Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp Gly Gly Asp
20 25 30
<210> 132 <211> 40 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(40)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Asp"
повторы
<400> 132
Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp
20 25 30
Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Asp
<210> 133 <211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Gly Asp"
повторы
<400> 133
Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Asp 50
<210> 134 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(20)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Lys"
повторы
<400> 134
Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys
Gly Lys Gly Lys
<210> 135 <211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(30)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Lys"
повторы
<400> 135
Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys
20 25 30
<210> 136 <211> 40 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(40)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Lys"
повторы
<400> 136
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys
20 25 30
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Lys 35 40
<210> 137 <211> 50
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Gly
Lys"
повторы
<400> 137
Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Lys
<210> 138 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(20)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Arg" повторы
<400> 138
Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg
1 5 10 15
Gly Arg Gly Arg 20
<210> 139 <211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак <222> (1).Т(30)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Arg"
повторы
<400> 139
Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly
-i IT -in -1 IT
10 15
Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Arg
20 25 30
<210> 140 <211> 40
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(40)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Arg"
повторы
<400> 140
Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg
1 5 10 15
Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg
20 25 30
Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg 35 40
<210> 141 <211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Gly Gly Gly Gly Arg"
повторы
<400> 141
Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Arg 50
<210> 142 <211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> misc_признак
<222> (1)..(50)
<223> Этот участок может включать в себя 1-10 "Glu Ala Ala Ala Lys"
повторы <400> 142
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala
35 40 45
Ala Lys
<210> 143
<211> 146 <212> PRT
<213> Mus sp. <400> 143
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ala
20 25 30
Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Val
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser Pro
130 135 140
Glu Cys 145
<210> 144 <211> 145
<212> PRT
<213> Mus sp. <400> 144
Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Val Ser Ala Lys
20 25 30
Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu
35 40 45
Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Val Leu
50 55 60
Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala Asn Asp Leu Glu
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Ser
85 90 95
Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly Val
100 105 110
Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
115 120 125
Cys 145
<210> 145 <211> 147
<212> PRT <213> Mus sp.
<400> 145
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
-i IT -in -i IT
10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ala Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Val Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser
130 135 140
<210> 146 <211> 146 <212> PRT <213> Mus sp.
<400> 146
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Val Ser Ala
20 25 30
Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Val
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser Pro
130 135 140
Glu Cys 145
<210> 147 <211> 213 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 147
Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val
20 25 30
Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu
65 70 75 80
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
100 105 110
His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr
115 120 125
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser
145 150 155 160
Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser
165 170 175
Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala
180 185 190
Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp
<210> 148 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> Lys(mPEG40K)
<400> 148
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 149 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 149
Gly Gly Gly Ser
<210> 150 <211> 5 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 150
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 151
<211> 16
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 151
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
-1 гт -in -i IT
10 15
<210> 152 <211> 15 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 152
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 153
<211> 18
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 153
Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly Gly Glu Gly
1 5 10 15
Gly Glu
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 154
Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly
1 5 10 15
Gly Lys
<210> 155 <211> 15 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 155
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 156 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 156
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
-i с -in -1С
10 15
Ala Ala Ala Lys 20
<210> 157
<211> 25 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 157
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys 20 25
<210> 158 <211> 6 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 158
Val Pro Ile Gln Lys Val 1 5
<210> 159
<211> 5 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 159
Leu Ala Glu Ala Lys 1 5
<210> 160 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 160
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
<210> 161 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 161
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 162 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 162
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 163 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
полипептид
<400> 163
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 164 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 164
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 165
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 165
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 166 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 166
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 167 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 167
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 168
<211> 37 <212> PRT
<400> 168
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 169 <211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 169
Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 170 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 170
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
<210> 171 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 171
Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
-i IT -in 1 IT
10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 172 <211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 172
Lys Ala Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 173 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 173
Lys Ala Asn Thr Ala Thr Ala Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 174 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 174
Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 175 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 175
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 176
<211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 176
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 177 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 177
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 178
<211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 178
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 179
<211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 179
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 180
<211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 180
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
<210> 181 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 181
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 182 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 182
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 183 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 183
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 184
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 184
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ile His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 185 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 185
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 186 <211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 186
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Ile
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 187 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 187
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 188 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 188
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Val Leu Ser Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 189 <211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 189
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 190 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 190
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 191 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 191
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 192
<211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 192
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Pro Ser Thr Asp Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 193 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 193
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 194
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 194
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ile Leu Pro Pro Thr Asp Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 195 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 195
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 196
<211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> N-term mPEG40KD
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 196
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 197 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> N-term mPEG40KD <220>
<223> С-концевая NH2
<400> 197
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 198 <211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (21)..(21)
<223> Lys(mPEG40KD) <220>
<223> С-концевая NH2 <400> 198
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 199 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Lys(mPEG40KD)
<400> 199
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 200 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 200
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 201 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25)
<223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 201
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 202 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 202
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 203
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Lys Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 204
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Lys(Y-shaped-mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 204
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 205 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 205
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Lys Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 206 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> Lys(mPEG40KD)
<400> 206
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 207 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 207
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Lys Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 208
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
<221> MOD_RES
<222> (25)..(25)
<223> Lys(Y-shaped-mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 208
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 209 <211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 209
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Lys Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Lys(mPEG40KD)
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 210
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Lys Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 211
<211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Lys(mPEG40KD) <220>
<223> С-концевая NH2 <400> 211
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Lys Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
<210> 212 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Lys(mPEG40KD) <220>
<223> С-концевая NH2 <400> 212
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Lys Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 213 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Lys(mPEG40KD) <220>
<223> С-концевая NH2
<400> 213
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Lys Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 214 <211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> Lys(mPEG40K)
<400> 214
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 215 <211> 6 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 215
Thr Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 216
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 217
<211> 14 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 217
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
-1 С -in
<210> 218 <211> 18
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 218
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser
<210> 219
<211> 22 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 219
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Ser 20
<210> 220 <211> 6 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 220
Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5
<210> 221 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 221
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5 10
<210> 222 <211> 14 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 222
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5 10
<210> 223 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ala Ser
<210> 224 <211> 22 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 224
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
-i IT -in 1 IT
10 15
Gly Gly Gly Ser Ala Ser 20
<210> 225 <211> 8 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 225
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5
<210> 226 <211> 12 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 226
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser
-i IT -in
<211> 16
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 227
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5 10 15
<210> 228
<211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 228
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ala Ser 20
<210> 229
<211> 24 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 229
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Ser 20
<210> 230
<400> 230 000
<210> 232
<400> 232 000
<210> 233
<400> 233 000
<210> 234
<400> 234 000
<210> 235
<400> 235 000
<210> 236 <400> 236
000
<210> 237
<400> 237 000
<210> 238
<400> 238 000
<210> 239
<400> 239 000
<210> 241
<400> 241 000
<210> 242
<400> 242 000
<210> 243
<400> 243 000
<210> 244
<400> 244 000
<210> 245
<400> 245 000
<210> 246
<400> 246 000
<210> 247
<400> 247 000
<210> 248
<400> 249 000
<210> 250
<400> 250 000
<210> 251
<400> 251 000
<210> 252
<400> 252 000
<210> 253
<400> 253 000
<210> 254
<400> 254 000
<210> 255
<400> 255 000
<210> 256
<400> 256 000
<210> 257
<400> 258 000
<210> 259
<400> 259 000
<210> 260
<400> 260 000
<210> 261
<400> 261 000
<210> 262
<400> 262 000
<210> 263
<400> 263 000
<210> 264
<400> 264 000
<210> 265
<400> 265 000
<210> 266
<400> 267 000
<210> 268
<400> 268 000
<210> 269
<400> 269 000
<210> 270
<400> 270 000
<210> 271
<400> 271 000
<210> 272
<400> 272 000
<210> 273
<400> 273 000
<210> 274
<400> 274 000
<210> 275 <400> 275
<400> 276 000
<210> 277
<400> 277 000
<210> 278
<400> 278 000
<210> 279
<400> 279 000
<210> 280
<400> 280 000
<210> 281
<400> 281 000
<210> 282
<400> 282 000
<210> 283
<400> 283 000
<210> 285 <400> 285
000
<210> 286
<400> 286 000
<210> 287 <400> 287
000
<210> 288
<400> 288 000
<210> 289 <400> 289
000
<210> 290
<400> 290 000
<210> 291
<400> 291 000
<210> 292
<400> 292 000
<210> 294
<400> 294 000
<210> 295
<400> 295 000
<210> 296 <400> 296
000
<210> 297
<400> 297 000
<210> 298
<400> 298 000
<210> 299
<400> 299 000
<210> 300
<400> 300 000
<210> 301
<400> 302 000
<210> 303
<400> 303 000
<210> 304
<400> 304 000
<210> 305
<400> 305 000
<210> 306
<400> 306 000
<210> 307
<400> 307 000
<210> 308
<400> 308 000
<210> 309
<400> 309 000
<210> 310
<400> 311 000
<210> 312
<400> 312 000
<210> 313
<400> 313 000
<210> 314
<400> 314 000
<210> 315
<400> 315 000
<210> 316
<400> 316 000
<210> 317
<400> 317 000
<210> 318
<400> 318 000
<210> 319
<400> 320 000
<210> 321
<400> 321 000
<210> 322
<400> 322 000
<210> 323
<400> 323 000
<210> 324
<400> 324 000
<210> 325
<400> 325 000
<210> 326
<400> 326 000
<210> 327
<400> 327 000
<400> 329 000
<210> 330
<400> 330 000
<210> 331
<400> 331 000
<210> 332
<400> 332 000
<210> 333
<400> 333 000
<210> 334
<400> 334 000
<210> 335
<400> 335 000
<210> 336
<400> 336 000
<210> 338
<400> 338 000
<210> 339
<400> 339 000
<210> 340
<400> 340 000
<210> 341
<400> 341 000
<210> 342
<400> 342 000
<210> 343
<400> 343 000
<210> 344
<400> 344 000
<210> 345
<400> 345 000
<210> 347 <400> 347
000
<210> 348 <400> 348
000
<210> 349
<400> 349 000
<210> 350 <400> 350
000
<210> 351
<400> 351 000
<210> 352
<400> 352 000
<210> 353
<400> 353 000
<210> 354
<400> 355 000
<210> 356 <400> 356
000
<210> 357
<400> 357 000
<210> 358
<400> 358 000
<210> 359 <400> 359
000
<210> 360
<400> 360 000
<210> 361
<400> 361 000
<210> 362
<400> 362 000
<210> 363
<400> 364 000
<210> 365
<400> 365 000
<210> 366
<400> 366 000
<210> 367
<400> 367 000
<210> 368
<400> 368 000
<210> 369
<400> 369 000
<210> 370
<400> 370 000
<210> 371
<400> 371 000
<210> 372
<400> 373 000
<210> 374
<400> 374 000
<210> 375
<400> 375 000
<210> 376
<400> 376 000
<210> 377
<400> 377 000
<210> 378
<400> 378 000
<210> 379
<400> 379 000
<210> 380
<400> 380 000
<400> 382 000
<210> 383
<400> 383 000
<210> 384
<400> 384 000
<210> 385
<400> 385 000
<210> 386
<400> 386 000
<210> 387
<400> 387 000
<210> 388
<400> 388 000
<210> 389
<400> 389 000
<210> 391
<400> 391 000
<210> 392
<400> 392 000
<210> 393
<400> 393 000
<210> 394
<400> 394 000
<210> 395
<400> 395 000
<210> 396
<400> 396 000
<210> 397
<400> 397 000
<210> 398
<400> 398 000
<210> 400
<400> 400 000
<210> 401
<400> 401 000
<210> 402
<400> 402 000
<210> 403
<400> 403 000
<210> 404
<400> 404 000
<210> 405
<400> 405 000
<210> 406
<400> 406 000
<210> 407
<210> 409
<400> 409 000
<210> 410
<400> 410 000
<210> 411
<400> 411 000
<210> 412
<400> 412 000
<210> 413
<400> 413 000
<210> 414
<400> 414 000
<210> 415
<400> 415 000
<210> 416
<210> 418
<400> 418 000
<210> 419 <400> 419
000
<210> 420
<400> 420 000
<210> 421
<400> 421 000
<210> 422
<400> 422 000
<210> 423 <400> 423
000
<210> 424
<400> 424 000
<210> 425 <400> 425
000
<210> 427
<400> 427 000
<210> 428
<400> 428 000
<210> 429
<400> 429 000
<210> 430
<400> 430 000
<210> 431
<400> 431 000
<210> 432
<400> 432 000
<210> 433
<400> 433 000
<400> 435 000
<210> 436
<400> 436 000
<210> 437
<400> 437 000
<210> 438
<400> 438 000
<210> 439
<400> 439 000
<210> 440
<400> 440 000
<210> 441
<400> 441 000
<210> 442
<400> 442 000
<210> 444
<400> 444 000
<210> 445
<400> 445 000
<210> 446
<400> 446 000
<210> 447
<400> 447 000
<210> 448
<400> 448 000
<210> 449
<400> 449 000
<210> 450
<400> 450 000
<210> 451
<400> 451 000
<210> 453
<400> 453 000
<210> 454
<400> 454 000
<210> 455
<400> 455 000
<210> 456
<400> 456 000
<210> 457
<400> 457 000
<210> 458
<400> 458 000
<210> 459
<400> 459 000
<210> 460
<400> 461 000
<210> 462
<400> 462 000
<210> 463
<400> 463 000
<210> 464
<400> 464 000
<210> 465
<400> 465 000
<210> 466
<400> 466 000
<210> 467
<400> 467 000
<210> 468
<400> 468 000
<210> 469
<400> 470 000
<210> 471
<400> 471 000
<210> 472
<400> 472 000
<210> 473
<400> 473 000
<210> 474
<400> 474 000
<210> 475
<400> 475 000
<210> 476
<400> 476 000
<210> 477
<400> 477 000
<210> 478 <400> 478
000
<210> 480
<400> 480 000
<210> 481
<400> 481 000
<210> 482
<400> 482 000
<210> 483 <400> 483
000
<210> 484
<400> 484 000
<210> 485 <400> 485
000
<210> 486
<400> 486 000
<400> 488 000
<210> 489
<400> 489 000
<210> 490
<400> 490 000
<210> 491
<400> 491 000
<210> 492
<400> 492 000
<210> 493
<400> 493 000
<210> 494
<400> 494 000
<210> 495
<400> 495 000
<210> 497
<400> 497 000
<210> 498
<400> 498 000
<210> 499
<400> 499 000
<210> 500
<400> 500 000
<210> 501
<400> 501 000
<210> 502
<400> 502 000
<210> 503
<400> 503 000
<210> 504
<400> 504 000
<210> 506
<400> 506 000
<210> 507
<400> 507 000
<210> 508
<400> 508 000
<210> 509
<400> 509 000
<210> 510
<400> 510 000
<210> 511
<400> 511 000
<210> 512
<400> 512 000
<210> 513
<400> 514 000
<210> 515
<400> 515 000
<210> 516
<400> 516 000
<210> 517
<400> 517 000
<210> 518
<400> 518 000
<210> 519
<400> 519 000
<210> 520
<400> 520 000
<210> 521
<400> 521 000
<210> 522
<400> 523 000
<210> 524
<400> 524 000
<210> 525
<400> 525 000
<210> 526
<400> 526 000
<210> 527
<400> 527 000
<210> 528
<400> 528 000
<210> 529
<400> 529 000
<210> 530
<400> 530 000
<210> 531
<400> 532 000
<210> 533
<400> 533 000
<210> 534
<400> 534 000
<210> 535
<400> 535 000
<210> 536
<400> 536 000
<210> 537
<400> 537 000
<210> 538
<400> 538 000
<210> 539
<400> 539 000
<210> 542
<400> 542 000
<210> 543 <400> 543
000
<210> 544
<400> 544 000
<210> 545
<400> 545 000
<210> 546
<400> 546 000
<210> 547 <400> 547
000
<210> 548 <400> 548
000
<210> 550
<400> 550 000
<210> 551
<400> 551 000
<210> 552
<400> 552 000
<210> 553
<400> 553 000
<210> 554
<400> 554 000
<210> 555
<400> 555 000
<210> 556 <400> 556
000
<210> 557
<400> 557 000
<210> 559
<400> 559 000
<210> 560
<400> 560 000
<210> 561
<400> 561 000
<210> 562
<400> 562 000
<210> 563
<400> 563 000
<210> 564
<400> 564 000
<210> 565
<400> 565 000
<210> 566
<400> 567 000
<210> 568
<400> 568 000
<210> 569
<400> 569 000
<210> 570
<400> 570 000
<210> 571
<400> 571 000
<210> 572
<400> 572 000
<210> 573
<400> 573 000
<210> 574
<400> 574 000
<210> 575
<400> 576 000
<210> 577
<400> 577 000
<210> 578
<400> 578 000
<210> 579
<400> 579 000
<210> 580
<400> 580 000
<210> 581
<400> 581 000
<210> 582
<400> 582 000
<210> 583
<400> 583 000
<210> 584
<400> 585 000
<210> 586
<400> 586 000
<210> 587
<400> 587 000
<210> 588
<400> 588 000
<210> 589
<400> 589 000
<210> 590
<400> 590 000
<210> 591
<400> 591 000
<210> 592
<400> 592 000
<400> 594 000
<210> 595
<400> 595 000
<210> 596
<400> 596 000
<210> 597
<400> 597 000
<210> 598
<400> 598 000
<210> 599
<400> 599 000
<210> 600
<400> 600 000
<210> 601
<400> 601 000
<210> 603 <400> 603
000
<210> 604
<400> 604 000
<210> 605
<400> 605 000
<210> 606
<400> 606 000
<210> 607 <400> 607
000
<210> 608 <400> 608
000
<210> 609
<400> 609 000
<210> 610
<400> 610 000
<210> 612
<400> 612 000
<210> 613
<400> 613 000
<210> 614
<400> 614 000
<210> 615 <400> 615
000
<210> 616
<400> 616 000
<210> 617
<400> 617 000
<210> 618
<400> 618 000
<210> 619 <400> 619
000
<400> 620 000
<210> 621
<400> 621 000
<210> 622
<400> 622 000
<210> 623
<400> 623 000
<210> 624
<400> 624 000
<210> 625
<400> 625 000
<210> 626
<400> 626 000
<210> 627
<400> 627 000
<210> 628
<400> 629 000
<210> 630
<400> 630 000
<210> 631
<400> 631 000
<210> 632
<400> 632 000
<210> 633
<400> 633 000
<210> 634
<400> 634 000
<210> 635
<400> 635 000
<210> 636
<400> 636 000
<210> 637
<400> 638 000
<210> 639
<400> 639 000
<210> 640
<400> 640 000
<210> 641
<400> 641 000
<210> 642
<400> 642 000
<210> 643
<400> 643 000
<210> 644
<400> 644 000
<210> 645
<400> 645 000
<400> 647 000
<210> 648
<400> 648 000
<210> 649
<400> 649 000
<210> 650
<400> 650 000
<210> 651
<400> 651 000
<210> 652
<400> 652 000
<210> 653
<400> 653 000
<210> 654
<400> 654 000
<210> 656
<400> 656 000
<210> 657
<400> 657 000
<210> 658
<400> 658 000
<210> 659
<400> 659 000
<210> 660
<400> 660 000
<210> 661
<400> 661 000
<210> 662
<400> 662 000
<210> 663
<400> 663 000
<211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 664
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 665 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 665
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 666 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 667 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 667
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 668 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 668
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 669 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 669
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 670 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 670
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 671 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 671
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Cys Ser Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 672 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 672
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 673 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 673
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser
130 135 140
Pro Glu Cys
145
<210> 674 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 674
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Pro Glu Cys
145
<210> 675 <211> 147
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 675
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
<210> 676 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 676
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
<210> 677 <211> 147 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 677
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
-i с -in -1С
10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
<210> 678
<400> 679 000
<210> 680
<400> 680 000
<210> 681
<400> 681 000
<210> 682
<400> 682 000
<210> 683
<400> 683 000
<210> 684
<400> 684 000
<210> 685
<400> 685 000
<210> 686
<400> 686 000
<210> 689 <400> 689
000
<210> 690
<400> 690 000
<210> 691
<400> 691 000
<210> 692
<400> 692 000
<210> 693 <400> 693
000
<210> 694
<400> 694 000
<210> 695 <400> 695
000
<210> 697 <400> 697
000
<210> 698
<400> 698 000
<210> 699
<400> 699 000
<210> 700
<400> 700 000
<210> 701
<400> 701 000
<210> 702
<400> 702 000
<210> 703
<400> 703 000
<210> 704
<400> 704 000
<210> 706
<400> 706 000
<210> 707
<400> 707 000
<210> 708
<400> 708 000
<210> 709
<400> 709 000
<210> 710
<400> 710 000
<210> 711
<400> 711 000
<210> 712
<400> 712 000
<210> 713
<400> 714 000
<210> 715
<400> 715 000
<210> 716
<400> 716 000
<210> 717
<400> 717 000
<210> 718
<400> 718 000
<210> 719
<400> 719 000
<210> 720
<400> 720 000
<210> 721
<400> 721 000
<210> 722
<400> 723 000
<210> 724
<400> 724 000
<210> 725
<400> 725 000
<210> 726
<400> 726 000
<210> 727
<400> 727 000
<210> 728
<400> 728 000
<210> 729
<400> 729 000
<210> 730
<400> 730 000
<210> 731
<400> 732 000
<210> 733
<400> 733 000
<210> 734
<400> 734 000
<210> 735
<400> 735 000
<210> 736
<400> 736 000
<210> 737
<400> 737 000
<210> 738
<400> 738 000
<210> 739
<400> 739 000
<400> 741 000
<210> 742
<400> 742 000
<210> 743
<400> 743 000
<210> 744
<400> 744 000
<210> 745
<400> 745 000
<210> 746
<400> 746 000
<210> 747
<400> 747 000
<210> 748
<400> 748 000
<210> 750 <400> 750
000
<210> 751
<400> 751 000
<210> 752
<400> 752 000
<210> 753 <400> 753
000
<210> 754
<400> 754 000
<210> 755
<400> 755 000
<210> 756
<400> 756 000
<210> 757
<400> 757 000
<210> 759
<400> 759 000
<210> 760 <400> 760
000
<210> 761
<400> 761 000
<210> 762
<400> 762 000
<210> 763
<400> 763 000
<210> 764
<400> 764 000
<210> 765
<400> 765 000
<210> 766
<400> 767 000
<210> 768
<400> 768 000
<210> 769
<400> 769 000
<210> 770
<400> 770 000
<210> 771
<400> 771 000
<210> 772
<400> 772 000
<210> 773
<400> 773 000
<210> 774
<400> 774 000
<210> 775
<400> 776 000
<210> 777
<400> 777 000
<210> 778
<400> 778 000
<210> 779
<400> 779 000
<210> 780
<400> 780 000
<210> 781
<400> 781 000
<210> 782
<400> 782 000
<210> 783
<400> 783 000
<210> 784
<400> 785 000
<210> 786
<400> 786 000
<210> 787
<400> 787 000
<210> 788
<400> 788 000
<210> 789
<400> 789 000
<210> 790
<400> 790 000
<210> 791
<400> 791 000
<210> 792
<400> 792 000
<400> 794 000
<210> 795
<400> 795 000
<210> 796
<400> 796 000
<210> 797
<400> 797 000
<210> 798
<400> 798 000
<210> 799
<400> 799 000
<210> 800 <211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> N-term hydrogen, N-term capping group or a linker to a duration enhancing moiety
<221> MOD_RES <222>
<223> Может присутствовать или нет
<220>
<221> MOD_RES <222> (21)..(21)
<223> Lys, Cys or Asn
<220>
<221> MOD_RES <222> (24)..(24)
<223> Lys, Cys or Gly
<220>
<221> MOD_RES <222> (25)..(25)
<223> Lys, Cys or Pro
<220>
<221> MOD_RES <222> (26)..(26)
<223> Lys, Cys or Ile
<220>
<221> MOD_RES <222> (27)..(27)
<223> Lys, Cys or Leu
<220>
<221> MOD_RES <222> (28)..(29)
<223> Lys, Cys or Pro
<220>
<221> MOD_RES <222> (31)..(31)
<223> Lys, Cys or Asn
<220>
<223> С-концевая substituted or unsubstituted amino, substituted or unsubstituted alkylamino, substituted or unsubstituted dialkylamino, substituted or unsubstituted
cycloalkylamino,
substituted or unsubstituted arylamino, substituted or
<220>
<223> cont. from above; unsubstituted aralkylamino, substituted or unsubstituted alkyloxy, substituted or unsubstituted aryloxy, substituted or unsubstituted aralkyloxy, or hydroxyl
<400> 800
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
Val His Ser Ser Xaa Asn Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr
<210> 801 <211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 801
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 802
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 802
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 803 <211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 803
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 804
<211> 37
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 804
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
<210> 805 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 805
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 806 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 806
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Lys Val
20 25 30
<210> 807 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 807
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Lys Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 808 <211> 37 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2 <400> 808
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
1 5 10 15
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 809
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 810 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 810
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Lys Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 811
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 812 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 812
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Lys Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 813 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 813
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Lys Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 814
<211> 36
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 814
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Lys Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 815 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
<400> 815
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Lys Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 816 <211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<400> 816
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Lys Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 817
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Lys Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего
альбумин домена (ABD) и первый пептидный гормональный домен (HD1), выбранный из
лептина, лептинового аналога или их активного фрагмента.
2. Сконструированный полипептид согласно п. 1, дополнительно содержащий первый линкер (L1), ковалентно связанный с указанным HD1.
3. Сконструированный полипептид согласно п. 1 или 2, в котором указанный сконструированный полипептид содержит указанный ABD в качестве N-концевого фрагмента и указанный HD1 в качестве С-концевого фрагмента.
4. Сконструированный полипептид согласно п. 1 или 2, в котором указанный сконструированный полипептид содержит указанный ABD в качестве С-концевого фрагмента и указанный HD1 в качестве N-концевого фрагмента.
5. Сконструированный полипептид согласно п. 3, содержащий структуру: ABD-
HD1.
6. Сконструированный полипептид согласно п. 3, содержащий структуру: ABD-L1-
HD1.
7. Сконструированный полипептид согласно п. 4, содержащий структуру: HD1-
ABD.
8. Сконструированный полипептид согласно п. 4, содержащий структуру: HD1-L1-
ABD.
9. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 8, в котором указанный HD1 представляет собой указанный лептин, лептиновый аналог, активный фрагмент лептина или производное лептина.
10. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 9, в котором
указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно
аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1,
SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ
ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ
ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19,
SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID
N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33.
11. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 10, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 90%-ной идентичностью относительно аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33.
12. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 11, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина человека.
13. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 12, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 90%-ной идентичностью относительно лептина человека.
14. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 13, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно SEQ ID N0:20.
15. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 14, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 90%-ной идентичностью относительно SEQ ID N0:20.
16. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 15, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина утконоса.
17. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 16, в котором указанный HD1 характеризуется по меньшей мере 50%-ной идентичностью относительно лептина нерпы.
11.
18. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 17, в котором указанный HD1 содержит 1-5 аминокислотных модификаций, выбранных независимо из одной или сочетания инсерции, делеции, добавления и замены.
19. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 18, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32 и SEQ ID N0:33.
20. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 19, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32 и SEQ ID N0:33.
21. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:1.
22. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:2.
23. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:3.
24. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:4.
25. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:5.
26. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:6.
11.
27. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:7.
28. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:8.
29. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:9.
30. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:10.
31. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 11.
32. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 12.
33. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:13.
34. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 14.
35. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 15.
36. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:16.
37. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:17.
38. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 18.
39. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:19.
40. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:20.
41. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:21.
11.
42. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:22.
43. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:23.
44. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:24.
45. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:25.
46. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID NO: 26.
47. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:27.
48. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:28.
49. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:29.
50. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:30.
51. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:31.
52. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:32.
53. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:33.
54. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 53, в котором указанный ABD содержит связывающий альбумин мотив (АВМ), состоящий из аминокислотной последовательности
GVSD Х5 YK Х8 Х91 Хп Хи А Хм TVEGV Х20 AL Х23 Х24 Х251 (SEQ ID N0:34) в которой независимо один от другого Х5 выбран из Y и F; Х8 выбран из N, R и S;
Х9 выбран из V, I, L, М, F и Y;
Хп выбран из N, S, Е и D;
Х12 выбран из R, К и N;
Х14 выбран из К и R;
Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S, R и К;
Х23 выбран из К, I и Т;
Х24 выбран из A, S, Т, G, Н, L и D; и
Х25 выбран из Н, Е и D.
55. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 54, в котором, независимо один от другого,
Х5 представляет собой Y;
Х8 представляет собой N;
Х23 представляет собой Т или I;
Х24 представляет собой S или L; и
Х25 представляет собой Е или Н.
56. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 55, в котором связывающий альбумин мотив содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLffl (SEQ ID N0:114) и GVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEI (SEQ ID NO: 115).
57. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 56, в котором указанный ABD содержит связывающий альбумин мотив (АВМ), который не является GVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEI (SEQ ID N0:35).
58. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 57, в котором указанный ABD содержит АВМ, описанный в таблице 1.
59. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 58, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность:
LAEAK Ха Xb А Хс Xd EL Хе KY - [АВМ]- LAALP (SEQ ID N0:36), в которой
[АВМ] представляет собой связывающий альбумин мотив, и независимо один от другого, Ха выбран из V и Е;
Хь выбран из L, E и D; Xc выбран из N, L и I; Xd выбран из R и К; Xe выбран из D и К;
лейцин в положении 45 присутствует или отсутствует; и пролин в положении 46 присутствует или отсутствует.
60. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 59, в котором, независимо один от другого,
Ха представляет собой Е; Хь представляет собой D; Хс представляет собой I; и Xd представляет собой К.
61. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 60, в котором полипептид связывающего альбумин домена (ABD) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
L А Е А К Е D АIК Е L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К Т V Е G V Е A L Т L НIL A A L Р (SEQ ID N0:50); и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP (SEQ ID N0:51).
62. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 61, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность:
LAEAK Ха Xb А Хс Xd EL Хе KY - [АВМ]- LAALP (SEQ ID N0:36), в которой
[АВМ] представляет собой связывающий альбумин мотив, и,
независимо один от другого,
Ха выбран из V и Е;
Хь выбран из L, Е и D;
Хс выбран из N, L и I;
Xd выбран из R и К;
Хе выбран из D и К;
лейцин в положении 45 присутствует или отсутствует;
пролин в положении 46 присутствует или отсутствует; и
в котором АВМ состоит из аминокислотной последовательности:
GVSD X5 YK X8 X91 Хп X12 A Xi4 TVEGV X20 AL X23 X24 X25 1 (SEQ ID N0:34),
в которой, независимо один от другого,
Х5 выбран из Y и F;
Х§ выбран из N, R и S;
Х9 выбран из V, I, L, М, F и Y;
Хп выбран из N, S, Е и D;
Х12 выбран из R, К и N;
Х14 выбран из К и R;
Х20 выбран из D, N, Q, Е, Н, S, R и К;
Х2з выбран из К, I и Т;
Х24 выбран из A, S, Т, G, Н, L и D; и
Х25 выбран из Н, Е и D.
63. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 62, в котором указанный ABD содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 85%-ной идентичностью относительно аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID N0:39, SEQ ID N0:40, SEQ ID N0:41, SEQ ID N0:42, SEQ ID N0:43, SEQ ID N0:44, SEQ ID N0:45, SEQ ID N0:46, SEQ ID N0:47, SEQ ID N0:48, SEQ ID N0:49, SEQ ID N0:50, SEQ ID N0:51 и SEQ ID N0:52.
64. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 63, в котором указанный ABD содержит любой из пептидов, выбранных из группы, состоящей из LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGFnLAALP (SEQ ID N0:38), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVNALTFffllLAALP (SEQ ID N0:39), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDFnLAALP (SEQ ID N0:40), LAEAK V L A N R E L D К Y G V S D Y Y К N11N R А К TV E G V RALKLHILAALP (SEQ ID N0:41), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGFnLAALP (SEQ ID N0:42), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:43), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVDALIAFnLAALP (SEQ ID N0:44), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP (SEQ ID N0:45), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSFnLAALP (SEQ ID N0:46), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVTNKAKTVEGVEALIADILAALP (SEQ ID N0:47),
63.
LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP (SEQ ID N0:48), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLinLAALP (SEQ ID N0:49), L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К T V E G V EALTLHILAALP (SEQ ID N0:50), L A E А К E D AIК E L D К Y G V S D Y Y К N LIN К А К T V E G V E A L l s e IL A A L P (SEQ ID N0:51), и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP (SEQ ID N0:52).
65. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 64, в котором указанный линкер L1 представляет собой пептид, состоящий из 1 - 30 аминокислот или менее чем 30 аминокислот.
66. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 65, в котором указанный линкер L1 выбран из 20 природных аминокислот.
67. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 66, в котором указанный линкер L1 представляет собой неприродную аминокислоту, включенную в ходе химического синтеза, посттрансляционной химической модификации или путем in vivo включения при рекомбинантной экспрессии в клетке-хозяине.
68. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 67, в котором аминокислоты указанного линкера L1 выбраны из серина, глицина, аланина, пролина, аспарагина, глутамина, глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и лизина.
69. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 68, в котором указанный линкер L1 содержит большинство стерически незатрудненных аминокислот.
70. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 69, в котором указанный линкер L1 содержит один или несколько из следующего: кислого линкера, основного линкера и структурного мотива.
71. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 70, в котором указанный линкер L1 содержит полиглицин, полиаланины, поли(С1у-А1а) или поли(С1у-Ser).
72. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 71, в котором указанный линкер L1 содержит полиглицин (Gly)3, (Gly)4 (SEQ ID NO: 116) или (Gly)s (SEQ ID NO: 117)
73. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 72, в котором указанный линкер L1 содержит (Gly)3Lys(Gly)4 (SEQ ID NO: 118); (Gly)3AsnGlySer(Gly)2
65.
74. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 73, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Ala.
75. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 74, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Ser.
76. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 75, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Glu.
77. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 76, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Lys.
78. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 77, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Ser]" (SEQ ID NO: 122), [Gly- Gly- Ser]" (SEQ ID NO: 123), [Gly-Gly-Gly- Ser]" (SEQ ID NO: 124) и [Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]n (SEQ ID NO: 125); где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.
79. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 78, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 126); [Gly-Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 127); [Gly-Gly-Gly- Glu]" (SEQ ID NO: 128); [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID NO: 129), [Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 130); [Gly-Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 131); [Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 132); [Gly-Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 133), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
80. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 79, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 126); [Gly-Gly-Glu] " (SEQ ID NO: 127); [Gly-Gly-Gly- Glu]" (SEQ ID NO: 128); [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]" (SEQ ID NO: 129), [Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 130); [Gly-Gly-Asp] " (SEQ ID NO: 131); [Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 132); [Gly-Gly-Gly-Gly-Asp]" (SEQ ID NO: 133), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
81. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 80, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Lys] " (SEQ ID NO: 134); [Gly-Gly- Lys] " (SEQ ID NO: 135); [Gly-Gly-Gly- Lys]" (SEQ ID NO: 136); [Gly-Gly-Gly-Gly- Lys]" (SEQ ID NO: 137), [Gly- Arg] " (SEQ ID NO: 138); [Gly-
65.
Gly- Arg] n (SEQ ID NO: 139); [Gly-Gly-Gly- Arg]" (SEQ ID NO: 140); [Gly-Gly-Gly-Gly-Arg]n (SEQ ID NO: 141), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
82. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 81, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]" (SEQ ID NO: 142), где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
83. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 81, в котором указанный линкер L1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из [Gly-Gly-Glu] 6 (SEQ ID NO: 153) [Gly-Gly-Lys] 6. (SEQ ID NO: 154) [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]3 (SEQ ID NO: 155),, [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]4 (SEQ ID NO: 156) или [Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]5 (SEQ ID NO: 157).
84. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 83, в котором указанный линкер L1 содержит N-концевой дипептид TG.
85. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 84, в котором указанный линкер L1 содержит С-концевой дипептид AS.
86. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 85, в котором указанный линкер L1 содержит N-концевой дипептид TG и С-концевой дипептид AS.
87. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 86, в котором указанный линкер L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из TG-(GGGS)i (SEQ ID NO: 215), TG-(GGGS)2 (SEQ ID NO: 216), TG-(GGGS)3 (SEQ ID NO: 217), TG-(GGGS)4 (SEQ ID NO: 218), TG-(GGGS)5 (SEQ ID NO: 219), (GGGS)i-AS (SEQ ID NO: 220), (GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 221), (GGGS)3-AS (SEQ ID NO: 222), (GGGS)4-AS (SEQ ID NO: 223), (GGGS)5-AS (SEQ ID NO: 224), TG-(GGGS)i-AS (SEQ ID NO: 225), TG-(GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 226), TG-(GGGS)3-AS (SEQ ID NO: 227), TG-(GGGS)4-AS (SEQ ID NO: 228) и TG-(GGGS)5-AS (SEQ ID NO: 229).
88. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 87, в котором указанный дипептид TG и/или указанный дипептид AS отсутствуют или заменены парой аминокислот, выбранных из Т, A, S и G.
89. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 88, в котором указанный полипептид дополнительно содержит один или несколько дополнительных линкеров.
82.
90. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 89, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:53, SEQ ID N0:54, SEQ ID N0:55, SEQ ID N0:56, SEQ ID N0:57, SEQ ID N0:58, SEQ ID N0:59, SEQ ID N0:60, SEQ ID N0:61, SEQ ID N0:62, SEQ ID N0:63, SEQ ID N0:64, SEQ ID N0:65, SEQ ID N0:66, SEQ ID N0:67, SEQ ID N0:68, SEQ ID N0:69, SEQ ID N0:70, SEQ ID N0:71, SEQ ID N0:72, SEQ ID N0:73, SEQ ID N0:74, SEQ ID N0:75, SEQ ID N0:76, SEQ ID N0:77, SEQ ID N0:78, SEQ ID N0:79, SEQ ID N0:80, SEQ ID N0:81, SEQ ID N0:82, SEQ ID N0:83, SEQ ID N0:84, SEQ ID N0:85 SEQ ID N0:86, SEQ ID N0:87, SEQ ID N0:88, SEQ ID N0:89, SEQ ID N0:90, SEQ ID N0:91, SEQ ID N0:92, SEQ ID N0:93, SEQ ID N0:94, SEQ ID N0:95, SEQ ID N0:96, SEQ ID N0:97, SEQ ID N0:98, SEQ ID N0:99, SEQ ID N0:100, SEQ ID N0:101, SEQ ID N0:102, SEQ ID N0:103, SEQ ID N0:104, SEQ ID N0:105, SEQ ID N0:106 и SEQ ID N0:107.
91. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:53.
92. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:54.
93. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:55.
94. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:56.
95. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:57.
96. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:58.
82.
97. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:59.
98. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:60.
99. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:61.
100. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:62.
101. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:63.
102. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:64.
103. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:65.
104. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:66.
105. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:67.
106. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:68.
82.
107. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:69.
108. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:70.
109. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:71.
110. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:72.
111. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:73.
112. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:74.
113. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:75.
114. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:76.
115. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:77.
116. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:78.
82.
117. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:79.
118. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:80.
119. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:81.
120. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:82.
121. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:83.
122. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:84.
123. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:85.
124. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:86.
125. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:87.
126. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:88.
82.
127. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:89.
128. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:90.
129. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:91.
130. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:92.
131. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:93.
132. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:94.
133. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:95.
134. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:96.
135. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:97.
136. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:98.
82.
137. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:99.
138. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:100.
139. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:102.
140. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:102.
141. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:103.
142. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:104.
143. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:105.
144. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:106.
145. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 90, в котором указанный сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:107.
146. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 145, характеризующийся аффинностью к сывороточному альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10"6 моль/л.
82.
147. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 146, характеризующийся аффинностью к сывороточному альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10"9 моль/л.
148. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 147, характеризующийся аффинностью к сывороточному альбумину с константой диссоциации, составляющей менее приблизительно 10"12 моль/л.
149. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 148, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 1 день.
150. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 149, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 3 дня.
151. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 150, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия, составляющей по меньшей мере 5 дней.
152. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 151, в котором полипептид характеризуется продолжительностью действия в организме человека, составляющей по меньшей мере 5 дней.
153. Способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту сконструированного полипептида согласно любому из пп. 1 - 152 в количестве, эффективном для лечения указанного заболевания или нарушения.
154. Способ согласно п. 153, причем указанное заболевание или нарушение могут представлять собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени, сахарный диабет (включая тип I и тип II), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD), метаболический синдром X и болезнь Хантингтона.
155. Способ согласно п. 153 или п. 154, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию,
149.
избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени или сахарный диабет.
156. Способ согласно любому из пп. 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой сахарный диабет типа I или сахарный диабет типа П.
157. Способ согласно любому из пп. 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой ожирение.
158. Способ согласно любому из пп. 153 - 155, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию или лептиновую недостаточность.
159. Фармацевтическая композиция, содержащая сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 152 и фармацевтически приемлемый наполнитель.
160. Фармацевтическая композиция согласно п. 159, причем указанная
фармацевтическая композиция представляет собой инъецируемую фармацевтическую
композицию.
161. Фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 159 - 160, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию замедленного высвобождения или длительного действия.
162. Фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 159 - 161, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой вводимую один раз в день фармацевтическую композицию.
163. Фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 159 - 161, причем указанная фармацевтическая композиция представляет собой вводимую один раз в неделю фармацевтическую композицию.
164. Фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 159 - 163 для лечения заболевания или нарушения у субъекта.
165. Фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 159 - 164, причем указанное заболевание или нарушение могут представлять собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени, сахарный диабет (включая тип I и тип II), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольную жировую дистрофию печени (NAFLD) и метаболический синдром X.
161.
166. Фармацевтическая композиция согласно п. 164 или п. 165, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию, дислипидемию, гиперлипидемию, избыточную массу тела, ожирение, гипоталамическую аменоррею, болезнь Альцгеймера, лептиновую недостаточность, жировую дистрофию печени или сахарный диабет.
167. Способ согласно любому из пп. 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой сахарный диабет типа I или сахарный диабет типа П.
168. Способ согласно любому из пп. 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой ожирение.
169. Способ согласно любому из пп. 164 - 166, причем указанное заболевание или нарушение представляет собой липодистрофию или лептиновую недостаточность.
170. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 18, в котором указанный HD1 выбран из группы, состоящей из
(a) аминокислотной последовательности 1-146 лептина, выбранной из группы,
состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ
ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID
N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ
ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23,
SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID
N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ
ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой аминокислота заменена на
отличную в одном или нескольких из следующих положений при сохранении прежней
нумерации (даже в отсутствие глутаминильного остатка в положении 28): 4, 32, 33, 35, 50,
64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145;
(b) аминокислотной последовательности согласно подразделу (а), в которой глутаминильный остаток в положении 28 отсутствует;
(c) аминокислотной последовательности согласно подразделам (а) или (Ь), в которой метонильный остаток добавлен на N-конце;
(d) лептина, состоящего из фрагмента аминокислотной последовательности (а), (Ь)
или (с), выбранного из группы, состоящей из
(i) аминокислот 98-146;
(ii) аминокислот 1-32;
(iii) аминокислот 40-116;
(iv) аминокислот 1-99 и 112-146;
(v) аминокислот 1-99 и 112-146, в которых одна или несколько из аминокислот 100111 расположены между аминокислотами 99 и 112;
(vi) аминокислотной последовательности согласно подразделу (i), в которой одна или несколько из аминокислот 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145 заменены другой аминокислотой;
(vii) аминокислотной последовательности согласно подразделу (ii), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 8 и 32 заменены другой аминокислотой;
(viii) аминокислотной последовательности согласно подразделу (iii), в которой одна или несколько из аминокислот 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 и 112 заменены другой аминокислотой;
(ix) аминокислотной последовательности согласно подразделу (iv), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142, и 145 заменены другой аминокислотой; и
(x) аминокислотной последовательности согласно подразделу (v), в которой одна или несколько из аминокислот 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142, и 145 заменены другой аминокислотой;
(xi) аминокислотной последовательности согласно любому из подразделов (i)-(x), в которой метионин добавлен на N-конце;
(e) аминокислотной последовательности согласно любому из подразделов (а) - (d),
причем указанная аминокислотная последовательность присоединена к химическому
фрагменту;
(f) аминокислотной последовательности согласно подразделу (е), в которой указанный химический фрагмент представляет собой фрагмент растворимого в воде полимера;
(g) аминокислотной последовательности согласно подразделу (f), в которой
указанный фрагмент растворимого в воде полимера выбран из группы, состоящей из
полиэтиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля,
карбоксиметилцеллюлозы, декстрана, поливинилового спирта, поливинилпиролидона,
(f)
поли-1,3-диоксолана, поли-1,3,6-триокеана, сополимера этилена и малеинового ангидрида, гомополимера полиаминокислоты, случайного сополимера полиаминокислоты, альбумина, Fc-белка, поли(п-винилпирролидон)полиэтиленгликоля, гомополимера пропиленгликоля, сополимера полипропиленоксида и этиленоксида, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полиэтиленгликольпропионового альдегида, сукцината и стирола;
(h) аминокислотной последовательности согласно подразделу (g), в которой
указанный фрагмент растворимого в воде полимера представляет собой
полиэтиленгликоль; и
(i) аминокислотной последовательности согласно подразделу (g), в которой
указанный растворимый в воде полимер представляет собой полиаминокислоту, альбумин,
антитело, Fc-белок и полилизиновый фрагмент.
171. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 18 и 170, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны одна или несколько аминокислотных замен.
172. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой была сделана одна аминокислотная замена.
171.
173. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны две аминокислотные замены.
174. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны три аминокислотные замены.
175. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 18 и 171, в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны четыре аминокислотные замены.
171.
176. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны пять аминокислотных замен.
177. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны шесть аминокислотных замен.
178. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны семь аминокислотных замен.
171.
179. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны восемь аминокислотных замен.
180. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны девять аминокислотных замен.
181. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны десять аминокислотных замен.
171.
182. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 11 аминокислотных замен.
183. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 12 аминокислотных замен.
184 Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 18и 171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 13 аминокислотных замен.
185. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 14 аминокислотных замен.
186. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 15 аминокислотных замен.
187. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 16 аминокислотных замен.
185.
188. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 17 аминокислотных замен.
189. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 18 аминокислотных замен.
190. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 19 аминокислотных замен.
185.
191. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой были сделаны 20 аминокислотных замен.
192. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1-18и171,в котором указанный HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:145 и SEQ ID N0:146; в которой была сделана 21 аминокислотная замена.
193. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:143.
194. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:144.
165. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:145.
196. Сконструированный полипептид согласно любому из пп. 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:146.
197. Способ лечения ожирения у субъекта, предусматривающий периферическое введение терапевтически эффективных количеств по меньшей мере двух различных средств против ожирения, причем по меньшей мере одно средство против ожирения
196.
представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина (т.е. амилиновое средство) и по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего альбумин домена (ABD); и первый пептидный горональный домен (HD1), выбранный из лептина, аналога лептина или их активного фрагмента.
198. Способ снижения массы тела у субъекта, предусматривающий периферическое введение терапевтически эффективных количеств по меньшей мере двух различных средств против ожирения, причем по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой амилин, аналог амилина, агонист амилина или производное амилина (т.е. амилиновое средство) и по меньшей мере одно средство против ожирения представляет собой сконструированный полипептид, содержащий полипептид связывающего альбумин домена (ABD); и первый пептидный горональный домен (HD1), выбранный из лептина, аналога лептина или их активного фрагмента.
199. Способ согласно любому из пп. 197 или 198, в котором по меньшей мере одно амилиновое средство против ожирения представляет собой агонист амилина.
200. Способ согласно любому из пп. 197 - 199, в котором агонист амилина содержит аналог или производное амилина.
201. Способ согласно любому из пп. 197 - 200, в котором аналог или производное амилина содержит прамлинтид.
202. Способ согласно любому из пп. 197 - 201, в котором аналог или производное амилина содержит соединение, раскрытое в таблице 4.
203. Способ согласно любому из пп. 197 - 202, в котором аналог или производное амилина содержит Ве8-Ьуз1-[Ьу826(тРЕО40К)]-прамлинтид (SEQ ID NO: 214).
204. Способ согласно любому из пп. 197 - 203, в котором ABD содержит любой из пептидов, выбранных из группы, состоящей из
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSYINRAKTVEGVHTLIGinLAALP (SEQ ID N0:38), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVNALTHHILAALP (SEQ ID N0:39), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINRARTVEGVHALIDHILAALP (SEQ ID NO:40), LAEAK V L A N R E L D К Y G V S D Y Y К N11N R А К TV E G V RALKLHILAALP (SEQ ID N0:41), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVSSLKGHILAALP (SEQ ID N0:42), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:43),
LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVDALIAHILAALP (SEQ ID N0:44), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKSLINRAKTVEGVDALTSHILAALP (SEQ ID N0:45), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNLINRAKTVEGVNSLTSHILAALP (SEQ ID N0:46), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKNVTNKAKTVEGVEALIADILAALP (SEQ ID N0:47), LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVQALIAHILAALP (SEQ ID N0:48), LAEAKVLANRELDKYGVSDFYKRLINKAKTVEGVEALKLFnLAALP (SEQ ID N0:49), LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALTLHILAALP (SEQ ID N0:50), LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKNLINKAKTVEGVEALISEILAALP (SEQ ID N0:51), и LAEAKEDAIKELDKYGVSDYYKRLISKAKTVEGVKALISEILAALP (SEQ ID N0:52).
205. Способ согласно любому из пп. 197 - 204, в котором HD1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:24, SEQ ID N0:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID N0:27, SEQ ID N0:28, SEQ ID NO: SEQ ID N0:29, SEQ ID N0:30, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:32, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:144, SEQ ID NO: 145 и SEQ ID N0:146.
206. Способ согласно любому из пп. 197 - 205, в котором HD1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:29.
207. Способ согласно любому из пп. 197 - 206, в котором сконструированный полипептид содержит соединение, раскрытое в таблице 2.
208. Способ согласно любому из пп. 197 - 207, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:53, SEQ ID N0:54, SEQ ID N0:55, SEQ ID N0:56, SEQ ID N0:57, SEQ ID N0:58, SEQ ID N0:59, SEQ ID N0:60, SEQ ID N0:61, SEQ ID N0:62, SEQ ID N0:63, SEQ ID N0:64, SEQ ID N0:65, SEQ ID N0:66, SEQ ID N0:67, SEQ ID N0:68, SEQ ID N0:69, SEQ ID N0:70, SEQ ID N0:71, SEQ ID N0:72, SEQ ID N0:73, SEQ ID N0:74, SEQ ID N0:75, SEQ ID N0:76, SEQ ID N0:77, SEQ ID N0:78, SEQ ID N0:79, SEQ ID N0:80, SEQ ID N0:81, SEQ ID N0:82, SEQ ID N0:83, SEQ ID N0:84, SEQ ID N0:85 SEQ ID N0:86, SEQ ID N0:87, SEQ ID N0:88, SEQ ID N0:89, SEQ ID N0:90, SEQ ID N0:91, SEQ
205.
ID N0:92, SEQ ID N0:93, SEQ ID N0:94, SEQ ID N0:95, SEQ ID N0:96, SEQ ID N0:97, SEQ ID N0:98, SEQ ID N0:99, SEQ ID N0:100, SEQ ID N0:101, SEQ ID N0:102, SEQ ID N0:103, SEQ ID N0:104, SEQ ID N0:105, SEQ ID N0:106 и SEQ ID N0:107.
209. Способ согласно любому из пп. 197 - 208, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:54.
210. Способ согласно любому из пп. 197 - 208, в котором сконструированный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:61.
211. Способ согласно любому из пп. 197-210, в котором эффективное количество амилинового средства и эффективное количество сконструированного полипептида содержит количество, обеспечивающее большее уменьшение массы тела при введении указанному субъекту амилинового средства в сочетании с сконструированным полипептидом, нежели уменьшение массы тела при введении любого из средств по отдельности.
212. Способ согласно любому из пп. 197 - 211, в котором два средства вводят одновременно.
213. Способ согласно любому из пп. 197 - 212, в котором два средства смешивают
вместе.
214. Способ согласно любому из пп. 197 - 213, в котором значение BMI субъекта составляет более 25.
215. Способ согласно любому из пп. 197 - 214, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 35.
216. Способ согласно любому из пп. 197 - 215, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 40.
217. Способ согласно любому из пп. 197 - 216, в котором значение BMI субъекта составляет 25 - 45.
218. Способ согласно любому из пп. 197 - 217, в котором значение BMI субъекта составляет 35 - 45.
219. Способ согласно любому из пп. 197 - 218, в котором значение BMI субъекта снижено до менее чем 30.
220. Способ согласно любому из пп. 197 - 219, в котором значение BMI субъекта снижено до менее чем 25.
214.
221. Способ согласно любому из пп. 197 - 220, в котором значение BMI субъекта снижено до нормы.
222. Способ согласно любому из пп. 197 - 221, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 4 недель лечения.
223. Способ согласно любому из пп. 197 - 222, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 8 недель лечения.
224. Способ согласно любому из пп. 197 - 223, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 12 недель лечения.
225. Способ согласно любому из пп. 197 - 224, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 20 недель лечения.
226. Способ согласно любому из пп. 197 - 225, в котором уменьшение массы тела достигнуто в течение 24 недель лечения.
227. Способ согласно любому из пп. 197 - 226, в котором субъект представляет собой человека.
228. Способ согласно любому из пп. 197 - 227, в котором субъект представляет собой страдающего ожирением человека.
229. Способ согласно любому из пп. 197 - 228, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 10%.
230. Способ согласно любому из пп. 197 - 229, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 12%.
231. Способ согласно любому из пп. 197 - 230, в котором снижение массы тела уменьшено по меньшей мере на 15%.
214.
ФИГ. IB
200 -i
ФИГ. ЗА
ФИГ. ЗВ
Дни
ФИГ. 5
Обнаружение SEQ Ш N0:33 (непрерывная подкожная инфузия) и SEQ Ш N0:54 (инъекция один раз в неделю) у DIO крыс
SEQ ID NO: 33
12000л 100008000-
Инертный 1=1 носитель
6000-
a SEQ Ю N0:33
г/м
4000-
250 мкг/кг/день
2000Л
*Р <0.001
50000
40000-1
30000
20000-1
10000
SEQ ID NO: 54
Г*~1
Инертный носитель
a SEQ ID N0:54
1,3 мг/кг/день кэ SEQ Ю N0:54
3,0 мг/кг/день
ФИГ. 6
ФИГ. 7
ФИГ. 9В
+-SEQ ID N0:54 -•-SEQ ID N0:69 -¦-SEQ ID N0:67 ^SEQIDNO:68
ФИГ. 10
200 Н 150 100 50 0
у/,
EZH3 SEQ ID N0:54 ЕЗ SEQ ID N0:104 EZ] SEQ ID N0:105
ШШ SEQ ID NO:106 ^ SEQ ID N0:107
ФИГ. 11A
¦-SEQ ID N0:54
SEQ ID N0:104 т-SEQ ID N0:105 SEQ ID N0:106 SEQ ID N0:107
Изменение массы тела
0123456789
день
ФИГ. 11С
1-r 0.90.80.7-
?3 0.1% BSA (1) ? 1%BSA(2) Щ 1%RSA(3) g 1% HSA{4)
3000 -i
дни
ФИГ. 13
ФИГ. 14
Концентрация лекарственного средства в Концентрация лекарственного средства в плазме плазме
-10-
О 1
-BH * VVT:Инертный носитель i_ ууу. Соединение 2
-i 1-i 1 r
2 3 4 5 8
день
ФИГ. 15A
т-i-i-i-i-i-i-i-i-i-г О 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
день
-ф- Инертный носитель
Соединение 2 (60 нмоль/кг, один раз в неделю)
А150 120 нмоль/кг (два раза в день)
-в- Соединение 2 (120 нмоль/кг, один раз в неделю)
ФИГ. 16
ФИГ. 17
-20-
Инертный
носитель Амилин CSI ABD1-A500 (QW) ¦- Комбинация
7 14
QW = один раз в неделю
о о
н а,
" <и
ч к
о о
ей Ю О
-20
о " о
PEG-крысиный амилин (QW) . ABD1-A500 Лептин (QW) Комбинация
лень
лень
ФИГ. 18А
ФИГ. 18В
ей Ч CD Н
3 о о
К X
CD CD
К ч
CD Н К о О
35 3 х н
CD X X ей
35 3 х
X ей Ю О
н и
о и о
-20
14 21
-г 28
Комбинация
лень
лень
ФИГ. 19А
ФИГ. 19В
ФИГ. 21С
Инертный носитель
ABDl-HuSeal Амилин
Комбинация
день
ФИГ. 22В
1000-1 800600 400 200 0J
-¦- Инертный носитель -^-Соединение 15 -*- Соединение 2
Инсулин
Нормальное
содержание
200-
Время (неделя)
ФИГ. 23А
Изменение содержания глюкозы в крови от исходного уровня через 2 недели
| | Инертный носитель | | Соединение 15
I 1 Соединение 2 I | Инсулин
-200-
-400 J
ФИГ. 23В
10i
-м- Инертный носитель -*-Соединение 15
Соединение 2
Инсулин ~°~ Нормальное
содержание
< 6Н
Время (неделя)
ФИГ. 24 А
Изменение HbAlc от исходного уровня через 2 недели
-| Инертный носитель -] Соединение 15
J Соединение 2
] Инсулин
-3J
ФИГ. 24В
* р <0,0001 по сравнению с инертным носителем с помощью ANOVA с критерием Дуннетта
Масса тела
20-
15-
- Инертный носитель -Соединение 15
- Соединение 2
- Инсулин ¦Нормальное
содержание
-i 1
1 2
Время (неделя)
ФИГ. 25А
150
100
50-
Суммарное потребление пищи
Инертный носитель
¦ Соединение 15
¦ Соединение 2
¦ Инсулин
¦ Нормальное содержание
Время (неделя)
ФИГ. 25В
ее "и;
Содержание глюкозы в крови
_ Инертный носитель/Плацебо Инертный носитель/Инсулин Соединение 15/Плацебо Соединение 15/Инсулин Инертный носитель/Плацебо (нормальное содержание)
500-
I 1 1 1 1 1 1 1
0 2 4 6 8 10 12 14
Время (дни)
ФИГ. 26А
Изменение содержания глюкозы в крови от исходного уровня через 2 недели
CZ3
Инертный носитель/Плацебо Инертный носитель/Инсулин Соединение 15/Плацебо
-200
Г Соединение 15/Инсулин
-400-
*р <0,0001 по сравнению с инертным
носителем/плацебо с помощью ANOVA с критерием Дуннетта
ФИГ. 26В
Инертный носитель/Плацебо (нормальное содержание)
-?- Инертный носитель/Плацебо -*-Инертный носитель/Инсулин -•-Соединение 15/Плацебо -о-Соединение 15/Инсулин
Гемоглобин А1с
UJ ОТ
10п
Время (неделя)
ФИГ. 27А
Изменение HbAlc от исходного уровня через 2 недели
-Н н
ей X "
X X а ю о
К CD
Оч Оч
о и о
-1-
-2-
-3-
-4J
I I
Инертный ] носитель/Плацебо ^ Инертный носитель/Инсулин
Соединение 15/Плацебо Соединение 15/Инсулин
* р <0,0001 по сравнению с инертным
носителем/плацебо с помощью ANOVA с критерием Дуннетта
ФИГ. 27В
Суммарное потребление пищи
Время (неделя)
ФИГ. 28А
-ш- Инертный носитель/Плацебо --п-Инертный носитель/Инсулин -• Соединение 15/Плацебо Соединение 15/Инсулин
% изменения массы тела от исходного уровня
I 1 1
О 1 2
Время (неделя) ^ р <о ош по сравнению с
инертным носителем/плацебо через 2 недели и 4 недели с помощью ANOVA с критерием ФИГ. 28В Дуннетта
109
112
112
133
134
VII. Примеры
136
136
144
Пример 14: Определение аффинности связывающих альбумин полипептидов
144
Пример 14: Определение аффинности связывающих альбумин полипептидов
145
Таблица 7: KD связывающих альбумин полипептидов с вариантами альбумина
145
Таблица 7: KD связывающих альбумин полипептидов с вариантами альбумина
146
Пример 17: Эффект сконструированных полипептидов, опосредованный рецепторами лептина
146
Пример 17: Эффект сконструированных полипептидов, опосредованный рецепторами лептина
147
147
149
концентрации 10, 20 и 30 мг/мл в течение по меньшей мере 1 месяца при 5-25°С, что определяли с помощью HPLC.
Таблица 10. Стабильность сконструированных полипептидов
148
151
151
153
Пример 25: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина
153
Пример 25: Синергизм сконструированных полипептидов с агонистами амилина
154
большей потере массы тела, чем результаты, наблюдаемые для каждого средства отдельно. ABDl-HuSeal вводили в дозе 120 нмоль/кг и PEG-амилин вводили в дозе 125 нмоль/кг самцам крыс DIO HSD со средней массой 500 г.
154
большей потере массы тела, чем результаты, наблюдаемые для каждого средства отдельно. ABDl-HuSeal вводили в дозе 120 нмоль/кг и PEG-амилин вводили в дозе 125 нмоль/кг самцам крыс DIO HSD со средней массой 500 г.
155
155
158
158
Вариант осуществления 24. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:4.
Вариант осуществления 24. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:4.
159
Вариант осуществления 25. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:5.
159
Вариант осуществления 25. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:5.
Вариант осуществления 34. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:14.
Вариант осуществления 34. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:14.
160
Вариант осуществления 35. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:15.
160
Вариант осуществления 35. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:15.
Вариант осуществления 44. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:24.
Вариант осуществления 44. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:24.
161
Вариант осуществления 45. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:25.
161
Вариант осуществления 45. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 20, в котором указанный HD1 представляет собой SEQ ID N0:25.
162
162
163
164
[АВМ] представляет собой связывающий альбумин мотив, и,
166
166
167
Вариант осуществления 76. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 75, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Glu.
167
Вариант осуществления 76. Сконструированный полипептид согласно любому из вариантов осуществления 1 - 75, в котором указанный линкер L1 содержит сочетание Gly и Glu.
169
169
203
203
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
115
120
125
115
120
125
Gly Cys 145
Gly Cys 145
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys 145
145
146
PRT
<213> Macaca mulatta
145
146
PRT
<213> Macaca mulatta
Ile Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
115
120
125
<213> Homo sapiens
<213> Homo sapiens
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
100
110
105
100
110
105
100
110
105
145
145
Cys 145
Cys 145
неизвестная
неизвестная
<213> Искусственная последовательность
<220>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Ser Arg Leu Lys Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Gln Leu Asp Arg
195 200 205
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys
145 150 155 160
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
100 105 110
Thr Leu Ser Gly Met Asp Gln Ile Leu Ala Thr Tyr Gln Gln Ile Leu
100 105 110
Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Ile Ile Asn Arg Ala Lys Thr Val
20 25 30
180
190
185
180
190
185
130 135 140
130 135 140
<213> Искусственная последовательность <220>
Asn Pro Gly Cys 210
Asn Pro Gly Cys 210
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
165 170 175
Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu
165 170 175
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser
130 135 140
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser
85 90 95
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
Glu Gly Val Glu Ala Leu Thr Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro Thr
35 40 45
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
195
200
205
195
200
205
130 135 140
130 135 140
85 90 95
85 90 95
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
195
200
195
200
165 170 175
165 170 175
115
120
125
115
120
125
85 90 95
85 90 95
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
195
200
205
195
200
205
145
150
160
155
145
150
160
155
100
110
105
100
110
105
50 55 60
50 55 60
<213> Искусственная последовательность <220>
Leu Ser Pro Gly Cys 210
Leu Ser Pro Gly Cys 210
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
Lys Ser Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser
165 170 175
<400> 119
<400> 119
<400> 122
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
<400> 122
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
<211> 50 <212> PRT
<211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<213> Искусственная последовательность
<220>
Gly Glu Gly Glu 20
Gly Glu Gly Glu 20
Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu
20 25 30
Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu
20 25 30
100
110
105
100
110
105
Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser Pro Glu
130 135 140
Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser Pro Glu
130 135 140
Pro Glu Cys 145
Pro Glu Cys 145
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
200
205
195
Leu Ser Pro Gly Cys
210
200
205
195
Leu Ser Pro Gly Cys
210
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<211> 18
<211> 18
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<213> Искусственная последовательность
/ о о г\ ^
<220>
<213> Искусственная последовательность
/ о о г\ ^
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
Ser Asn Thr Tyr 35
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly
20 25 30
Ser Asn Thr Tyr 35
Ser Asn Thr Tyr 35
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Ile His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Ile His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp Val
20 25 30
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly
20 25 30
<220>
<220>
<223> С-концевая NH2
<223> С-концевая NH2
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Lys Val
20 25 30
<210> 203
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Lys Val
20 25 30
<210> 203
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
<223> С-концевая NH2
<223> С-концевая NH2
полипептид
<220>
полипептид
<220>
<211> 36 <212> PRT
<211> 36 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность <220>
<213> Искусственная последовательность <220>
Ser Asn Thr Tyr 35
Ser Asn Thr Tyr 35
<210> 216 <211> 10
<210> 216 <211> 10
<400> 223
<400> 223
<210> 231
<210> 231
<400> 231 000
<400> 231 000
<210> 240
<210> 240
<400> 240 000
<400> 240 000
<400> 248 000
<400> 248 000
<210> 249
<210> 249
<400> 257 000
<400> 257 000
<210> 258
<210> 258
<400> 266 000
<400> 266 000
<210> 267
<210> 267
000
<210> 276
000
<210> 276
<210> 284
<210> 284
<400> 284
000
<400> 284
000
<210> 293
<210> 293
<400> 293
000
<400> 293
000
<400> 301 000
<400> 301 000
<210> 302
<210> 302
<400> 310 000
<400> 310 000
<210> 311
<210> 311
<400> 319 000
<400> 319 000
<210> 320
<210> 320
<210> 328 <400> 328
<210> 328 <400> 328
000
<210> 329
000
<210> 329
<210> 337
<210> 337
<400> 337 000
<400> 337 000
<210> 346
<210> 346
<400> 346 000
<400> 346 000
<400> 354 000
<400> 354 000
<210> 355
<210> 355
<400> 363 000
<400> 363 000
<210> 364
<210> 364
<400> 372 000
<400> 372 000
<210> 373
<210> 373
<210> 381 <400> 381
<210> 381 <400> 381
000
<210> 382
000
<210> 382
<210> 390
<210> 390
<400> 390 000
<400> 390 000
<210> 399
<210> 399
<400> 399 000
<400> 399 000
<400> 407 000
<400> 407 000
<210> 408 <400> 408
000
<210> 408 <400> 408
000
<400> 416 000
<400> 416 000
<210> 417 <400> 417
000
<210> 417 <400> 417
000
<210> 426 <400> 426
000
<210> 426 <400> 426
000
<210> 434 <400> 434
<210> 434 <400> 434
000
<210> 435
000
<210> 435
<210> 443
<210> 443
<400> 443 000
<400> 443 000
<210> 452
<210> 452
<400> 452 000
<400> 452 000
<400> 460 000
<400> 460 000
<210> 461
<210> 461
<400> 469 000
<400> 469 000
<210> 470
<210> 470
<210> 479 <400> 479
000
<210> 479 <400> 479
000
<210> 487 <400> 487
<210> 487 <400> 487
000
<210> 488
000
<210> 488
<210> 496
<210> 496
<400> 496 000
<400> 496 000
<210> 505
<210> 505
<400> 505 000
<400> 505 000
<400> 513 000
<400> 513 000
<210> 514
<210> 514
<400> 522 000
<400> 522 000
<210> 523
<210> 523
<400> 531 000
<400> 531 000
<210> 532
<210> 532
<210> 540 <400> 540
<210> 540 <400> 540
000
<210> 541 <400> 541
000
000
<210> 541 <400> 541
000
<210> 549
<210> 549
<400> 549
000
<400> 549
000
<210> 558
<210> 558
<400> 558 000
<400> 558 000
<400> 566 000
<400> 566 000
<210> 567
<210> 567
<400> 575 000
<400> 575 000
<210> 576
<210> 576
<400> 584 000
<400> 584 000
<210> 585
<210> 585
<210> 593 <400> 593
<210> 593 <400> 593
000
<210> 594
000
<210> 594
<210> 602
<210> 602
<400> 602 000
<400> 602 000
<210> 611
<210> 611
<400> 611 000
<400> 611 000
<210> 620
<210> 620
<400> 628 000
<400> 628 000
<210> 629
<210> 629
<400> 637 000
<400> 637 000
<210> 638
<210> 638
<210> 646 <400> 646
<210> 646 <400> 646
000
<210> 647
000
<210> 647
<210> 655
<210> 655
<400> 655 000
<400> 655 000
<210> 664
<210> 664
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 666
<400> 666
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Met Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys
1 5 10 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser
20 25 30
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro
35 40 45
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln
50 55 60
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Cys His Leu Pro Gln Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly
100 105 110
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser
130 135 140
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Val Ser
130 135 140
Pro Glu Cys 145
Pro Glu Cys 145
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser
130 135 140
Pro Gly Cys 145
<400> 678 000
<400> 678 000
<210> 679
<210> 679
<210> 687 <400> 687
<210> 687 <400> 687
000
<210> 688 <400> 688
000
000
<210> 688 <400> 688
000
<210> 696
<210> 696
<400> 696 000
<400> 696 000
<210> 705
<210> 705
<400> 705 000
<400> 705 000
<400> 713 000
<400> 713 000
<210> 714
<210> 714
<400> 722 000
<400> 722 000
<210> 723
<210> 723
<400> 731 000
<400> 731 000
<210> 732
<210> 732
<210> 740 <400> 740
<210> 740 <400> 740
000
<210> 741
000
<210> 741
<210> 749
<210> 749
<400> 749
000
<400> 749
000
<210> 758
<210> 758
<400> 758 000
<400> 758 000
<400> 766 000
<400> 766 000
<210> 767
<210> 767
<400> 775 000
<400> 775 000
<210> 776
<210> 776
<400> 784 000
<400> 784 000
<210> 785
<210> 785
<210> 793 <400> 793
<210> 793 <400> 793
000
<210> 794
000
<210> 794
<220>
<220>
Val Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Gly Ser Asn Thr Tyr 35
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
<210> 809
Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val
20 25 30
<210> 809
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<220>
<223> С-концевая NH2
полипептид
<220>
полипептид
<220>
<223> С-концевая NH2
<223> С-концевая NH2
<400> 817
<400> 817
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val
1 5 10 15
204
204
212
213
(SEQ ID NO: 119); (Gly)3Cys(Gly)4 (SEQ ID NO: 120); и GlyProAsnGlyGly (SEQ ID NO: 121).
215
215
1/29
1/29
3/29
3/29
4/29
4/29
5/29
5/29
7/29
7/29
8/29
8/29
9/29
9/29
10/29
Инертный -в- носитель
10/29
Инертный -в- носитель
10/29
Инертный -в- носитель
10/29
Инертный -в- носитель
10/29
Инертный -в- носитель
10/29
Инертный -в- носитель
11/29
250
Инертный носитель
11/29
250
Инертный носитель
12/29
Инертный -#- носитель
12/29
Инертный -#- носитель
12/29
Инертный -#- носитель
12/29
Инертный -#- носитель
13/29
13/29
13/29
13/29
14/29
14/29
15/29
15/29
16/29
16/29
17/29
17/29
18/29
19/29
CSI = непрерывная подкожная инфузия
18/29
19/29
CSI = непрерывная подкожная инфузия
20/29
19/29
CSI = непрерывная подкожная инфузия
20/29
19/29
CSI = непрерывная подкожная инфузия
21/29
21/29
22/29
22/29
23/29
Л % от исходного уровня массы тела скорректированный на инертный носитель
23/29
Л % от исходного уровня массы тела скорректированный на инертный носитель
23/29
Л % от исходного уровня массы тела скорректированный на инертный носитель
23/29
Л % от исходного уровня массы тела скорректированный на инертный носитель
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
24/29
Содержание глюкозы в крови
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25/29
Гемоглобин Ale
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
25-
26/29
27/29
27/29
27/29
27/29
27/29
27/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
28/29
29/29
29/29
29/29
29/29
29/29
29/29
|
