(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим человеческие антитела, которые специфически связываются с рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4R). Композиции могут содержать в добавление к анти-hIL-4R антителу по меньшей мере одну аминокислоту, по меньшей мере один сахар или по меньшей мере одно неионное поверхностно-активное вещество. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению проявляют существенную степень стабильности антител после хранения в течение нескольких месяцев.
Евразийское (21) 201390494 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61K39/395 (2006.01)
2013.09.30 C07K16/28 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2011.10.05
(54) СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К РЕЦЕПТОРУ ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 (IL-4R)
(31) 61/390,283; 13/253,103
(32) 2010.10.06; 2011.10.05
(33) US
(86) PCT/US2011/054856
(87) WO 2012/047954 2012.04.12
(71) Заявитель:
РИДЖЕНЕРОН
ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Дикс Дэниел Б., Тан Сяолинь (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим человеческие антитела, которые специфически связываются с рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4R). Композиции могут содержать в добавление к анти-hIL-4R антителу по меньшей мере одну аминокислоту, по меньшей мере один сахар или по меньшей мере одно неионное поверхностно-активное вещество. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению проявляют существенную степень стабильности антител после хранения в течение нескольких месяцев.
2420-195061ЕА/061 СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К РЕЦЕПТОРУ
ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 (IL-4R)
Описание
Область техники
Настоящее изобретение относится к области композиций терапевтических антител. В частности, настоящее изобретение относится к области фармацевтических композиций, содержащих человеческие антитела, которые специфически связываются с рецептором человеческого интерлейкина-4.
Список последовательностей
Соответствующий текстовый файл списка последовательностей ST.25 подан одновременно с настоящей заявкой. Содержание текстового файла включено в настоящее описание посредством ссылки. Бумажная копия списка последовательностей, которая является идентичной по содержанию соответствующему текстовому файлу ST.25, включена как часть настоящей заявки.
Предшествующий уровень техники
Терапевтические макромолекулы (например, антитела)
необходимо составлять таким образом, чтобы не только делать
молекулы подходящими для введения пациенту, но также сохранять
их стабильность при хранении и последующем применении.
Например, терапевтические антитела в водном растворе подвержены
разрушению, агрегации или нежелательным химическим
модификациям, если раствор составлен неправильно. Стабильность антител в жидкой композиции зависит не только от вида эксципиентов, используемых в композиции, но также от количества и пропорций эксципиентов относительно друг друга. Более того, при получении жидкой композиции необходимо принимать во внимание другие характеристики антител, кроме стабильности. Примеры таких дополнительных характеристик включают вязкость раствора и концентрацию антител, которую может содержать заданная композиция, и визуальное качество или вид композиции. Следовательно, при составлении терапевтических антител необходимо обращать большое внимание на получение композиции, которая остается стабильной, содержит адекватную концентрацию
антител и обладает подходящей вязкостью, а также другими характеристиками, которые допускают удобное введение композиции пациентам.
Антитела к альфа рецептору человеческого интерлейкина-4 (hIL-4Ra) являются одним примером терапевтически важной макромолекулы, которая требует соответствующего составления в композицию. AHTH-hIL-4Ra антитела являются клинически применимыми для лечения или профилактики заболеваний, таких как атопический дерматит и аллергическая астма, и других состояний. Примеры анти-Ь1Ъ-4Ка антитела описаны, в частности, в патентах США 7605237; 7608693; 7465450 и 7186809; и патентных заявках США No. 2010-0047254 и 2 010-0021476.
Хотя aHTH-hIL-4Ra антитела известны, в данной области остается необходимость в новых фармацевтических композициях, содержащих aHTH-hIL-4Ra антитела, которые являются достаточно стабильными и подходящими для введения пациентам.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение удовлетворяет приведенной выше необходимости путем обеспечения фармацевтических композиций, содержащих человеческие антитела, которые специфически связываются с альфа рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4Ra).
В одном аспекте обеспечивают жидкую фармацевтическую композицию, содержащую: (i) человеческие антитела, которые специфически связываются с альфа рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4Ra); (ii) буфер; (iii) органический сорастворитель; (iv) термический стабилизатор и (v) понизитель вязкости.
В одном варианте осуществления изобретения антитела обеспечивают в концентрации около 150 мг/мл+50 мг/мл. В другом варианте осуществления изобретения антитела обеспечивают в концентрации около 150 мг/мл+15 мг/мл. В специфическом варианте осуществления изобретения антитела обеспечивают в концентрации около 150 мг/мл.
В одном варианте осуществления изобретения антитела
включают любую одну или более последовательностей аминокислот SEQ ID N0:1-8. В одном варианте осуществления изобретения антитела включают (а) вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), включающий участки, определяющие комплементарность тяжелых цепей 1, 2 и 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3 и SEQ ID N0:4, соответственно; и (b) вариабельный участок легкой цепи (LCVR), включающий участки, определяющие комплементарность легкой цепи 1, 2 и 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7 и SEQ ID N0:8, соответственно. В специфическом варианте осуществления изобретения антитела включают HCVR и LCVR, каждый из которых включает последовательность аминокислот SEQ ID N0:1 и SEQ ID N0:5, соответственно.
В одном варианте осуществления изобретения антитела включают любую одну или более последовательностей аминокислот SEQ ID N0:9-16. В одном варианте осуществления изобретения антитела включают (а) вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), включающий участки, определяющие комплементарность тяжелых цепей 1, 2 и 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11 и SEQ ID N0:12, соответственно; и (b) вариабельный участок легкой цепи (LCVR), включающий участки, определяющие комплементарность легкой цепи 1, 2 и 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15 и SEQ ID N0:16, соответственно. В специфическом варианте осуществления изобретения антитела включают HCVR и LCVR, каждый из которых включает последовательность аминокислот SEQ ID N0:9 и SEQ ID N0:13, соответственно.
В одном варианте осуществления изобретения антитела включают любую одну или более последовательностей аминокислот SEQ ID N0:17-24. В одном варианте осуществления изобретения антитела включают (а) вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), включающий участки, определяющие комплементарность тяжелых цепей 1, 2 и 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19 и SEQ ID N0:20,
соответственно; и (b) вариабельный участок легкой цепи (LCVR), включающий участки, определяющие комплементарность легкой цепи 1, 2 и 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), каждый включающий последовательность SEQ ID N0:22, SEQ ID N0:23 и SEQ ID N0:24, соответственно. В специфическом варианте осуществления изобретения антитела включают HCVR и LCVR, каждый из которых включает последовательность аминокислот SEQ ID N0:17 и SEQ ID N0:21, соответственно.
В одном варианте осуществления изобретения рН жидкой композиции составляет около рН 5,9+0,5. В специфическом варианте осуществления изобретения рН жидкой композиции составляет около рН 5,9+0,1. В одном варианте осуществления изобретения жидкий фармацевтический буфер включает один или более буферов, которые могут держать от рН около 5,6 до около 6, 2 .
В одном варианте осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит систему буферов, которая включает, по меньшей мере, два буфера. В одном варианте осуществления изобретения система буферов включает первый буфер, имеющий эффективный диапазон рН в интервале 3,6-5,б, и второй буфер, имеющий эффективный диапазон рН в интервале 5,57,4. В одном варианте осуществления изобретения первый буфер имеет рКа около 4,8+0,3, и второй буфер имеет рКа около 6,0+0,3. В специфическом варианте осуществления изобретения первым буфером является ацетатный буфер, и вторым буфером является гистидиновый буфер. В одном специфическом варианте осуществления изобретения ацетат находится в концентрации 12,5 мМ+1,9 мМ и гистидин в концентрации 2 0 мМ+3 мМ.
В одном варианте осуществления изобретения органическим сорастворителем является неионный полимер, содержащий полиоксиэтиленовый компонент. В некоторых вариантах осуществления изобретения органическим сорастворителем является любой один или более из полисорбата 20, полоксамера 181 и полиэтиленгликоля 3350. В специфическом варианте осуществления изобретения органическим сополимером является полисорбат 20.
В одном варианте осуществления изобретения органический сорастворитель находится в концентрации от около 0,2%±0,03% до
около 1%±0,15% "массы по объему" или "масс/об", где, например, 0,1 г/мл составляет 10%, и 0,01 г/мл составляет 1%. В специфическом варианте осуществления изобретения органическим сорастворителем является полисорбат 20, который находится в концентрации около 0,2%±0,03% масс/об.
В одном варианте осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахар. В одном варианте осуществления изобретения сахар выбирают из группы, состоящей из сахарозы, маннита и трегалозы. В специфическом варианте осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахароза.
В одном варианте осуществления изобретения термический стабилизатор находится в концентрации от около 0,9%±0,135%
масс/об до около 10%±1,5% масс/об. В специфическом варианте осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахароза в концентрации около 5%±0,75% масс/об.
В одном варианте осуществления изобретения понизителем вязкости является соль, выбранная из группы, состоящей из гидрохлорида аргинина, тиоцианата натрия, тиоцианата аммония, сульфата аммония, хлорида аммония, хлорида кальция, хлорида цинка и ацетата натрия. В специфическом варианте осуществления изобретения понизителем вязкости является гидрохлорид L-аргинина.
В одном варианте осуществления изобретения понизитель вязкости находится к концентрации, которая составляет не более чем 100 мМ. В одном варианте осуществления изобретения понизитель вязкости находится в концентрации 50 мМ+7,5 мМ. В другом варианте осуществления изобретения понизитель вязкости находится в концентрации около 2 5 мМ+3,7 5 мМ. В специфическом варианте осуществления изобретения понизителем вязкости является 25 мМ+3,75 мМ гидрохлорида L-аргинина.
В одном варианте осуществления изобретения вязкость жидкой фармацевтической композиции составляет менее чем или равно
около 35+3,5 сПуаз. В одном варианте осуществления изобретения вязкость составляет около 21,5+13,5 сПуаз, около 11+1,1 сПуаз или около 8,5+0,8 5 сПуаз. В специфическом варианте осуществления изобретения вязкость жидкой фармацевтической композиции составляет около 8,5+0,8 5 сПуаз.
В одном варианте осуществления изобретения осмолярность жидкой фармацевтической композиции составляет менее чем около 450 мОсм/кг. В одном варианте осуществления изобретения осмолярность жидкой фармацевтической композиции составляет около 2 90+2 0 мОсм/кг.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, 90% или, по меньшей мере, 95% нативной формы анти-ЫЪ-4Ка антител восстанавливается из жидкой фармацевтической композиции через шесть месяцев хранения жидкой фармацевтической композиции при 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией. В специфическом варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, 98% нативной формы антител восстанавливается через шесть месяцев хранения при 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, 90% нативной формы антител восстанавливается из жидкой фармацевтической композиции через восемь недель хранения при 45°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения менее чем 45% антител, которые восстанавливаются из жидкой фармацевтической композиции через восемь недель хранения при 4 5°С, находятся в кислой форме, что определяют катионообменной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения менее чем около 4% антител, которые восстанавливаются из жидкой фармацевтической композиции через шесть месяцев хранения при 25°С, являются агрегированными, что определяют обменной эксклюзионной хроматографией.
В одном аспекте обеспечивают жидкую фармацевтическую композицию, содержащую: (i) около 150 мг/мл+50 мг/мл
человеческих антител, которые специфически связываются с hlL-4Ra, где антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR) и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), включающие последовательность аминокислот SEQ ID N0:1 и SEQ ID N0:5, соответственно; (ii) около 12,5 мМ+2 мМ ацетата; (iii) около 20 мМ+3 мМ гистидина; (iv) около 5%±0,75% (масс/об) сахарозы; (v) около 0,2%±0,03% (масс/об) полисорбата 20; и (vi) около 25 мМ+3,7 5 мМ аргинина, при рН около 5,9+0,5.
В одном варианте осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция имеет вязкость от около 8,5+0,85
сПуаз до около 11+1,1 сПуаз. В специфическом варианте осуществления изобретения вязкость жидкой фармацевтической композиции составляет около 8,5+0,8 5 сПуаз.
В одном варианте осуществления изобретения жидкая
фармацевтическая композиция является физиологически
изотоничной. В одном варианте осуществления изобретения осмолярность жидкой фармацевтической композиции составляет около 2 90+2 0 мОсм/кг.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, около 98% нативной формы aHTH-hIL4-Ra антител восстанавливается из жидкой композиции через шесть месяцев
хранения при 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, около 90% нативной формы aHTH-hIL4-Ra антител восстанавливается из жидкой фармацевтической композиции через восемь недель хранения при 45°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения менее чем около 45% антител, которые восстанавливаются из жидкой фармацевтической композиции через восемь недель хранения при 45°С, находится в кислой форме, что определяют катионообменной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения менее чем 4% антител, которые восстанавливаются из жидкой фармацевтической
композиции через шесть недель хранения при 25°С, являются агрегированными, что определяют обменной эксклюзионной хроматографией.
В одном аспекте обеспечивают стабильную изотоничную жидкую фармацевтическую композицию с низкой вязкостью, которая содержит, по меньшей мере, 100 мг/мл стабильного антитела анти-hIL4-Ra. В одном варианте осуществления изобретения антитела находятся в концентрации около 150 мг/мл+50 мг/мл. В специфическом варианте осуществления изобретения концентрация антител составляет около 150 мг/мл+15 мг/мл.
В одном варианте осуществления изобретения антитела включают любую одну или более последовательностей аминокислот SEQ ID N0:1-8. В одном варианте осуществления изобретения антитела включают вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR) и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), где комбинация HCVR/LCVR включает участки, определяющие комплементарность тяжелой и легкой цепи (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3), которые включают последовательности аминокислот SEQ ID N0:2-3-4/SEQ ID N0:6-7-8, соответственно. В специфическом варианте осуществления изобретения антитела включают HCVR и LCVR, каждый из которых включает последовательность аминокислот SEQ ID N0:1 и SEQ ID N0:5, соответственно.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция имеет вязкость менее чем 35+3,5 сПуаз, менее чем 20+2 сПуаз,
менее чем 15+1,5 сПуаз или менее чем 10+1 сПуаз. В специфическом варианте осуществления изобретения жидкая композиция имеет вязкость около 8,5+2,5 сПуаз.
В одном варианте осуществления изобретения композиция имеет осмолярность, которая является физиологически совместимой. В специфическом варианте осуществления изобретения композиция имеет осмолярность 2 90+2 0 мОсм/кг.
В одном варианте осуществления изобретения антитела являются стабильными в течение, по меньшей мере, около шести месяцев при около 5°С. В специфическом варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, около 98% антител сохраняют свою
природную конформацию в течение около шести месяцев хранения при 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения антитела являются стабильными в течение, по меньшей мере, около восьми недель хранения при около 4 5°С. В специфическом варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, около 90% антител сохраняют свою нативную конформацию через примерно восемь недель хранения при 45°С, что определяют эксклюзионной хроматографией. В специфическом варианте осуществления изобретения менее чем около 4 5% антител имеют кислую форму через примерно восемь недель хранения при 45°С, что определяют катионообменной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения антитела остаются стабильными в течение, по меньшей мере, около шести месяцев хранения при около 2 5°С. В специфическом варианте осуществления изобретения менее чем около 4% антител имеют агрегированную форму после около шести месяцев хранения при 25°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
В одном варианте осуществления изобретения композиция включает буфер и имеет рН около рН 5,9+0,5. В одном варианте осуществления изобретения буфер включает ацетатный буфер и гистидиновый буфер. В специфическом варианте осуществления изобретения ацетат находится в концентрации 12,5 мМ+1,9 мМ, и гистидин находится в концентрации 2 0 мМ+3 мМ.
В одном варианте осуществления изобретения композиция включает органический сорастворитель в концентрации от около 0,2%+0,03% до около 1%+0,15% масс/об. В одном варианте осуществления изобретения органическим сорастворителем является неионный полимер, содержащий полиоксиэтиленовый компонент. В некоторых вариантах осуществления изобретения органическим сорастворителем является любой один или более из полисорбата 20, полоксамера 181 и полиэтиленгликоля 3350. В специфическом варианте осуществления изобретения органическим сорастворителем является полисорбат 20 в концентрации около 0,2%+0,03% масс/об.
В одном варианте осуществления изобретения композиция содержит термический стабилизатор в концентрации от около 0,9%±0,135% масс/об до около 10%±1,5% масс/об. В одном варианте осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахар. В одном варианте осуществления изобретения сахар выбирают из группы, состоящей из сахарозы, маннита и трегалозы. В специфическом варианте осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахароза в концентрации около 5%±0,75% масс/об.
В одном варианте осуществления изобретения композиция содержит понизитель вязкости в концентрации, которая составляет не более чем около 100 мМ. В одном варианте осуществления изобретения понизителем вязкости является аргинин. В специфическом варианте осуществления изобретения понизителем вязкости является гидрохлорид L-аргинина в концентрации 25 мМ+3,7 5 мМ.
В специфическом варианте осуществления изобретения стабильная изотоничная жидкая фармацевтическая композиция с низкой вязкостью имеет вязкость около 8,5+2,5 сПуаз и осмолярность около 290+20 мОсм/кг и включает: (i) 150 мг/мл+15 мг/мл анти-ЫЪ4-Ка антител, где антитела включают HCVR и LCVR, каждый из которых включает последовательность аминокислот SEQ ID N0:1 и SEQ ID N0:5, соответственно; (ii) 12,5 мМ+1,9 мМ ацетата; (iii) 20 мМ+3 мМ гистидина; (iv) 0,2%+0,03% масс/об полисорбата 20; (v) 5%+0,75% масс/об сахарозы; и (vi) 25 мМ+3,75 мМ гидрохлорида L-аргинина. В соответствии с указанным вариантом осуществления изобретения, (i) по меньшей мере, около 98% антител сохраняет свою нативную конформацию, что определяют эксклюзионной хроматографией при хранении при 5°С в течение, по меньшей мере, около шести месяцев, (ii) по меньшей мере, около 90% антител сохраняют свою нативную конформацию, что определяют эксклюзионной хроматографией при хранении при 4 5°С в течение, по меньшей мере, около восьми недель, (iii) менее чем около 45% антител имеют кислую форму, что определяют катионообменной
хроматографией, при хранении при 4 5°С в течение около восьми недель, и (iv) менее чем около 4% антител имеют агрегированную форму, что определяют эксклюзионной хроматографией при хранении при 25°С в течение около шести месяцев.
В одном аспекте жидкую фармацевтическую композицию по любому из предшествующих аспектов обеспечивают в контейнере. В одном варианте осуществления изобретения контейнером является стеклянный флакон. В другом варианте осуществления изобретения контейнером является микроинфузор. В другом варианте осуществления изобретения контейнером является шприц. В одном специфическом варианте осуществления изобретения шприц включает поршень, покрытый фторуглеродом. В одном специфическом варианте осуществления изобретения шприцом является низковольфрамовый шприц.
Другие варианты осуществления настоящего изобретения будут очевидны из обзора последующего подробного описания. Подробное описание изобретения
До того, как настоящее изобретение будет описано, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено определенными описанными способами и экспериментальными условиями, такие способы и условия могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, предназначена только для целей описания определенных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения, так как объем настоящего изобретения ограничен только приложенной формулой изобретения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значения, в общем понимаемые средним специалистом в данной области, к которой относится настоящее изобретение. Как используется в настоящем описании, термин "около", когда используется со ссылкой на определенное указанное числовое значение или диапазон значений, означает, что значение может варьироваться от указанного значения на не более чем 1%. Например, как используется в настоящем описании, выражение "около 100" включает 99 и 101 и
все значения между (например, 99,1 , 99,2, 99,3, 99,4 и др.).
Хотя все способы и материалы, сходные или эквивалентные описанным в настоящем описании, могут быть использованы при осуществлении или тестировании настоящего изобретения, далее описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, приведенные в настоящем описании, включены в настоящее описание посредством ссылки для описания во всей их полноте.
Фармацевтические композиции
Как используется в настоящем описании, выражение
"фармацевтическая композиция" означает комбинацию, по меньшей
мере, одного активного ингредиента (например, малой молекулы,
макромолекулы, соединения и др., которое способно развивать
биологический эффект у человека или животного, не являющегося
человеком), и, по меньшей мере, одного неактивного ингредиента,
который при комбинировании с активным ингредиентом или одним
или более дополнительными неактивными ингредиентами, подходит
для терапевтического введения человеку или животному, не
являющемуся человеком. Термин "композиция", как используется в
настоящем описании, означает "фармацевтическую композицию",
если особым образом не указано иное. Настоящее изобретение
обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие, по
меньшей мере, один терапевтический полипептид. В соответствии с
определенными вариантами осуществления настоящего изобретения,
терапевтическим полипептидом является антитело или его
антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются специфически с
альфа рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4Ra). Более
конкретно, настоящее изобретение включает фармацевтические
композиции, которые содержат: (i) человеческие антитела,
которые специфически связываются с hIL-4Ra; (ii) систему
ацетатного/гистидинового буфера; (iii) органический
сорастворитель, которым является неионное поверхностно-активное вещество; (iv) термический стабилизатор, которым является углеводород; и (v) понизитель вязкости. Специфические примеры компонентов и композиций, включенных в настоящее описание, подробно описаны ниже.
Антитела, которые специфически связываются с hIL-4R
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению
могут включать человеческое антитело или его антигенсвязывающий
фрагмент, который специфически связывается с hIL-4Ra. Как
используется в настоящем описании, термин "hIL-4Ra" означает
рецептор человеческого цитокина, который специфически
связывается с интерлейкином-4 (IL-4). В определенных вариантах
осуществления изобретения антитела, содержащиеся в
фармацевтических композициях по настоящему изобретению, специфически связываются с внеклеточным доменом hIL-4Ra. Пример последовательности аминокислот альфа рецептора человеческого IL-4 (hIL-4Ra) описан в SEQ ID N0:25. Антитела к hIL-4Ra описаны в патентах США 7 605237 и 7 608 693. Внеклеточный домен hIL-4Ra представлен последовательностью аминокислот SEQ ID N0:26.
Термин "антитело", как используется в настоящем описании,
обычно относится к молекулам иммуноглобулина, включающим четыре
полипептидных цепи, две тяжелых (Н) цепи и две легких (L) цепи,
связанные дисульфидными связями, а также их мультимерам
(например, IgM); однако, молекулы иммуноглобулина, состоящие
только из тяжелых цепей (т.е. не имеющие легких цепей), также
охватываются определением термина "антитело". Каждая тяжелая
цепь включает вариабельный участок тяжелой цепи (сокращенный в
данном описании как HCVR или VH) и постоянный участок тяжелой
цепи. Постоянный участок тяжелой цепи включает три домена, СН1,
СН2 и СНЗ. Каждая легкая цепь включает вариабельный участок
легкой цепи (сокращенный в настоящем описании как LCVR или VL)
и постоянный участок легкой цепи. Постоянный участок легкой
цепи включает один домен (CL1) . Участки VH и VL могут быть
дополнительно подразделены на участки гипервариабельности,
называемые участками, определяющими комплементарность (CDR),
перемежающиеся участками, которые являются более
консервативными, называемыми каркасными участками (FR) . Каждый VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных с аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Если особым образом не указано иное, термин "антитело",
как используется в настоящем описании, необходимо понимать как охватывающий полные молекулы антител, а также их антигенсвязывающие фрагменты. Термин "антигенсвязывающая часть" или "антигенсвязывающий фрагмент" антитела (или просто "часть антитела" или "фрагмент антитела"), как используется в настоящем описании, относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с hIL-4Ra или его эпитопом.
"Изолированное антитело", как используется в настоящем описании, предназначено для обозначения антитела, которое по существу свободно от других антител, имеющих различные антигенные специфики (например, выделенное антитело, которое специфически связывается с hIL-4Ra, является по существу свободным от антител, которые специфически связываются с антигенами, иными, чем hIL-4Ra).
Термин "специфически связывается" или подобные означает,
что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует
комплекс с антигеном, который является относительно стабильным
в физиологических условиях. Специфическое связывание может быть
охарактеризовано константой диссоциации, по меньшей мере, около
1x1 СГ6 М или более. Способы определения, могут ли две молекулы
специфически связываться, хорошо известны в данной области и
включают, например, равновесный диализ, поверхностный
плазмоновый резонанс и подобные. Выделенное антитело, которое
специфически связывается с hIL-4Ra, может, однако, перекрестно
взаимодействовать с другими антигенами, такими как молекулы IL-
4R других видов (ортологи). В контексте настоящего изобретения
мультиспецифические (например, биспецифические) антитела,
которые связываются с hIL-4Ra, а также с одним или более
дополнительными антигенами, считаются "специфически
связывающими" hIL-4Ra. Более того, выделенное антитело может быть по существу свободным от других клеточных материалов или химических веществ.
Примеры aHTH-hIL-4Ra антител, которые могут быть включены в фармацевтические композиции по настоящему изобретению,
представлены в US 7605237 и US 7608693, описание которых включено посредством ссылки во всей их полноте.
В соответствии с определенными вариантами осуществления настоящего изобретения анти-п1Ъ-4Ка антитело представляет собой человеческий IgGl, включающий вариабельный участок тяжелой цепи, которым является подтип IGHV3-9, и вариабельный участок легкой цепи, которым является подтип IGKV2-2 8 (см. Barbie and Lefranc, The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments, Exp. Clin. Immunogenet. 1998; 15:171 -183; и Scaviner, D. et al. , Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable and Joining Regions, Exp. Clin. Immunogenet., 1999; 16:234-240).
В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-hIL-
4Ra включает, по меньшей мере, одну замену аминокислоты,
которая приводит к изменению заряда на выставленной поверхности
антитела относительно исходной последовательности IGHV3-9 или
исходной последовательности IGKV2-28. Исходные
последовательности IGHV3-9 и IGKV2-28 и обозначения положений
номеров аминокислот, представленных в настоящем описании,
соответствуют международной информационной системе
Immunogenetics (IMGT), как описано в Lefranc, М.-Р., et al.,
IMGT(r), the international ImMunoGeneTics information system(r),
Nucl. Acids Res, 37, D1006-D1012 (2009). В некоторых вариантах
осуществления изобретения поверхность, подвергаемая
воздействию, включает участок, определяющий комплементарность
(CDR) . В некоторых вариантах осуществления изобретения замену или замены аминокислот выбирают из группы, состоящей из (а) основной аминокислоты, замененной нейтральной аминокислотой в рамках CDR2 (например, в положении 58) IGHV3-9, (Ь) нейтральной аминокислоты, замененной кислой аминокислотой в рамках CDR3
(например, в положении 107) IGHV3-9, (с) нейтральной аминокислоты, замененной основной аминокислотой в рамках CDR1
(например, в положении 33) IGKV2-28. Уникальные перестановки в распределении заряда антитела, особенно на границе с окружающей средой (такой как, например, в CDR) ожидаемо создают непредсказуемые условия для стабильности антитела в растворе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-hIL-
4Ra антитело включает, по меньшей мере, одну замену
аминокислот, которая создает изменение деформации скручивания в
каркасном участке антитела относительно исходной
последовательности IGHV3-9 или исходной последовательности IGKV2-28. В некоторых вариантах осуществления изобретения замену или замены аминокислот выбирают из группы, состоящей из (а) пролина, замененного непролиновой аминокислотой в каркасном участке 3 (FR3) (например, в положении 96) IGHV3-9, и (Ь) непролиновой аминокислоты, замененной пролином в каркасном участке 2 (FR2) (например, в положении 46) IGKV2-28. Изменения способности пептидной цепи вращаться, особенно в области каркасного участка, что влияет на взаимодействие CDR с растворителем, вероятно, могут создать непредсказуемые условия для стабильности антитела в растворе.
В соответствии с определенными вариантами осуществления настоящего изобретения, aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающий фрагмент включают участок, определяющий комплементарность тяжелой цепи (HCDR) 1 SEQ ID N0:2, HCDR2 SEQ ID N0:3 и HCDR3 SEQ ID N0:4. В определенных вариантах осуществления изобретения aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающий фрагмент включают HCVD SEQ ID N0:1.
В соответствии с определенными вариантами осуществления
настоящего изобретения aHTH-aHTH-hIL-4Ra или его
антигенсвязывающий фрагмент включают участок, определяющий комплементарность легкой (каппа) цепи (LCDR) 1 SEQ ID N0:6, LCDR2 SEQ ID N0:7 и LCDR3 SEQ ID N0:8. В определенных вариантах осуществления изобретения aHTH-aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включают LCVD SEQ ID N0:5.
В соответствии с определенными другими вариантами осуществления настоящего изобретения aHTH-aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включают HCDR1 SEQ ID N0:10, HCDR2 SEQ ID N0:11, HCDR3 SEQ ID N0:12, LCDR1 SEQ ID N0:14, LCDR2 SEQ ID N0:15 и LCDR3 SEQ ID N0:16. В определенных вариантах осуществления изобретения aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включают HCVD SEQ ID N0:9 и
LCVD SEQ ID N0:13.
В соответствии с определенными другими вариантами осуществления настоящего изобретения анти-п1Ъ-4Ка антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включает HCDR1 SEQ ID N0:18, HCDR2 SEQ ID N0:19, HCDR3 SEQ ID N0:20, LCDR1 SEQ ID N0:22, LCDR2 SEQ ID N0:23 и LCDR3 SEQ ID N0:24. В определенных вариантах осуществления изобретения aHTH-hIL-4Ra антитела или их антигенсвязывающие фрагменты включают HCVD SEQ ID N0:17 и LCVD SEQ ID N0:21.
Неограничивающие примеры антител, используемых в примерах
в настоящем описании, называют как "тАЫ". Указанные антитела
также представлены в US 7608693 как Н4Н098Р. тАЫ (Н4Н098Р)
включает пару последовательностей аминокислот HCVR/LCVR, SEQ ID
N0:1/5, и HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домены,
представленные SEQ ID NO:2-3-4/SEQ ID N0:6-7-8.
Другие неограничивающие примеры антител, которые могут
быть использованы при осуществлении настоящего изобретения,
называют как "тАЬ2". Указанные антитела также представлены в US
7608693 как Н4Н083Р. тАЬ2 (Н4Н083Р) включает пару
последовательностей аминокислот HCVR/LCVR, имеющую SEQ ID
N0:9/13, и HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домены,
представленные SEQ ID NO:10-11-12/SEQ ID N0:14-15-16.
Еще одним неограничивающим примером антитела, которое может быть использовано при осуществлении настоящего изобретения, является "тАЬЗ". Указанное антитело также представлено в US 7608693 как Н4Н095Р. тАЬЗ (Н4Н095Р) включает пару последовательностей аминокислот HCVR/LCVR, имеющих SEQ ID N0:17/21, и HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домены, представленные SEQ ID N0:18-19-20/SEQ ID N0:22-23-24.
Количество антител или их антигенсвязывающих фрагментов,
содержащееся в фармацевтических композициях по настоящему
изобретению, может варьироваться в зависимости от специфических
желаемых свойств композиций, а также определенных обстоятельств
и целей, для которых предназначено применение композиций. В
определенных вариантах осуществления изобретения
фармацевтические композиции являются жидкими композициями,
которые могут содержать от около 10 0+10 мг/мл до около 2 0 0+2 0 мг/мл антитела; от около 110+11 мг/мл до около 190+19 мг/мл антитела; от около 120+12 мг/мл до около 180+18 мг/мл антитела; от около 130+13 мг/мл до около 170+17 мг/мл антитела; от около 140+14 мг/мл до около 160+16 мг/мл антитела; около 150+15 мг/мл антитела. Например, композиции по настоящему изобретению могут включать около 90 мг/мл; около 95 мг/мл; около 100 мг/мл; около 105 мг/мл; около 110 мг/мл; около 115 мг/мл; около 12 0 мг/мл; около 12 5 мг/мл; около 130 мг/мл; около 131 мг/мл; около 132 мг/мл; около 133 мг/мл; около 134 мг/мл; около 135 мг/мл; около 14 0 мг/мл; около 145 мг/мл; около 150 мг/мл; около 155 мг/мл; около 160 мг/мл; около 165 мг/мл; около 17 0 мг/мл; около 175 мг/мл; около 180 мг/мл; около 185 мг/мл; около 190 мг/мл; около 195 мг/мл или около 200 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего, которые специфически связываются с hlL-4Ra.
Эксципиенты и рН
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают одно или более эксципиентов. Термин "эксципиет", как используется в настоящем описании, означает любое нетерапевтическое средство, добавляемое к композиции для обеспечения желаемой консистенции, вязкости и стабилизирующего эффекта.
В определенных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция по изобретению содержит, по меньшей мере, один органический сорастворитель типа и в количестве, которое стабилизирует антитела hIL-4Ra в условиях небрежного обращения, таких как, например, встряхивание. В некоторых вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует" понимают предотвращение образования более чем 2% агрегированных антител от общего количества антител (на молярной основе) при небрежном обращении. В некоторых вариантах осуществления изобретения небрежным обращением является встряхивание раствора, содержащего антитела и органический сорастворитель, в течение около 12 0 минут.
В определенных вариантах осуществления изобретения органическим сорастворителем является неионное поверхностно-активное вещество, такое как алкилполи(этиленоксид). Специфические неионные поверхностно-активные вещества, которые могут быть включены в композиции по настоящему изобретению, включают, например, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 28, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81 и полисорбат 8 5; полоксамеры, такие как полоксамер 181, полоксамер 188, полоксамер 407 или полиэтиленгликоль (PEG). Полисорбат 2 0 также известен как TWEEN 20, монолаурат сорбита и монолаурат полиоксиэтиленсорбита. Полоксамер 181 также известен как PLURONIC F68.
Количество органического сорастворителя, содержащееся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, может варьироваться в зависимости от специфических свойств, желаемых для композиций, а также от определенных обстоятельств и целей, для которых предназначено применение композиций. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции могут содержать от около 0,1%±0,01% до около 2%±0,2% поверхностно-активного вещества. Например, композиции по настоящему изобретению могут включать около 0,09%; около 0,10%; около 0,11%; около 0,12%; около 0,13%; около 0,14%; около 0,15%; около 0,16%; около 0,17%; около 0,18%; около 0,19%; около 0,2 0%; около 0,21%; около 0,22%; около 0,23%; около 0,24%; около 0,25%; около 0,2 6%; около 0,27%; около 0,2 8%; около 0,2 9% или около 0,3 0% полисорбата 20 или полоксамера 181. Например, композиции по настоящему изобретению могут включать около 0,5%; около 0,6%; около 0,7%; около 0,8%; около 0,9%; около 1%; около 1,1%; около 1,2%; около 1,3%; около 1,4%; около 1,5%; около 1,6%; около 1,7%; около 1,8%; около 1,9% или около 2,0% PEG 3350.
Примеры органических сорастворителей, которые
стабилизируют антитела hIL-4Ra, включают 0,2%±0,02% полисорбата 20, 0,2%±0,02% полоксамера 181 или 1%±0,1 % PEG 3350.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут содержать один или более термических стабилизаторов
типа и в количестве, которые стабилизируют антитела hIL-4Ra в условиях термического стресса. В некоторых вариантах осуществления изобретения термин "стабилизирует" означает поддержание более чем около 92% антител в нативной конформации, когда раствор, содержащий антитела и термический стабилизатор, хранят при около 4 5°С в течение до около 2 8 дней. В некоторых вариантах осуществления изобретения "стабилизирует" означает, что менее чем около 5% антител агрегированы, когда раствор, содержащий антитела и термический стабилизатор, хранят при
около 45°С в течение до около 28 дней.
В определенных вариантах осуществления изобретения термическим стабилизатором является сахар или сахарный спирт, выбранный из сахарозы, трегалозы и маннита, или любой их комбинации, количество которых, содержащееся в композиции, может варьироваться в зависимости от специфических обстоятельств и предназначенного применения, для которого используется композиция. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции могут содержать от около 2,5% до около 10% сахара или сахарного спирта; от около 3% до около 9,5% сахара или сахарного спирта; от около 3,5% до около 9% сахара или сахарного спирта; от около 4% до около 8,5% сахара или сахарного спирта; от около 4,5% до около 8% сахара или сахарного спирта; от около 5% до около 7,5% сахара или сахарного спирта; от около 5,5% до около 7% сахара или сахарного спирта или от около б, 0% до около б, 5% сахара или сахарного спирта. Например, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут включать около 2,5%±0,375%; около 3%±0,45%; около 3,5%±0,525%; около 4,0%±0,б%; около 4,5%±0,б75%; около 5,0%±0,75%; около 5,5%±0,825%; около б,0%±0,9%; около б,5%±0,975%; около 7,0%±1,05%; около 7,5%±1,125%; около 8,0%±1,2%; 8,5%+1,275%; около 9,0%±1,35% или около 10,0%±1,5% сахара или сахарного спирта (например, сахарозы, трегалозы или маннита).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут включать буфер или систему буферов, которые
предназначены для поддержания стабильного рН и для улучшения стабильности hIL-4Ra антител. В некоторых вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует" понимают, что менее чем 3,0%±0,5% антител агрегируются, когда раствор,
содержащий антитела и буфер, хранят при около 45°С в течение до
около 14 дней. В некоторых вариантах осуществления изобретения
под "стабилизирует" понимают, что менее чем 3,7%±0,5% антител
агрегированы, когда раствор, содержащий антитела и буфер,
хранят при около 2 5°С в течение около б месяцев. В некоторых
вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует"
понимают, что, по меньшей мере, 95%±0,5% антител находится в их
нативной конформации, что определяют эксклюзионной
хроматографией, когда раствор, содержащий антитела и буфер,
хранят при около 4 5°С в течение до около 14 дней. В некоторых
вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует"
понимают, что, по меньшей мере, 9б%±0,5% антител находится в их
нативном состоянии, что определяют эксклюзионной
хроматографией, когда раствор, содержащий антитела и буфер, хранят при около 2 5°С в течение до около б месяцев. В некоторых вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует" понимают, что, по меньшей мере, б2%±0,5% антител находится в их нейтральной конформации, что определяют катионообменной хроматографией, когда раствор, содержащий антитела и буфер, хранят при около 4 5°С в течение до около 14 дней. В некоторых вариантах осуществления изобретения под "стабилизирует" понимают, что, по меньшей мере, 54%±0,5% антител находится в их нейтральной конформации, что определяют катионообменной хроматографией, когда раствор, содержащий антитела и буфер, хранят при около 25°С в течение до около б месяцев. Под "нейтральной конформацией", понимают фракцию антител, которая элюирует из ионообменной смолы в главном пике, который обычно ограничен более "щелочными" пиками с одной стороны и более "кислыми" пиками с другой стороны.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению
могут иметь рН от около 5,2 до около 6,4. Например, композиции по настоящему изобретению могут иметь рН около 5,2; около 5,3; около 5,4; около 5,5; около 5,6; около 5,7; около 5,8; около 5,9; около 6,0; около 6,1; около 6,2; около 6,3 или около 6,4. В некоторых вариантах осуществления изобретения рН составляет около 5,3+0,2; около 5,9+0,2 или около 6,0+0,2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер или система буферов включают, по меньшей мере, один буфер, который имеет буферный диапазон, который полностью или частично охватывает диапазон рН 5,2-6,4. В одном варианте осуществления изобретения буфер или система буферов включает два буфера, первый из которых имеет эффективный диапазон рН в пределах 3,65,6, и второй, который имеет эффективный диапазон рН в пределах 5,5-7,4. В одном варианте осуществления изобретения первый буфер имеет рКа около 4,8+0,3, и второй буфер имеет рКа около 6,0+0,3. В определенных вариантах осуществления изобретения система буферов включает ацетатный буфер и гистидиновый буфер. В определенных вариантах осуществления изобретения гистидин присутствует в количестве 1,3-1,9 частей на 1 часть ацетатного буфера по моль. В определенных вариантах осуществления изобретения гистидин присутствует в количестве около 1,6+0,25 частей на 1 часть ацетата по моль. В определенных вариантах осуществления изобретения ацетат присутствует в концентрации от около 2,5 мМ до около 22,5 мМ; от около 3,0 мМ до около 22 мМ; от около 3,5 мМ до около 21,5 мМ; от около 4,0 мМ до около 21,0 мМ; от около 4,5 мМ до около 20,5 мМ; от около 5,0 мМ до около 20 мМ; от около 5,5 мМ до около 19,5 мМ; от около 6,0 мМ до около 19,0 мМ; от около 6,5 мМ до около 18,5 мМ; от около 7,0 мМ до около 18,0 мМ; от около 7,5 мМ до около 17,5 мМ; от около 8,0 мМ до около 17 мМ; от около 8,5 мМ до около 16,5 мМ; от около 9,0 мМ до около 16,0 мМ; от около 9,5 мМ до около 15,5 мМ; от около 10,0 мМ до около 15,0 мМ; от около 10,5 мМ до около 14,5 мМ; от около 12,5 мМ+1,875 мМ; от около 11,0 мМ до около 14,0 мМ; от около 11,5 мМ до около 13,5 мМ или от около 12,0 мМ до около 13,0 мМ. В определенных вариантах
осуществления изобретения гистидин присутствует в концентрации от около 10 мМ до около 3 0 мМ; от около 11 мМ до около 2 9 мМ; от около 12 мМ до около 28 мМ; от около 13 мМ до около 27 мМ; от около 14 мМ до около 2 6 мМ; от около 15 мМ до около 2 5 мМ; от около 16 мМ до около 2 4 мМ; от около 17 мМ до около 2 3 мМ; от около 18 мМ до около 22 мМ или от около 19 мМ до около 21 мМ. В определенных вариантах осуществления изобретения система буферов включает ацетат в количестве около 12,5 мМ и гистидин в количестве около 20 мМ, при рН около 5,9.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут включать одно или более эксципиентов, которые предназначены для поддержания пониженной вязкости или для снижения вязкости композиций, содержащих высокую концентрацию белка (например, обычно > 100 мг/мл белка). В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция включает аргинин в количестве, достаточном для поддержания вязкости жидкой композиции менее чем около 35 сПуаз, менее чем около 30 сПуаз, менее чем около 2 5 сПуаз, менее чем около 2 0 сПуаз, менее чем около 15 сПуаз, менее чем около 14 сПуаз, менее чем около 13 сПуаз, менее чем около 12 сПуаз, менее чем около 10 сПуаз или менее чем около 9 сПуаз.
В определенных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит аргинин, предпочтительно гидрохлорид L-аргинина, в концентрации около 25 мМ±3,75 мМ, около 50 мМ+7,5 мМ или около 100 мМ±15 мМ. В определенных вариантах осуществления изобретения аргинин находится в количестве от около 20 мМ до около 30 мМ, от около 21 мМ до около 29 мМ, от около 21,25 мМ до около 28, 75 мМ, от около 22 мМ до около 28 мМ, от около 23 мМ до около 27 мМ или от около 24 мМ до около 26 мМ.
Примеры композиций
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения фармацевтическая композиция представляет собой, как правило, физиологически изотоничную жидкую композицию с низкой вязкостью, которая содержит: (i) человеческие антитела, которые
специфически связываются с hIL-4Ra (например, тАЫ, тАЬ2 или тАЬЗ [выше]), в концентрации около 100 мг/мл или более; (ii) систему буферов, которая обеспечивает достаточную буферность на
уровне около 5,9+0,6; (iii) сахар, который предназначен, между прочим, в качестве термического стабилизатора; (iv) органический сорастворитель, который защищает структурную целостность антител; и (v) аминокислоту, которая предназначена для поддержания вязкости, приемлемой для подкожной инъекции.
В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит: (i) человеческие антитела IgGl, которые специфически связываются с hIL-4Ra, и которые включают замещенный вариабельный участок тяжелой цепи типа IGHV3-9 и замещенный вариабельный участок легкой цепи типа IGLV2-28 (например, тАЫ) в концентрации от около 100 мг/мл до около 200 мг/мл; (ii) систему буферов, включающую ацетат и гистидин, которая эффективно поддерживает рН около 5,9+0,6; (iii) сахарозу в качестве термического стабилизатора; (iv) полисорбат в качестве органического сорастворителя; и (v) аргинин в качестве понизителя вязкости.
В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит: (i) человеческие антитела IgGl, которые специфически связываются с hIL-4Ra, и которые включают HCDR1 SEQ ID N0:2, HCDR2 SEQ ID N0:3, HCDR3 SEQ ID N0:4, LCDR1 SEQ ID N0:6, LCDR2 SEQ ID N0:7 и LCDR3 SEQ ID N0:8, в концентрации около 150 мг/мл+25 мг/мл; (ii) ацетат в концентрации около 12,5 мМ+1,9 мМ и гистидин в концентрации около 2 0 мМ±3 мМ, которые эффективно забуферивают при рН около 5,9+0,3; (iii) сахарозу в концентрации около 5% масс/об+0,75% масс/об; (iv) полисорбат 20 в концентрации около 0,2% масс/об+0,03% масс/об; и (v) аргинин в виде гидрохлорида L-аргинина в концентрации около 2 5 мМ+3,7 5 мМ.
Дополнительные неограничивающие примеры фармацевтических композиций, охватываемые настоящим изобретением, представлены далее в настоящем описании, включая рабочие примеры, представленные ниже.
Стабильность и вязкость фармацевтических композиций
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению
обычно проявляют высокую стабильность. Термин "стабильный", как
используется в настоящем описании в отношении фармацевтических
композиций, означает, что антитела в фармацевтических
композициях сохраняют приемлемую степень химической структуры
или биологической функции после хранения в определенных
условиях. Композиция может быть стабильной даже если антитела,
содержащиеся в ней, не сохраняют 100% своей химической
структуры или биологической функции после хранения в течение
определенного количества времени. В определенных
обстоятельствах сохранение около 90%, около 95%, около 96%, около 97%, около 98% или около 99% структуры или функции антител после хранения в течение определенного количества времени может быть расценено как "стабильный".
Стабильность может быть измерена, между прочим, путем определения процента нативных антител, которые остаются в композиции после хранения в течение определенного количества времени при определенной температуре. Процент нативных антител может быть определен, между прочим, эксклюзионной хроматографией (например, эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии [Э-ВЭЖХ]). "Приемлемая степень стабильности", как используется в настоящем описании, означает, что, по меньшей мере, 90% нативной формы антител может быть определено в композиции после хранения в течение определенного количества времени при заданной температуре. В определенных вариантах осуществления изобретения, по меньшей мере, около 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% антител нативной формы может быть определено в композиции после хранения в течение определенного периода времени при определенной температуре. Определенным количеством времени, после которого измеряют стабильность, может быть, по меньшей мере, 2 недели, по меньшей мере, 1 месяц, по меньшей мере, 2 месяца, по меньшей мере, 3 месяца, по меньшей мере, 4 месяца, по меньшей мере, 5 месяца, по меньшей мере, б месяцев, по меньшей мере, 7 месяцев, по меньшей мере, 8 месяцев, по меньшей
мере, 9 месяцев, по меньшей мере, 10 месяцев, по меньшей мере, 11 месяцев, по меньшей мере, 12 месяцев, по меньшей мере, 18 месяцев, по меньшей мере, 24 месяцев или более. Определенной температурой, при которой можно хранить фармацевтическую композицию при оценке стабильности, может быть любая температура от около -80°С до около 45°С, например, хранение при около -30°С, около -20°С, около 0°С, около 4°-8°С, около 5°С, около 25°С или около 45°С. Например, фармацевтическая композиция может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 5°С более чем около 90%, 95%, 96%, 97% или 98% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если через б месяцев хранения при 5°С более чем около 90%, 95%, 96%, 97% или 98% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 9 месяцев хранения при 5°С более чем около 90%, 95%, 96%, 97% или 98% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 25°С более чем около 90%, 95%, 96% или 97% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после б месяцев хранения при 25°С более чем около 90%, 95%, 96% или 97% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 9 месяцев хранения при 25°С более чем около 90%, 95%, 96% или 97% нативных антител определяются Э-ВЭЖХ.
Стабильность может быть измерена, между прочим, путем
определения процента антител, которые образуют агрегаты в
композиции после хранения в течение определенного периода
времени при определенной температуре, где стабильность обратно
пропорциональна проценту образующегося агрегата. Процент
агрегированных антител может быть определен, между прочим,
эксклюзионной хроматографией (например, эксклюзионной
высокоэффективной жидкостной хроматографией [Э-ВЭЖХ]).
"Приемлемая степень стабильности", как эту фразу используют в настоящем описании, означает, что не более 5% антител находятся в агрегированной форме, определяемой в композиции после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре. В определенных вариантах осуществления изобретения приемлемая степень стабильности означает, что не более примерно 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител может быть определено в агрегате в композиции после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре. Определенное количество времени, после которого измеряют стабильность, может составлять, по меньшей мере, 2 недели, по меньшей мере, 1 месяц, по меньшей мере, 2 месяца, по меньшей мере, 3 месяца, по меньшей мере, 4 месяца, по меньшей мере, 5 месяцев, по меньшей мере, б месяцев, по меньшей мере, 7 месяцев, по меньшей мере, 8 месяцев, по меньшей мере, 9 месяцев, по меньшей мере, 10 месяцев, по меньшей мере, 11 месяцев, по меньшей мере, 12 месяцев, по меньшей мере, 18 месяцев, по меньшей мере, 2 4 месяца или более. Температурой, при которой может храниться фармацевтическая композиция при оценке стабильности, может быть любая температура от около -80°С до около 45°С, например, хранение при около -30°С, около -20°С, около 0°С, около 4°-8°С, около 5°С, около 25°С или около 45°С. Например, фармацевтическая композиция может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 5°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяют в агрегированной форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после б месяцев хранения при 5°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяются в агрегированной форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 9 месяцев хранения при 5°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяются в агрегированной форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 25°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяются в агрегированной форме.
Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после б месяцев хранения при 25°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяются в агрегированной форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 9 месяцев хранения при 25°С менее чем около 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител определяются в агрегированной форме.
Стабильность может быть измерена, между прочим, путем определения процента антител, которые мигрируют в более кислую фракцию во время обмена ионов ("кислая форма") чем в главную фракцию антител ("нейтральная конформация"), где стабильность обратно пропорциональна фракции антител в кислой форме. Не желая быть связанными с теорией, деамидирование антител может вызывать формирование более отрицательно заряженного антитела и, следовательно, более кислого относительно недеамидированного антитела (см., например, Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99 (8):5283-5288) . Процент "подкисленного" или "деамидированного" антитела может быть определен, между прочим, ионообменной хроматографией (например, катионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографией [КО-ВЭЖХ]). "Приемлемая степень стабильности", как эта фраза используется в настоящем описании, означает, что не более 45% антител находится в композиции в более кислой форме после хранения в течение определенного периода времени при определенной температуре. В определенных вариантах осуществления изобретения приемлемая степень стабильности означает, что не более примерно 4 5 ts ^ 4 0 ts j 35ts^ 3 0 ts ^ 2 5 ts ^ 2 0 ts ^ 15 ts ^ 10 ts ^ 5 ts ^ 4 ts ^ 3 ts ^ 2 ts ^ 1 'б / 0,5% или 0,1 % антител могут быть определены в кислой форме в композиции после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре. Определенное количество времени, после которого измеряют стабильность, может составлять, по меньшей мере, 2 недели, по меньшей мере, 1 месяц, по меньшей мере, 2 месяца, по меньшей мере, 3 месяца, по меньшей мере, 4 месяца, по меньшей мере, 5 месяцев, по меньшей мере, б месяцев, по меньшей мере, 7 месяцев, по меньшей мере, 8
месяцев, по меньшей мере, 9 месяцев, по меньшей мере, 10 месяцев, по меньшей мере, 11 месяцев, по меньшей мере, 12 месяцев, по меньшей мере, 18 месяцев, по меньшей мере, 2 4 месяца или более. Температурой, при которой фармацевтическая композиция может храниться при оценке стабильности, может быть любая температура от около -80°С до около 45°С, например, хранение при около -30°С, около -20°С, около 0°С, около 4°-8°С, около 5°С, около 25°С или около 45°С. Например, фармацевтическая композиция может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 5°С, менее чем около 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител находится в более кислой форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 3 месяцев хранения при 25°С менее чем около 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител находятся в более кислой форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 8 недель хранения при 45°С менее чем около 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5% или 0,1% антител находятся в более кислой форме. Фармацевтическая композиция также может быть расценена стабильной, если после 2 недель хранения при 40°С менее чем около 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%,
1 Л 9 1 Я9 199- 119- 1 П9 Q9 Р9 79- ?9 R9 Л 9 Я 9- 99 19
1 4 о ^ _1_ О о , _L Z. о , 11 о ^ _1_ U о , о , О о , ' о , О о , J о / 4 о / О о , Z. о , -L о ,
0,5% или 0,1% антител могут быть определены в более кислой форме.
Другие способы могут быть использованы для оценки
стабильности композиций по настоящему изобретению, такие как,
например, дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) для
определения термической стабильности, контролируемое
перемешивание для определения механической стабильности и поглощение при около 350 нм или около 4 05 нм для определения мутности раствора. Например, композиция по настоящему изобретению может быть расценена стабильной, если после б или более месяцев хранения при от 5°С до около 25°С изменение ОП405 композиции составляет менее чем около 0,05 (например, 0,04,
0, 03, 0, 02, 0, 01 или менее) от ОП405 композиции в нулевой момент времени.
Стабильность также может быть оценена путем измерения биологической активности или аффинности связывания антитела с его мишенью. Например, композиция по настоящему изобретению может быть расценена как стабильная, если после хранения,
например, при 5°С, 25°С, 45°С и др., в течение определенного количества времени (например, от 1 до 12 месяцев), анти-1Ъ-4Ка антитела, содержащиеся в композиции, связываются с IL-4Ra с аффинностью, которая составляет, по меньшей мере, 90%, 95% или более аффинности связывания антител перед указанным хранением. Аффинность связывания может быть определена, например, ELISA или плазмоновым резонансом. Биологическая активность может быть определена анализом активности IL-4Ra, такого как, например, контакт клетки, которая экспрессирует IL-4Ra, с композицией, содержащей aHTH-IL-4Ra антитела. Связывание антител с такой клеткой может быть измерено непосредственно, например, с помощью FACS анализа. Альтернативно, нижележащая активность системы IL-4Ra может быть измерена в присутствии антитела и агониста IL-4Ra и сравнена с активностью системы IL-4Ra в отсутствии антител. В некоторых вариантах осуществления изобретения IL-4Ra может быть эндогенным для клетки. В других вариантах осуществления изобретения IL-4Ra может эктопически экспрессироваться в клетке.
Дополнительные способы оценки стабильности антител в композиции продемонстрированы в примерах, представленных ниже.
Жидкие фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут в определенных вариантах осуществления изобретения проявлять вязкость от низкой до умеренной. "Вязкость", как используется в настоящем описании, может быть "кинематической вязкостью" или "абсолютной вязкостью". "Кинематическая вязкость" представляет собой меру резистивного потока жидкости под влиянием гравитации. Когда две жидкости равного объема помещают в идентичные капиллярные вискозиметры и позволяют течь под действием гравитации, причем для протекания
через капилляр вязкой жидкости требуется больше времени, чем
менее вязкой. Например, если для одной жидкости завершение тока
занимает 200 секунд и для другой жидкости занимает 400 секунд,
вторая жидкость является в два раза более вязкой, чем первая по
шкале кинематической вязкости. "Абсолютная вязкость", иногда
называемая динамической или простой вязкостью, является
продуктом кинематической вязкости и плотности жидкости
(Абсолютная вязкость=Кинематическая вязкостьхПлотность).
Измерением кинематической вязкости является L2/T, где L представляет собой длину, и Т представляет собой время. Обычно кинематическую вязкость выражают в сантистоксах (сСт). Единица СИ кинематической вязкости представляет собой мм2/с, что составляет 1 сСт. Абсолютную вязкость выражают в единицах сантипуаз (сП) . Единица СИ абсолютной вязкости является миллиПаскаль-секунду (мПа-с), где 1 сП=1 мПа-с.
Как используется в настоящем описании, низкий уровень вязкости, в отношении жидкой композиции по настоящему изобретению, означает абсолютную вязкость менее чем около 15 сПуаз (сП) . Например, жидкая композиция по изобретению расценивается как имеющая "низкую вязкость", если при измерении с использованием стандартных методик измерения вязкости, композиция проявляет абсолютную вязкость около 15 сП, около 14 сП, около 13 сП, около 12 сП, около 11 сП, около 10 сП, около 9 сП, около 8 сП или менее. Как используется в настоящем описании, умеренный уровень вязкости, в отношении жидкой композиции по настоящему изобретению, означает абсолютную вязкость от около 35 сП до около 15 сП. Например, жидкая композиция по изобретению расценивается как имеющая "умеренную вязкость", если при измерении с использованием стандартных методик измерения вязкости, композиция проявляет абсолютную вязкость около 34 сП, около 33 сП, около 32 сП, около 31 сП, около 30 сП, около 29 сП, около 28 сП, около 27 сП, около 26 сП, около 25 сП, около 24 сП, около 23 сП, около 22 сП, около 21 сП, около 20 сП, около 19 сП, 18 сП, около 17 сП, около 16 сП или около 15,1 сП.
Как проиллюстрировано в примерах ниже, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что жидкие композиции с вязкостью от низкой до умеренной, включающие высокие концентрации анти-п1Ъ-4Ка антител (например, от около 100 мг/мл до, по меньшей мере, 200 мг/мл), могут быть получены путем составления в композиции антител с аргинином от около 2 5 мМ до около 100 мМ. Кроме того, дополнительно было обнаружено, что вязкость композиции может быть снижена даже в большей степени путем регуляции содержания сахарозы до менее чем около 10%.
Контейнеры для фармацевтических композиций и способы введения
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержаться в любом контейнере, подходящем для хранения лекарственных препаратов и других терапевтических композиций. Например, фармацевтические композиции могут содержаться в герметичном и стерилизованном пластиковом или стеклянном контейнере, имеющем определенный объем, такой как флакон, ампула, шприц, картридж или бутыль. Различные типы флаконов могут быть использованы для содержания композиций по настоящему изобретению, включая, например, прозрачные и непрозрачные (например, янтарные) стеклянные или пластиковые флаконы. Также любой тип шприцов может быть использован для содержания или введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержаться в "нормальновольфрамовых" шприцах или "низковольфрамовых" шприцах. Как будет понятно специалисту в данной области, способ получения стеклянных шприцов обычно включает применение горячего вольфрамового стержня, который действует, прокалывая флакон, создавая при этом отверстие, из которого жидкость может быть получена и вытолкнута из шприца. Указанный способ приводит к отложению следовых количеств вольфрама на внутренней поверхности шприца. Последующая промывка и другие стадии обработки могут быть использованы для уменьшения количества вольфрама в шприце. Как используется в настоящем описании, термин "нормальновольфрамовый" означает, что шприц содержит более чем 500 частей на миллиард (ч./млд.)
вольфрама. Термин "низковольфрамовый" означает, что шприц содержит менее чем 500 ч./млд. вольфрама. Например, низковольфрамовый шприц, в соответствии с настоящим изобретением, может содержать менее чем около 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 или меньше ч./млд. вольфрама.
Резиновые поршни, используемые в шприцах, и резиновые пробки, используемые для закрытия отверстий флаконов, могут быть покрыты оболочкой для предотвращения контаминации медицинского содержимого шприца или флакона, или для сохранения их стабильности. Следовательно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению, в соответствии с определенными вариантами осуществления изобретения, могут содержаться в шприце, который включает покрытый оболочкой поршень, или во флаконе, который закрыт покрытой оболочкой резиновой пробкой. Например, поршень или пробка могут быть покрыты фторуглеродной пленкой. Примеры покрытых оболочкой пробок или поршней, подходящих для применения с флаконами и шприцами, содержащими фармацевтические композиции по настоящему изобретению, приведены, например, а патентах США 4997423; 5908686; 6286699; 6645635 и 722 6554, содержание которых включено посредством ссылки в настоящее описание во всей их полноте. Определенные примерные покрытые оболочкой резиновые пробки и поршни, которые могут быть использованы в контексте настоящего изобретения, коммерчески доступны под торговым названием "FluroTec(r)", доступные от West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA) .
В соответствии с определенными вариантами осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции могут содержаться в низковольфрамовом шприце, который включает поршень, покрытый фторуглеродом.
Фармацевтические композиции можно вводить пациенту парентеральными путями, такими как инъекция (например, подкожная, внутривенная, внутримышечная, интраперитонеальная и др.) или чрескожным, чрезслизистым, назальным, легочным или
пероральным путем. Множество ручек многоразового использования или автоинъекционных устройств для введения могут быть использованы для подкожной доставки фармацевтических композиций по настоящему изобретению. Примеры включают, но не ограничиваются ими, AUTOPEN(tm) (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK) , ручку DISETRONIC(tm) (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland) , ручку HUMALOG MIX 75/25(tm), ручка HUMALOG(tm), ручку HUMALI N 70/30(tm) (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN(tm) I, II и III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR(tm) (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), ручка BD(tm) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) , OPTI PEN(tm), OPTIPEN PRO(tm), OPTI PEN STARLET(tm) и OPTICLI K(tm) (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany). Примеры ручек многоразового использования или автоинъекционных устройств для введения, имеющих применение в подкожной доставке фармацевтической композиции по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, ручку SOLOSTAR(tm) (sanofi-aventis), FLEXPEN(tm) (Novo Nordisk) и KWIKPEN(tm) (Eli Lilly), SURECLICK(tm) Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA) , PENLET(tm)
(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) и ручку HUMIRA(tm) (Abbott Labs, Abbott Park, IL).
Применение микроинфузора для введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению также предусматривается в настоящем описании. Как используется в настоящем описании, термин "микроинфузор" означает устройство для подкожного введения, созданное для медленного введения больших объемов
(например, до около 2,5 мл или более) терапевтической композиции в течение длительного периода времени (например, около 10, 15, 20, 25, 30 или более минут). См., например, U.S. 6629949; US 6659982; и Meehan et al, J. Controlled Release 46:107-1 16 (1996). Микроинфузоры являются особенно подходящими для введения больших доз терапевтических белков, содержащихся в высокой концентрации (например, около 100, 125, 150, 175, 200 или более мг/мл) или вязких растворов.
В одном варианте осуществления изобретения жидкую фармацевтическую композицию, содержащую около 150 мг/мл+15
мг/мл aHTM-IL-4Ra антитела, вводят подкожно в объеме приблизительно 1 мл+0,15 мл из заранее заполненного шприца в автоинжекторе. В другом варианте осуществления изобретения композицию вводят в объеме от около 1 мл до 2,5 мл из микроинфузорного устройства. Композиция может быть заранее заполнена в мешок или картридж для применения в микроинфузоре. Терапевтическое применение фармацевтических композиций Фармацевтические композиции по настоящему изобретению являются применимыми, между прочим, для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или расстройства, ассоциированного с активностью IL-4, включая заболевания или расстройства, опосредованные активацией IL-4Ra. Примеры неограничивающих заболеваний и расстройств, которые можно лечить или предотвратить путем введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению, включают различные атопические заболевания, такие как, например, атопический дерматит, аллергический конъюнктивит, аллергический ринит, астма и другие заболевания, опосредованные IgE/Th2.
Следовательно, настоящее изобретение включает способы лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или расстройства, ассоциированного с активностью IL-4 или активацией IL-4Ra (включая любое из приведенных выше примеров заболеваний, расстройств и состояний). Терапевтические способы по настоящему изобретению включают введение пациенту любой композиции, содержащей aHTH-hIL-4Ra антитела, как описано в настоящем описании. Пациентом, которому вводят фармацевтическую композицию, может быть, например, любой человек или животное, не являющееся человеком, которое нуждается в таком лечении, профилактике или облегчении, или которое может иным образом получить пользу от ингибирования или подавления активности, опосредованной IL-4 или IL-4Ra. Например, пациентом может быть индивидуум, у которого диагностирован или который вероятно имеет риск развития любого из приведенных выше заболеваний или расстройств. Настоящее изобретение дополнительно включает применение любой из фармацевтических композиций, описанных в
настоящем описании, в производстве лекарственного препарата для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или расстройства, ассоциированного с активностью IL-4 или активацией IL-4Ra (включая любое из приведенных выше примеров заболеваний, расстройств и состояний). ПРИМЕРЫ
Следующие примеры представлены для обеспечения обычного специалиста в данной области полной информацией и описанием, как получать и применять способы и композиции по изобретению, и не предназначены для ограничения объема, которым авторы оценивают свое изобретение. Производились попытки обеспечить точность относительно используемых цифр (например, количества, температура и др.), но некоторые экспериментальные ошибки и отклонения необходимо принимать во внимание. Если не указано иное, части представляют собой мольные части, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура представлена в градусах по Цельсию, и давление представлено в или около атмосферном давлении.
Опытные работы относительно исходной композиции включали
скрининг органических сорастворителей, термических
стабилизаторов и буферов в жидких композициях тАЫ (анти-1Ъ-4Ка антитела по изобретению), чтобы определить эксципиенты, которые совместимы с белком и улучшают его стабильность, при сохранении осмолярности и вязкости для подкожной инъекции. Буферные условия также исследовали для определения оптимального рН для максимальной стабильности белка.
Пример 1. Органические сорастворители
Наблюдали, что тАЫ являются нестабильными при воздействии
стресса взбалтывания. Анализы высокоэффективной жидкостной
хроматографией с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) и эксклюзионной
высокоэффективной жидкостной хроматографией (Э-ВЭЖХ)
продемонстрировали потерю белка и увеличение агрегатов белка, когда тАЫ встряхивали при комнатной температуре (таблица 1, см. данные "отсутствие сорастворителя"). Добавление органических сорастворителей к раствору тАЫ предотвращало разложение белка, что измеряли Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ (таблица 1) .
Однако наблюдали, что добавление некоторых органических сорастворителей снижает термическую стабильность тАЫ (таблица 2) . Потерю восстановления белка наблюдали в композициях, содержащих PEG 3350 (3%) и PEG 300 (10% и 20%), что определяли ОФ-ВЭЖХ после термического стресса (таблица 2) . Кроме того, имело место большее образование агрегатов в композициях, содержащих PLURONIC F68 (полоксамер 181) (0,2%), PEG 300 (10% и 20%) и пропиленгликоль (20%), чем в композициях без сорастворителя, что определяли Э-ВЭЖХ. Полисорбат 20 (0,2%) и полисорбат 8 0 (0,2%) обеспечивали сравнимую стабильность к встряхиванию и термическому стрессу.
Согласно таблице 1, 0,3 мл 15 мг/мл тАЫ в 10 мМ фосфата, рН 6,0 и различные органические сорастворители в 2 мл стеклянном флаконе подвергали встряхиванию в течение около 12 0 минут. Мутность оценивали посредством оптической плотности (ОП) при 4 05 нм и представляли как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Процент общего восстановленного тАЫ определяли ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) . Процент нативных и агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ). Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах "исходное вещество" представляют собой среднее значение каждой композиции в отсутствии встряхивания.
Органический сорастворитель
Внешний вид
Мутность
Общий % тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
% нативных тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
% агрегата тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
Исходное вещество2 (отсутствие встряхивания)
Удовл.
0, 00
6, 0
100
96, 8
1,8
Отсутствие сорастворителя
Неуд.
0, 87
б, 0
95, 8
3,5
0,2%
полисорбат 2 0
Удовл.
0, 01
5,9
97, 0
1,7
0,2%
полисорбат 8 0
Удовл.
0, 00
5,9
100
96, 6
2, 0
0,2%
плюроник F68
Удовл.
0, 00
5,9
96, 9
1,7
3% PEG 3350
Удовл.
0, 00
б, 0
102
96, 7
2, 0
1% PEG 3350
Удовл.
0, 01
б, 0
96, 8
1,8
20% PEG 300
Удовл.
0, 01
5,9
101
96, 1
2, 6
10% PEG 300
Удовл.
0, 01
б, 0
100
96, 7
2, 0
20%
пропиленгликоль
Удовл.
0, 00
б, 0
101
96, 7
2, 0
Согласно таблице 2, 0,3 мл 15 мг/мл тАЫ в 10 мМ фосфата, рН 6,0 и различные органические сорастворители в 2 мл стеклянном флаконе хранили при около 4 5°С в течение около 2 8 дней. Мутность оценивали по оптической плотности (ОП) при 405 нм и сообщали как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Процент всех восстановленных тАЫ определяли ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Процент нативных и агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ). Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах "исходного вещества", представляют собой среднее из значений каждой композиции в отсутствие термического стресса.
Органический сорастворитель
Внешний вид
Мутность
Общий % тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
% нативных тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
% агрегата тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
Исходное вещество (отсутствие ускорения)
Удовл.
0, 00
6, 0
100
96, 8
1,8
Отсутствие сорастворителя
Удовл.
0, 00
6, 2
94, 9
3,5
0,2% полисорбат 20
Удовл.
0, 00
б, 3
94, б
3, б
0,2% полисорбат 80
Удовл.
0, 00
б, 2
94, 3
3, 8
0,2% плюроник F68
Удовл.
0, 00
б, 2
93, 0
5,1
3% PEG 3350
Удовл.
0, 00
б, 2
96, 5
1,4
1% PEG 3350
Удовл.
0, 01
б, 0
94, б
3, 8
20% PEG 300
Удовл.
0, 04
4,5
8,5
87,5
10% PEG 300
Удовл.
0, 02
4,8
57, 7
38, 1
20%
пропиленгликоль
Удовл.
0, 00
б, 3
93, 6
4,7
Различные термические стабилизаторы, такие как сахара, аминокислоты и неорганические соли, исследовали в отношении их способности ингибировать деградацию тАЫ при хранении при около 4 5°С. Резюме исследуемых термических стабилизаторов представлено в таблице 3. Композиции, содержащие или сахарозу или трегалозу, оказывали наибольший стабилизирующий эффект на тАЫ в растворе при инкубации при повышенной температуре (что определяли по Э-ВЭЖХ). Сахарозу выбирали в качестве стабилизатора, так как она имеет историю безопасного применения в композициях моноклональных антител.
Согласно таблице 3, 0,3 мл 25 мг/мл тАЫ в 10 мМ ацетата, рН 5,3 и различные термические стабилизаторы в 2 мл стеклянном
флаконе хранили при около 4 5°С в течение около 2 8 дней. Мутность оценивали по оптической плотности (ОП) при 405 нм и
Пример 2. Термические стабилизаторы
сообщали как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Мутность была незначительной для всех образцов. Процент всех восстановленных тАЫ определяли ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Процент нативных и агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ). Кислые и основные виды определяли как сумму пиков тАЫ, которые элюируют из катионообменной колонки (КО-ВЭЖХ) с более ранним или более поздним временем удерживания, чем основной пик, соответственно. Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах "исходного вещества", представляют собой среднее из значений каждой композиции в отсутствие термического стресса.
Пример 3. Буферы и рН
Также исследовали эффект рН и вариантов буферов на стабильность тАЫ. 15 мг/мл тАЫ инкубировали в различных буферах при различных значениях рН, варьирующихся от рН 4,5 до 7,0. Стабильность белка отслеживали Э-ВЭЖХ и катионообменной ВЭЖХ (КО-ВЭЖХ). Максимальную стабильность белка наблюдали, что
определяли как по Э-ВЭЖХ, так и КО-ВЭЖХ, когда тАЫ составляли при рН 6,0 в гистидиновом буфере или при рН 5,3 в ацетатном буфере (таблица 4 и таблица 5) . Система ацетатного буфера обеспечивала более широкий диапазон стабильности рН и более низкую скорость изменений вариантов композиции относительно композиции, содержащей гистидиновый буфер (таблица 5). Следовательно, ацетатный буфер при рН 5,3 выбирали отчасти для составления лекарственного вещества тАЫ.
Согласно таблице 4, 0,3 мл 15 мг/мл тАЫ, 0,2% полисорбата 20, смешивали с 10 мМ различных буферов в 2 мл стеклянном
флаконе, хранили при около 4 5°С в течение около 14 дней. Мутность оценивали по оптической плотности (ОП) при 405 нм и сообщали как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Мутность была незначительной для всех образцов. Процент всех восстановленных тАЫ определяли ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Процент нативных и агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ). Кислые и основные виды определяли как сумму пиков тАЫ, которые элюируют из катионообменной колонки (КО-ВЭЖХ) с более ранним или более поздним временем удерживания, чем основной пик, соответственно. Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах "исходного вещества", представляют собой среднее из значений каждой композиции в отсутствие термического стресса.
Буфер и рН
Общий % восстановленных тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
% нативных восстановленных тАЫ (Э-ВЭЖХ)
% агрегата восстановленных тАЫ (Э-ВЭЖХ)
% восстановленных2 тАЫ (КО-ВЭЖХ)
Кислый пик
Главный пик
Щелочной пик
Исходное вещество3 (отсутствие инкубации при 4 5°С)
100
96, 8
1,7
19, 1
66, 4
14,5
рН 7,0, фосфат
93, 9
4,5
39, 1
50, 1
10, 8
рН 6,5, фосфат
94, 4
4,0
31,7
55, 9
12,5
рН 6,0, фосфат
95, 2
3,1
23, 8
62, 2
14, 0
рН 6,0, гистидин
95, 5
2, 8
23, 9
61, 8
14,3
рН 6,0, сукцинат
94, 8
3,5
26,7
59, 6
13,7
рН 6,0, цитрат
95, 5
2,9
26,1
59, 8
14, 1
рН 5,5, цитрат
94, 7
3,4
25, 0
60, 9
14,2
рН 5,0, цитрат
89, 5
7,4
23, 6
61,5
15, 0
рН 5,0, ацетат
94, 7
3, 6
18, 1
66, 3
15, 5
рН 4,5, ацетат
89, 9
8,3
20, 8
62, 8
16,4
Согласно таблице 5, 0,3 мл 15 мг/мл тАЫ, 0,2% полисорбата 20, комбинированные с 10 мМ различных буферов в 2 мл стеклянном
флаконе хранили при около 4 5°С в течение около 14 дней. Мутность оценивали по оптической плотности (ОП) при 405 нм и сообщали как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Мутность была незначительной для всех образцов. Процент всех восстановленных тАЫ определяли ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Процент нативных и агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ). Кислые и основные виды определяли как сумму пиков тАЫ, которые элюируют из катионообменной колонки (КО-ВЭЖХ) с более ранним или более поздним временем удерживания, чем главный пик, соответственно. Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах "исходного вещества", представляют собой среднее из значений каждой композиции в отсутствие термического стресса.
Исследования по разработке композиции показали, что в щелочных условиях (рН> 6,5), тАЫ в растворе могут деамидироваться. Наоборот, ниже рН 5,0 наблюдали увеличение
скорости образования вариантов молекулярной массы тАЫ. На основании полученных данных рН композиции тАЫ поддерживали от
Эффект рН и вариантов буферов на стабильность тАЫ дополнительно оценивали в композициях, содержащих или 2 0 мМ гистидина рН б, 12,5 мМ ацетата рН 5,3, или комбинацию 20 мМ гистидина и 12,5 ацетата рН 5,9 (таблица 6) . По сравнению с системой отдельных буферов, тАЫ были наиболее стабильными в композиции, содержащей как гистидин, так и ацетат приблизительно при рН 5.9. Самую медленную скорость агрегации определяли, когда тАЫ составляли в указанной комбинированной системе буферов (Э-ВЭЖХ) (таблица 6).
Буфер и рН
Общий % восстановленных тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
% нативных восстановленных тАЫ (Э-ВЭЖХ)
% агрегата восстановленных тАЫ (Э-ВЭЖХ)
восстановленных2 тАЫ (КО-ВЭЖХ)
Кислый пик
Главный пик
Щелочной пик
Исходное вещество (отсутствие инкубации при 4 5°С)
100
97, 0
2, б
27,4
62, 1
10,5
2 0 мМ гистидин, рН 5,9
100
95, 2
4,3
34, 8
53, 9
11,4
12,5 мМ ацетат, рН 5, 3
103
94, 8
4,8
30, 9
56, 0
13, 1
Комбинация 2 0 мМ гистидина и 12,5 мМ ацетата, рН 5,9
104
95, 9
3,7
33,7
54, 1
12, 1
Согласно таблице б, 0,4 мл 150 мг/мл тАЫ, 10% сахарозы,
0,2% полисорбата 20, комбинированные с различными буферами в 2
мл стеклянном флаконе хранили при около 4 5°С в течение около 14
дней. Мутность оценивали по оптической плотности (ОП) при 405
нм и сообщали как относительное изменение ОП при 4 05 нм по
сравнению с исходным веществом. Мутность была незначительной
для всех образцов. Процент всех восстановленных тАЫ определяли
ВЭЖХ с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Процент нативных и
агрегированных тАЫ определяли эксклюзионной ВЭЖХ (Э-ВЭЖХ).
Кислые и основные виды определяли как сумму пиков тАЫ, которые
элюируют из катионообменной колонки (КО-ВЭЖХ) с более ранним
или более поздним временем удерживания, чем основной пик,
соответственно. Результаты Э-ВЭЖХ, представленные в результатах
"исходного вещества", представляют собой среднее из значений
каждой композиции в отсутствие термического стресса.
Пример 4. Управление вязкостью и тоничностью
Комбинации различных эксципиентов с высокими
концентрациями тАЫ (т.е. 150 мг/мл, 175 мг/мл и 200 мг/мл) оценивали в отношении вязкости и тоничности (выраженной в осмолярности). Уровень сахарозы, хлорида натрия и гидрохлорида
L-аргинина регулировали для получения композиции, содержащей высокую концентрацию тАЫ при низкой вязкости и при физиологической тоничности для возможности легкого, удобного и быстрого подкожного введения большого количества тАЫ (таблица 7). Жидкая композиция, содержащая 2 5 мМ аргинина, 2 0 мМ гистидина, 12,5 мМ ацетата, 5% (масс/об) сахарозы, 0,2% (масс/об) полисорбата 20, и 150 мг/мл тАЫ, при рН 5,9 (композиция А) представляет собой оптимизированную композицию, имеющую низкую вязкость (около 8,5 сПуаз) и являющуюся физиологически изотоничной (около 2 93 мОсм/кг), при сохранении стабильности тАЫ.
Пример 5. Характеризация композиции А
Основными путями разрушения, идентифицированными во время разработки жидкой композиции тАЫ, были образование агрегатов, продуктов расщепления и вариантов заряда. Образование таких продуктов разрушения минимизировали путем составления тАЫ в композиции, содержащей 20 мМ гистидина, 12,5 мМ ацетата, 0,2% полисорбата 20, 5% сахарозы и 2 5 мМ гидрохлорида L-аргинина при рН 5,9. Наблюдали, что составленные в композицию 150 мг/мл тАЫ оставались прозрачным до слегка опалесцирующего жидким раствором, по существу свободным от видимых частиц.
Составленные в композицию тАЫ были физически и химически стабильны при воздействии различного стресса (инкубация при 2 5°С и 4 5°С) и условий хранения в реальном времени (5°С) (таблица 8) . Внешний вид не изменялся, когда тАЫ инкубировали при 2 5°С (3 месяца) или хранили при 5°С в течение б месяцев. Кроме того, не наблюдали воздействия на рН раствора, мутность или на количество восстановленных тАЫ. После инкубации составленных в композицию тАЫ в течение 3 месяцев при 25°С, антитела существенно не разрушались, что определяли по Э-ВЭЖХ и было не более 3,3% разрушенных, что определяли по КО-ВЭЖХ.
Наблюдали повышенное разрушение после инкубации при 4 5°С в течение 8 недель, что определяли Э-ВЭЖХ и КО-ВЭЖХ, показывая, что образование агрегатов и вариантов заряда являются основными путями разрушения молекулы антитела тАЫ. Не наблюдали разрушения, когда составленные в композицию тАЫ хранили в течение б месяцев при 5°С.
Стресс тест
Отсутствие хранения
45°С
Длительность хранения
2 нед.
3 нед.
6 нед.
Внешний вид
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Мутность (ОП 405 нм)
0, 00
0, 02
0, 03
0, 05
6, 0
б, 0
6, 0
6, 0
% тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
100
102
100
% нативных тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
98, 1
95, 9
94, 2
90,5
% тАЫ (пики из КО-ВЭЖХ)
Кислый
14, 6
20, 8
29, 9
44, 0
Главный пик
70,7
64, 5
56, 7
45, 1
Щелочной
14,7
14,7
13,4
10, 9
Согласно таблице 8, ОП=оптическая плотность; ОФ-ВЭЖХ=высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой; Э-ВЭЖХ=эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография; и КО-ВЭЖХ=катионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография. Кислые и щелочные виды определяли как сумму пиков тАЫ, которые элюируют из колонки КО-ВЭЖХ с более ранним или более поздним временем удерживания, чем главный пик, соответственно.
Пример 6. Контейнеры
Композиции, содержащие тАЫ, определяли как стабильные при фильтрационной стерилизации. Набор для фильтрации Millipore MILLIPAK использовали в получении клинических партий, тогда как фильтрацию идентичных композиций использовали в научных исследованиях (Millipore MILLEX DURAPORE).
5-мл стеклянный флакон заполняли минимум на 2,5 мл 150 мг/мл тАЫ, 5% (масс/об) сахарозы, 25 мМ гидрохлорида L-аргинина, 0,2% (масс/об) полисорбата 20, 12,5 мМ ацетата, 20 мМ гистидина, рН 5,9. Избыток 0,5 мл композиции помещали в 5-мл флакон, для обеспечения того, чтобы можно было забрать 2,0 мл композиции. Такой избыток не был создан для компенсации потерь при производстве тАЫ или композиции, содержащей тАЫ, разрушения во время производства, разрушения во время хранения (срок годности) или для удлинения периода срока годности.
По сравнению с хранением в стеклянных флаконах на стабильность составленных в композицию тАЫ (композиция А) не влияло хранение в или полипропиленовой пробирке, или полистирольной пробирке, или поликарбонатной пробирке, или в стеклянном флаконе, содержащем кусочки нержавеющей стали (таблица 9).
Таблица 9
Температура хранения
Отсутствие хранения
40°С в течение 14 дней
Контейнер для хранения
Стекло
Стекло
Полипропилен
Полистирол
Поликарбонат
Нержавеющая сталь
Внешний вид
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Мутность (ОП при 4 05 нм)
0, 00
0, 01
0, 01
0, 02
0, 02
0, 01
5,9
5,9
5,7
5, 8
5, 8
5,9
% тАЫ (ОФ-ВЭЖХ)
100
102
103
107
106
102
% нативных тАЫ (ВР-ВЭЖХ)
98,4
97, 6
97, 4
97, 5
97, 5
96, 1
% пика тАЫ (КО-ВЭЖХ)
Кислый
14, 8
18,4
19, 1
18,4
18,4
20,3
Главный
70,7
65, 8
65, 5
66, 0
66, 5
65, 0
Щелочной
14,5
15, 8
15, 3
15, 6
15, 1
14,7
Согласно таблице 9, 150 мг/мл тАЫ, 5% сахарозы, 25 мМ
гидрохлорида аргинина, 0,2% PS-20, 20 мМ гистидина, 12,5 мМ
ацетата, рН 5,9 инкубировали с/в различных веществах при 40°С в
течение 14 дней. ОП=оптическая плотность; ОФ-
ВЭЖХ=высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой; Э-ВЭЖХ=эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография; и КО-ВЭЖХ=катионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография. Мутность представляют как относительное изменение ОП при 4 05 нм по сравнению с исходным веществом. Кислые или основные виды определяют как сумму пиков тАЫ, которые элюируют из колонки КО-ВЭЖХ с более ранним или более поздним временем удерживания, чем главный пик, соответственно.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> Стабилизированные композиции, содержащие анти-1Ь-4К антитела
<130>
<160> 26
<170> Patentln version 3.5
<210> 1
<211> 124
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser lie Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser lie Thr lie Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala 1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
lie Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr 1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Ala Lys Asp Arg Leu Ser lie Thr lie Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
15 10 15
<210> 5
<211> 112
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
lie Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Ser Gly Gin Ser
35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gin Ala
85 90 95
Leu Gin Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys
100 105 110
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Gin Ser Leu Leu Tyr Ser lie Gly Tyr Asn Tyr
<210> 7
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Leu Gly Ser
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Tyr Thr 1 5
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser lie Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser lie
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr 15 10
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser lie Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Ser Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35 40 45
Asn Val Ala Ser Arg Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Asn Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro lie
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105
<210> 14
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Gin Asp lie Ser lie Trp 1 5
<210> 15
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Val Ala Ser
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro lie Thr 1 5
<210> 17
<211> 117
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr lie Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Arg Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly 1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys 1 5
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Ala Lys Glu Gly Arg Gly Gly Phe Asp Tyr 15 10
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Ser Leu lie
35 40 45
His Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser His Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Gin Val lie Asn Asn Tyr 1 5
<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Ala Ala Ser
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 24
Gin Gin Tyr Asn Ser His Pro Trp Thr 1 5
<210> 25
<211> 825
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val
15 10 15
Leu Leu Gin Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gin Glu Pro
20 25 30
Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser lie Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met
35 40 45
Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gin Leu
50 55 60
Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys lie Pro Glu Asn Asn Gly
65 70 75 80
Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala
85 90 95
Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gin Gin Leu Leu Trp Lys
100 105 110
Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn
115 120 125
Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser
130 135 140
Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala
145 150 155 160
Val Asn lie Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg lie Tyr Asn
165 170 175
Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg lie Ala Ala Ser Thr Leu Lys
180 185 190
Ser Gly lie Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gin Cys Tyr
195 200 205
Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser
210 215 220
Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gin His Leu Leu Leu Gly Val Ser Val Ser
225 230 235 240
Cys lie Val lie Leu Ala Val Cys Leu Leu Cys Tyr Val Ser lie Thr
245 250 255
Lys lie Lys Lys Glu Trp Trp Asp Gin lie Pro Asn Pro Ala Arg Ser
260 265 270
Arg Leu Val Ala lie lie lie Gin Asp Ala Gin Gly Ser Gin Trp Glu
275 280 285
Lys Arg Ser Arg Gly Gin Glu Pro Ala Lys Cys Pro His Trp Lys Asn
290 295 300
Cys Leu Thr Lys Leu Leu Pro Cys Phe Leu Glu His Asn Met Lys Arg
305 310 315 320
Asp Glu Asp Pro His Lys Ala Ala Lys Glu Met Pro Phe Gin Gly Ser
325 330 335
Gly Lys Ser Ala Trp Cys Pro Val Glu lie Ser Lys Thr Val Leu Trp
340 345 350
Pro Glu Ser lie Ser Val Val Arg Cys Val Glu Leu Phe Glu Ala Pro
355 360 365
Val Glu Cys Glu Glu Glu Glu Glu Val Glu Glu Glu Lys Gly Ser Phe
370 375 380
Cys Ala Ser Pro Glu Ser Ser Arg Asp Asp Phe Gin Glu Gly Arg Ala
385 390 395 400
Gly lie Val Ala Arg Leu Thr Glu Ser Leu Phe Leu Asp Leu Leu Gly
405 410 415
Glu Glu Asn Gly Gly Phe Cys Gin Gin Asp Met Gly Glu Ser Arg Leu
420 425 430
Leu Pro Pro Ser Gly Ser Thr Ser Ala His Met Pro Trp Asp Glu Phe
435 440 445
Pro Ser Ala Gly Pro Lys Glu Ala Pro Pro Trp Gly Lys Glu Gin Pro
450 455 460
Leu His Leu Glu Pro Ser Pro Pro Ala Ser Pro Thr Gin Ser Pro Asp
465 470 475 480
Asn Leu Thr Cys Thr Glu Thr Pro Leu Val lie Ala Gly Asn Pro Ala
485 490 495
Tyr Arg Ser Phe Ser Asn Pro Leu Ser Gin Ser Pro Cys Pro Arg Glu
500 505 510
Leu Gly Pro Asp Pro Leu Leu Ala Arg His Leu Glu Glu Val Glu Pro
515 520 525
Glu Met Pro Cys Val Pro Gin Leu Ser Glu Pro Thr Thr Val Pro Gin
530 535 540
Pro Glu Pro Glu Thr Trp Glu Gin lie Leu Arg Arg Asn Val Leu Gin
545 550 555 560
His Gly Ala Ala Ala Ala Pro Val Ser Ala Pro Thr Ser Gly Tyr Arg
565 570 575
Glu Phe Val His Ala Val Glu Gin Gly Gly Thr Gin Ala Ser Ala Val
580 585 590
Val Gly Leu Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly Tyr Lys Ala Phe Ser Ser
595 600 605
Leu Leu Ala Ser Ser Ala Val Ser Pro Glu Lys Cys Gly Phe Gly Ala
610 615 620
Ser Ser Gly Glu Glu Gly Tyr Lys Pro Phe Gin Asp Leu lie Pro Gly
625 630 635 640
Cys Pro Gly Asp Pro Ala Pro Val Pro Val Pro Leu Phe Thr Phe Gly
645 650 655
Leu Asp Arg Glu Pro Pro Arg Ser Pro Gin Ser Ser His Leu Pro Ser
660 665 670
Ser Ser Pro Glu His Leu Gly Leu Glu Pro Gly Glu Lys Val Glu Asp
675 680 685
Met Pro Lys Pro Pro Leu Pro Gin Glu Gin Ala Thr Asp Pro Leu Val
690 695 700
Asp Ser Leu Gly Ser Gly lie Val Tyr Ser Ala Leu Thr Cys His Leu
705 710 715 720
Cys Gly His Leu Lys Gin Cys His Gly Gin Glu Asp Gly Gly Gin Thr
725 730 735
Pro Val Met Ala Ser Pro Cys Cys Gly Cys Cys Cys Gly Asp Arg Ser
740 745 750
Ser Pro Pro Thr Thr Pro Leu Arg Ala Pro Asp Pro Ser Pro Gly Gly
755 760 765
Val Pro Leu Glu Ala Ser Leu Cys Pro Ala Ser Leu Ala Pro Ser Gly
770 775 780
lie Ser Glu Lys Ser Lys Ser Ser Ser Ser Phe His Pro Ala Pro Gly
785 790 795 800
Asn Ala Gin Ser Ser Ser Gin Thr Pro Lys lie Val Asn Phe Val Ser
805 810 815
Val Gly Pro Thr Tyr Met Arg Val Ser 820 825
<210> 26
<211> 207
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Met Lys Val Leu Gin Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser lie
15 10 15
Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu
20 25 30
Leu Arg Leu Leu Tyr Gin Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr
35 40 45
Cys lie Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu
50 55 60
Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala
65 70 75 80
Gly Gin Gin Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val
85 90 95
Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp
100 105 110
Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu
115 120 125
Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn lie Trp Ser Glu Asn Asp Pro
130 135 140
Ala Asp Phe Arg lie Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg
145 150 155 160
lie Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly lie Ser Tyr Arg Ala Arg Val
165 170 175
Arg Ala Trp Ala Gin Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro
180 185 190
Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gin His
195 200 205
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Жидкая фармацевтическая композиция, содержащая: (i) человеческие антитела, которые специфически связываются с альфа рецептором человеческого интерлейкина-4 (hIL-4Ra); (ii) буфер при рН 5,9+0,5 единиц рН; (iii) органический сорастворитель; (iv) термический стабилизатор; и (v) средство, снижающее вязкость.
2. Жидкая фармацевтическая композиция по п.1, где антитела находятся в концентрации 150 мг/мл+50 мг/мл.
3. Жидкая фармацевтическая композиция по п.1 или п. 2, где антитела находятся в концентрации 150 мг/мл+15 мг/мл.
4. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-3, где буфер включает первый буфер, имеющий эффективный диапазон рН в пределах 3,6-5,б, и второй буфер, имеющий эффективный диапазон рН в пределах 5,5-7,4.
5. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 4, где первый буфер имеет рКа 4,8±0,3, и второй буфер имеет рКа 6,0+0,3.
6. Жидкая фармацевтическая композиция по п.5, где первым буфером является ацетат, и вторым буфером является гистидин.
7. Жидкая композиция по любому из п.п.1-6, где буфер включает ацетат в концентрации 12,5 мМ+1,85 мМ и гистидин в концентрации 2 0 мМ+0,3 мМ.
8. Жидкая композиция по любому из п.п.1-7, где органический растворитель выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полоксамера 181 и полиэтиленгликоля 3350.
9. Жидкая композиция по любому из п.п.1-8, где органический сорастворитель находится в концентрации от около 0,085% до около 1,15% масс/об.
10. Жидкая композиция по любому из п.п.1-9, где органическим сорастворителем является полисорбат 2 0 в концентрации 0,2+0,03% масс/об.
11. Жидкая композиция по любому из п.п.1-10, где термический стабилизатор выбирают из группы, состоящей из сахарозы, маннита и трегалозы.
12. Жидкая композиция по любому из п.п.1-11, где
термический стабилизатор находится в концентрации от около 3,5% до около 11% масс/об.
13. Жидкая композиция по любому из п.п.1-12, где
термическим стабилизатором является сахароза в концентрации
5%±0,75% масс/об.
14. Жидкая композиция по любому из п.п.1-13, где средство,
понижающее вязкость, находится в концентрации менее чем около
100 мМ.
15. Жидкая композиция по любому из п.п.1-15, где
средством, понижающим вязкость, является аргинин в концентрации
25 мМ+3,75 мМ или 50 мМ+7,5 мМ.
16. Жидкая композиция по любому из п.п.1-15, где вязкость жидкости составляет менее чем или равно 35+3,5 сПуаз.
17. Жидкая композиция по любому из п.п.1-16, где вязкость жидкости составляет 21,5+13,5 сПуаз.
18. Жидкая композиция по любому из п.п.1-16, где вязкость жидкости составляет 11+1,1 сПуаз или 8,5±0,85 сПуаз.
19. Жидкая композиция по любому из п.п.1-18, где осмолярность жидкости составляет 2 90+2 0 мОсм/кг.
20. Жидкая композиция по любому из п.п.1-19, где, по меньшей мере, около 90% нативной формы антител восстанавливается после около шести месяцев хранения при около 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
21. Фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-2 0, где, по меньшей мере, около 95% нативной формы антител восстанавливается после около шести месяцев хранения при около 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
22. Фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-21, где, по меньшей мере, около 98% нативной формы указанного антитела восстанавливается после около шести месяцев хранения
при около 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
23. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-
22, где, по меньшей мере, около 90% нативной формы указанного
антитела восстанавливается после около восьми недель хранения
при около 45°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
24. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-
23, где менее чем около 45% антител, восстановленных после
около восьми недель хранения при около 45°С, находится в кислой
форме, что определяют катионообменной хроматографией.
25. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-
24, где менее чем около 4% антител, восстановленных через шесть
месяцев хранения при 25°С, являются агрегированными, что
определяют эксклюзионной хроматографией.
26. Жидкая фармацевтическая композиция по п.1, где
указанные человеческие антитела, которые специфически
связываются с hIL-4R включают вариабельный участок тяжелой цепи
(HCVR) и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), где (a) HCVR
включает участки, определяющие комплементарность тяжелой цепи
HCDR1, HCDR2 и HCDR3, включающие последовательность аминокислот
(i) SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3 и SEQ ID N0:4, соответственно,
(ii) SEQ ID N0:10, SEQ ID N0:11 и SEQ ID N0:12, соответственно,
или (iii) SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:19 и SEQ ID N0:20,
соответственно; и (b) LCVR включает участки, определяющие
комплементарность легкой цепи LCDR1, LCDR2 и LCDR3 включающие
последовательность аминокислот (i) SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7 и
SEQ ID N0:8, соответственно, (ii) SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15 и
SEQ ID N0:16, соответственно, или (iii) SEQ ID N0:22, SEQ ID
N0:23 и SEQ ID N0:24, соответственно.
27. Жидкая фармацевтическая композиция по п.2 6, где HCVR и LCVR включают последовательности аминокислот SEQ ID N0:1 и SEQ ID N0:5, соответственно.
28. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-27, содержащаяся в стеклянном флаконе.
29. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-27, содержащаяся в шприце.
30. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.1-27, содержащаяся в микроинфузоре.
31. Жидкая фармацевтическая композиция по п.29, где
указанный шприц включает поршень, покрытый фторуглеродом.
32. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 2 9 или п. 31, где указанный шприц является низковольфрамовым шприцом.
33. Жидкая фармацевтическая композиция, содержащая: (i) 150 мг/мл+50 мг/мл человеческих антител, которые специфически связываются с hIL-4Ra, где указанные антитела включают вариабельные участки тяжелой цепи и легкой цепи (HCVR/LCVR) пары последовательностей аминокислот SEQ ID N0:1/5; (ii) 12,5 мМ+2 мМ ацетата; (iii) 20 мМ+3 мМ гистидина; (iv) 5+0,75% сахарозы; (v) 0,2%+0,03% полисорбата 20; и (vi) 25 мМ+3,75 мМ аргинина, при рН 5,9+0,5.
34. Жидкая фармацевтическая композиция по п.33, где вязкость жидкости составляет 11+1,1 сПуаз или 8,5+0,85 сПуаз.
35. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 33 или п. 34, где осмолярность жидкости составляет 2 90+2 0 мОсм/кг.
36. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.33-35, где, по меньшей мере, 98% нативной формы указанных антител восстанавливается через шесть месяцев хранения при 5°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
37. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.33-36, где, по меньшей мере, 90% нативной формы антител восстанавливается через восемь недель хранения при 45°С, что определяют эксклюзионной хроматографией.
38. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.33-37, где менее чем 45% антител, восстанавливающихся через восемь недель хранения при 45°С, находятся в кислой форме, что определяют катионообменной хроматографией.
39. Жидкая фармацевтическая композиция по любому из п.п.33-38, где менее чем около 4% антител, восстановленных после шести месяцев хранения при 25°С, являются агрегированными, что определяют эксклюзионной обменной хроматографией.
По доверенности
(19)
(19)
(19)
Таблица 1
Таблица 1
Таблица 2
Таблица 2
Таблица 4
Таблица 6
Таблица 6
