|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[**] Настоящее изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I) или (I'), или к фармакологически приемлемым солям указанного соединения; фармацевтическим композициям, содержащим это соединение; способам получения соединения; способам применения указанного соединения для лечения и/или предотвращения различных злокачественных образований или пролиферативных нарушений; способам применения указанного соединения для идентификации биомаркеров для клинической разработки средств для лечения и/или предотвращения злокачественных образований или пролиферативных нарушений и способам применения указанного соединения для идентификации его рационального применения в способах комбинированной терапии, направленной против различных видов рака. В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с белком теплового шока 70 (Hsp70). Настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с белком теплового шока 70 (Hsp70) и когнатным белком теплового шока 70 (Hsc70).  
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I) или (I'), или к фармакологически приемлемым солям указанного соединения; фармацевтическим композициям, содержащим это соединение; способам получения соединения; способам применения указанного соединения для лечения и/или предотвращения различных злокачественных образований или пролиферативных нарушений; способам применения указанного соединения для идентификации биомаркеров для клинической разработки средств для лечения и/или предотвращения злокачественных образований или пролиферативных нарушений и способам применения указанного соединения для идентификации его рационального применения в способах комбинированной терапии, направленной против различных видов рака. В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с белком теплового шока 70 (Hsp70). Настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с белком теплового шока 70 (Hsp70) и когнатным белком теплового шока 70 (Hsc70).
Евразийское (21) 201290062 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61K31/54 (2006.01)
2013.09.30
(22) Дата подачи заявки 2010.08.17
(54) СОЕДИНЕНИЯ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
(31) 61/272,101
(32) 2009.08.17
(33) US
(86) PCT/US2010/045817
(87) WO 2011/022440 2011.02.24
(88) 2011.08.11
(71) Заявитель:
МЕМОРИАЛ СЛОУН-КЕТТЕРИНГ КЭНСЭ СЕНТР (US)
(72) Изобретатель:
Чиозис Габриэла, Тальдоне Тони, Родина Анна, Патель Паллав, Кан Яньлун (US)
(74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I) или (I'), или к фармакологически приемлемым солям указанного соединения; фармацевтическим композициям, содержащим это соединение; способам получения соединения; способам применения указанного соединения для лечения и/или предотвращения различных злокачественных образований или пролиферативных нарушений; способам применения указанного соединения для идентификации биомаркеров для клинической разработки средств для лечения и/или предотвращения злокачественных образований или пролиферативных нарушений и способам применения указанного соединения для идентификации его рационального применения в способах комбинированной терапии, направленной против различных видов рака. В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с бел
ком теплового шока 70 (Hsp70). Настоящее изобретение относится к соединениям, которые с некоторым уровнем специфичности связываются с белком теплового шока 70 (Hsp70) и когнатным белком теплового шока 70 (Hsc70).
К заявке № 201290062
СОЕДИНЕНИЯ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
БЛАГОДАРНОСТИ
[001] Описанное в настоящей заявке изобретение было сделано частично при
поддержке государства (NIH R01 СА119001). Государство обладает определенными правами на настоящее изобретение.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[002] Настоящее изобретение относится к соединению, представленному общей
формулой, раскрытой в настоящем тексте, или к фармакологически приемлемым солям указанного соединения; фармацевтическим композициям, содержащим это соединение: способам получения соединения; способам применения указанного соединения для лечения и/или предотвращения различных злокачественных образований или пролиферативных нарушений; способам применения указанного соединения для идентификации биомаркеров для клинической разработки средств для лечения и/или предотвращения злокачественных образований или пролиферативных нарушений; и способам применения указанного соединения для идентификации его рационального применения в способах комбинированной терапии. В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, которые являются низкомолекулярными ингибторами белка теплового шока 70 (Hsp70). В другом варианте реализации, настоящее изобретение относится к низкомолекулярной молекуле, которая занимает аллостерический карман Hsp70 и к способам идентификации, исследования и применения такой низкомолекулярной молекулы.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[003] Раковые клетки часто экспрессируют высокие уровни нескольких белков
теплового шока (HSP), которые усиливают агрессивность этих опухолей и также позволяют клеткам выживать в летальных условиях, включая терапевтическое уничтожение. В дополнение к обеспечению устойчивости к лечению, повышенная экспрессия HSP ракже способствует развитию рака путем подавления запрограммированной гибели клеток, стимулируя автономный рост.
[004] К основным HSP относятся Hsp90 и Hsp70, белки, которые действуют как
взаимосвязанно, так и по отдельности и регулируют злокачественный фенотип. Hsp90
поддерживает трансформирующую способность нескольких онкобелков, включая HER2, АКТ, RAF1, IGF-IR и HIF-1, причем осуществлению этой функции способствует Hsc70, конститутивный Hsp70, индуцибельные изоформы Hsp70. В результате ингибирования Hsp90, онкобелки-клиенты Нзр90становятся дестабилизированными и разрушаются по протеосомному механизму (Фиг. 1а). Фактор транскрипции HSF-1, основной регулытор ответа белков теплового шока, также является клиентом Hsp90, но в отличие от онкобелков, он активируется при ингибировании Hsp90. Активация HSF-1 приводит к повышению уровней Hsp70, и вызывает ответ по типу обратной связи, который ограничивает эффективность ингибиторов Hsp90 в некоторых опухолях. Hsp70 сам по себе является эффективным анти-апоптотическим соединением, что указывает на то, что ингибирование как собственного таки и внешнего механизмов апоптоза в результате увеличения уровня Hsp70 возможно отвечает за снижение эффекта ингибирования Hsp90. Помимо ингибирования ппоптоза и помощи Hsp90, Hsp70 и его высоко гомологичные цитолитические изоформы выполняют множество других перекрывающихся шаперонных функций и в некоторых случаях могут заменять друг друга.
[005] Мульти-шаперонный комплекс Hsp90, также называемый
супершаперонным аппаратом Hsp90, играет важную роль в развитии и прогрессировании паталогической трансформации клеток посредством регуляции некоторых определяющих злокачественность и вспомогательных белков-клиентов. Активность мульти-шаперонной системы поддерживается и осуществляется сложной системой шаперонов. Белки Hsp70 (конститутивно экспрессируемый Hsc70, индуцируемый теплом Hsp70-1 и Hsp70-6) участвуют в предварительных этапах, a Hsp90 участвует на боле поздней стадии (Фиг. 1а). Для осуществления их функций необходимо множество со-шаперонов, таких как регуляторы Hsp70, Hsp40, HspllO, BAG и HIP; HSP-организующие белки (HOP), участвующие в образовании промежуточного молекулярного шаперонного комплекса, в котором клиент передается от Hsp70 к Hsp90, и других, таких как р23, cdc37 и иммунофилины, действующие на стадии завершения созревания комплекса Hsp90 (Фиг. 1а). Ингибирование аппарата Hsp90 агентами, которые действуют петм прямого связывания с регуляторным карманом АТФазы белка Hsp90, такие как гелданамицин (GM) и производные PU PU24FC1 м PU-H71 (Фиг. lb), препятствуют формированию зрелых комплексов, направляя белки-клиенты на протеосомное разрушение (Фиг. 1а). Существуют интересные данные о том, что снижение активности Hsp90, но не экспрессии Hsp70 или ко-шаперонов HOP, HIP, р23 и Hsp40, резко активирует HSF-1. Интригующим рещултатом этого наблюдения является то, что для активации HSF-1 не требуется Hsp70, в отличие от онкобелков-клиентов аппарата Hsp90.
[006] Хотя в настоящее время важность ингибирования Hsp90 хорошо осознается
и используется в разработке низкомолекулярных ингибиторов, которые в настоящее время проходят клинические испытания на предмет лечения различных видов рака, немногое известно о способах препятствования активности аппарата Hsp90. Вмешательство в шаперонный механизм способами, отличными от ингибирования Hsp90, может выявить различие между несколькими функциями и придать ему специфичную биологическую активность.
Краткое описание изобретения
[007] В целом, с учетом сложного взаимодействия белков теплового шока при
раке и присущую опухолям зависимость от этих белков, не вызывает удивление что после ингибирования HSP в клетки развиваются механизмы для компенсации этой функциональной потери, задействующие другой HSP. Следовательно, такие подходы, как описаны в настоящей заявке, которые направлены одновременно на несколько HSP скорее обеспечат терапевтический успех.
[008] Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает соединения и способы
для разделения двух функций молекулярного аппарата Hsp90, а именно: регуляции
онкобелков и подавления HSF-1, путем специфичного модулирования шаперонов Hsp70.
[009] Предложены новые соединения и способы получения и применения этих
соединений. В одном варианте реализации настоящего изобретения описанные здесь соединения могут быть использованы для модуляции роста клеток, например, подавления злокачественных клеток и/или повышения цитотоксичности в отношении раковых клеток. В другом варианте реализации описанные здесь соединения могут функционировать в качестве модуляторов белка теплового шока 70 (Hsp70). Соответственно, было обнаружено, что фармакологическая модуляция Hsp70 с использованием этих или других соединений обеспечивает существенные и разнообразные полезные эффекты в раковых клетках. В ещё одном варианте реализации предложенные соединения способны нарушать образование аппарата Hsp90 /комплексов онкобелков, вызывая протеосомное разрушение нескольких онкобелков, не приводя при этом к нарушению или разрушению неонкогенных киназ. В других вариантах реализации противораковые эффекты предложенных соединений могут включать, например, ингибирование пролиферации, специфичное к трансформации блокирование клеточного цикла, индукцию апоптоза или снижение способности к инвазии.
[0010] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения описано,
что что важная активность предложенных соединений возможно осуществляется
соединением, которое взаимодействует по механизму необратимого ил иобратимого связывания. В конкретном варианте раелизации эти соединения взаимодействуют с Hsp70. В еще одном варианте реализации они взаимодействуют с описанным в настоящем тексте аллостерическим сайтом Hsp70.
[ООП] В одном варианте реализации представлена омологичная модель Hsp70. В
другом варианте реализации гомологичную модель применяют для рационального
конструирования соединений, которые модулируют актиность Hsp70 млекопитающих.
Эту гомологичную модель можно применять для обнаружения соединений согласно
настоящему изобретению способами, включающими, но не ограничивающимися
рациональным конструированием лекарственных средств и виртуальным скринингом.
[0012] В других вариантах реализации предложен аллстерический карман,
расположенный вне сайта связывания нуклеотидов Hsp70 и Hsc70. Для этого кармана не
существует известных природных или синтетических низкомолекулярных лигандов. В
ещё одном варианте реализации представлено, что занятие этого кармана
низкомолекулярным лигандом приводит к, например, ингибированию пролиферации,
специфичному в отношении трансформации блокированию клеточного цикла, индукции
апоптоза или снижению способности к инфазии. Этот карман пригоден для обнаружения
соединений согласно настоящему изобретению. Соединение-кандидат может быть
получено вычислительным путем с использованием нескольких методов. Примеры таких
методов включают объединение молекулярных фрагментов в соединение-кандидат,
конструирование кандидатных соединений de novo, модификацию соединений, о которых
известно, что они связываются с данным сайтом, включая описанные в настоящем тексте
соединения, с получением кандидатных соединений искрининг баз данных, и т.д.
[0013] В соответствии с другим вариантом реализации занятие полости белка
Hsp70, для которой не существует известных природных или синтезированных лигандов, соединением согласно настоящему изобретению приводит к ингибированию злокачественного роста клеток, ингибированиюю абберантного течения клеточного цикла, разрушению и ингибированию нескольких онкобелков, индукции апоптоза и снижению способности раковых клеток к инвазии в дозах, не токсичных для нормальных клеток. В соответствии с другим вариантом реализации занятие этого не исследовавшегося ранее кармана вызывает все перечисленные ниже эффекты или какой-либо набор из них, что не исключает других возможных эффектов: ингибирование роста злокачественных клеток, ингибирование абберантного течения клеточного цикла, разрушение и ингибирование некоторых онкобелков, индукция апоптоза и снижения способности раковых клеток к инвазии, в дозах, нетоксичных для нормальных клеток.
[0014] В других вариантах реализации предложены способы обнаружения
лигандов, которые занимают этот карман. В ещё одном варианте реализации представлено, что занятие этого кармана низкомолекулярным соединением приводит к двойному ингибированию онкогенных путей Hsp90 и Hsp70. Новая связывающая полость и мезханизм взаимодействия в Hsp70, описанные в настоящем тексте, также обеспечивают ценный плацдарм для разработки ингибиторов со сходным механизмом действия и терапевтическим применением. В то время как целенаправленное воздействие на один HSP обладает ясным терапевтическим значением, варианты реализации предложенного изобретения показывают, что одновременное ингибирование Hsp70 и Hsc70, позволяют достичь благоприятных эффектов ингибирования Hsp90, а именно снижение в опухоли количества онкобелков, направляющих злокачественные процессы, такие как пролиферация, выживан ие и метастазирование, а также апоптотического эффекта ингибирования Hsp70. В заключение, согласно одному варианту реализации предложена новая стртения направленного воздействия на раковую опухоль путем ингибирования аллостеричческого кармана, расположенного вне сакта связывания нуклеотидов Hsp70 и Hsc70.
[0015] В других вариантах реализации настоящего изобретения предложена а
стратегия, включающая одини или более из нескольких способов оценки способности соединения-кандидата обеспечивать существенные и разнообразные полезные последствия в раковых клетках, присущие соединениям согласно настоящему изобретению. Указанная стратегия включает анализ описанного здесь терапевтического результата в выбранных раковых клетках, осуществление описанного здесь конкурентного анализа с флюоресцентной поляризацией для исследования связывания Hsp90 и Hsp70 и вычислительное исследования кструктурного соответствия соединения-кандидата указанному карману. Фенотепический тест включает, но не ограничивается слеудющим: тест на ингибирование роста обширной панели раковых клеток, разрушение HER2 и Raf-1 клетках рака груди HER2+ SKBr3, инактивация FLT3 p-STAT5 в клетках MOLM-13 AML, инактивация p-STAT3 и p-PDKl в трижды отрицательных клетках рака груди MDA-MB-468, разрушение мутантного AR в клетках рака предстательной железы LNCaP, расщепление PARP в обширной панели раковых клеток, активация каспазы 3,7 в клетках MOLM-13, усиление апоптотического действия интерферона и TNF в клетках рака груди и отсутствие индукции Hsp70 в обширной панели раковых клеток. Конкурентные тесты с Hsp70 и Hsp90 позволяют исследовать конкурентное связывание соединений-кандидатов с HSP, экспрессируемым в раковых клетках.
[0016] В других вариантах реализации показано, что описанные здесь соединения
изолируют Hsp70 в комплексах, нагруженных онкобелком-клиентом. Таким образом, описанные здесь соединения, иммобилизованные на твёрдой подложке, обеспечивают беспрецедентную возможность для исследования внутри клетки интерактома Hsp70 при раке.
[0017] In other embodiments, compounds of the herein described subject matter may
also be derivatized to form biotin-containing compounds that can be attached onto streptavidin or avidin beads, or can be directly linked to a correspondingly functionalized resin, such as but not limited to agarose, sepharose and matrigel resin.
[0018] В еще одном варианте реализации описанные здесь соединения могут быть
дериватизированы флюоресцентным красителем, таким как, без ограничения: СуЗВ, FITC и BODiPY. При использовании в условиях описанного здесь анализа методом флюоресцентной поляризации жто соединение может быть использовано для скрининга соединения-кандидата, которое взаимодействует с Hsp70 аналогично соединениям согласно настоящему изобретению.
[0019] В еще одном варианте реализации соединение согласно настоящему
изобретению, иммобилизованное на твёрдой подложке, применяют для идентификации того, что компоненты, общие для многих опухолей активированных в раковых клектах путей, находятся в комплексе с Hsp70. Добавление композиций согласно настоящему изобретению к раковым клеткам приводит к дестабилизации этих комплексов, разрушению или ингибированию онкобелков ингибированию роста и к гибели раковых клеток. Эти вторичные события ингибирования Hsp70 в опухоли можно применять для функционального мониторинга эффектов соединений согласно настоящему изобретению, описанных здесь. Таким образом, описанные здесь способы обеспечивают эффективный анализ функциональных молекулярных биомаркеров, связанных с ответом на описанные соединения согласно настоящему изобретению и на другие средства терапии, которые действуют путем занимания описанного здесь аллостерического кармана, или которые могут быть идентифицированы путем описанного здесь анализа. Предполагается, что эти биомаркеры пригодны для клинической разработки описанных здесь средств, средств, которые занимают описанный здесь карман или средств, идентифицированных описанными здесь способами анализа.
[0020] Интересно, что только снижение активности Hsp90, но не других шаперонов
- его партнеров по аппарату Hsp90, таких как Hsp70 или HOP, HIP, р23 или Hsp40, резко активирует HSF-1, и применение таких соединений согласно настоящему изобретению позволяет разделять две функции молекулярного аппарата путем специфичной
регулировки его ко-шаперонов. В отличие от прямых ингибиторов Hsp90, соединения согласно настоящему изобретению возможно, например, активируют HSF-1 или индуцируют защитный ответ булков теплового шока по типу обратной связи. В одном варианте реализации настоящего изобретения соединения нарушают образование аппарата Hsp90 /комплексов онкобелков, не активируя при этом HSF-1 и/или не индуцируя ответа белков теплового шока по типу обратной связи.
[0021] При сравнении с прямым ингибированием Hsp90 фармакологическое
введение соединений в некторых вариантах реализации приводит к повышенной, но все же еще селективной цитотоксичности, направленной против раковых клеток, например, по механизму апоптоза. Биологические эффекты фармакологического ингибирования Hsp70 исследовали в злокачественных клетках с использованием соединений согласно настоящему изобретению. Было обнаружено, что Hsp70 модулирует дефосфорилирование супрессора STAT1 опухоли в клетках рака груди, что является новым механизмом инактивации супрессора опухоли STAT1. В другом варианте реализации настоящего изобретения описанные соединения ингибируют или инактивируют успорение дефосфорилирования STAT1 под действием Hsp70 в клетках рака груди, стимулируя таким образом подавление опухоли , обеспечивая непрерывную активность супрессора опухоли STAT1.
[0022] STAT1 является основным эффектором сигнального пути интерферона
(IFN)y. IFNy представляет собой цитокин, продуцируемый Т-лимфоцитами, обладающий природной иммуно-стимулирующей функцией, которая обеспечивает защиту против развития опухолей. В еще отном варианте реализации обнаружено, что настоящее изобретение усиливает эффект IFNy и другого цитокина, TNFa. и может обеспечить иммунные ответы и более эффективное уничтожение опухолей. Это - важная находка для исследований вакцинной терапии, указывающее на то, что совместное ввежение биологически активного интерферона с с соединением, описанным в настоящем тексте, т.е. с соединением согласно настоящему изобретению, которое занимает описанный карман, или с соединением согласно настоящему изобретению, идентифицированному при помощи описанного в данном тексте анализа, позволяет повысить эффективность вакцины и обеспечить использование более низких доз вакцины.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определения
[0023] В контексте настоящей заявки термины "вводить" и "введение" относятся к
любому способу, который согласно здравой медицинской практике подходит для доставки
указанной композиции объекту таким образом, чтобы обеспечить терапевтический эффект.
[0024] Выражение "производное" в контексте настоящей заявки относится к
любому гидрату, сольвату, соли, рацемату, изомеру, энантиомеру, пролекарству, метаболиту, сложному эфиру, или другому аналогу или производному конкретного химического соединения или молекулы. Термин "производное" может означать также модификацию описанных соединений, включая в качестве неограничивающих примеров продукты гидролиза, восстановления или окисления описанных соединений. Реакции гидролиза, восстановления и окисления известны специалистам в данной области техники.
[0025] Термин "модуляция" относится к процессу эффективного воздействия на
биологическую активность, функционирование, здоровье или состояние организма, в
котором такую биологическую активность, функционирование, здоровье или состояние
поддерживают, усиливают, уменьшают или лечат таким способом, который согласуется с
общим состоянием здоровья и благополучием организма. Термин "усиление"
биологической активности, функционирования, здоровья или состояния организма
относится к процессу увеличения, укрепления, упрочнения или улучшения.
[0026] В контексте настоящей заявки выражения "эффективное количество" или
"терапевтически эффективное количество" активного агента или ингредиента, или фармацевтически активного агента или ингредиента, в контексте настоящей заявки представляющих собой синонимы, относятся к количеству фармацевтически активного агента, достаточному для оказания терапевтического эффекта при введении. Терапевтический эффективное количество фармацевтически активного агента может вызывать, вызывает или предположительно вызовет облегчение симптомов. Эффективные количества фармацевтически активного агента варьируют в зависимости от конкретного состояния или состояний - мишеней для лечения, тяжести состояния, продолжительности лечения, использования специфических компонентов указанных композиций и тому подобных факторов.
[0027] Выражение "любой заместитель" в контексте настоящей заявки в формулах-
определениях (I) и ( Г) означает любой заместитель, который может быть замещен на водород. Согласно некоторым вариантам реализации термин "любой заместитель," в контексте настоящей заявки в формулах-определениях (I) и ( Г), представляет собой возможно замещенную линейную или разветвленную алкильную, алкенильную или алкинильную группы; возможно замещенную карбоциклическую, гетероциклическую, арильную или гетероарильную группу; галоген; возможно замещенную С2-22 ацильную
группу; гидроксил; нитро; циано; арилокси; алкокси; галогенированную алкокси; алкенилокси; гидроксиалкил; амино; алкиламино; диалкиламино; циклоалкиламино; ариламино; диариламино; ациламино; карбамил; замещенныую или незамещенную амидо; алкиламидо; алкилсульфонамидо; сульфонамидо; -ЖКОгалкенил; -ТчГНСОалкенил; -ТЧНСОалкинил; -СОалкенил; -СОалкинил; тригалоуглерод; тиоалкил; БОг-алкил; -СОО-алкил; -СОалкил; и алкил-CN; или их фармацевтически приемлемую соль, или их гидрат. Согласно другим вариантам реализации выражение "любой заместитель" относится к заместителю, который содержит группу-метку или маркерную группу, подходящую для определения, отслеживания и/или выделения указанного соединения. Неограничивающие примеры подходящих для целей настоящего изобретения групп-меток и маркерных групп включают, например, флуоресцентные группы, биотиновые группы, авидиновые группы, и линкерные фермент-связывающие группы.
[0028] В названиях вариантов заместителей, таких как для Z и W1-W4 ниже,
название относится к типу группы, непосредственно связанной с центральной структурой, и не исключает дополнительные функциональные группы, присоединенные к основному заместителю.
[0029] Таким образом, термин "алкил" относится к возможно замещенной
линейной, циклической или разветвленной насыщенной углеводородной группе, в которой атом, присоединенный к остальной части структуры, представляет собой атом углерода. Алкильная группа может содержать 1-24 атома углерода, как метил, этил, п-пропил, изопропил, п-бутил, изобутил, t-бутил, октил, децил, тетрадецил, гексадецил, эйкозил, тетракозил и т.п. Предпочтительные "алкильные" группы в данном случае содержат от 1 до 12 атомов углерода. "Низший алкил" относится к алкильной группе, содержащей от одного до шести, более предпочтительно от одного до четырех атомов углерода. Указанная алкильная группа может содержать заместители, например, галогены, гидрокси, алкокси, амино, замещенные и незамещенные замещенные и незамещенные амидо, сульфонамино, сульфонамидо, сульфокси, арил, циано, карбокси, карбоксамидные, ацил, нитро, тио- группы.
[0030] Термин "алкенил" относится к возможно замещенной линейной,
циклической или разветвленной ненасыщенной углеводородной группе, содержащей углерод-углеродную двойную связь в одном или более месте, где атом, присоединенный к остальной части структуры, представляет собой атом углерода. Указанная алкенильная группа может содержать 2-20 атомов углерода, предпочтительно 2-8 атомов углерода. Линейная алкенильная группа включает, например: 1-алкенильные группы, такие как этенильная группа, 1-пропенильная группа, и 1-бутенильная группа; и 2-алкенильные
группы, такие как 2- бутенильная группа и 2-пентенильная группа. Указанная
алкенильная группа может содержать такие же заместители, что и алкильная группа.
[0031] Термин "алкинил" относится к возможно замещенной разветвленной или
неразветвленной ненасыщенной углеводородной группе, содержащей углерод-углеродную тройную связь в одном или более месте, в которой один атом, присоединенный к остальной части структуры, представляет собой атом углерода. Алкинильная группа может содержать 2-20 атомов углерода, предпочтительно - 2-8 атомов углерода. Примеры включают: 1-алкинильные группы, такие как этинильная группа, 1-пропинильная группа, и 3,3-диметил-1-бутинильная группа; и 2- алкинильные группы, такие как а 2- пропинильная группа, 2- бутинильная группа, и З-фенил-2-пропинильная группа. Алкинильная группа может содержать такие же заместители, что и алкильная группа.
[0032] Термины "гало" или "галоген" относятся к фтору, хлору, брому или йоду,
как правило, подразумевается замещение галогеном атома водорода в органическом соединении. Из всех галогенов, как правило, предпочтительными являются хлор и фтор, и хлор, как правило, наиболее предпочтителен.
[0033] Термин "амино" охватывает молекулы, в которых N аминогруппы прямо
связан с центральной структурой, включая NH2, алкиламино- и алкениламиногруппы.
[0034] Термин "ацил" относится к водороду, алкилу, частично насыщенному или
полностью насыщенному циклоалкилу, частично насыщенному или полностью
насыщенному гетероциклу и арил-замещенным карбонильным группам.
[0035] Термин "арил" относится к группе замещенного или незамещенного
ароматического углеводородного кольца, содержащей от 5 до приблизительно 30 атомов углерода, предпочтительно, приблизительно от 6 до приблизительно 14 атомов углерода. Указанная "арильная" группа может содержать одиночные кольца или множественные конденсированные кольца. Если заместитель идентифицирован как арильный заместитель, атом арильного кольца связан непосредственно с атомом остальной части структуры. Арилокси-заместитель представляет собой арильную группу, соединенную с остальной частью структуры -О- мостиком. Указанная арильная группа может включать такие же заместители, как и алкильная группа, плюс алкильные, алкенильные или алкинильные заместители. Термин "арил" включает в качестве неограничивающих примеров фенил, а-нафтил, [3-нафтил, бифенил, антрил, тетрагидронафтил, флюоренил, инданил, бифениленил и аценафтенил. В частности, в определение "арил" включены возможно замещенные ароматические группы. Например, согласно типовым вариантам реализации настоящего изобретения, указанные "арил" группы представляют собой возможно
замещенные 1-5 заместителями, выбранными из группы, состоящей из ацилокси, гидрокси, ацила, алкила с 1 -6 атомами углерода, алкокси с 1 -6 атомами углерода, алкенила с 2-6 атомами углерода, алкинила с 2-6 атомами углерода, аминогруппы, аминогруппы, замещенной одной или двумя алкильными группами с 1-6 атомами углерода, аминоацила, ациламино, азидо, циано, гало, нитро, тиоалкокси, тригалометильной и арильной групп. Термин "аралкил" включает арил-замещенные алкильные фрагменты. Предпочтительно, аралкильные группы представляют собой "низшие аралкильные" группы, где арильные группы присоединена к алкильным группам, содержащим от одного до шести атомов углерода. Примеры таких групп включают бензил, дифенилметил, трифенилметил, фенилэтил и дифенилэтил.
[0036] Термин "карбоциклический" относится к возможно замещенной группе,
содержащей одну или более ковалентно непрерывную кольцевую структуру, и где все атомы, формирующие основную структуру кольца, представляют собой атомы углерода. Указанный термин, таким образом, устанавливает отличие карбоциклических колец от гетероциклических, в которых основа кольца содержит по меньшей мере один неуглеродный атом. Термины "циклоалкан" или "циклический алкан" или "циклоалкил" относятся к карбоциклической группе, в которой кольцо представляет собой возможно замещенный циклический алифатический углеводород, например, циклическую алкильную группу предпочтительно с 3-12 атомами углерода в кольце. "Циклоалкил" включает, как пример, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил, и т.п.
[0037] Термин "гетероциклический или гетероцикл" означает возможно
замещенную, насыщенную или ненасыщенную, ароматическую или не-ароматическую циклическую углеводородную группу, содержащую от 4 до приблизительно 20 атомов углерода, предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 6, где от 1 до приблизительно 4 атомов углерода заменены на азот, кислород или серу. Предпочтительные гетероциклы выбраны из группы, состоящей из бензимидазола, дигидротиофена, диоксина, диоксана, диоксолана, дитиана, дитиазина, дитиазола, дитиолана, фурана, имидазола, морфолина, оксазола, оксадиазола, оксатиазола, оксатиазолидина, оксазин, оксадиазин, пиперазин, пиперидин, пиран, пиразин, пиразол, пиридин, пиримидин, пиррол, пирролидин, тетрагидрофуран, тетразин, тиадиазин, тиадиазол, тиатриазол, тиазин, тиазол, тиоморфолин, тиофен, тиопиран, триазин и триазол. Структуры некоторых гетероциклов представлены ниже:
Гетероциклы
Н н
N м А Р S
L\ Д /Л ?\ /Л
Азиридин Азирин Оксирен Эпоксид Эписульфид
hng о о и П а П
1,2-Дитиэтан
Азетидин Оксетан Тиэтан 1,2-Диоксетан 1,3-ДиоксетаБ 1,3-Дитиэтан
боо обод
Пирролидин Тетрагидрофуран Тетрагидротиофен 1-Пирролин 2-Пирролин З-Пирролин Пиррол
О 0 0 0 0 0
2,3-Дигидрофуран 2,5-Дигидрофуран Фуран 2,3-Дигидротиофен 2,5-Дигидротиофен Тиофен
б О О О О Q
N О S
п Изооксазолидин хиазолИдИН Диоксолан Дитиолан
Имидазолидин Оксазолидин
Пиразол Имидазол Оксазол Изоксазол Тиазол Изотиазол 1,2,3-Триазол 1,2,4-Триазол
О О О о О О 6 й
I/ й> о
1,4,2-Дитиазол . Тетразол Пиперидин Тетрагидропиран
Тиан Пиридин
[0038] В контексте настоящей заявки термин "гетероарил" определяется как
системы замещенного или незамещенного ароматического гетероциклического кольца (моноциклическая или бициклическая). Гетероарильные группы могут содержать, например, приблизительно 4-20 атомов углерода (если четко не указано иное), предпочтительно приблизительно 4-10. Согласно некоторым вариантам реализации гетероарильные группы представляют собой системы ароматических гетероциклических колец, содержащих приблизительно 4-14 атомов в кольце и содержащих атомы углерода и 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из кислорода, азота или серы. Типовые гетероарильные группы включают фуран, тиофен, индол, азаиндол, оксазол, тиазол, изоксазол, изотиазол, имидазол, N-метилимидазол, пиридин, пиримидин, пиразин, пиррол, N-метилпиррол, пиразол, N-метилпиразол, 1,3,4-оксадиазол, 1,2,4-триазол, 1-метил-1,2,4-триазол, Ш-тетразол, 1-метилтетразол, бензоксазол, бензотиазол, бензофуран, бензисоксазол, бензимидазол, N-метилбензимидазол, азабензимидазол, индазол, хиназолин, хинолин и изохинолин.
[0039] Термин "кольцо с внутренним мостиком" относится к группе из 6-12
атомов, формирующих возможно замещенные углеродное кольцо, гетероцикл, арил или
гетероарил, содержащей одно или более кольцо, в котором два или более несмежных
атома кольца соединены. Неограничивающие примеры кольцевых структур с внутренним
мостиком могут включать трициклоалканы, такие как, например, адамантанил.
[0040] "Возможный" или "возможно" означает, что описанные ниже события или
обстоятельства могут иметь или могут не иметь место, и что указанное описание включает случаи, когда указанные события или обстоятельства имеют место, и случаи, когда это не так. Термин "возможно" включает варианты реализации, согласно которым описанные условия наличествуют и варианты реализации, согласно которым описанные условия отсутствуют. Например, "возможно замещенный фенил" означает, что указанный фенил может быть или может не быть замещенным, и что описаение включает как незамещенный фенил, так и фенил, содержащий замещение. Термин "возможно" включает варианты реализации, согласно которым описанные условия наличествуют и варианты реализации, согласно которым описанное условие отсутствует.
[0041] Соединения, предложенные в настоящем изобретении, могут быть
представлены таутомерами, геометрическими изомерами или стереоизомерами. Предмет настоящего изобретения включает все такие соединения, в том числе цис- и трансгеометрические изомеры, Е- и Z-геометрические изомеры, R- и S-энантиомеры, диастереомеры, D-изомеры, L-изомеры, их рацемические и другие смеси, как входящие в рамки настоящего изобретения.
[0042] Выражение "фармацевтически приемлемый носитель" в контексте
настоящей заявки относится к любому неактивному ингредиенту, присутствующемув одной из описанных здесь композиций в количестве, действенном для увеличения эффективности или других качеств указанной композиции. Неограничивающие примеры таких фармацевтически приемлемых носителей включают разбавители, вспомогательные вещества, суспендирующие агенты, смазывающие агенты, адъюванты, основы, системы доставки, эмульгаторы, разрыхлители, абсорбенты, адсорбенты, консерванты, поверхностно-активные вещества, красители, вкусоароматические вещества, смягчающие вещества, буферы, изменяющие рН агенты, загустители, агенты для смягчения воды, увлажняющие агенты, ароматизаторы, стабилизаторы, кондиционирующие агенты, хелатирующие агенты, подсластители, распыляющие агенты, антислеживающие агенты, увеличивающие вязкость агенты, солюбилизаторы, пластификаторы, усиливающие
проникновение агенты, скользящие вещества, пленкообразователи, наполнители,
вещества для покрытия, связующие вещества, антиоксиданты, повышающие жесткость
агенты, смачивающие агенты или любые смеси указанных компонентов.
[0043] В контексте настоящей заявки выражение "фармацевтически приемлемые
соли" относится к солям определенного(ных) ингредиент(ов), обладающих такой же активностью, как и немодифицированное(ые) соединение(я), и которые не являются нежелательными с биологической или другой точки зрения. Соль может быть получена с применением, например, органических или неорганических кислот. Неограничивающими примерами подходящих кислот являются уксусная кислота, ацетилсалициловая кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, аскорбиновая кислота, аспарагиновая кислота, бензойная кислота, бензолсульфоновая кислота, бисульфокислота, борная кислота, масляная кислота, камфарная кислота, камфорсульфокислота, угольная кислота, лимонная кислота, циклопентанпропионовая кислота, диглюконовая кислота, додецилсульфокислота, этансульфоновая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, глицериновая кислота, глицерофосфорная кислота, глицин, глюкогептановая кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, глутаровая кислота, гликолевая кислота, хемисульфокислота, гептановая кислота, гексановая кислота, гиппуровая кислота, бромистоводородная кислота, соляная кислота, йодистоводородная кислота, гидроксиэтансульфоновая кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, муциновая кислота, нафтилансульфоновая кислота, нафтеновая кислота, никотиновая кислота, азотистая кислота, щавелевая кислота, пеларгоновая кислота, фосфорная кислота, пропионовая кислота, сахарин, салициловая кислота, сорбиновая кислота, янтарная кислота, серная кислота, винная кислота, тиоциановая кислота, тиогликолевая кислота, тиосерная кислота, тозиловая кислота, ундециленовая кислота, а также нативные и искусственно синтезированные аминокислоты.
[0044] В контексте настоящей заявки "объект" или "индивидуум" или "животное"
или "пациент" или "млекопитающее" относится к любому объекту, в частности, к млекопитающему, который нуждается в диагнозе, прогнозе или терапии, например, к человеку.
[0045] В контексте настоящей заявки термин "лечение" болезни, расстройства или
состояния включает облегчение, по крайней мере одного из их симптомов, уменьшение их тяжести, замедление, предотвращение или подавление их прогрессирования. Лечение не обязательно означает, что болезнь, расстройство или состояние излечиваются полностью. Подходящая композиция согласно настоящему изобретению должна только уменьшать
тяжесть заболевания, расстройства или состояния, снижать тяжесть связанных с ними симптомов, обеспечивать улучшение качества жизни пациента или объекта, или задерживать, предотвращать или подавлять начало развития болезни, расстройства или состояния.
[0046] В контексте настоящей заявки термин "модуляция" означает, что
соединение, предложенное в настоящем изобретении, может представлять собой активатор или ингибитор Hsp70 или Hsc70. Активатор потенциально может стимулировать HSP-сигнальные пути. Активаторы потенциально подходят для лечения болезней, при которых увеличение пролиферации может иметь благотворный терапевтический эффект. Ингибитор потенциально может ингибировать Hsp70 или Hsc70 и тем самым ингибировать HSP-сигнальные пути и подавлять рост различных видов рака и пролиферативных заболеваний. Следовательно, в условиях, когда требуется увеличение активности HSP-сигнальных путей, предпочтительным является активатор. В условиях, когда требуется торможение HSP-сигнального пути, предпочтительным является ингибитор.
[0047] Согласно определенным вариантам реализации соединения, предложенные
в настоящем изобретении, подходят для лечения пролиферативных заболеваний. Термин "пролиферативное заболевание" в контексте настоящей заявки относится к раку, включая рак груди, простаты, легкого, толстой кишки, желудка, поджелудочной железы, яичника, мозга, рак кроветворных тканей, карцинома пищевода, почечно-клеточная карцинома, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, лейкемии и саркомы, такие как холангиосаркома и саркома пищевода. В частности, таковые включают рак груди и яичников, рак простаты, рак поджелудочной железы, гепатоклеточную карциному, немелкоклеточный и мелкоклеточный рак лёгкого (НМКРЛ и МКРЛ), колоректальный рак, лейкемию и лимфому. Сюда включены метастатические типы рака, такие как, например, метастатический рак груди.
[0048] В контексте настоящей заявки "онкогенный белок" означает белок, который
потенциально способен индуцировать неопластическую трансформацию клетки или способствовать ей. Согласно одному из примеров указанный белок может кодироваться онкогеном. Онкоген в контексте настоящей заявки представляет собой ген, производящий генный продукт, который потенциально способен индуцировать неопластическую трансформацию клетки или способствовать ей. Онкоген может иметь вирусное или клеточное происхождение. Неограничивающие примеры онкогенных белков включают рецепторы фактора роста, протеинкиназы, трансдукторы сигнала, ядерные фосфопротеины, метилтрансферазы и факторы транскрипции. Если эти белки
экспрессируются неправильно, активируются или перемещаются внутри клетки после
структурных и/или регуляторных изменений, результатом может стать неконтролируемая
пролиферация клеток и недостаточные уровни клеточной смерти. Неограничивающие
примеры онкогенных белков, предложенных в настоящем изобретении, включают ЕгЬВ2
(Her2/Neu), EGFR/ErbBl, ЕгЬВЗ, ErbB4, ErbB5 и любые другие белки семейства erbB,
PDGFR, PML-RAR АКТ, BCR-abl, src, семейство Raf (например, C-Raf, B-Raf),
доминантно-негативный р53, HIF-la, теломеразу, MTG8 (белок миелоидной лейкемии),
фактор теплового шока, обратная транскриптаза вируса гепатита В, c-src, v-src, мутантный
или отсутствующий р53, рецептор эстрогенов, мутантные белки K-ras, синтазу оксида
азота и химерный белок р210 BCR-АВЬПО отдельности и/ли в любой комбинации. Настоящее
изобретение также включает любые другие онкогенные белки, известные на сегодняшний
день и те, которые будут идентифицированы как связанные с Hsp70 или с комплексом
Hsp70-Hsp90. Согласно некоторым вариантам реализации уровни указанных онкогенных
белков, присутствующих у пациента, измеряют до, во время и после терапии. Согласно
другим вариантам реализации введение соединений, предложенных в настоящем
изобретении, нуждающемуся в этом пациенту, приводит к дестабилизации и деградации
одного или более чем одного онкогенного белка у указанного пациента.
[0049] Любые диапазоны концентраций, процентов или отношений,
перечисленные в настоящем документе, следует трактовать как включающие концентрации, проценты или отношения, равные любому целому числу в указанном диапазоне либо его долям, таким как одна десятая или одна сотая целого числа, если не указано иное.
[0050] Следует понимать, что термины, используемые в единственном числе, везде
в контексте настоящей заявки относятся к "одному или более" из перечисленных
компонентов. Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что применение
единственного числа в данном случае подразумевает и множественное число, если не
указано иное. Таким образом, термины, используемые в единственном числе, и
выражение "по меньшей мере один" в настоящей заявке взаимозаменяемы. Например,
"полимер" относится и одному полимеру, и к смеси, содержащей два или более полимера.
[0051] В настоящей заявке при описании различных вариантов реализации везде
использована формулировка "содержащий", однако для специалиста будет очевидно, что
в определенных конкретных случаях вариант реализации может также быть описан с
применением формулировки "состоящий в основном из" или "состоящий из".
[0052] В целях лучшего понимания настоящего руководства и никоим образом не
для ограничения объема настоящего руководства, если не указано иное, все числа,
выражающие количества, проценты или пропорции, и другие численные значения, используемые в настоящем описании и в формуле изобретения, следует во всех возможных случаях считать модифицированными согласно термину "приблизительно." Соответственно, если не указано иное, указанные численные параметры, изложенные в следующем описании и прилагаемой формуле изобретения, являются приблизительными и могут варьироваться варьировать в зависимости от желаемых свойств, которые необходимо получить. Как минимум, каждый численный параметр должен по крайней мере быть интерпретирован в свете имеющихся сведений о значащих разрядах с применением обычных методов округления.
[0053] Значение других терминов в контексте настоящей заявки соответствует их
общепринятым определениям.
Соединения согласно настоящему изобретению
[0054] В соответствии с первым общим вариантом реализации настоящее
изобретение относится к соединениям, имеющим формулу:
Формула I Формула I'
I I i I I I i I
Left side, Aryl Right side, Aryl Left side, Aryl Right side, Aryl
Формула la Формула lb Формула la' Формула lb'
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хь Х2, Х3, Х4, Х5, Х6, Х7, Х8, и Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR, О и S с сохранением ароматичности; R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенные и незамещенные амидо, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -ИНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, SO2-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенные и незамещенные амидо, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -КНЗОгалкенил, -КНСОалкенил, -КНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенные и незамещенные амидо, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил,-СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[0055] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (1а) и формулы
(lb) Х1-Х4 независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
В предпочтительных вариантах осуществления формулы (lb'), Хю is СН2, NH, NR', О и S; где R'представляет собой цепь низшего алкила;
В предпочтительных вариантах осуществления формулы (I) и формулы (Г) Y представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[0056] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (1а) и формулы
(la') Z представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенные и незамещенные амидо, алкиламидо и диалкиламидо.
[0057] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (1а) и формулы
(la') Wi и W2 в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенные и незамещенные амидо, алкиламидо и диалкиламидо; Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
[0058] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (lb) и формулы
(lb') W3 и W4 в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо; W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
[0059] В одном варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Y выбран из группы, состоящей из: S, SO и S02; (2) Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (3) левый арил в формуле 1а или 1а' содержит по меньшей мере один азот в кольце; (4) по меньшей мере один из W1 и W2 выбран из группы, состоящей из следующего: алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (5) по меньшей мере один из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; -КНЕОгалкенил, -МНСОалкенил, -ИНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0060] В еще одном варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Z выбран из группы, состоящей из следующего: арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (2) по меньшей мере один из W1 и W2 выбран из группы, состоящей из следующего: алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (3) по меньшей мере один из W3 и (4) W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; -КНЕОгалкенил, -МНСОалкенил, -ИНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0061] В другом варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Y выбран из группы, состоящей из: S, SO и S02; (2) Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (3) по меньшей мере один из W1 и W2 выбран из группы, состоящей из следующего: алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (4) по меньшей мере один из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; МНБОгалкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0062] В другом варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Z выбран из группы, состоящей из следующего: арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (2) оба W1 и W2 выбраны из группы, состоящей из следующего: алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (3) по меньшей мере один из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; -КНБОгалкенил, -МНСОалкенил, -ИНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0063] В другом варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) оба W1 и W2 выбраны из
группы, состоящей из следующего: арил, гетероцикл, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (4) по меньшей мере один
из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенный или незамещенный амидо; -МНБОгалкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил,
-СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0064] В одном варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Y выбран из группы, состоящей из: S, SO и S02; (2) Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (3) либо левый арил, либо
правый арил в формуле 1а или 1а' содержит по меньшей мере два атома азота в кольце; (4) по меньшей мере один из W1 и W2 выбран из группы, состоящей из следующего: алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (5) по меньшей мере один из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего: амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; -МНБОгалкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0065] В одном варианте реализации соединение формулы (I) или (Г)
соответствует данному выше определению, при условии, что: (1) Y выбран из группы, состоящей из: S, SO и S02; (2) Z выбран из группы, состоящей из следующего: арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; (3) либо левый арил, либо правый арил, либо оба арила в формуле 1а или 1а' содержат по меньшей мере два атома азота в кольце; (4) по меньшей мере один из W1 и W2 выбран из группы, состоящей из следующего: алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино и диариламино; и (5) по меньшей мере один из W3 и W4 выбран из группы, состоящей из следующего:алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенный или незамещенный амидо; -МНБОгалкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, алкиламидо, алкилсульфонамидо и сульфонамидо.
[0066] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, в где,
соединениям формулы:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, 1ЧН802алкенил, -хЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и;
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ГЧНСОалкенил, -ГЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[0067] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2а), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2а), Y представляет собой S, SO, S02, О или СН2.
[0068] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2а), Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0069] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2а), Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0070] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2а), W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0071] В конкретном варианте реализации формулы (2а), Х5-Х9 представляют
собой
[0072] В конкретном варианте реализации формулы (2а), Y представляет собой S,
SO или S02.
[0073] В конкретном варианте реализации формулы (2а), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[0074] В конкретном варианте реализации формулы (2а), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[0075] В конкретном варианте реализации формулы (2а), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -ГЧН802алкенил, -ГЧНСОалкенил, -ГЧНСОалкинил, -СОалкенил,
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[0076] В Таблице 1 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант осуществления. Значения IC50, приведенные для некоторых соединений, иллюстрируют антипролиферативные свойства исследуемых соединений, эти значения были получны в тестах ингибирования расто, описанных в настоящей заявке.
Таблица 1
Иденти фикаци онный номер
Название соединение
1С50
(мкМ)
Kasumi
IC50
(мкМ)
SKBr3
YK1
^№-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил)диацетамид
YK2
2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
57.2
YK3
^№-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илсульфинил)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
YK4
1\Ц6-амино-2-(2-амино-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)-3-(диэтиламино)пропанамид
YK5
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
0.4-0.6
0.455
YK6
1\Ц6-амино-2-(2-амино-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)-3-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
YK7
М,№-(2-(2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
YK8
N,N'-(2-(4,6-flHMeTOKcn-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
> 100
YK9
М,М'-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
> 100
YK10
2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этанол
YK11
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
> 100
YK12
2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
> 100
YK13
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
> 100 (> 100)
YK14
М-(6-амино-2-(2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
> 100
YK15
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
> 100
YK16
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
> 100
YK17
М-(6-амино-2-(2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
YK18
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
YK19
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
2.5
YK20
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)октанамид
6.3
YK21
М-(6-амино-2-(2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)октанамид
7.2
YK22
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)октанамид
12.3
YK23
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)октанамид
13.2
YK24
М,№-(2-(2-(4-бутилпиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил)диацетамид
16.8
YK25
2-(2-(4-бутилпиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диамин
> 100
YK26
М-(6-амино-2-(2-(4-бутилпиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
YK27
М-(6-амино-2-(2-(4-бутилпиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)октанамид
YK28
2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
YK29
М,М'-(2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил)диацетамид
76.7
YK30
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
0.48
YK31
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
34.1
YK32
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3-хлоропропанамид
YK33
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)циалопропанкарбоксамид
88.7 (14.2)
YK34
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
YK35
2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
YK36
М,М'-(2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил)диацетамид
YK37
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
2.5
YK38
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK39
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-2-
бромацетамид
YK40
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
38.3
YK41
М,№-(2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил)(1щиалопропанкарбоксамид
> 100
YK42
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(пиперидин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
YK43
М,М'-(2-(4,6-диэтокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
YK44
1\Ц6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
1.2
YK45
1\Ц6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK46
1\Ц6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)-2-бромацетамид
YK47
1\Ц6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
YK48
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)бут-2-амид
YK49
1\Ц6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)фуран-2-карбоксамид
> 100
YK50
1\Ц6-амино-2-(2-амино-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
1.5
ил)акриламид
YK51
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3-(диметиламино)пропанамид
YK52
6-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-иламино)гексан-1 -ол
779
YK53
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
YK54
N-(6-3MHHO-2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
4.8
YK55
2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-(1]имидазол-4-ил)пентаноат
13.1
YK56
2-(2-(2-(2-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-
2-илтио)-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-4-
илокси)этокси)этокси)этокси)этил 5 -
((3 aR,4R,6aS)-2-OKCoreKcarnflpo-1 Н-тиено [3,4-
<1]имидазол-4-ил)пентаноат
YK57
N-(6-3MHHO-2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этокси)-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
YK58
М-(6-амино-2-(2-амино-4-метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
YK59
2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-амино-6-
пропионамидопиримидин-2-илтио)-4,6-ё1етохупиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-((3aS,4S,6aR)-2-оксогексагидро-Ш-тиено[3,4-с1]имидазол-4-ил)пентаноат
YK60
2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-амино-6-(3-
(диметиламино)пропанамидо)пиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-((3aS,4S,6aR)-2-OKCoreKcarnflpo-lH-THeHo[3,4- <1]имидазол-4-ил)пентаноат
YK61
М-(2-(2-амино-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
94.4
YK62
М-(2-(2-фтор-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
> 100
YK63
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)ацетамид
11.2
YK64
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)ацетамид
YK65
М-(2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
15.7
YK66
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)ацетамид
48.3
YK67
2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
93.5
YK68
2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
14.7
YK69
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
54.2
YK70
2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
25.2
YK71
1\Ц2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
0.8
1.2
YK72
1\Ц2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
YK73
1\Ц2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1.9
11.6
YK74
1\Ц2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
42.2
4.3
YK75
4-(5-(4-ацетамидопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-1 -метилпиперазин 1-оксид
> 100
YK76
1\Ц2-(2,4,6-триметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
22.5
2.4
YK77
1\Ц2-(2,4,6-триметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
62.3
79.2
YK78
1\Ц2-(2,4,6-триметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
YK79
4-(5-(4-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-1 -метилпиперазин 1-оксид
YK80
4-(5-(4-акриламидопиримидин-2-илтио)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-1 -метилпиперазин 1-оксид
> 100
31.1
YK81
1Ч-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK82
4-(4,6-диметокси-5-(4-пропионамидопиримидин-2-илсульфонил)пиримидин-2-ил)-1 -метилпиперазин 1-оксид
YK83
4-(5-(4-аминопиримидин-2-илсульфинил)-4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-1 -метилпиперазин 1-оксид
YK84
2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
YK85
1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
4.8
1.8
YK86
1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
26.2
44.4
YK87
(Е)-1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-
амид
16.0
YK88
1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
13.1
16.7
YK89
1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-
2-карбоксамид
12.0, 7.5
6.8
YK90
1\Ц2-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
20.1, 27.1
25.8
YK91
2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диамин
YK92
М-(6-амино-2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1 -
ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
YK93
2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
амин
YK94
М-(2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1 -ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
YK95
М-(2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1 -ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)фуран-2-карбоксамид
YK96
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK97
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
YK98
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
YK99
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-
2-карбоксамид
YK100
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-
2-карбоксамид
YK101
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK102
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-
амид
YK103
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
YK104
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-
2-карбоксамид
YK105
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пиперидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
YK106
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
> 100
99.5
YK107
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-
амид
YK108
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
9.5
YK109
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-
2-карбоксамид
YK110
М-(2-(4,6-диметокси-2-(пирролидин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
> 100, > 100
> 100
YK111
М-(2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
YK112
(Е)-> Ц2-(4,6-диметокси-2-
морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)бут-2-амид
YK113
М-(2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)метакриламид
YK114
М-(2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-2-карбоксамид
YK115
М-(2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
PDP2
3-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)анилин
79.7
> 100
PDP3
М-(3-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
11.4
16.5
PDP4
М-(3-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
> 100
> 100
PDP5
М-(3-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-
18.1
илтио)фенил)метакриламид
PDP6
М-(3-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)фенил)циалопропанкарбоксамид
9.9(?)
PDP7
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-илтио)-6-(трифторметил)пиримидин-4-ол
PDP8
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-
илтио)-6-(трифторметил)пиримидин-4-ил
акрилат
PDP9
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-
илтио)-6-(трифторметил)пиримидин-4-ил
циалопропанкарбоксилат
PDP10
2-(4,6-диметокси-2-морфолинопиримидин-5-
илтио)-6-(трифторметил)пиримидин-4-ил
метакрилат
YK116
2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
YK117
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
6.2
14.4
YK118
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропионамид
> 100
> 100
YK119
(Е)-М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
YK120
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)метакриламид
YK121
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)фуран-2-карбоксамид
YK122
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-
ил)циалопропанкарбоксамид
YK123
М-(2-(4,6-диметил-2-морфолинопиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-2-метоксиацетамид
58.1
> 100
YK124
2-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-амин
YK125
М-(2-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
YK126
М-(2-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропионамид
YK127
(Е)-М-(2-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-
амид
YK128
М-(2-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
YK129
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
7.7, 9.9
6.8
YK130
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
10.4, 21.2
18.3
YK131
(Е)-М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бут-2-амид
15.0
20.7
YK132
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)метакриламид-М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)метакриламид
7.7
17.8
YK133
3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)анилин
30.5, 25.4
37.3
YK134
М-(3-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
YK135
М-(3-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
YK136
(Е)-М-(3-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бут-2-амид
YK137
М-(3-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)метакриламид
YK138
3-(4,6-диметил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)анилин
YK139
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -
илтио)фенил)циалопропанкарбоксамид
8.9,7-9
7.7
YK140
1\ЦЗ-(2-амино-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
35.2
99.5
YK141
N-(3-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)фенил)пропионамид
38.9
YK142
2-(2-(2-(2-(4-(4,6-диметокси-5-(3-пропионамидофенилтио)пиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-сГ]имидазол-4-ил)пентаноат
47.9
YK144
N-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-
1-ил)-4,6-диметилпиримидин-5-
илтио)пиримидин-4-ил)фуран-2-карбоксамид
YK145
2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-(фуран-2-
карбоксамидо)пиримидин-2-илтио)-4,6-диметилпиримидин-2-ил)пиперазин-1 -ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-(1]имидазол-4-ил)пентаноат
YK146
М-(3-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
8.8,9.0
YK147
М-(3-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)бут-3 -амид
YK148
1Ч-(3-(4,6-диметил-2-(пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)метакриламид
YK149
2-амино-М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
13.9, 21.0
YK177
methyl 2-(5-(3-ацетамидофенилтио)-2-амино-6-
метилпиримидин-4-илокси)пропаноат
ТТ-2
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -
илтио)фенил)циклобутанкарбоксамид
ТТ-3
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)циклогексан-
карбоксамид
ТТ-4
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бензамид
ТТ-5
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенилпиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-6
1\Ц2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-
аминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1 -
ил)этокси)этокси)этокси)этил)-5-(2-
оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-(1]имидазол-4-
ил)пентанамид
ТТ-7
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-8
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бензамид
ТТ-9
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-10
2-амино-М-(3-(4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-11
М-(3-(4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-12
2-амино-М-(3-(4-(циклопентилметокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-13
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
феноксипиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-14
2-амино-М-(3-(4-(циклопентилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-15
2-амино-М-(3-(4-(циклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-16
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3 -илметокси)пиримидин-5 -илтио)фенил)ацетамид
ТТ-17
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
(пиридин-4-илметокси)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
ТТ-18
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропанамид
ТТ-19
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
ТТ-20
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
ТТ-21
2-амино-М-(3-(4-бензил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-22
2-амино-М-(3-(4-(4-хлоробензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пентил)ацетамид
ТТ-23
2-амино-М-(3-(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-24
2-амино-М-(3-(4-(3-аминобензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-25
2-амино-М-(3-(4-(2-аминобензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
ТТ-26
2-амино-М-(3-(4-(дифтор(фенил)метокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-27
2-амино-М-(3-(4-(3,5-дифторбензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
ТТ-28
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
ТТ-29
М-(2-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)акриламид
ТТ-30
М-(6-амино-2-(4-(бензилокси)-2-(4-этилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-01
2-амино-М-(3-(4-(3-(диметиламино)фенил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-02
2-амино-М-(3-(4-(4-(диметиламино)фенил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-03
2-амино-М-(3-(4-(3-цианофенил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-04
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(3-
нитрофенил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
1-05
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(3-
сульфамоилфенил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
1-06
2-амино-1\ЦЗ-(4-(фуран-2-ил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-07
М-(3-(4-(фуран-3-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бензамид
1-08
3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)-1Ч-циклопропилбензамид
1-09
3 -(3 -(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)фенокси)-2-
метилпропанамид
1-10
2-амино-М-(3-амино-5-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-( 1 Н-пиррол-2-ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)ацетамид
1-11
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(1 Н-пиррол-3 -ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)пропанамид
1-12
2-амино-М-(3-хлор-5-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-( 1 Н-пиразол-3 -ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)ацетамид
1-13
М-(3-(4-(циклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бензамид
1-14
2-амино-М-(3-амино-5-(4-(2-(диметиламино)этокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-15
2-амино-М-(3-(4-(2-метоксиэтил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропанамид
1-16
М-(3-(4-ацетил-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)-5-хлорфенил)-2-
аминоацетамид
1-17
М-(4-метил-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-10Н-
трихлоромено[3,2-с!]пиримидин-7-
ил)пропионамид
1-18
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
(пирролидин-2-илметокси)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
1-19
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
(пиперидин-4-илокси)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
1-20
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-(трифторметил)пиримидин-5 -илтио)-5 -метоксифенил)ацетамид
1-21
2-амино-1\ЦЗ-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)-3 -(1 Н-имидазол-4-ил)пропанамид
1-22
5-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)хинолин-2(1Н)-он
1-23
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
1-24
1Ч-(4-(4-(3-(диметиламино)фенокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиридин-2-ил)пропионамид
1-25
N-(3 -(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиперидин-3 -илокси)пиримидин-5 -илтио)фенил)метансульфонамид
1-26
4-(бензилокси)-6-(2-метоксиэтокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5-(3-( 1 -фенилэтил)фенилтио)пиримидин
1-27
7-(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(хинолин-8-
илметокси)пиримидин-5-илтио)хинолин-2(1Н)-
1-28
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
1-29
2-амино-М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пропанамид в смеси с N-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамидом (1:1)
1-30
2-амино-М-(5-(4-(3-аминофенокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиридин-3 -ил)ацетамид
1-31
2-амино-М-(4-(4-(4-аминоциклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
1-32
2-амино-3-метил-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3 -илметокси)пиримидин-5 -илсульфонил)фенил)пентанамид
1-33
2-амино-1\Ц6-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)бензо [d] [ 1,3 ] диоксол-4-ил)ацетамид
1-34
(3-(4-(3-аминоциклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)метанол
1-35
2-амино-1\Ц4-(4-(бензилокси)-6-(2-метоксиэтокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-36
2-амино-М-(3-(фуран-3-иламино)-5-(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиримидин-2-илметокси)пиримидин-5-илсульфинил)фенил)-4-метилпентанамид
1-37
2-амино-М-(3-(4-(3-бром-2-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)-5-метоксифенил)ацетамид
1-38
2-амино-М-(6-(4-(3-аминоциклопентилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
1-39
2-амино-М-(4-(4-(бензилокси)-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)пропанамид
1-40
2-амино-М-(6-(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-
(пиридин-3-илокси)пиримидин-5-илтио)пиридин-2-ил)пропанамид
1-41
2-амино-1Ч-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-5 -(диметиламино)фенил)ацетамид
1-42
5-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он
1-43
2-aMHHO-N-(2-(4-(3-carbamimidoy^eHOKCH)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
1-44
М-(3-(4-(2-(диметиламино)этокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
1-45
2-амино-М-(2-(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-2-илокси)пиримидин-5 -илсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
1-46
2-амино-М-(3-амино-5-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-47
7-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он
1-48
N-(3 -(2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-4-илокси)пиримидин-5 -илсульфинил)фенил)бензамид
1-49
М-(2-амино-6-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиридин-4-ил)акриламид
1-50
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиридин-4-ил)акриламид
1-51
М-(3-амино-5-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)акриламид
1-52
М-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
1-53
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)метакриламид
1-54
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)метакриламид
1-55
(Z)-N-(6-aMHHO-2-(4,6-flHMeTOKcn-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
1-56
^)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
1-57
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
1-58
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)бут-2-амид
1-59
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-М-метилакриламид
1-60
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-1Ч-метилакриламид
1-61
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропиоламид
1-62
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-
ил)пропиоламид
1-63
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)-6-метоксипиримидин-4-ил)акриламид
1-64
М4-аллил-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
1-65
1Ч-аллил-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
1-66
2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)-№-(проп-2-
инил)пиримидин-4,6-диамин
1-67
2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиримидин-5-илтио)-М-(проп-2-
инил)пиримидин-4-амин
1-68
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-(2-(2-метоксиэтокси)этил)пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-69
1\Ц2-(4,6-диметокси-2-(4-(2-(2-метоксиэтокси)этил)пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-70
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-(2-(2-морфолиноэтокси)этил)пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-71
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-(2-(2-морфолиноэтокси)этил)пиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-72
N-(6-aMHHO-2-(2-(4-(2-(2-(диметиламино)этокси)этил)пиперазин-1 -ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
1-73
N-(2-(2-(4-(2-(2-
(диметиламино)этокси)этил)пиперазин-1 -ил)-
4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-
4-ил)акриламид
1-74
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-6-(3 -морфолинопропиламино)пиримидин-4-ил)акриламид
1-75
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-6-(3 -(диметиламино)пропиламино)пиримидин-4-ил)акриламид
1-76
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-4-(диметиламино)бут-2-амид
1-77
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)-4-(диметиламино)бут-2-амид
1-78
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3-(фуран-2-ил)акриламид
1-79
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3-(фуран-2-ил)акриламид
1-80
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3-(тиофен-2-ил)акриламид
1-81
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)-3 -(тиофен-2-ил)акриламид
1-82
(Е)-М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)-3 -(пиридин-3 -ил)акриламид
1-83
(Е)-М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)-3 -(пиридин-3 -ил)акриламид
1-84
5-(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)-1 Н-пиррол-2(5Н)-он
1-85
N-( 1 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)изохинолин-3 -ил)акриламид
1-86
М-(4-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид
1-87
5-(4-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5 -илтио)фенил)пент-1 -ен-3 -он
1-88
1\Ц6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)этенсульфонамид
1-89
М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)пропиоламид
1-90
1 -(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)пиримидин-4-ил)бут-3 -ен-2-он
1-91
2-амино-1\ЦЗ-(4-(4-хлоробензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-92
2-амино-М-(3-(4-(фуран-2-илметокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-93
2-амино-М-(3-(4-(фуран-3-илметокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
1-94
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенэтоксипиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-95
2-амино-1Ч-(3-(4-(2-циклопентилэтокси)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
1-96
2-амино-1Ч-(3-(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
[0077] Один вариант реализации формулы 2а представляет собой соединение
формулы 2а'
Y Y
Y Y
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, где: каждый X и Y независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -NR4R5; группа -C(0)R6; группа -(этокси)п-Рб, где п равно 1-12; возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; возможно замещенная амино-группа; нитро-группа; и карбокси-группа; R4 и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; и -С(О) R^; и каждый R^ независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; и алкилакрилатная группа (такая как этилакрилат).
[0078] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, при условии, что X не содержит мостиковой системы циклов.
[0079] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, при условии, что по меньшей мере один из
заместителей X или Y содержит по меньшей мере одну группу-метку или маркерную
группу, пригодную для идентификации, отслеживания или выделения указанного
соединения. Неограничивающие примеры групп-меток и маркерных групп пригодных для
применения в настоящем изобретении, включают, например, флюоресцентные группы,
группы биотина, группы авидина и группы ферментных линкеров.
[0080] Другой вариант реализации настоящего изобретения представляет собой
NR2R3
NR4R5
соединение формулы 2а" "' 2а"
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, шде: каждый Ri независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -C(0)R6; и группа -(этокси)п-Рб, где п равно 1-12; R2, R3, R4 и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -C(0)R6; и возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; и X выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая (например, 4-алкилпиперазин), арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -NR4R5; группа -C(0)R6 group; группа -(этокси)п-Е1б, где п равно 1-12; возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; возможно замещенная амино-группа; нитро-группа; и карбокси-группа; и каждый R^ независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; и алкилакрилатная группа (такая как этилакрилат); при условии, что X не содержит мостиковой системы циклов.
[0081] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, при условии, что данное соединение не представляет собой М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)октанамид (YK20).
[0082] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а" представляет
собой соединение, описанное выше, и в котором: каждый Ri независимо выбран из
группы, состоящей из следующего: Н; и возможно замещенный линейный или
разветвленный алкил, алкенил или алкинил; R2, R3, R4 и R5 каждый независимо выбран из
группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или
разветвленный С1-С6 алкил; и -С(О) R^, причем R^ представляет собой замещенный
линейный или разветвленный С1-С6 алкил , алкенил или алкинил; и X выбран из группы,
состоящей из следующего: возможно замещенная линейная или разветвленная алкильная,
алкенильная или алкинилтная группа; возможно замещенная карбоциклическая,
гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; и галоген. В другом варианте
реализации X представляет кольцо пиперазина, связанное по атому азота, причем
пиперазин возможно содержит в качестве заместителя по меньшей мере одну группу,
выбранную из группы, состоящей из следующего: галоген галоалкил, линейный или
разветвленный алкил, замещенный линейный или разветвленный алкил и НО-(этокси)п-
С1-С6 алкил-, причем п = 1-8 (накой как, например, НО-(этокси)з-С2Н4-).
[0083] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, где: каждый Ri независимо выбран из группы, состоящей из следующего: линейный или разветвленный С1-С6 алкил и замещенный линейный или разветвленный С1-С6 алкил. Например, Ri может быть выбран из группы, состоящей из следующего: метил, этил, этенил, пропил и бутил.
[0084] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, в котором: каждый Ri независимо выбран из метила и этила; NR2R3 представляет собой NH2; NR4R5 представляет собой NHC(0)-C1-C6 алкил или NHC(0)-C2-C6 алкенил; и X представляет кольцо пиперазина, связанное по атому азота, кольцо пиперазина содержит в качестве заместителя галоген, галоалкил или линейный или разветвленный С1-С6 алкил.
[0085] В еще одном варианте реализации соединение формулы 2а' представляет
собой соединение, описанное выше, где: каждый Ri идентичны или различны и представляют собой метил или этил; R2 , R3 и R4 каждый представляет собой Н; R5 представляет собой -С(0)-метил, -С(0)-этил пли-С(0)-этенил; X представляет собой
пиперазин, 4-метилпиперазин-1-ил или 4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1 -ил.
[0086] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, Б02-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№НБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[0087] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (За), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
[0088] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (За) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[0089] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (За) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0090] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (За) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0091] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (За) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород,
алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[0092] В конкретном варианте реализации формулы (За), Х5-Х9 представляют
собой
[0093] В конкретном варианте реализации формулы (За), Y представляет собой S,
SO или S02.
[0094] В конкретном варианте реализации формулы (За), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[0095] В конкретном варианте реализации формулы (За), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[0096] В конкретном варианте реализации формулы (За), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[0097] В Таблице 2 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
2-16
М-изопропил-4,6-диметил-2-(5-(трифторметил)пиридин-3-илтио)пиримидин-5 -амин
2-17
М-(5-(4,6-диметил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиридин-3 -ил)пиколинамид
2-18
N-(5 -(4-метил-6-(5 -метил фуран-2-ил)-5 -(пиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
2-19
М-(6-гидрокси-2-(4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-винилпиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
2-20
М-(2-(4-(диметиламино)-5-(проп-1-инил)пиримидин-2-илтио)-6-(винилоху)пиримидин-4-ил)ацетамид
2-21
1 -(6-гидрокси-2-(4-метокси-5 -(1 Н-пиррол-1 -ил)-6-винилпиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)этанон
2-22
2-(5-(диэтиламино)-4-метокси-6-винилпиримидин-2-илтио)-6-(метилтио)пиримидин-4-ол
2-23
М-(6-гидрокси-2-(4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-винилпиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)никотинамид
2-24
М-(6-гидрокси-2-(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-( 1Н-пиррол-2-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
2-25
4-(4-метокси-2-(6-нитропиразин-2-илтио)-6-фенилпиримидин-5-ил)морфолин
2-26
2-(6-(4-(циклопентиламино)-6-метокси-5-(пиридин-4-ил)пиримидин-2-илсульфинил)пиразин-2-ил)этанол
2-27
2-(5-(4-метокси-6-фенил-5-(пиперидин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
2-28
М-циклопентил-4-метокси-2-(6-(метилсульфонил)пиразин-2-илтио)-6-фенилпиримидин-5 -амин
2-29
4-(6-метокси-5-морфолино-2-(6-нитропиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)-М,М-диметиланилин
2-30
4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(6-нитропиразин-2-илтио)-6-( 1 Н-пиразол-3 -ил)пиримидин
2-31
6-(4-этинил-6-метокси-5-(пиперидин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
2-32
2-(6-аминопиримидин-4-илсульфонил)-5-циклогексил-1Ч-фенилпиримидин-4-амин
2-33
М-(6-(4-этинил-5-фтор-6-метоксипиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
2-34
изопропил 6-(4-этинил-6-метокси-5-(фениламино)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-карбоксилат
2-35
6-(4-(3-(диметиламино)фенил)-5-(пиперидин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
2-36
6-(4-метокси-5-(пиперидин-1-ил)-6-(тиофен-2-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
2-37
N-(4-aMHHO-6-(5 -(4-гидроксипиперидин-1 -ил)-4-феноксипиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
2-38
6-(5-циклогексинилпиримидин-2-илтио)-М2-этил-М4,М4-диметил-1,3,5 -триазин-2,4-диамин
2-39
М-ацетил-М-(4-амино-6-(5-бром-4-феноксипиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид
2-40
(4-амино-6-(4-фенокси-5-(пиримидин-5-иламино)пиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)(циклопентил)метанон
2-41
1\Ц4-амино-6-(4-(3-(диметиламино)фенокси)-5-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
2-42
1\Ц4-(4-аллил-5-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)-6-амино-1,3,5-триазин-2-ил)-2-аминопропанамид
2-43
6-(5-(4-гидроксициклогексиламино)-4-метокси-6-(тиофен-2-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
2-44
М-(4-амино-6-(5-(4-гидроксициклогексиламино)-4-феноксипиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
2-45
2-амино-М-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пирролидин-2-илметокси)пиримидин-2-илтио)фенил)ацетамид
2-46
2-амино-1Ч-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиперидин-4-илокси)пиримидин-2-илтио)фенил)ацетамид
2-47
2-амино-М-(3-(4-(бензилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(трифторметил)пиримидин-2-илтио)-5-метоксифенил)ацетамид
2-48
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропанамид
2-49
5 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-
илтио)хинолин-2(1Н)-он
2-50
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
2-51
N-(4-(4-(3 -(диметиламино)фенокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропионамид
2-52
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиперидин-3 -илокси)пиримидин-2-илтио)фенил)метансульфонамид
2-53
4-(2-метоксиэтокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-фенокси-2-(3-(1 -фенилэтил)фенилтио)пиримидин
2-54
7-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(хинолин-8-илокси)пиримидин-2-илтио)хинолин-2(1Н)-он
2-55
М-(3-(4-(бензилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
2-56
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)пропанамид
2-57
2-амино-М-(5-(4-(3-аминофенокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиридин-3-ил)ацетамид
2-58
2-амино-М-(4-(4-(4-аминоциклогексилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
2-59
2-амино-3-метил-М-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3-илметокси)пиримидин-2-илсульфонил)фенил)пентанамид
2-60
2-амино-М-(6-(4-(бензилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)бензо[с!][1,3]диоксол-4-ил)ацетамид
2-61
(3 -(4-(3 -(диметиламино)циклогексилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)метанол
2-62
2-амино-М-(4-(4-(бензилокси)-6-(2-метоксиэтокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)ацетамид
2-63
2-aMHHO-N-(3 -(фуран-3 -иламино)-5 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-
(пиримидин-2-илметокси)пиримидин-2-илсульфинил)фенил)-4-
метилпентанамид
2-64
2-амино-М-(6-(4-(3-аминоциклопентилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
2-65
2-амино-М-(4-(4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-фенилпиримидин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)пропанамид
2-66
2-aMHHO-N-(6-(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-3 -илокси)пиримидин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропанамид
2-67
2-амино-М-(2-(4-(3-сагЬат1т1с1оу1фенокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
2-68
N-(3 -(4-(2-(диметиламино)этокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фенил)акриламид
2-69
2-амино-М-(2-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-2-илокси)пиримидин-2-илсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
2-70
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-4-илокси)пиримидин-2-илсульфинил)фенил)бензамид
2-71
2-амино-М-(3-(диметиламино)-5-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-феноксипиримидин-2-илтио)фенил)ацетамид
2-72
5 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
2-73
2-aMHHO-N-(3 -амино-5 -(4-(циклопентилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)фенил)ацетамид
2-74
7-(4-(циклопропилтэтокси)-6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
[0098] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям, имеющим формулу:
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, CH2, CHR, CRR, CO, O, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№1Б02алкенил, -ГЧНСОалкенил, -ГЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ЖТСОалкенил, -ГЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№НБ02алкенил, -ЖТСОалкенил, -ГЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[0099] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4а), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
[00100] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4а) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[00101] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4а) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00102] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4а) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00103] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4а) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00104] В конкретном варианте реализации формулы (4а), Х5-Х9 представляют
[00105] В конкретном варианте реализации формулы (4а), Y представляет собой S,
SO или S02.
собой
[00106] В конкретном варианте реализации формулы (4а), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00107] В конкретном варианте реализации формулы (4а), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00108] В конкретном варианте реализации формулы (4а), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -1\[Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00109] В Таблице 3 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
3-07
5-(4,6-дихлорпиридин-2-илтио)-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин
3-08
М-(2-(3-амино-5-этил-6-метоксипиразин-2-илсульфинил)-6-метоксипиридин-4-ил)ацетамид
3-09
5-(6-хлор-4-(циклопентиламино)пиридин-2-илтио)-М2Дч[2-диэтил-№ -фенилпиразин-2,3 -диамин
3-10
(2-хлор-6-(5-этокси-6-метоксипиразин-2-илтио)пиридин-4-ил) метансильфинамид
3-11
2-(2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-4-ил)ацетонитрил
3-12
2-амино-1Ч-(2-(6-(фуран-2-ил)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-4-ил)ацетамид
3-13
М-(5-(6-метил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
3-14
N-метил-З -(5 -(трифторметокси)пиридин-З -илсульфонил)-6-винилпиразин-2-амин
3-15
этил 5-(6-(дифениламино)-5-(пирролидин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-3-илкарбамат
3-16
N-изопропил-3,6-диметил-5 -(5 -(трифторметил)пиридин-З -илтио)пиразин-2-амин
3-17
М-(5-(3,6-диметил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-3 -ил)пиколинамид
3-18
1Ч-(5-(3-метил-6-(5-метилфуран-2-ил)-5-(пиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
3-19
М-(6-гидрокси-2-(3-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-винилпиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
3-20
М-(2-(3-(диметиламино)-5-(проп-1-инил)пиразин-2-илтио)-6-(винилоху)пиримидин-4-ил)ацетамид
3-21
1 -(6-гидрокси-2-(3-метокси-5-( 1 Н-пиррол-1 -ил)-6-винилпиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)этанон
3-22
2-(5-(диэтиламино)-3-метокси-6-винилпиразин-2-илтио)-6-(метилтио)пиримидин-4-ол
3-23
М-(6-гидрокси-2-(3-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-винилпиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)никотинамид
3-24
М-(6-гидрокси-2-(3-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(1Н-пиррол-2-ил)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
3-25
4-(3-метокси-5-(6-нитропиразин-2-илтио)пиразин-2-ил)морфолин
3-26
2-(6-(3-(циклопентиламино)-6-метокси-5-(пиридин-4-ил)пиразин-2-илсульфинил)пиразин-2-ил)этанол
3-27
2-(5-(6-метокси-3-фенил-5-(пиперидин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
3-28
М-циклопентил-3-метокси-5-(6-(метилсульфонил)пиразин-2-илтио)-6-фенилпиразин-2-амин
3-29
4-(5-метокси-6-морфолино-3-(6-нитропиразин-2-илтио)пиразин-2-ил)-1Ч,1Ч-диметиланилин
3-30
2-метокси-3-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(6-нитропиразин-2-илтио)-5 -(1 Н-пиразол-3 -ил)пиразин
3-31
6-(3-этинил-6-метокси-5-(пиперидин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
3-32
6-(5-циклогексил-3-(фениламино)пиразин-2-илсульфонил)пиримидин-4-амин
3-33
М-(6-(3-этинил-5-фтор-6-метоксипиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
3-34
изопропил 6-(3-этинил-6-метокси-5-(фениламино)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-карбоксилат
3-35
6-(3 -(3 -(диметиламино)фенил)-5 -(пиперидин-1 -ил)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
3-36
6-(6-метокси-5-(пиперидин-1-ил)-3-(тиофен-2-ил)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
3-37
N-(4-aMHHO-6-(5 -(4-гидроксипиперидин-1 -ил)-3 -феноксипиразин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
3-38
6-(5-циклогексинилпиразин-2-илтио)-М2-этил-М4,М4-диметил-1,3,5 -триазин-2,4-диамин
3-39
М-ацетил-М-(4-амино-6-(5-бром-3-феноксипиразин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид
3-40
(4-амино-6-(3 -фенокси-5 -(пиримидин-5 -иламино)пиразин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)(циклопентил)метанон
3-41
1\Ц4-амино-6-(3-(3-(диметиламино)фенокси)-5-(4-
гидроксипиперидин-1-ил)пиразин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-
ил)бензамид
3-42
N-(4-(3 -аллил-5 -(4-гидроксипиперидин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-6-амино-1,3,5-триазин-2-ил)-2-аминопропанамид
3-43
М-(3-(5-(4-гидроксициклогексиламино)-3,6-диметоксипиразин-2-илтио)фенил)акриламид
3-44
2-амино-М-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(пирролидин-2-илметокси)пиразин-2-илтио)фенил)ацетамид
3-45
2-амино-1Ч-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(пиперидин-4-илокси)пиразин-2-илтио)фенил)ацетамид
3-46
2-aMHHO-N-(3 -(б-(бензилокси)-З -метокси-5 -(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)-5-метоксифенил)ацетамид
3-47
2-aMHHO-N-(3 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропанамид
3-48
5 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)хинолин-2(1Н)-он
3-49
2-aMHHO-N-(3 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
3-50
N-(4-(6-(3 -(диметиламино)фенокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропионамид
3-51
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-(пиперидин-3 -илокси)пиразин-2-илтио)фенил)метансульфонамид
3-52
М,М-диметил-2-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-фенокси-3-(3-(1-фенилэтил)фенилтио)пиразин-2-илокси)этанамин
3-53
7-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(хинолин-8-илокси)пиразин-2-илтио)хинолин-2(1Н)-он
3-54
N-(3 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
3-55
2-aMHHO-N-(3 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)пропанамид
3-56
2-амино-М-(5-(6-(3-аминофенокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)пиридин-3-ил)ацетамид
3-57
2-амино-М-(4-(6-(4-аминоциклогексилокси)-5-(4-
метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
3-58
2- амино-3-метил-М-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(пиридин-
3- илметокси)пиразин-2-илсульфонил)фенил)пентанамид
3-59
2-амино-М-(6-(6-(бензилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)бензо[с1][1,3]диоксол-4-ил)ацетамид
3-60
(3 -(6-(3 -(диметиламино)циклогексилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)метанол
3-61
2-амино-М-(4-(6-(бензилокси)-3-(2-метоксиэтокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)ацетамид
3-62
2-aMHHO-N-(3 -(фуран-3 -иламино)-5 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-
6-(пиримидин-2-илметокси)пиразин-2-илсульфинил)фенил)-4-
метилпентанамид
3-63
2-амино-1Ч-(3-(6-(2,3-Диметоксибензилокси)-5-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)-5-
метоксифенил)ацетамид
3-64
2-амино-М-(6-(6-(3-аминоциклопентилокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
3-65
2-aMHHO-N-(4-(3 -метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-фенэтилпиразин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)пропанамид
3-66
2-aMHHO-N-(6-(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-(пиридин-3 -илокси)пиразин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропанамид
3-67
2-амино-М-(3-(3-амино-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-феноксипиразин-2-илтио)фенил)ацетамид
3-68
5 -(6-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
3-69
2-aMHHO-N-(2-(6-(3-carbamimidoy^eHOKCH)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
3-70
N-(3 -(6-(2-(диметиламино)этокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)акриламид
3-71
2-амино-М-(2-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(пиридин-2-илокси)пиразин-2-илсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
3-72
2-амино-М-(3-амино-5-(6-(циклопентилокси)-5-(4-
метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фенил)ацетамид
3-73
7-(6-(циклопропилтэтокси)-3 -метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он
3-74
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-(пиридин-4-илокси)пиразин-2-илсульфинил)фенил)бензамид
[00110] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо,
алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5 или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5 или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00111] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5а), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
[00112] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5а) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[00113] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5а) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00114] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5а) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси,
алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00115] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5а) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00116] В конкретном варианте реализации формулы (5 а), Х5-Х9 представляют
собой
[00117] В конкретном варианте реализации формулы (5а), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00118] В конкретном варианте реализации формулы (5а), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00119] В конкретном варианте реализации формулы (5 а), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00120] В конкретном варианте реализации формулы (5 а), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00121] В Таблице 4 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
4-05
этил 5 -(5 -(дифениламино)-б-(пирролидин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиридин-3-илкарбамат
4-06
М-изопропил-3,6-диметил-5-(5-(трифторметил)пиридин-3-илтио)пиридин-2-амин
4-07
N-(5 -(2,5 -диметил-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиридин-3 -ил)пиколинамид
4-08
N-(5 -(2-метил-5 -(5 -метилфуран-2-ил)-6-(пиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиридин-3 -ил)циалопропанкарбоксамид
4-09
М-(6-гидрокси-2-(2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-винилпиридин-3-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
4-10
М-(2-(2-(диметиламино)-6-(проп-1-инил)пиридин-3-илтио)-6-(винилоху)пиримидин-4-ил)ацетамид
4-11
1 -(6-гидрокси-2-(2-метокси-6-( 1 Н-пиррол-1 -ил)-5-винилпиридин-3-илтио)пиримидин-4-ил)этанон
4-12
2-(6-(диэтиламино)-2-метокси-5-винилпиридин-3-илтио)-6-(метилтио)пиримидин-4-ол
4-13
М-(6-гидрокси-2-(2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-винилпиридин-3-илтио)пиримидин-4-ил)никотинамид
4-14
М-(6-гидрокси-2-(2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-
(1Н-пиррол-2-ил)пиридин-3-илтио)пиримидин-4-
ил)ацетамид
4-15
4-(3-метокси-5-(6-нитропиразин-2-илтио)пиридин-2-ил)морфолин
4-16
2-(6-(6-(циклопентиламино)-3-метокси-2,4'-бипиридин-5-илсульфинил)пиразин-2-ил)этанол
4-17
2-(5-(5-метокси-2-фенил-6-(пиперидин-1-ил)пиридин-3-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
4-18
М-циклопентил-3-метокси-5-(6-(метилсульфонил)пиразин-2-илтио)-6-фенилпиридин-2-амин
4-19
4-(5-метокси-6-морфолино-3-(6-нитропиразин-2-илтио)пиридин-2-ил)-М,М-диметиланилин
4-20
2-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(1Н-пиразол-3-ил)пиридин-3-илтио)-6-нитропиразин
4-21
6-(2-этинил-5 -метокси-6-(пиперидин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиримидин-4-карбонитрил
4-22
6-(6-циклогексил-2-(фениламино)пиридин-3-илсульфонил)пиримидин-4-амин
4-23
М-(6-(2-этинил-6-фтор-5-метоксипиридин-3-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
4-24
изопропил 6-(2-этинил-5-метокси-6-(фениламино)пиридин-3-илтио)пиримидин-4-карбоксилат
4-25
6-(2-(3-(диметиламино)фенил)-6-(пиперидин-1-ил)пиридин-3 -илтио)пиримидин-4-карбонитрил
4-26
6-(5-метокси-6-(пиперидин-1-ил)-2-(тиофен-2-ил)пиридин-3 -илтио)пиримидин-4-карбонитрил
4-27
М-(4-амино-6-(6-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)-2-феноксипиридин-3-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
4-28
6-(6-циклогексинилпиридин-3-илтио)-М2-этил-М4,М4-диметил-1,3,5 -триазин-2,4-диамин
4-29
М-ацетил-М-(4-амино-6-(6-бром-2-феноксипиридин-3-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид
4-30
(4-амино-6-(2-фенокси-6-(пиридин-3-иламино)пиридин-3-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)(циклопентил)метанон
4-31
М-(4-амино-6-(2-(3-(диметиламино)фенокси)-6-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1,3,5 -триазин-2-ил)бензамид
4-32
М-(4-(2-аллил-6-(4-гидроксипиперидин-1-ил)пиридин-3-илтио)-6-амино-1,3,5-триазин-2-ил)-2-аминопропанамид
4-33
N-(3 -(6-(4-гидроксициклогексиламино)-2,5 -диметоксипиридин-3-илтио)фенил)акриламид
4-34
N-(3 -(2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)фенил)ацетамид
4-35
2-амино-М-(2-(2-(фуран-2-ил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)пиридин-4-ил)ацетамид
4-36
N-(5 -(4-метокси-6-(пиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
4-37
2-амино-М-(3-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(пирролидин-2-
илметокси)пиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-38
2-aMHHO-N-(3 -(6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5 -(пиперидин-4-илокси)пиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-39
2-амино-М-(3-метокси-5-(2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-40
2-амино-М-(3-(2-(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиридин-3-илтио)фенил)-3-(1Н-имидазол-4-
ил)пропанамид
4-41
5 -(5 -(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)хинолин-2(1Н)-он
4-42
2-амино-М-(3-(2-(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
4-43
М-(4-(2-(3-(диметиламино)фенокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)пиридин-2-ил)пропионамид
4-44
N-(3 -(6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5 -(пиперидин-3 -илокси)пиридин-3-илтио)фенил)метансульфонамид
4-45
М,М-диметил-2-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-фенокси-3-(3-(1-фенилэтил)фенилтио)пиридин-2-илокси)этанамин
4-46
7-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(хинолин-8-илокси)пиридин-3-илтио)хинолин-2(1Н)-он
4-47
М-(3-(2-(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
4-48
2-амино-М-(3-(5-(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)пропанамид
4-49
2-амино-М-(5-(5-(3-аминофенокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)пиридин-3-ил)ацетамид
4-50
2-амино-М-(4-(5-(4-аминоциклогексилокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
4-51
2-амино-3-метил-М-(3-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(пиридин-3 -илметокси)пиридин-3 -илсульфонил)фенил)пентанамид
4-52
2-амино-М-(6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-феноксипиридин-3 -илтио)бензо [d] [ 1,3 ] диоксол-4-
ил)ацетамид
4-53
(3-(5-(3-(диметиламино)циклогексилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)метанол
4-54
2-амино-М-(4-(2-(2-метоксиэтокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-55
2-aMHHO-N-(3 -(фуран-3 -иламино)-5 -(6-(4-метилпиперазин-1 -
ил)-5-(пиримидин-2-илметокси)пиридин-3-
илсульфинил)фенил)-4-метилпентанамид
4-56
2-амино-М-(3-(5-(2,3-Диметоксибензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-5 -метоксифенил)ацетамид
4-57
2-амино-М-(6-(5-(3-аминоциклопентилокси)-6-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)пиразин-2-
ил)ацетамид
4-58
2-амино-М-(4-(2-(фуран-2-илокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)пропанамид
4-59
2-амино-М-(6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(пиридин-3-илокси)пиридин-3-илтио)пиридин-2-ил)пропанамид
4-60
2-амино-М-(3-(2-амино-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-феноксипиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-61
5 -(5 -(бензилокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
4-62
2-aMHHO-N-(2-(5-(3-carbamimidoy^eHOKCH)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
4-63
М-(3-(2-(фуран-3-илметил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)акриламид
4-64
2-амино-М-(2-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(пиридин-2-илокси)пиридин-3-илсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
4-65
2-амино-М-(3-амино-5-(5-(циклопентилокси)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)фенил)ацетамид
4-66
7-(5-(циклопропилтэтокси)-2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
4-67
N-(3 -(6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5 -(пиридин-4-илокси)пиридин-3-илсульфинил)фенил)бензамид
4-68
1\Ц6-амино-2-(7-амино-3 -метокси-1 -(4-метилпиперазин-1 -ил)изохинолин-4-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
[00122] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
Формула 6а
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, в которых,
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -
СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00123] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6а), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
[00124] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6а) Y
представляет собой Б, SO, SO2, О или СН2.
[00125] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6а) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00126] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6а) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино,
ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00127] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6а) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00128] В конкретном варианте реализации формулы (6а), Х5-Х9 представляют
собой
[00129] В конкретном варианте реализации формулы (6а), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00130] В конкретном варианте реализации формулы (6а), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00131] В конкретном варианте реализации формулы (6а), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00132] В конкретном варианте реализации формулы (6а), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00133] В Таблице 5 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
илтио)пиридин-3-илкарбамат
5-16
1Ч-изопропил-2,4-диметил-6-(5 -(трифторметил)пиридин-З -илтио)пиридин-3 -амин
5-17
М-(5-(4,6-диметил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиридин-3 -ил)пиколинамид
5-18
N-(5 -(6-метил-4-(5 -метил фуран-2-ил)-5 -(пиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
5-19
М-(6-гидрокси-2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-винилпиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
5-20
М-(2-(6-(диметиламино)-5-(проп-1-инил)пиридин-2-илтио)-6-(винилоху)пиримидин-4-ил)ацетамид
5-21
1 -(6-гидрокси-2-(6-метокси-5-( 1 Н-пиррол-1 -ил)-4-винилпиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)этанон
5-22
2-(5-(диэтиламино)-6-метокси-4-винилпиридин-2-илтио)-6-(метилтио)пиримидин-4-ол
5-23
М-(6-гидрокси-2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-винилпиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)никотинамид
5-24
1\Ц6-гидрокси-2-(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-( 1Н-пиррол-2-ил)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
5-25
4-(4-метокси-6-(6-нитропиразин-2-илтио)-2-фенилпиридин-3-ил)морфолин
5-26
2-(6-(2-(циклопентиламино)-4-метокси-3,4'-бипиридин-6-илсульфинил)пиразин-2-ил)этанол
5-27
2-(5-(4-метокси-6-фенил-5-(пиперидин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
5-28
М-циклопентил-4-метокси-6-(6-(метилсульфонил)пиразин-2-илтио)-2-фенилпиридин-3-амин
5-29
4-(4-метокси-3-морфолино-6-(6-нитропиразин-2-илтио)пиридин-2-ил)-М,М-диметиланилин
5-30
2-(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-6-( 1 Н-пиразол-3 -ил)пиридин-2-илтио)-6-нитропиразин
5-31
6-(6-этинил-4-метокси-5-(пиперидин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
5-32
6-(5-циклогексил-6-(фениламино)пиридин-2-
илсульфонил)пиримидин-4-амин
5-33
М-(6-(6-этинил-5-фтор-4-метоксипиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
5-34
изопропил 6-(6-этинил-4-метокси-5-(фениламино)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-карбоксилат
5-35
6-(6-(3-(диметиламино)фенил)-5-(пиперидин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
5-36
6-(4-метокси-5-(пиперидин-1-ил)-6-(тиофен-2-ил)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-карбонитрил
5-37
N-(4-aMHHO-6-(5 -(4-гидроксипиперидин-1 -ил)-6-феноксипиридин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
5-38
6-(5-циклогексинилпиридин-2-илтио)-М2-этил-М4,М4-диметил-1,3,5 -триазин-2,4-диамин
5-39
М-ацетил-М-(4-амино-6-(5-бром-6-феноксипиридин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид
5-40
(4-амино-6-(6-фенокси-5-(пиримидин-5-иламино)пиридин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)(циклопентил)метанон
5-41
М-(4-амино-6-(6-(3-(диметиламино)фенокси)-5-(4-
гидроксипиперидин-1-ил)пиридин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-
ил)бензамид
5-42
М-(4-(6-аллил-5-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-6-амино-1,3,5-триазин-2-ил)-2-аминопропанамид
5-43
М-(3-(5-(4-гидроксициклогексиламино)-4,6-диметоксипиридин-2-илтио)фенил)акриламид
5-44
М-(2-метокси-5-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)фенил)акриламид
5-45
1-(6-(4,6-дихлорпиридин-2-илтио)-5-метоксипиридин-3-ил)-4-метилпиперазин
5-46
М-(5-(3,6-диметил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
5-47
М-(2-(3-циклопропокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)-6-гидроксипиримидин-4-ил)ацетамид
5-48
4-(5-метокси-6-(6-нитропиразин-2-илтио)-2-фенилпиридин-3-ил)морфолин
5-49
2-амино-М-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пирролидин-2-илметокси)пиридин-2-илтио)фенил)ацетамид
5-50
2-aMHHO-N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -(пиперидин-4-илокси)пиридин-2-илтио)фенил)ацетамид
5-51
2-aMHHO-N-(3 -(3 -(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-5-метоксифенил)ацетамид
5-52
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропанамид
5-53
5 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)хинолин-2(1Н)-он
5-54
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)-3-метилбутанамид
5-55
N-(4-(3 -(3 -(диметиламино)фенокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропионамид
5-56
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиперидин-3 -илокси)пиридин-2-илтио)фенил)метансульфонамид
5-57
1-(2-(2-метоксиэтокси)-4-фенокси-6-(3-(1-фенилэтил)фенилтио)пиридин-3-ил)-4-метилпиперазин
5-58
7-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(хинолин-8-илокси)пиридин-2-илтио)хинолин-2(1Н)-он
5-59
N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
5-60
2-aMHHO-N-(3 -(4-(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)пропанамид
5-61
2-амино-М-(5-(4-(3-аминофенокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)пиридин-3-ил)ацетамид
5-62
2-амино-М-(4-(4-(4-аминоциклогексилокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
5-63
2-амино-3-метил-1Ч-(3-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
(пиридин-3-илметокси)пиридин-2-
илсульфонил)фенил)пентанамид
5-64
2-aMHHO-N-(6-(3 -(бензилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)бензо[с!][1,3]диоксол-4-ил)ацетамид
5-65
(3 -(4-(3 -(диметиламино)циклогексилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)метанол
5-66
2-амино-М-(4-(4-(бензилокси)-6-(2-метоксиэтокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)ацетамид
5-67
2-амино-1Ч-(3 -(фуран-3 -иламино)-5 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -
ил)-3-(пиримидин-2-илметокси)пиридин-2-
илсульфинил)фенил)-4-метилпентанамид
5-68
2-aMHHO-N-(3 -(4-(2,3 -Диметоксибензилокси)-5 -(4-
метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)-5-
метоксифенил)ацетамид
5-69
2-амино-М-(6-(4-(3-аминоциклопентилокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
5-70
(Е)-2-амино-М-(4-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-стирилпиридин-2-илтио)-1,3,5-триазин-2-ил)пропанамид
5-71
2-aMHHO-N-(6-(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-3 -илокси)пиридин-2-илтио)пиридин-2-ил)пропанамид
5-72
2-амино-М-(3-(диметиламино)-5-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-феноксипиридин-2-илтио)фенил)ацетамид
5-73
5 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -(пиридин-3 -илметокси)пиридин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
5-74
2-aMHHO-N-(2-(4-(3-carbamimidoy^eHOKCH)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
5-75
N-(3 -(4-(2-(диметиламино)этокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)акриламид
5-76
2-амино-М-(2-(5-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-(пиридин-2-илокси)пиридин-2-илсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
5-77
2-aMHHO-N-(3 -амино-5 -(4-(циклопентилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фенил)ацетамид
5-78
7-(4-(циклопропилтэтокси)-6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он
5-79
N-(3 -(5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-(пиридин-4-илокси)пиридин-2-илсульфинил)фенил)бензамид
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1\[НБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1\[НБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и
алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00135] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7а), Х5-Х9
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
[00136] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7а) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[00137] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7а) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00138] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7а) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00139] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7а) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00140] В конкретном варианте реализации формулы (7а), Х5-Х9 представляют
собой
[00141] В конкретном варианте реализации формулы (7а) Y представляет собой S,
SO или S02.
[00142] В конкретном варианте реализации формулы (7а) Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00143] В конкретном варианте реализации формулы (7а), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00144] В конкретном варианте реализации формулы (7а), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00145] В Таблице 6 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
6-17
М-(5-(2-(циклопентиламино)-6-метокси-4-(4-
метилпиперазин-1-ил)фенилтио)пиридин-3-
ил)пиколинамид
6-18
N-(5 -(3 -метил-5 -(5 -метилфуран-2-ил)-4-(пиперазин-1 -ил)фенилтио)пиридин-3-ил)циалопропанкарбоксамид
6-19
М-(6-гидрокси-2-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5-винилфенилтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
6-20
М-(2-(2-(диметиламино)-4-(проп-1 -инил)фенилтио)-6-(винилоху)пиримидин-4-ил)ацетамид
6-21
1 -(6-гидрокси-2-(5-метокси-4-( 1 Н-пиррол-1 -ил)-2-винилфенилтио)пиримидин-4-ил)этанон
6-22
2-(4-(диэтиламино)-3-метокси-5-винилфенилтио)-6-(метилтио)пиримидин-4-ол
6-23
N-(2-(2,5 -диметокси-4-(4-метилпиперазин-1 -
ил)фенилтио)-6-гидроксипиримидин-4-
ил)никотинамид
6-24
М-(2-(2-(фуран-2-ил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-5-(1 Н-пиррол-2-ил)фенилтио)-6-гидроксипиримидин-4-ил)ацетамид
6-25
4-(3-метокси-5-(6-нитропиразин-2-илтио)бифенил-2-ил)морфолин
6-26
2-(6-(3-(циклопентиламино)-5-метокси-4-(пиридин-4-ил)фенилсульфинил)пиразин-2-ил)этанол
6-27
2-(5 -(5 -метокси-6-(пиперидин-1 -ил)бифенил-3 -илтио)пиразин-2-ил)ацетамид
6-28
N-циклопентил-З -метокси-5 -(6-(метилсульфонил)пиразин-2-илтио)бифенил-2-амин
6-29
3'-метокси-М,М-диметил-2'-морфолино-5'-(6-нитропиразин-2-илтио)бифенил-4-амин
6-30
2-(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-5 -(1Н-пиразол-3-ил)фенилтио)-6-нитропиразин
6-31
6-(3 -этинил-5 -метокси-4-(пиперидин-1 -ил)фенилтио)пиримидин-4-карбонитрил
6-32
6-(4-циклогексил-3 -
(фениламино)фенилсульфонил)пиримидин-4-амин
6-33
М-(6-(6-этинил-5-фтор-4-метоксипиридин-2-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
6-34
изопропил 6-(3 -этинил-5 -метокси-4-(фениламино)фенилтио)пиримидин-4-карбоксилат
6-35
6-(3 '-(диметиламино)-б-(пиперидин-1 -ил)бифенил-3 -илтио)пиримидин-4-карбонитрил
6-36
6-(3-метокси-4-(пиперидин-1-ил)-5-(тиофен-2-ил)фенилтио)пиримидин-4-карбонитрил
6-37
М-(4-амино-6-(4-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)-3 -феноксифенилтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
6-38
6-(4-циклогексинилфенилтио)-М2-этил-М4,М4-диметил-1,3,5 -триазин-2,4-диамин
6-39
М-ацетил-М-(4-амино-6-(4-бром-3-феноксифенилтио)-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамид
6-40
(4-амино-6-(3-фенокси-4-(пиримидин-5-
иламино)фенилтио)-1,3,5-триазин-2-
ил)(циклопентил)метанон
6-41
М-(4-амино-6-(3-(3-(диметиламино)фенокси)-4-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)фенилтио)-1,3,5-триазин-2-ил)бензамид
6-42
М-(4-(3-аллил-4-(4-гидроксипиперидин-1 -
ил)фенилтио)-6-амино-1,3,5-триазин-2-ил)-2-
аминопропанамид
6-43
N-(3 -(4-(4-гидроксициклогексиламино)-2,6-диметоксифенилтио)фенил)акриламид
6-44
2-амино-М-(3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-(пирролидин-2-илметокси)фенилтио)фенил)ацетамид
6-45
2-амино-М-(3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиперидин-4-илокси)фенилтио)фенил)ацетамид
6-46
2-амино-М-(3-(2-(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)-5-метоксифенил)ацетамид
6-47
2-aMHHO-N-(3 -(3 -(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропанамид
6-48
5 -(3 -(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)хинолин-2(1Н)-он
6-49
2-aMHHO-N-(3 -(3 -(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)-3-метилбутанамид
6-50
М-(4-(2-(3-(диметиламино)фенокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)пиридин-2-ил)пропионамид
6-51
N-(3 -(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -(пиперидин-3 -илокси)фенилтио)фенил)метансульфонамид
6-52
1-(2-(2-метоксиэтокси)-6-фенокси-4-(3-(1-фенилэтил)фенилтио)фенил)-4-метилпиперазин
6-53
7-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-(хинолин-8-илокси)фенилтио)хинолин-2( 1 Н)-он
6-54
М-(3-(3-(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
6-55
2-aMHHO-N-(3 -(3 -(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)пропанамид
6-56
2-амино-М-(5-(3-(3-аминофенокси)-4-(4-
метилпиперазин-1-ил)фенилтио)пиридин-3-
ил)ацетамид
6-57
2-амино-М-(4-(3-(4-аминоциклогексилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-6-метилпиримидин-2-ил)ацетамид
6-58
2-амино-3-метил-М-(3-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-(пиридин-3-
илметокси)фенилсульфонил)фенил)пентанамид
6-59
2-амино-М-(6-(2-(бензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)бензо[с!][1,3]диоксол-4-ил)ацетамид
6-60
(3 -(3 -(3 -(диметиламино)циклогексилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)метанол
6-61
2-амино-М-(4-(3-(бензилокси)-5-(2-метоксиэтокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)ацетамид
6-62
2-амино-М-(3-(фуран-3-иламино)-5-(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(пиримидин-2-
илметокси)фенилсульфинил)фенил)-4-метилпентанамид
6-63
2-амино-М-(3-(3-(2,3-Диметоксибензилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-5-метоксифенил)ацетамид
6-64
2-амино-М-(9-метокси-8-(4-метилпиперазин-1 -ил)сИЬепго[Ь,с1]тиофен-3-ил)ацетамид
6-65
2-амино-М-(6-(3-(3-аминоциклопентилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)пиразин-2-ил)ацетамид
6-66
(Е)-2-амино-М-(4-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-
ил)-5-стирилфенилтио)-1,3,5-триазин-2-
ил)пропанамид
6-67
2- амино-М-(6-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-(пиридин-
3- илокси)фенилтио)пиридин-2-ил)пропанамид
6-68
2-aMHHO-N-(3 -(диметиламино)-5 -(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -феноксифенилтио)фенил)ацетамид
6-69
5-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-илметокси)фенилтио)-3,4-дигидрохинолин-2( 1 Н)-он
6-70
2-aMHHO-N-(2-(3-(3-carbamimidoy^eHOKCH)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
6-71
М-(3-(3-(2-(диметиламино)этокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)акриламид
6-72
2-амино-М-(2-(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(пиридин-2-илокси)фенилсульфонил)пиридин-4-ил)пропанамид
6-73
2-амино-М-(3-амино-5-(3-(циклопентилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фенил)ацетамид
6-74
7-(3 -(циклопропилтэтокси)-5 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-он
6-75
N-(3 -(4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -(пиридин-4-илокси)фенилсульфинил)фенил)бензамид
6-76
2-амино-1Ч-(2-(6-амино-4-(4-метилпиперазин-1-ил)нафталин-1 -илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к соединениям
формулы:
Формула 2b
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -
СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00146] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2Ь), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00147] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2b) Y
представляет собой Б, SO, SO2, О или СН2.
[00148] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00149] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2b) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино,
ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00150] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (2b) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00151] В конкретном варианте реализации формулы (2Ь), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:;
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00152] В конкретном варианте реализации формулы (2b), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00153] В конкретном варианте реализации формулы (2b), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00154] В конкретном варианте реализации формулы (2b), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00155] В конкретном варианте реализации формулы (2b), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00156] В Таблице 7 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
7-14
1 -(5 -(4-(этиламино)фуран-3 -илтио)-2-(пиридин-3 -ил)пиримидин-4-ил)этанон
7-15
2-ЭТИНИЛ-5 -(5 -(пирролидин-1 -ил)фуран-3 -илтио)пиримидин-4-амин
7-16
1-(5-(5-метилфуран-3-илтио)-2-(фениламино)пиримидин-4-ил)этанон
7-17
изопропил 4-(4-ацетил-2-( 1 Н-пиррол-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фуран-2-илкарбамат
7-18
метил 4-(4-( 1 Н-пиразол-3-ил)-2-(пиридин-3-ил)пиримидин-5-илтио)фуран-2-карбоксилат
7-19
1 -(3 -(5 -(5 -хлортиофен-3 -илтио)-2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиримидин-4-ил)фенил)этанон
7-20
N-(4-(4-(3 -ацетилфанил)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
7-21
1-(3-(5-(5-бромтиофен-3-илтио)-2-(5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)пиримидин-4-ил)фенил)этанон
7-22
1 -(3 -(2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)-5 -(5 -этокситиофен-3 -илтио)пиримидин-4-ил)фенил)этанон
7-23
4-(4-(3-ацетилфанил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)тиофен-3-сульфонамид
7-24
М-(4-(4-(циклопентиламино)-6-метил-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
7-25
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
7-26
4-(бензилокси)-5-(3-метокси-1Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин
7-27
1 -этил-5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-N-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
7-28
1 -(5-(5-(гидроксиметил)-1 Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-4-ил)мочевина
7-29
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -mrrao)-N-метилфуран-3-карбоксамид
7-30
2-амино-М-(2-(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фуран-3-ил)ацетамид
7-31
1 -(5-(4-(циклопропиламино)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5-илтио)фуран-2-ил)этанон
7-32
2-амино-1Ч-(2-(4-метокси-6-метил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)тиофен-3-ил)пропанамид
7-33
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -mrrao)-N-метил-4-(трифторметокси)тиофен-3-карбоксамид
7-34
5 -метил-3 -(2-(пиридин-3 -ил)пиримидин-5 -илсульфинил)изоксазол
7-35
1 -(3 -(4-амино-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)изоксазол-4-ил)этанон
7-36
3-(4,6-диметил-2-(пиперидин-1-ил)пиримидин-5-илтио)изотиазол
7-37
4-(4-(бензилокси)-5-(5-(фуран-2-ил)изотиазол-3-илтио)пиримидин-2-ил)морфолин
7-38
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -mrrao)-N-метил-Ш-пиразол-З-карбоксамид
7-39
4-(бензилокси)-5-(4-метокси-1Н-пиразол-5-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин
7-40
1 -этил-5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-N-метил-1 Н-пиразол-3 -карбоксамид
7-41
2-(3-(4-этил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)-1-метил-1 Н-пиразол-4-илокси)этанамин
7-42
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -mrrao)-N-метилизоксазол-3-карбоксамид
7-43
2-амино-М-(5-(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
7-44
1Ч-циклопропил-5 -(изоксазол-5 -илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-4-амин
7-45
2-амино-1Ч-(5-(4-метокси-6-метил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
7-46
5 -(4-метокси-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-5 -илтио)-М-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-3-карбоксамид
[00157] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
Формула 3b
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причес R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№1Б02алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№НБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил,
амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00158] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (ЗЬ), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
где R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00159] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (3b) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[00160] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (3b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00161] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (ЗЬ) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00162] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (ЗЬ) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или
ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00163] В конкретном варианте реализации формулы (ЗЬ), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:;
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00164] В конкретном варианте реализации формулы (ЗЬ), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00165] В конкретном варианте реализации формулы (ЗЬ), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00166] В конкретном варианте реализации формулы (ЗЬ), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00167] В конкретном варианте реализации формулы (ЗЬ), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00168] В Таблице 8 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
N-этилфуран-З-амин
8-15
5 -этинил-2-(5 -(пирролидин-1 -ил)фуран-3 -илтио)пиримидин-4-амин
8-16
2-(5 -метил фуран-3 -илтио)-1Ч-фенил-4-(тиофен-3 -ил)пиримидин-5 -амин
8-17
изопропил 4-(4-ацетил-5-( 1 Н-пиррол-1 -ил)пиримидин-2-илтио)фуран-2-илкарбамат
8-18
метил 4-(4-( 1 Н-пиразол-3-ил)-5-(пиридин-3-ил)пиримидин-2-илтио)фуран-2-карбоксилат
8-19
1 -(3 -(2-(5 -хлортиофен-3 -илтио)-5 -(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиримидин-4-ил)фенил)этанон
8-20
М-(4-(4-(2-(диметиламино)этокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
8-21
1-(3-(2-(5-бромтиофен-3-илтио)-5-(5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)пиримидин-4-ил)фенил)этанон
8-22
5-(5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)-2-(5-этокситиофен-3-илтио)-4-(фуран-2-ил)пиримидин
8-23
4-(4-(циклопентилокси)-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-2-илтио)тиофен-3-сульфонамид
8-24
М-(4-(4-(циклопентиламино)-6-метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиримидин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
8-25
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
8-26
3-(бензилокси)-5-(3-метокси-1Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин
8-27
1 -этил-5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
8-28
1-(6-(5-(гидроксиметил)-1Н-пиррол-2-илтио)-3-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-ил)мочевина
8-29
5 -(6-метокси-З -метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-N-метил фуран-3-карбоксамид
8-30
2-амино-М-(2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)фуран-3-ил)ацетамид
8-31
1 -(5-(6-(циклопропиламино)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фуран-2-ил)этанон
8-32
2-амино-М-(2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)тиофен-3-ил)пропанамид
8-33
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)тиофен-3-карбоксамид
8-34
3 -(6-метокси-5 -(пиридин-3 -ил)пиразин-2-илсульфинил)-5 -метилизоксазол
8-35
1 -(3 -(6-амино-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изоксазол-4-ил)этанон
8-36
3 -(6-метил-5 -(пиперидин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изотиазол
8-37
4-(3 -(бензилокси)-5 -(5 -(фуран-2-ил)изотиазол-3 -илтио)пиразин-2-ил)морфолин
8-38
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-Ш-пиразол-З-карбоксамид
8-39
3 -(бензилокси)-5 -(4-метокси-1 Н-пиразол-5 -илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин
8-40
1 -этил-5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-Ш-пиразол-З-карбоксамид
8-41
2-(3 -(6-этил-З -метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1 -метил-1 Н-пиразол-4-илокси)этанамин
8-42
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метилизоксазол-3-карбоксамид
8-43
2-амино-М-(5-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
8-44
1Ч-циклопропил-6-(изоксазол-5 -илтио)-3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-амин
8-45
2-амино-М-(5-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
8-46
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-3-карбоксамид
[00169] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
Формула 4b
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, Б02-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный
циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00170] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4Ь), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00171] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4b) Y
представляет собой S, SO, SO2, О или СН2.
[00172] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00173] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4b) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00174] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (4b) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород,
алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00175] В конкретном варианте реализации формулы (4Ь), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:;
где R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00176] В конкретном варианте реализации формулы (4b), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00177] В конкретном варианте реализации формулы (4b), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00178] В конкретном варианте реализации формулы (4b), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00179] В конкретном варианте реализации формулы (4b), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00180] В Таблице 9 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации.
9-16
5 -(5 -метил фуран-3 -илтио)-1Ч-фенил-3 -(тиофен-3 -ил)пиразин-2-амин
9-17
изопропил 4-(6-ацетил-5 -(1 Н-пиррол-1 -ил)пиразин-2-илтио)фуран-2-илкарбамат
9-18
метил 4-(6-(1Н-пиразол-3-ил)-5-(пиридин-3-ил)пиразин-2-илтио)фуран-2-карбоксилат
9-19
1-(3-(6-(5-хлортиофен-3-илтио)-3-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиразин-2-ил)фенил)этанон
9-20
1\Ц4-(6-(2-(диметиламино)этокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
9-21
1-(3-(6-(5-бромтиофен-3-илтио)-3-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиразин-2-ил)фенил)этанон
9-22
2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)-5-(5-этокситиофен-3-илтио)-3-(фуран-2-ил)пиразин
9-23
4-(6-(циклопентилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)тиофен-3-сульфонамид
9-24
1\Ц4-(6-(циклопентиламино)-3-метил-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
9-25
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
9-26
3-(бензилокси)-5-(3-метокси-1Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин
9-27
1 -этил-5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиррол-3-карбоксамид
9-28
1 -(6-(5 -(гидроксиметил)-1 Н-пиррол-2-илтио)-3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-ил)мочевина
9-29
5 -(6-метокси-З -метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метилфуран-3-карбоксамид
9-30
2-амино-М-(2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиразин-2-илтио)фуран-3-ил)ацетамид
9-31
1 -(5 -(6-(циклопропиламино)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)фуран-2-ил)этанон
9-32
2-амино-1Ч-(2-(6-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиразин-2-илтио)тиофен-3-ил)пропанамид
9-33
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-
илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)тиофен-3-
карбоксамид
9-34
3 -(6-метокси-5 -(пиридин-3 -ил)пиразин-2-илсульфинил)-5-метилизоксазол
9-35
1 -(3 -(6-амино-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изоксазол-4-ил)этанон
9-36
3 -(6-метил-5 -(пиперидин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изотиазол
9-37
4-(3 -(бензилокси)-5 -(5 -(фуран-2-ил)изотиазол-3 -илтио)пиразин-2-ил)морфолин
9-38
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
9-39
3 -(бензилокси)-5 -(4-метокси-1 Н-пиразол-5 -илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин
9-40
1 -этил-5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
9-41
2-(3 -(6-этил-З -метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-1 -метил-1 Н-пиразол-4-илокси)этанамин
9-42
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)-М-метилизоксазол-3-карбоксамид
9-43
2-aMHHO-N-(5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
9-44
М-циклопропил-6-(изоксазол-5-илтио)-3-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-амин
9-45
2-aMHHO-N-(5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
9-46
5 -(6-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиразин-2-
илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-3-
карбоксамид
[00181] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
Формула 5Ь
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -
СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00182] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5Ь), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00183] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5b) Y
представляет собой Б, SO, S02, О или СН2.
[00184] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00185] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5b) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или
ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00186] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (5b) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00187] В конкретном варианте реализации формулы (5Ь), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:;
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00188] В конкретном варианте реализации формулы (5b), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00189] В конкретном варианте реализации формулы (5b), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00190] В конкретном варианте реализации формулы (5b), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00191] В конкретном варианте реализации формулы (5b), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00192] В Таблице 10 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации. Таблица 10
ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР
Название соединения
10-01
4-(5-(4-(диметиламино)фенил)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1 Н-пиррол-З-ол
10-02
3-(2-(4-гидроксициклогексиламино)-5-(2-фенил-1Н-пиррол-3-илсульфонил)пиридин-3-ил)бензимидамид
10-03
(Е)-4-(6-(этиламино)-5 -(проп-1 -енил)пиридин-3 -илтио)-1 Н-пиррол-З-ол
10-04
4-(6-метоксипиридин-3 -илтио)-1 Н-пиррол-З-ол
10-05
2-метокси-5 -(5 -метокси-4-метил-1 Н-пиррол-3 -илтио)-6-метилпиридин-3-амин
10-06
4-(3 -метокси-5 -(2-(метилтио)-1 Н-пиррол-3 -илсульфонил)пиридин-2-иламино)циклогексанол
10-07
5-( 1 -метил-1 Н-пиррол-3-илтио)-3-фенил-2-(пиперидин-1 -ил)пиридин
10-08
1 -метил-4-(3 -фенил-2,4'-бипиридин-5 -илтио)-1Н-пиррол-3-амин
10-09
4-(5 -этинил-6-винилпиридин-З -mrrao)-N,N, 1 -триметил-1 Н-пиррол-3 -амин
10-10
2-метил-З -(1 -метил-4-нитро-1 Н-пиррол-3 -илтио)-6-феноксипиридин
10-11
М-(4-(6-этокси-5-(3-сульфамоилфенил)пиридин-3-илтио)-1 -этил-1 Н-пиррол-3 -ил)ацетамид
10-12
3 -(3,5 -бис(трифторметил)фенил)-5 -(1 -метил-4-(метилсульфонил)-1 Н-пиррол-3 -илтио)-2,4'-Ыпиридин
10-13
1-(2-(диэтиламино)-5-(5-метилфуран-3-илтио)пиридин-3 -ил)этанон
10-14
Для данной структуры название не может быть сгенерировано
10-15
2-ЭТИНИЛ-5 -(5 -(пирролидин-1 -ил)фуран-3 -илтио)пиридин-3-амин
10-16
5 -(5 -метил фуран-3 -илтио)-1Ч-фенил-3 -(тиофен-3 -ил)пиридин-2-амин
10-17
изопропил 4-(5 -ацетил-6-( 1 Н-пиррол-1 -ил)пиридин-3-илтио)фуран-2-илкарбамат
10-18
метил 4-(3-(1 Н-пиразол-3-ил)-2,3'-бипиридин-5-илтио)фуран-2-карбоксилат
10-19
1-(3-(5-(5-хлортиофен-3-илтио)-2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиридин-3 -ил)фенил)этанон
10-20
1\Ц4-(5-(2-(диметиламино)этокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
10-21
1-(3-(5-(5-бромтиофен-3-илтио)-2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиридин-3 -ил)фенил)этанон
10-22
2-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)-5-(5-этокситиофен-3-илтио)-3-(фуран-2-ил)пиридин
10-23
4-(5 -(циклопентилокси)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3-илтио)тиофен-3-сульфонамид
10-24
М-(4-(5-(циклопентиламино)-2-метил-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
10-25
5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1Ы-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
10-26
1 -(3 -(бензилокси)-5 -(3 -метокси-1 Н-пиррол-2-илтио)пиридин-2-ил)-4-метилпиперазин
10-27
1 -этил-5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
10-28
1-(5-(5-(гидроксиметил)-1Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -ил)мочевина
10-29
5 -(5 -метокси-2-метил-6-(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиридин-3-илтио)-1Ч-метилфуран-3-карбоксамид
10-30
2-амино-1Ч-(2-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3-илтио)фуран-3-ил)ацетамид
10-31
1 -(5 -(5 -(циклопропиламино)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3-илтио)фуран-2-ил)этанон
10-32
2-амино-1Ч-(2-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3-илтио)тиофен-3-ил)пропанамид
10-33
5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -
илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)тиофен-3-
карбоксамид
10-34
4-(3 -(бензилокси)-5 -(5 -(фуран-2-ил)изотиазол-3 -илтио)пиридин-2-ил)морфолин
10-35
5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
10-36
1 -(3 -(бензилокси)-5 -(4-метокси-1 Н-пиразол-5 -илтио)пиридин-2-ил)-4-метилпиперазин
10-37
1 -этил-5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1Ч-метил-1 Н-пиразол-3 -карбоксамид
10-38
2-(3-(5-этил-2-метил-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3 -илтио)-1 -метил-1 Н-пиразол-4-илокси)этанамин
10-39
5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -илтио)-1Ч-метилизоксазол-3-карбоксамид
10-40
2-амино-М-(5-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
10-41
М-циклопропил-5-(изоксазол-5-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -амин
10-42
2-амино-1Ч-(5-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
10-43
2-амино-М-(5-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
10-44
М-циклопропил-5-(изоксазол-5-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -амин
10-45
2-амино-1Ч-(5-(5-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
10-46
5 -(5 -метокси-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -
илтио)-М-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-3-
карбоксамид
[00193] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, wherein R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -1ЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино,
ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-
членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00194] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6Ь), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00195] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6b) Y
представляет собой Б, SO, SO2, О или СН2.
[00196] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00197] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6b) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород,
алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00198] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (6b) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00199] В конкретном варианте реализации формулы (6Ь), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:;
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00200] В конкретном варианте реализации формулы (6b), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00201] В конкретном варианте реализации формулы (6b), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00202] В конкретном варианте реализации формулы (6b), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00203] В конкретном варианте реализации формулы (6b), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -1\[Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00204] В Таблице 11 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации. Таблица 11
ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР
Название соединения
11-01
4-(4-(4-(диметиламино)фенил)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-1 Н-пиррол-З-ол
11-02
3-(5-(4-гидроксициклогексиламино)-2-(2-фенил-1Н-пиррол-3-илсульфонил)пиридин-4-ил)бензимидамид
11-03
(Е)-4-(5-(этиламино)-4-(проп-1-енил)пиридин-2-илтио)-1 Н-пиррол-З-ол
11-04
4-(5-метоксипиридин-2-илтио)-1Н-пиррол-3-ол
11-05
3 -метокси-6-(5 -метокси-4-метил-1 Н-пиррол-3 -илтио)-2-метилпиридин-4-амин
11-06
4-(4-метокси-6-(2-(метилтио)-1 Н-пиррол-3 -илсульфонил)пиридин-3-иламино)циклогексанол
11-07
2-( 1 -метил-1 Н-пиррол-3-илтио)-4-фенил-5-(пиперидин-1 -ил)пиридин
11-08
1 -метил-4-(4-фенил-3,4'-бипиридин-6-илтио)-1Н-пиррол-3-амин
11-09
4-(4-этинил-5-винилпиридин-2-илтио)-1Ч,1Ч,1-триметил-1 Н-пиррол-3 -амин
11-10
6-( 1 -метил-4-нитро-1 Н-пиррол-3 -илтио)-3 -фенокси-2-фенилпиридин
11-11
М-(4-(5-этокси-6-(3-сульфамоилфенил)пиридин-2-илтио)-1 -этил-1 Н-пиррол-3 -ил)ацетамид
11-12
4-(3,5-бис(трифторметил)фенил)-6-(1-метил-4-(метилсульфонил)-1 Н-пиррол-3 -илтио)-3,4'-Ьширидин
11-13
1-(5-(диэтиламино)-2-(5-метилфуран-3-илтио)пиридин-4-ил)этанон
11-14
4-(3,3'-бипиридин-6-илтио)-М-этилфуран-3-амин
11-15
5 -этинил-2-(5 -(пирролидин-1 -ил)фуран-3 -илтио)пиридин-4-амин
11-16
6-(5 -метил фуран-3 -илтио)-1Ч-фенил-4-(тиофен-3 -ил)пиридин-3 -амин
11-17
изопропил 4-(4-ацетил-5 -(1 Н-пиррол-1 -ил)пиридин-2-илтио)фуран-2-илкарбамат
11-18
метил 4-(4-( 1 Н-пиразол-3-ил)-3,3'-бипиридин-6-илтио)фуран-2-карбоксилат
11-19
1-(3-(2-(5-хлортиофен-3-илтио)-5-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиридин-4-ил)фенил)этанон
11-20
1\Ц4-(4-(2-(диметиламино)этокси)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
11-21
1-(3-(2-(5-бромтиофен-3-илтио)-5-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)пиридин-4-ил)фенил)этанон
11-22
5-(5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)-2-(5-этокситиофен-3-илтио)-4-(фуран-2-ил)пиридин
11-23
4-(4-(циклопентилокси)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)тиофен-3-сульфонамид
11-24
1\Ц4-(4-(циклопентиламино)-6-метил-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
11-25
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-М-метил-1 Н-пиррол-3 -карбоксамид
11-26
1-(4-(бензилокси)-6-(3-метокси-1Н-пиррол-2-илтио)пиридин-3-ил)-4-метилпиперазин
11-27
1 -этил-5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиррол-3-карбоксамид
11-28
1-(2-(5-(гидроксиметил)-1Н-пиррол-2-илтио)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-4-ил)мочевина
11-29
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-
илтио)-1Ч-метилфуран-3-карбоксамид
11-30
2-амино-1Ч-(2-(4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)фуран-3-ил)ацетамид
11-31
1 -(5 -(4-(циклопропиламино)-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)фуран-2-ил)этанон
11-32
2-амино-1Ч-(2-(4-метокси-6-метил-5-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)тиофен-3-
ил)пропанамид
11-33
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-
илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)тиофен-3-
карбоксамид
11-34
3 -(4-метокси-3,3 '-бипиридин-6-илсульфинил)-5 -метилизоксазол
11-35
1 -(3 -(4-амино-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)изоксазол-4-ил)этанон
11-36
3-(4,6-диметил-5-(пиперидин-1-ил)пиридин-2-илтио)изотиазол
11-37
4-(4-(бензилокси)-6-(5-(фуран-2-ил)изотиазол-3-илтио)пиридин-3-ил)морфолин
11-38
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
11-39
1 -(4-(бензилокси)-6-(4-метокси-1 Н-пиразол-5 -илтио)пиридин-3-ил)-4-метилпиперазин
11-40
1 -этил-5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -
ил)пиридин-2-илтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-
карбоксамид
11-41
2-(3-(4-этил-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)-1 -метил-1 Н-пиразол-4-илокси)этанамин
11-42
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)-М-метилизоксазол-3-карбоксамид
11-43
2-амино-М-(5-(4-метокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-илтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
11-44
М-циклопропил-2-(изоксазол-5-илтио)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-4-амин
11-45
2-aMHHO-N-(5 -(4-метокси-6-метил-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-илтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
11-46
5 -(4-метокси-5 -(4-метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-
илтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-3-
карбоксамид
[00205] Другой вариант реализации настоящего изобретения относится к
соединениям формулы:
Формула 7Ь
стереоизомерам, таутомерам и фармацевтически приемлемым солям таких соединений, где,
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТЧНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил,
амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае могут быть выбраны из группы, включающей следующее: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МНБ02алкенил, -КНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5-или 6-членного конденсированного кольца.
Далее, W2 может быть соединен с правым арилом напрямую с образованием 5-членного кольца или через линкер с образованием 6- или 7-членного кольца.
[00206] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7Ь), Хю и Хп
независимо выбраны из следующих неораничивающих вариантов:
причем R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00207] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7b) Y
представляет собой Б, SO, SO2, О или СН2.
[00208] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7b) Z
представляет собой алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00209] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7b) Wi и W2 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00210] В предпочтительных вариантах осуществления формулы (7b) W3 и W4 в
каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидогруппа, алкиламидо и диалкиламидо.
[00211] В конкретном варианте реализации формулы (7Ь), Хю и Хп независимо
выбраны из следующего:
wherein R представляет собой цепь алкила или замещенного алкила.
[00212] В конкретном варианте реализации формулы (7b), Y представляет собой S,
SO или S02.
[00213] В конкретном варианте реализации формулы (7b), Z представляет собой
водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил,
насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, алкокси, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00214] В конкретном варианте реализации формулы (7b), Wi и W2 независимо
представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкокси, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино или диариламино.
[00215] В конкретном варианте реализации формулы (7b), W3 и W4 независимо
представляют собой водород, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси,
галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо,
сульфонамидо, -1\[Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -
СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
[00216] В ТАблице 12 показаны примеры конкретных соединений, представляющих
этот вариант реализации. Таблица 12
ИДЕН ТИФИ КАЦИ
онны й
НОМЕ Р
Название соединения
12-01
4-(4'-(диметиламино)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)бифенил-3-илтио)-1Н-пиррол-3-ол
12-02
2'-(4-гидроксициклогексиламино)-5'-(2-фенил-1Н-пиррол-3-илсульфонил)бифенил-3-карбоксимидамид
12-03
(Е)-4-(4-(этиламино)-3 -(проп-1 -енил)фенилтио)-1 Н-пиррол-З-ол
12-04
4-(4-метоксифенилтио)-1 Н-пиррол-З-ол
12-05
2-метокси-5-(5-метокси-4-метил-1Н-пиррол-3-илтио)-3-метиланилин
12-06
4-(2-метокси-4-(2-(метилтио)-1Н-пиррол-3-илсульфонил)фениламино)циклогексанол
12-07
1-(5-(1-метил-1Н-пиррол-3-илтио)бифенил-2-ил)пиперидине
12-08
1 -метил-4-(6-(пиридин-4-ил)бифенил-3 -илтио)-1 Н-пиррол-3 -амин
12-09
4-(3 -этинил-4-винилфенилтио)-1Ч,1Ч, 1 -триметил-1 Н-пиррол-3 -амин
12-10
1 -метил-3 -нитро-4-(6-феноксибифенил-3 -илтио)-1 Н-пиррол
12-11
N-(4-(6-3TOKCH-3 '-сульфамоилбифенил-3 -илтио)-1 -этил-1 Н-пиррол-3 -ил)ацетамид
12-12
4-(5 -(1 -метил-4-(метилсульфонил)-1 Н-пиррол-3 -илтио)-3 ',5 '-бис(трифторметил)бифенил-2-ил)пиридин
12-13
1 -(2-(диэтиламино)-5 -(5 -метил фуран-3 -илтио)фенил)этанон
12-14
4-(3,4-ди(пиридин-3 -ил)-5 -(пирролидин-1 -ил)фенилтио)-1Ч-этил фуран -3-амин
12-15
2-ЭТИНИЛ-5 -(5 -(пирролидин-1 -ил)фуран-3 -илтио)анилин
12-16
4-(5-метилфуран-3-илтио)-М-фенил-2-(тиофен-3-ил)анилин
12-17
изопропил 4-(3-ацетил-4-(1Н-пиррол-1-ил)фенилтио)фуран-2-илкарбамат
12-18
метил 4-(3-(1Н-пиразол-3-ил)-4-(пиридин-3-ил)фенилтио)фуран-2-карбоксилат
12-19
1 -(5 '-(5 -хлортиофен-3 -илтио)-2'-(5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-ил)бифенил-3-ил)этанон
12-20
М-(4-(3-(2-(диметиламино)этокси)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
12-21
1-(5'-(5-бромтиофен-3-илтио)-2'-(5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)бифенил-3-ил)этанон
12-22
1-(4-(5-этокситиофен-3-илтио)-2-(фуран-2-ил)фенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин
12-23
4-(3 -(циклопентилокси)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)тиофен-3 -сульфонамид
12-24
N-(4-(3 -(циклопентиламино)-5 -метил-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилсульфинил)тиофен-3-ил)ацетамид
12-25
5 -(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-1Ч-метил-1 Н-пиррол-3-карбоксамид
12-26
1-(2-(бензилокси)-4-(3-метокси-1Н-пиррол-2-илтио)фенил)-4-метилпиперазин
12-27
1 -этил-5 -(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-1Ч-метил-1Н-пиррол-3-карбоксамид
12-28
1 -(5-(5-(гидроксиметил)-1 Н-пиррол-2-илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенил)мочевина
12-29
5-(5-метокси-2-метил-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)-1Ч-метилфуран-3-карбоксамид
12-30
2-амино-М-(2-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)фуран-3-ил)ацетамид
12-31
1 -(5 -(3 -(циклопропиламино)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)фуран-2-ил)этанон
12-32
2-амино-М-(2-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)тиофен-3 -ил)пропанамид
12-33
5-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)тиофен-З-карбоксамид
12-34
3 -(3 -метокси-4-(пиридин-3 -ил)фенилсульфинил)-5 -метилизоксазол
12-35
1 -(3 -(3 -амино-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)изоксазол-4-ил)этанон
12-36
3 -(3 -метил-4-(пиперидин-1 -ил)фенилтио)изотиазол
12-37
4-(2-(бензилокси)-4-(5-(фуран-2-ил)изотиазол-3-илтио)фенил)морфолин
12-38
5-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
12-39
1-(2-(бензилокси)-4-(4-метокси-1Н-пиразол-5-илтио)фенил)-4-метилпиперазин
12-40
1 -этил-5 -(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-1Ч-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид
12-41
2-(3-(5-этил-2-метил-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)-1 -метил-1Н-пиразол-4-илокси)этанамин
12-42
5-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)-М-метилизоксазол-3-карбоксамид
12-43
2-aMHHO-N-(5 -(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)изоксазол-4-ил)ацетамид
12-44
М-циклопропил-5 -(изоксазол-5 -илтио)-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)анилин
12-45
2-aMHHO-N-(5 -(3 -метокси-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенилтио)изотиазол-4-ил)пропанамид
12-46
5-(3-метокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенилтио)-1Ч-метил-4-(трифторметокси)изотиазол-З-карбоксамид
Пример 1: Химический синтез и очистка
[00217] Общая схема. Спектры ЯМР получали на ЯМР- спектрометре Брюкера
AV-III-500 МГц ЯМР. Химические сдвиги приведены в значениях 8 [00218] (2)-PU24FCl
2 синтезировали согласно предыдущей процедуре. ^ ЯМР (500 МГц, CDCb): 8 6.46 (s, Ш), 6.17 (br s, 2Н), 4.31 (s, 2Н), 4.12 (t, J = 7.3 Гц, 2Н), 3.91 (s, ЗН), 3.86 (s, ЗН), 3.72 (s, ЗН), 2.19 (dd, J= 6.6, 2.5 Гц, 2Н), 1.97 (t, J= 2.5 Гц, Ш), 1.94-1.87 (m, 2Н); 13С ЯМР (166
МГц, CDC13) 5 159.8, 157.7, 156.2, 152.8, 152.4, 150.5, 150.2, 142.6, 128.7, 119.7, 116.8, 108.5, 82.2, 69.8, 61.1, 56.2, 42.1, 31.5, 28.1, 15.7; MS (m/z): [M+H]+ 434.1.
[00219] (3)-PU-H71
3 синтезировали согласно предыдущей процедуре. ^ ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 8.33 (s, Ш), 7.31 (s, Ш), 6.89 (s, Ш), 5.99 (s, 2Н), 5.58 (br s, 2Н), 4.30 (t, J= 7.0 Гц, 2Н), 2.74-2.69 (m, Ш), 2.58 (t, J= 7.0 Гц, 2Н), 2.01-1.96 (т, 2Н), 1.03 (d, J = 6.2 Гц, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCI3) 5 154.6, 152.9, 151.6, 149.2, 148.9, 146.2, 127.9, 120.1, 119.2, 112.2, 102.2, 91.1, 48.7, 43.9, 41.7, 30.3, 22.9; MS (m/z): [М+Н]+ 513.0.
[00220] (5) - GM-СуЗВ
5 синтезировали согласно предыдущей процедуре. MS (m/z): [M+Na]+ 1181.3.
Схема синтеза 1
[00221] В схемк синтеза 1 приведены примеры синтеза соединений 18-26, YK5 (4), и
YK20 (6).
Reagents and conditions: (a) PMBCI, NaH, DMF, 0 °C to rt, 12 h, 95%; (b) NIS, MeCN, rt, 1 h, 98%; (c) 4,6-diamino-2-mercaptopyrimidine, neocuproine, Cul, K2C03, DMSO, 120 °C, 16 h, 65%; (d) Ac20, DMAP, 110 °C, 2 h, 91%; (e) TFA, CHCI3, 62 °C, 24 h, 95%; (f) HF/pyridine, NaN02, 0 °C, 1 h, 54%; (g) 1-methylpiperizine, DMF, 90 °C, 1 h, 90%; (h) NaOH, H20, MeOH, 60 °C, 1h, 95 %; (i) acryloyl chloride, Et3N, dioxane, rt, 24 h, 50% or octanoyl chloride, Et3N, dioxane, rt, 12 h, 71%.
[00222] (19) - 4,6-димeтoкcи-N,N-биc(4-мeтoкcибeнзил)пиpимидин-2-aмин
К раствору 2-амино-4,6-диметоксипиримидина (2.0 г, 12.9 ммоль) в 20 мл DMF при температуре 0 °С, добавляли NaH (1.24 г, 51.5 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляли 4-метоксибензил хлорид (4.03 г, 25.7 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь тушили метанолом и удаляли растворитель при пониженном давлении. Растворяли осадок в ЕЮ Ас, промывали рассолом и сушили над MgSCv Растворитель испаряли при пониженном давлении, и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 4:1) с получением 4.8 г (95 %) 19. ^ ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.26 (d, J= 8.4 Гц, 4Н), 6.89 (d, J= 8.4 Гц, 4Н), 5.47 (s, Ш), 4.78 (s, 4Н), 3.85 (s, 6Н), 3.80 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 171.9, 161.5, 158.7, 130.9, 129.1, 113.8, 78.7, 55.2, 53.4, 48.3; MS (m/z): [М+Н]+ 396.3.
[00223] (20) - 5-йoд-4,6-димeтoкcи-N,N-биc(4-мeтoкcибeнзил)пиpимидин-2-aмин
К раствору 19 (4.8 г, 12.3 ммоль) в 50 мЛ ацетонитрила, добавляли N-йодсукцинимид (4.13 г, 18.4 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель испаряли и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексашЕЮАс, 4:1) с получением 6.3 г (98 %) 20. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.18 (d, J = 8.6 Гц, 4Н), 6.83 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 4.71 (s, 4Н), 3.89 (s, 6Н), 3.79 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCI3): 5 169.1, 160.9, 158.8, 130.5, 129.0, 113.9, 55.3, 54.7, 48.6, 43.9; MS (m/z): [М+Н]+ 522.4.
[00224] (21) 2-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 20 (6.2 г, 11.9 ммоль), 4,6-диамино-2-меркаптопиримидина (1.7 г, 11.9 ммоль), неокупроина (0.538 г, 2.38 ммоль), йодида меди (0.452 г, 2.38 ммоль), и карбоната калия (3.3 г, 33.8 ммоль) в 100 мл DMSO перемешивали при температуре 120°С в течение 16 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 4.2 г (65 %) 21. 1Я ЯМР (500 МГц, DMSO-б/б): 5 7.18 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 6.80 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 5.09 (s, Ш), 4.68 (s, 4Н), 4.40 (s, 4Н), 3.79 (s, 6Н), 3.74 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 536.5.
[00225] (22) N,N,-(2-(2-(биc(4-мeтoкcибeнзил)aминo)-4,6-димeтoкcипиpимидин-5-
илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 21 (3.2 г, 6.0 ммоль) и DMAP (0.037 г, 0.3 ммоль) в 20 мЛ уксусного ангидрида перемешивали при температуре 110°С в течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексашЕЮАс, 1:1) с получением 3.4 г (91 %) 22. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/DMSO-6/6): 5 8.25 (br s, Ш), 7.70 (br s, 2H), 7.18 (d, J= 10.0 Гц, 4H), 6.81 (d, J= 10.0 Гц, 4H), 4.70 (s, 4H), 3.78 (s, 6H), 3.74 (s, 6H), 2.10 (s, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 620.4.
[00226] (23) ^ГЧ'-^-^-амино^б-диметоксипиримидин^-илтис^пиримидин^б-
диил) диацетамид
Раствор 22 (0.950 г, 1.5 ммоль) в 20 мЛ TFA:CHCi3 (1:1) нагревали при температуре 62°С в течение 24 часов. Удаляли избыток TFA и растворителя при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгС^МеОН, 20:1) с получением 0.550 г (95 %) 23. *Н ЯМР (500 МГц, DMSO-б/б): 5 10.51 (br s, 2Н), 8.37 (br s, Ш), 6.98 (s, 2Н), 3.78 (s, 6Н), 2.06 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, DMSO-б/б): 5 170.9, 170.1, 169.2, 162.5, 158.9, 92.8, 78.5, 53.9, 24.1; MS (m/z): [М+Н]+ 380.2.
[00227] (24) ^ГЧ'-^-^-фтор^б-диметоксипиримидин^-илтис^пиримидин^б-
диил) диацетамид
23 (2.0 г, 5.3 ммоль) добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0°С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (3.6 мл, 144 ммоль). Порциями добавляли NaN02 (0.545 г, 7.9 ммоль) в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 50 минут при температуре 0 °С и 2 часа при комнатной температуре. Добавляли СаСОз (14.4 г, 144 ммоль) чтобы удалить избыток HF. Смесь экстрагировали с СНгСЬ и очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 1.1 г (54 %) 24. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.45 (s, Ш), 7.61 (s, 2Н), 4.00 (s, 6Н), 2.18 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 383.2.
(25) N,N'-(2-(4,6-flHMeTOKCH-2-(4- метилпиперазин -1-ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К раствору 24 (30 мг, 0.078 ммоль) в 2 мл DMF добавляли 1-метилпиперазин (31 мг, 0.31 ммоль) и нагревали при температуре 90°С в течение 1 часа. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 32 мг (90 %) 25. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 8.36 (br s, Ш), 8.13 (br s, 2Н), 3.88 (s, 6Н), 3.87 (m, 4Н), 2.46 (m, 4Н), 2.35
(s, ЗН), 1.99 (s, 6H); ljC ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.2, 169.4, 168.9, 160.4, 158.9, 96.1, 95.9, 54.7, 54.3, 46.1, 43.8, 24.7; MS (m/z): [M+H]+ 463.2.
[00228] (26) 2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 25 (50 мг, 0.108 ммоль), 1 N NaOH (aq.) (2 мл) в 4 мЛ метанола перемешивали при температуре 60 °С в течение 1 часа. Растворители удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ с получением 39 мг (95 %) 26. 1Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.19 (s, Ш), 4.48 (s, 4Н), 3.88 (s, 6Н), 3.87 (m, 4Н), 2.48 (т, 4Н), 2.35 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 378.9.
[00229] YK5 (4) - ^(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)акриламид
К раствору 26 (0.370 г, 0.977 ммоль) и Et3N (0.988 г, 9.77 ммоль) в 10 мЛ безводного диоксана добавляли акрилоил хлорид (0.855 г, 9.77 ммоль) по капле в условиях водной бани. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 0.211 г (50 %) 4. Ш ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.96 (br s, Ш), 7.04 (s, Ш), 6.41 (d, J= 16.8 Гц, Ш), 6.17 (dd, J = 16.8, 10.3 Гц, Ш), 5.78 (d, J= 10.3 Гц, Ш), 4.83 (br s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.87 (m, 4H), 2.47 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 169.3, 168.8, 162.6, 162.5, 158.3, 154.9, 128.9, 127.1, 86.7, 78.2, 53.1, 52.4, 44.5, 41.9; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для Ci8H25N803S, 433.1770; получено 433.1750; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.28 минут.
[00230] YK20 (6) - ^(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)октанамид
К раствору 26 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли октаноил хлорид (80 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНС13:МеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 17 мг (71 %) 6. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.01 (br s, Ш), 6.97 (s, Ш), 4.86 (br s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.86 (m, 4H), 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН), 2.30 (t, J = 7.4 Гц, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.20-1.30 (m, 8H), 0.87 (t, J = 6.9 Гц, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.7, 171.1, 170.4, 164.3, 160.0, 156.7, 87.9, 80.1, 54.9, 54.2, 46.3, 43.7, 37.7, 31.6,
29.1, 29.0, 25.2, 22.6, 14.1; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C23H37N8O3S, 505.2709; получено 505.2701; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 7.98 минут.
Схема синтеза 2
[00231] В схеме синтеза 2 приведены примеры синтеза соединений 28-36, YK30
(15), и YK31 (16).
Reagents and conditions: (a) NaH, EtOH, reflux, 12 h, 89%; (b) PMBCI, NaH, DMF, 0 °C to rt, 12 h, 97%; (c) NIS, MeCN, rt, 1 h, 96%; (d) 4,6-diamino-2-mercaptopyrimidine, neocuproine, Cul, K2C03, DMSO, 120 °C, 16 h, 80%; (e) Ac20, DMAP, 110 °C, 2 h, 89%; (f) TFA, CHCI3, 62 °C, 24 h, 92%; (g) HF/pyridine, NaN02, 0 °C, 1 h, 46%; (h) 1-methylpiperizine, DMF, 90 °C, 1 h, 91%; (i) NaOH, H20, MeOH, 60 °C, 1 h, 93%; (j) acryloyl chloride, Et3N, dioxane, rt, 12 h, 40% or propionyl chloride, Et3N, dioxane, rt, 12 h, 66%.
[00232]
(28) - 2-амино-4,6-диэтоксипиримидине
К раствору 2-амино-4,6-дихлорпиримидина (1.0 г, 6.09 ммоль) в 20 мЛ чистого эткнола добавляли NaH (0.585 г, 24.39 ммоль) при комнатной температуре. Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли осадок в дихлорметане и промывали рассолом. Растворитель испаряли и полученное твёрдое вещество очищали методом колоночной хроматографии
(гексашЕЮАс, 4:1) с получением 1.0 г (89 %) 28. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.42 (s, Ш), 4.78 (br s, 2Н), 4.24 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 1.34 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 183.9.
[00233]
(29) - 4,6-диэтoкcи-N,N-биc(4-мeтoкcибeнзил)пиpимидин-2-aмин
К раствору 28 (1.00 г, 5.46 ммоль) в 20 мЛ DMF при температуре 0 °С, добавляли NaH (0.524 г, 21.83 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, добавляли 4-метоксибензил хлорид (1.88 г, 12.0 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили этанолом и удаляли растворитель при пониженном давлении. Растворяли осадок в ЕЮАс, промывали рассолом, сушили над MgS04 и концентрировали с получением осадка которых очищали методом колоночной хроматографии (гексашЕЮАс, 4:1) с получением 2.25 г (97 %) 29.
*Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.18 (d, J= 8.1, 4Н), 6.84 (d, J= 8.1, 4Н), 5.38 (s, Ш), 4.70 (s, 4Н), 4.27 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 3.79 (s, 6Н), 1.29 (t, J= 7.1 Гц, 6H); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 171.5, 161.4, 158.6, 130.9, 129.0, 113.7, 78.6,61.8,55.2,48.1, 14.6; MS (m/z): [М+Н]+424.2.
[00234]
(30) - 5-йод-4,6-диэтокси^^-бис(4-метоксибензил)пиримидин-2-амин
К раствору 29 (2.2 г, 5.2 ммоль) в 50 мЛ ацетонитрила, добавляли N-йодсукцинимид (1.7 г, 8 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан: ЕЮАс, 4:1) с получением 2.75 г (96 %) 30. *Н ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 7.17 (m, 4Н), 6.84 (т, 4Н), 4.68 (s, 4Н), 4.34 (q, J= 7.1 Гц, 4Н), 3.80 (s, 6Н), 1.32 (t, J= 7.1 Гц, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCI3/DMSO-6/6): 5 168.3, 160.4, 158.2, 130.1, 128.4, 113.2, 62.6, 54.8, 48.1, 44.2, 14.1; MS (m/z): [М+Н]+ 550.1.
(31) 2-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диэтоксипиримидин-5-илтио) пиримидин-4,6-диамин
Смесь 30 (2.75 г, 5.0 ммоль), 4,6-диамино-2-меркаптопиримидина (0.71 г, 5.0 ммоль), неокупроина (0.226 г, 1.0 ммоль), йодида меди (0.190 г, 1.0 ммоль), и карбоната калия
(1.38 г, 10.0 ммоль) в 60 мЛ DMSO перемешивали при температуре 120 °С в течение 16 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и порциями очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгС^МеОН-ЮТз (7N), 20:1) с получением 2.2 г (80 %) неочищенного 31 [MS (m/z): [М+Н]+ 564.2], который использовали без дальнейшей очистки на следующем шаге.
[00235] (32) N,NX2-(2-(6Hc(4-MeTOKCH6eH3^i)aMHHo)-4,6-flH3TOKCHnHpHMHflHH-5-
илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 31 (1.2 г, 2.19 ммоль) и DMAP (0.013 г, 0.11 ммоль) в 20 мЛ уксусного ангидрида перемешивали при температуре 110 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексашЕЮАс, 1:1) с получением 1.2 г (89 %) 32. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.22 (s, 2Н), 7.21 (d, J= 8.5 Гц, 4Н), 6.86 (d, J= 8.5 Гц, 4Н), 4.70 (s, 4Н) 4.32 (q, J= 7.1 Гц, 4Н), 3.80 (s, 6Н), 2.16 (s, 6Н), 1.20 (t, J= 7.1 Гц, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 648.1.
[00236] (33) N,N,-(2-(2-aминo-4,6-диэтoкcипиpимидин-5-илтиo)пиpимидин-4,6-
диил) диацетамид
Раствор 32 (2.00 г, 3.09 ммоль) в 20 мЛ TFA: СНСЬ (1:1) нагревали при температуре 62 °С в течение 24 часов. Избыток TFA и растворители удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгС^МеОН, 20:1) с получением 1.15 г, (92 %) 33 [MS (m/z): [М+Н]+ 407.8].
[00237] (34) ^^-(2-(2-фтор-4,6-диэтоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил) диацетамид
33 (1.5 г, 3.68 ммоль) добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0 °С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (3.0 мл, 120 ммоль). Через несколько минут добавляли NaN02 (0.380 г, 5.52 ммоль) порциями в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 50 минут при температуре 0°С. Добавляли СаСОз (12.0 г, 120 ммоль) чтобы удалить избыток HF. Смесь экстрагировали с СНгСЬ и очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 0.76 г (46 %) 34. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.47 (br s, Ш), 7.85 (br s, 2Н), 4.44 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 2.17 (s, 6Н), 1.31 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+411.3.
[0023 8] (35) N,N,-(2-(4,6-диэтoкcи-2-(4-мeтилпипepaзин-l-ил)пиpимидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К раствору 34 (0.165 г, 0.402 ммоль) в 3 мЛ DMF добавляли 1-метилпиперазин (400 мг, 4.4 ммоль) и нагревали до 90°С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (C^CbiMeOH-Ntb (7N), 10:1) с выходом 0.180 г (91 %) 35. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.35 (br s, Ш), 8.06 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 3.82 (m, 4H), 2.43 (m, 4H), 2.36 (s, ЗН), 2.15 (s, 6H), 1.26 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 491.2.
[00239] (36) - 2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 35 (0.130 г, 0.265 ммоль), 1 N NaOH (aq.) (2 мл) в 7 мл метанола перемешивали при температуре 60 °С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН, 10:1) с получением 0.100 г (93 %) 36. ХНЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.17 (br s, Ш), 4.48 (s, 4Н), 4.34 (q,J= 7.1 Гц, 4Н), 3.83 (m, 4Н), 2.47 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 1.27 (t, J= 7.1 Гц, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 407.1.
[00240] YK30 (15) - ^(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К раствору 36 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли акрилоил хлорид (44 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНС13:МеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 9 мг (40 %) 15. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.14 (br s, Ш), 7.04 (s, Ш), 6.40 (d, J= 16.9 Гц, Ш), 6.19 (dd, J= 16.9, 10.4 Гц, Ш), 5.77 (d, J= 10.4 Гц, Ш), 4.83 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.0 Гц, 4H), 3.83 (m, 4H), 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН), 1.28 (t, J = 7.0 Гц, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, DMSO-б/б): 5 170.1, 169.2, 164.8, 164.2, 159.4, 156.4, 131.3, 128.1, 87.5, 79.9, 62.0, 54.3, 46.6, 43.2, 14.4; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C2oH29N803S, 461.2083; получено 461.2096; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 5.57 минут.
[00241] YK31 (16) - ^(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)пропионамид
К раствору 36 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли пропионил хлорид (45 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь
перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНС13:МеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 15 мг (66 %) 16. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.17 (br s, Ш), 6.95 (s, Ш), 4.84 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.5, 4H), 3.82 (m, 4H), 2.44 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.34 (q, J= 7.5 Гц, 2H), 1.28 (t, J= 7.5 Гц, 6H), 1.15 (t, J= 7.5 Гц, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 173.3, 170.6, 170.5, 164.2, 160.0, 156.7, 87.7, 80.3, 62.4, 54.9, 46.3, 43.7, 30.6, 14.5, 9.1; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C20H3iN8O3S, 463.2240; получено 463.2253; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.22 минут.
Схема синтеза 3
[00242] В схеме синтеза 3 приведены примеры синтеза соединений 38-43, YK57
(11),и YK56(10).
Reagents and conditions: (a) H(OCH2CH2)4OH, DMF 80 °C 3 h, ,83%; (b) HF/pyridine, NaN02, 0 °C, 42%; (c) 1-methylpiperazine, DMF, 90 °C, 1 h, 91%; (d) NIS, CH3CN, rt, 1.5 h, ,85%; (e) 4,6-diamino-2-mercaptopyrimidine, neocuproine, Cul, K3P04, DMSO, 150 °C, 2.5 h, 73%; (f) acryloyl chloride, Et3N, CH2CI2, 0 °C to rt, 8 h, 38%; (g) NaOH, H20, THF, rt, 6 h, 52%; (h) D-biotin, DCC, DMAP, CH2CI2, sonicate, 8 h, 72%.
[00243] (38) - 2-(2-(2-(2-(2-амино-6-метоксипиримидин-4-
илокси)этокси)этокси)этокси) этанол
К 7.28 г (37.5 ммоль) тетраэтилен гликоля растворённого в 20 мл DMF добавляли 0.900 г (37.5 ммоль) NaH и полученную суспензию перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляли 2.0 г (12.5 ммоль) 2-амино-4-хлор-6-метоксипиримидин и нагревали реакционную смесь при температуре 80 °С в течение 3 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (ЕЮАс:МеОН, 100:0 to 95:5) с получением 3.30 г (83 %) масла 38. TLC (ЕЮАс:МеОН, 95:5 v/v): Rf= 0.24; lR ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.48 (s, Ш), 5.08 (br s, 2H), 4.39 (t, J= 4.8 Гц, 2H), 3.83 (s, ЗН), 3.79 (t, J= 4.8 Гц, 2H), 3.60-3.73 (m, 12H), 3.21 (br s, 1H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.6, 172.0, 162.4, 80.2, 72.8, 70.86, 70.80, 70.77, 70.57, 69.7, 65.6, 61.8, 53.9; MS (m/z): [M+H]+ 318.1.
[00244] (39) - 2-(2-(2-(2-(2-фтор-6-метоксипиримидин-4-
илокси)этокси)этокси)этокси) этанол
1.55 г (4.88 ммоль) 38 добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0 °С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (1.22 мл, 48.8 ммоль). Через несколько минут добавляли порциями 0.505 г (7.32 ммоль) NaN02 в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 70 минут при температуре 0 °С и при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли 15 мл CH2CI2 и 4.88 г СаС03 (48.8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Затем фильтровали над спечённой круглой воронкой и промывали твёрдое вещество ЕЮАс (4 х 25 мл). Объединённый фильтрат фильтровали через целит, концентрировали при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (ЕЮАс:МеОН, 100:0 to 95:5) с получением 0.65 г (42 %) масла 39. TLC (ЕЮАс): Rf= 0.19; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.99 (s, Ш), 4.48-4.50 (m, 2Н), 3.95 (s, ЗН), 3.80-3.84 (m, 2Н), 3.58-3.75 (m, 12Н), 2.56 (br s, Ш); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 173.7 (d, J= 15.7 Гц), 173.0 (d, J= 15.7 Гц), 161.6 (d, J = 215.9 Гц), 88.0 (d, J = 6.8 Гц), 72.5, 70.70, 70.68, 70.57, 70.37, 69.2, 66.6, 61.8, 54.7; MS (m/z): [M+H]+321.2.
[00245] (40) 2-(2-(2-(2-(6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-
илокси)этокси) этокси) этокси)этанол
0.55 г (1.72 ммоль) 39 растворяли в 40 мл DMF и добавляли 1.72 г (17.2 ммоль) 1-метилпиперазина и нагревали при температуре 90 °С в течение 1 часа. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (CH2Ci2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 0.63 г
(91 %) масла 40. TLC (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1 v/v): Rf = 0.24; lR ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.40 (s, 1H), 4.42 (t,J= 5.0 Гц, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (t,J= 5.1 Гц, 4H), 3.65-3.73 (m, 12H), 3.60 (t, J= 4.5 Гц, 2H), 2.44 (t, J= 5.1 Гц, 4H), 2.33 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.0, 171.3, 160.7, 78.5, 72.6, 71.8, 70.64, 70.55, 70.33, 69.5, 65.1, 61.7, 54.9, 53.5, 46.2, 43.7; MS (m/z): [M+H]+ 401.3.
[00246] (41) 2-(2-(2-(2-(5-йод-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-
илокси) этокси) этокси) этокси)этанол
К 0.600 г (1.50 ммоль) 40 растворённого в 20 мл CH3CN добавляли 0.581 г (2.58 ммоль) N-йодсукцинимид и перемешивали раствор в течение 1.5 часов при комнатной температуре. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH:Et3N, 90:10:2) с получением 0.670 г (85 %) масла 41. TLC (CHCl3:MeOH:Et3N, 90:10:2 v/v/v): Rf = 0.29; *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 4.46 (t, J= 4.7 Гц, 2H), 3.92 (s, ЗН), 3.86 (m, 4H), 3.57-3.83 (m, 14H), 2.46 (m, 4H), 2.33 (s, 3H); MS (m/z): [M+H]+ 527.2.
[00247] (42) - 2-(2-(2-(2-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-6-метокси-2-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этанол
0.620 г (1.18 ммоль) 41, 0.501 г (2.36 ммоль) К3Р04, 0.053 г (0.236 ммоль) неокупроина, 0.045 г (0.236 ммоль) йодида меди, и 0.184 г (1.30 ммоль) 4,6-диамино- 2-меркаптопиримидина в 14 мл DMSO нагревали при температуре 150 °С в течение 2.5 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH:Et3N, 99:1:2 to 95:5:2) с получением 0.465 г (73 %) 42. TLC (CHCl3:MeOH:Et3N, 85:15:2 v/v/v): Rf = 0.35; *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.18 (s, Ш), 4.94 (br s, 4H), 4.45 (t, J= 4.2 Гц, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.80-3.86 (br s, 4H), 3.74 (t, J = 4.2 Гц, 2H), 3.69 (t,J= 4.7 Гц, 2H), 3.51-3.63 (m, 10H), 2.46 (t,J= 4.6 Гц, 4H), 2.35 (s, 3H); MS (m/z): [M+H]+ 541.4.
[00248] (43) - 2-(2-(2-(2-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-6-
метокси-2-(4-метил пиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этил акрилат
К 0.100 г (0.185 ммоль) 42 в 2 мл СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 0.037 г (51 мкл, 0.370 ммоль) Et3N. Затем добавляли 0.117 г (105 мкл, 1.30 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 5 минут ледяную баню удаляли и продолжали перемешивать при комнатной температуре. Через 2 часа добавляли дополнительно 0.037 г (51 мкл, 0.370
ммоль) Et3N и 0.050 г (45 мкл, 0.555 ммоль) акрилоил хлорида и продолжали перемешивать в течение ещё 6 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬ^МеОН-NH3 (7N), 12:1) с выходом 0.049 г (38 %) 43. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.16 (br s, Ш), 7.06 (s, Ш), 6.39-6.42 (m, 2Н), 6.10-6.27 (m, 2Н), 5.76-5.83 (m, 2Н), 4.92 (s, 2Н), 4.49 (br s, 2H), 4.29 (br s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.86 (s, 4H), 3.51-3.74 (m, 12H), 2.48 (s, 4H), 2.37 (s, 3H); MS (m/z): [M+H]+ 649.4.
[00249] YK57 (11) - N-(6-aMHHO-2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этокси)-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К 0.042 г (0.0647 ммоль) 43 растворённого в 0.8 мл THF добавляли 0.2 мл 0.5 N NaOH при комнатной температуре и перемешивали в течение 6 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 0.020 г (52 %) 11. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.38 (s, Ш), 7.07 (s, Ш), 6.42 (d, J= 16.7 Гц, Ш), 6.24 (dd, J= 16.7, 10.3 Гц, Ш), 5.77 (d, J= 10.3 Гц, Ш), 4.95 (br s, 2Н), 4.49 (br s, 2H), 3.90 (s, ЗН), 3.86 (br s, 4H), 3.51-3.74 (m, 14H), 2.47 (br s, 4H), 2.36 (s, 3H); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C25H39N8O7S, 595.2662; получено, 595.2658; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 5.05 минут.
[00250] YK56 (10) - 2-(2-(2-(2-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-6-
метокси-2-(4-метил пиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этил 5-((3aS,4S,6aR)-2-OKCoreKca гидро-1Н-тиено[3,4-д]имидазол-4-ил)пентаноат
5.0 мг (0.0084 ммоль) 11, 7.0 мг (0.0287 ммоль) Б-(+)-биотин, 1.0 мг (0.0084 ммоль) DMAP, 14.0 мг (0.0679 ммоль) DCC в 2 мл СН2СЬ обрабатывали ультразвуком в течение 8 часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 5.0 мг (72 %) 10. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.58 (s, Ш), 7.15 (s, Ш), 6.41-6.43 (m, 2Н), 6.19 (br s, Ш), 5.77 (br s, Ш), 5.73 (dd, J= 7.3, 4.3 Гц, Ш), 5.31 (br s, 2H), 4.5-4.6 (m, 2H), 4.41-4.47 (m, 1H), 4.35- 4.4 (m, 1H), 4.15-4.25 (m, 2H), 3.85-3.93 (br s, 7H), 3.5-3.75 (m, 12H), 3.14-3.19 (m, 1H), 2.93 (dd, J= 12.9, 4.9 Гц, 1H), 2.84 (d, J= 12.7 Гц, 1H), 2.56 (br s, 4H), 2.41 (s, 2H), 2.28 (t, J= 7.5 Гц, ЗН), 1.37-1.78 (m, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 = 173.2, 170.7, 170.2, 169.4, 164.6, 164.3, 163.7, 159.5, 156.6, 130.6, 128.3, 88.3, 77.2, 70.5, 70.2, 70.1, 69.3, 68.8, 65.8, 63.1, 61.8, 59.9, 55.2, 54.2, 53.8, 45.4, 42.9, 40.1, 33.4, 29.3, 27.9,
27.8, 24.4; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C35H53N10O9S2, 821.3438; получено, 821.3439; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 7.10 минут.
Схема синтеза 4
[00251] В схеме синтеза 4 приведены примеры синтеза соединений 45-50, YK54
(12), и YK55 (9).
Reagents and conditions: (a) TsCI, NaOH, THF, H20, 0 °C, 2 h, 78%; (b) piperazine, CH3CN, 75 °C 12 h, 66%; (c) 24, DMF, 90 °C, 2 h, 79%; (d) NaOH, MeOH, H20, 60 °C, 2 h, 98%; (e) acryloyl chloride, Et3N, CH2CI2, 0 °C, 7 h, 36%; (f) NaOH, THF, H20, 3 h, 75%; (g) D-biotin, DCC, DMAP, CH2CI2, sonication, 13 h, 85%; (h) acryloyl chloride, Et3N, CH2CI2, 0 °C, 6 h, 41%
[00252] (45) - 2-(2-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил 4-
метилбензолсульфонат
2.0 г (10.3 ммоль) тетраэтилен гликоля в 10 мЛ THF охлаждали до темпетаруры 0 °С. Добавляли 0.200 г (5 ммоль) NaOH в 2 мл дистиллированной воды и перемешивали в течение 30 минут. Затем медленно добавляли 0.491 г (2.58 ммоль) р-толуолсульфонилхлорид и продолжали перемешивать при температуре 0 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексашЕЮАс, 50:50 до 10:90) с получением 0.705 г (78 %) масла 45. TLC (гексашЕЮАс, 10:90 v/v): Rf = 0.26; *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.80 (d, J = 8.1 Гц, 2H), 7.34 (d, J= 8.1 Гц, 2H), 4.16 (t, J= 4.9 Гц, 2H), 3.59-3.74 (m, 14Н), 2.45 (s, ЗН); MS (m/z): [M+Na]+ 371.3.
[00253] (46) - 2-(2-(2-(2-(пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этанол
0.705 г (2.02 ммоль) 45 и 0.697 г (8.09 ммоль) пиперазина в 45 мл CH3CN нагревали при температуре 75 °С в течение 12 часов. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH:MeOH-NH3 (7N), 90:5:5 до 90:0:10) с получением 0.350 г (66 %) масла 46. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 3.72 (m, 2Н), 3.58-3.70 (m, 12Н), 2.91 (m, 4Н), 2.59 (br m, 2H), 2.49 (m, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 263.3.
[00254] (47) - N,N'-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К 0.430 г (1.12 ммоль) 24 в 27 мл DMF добавляли 0.310 г (1.18 ммоль) 46 и нагревали при температуре 90 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 10:1) с получением 0.552 г (79 %) 47. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.38 (br s, 2Н), 8.13 (s, Ш), 3.88 (br s, ЮН), 3.57-3.74 (m, 14H), 2.66 (br s, 2H), 2.58 (br s, 4H), 2.15 (s, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 625.5.
[00255] (48) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил) пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этанол
К 0.520 г (0.832 ммоль) 47 добавляли 25 мл МеОН и 7 мл 10% NaOH (aq.) и перемешивали суспензию при температуре 60 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии
(СН2С12:МеОН, 15:1) с получением 0.440 г (98 %) 48. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.17 (s, Ш), 4.60 (br s, 4Н), 3.88 (br s, ЮН), 3.57-3.77 (m, 14H), 2.67 (br s, 2H), 2.59 (br s, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 541.4.
[00256] (49) 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметокси пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил акрилат
К 22.6 мг (0.042 ммоль) 48 в 3 мЛ СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 83.6 мг (116 мкл, 0.836 ммоль) Et3N. Добавляли 11.4 мг (10.2 мкл, 0.126 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 1 час дополнительно добавляли 11.4 мг (10.2 мкл, 0.126 ммоль) акрилоил хлорида. Эту процедуру повторяли ещё пять раз доведя полное время реакции до 7 часов (совокупное количество акрилоил хлорида, 79.8 мг, 71.7 мкл, 0.882 ммоль). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН, 10:1) с выходом 9.8 мг (36 %) 49. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.10 (br s, Ш), 7.05 (s, Ш), 6.35-6.45 (m, 2Н), 6.10-6.20 (m, 2Н), 5.73-5.85 (m, 2Н), 4.90 (br s, 2H), 4.32 (br s, 2H), 3.89 (br s, ЮН), 3.60-3.70 (m, 12H), 2.69 (br s, 2H), 2.61 (br s, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 649.5.
[00257] YK54 (12) N-(6-aMimo-2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил) пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К 8.0 мг (0.012 ммоль) 49 растворённого в 1.6 мл THF добавляли 0.4 мл 0.5 N NaOH при комнатной температуре и перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН, 10:1) с выходом 5.5 мг (75 %) 12. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.65 (s, Ш), 7.03 (s, Ш), 6.36 (d, J= 16.2 Гц, Ш), 6.11 (m, Ш), 5.70 (d, J= 10.1 Гц, Ш), 5.14 (br s, 2Н), 3.88 (br s, 4H), 3.85 (s, 6H), 3.57-3.75 (m, 15H), 2.70 (br s, 2H), 2.62 (br s, 4H); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C25H39N80yS, 595.2662; получено, 595.2684. ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.05 минут.
[00258] (50) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил) пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-
((ЗaS,4S,6aR)-2-oкcoгeкcaгидpo-lHтиeнo[3,4-d]имидaзoл-4-ил)пeнтaнoaт
50.0 мг (0.0925 ммоль) 48, 90.0 мг (0.37 ммоль) Б-(+)-биотина, 11.3 мг (0.0925 ммоль) DMAP, 153.0 мг (0.74 ммоль) DCC в 15 мл СН2С12 обрабатывали ультразвуком в течение 13 часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и
осадок очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1 до 10:1) с получением неочищенного 50 который очищали методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 60.0 мг (85 %) 50. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.27 (br s, Ш), 5.18 (s, Ш), 4.82 (br s, Ш), 4.59 (br s, 4H), 4.49 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 3.88 (br s, 10H), 3.60-3.75 (m, 12H), 3.15 (m, 1H), 2.92 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.60 (m, 4H), 2.34 (t, J = 5.9 Гц, 2H), 1.37-1.78 (m, 6H); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C32H5iNio08S2, 767.3333; получено 767.3361.
[00259] YK55 (9) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-
4,6-диметокси пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-((ЗaS,4S,6aR)-2-oкcoгeкcaгидpo-lH-тиeнo[3,4-d]имидaзoл-4-ил)пeнтaнoaт
К 50.0 мг (0.065 ммоль) 50 в 10 мЛ СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 195.4 мг (271 мкл, 1.953 ммоль) Et3N. Затем добавляли 17.7 мг (15.9 мкл, 0.196 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 1 час дополнительно добавляли 17.7 мг (15.9 мкл, 0.196 ммоль) акрилоил хлорид. Эту процедуру повторяли ещё четыре раза, доведя полное время реакции до 6 часов (совокупное количество акрилоил хлорида , 106.2 мг, 95.4 мкл, 1.17 ммоль). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 22.0 мг (41 %) 9. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.99 (s, Ш), 7.09 (s, Ш), 6.40 (d, J= 16.8 Гц, Ш), 6.31 (dd, J= 16 J, 9.9 Гц, Ш), 5.79 (br s, Ш), 5.74 (d, J= 10.8 Гц, Ш), 5.09 (s, 2H), 5.08 (s, Ш), 4.50 (m, Ш), 4.36 (m, Ш), 4.21 (t, J= 6.8 Гц, 2H), 3.87 (s, ЮН), 3.6-3.75 (m, 12H), 3.16 (m, 1Щ2.91 (dd, J= 12.8, 5.0 Гц, 1H), 2.74 (d, J= 12.8 Гц, 1H), 2.70 (t, J=5.4 Гц, 2H), 2.61 (t, J= 4.8 Гц, 4H), 2.31 (t, J= 7.6 Гц, 2H), 1.37-1.8 (m, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.9, 170.4, 169.5, 164.1, 164.0, 163.2, 159.3, 156.3, 130.3, 127.9, 88.1, 78.9, 69.9, 69.8, 69.7, 68.5, 68.0, 62.8, 61.4, 59.6, 57.7, 57.1, 54.9, 53.5, 52.5, 42.9, 39.9, 33.1, 27.8, 27.6, 24.0; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C35H53Nio09S2, 821.3438; получено 821.3455; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.98 минут.
Scheme 5. Preparation of Cy3B-YK5 (57).
Reagents and conditions: a. piperazine, DMF, 90°C, 1h; b. N-(4-bromobutyl)phthalimide, DMF, 80°C, 1h; c. hydrazine, THF, rt, 16h; d. NaOH, methanol, 60°C, 1 h; e. di-t-butyldicarbonate, Et3N, CH2CI2, rt, 2h; f. acryloyl chloride, Et3N, CH2CI2; g. TFA:CH2CI2 (1:4), rt, 1h; h СуЗВ-OSu, DMF, rt, 12 h.
[00260] (51) N,N,-(2-((4,6-димeтoкcи-2-(пипepaзин-l-ил)пиpимидин-5-
ил)тио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 24 (100 мг, 0.26 ммоль) и пиперазина (45 мг, 0.52 ммоль) в 5mL DMF нагревали до 90 °С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2CI2: MeOH-NFb (7N), 10:1) с получением 84 мг (72%) 51. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13) 5 8.20 (s, Ш), 8.03 (s, 2Н), 3.87 (s, 6Н), 3.80 (m, 4Н), 3.45 (m, 4Н), 2.08 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 449.1.
[00261] (52) N,N,-(2-((2-(4-(4-(l,3-диoкcoиндoлин-2-ил)бyтил)пипepaзин-l-ил)-
4,6-диметоксипиримидин-5-ил)тио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 51 (50 мг, 0.111 ммоль) и ТчЦ4-бромбутил)фталимида (125 мг, 0.446 ммоль) в 5 мл DMF нагревали до 80°С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении. Очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2CI2: MeOH-NFb (7N), 10:1) с получением 61 мг (86%) 52. MS (m/z): [М+Н]+ 650.1.
[00270] В одном варианте осуществления этого аспекта композиции согласно
настоящему изобретению и дополнительные фармацевтические лекарственные формы
можно вводить пациентов одно и то же время. В альтернативном варианте осуществления
одна из настоящих предпочитаемых композиций и дополнительные фармацевтические
лекарственные формы можно вводить по утрам, а другая - по вечерам.
[00271] В другом варианте осуществления описанные в данной заявке композиции
можно вводить пациенту, нуждающемуся в этом, в различных фармацевтических лекарственных формах. Эта комбинированная терапия может максимизировать эффективность настоящей композиции в лечении рака, злокачественных опухолей, или пролиферативных нарушений.
ПРИМЕРЫ
[00272] Приведенные ниже примеры иллюстрируют фармацевтические композиции
и не предполагают их ограничения. Названия соединений получены с использованием функции"Convert Structure to Name" в ChemBioDraw Ultra V. 11.0.1 (Cambridge Soft; Cambridge, MA)
Пример 1: Химический синтез и очистка
[00273] Общая схема. Спектры ЯМР получали на ЯМР- спектрометре Брюкера
AV-III-500 МГц ЯМР. Химические сдвиги приведены в значениях 8 в единицах ррт (частей на миллион) смещения в область слабого поля относительно TMS (тетраметилсилана) в качестве внутреннего стандарта, результаты для *Н представлены следующим образом: химический сдвиг, мультиплетность (з=синглет, d=дyблeт, 1=триплет, с[=квартент, br = широкий, ш= мультиплет), постоянная взаимодействия (Гц), интеграция. Химический сдвиги для 13С приведены в значениях 8 в ррт смещения в область слабого поля относительно TMS (тетраметилсилана) в качестве внутреннего стандарта. Самм-спектры в высоком разрешении снимали на системе Waters LTC Premier. Масс-спектры низкого разрешения получали на системе Waters Acquity Ultra Performance LC с ионизацией электроспреем и четвертьволновым (SQ) датчиком. Аналитическую ВЭЖХ выполняли на системе Waters Autopurification с детектором ELSD (испарительный детектор светорассеяния), PDA и MicroMass ZQ. Аналитическую хроматографию в тонком слое выполняли на силикагелевых пластинах F254 толщиной ЮОмкм. Колоночную флэш=хроматографию проводили с использованием силикагеля размера 230400 меш. Использовали растворители класса ВЭЖХ. Все реагенты приобретали в Aldrich
или Acorn Organics и использовали без очистки. Все реакции осуществляли с аргоновой защитой.
[00274] (2) - PU24FC1
2 синтезировали согласно предыдущей процедуре. ХН ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 6.46 (s, Ш), 6.17 (br s, 2Н), 4.31 (s, 2Н), 4.12 (t, J= 7.3 Гц, 2Н), 3.91 (s, ЗН), 3.86 (s, ЗН), 3.72 (s, ЗН), 2.19 (dd, J= 6.6, 2.5 Гц, 2Н), 1.97 (t, J= 2.5 Гц, Ш), 1.94-1.87 (m, 2Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCI3) 5 159.8, 157.7, 156.2, 152.8, 152.4, 150.5, 150.2, 142.6, 128.7, 119.7, 116.8, 108.5, 82.2, 69.8, 61.1, 56.2, 42.1, 31.5, 28.1, 15.7; MS (m/z): [М+Н]+ 434.1.
[00275] (3) - PU-H71
3 синтезировали согласно предыдущей процедуре. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 8 8.33 (s, Ш), 7.31 (s, Ш), 6.89 (s, Ш), 5.99 (s, 2Н), 5.58 (br s, 2Н), 4.30 (t, J= 7.0 Гц, 2Н), 2.74-2.69 (m, Ш), 2.58 (t, J= 7.0 Гц, 2Н), 2.01-1.96 (m, 2Н), 1.03 (d, J = 6.2 Гц, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCb) 5 154.6, 152.9, 151.6, 149.2, 148.9, 146.2, 127.9, 120.1, 119.2, 112.2, 102.2, 91.1, 48.7, 43.9, 41.7, 30.3, 22.9; MS (m/z): [М+Н]+ 513.0.
[00276] (5) - GM-СуЗВ
5 синтезировали согласно предыдущей процедуре. MS (m/z): [M+Na]+ 1181.3.
Схема синтеза 1
[00277] В схеме синтеза 1 приведены примеры синтеза соединений 18-26, YK5 (4), и
YK20 (6).
Реагенты и условия: (a) PMBCI, NaH, ДМФ, 0°С до к.т.Д2 ч. 95%; (б) NIS, MeCN, кт, 1ч, 89%; (с) 4б6-диамино-2-меркаптопиримидин, неокурпоин, Cul, К2С03, ДМСО, 120°С, 16 ч, 65%; (d) Ac20, DMAP, 110°С, 2ч, 91%; (е) ТФА, СНС13, 62°С, 24 чб 95%; (f) HF/пиридин, NaN02, 60°С, 1 ч, 54%; (g) 1-метилпиперазин, ДМФ, 90°С, 1 ч, 95%, (c)акрилоил хлорид, Et3N, диоксан, кт, 24 ч, 50% или октаноил хлорид, Et3N, диоксан, к.т., 12 ч, 71%
[00278] (19) - 4,6-диметокси-^^бис(4-метоксибензил)пиримидин-2-амин
К раствору 2-амино-4,6-диметоксипиримидина (2.0 г, 12.9 ммоль) в 20 мл ДМФ при температуре 0 °С, добавляли NaH (1.24 г, 51.5 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляли 4-метоксибензил хлорид (4.03 г, 25.7 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь тушили метанолом и удаляли растворитель при пониженном давлении. Растворяли осадок в ЕЮАс, промывали рассолом и сушили над MgSC> 4. Растворитель испаряли при пониженном давлении, и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 4:1) с получением 4.8 г (95 %) 19. *Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.26 (d, J= 8.4 Гц, 4Н), 6.89 (d, J= 8.4 Гц, 4Н), 5.47 (s, Ш), 4.78 (s, 4Н), 3.85 (s, 6Н), 3.80 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 171.9, 161.5, 158.7, 130.9, 129.1, 113.8, 78.7, 55.2, 53.4, 48.3; MS (m/z): [М+Н]+ 396.3.
[00279] (20) - 5-йод-4,6-диметокси^^-бис(4-метоксибензил)пиримидин-2-амин
К раствору 19 (4.8 г, 12.3 ммоль) в 50 мЛ ацетонитрила, добавляли N-йодсукцинимид (4.13 г, 18.4 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель испаряли и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 4:1) с получением 6.3 г (98 %) 20. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 8 7.18 (d, J = 8.6 Гц, 4Н), 6.83 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 4.71 (s, 4Н), 3.89 (s, 6Н), 3.79 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 169.1, 160.9, 158.8, 130.5, 129.0, 113.9, 55.3, 54.7, 48.6, 43.9; MS (m/z): [М+Н]+ 522.4.
[00280] (21) 2-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 20 (6.2 г, 11.9 ммоль), 4,6-диамино-2-меркаптопиримидина (1.7 г, 11.9 ммоль), неокупроина (0.538 г, 2.38 ммоль), йодида меди (0.452 г, 2.38 ммоль), и карбоната калия (3.3 г, 33.8 ммоль) в 100 мл ДМСО перемешивали при температуре 120°С в течение 16 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 4.2 г (65 %) 21. *Н ЯМР (500 МГц, ДМСОчЙГ): 5 7.18 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 6.80 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 5.09 (s, Ш), 4.68 (s, 4Н), 4.40 (s, 4Н), 3.79 (s, 6Н), 3.74 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 536.5.
[00281] (22) N,N'-(2-(2-(биc(4-мeтoкcибeнзил)aминo)-4,6-димeтoкcипиpимидин-5-
илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 21 (3.2 г, 6.0 ммоль) и DMAP (0.037 г, 0.3 ммоль) в 20 мЛ уксусного ангидрида перемешивали при температуре 110°С в течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 1:1) с получением 3.4 г (91 %) 22. 1Я ЯМР (500 МГц, СБС13/ДМСО-й^): 5 8.25 (br s, Ш), 7.70 (br s, 2Н), 7.18 (d, J= 10.0 Гц, 4Н), 6.81 (d, J= 10.0 Гц, 4Н), 4.70 (s, 4Н), 3.78 (s, 6Н), 3.74 (s, 6Н), 2.10 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 620.4.
[00282] (23) ]Ч,]Ч'-(2-(2-амино-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил) диацетамид
Раствор 22 (0.950 г, 1.5 ммоль) в 20 мЛ TFA:CHC13 (1:1) нагревали при температуре 62°С в течение 24 часов. Удаляли избыток TFA и растворителя при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 20:1) с получением 0.550 г (95 %) 23. 1Я ЯМР (500 МГц, ДМСОчЙ): 5 10.51 (br s, 2Н), 8.37 (br s, Ш), 6.98 (s, 2Н), 3.78 (s, 6Н), 2.06 (s, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, ДМСОчЙ): 5 170.9, 170.1, 169.2, 162.5, 158.9, 92.8, 78.5, 53.9, 24.1; MS (m/z): [М+Н]+ 380.2.
[00283] (24) ^]Ч'-(2-(2-фтор-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил) диацетамид
23 (2.0 г, 5.3 ммоль) добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0°С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (3.6 мл, 144 ммоль). Порциями добавляли NaN02 (0.545 г, 7.9 ммоль) в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 50 минут при температуре 0 °С и 2 часа при комнатной температуре. Добавляли СаСОз (14.4 г, 144 ммоль) чтобы удалить избыток HF. Смесь экстрагировали с CH2CI2 и очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 1.1 г (54 %) 24. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.45 (s, Ш), 7.61 (s, 2Н), 4.00 (s, 6Н), 2.18 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 383.2.
(25) ]Ч,]Ч'-(2-(4,6-диметокси-2-(4- метилпиперазин -1-ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К раствору 24 (30 мг, 0.078 ммоль) в 2 мл ДМФ добавляли 1-метилпиперазин (31 мг, 0.31 ммоль) и нагревали при температуре 90°С в течение 1 часа. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 32 мг (90 %) 25. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.36 (br s, Ш), 8.13 (br s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.87 (m, 4H), 2.46 (m, 4H), 2.35
(s, ЗН), 1.99 (s, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.2, 169.4, 168.9, 160.4, 158.9, 96.1, 95.9, 54.7, 54.3, 46.1, 43.8, 24.7; MS (m/z): [M+H]+ 463.2.
[00284] (26) 2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 25 (50 мг, 0.108 ммоль), 1 N NaOH (aq.) (2 мл) в 4 мЛ метанола перемешивали при температуре 60 °С в течение 1 часа. Растворители удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ с получением 39 мг (95 %) 26. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.19 (s, Ш), 4.48 (s, 4Н), 3.88 (s, 6Н), 3.87 (m, 4Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 378.9.
[00285] YK5 (4) - ^(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)акриламид
К раствору 26 (0.370 г, 0.977 ммоль) и Et3N (0.988 г, 9.77 ммоль) в 10 мЛ безводного диоксана добавляли акрилоил хлорид (0.855 г, 9.77 ммоль) по капле в условиях водной бани. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 0.211 г (50 %) 4. Ш ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.96 (br s, Ш), 7.04 (s, Ш), 6.41 (d, J= 16.8 Гц, Ш), 6.17 (dd, J = 16.8, 10.3 Гц, Ш), 5.78 (d, J= 10.3 Гц, Ш), 4.83 (br s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.87 (m, 4H), 2.47 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDCb): 5 169.3, 168.8, 162.6, 162.5, 158.3, 154.9, 128.9, 127.1, 86.7, 78.2, 53.1, 52.4, 44.5, 41.9; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для Ci8H25N803S, 433.1770; получено 433.1750; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.28 минут.
[00286] YK20 (6) - ^(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)октанамид
К раствору 26 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли октаноил хлорид (80 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНСЬМеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 17 мг (71 %) 6. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.01 (br s, Ш), 6.97 (s, Ш), 4.86 (br s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.86 (m, 4H), 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН), 2.30 (t, J = 7.4 Гц, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.20-1.30 (m, 8H), 0.87 (t, J = 6.9 Гц, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDCb): 5 172.7, 171.1, 170.4, 164.3, 160.0, 156.7, 87.9, 80.1, 54.9, 54.2, 46.3, 43.7, 37.7, 31.6,
29.1, 29.0, 25.2, 22.6, 14.1; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для СгзНзт^ОзБ, 505.2709; получено 505.2701; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 7.98 минут.
Схема синтеза 2
[00287] В схеме синтеза 2 приведены примеры синтеза соединений 28-36, YK30
(15), и YK31 (16).
Реагенты и условия: (a) NaH, ЕЮН, нагревание с обратным холодильником 12 ч. 89%; (б) PMBCI, NaH, ДМФ, от 0 °С до кт, 1ч, 97%; (с) NIS, MaCN, кт, 1ч, 96%; (d) 4,6-диамино-2-меркаптопиримидин, неокурпоин, Cul, К2С03, ДМСО, 120°С, 16 ч, 80%; (е) Ac20, DMAP, 110°С, 2ч, 89%; (f) ТФА, СНС13, 62°С, 24 ч, 92%; (g) HF/пиридин, NaN02, 60°С, 1 ч, 46%; (h) 1-метилпиперазин, ДМФ, 90°С, 1 ч, 91%, (i)NaOH, Н20, МеОН, 60°С; (c)акрилоил хлорид, Et3N, диоксан, кт, 24 ч, 40% или октаноил хлорид, Et3N, диоксан, к.т., 12 ч, 66%
[00288] (28) - 2-амино-4,6-диэтоксипиримидин
К раствору 2-амино-4,6-дихлорпиримидина (1.0 г, 6.09 ммоль) в 20 мЛ чистого эткнола добавляли NaH (0.585 г, 24.39 ммоль) при комнатной температуре. Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли осадок в дихлорметане и промывали рассолом. Растворитель испаряли и полученное твёрдое вещество очищали методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 4:1) с получением 1.0 г (89 %) 28. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.42 (s, Ш), 4.78 (br s, 2Н), 4.24 (q, 7 = 7.1 Гц, 4H), 1.34 (t, 7 = 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 183.9.
[00289] (29) - 4,6-диэтокси-^^бис(4-метоксибензил)пиримидин-2-амин
К раствору 28 (1.00 г, 5.46 ммоль) в 20 мЛ ДМФ при температуре 0 °С, добавляли NaH (0.524 г, 21.83 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, добавляли 4-метоксибензил хлорид (1.88 г, 12.0 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили этанолом и удаляли растворитель при пониженном давлении. Растворяли осадок в ЕЮАс, промывали рассолом, сушили над MgSCM и концентрировали с получением осадка которых очищали методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 4:1) с получением 2.25 г (97 %) 29. *НЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.18 (d, 7= 8.1, 4Н), 6.84 (d, 7= 8.1, 4Н), 5.38 (s, Ш), 4.70 (s, 4Н), 4.27 (q, 7= 7.1 Гц, 4Н), 3.79 (s, 6Н), 1.29 (t, 7= 7.1 Гц, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCb): 5 171.5, 161.4, 158.6, 130.9, 129.0, 113.7, 78.6,61.8,55.2, 48.1, 14.6; MS (m/z): [М+Н]+424.2.
[00290] (30) - 5-йoд-4,6-диэтoкcи-N,N-биc(4-мeтoкcибeнзил)пиpимидин-2-aмин
К раствору 29 (2.2 г, 5.2 ммоль) в 50 мЛ ацетонитрила, добавляли N-йодсукцинимид (1.7 г, 8 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан: ЕЮАс, 4:1) с получением 2.75 г (96 %) 30. *Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.17 (m, 4Н), 6.84 (m, 4Н), 4.68 (s, 4Н), 4.34 (q, 7= 7.1 Гц, 4Н), 3.80 (s, 6Н), 1.32 (t,7=7.1 Гц, 6Н); 13СЯМР(166 МГц, CDCb/ДМСО-^): 5 168.3, 160.4, 158.2, 130.1, 128.4, 113.2, 62.6, 54.8, 48.1, 44.2, 14.1; MS (m/z): [М+Н]+ 550.1.
(31) 2-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диэтоксипиримидин-5-илтио) пиримидин-4,6-диамин
Смесь 30 (2.75 г, 5.0 ммоль), 4,6-диамино-2-меркаптопиримидина (0.71 г, 5.0 ммоль), неокупроина (0.226 г, 1.0 ммоль), йодида меди (0.190 г, 1.0 ммоль), и карбоната калия (1.38 г, 10.0 ммоль) в 60 мЛ ДМСО перемешивали при температуре 120 °С в течение 16 ч.
Удаляли растворитель при пониженном давлении и порциями очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 20:1) с получением 2.2 г (80 %) неочищенного 31 [MS (m/z): [М+Н]+ 564.2], который использовали без дальнейшей очистки на следующем шаге.
[00291 ] (32) ^]Ч'-(2-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диэтоксипиримид ин-5-
илтио) пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 31 (1.2 г, 2.19 ммоль) и DMAP (0.013 г, 0.11 ммоль) в 20 мЛ уксусного ангидрида перемешивали при температуре 110 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 1:1) с получением 1.2 г (89 %) 32. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.22 (s, 2Н), 7.21 (d, J= 8.5 Гц, 4Н), 6.86 (d, J= 8.5 Гц, 4Н), 4.70 (s, 4Н) 4.32 (q, J= 7.1 Гц, 4Н), 3.80 (s, 6Н), 2.16 (s, 6Н), 1.20 (t, J= 7.1 Гц, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 648.1.
[00292] (33) ]Ч,]Ч'-(2-(2-амино-4,6-диэтоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил) диацетамид
Раствор 32 (2.00 г, 3.09 ммоль) в 20 мЛ TFA: СНОз (1:1) нагревали при температуре 62 °С в течение 24 часов. Избыток TFA и растворители удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгС^МеОН, 20:1) с получением 1.15 г, (92 %) 33 [MS (m/z): [М+Н]+ 407.8].
[00293] (34) ]Ч,]Ч'-(2-(2-фтор-4,6-диэтоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-
диил) диацетамид
33 (1.5 г, 3.68 ммоль) добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0 °С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (3.0 мл, 120 ммоль). Через несколько минут добавляли NaN02 (0.380 г, 5.52 ммоль) порциями в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 50 минут при температуре 0°С. Добавляли СаСОз (12.0 г, 120 ммоль) чтобы удалить избыток HF. Смесь экстрагировали с CH2CI2 и очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 0.76 г (46 %) 34. 1И ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 8.47 (br s, Ш), 7.85 (br s, 2Н), 4.44 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 2.17 (s, 6Н), 1.31 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 411.3.
[00294] (35) ]Ч,]Ч'-(2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К раствору 34 (0.165 г, 0.402 ммоль) в 3 мЛ ДМФ добавляли 1-метилпиперазин (400 мг, 4.4 ммоль) и нагревали до 90°С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 0.180 г (91 %) 35. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.35 (br s, Ш), 8.06 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 3.82 (m, 4H), 2.43 (m, 4H), 2.36 (s, ЗН), 2.15 (s, 6H), 1.26 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 491.2.
[00295] (36) - 2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диамин
Смесь 35 (0.130 г, 0.265 ммоль), 1 N NaOH (aq.) (2 мл) в 7 мл метанола перемешивали при температуре 60 °С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН, 10:1) с получением 0.100 г (93 %) 36. 11ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.17 (br s, Ш), 4.48 (s, 4Н), 4.34 (q, J= 7.1 Гц, 4H), 3.83 (m, 4Н), 2.47 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 1.27 (t, J= 7.1 Гц, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 407.1.
[00296] YK30 (15) - ^(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К раствору 36 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли акрилоил хлорид (44 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНСЬМеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 9 мг (40 %) 15. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.14 (br s, Ш), 7.04 (s, Ш), 6.40 (d, J= 16.9 Гц, Ш), 6.19 (dd, J= 16.9, 10.4 Гц, Ш), 5.77 (d, J= 10.4 Гц, Ш), 4.83 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.0 Гц, 4H), 3.83 (m, 4H), 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, ЗН), 1.28 (t, J = 7.0 Гц, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, ДМСОчЙ): 5 170.1, 169.2, 164.8, 164.2, 159.4, 156.4, 131.3, 128.1, 87.5, 79.9, 62.0, 54.3, 46.6, 43.2, 14.4; HRMS (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C2oH29N803S, 461.2083; получено 461.2096; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 5.57 минут.
[00297] YK31 (16) - ^(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) пиримидин-4-ил)пропионамид
К раствору 36 (20 мг, 0.049 ммоль) и Et3N (49 мг, 0.49 ммоль) в 1 мл безводного диоксана добавляли пропионил хлорид (45 мг, 0.49 ммоль) по капле. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНСЬМеОН-
NH3 (7N), 10:1) с получением 15 мг (66 %) 16. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.17 (br s, Ш), 6.95 (s, Ш), 4.84 (br s, 2H), 4.35 (q, J= 7.5, 4H), 3.82 (m, 4H), 2.44 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.34 (q, J= 7.5 Гц, 2H), 1.28 (t, J= 7.5 Гц, 6H), 1.15 (t, J= 7.5 Гц, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 173.3, 170.6, 170.5, 164.2, 160.0, 156.7, 87.7, 80.3, 62.4, 54.9, 46.3, 43.7, 30.6, 14.5, 9.1; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C20H3iN8O3S, 463.2240; получено 463.2253; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.22 минут.
Схема синтеза 3
[00298] В схеме синтеза 3 приведены примеры синтеза соединений 38-43, YK57
(11), и YK56 (10).
NH2 NH2 F
N^N a N^N b N^N c ~"
О' ^ ^Cl ^cT ^0(CH2CH20)4H ^O' ^ ^0(CH2CH20)4H N^.N
37 38 3g ^ ~0(CH2CH20)4H
о л
О у 0(CH2CH20)4H I
1. <*ААА.нЛ
N' N НО
АЛ к
41 H2N NH2
NH2
YK57 11 kQH
Реагенты и условия: (а) Н(ОСН2СН2)ОН, ДМФ 80°Сб 3 ч, 83%, (b) (g) HF/пиридин, NaN02, 60°С, 1 ч, 42%; (h) 1-метилпиперазин, ДМФ, 90°С, 1 ч, 91%, (с) 1-метилпиперазин, ДМФ, 90°С, 1 ч,91%; (d)NIS, CH3CN, кт, 1,5ч, 85%; (t) 4,6-диамино-2-меркаптопиримидин, неокурпоин, Cul, К3Р04, ДМСО, 150°С, 2,5 ч, 73%; (f) акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С до к.т., 8ч, 38%; (g) NaOH, Н20, ТГФ, кт 6ч, 53°С; (h) D-биотин, DMAP, СН2С12, ультразвук, 8 ч, 72%
[00299] (38) - 2-(2-(2-(2-(2-амино-6-метоксипиримидин-4-
илокси)этокси)этокси)этокси) этанол
К 7.28 г (37.5 ммоль) тетраэтилен гликоля растворённого в 20 мл ДМФ добавляли 0.900 г (37.5 ммоль) NaH и полученную суспензию перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляли 2.0 г (12.5 ммоль) 2-амино-4-хлор-6-метоксипиримидин и нагревали реакционную смесь при температуре 80 °С в течение 3 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (ЕЮАс:МеОН, 100:0 to 95:5) с получением 3.30 г (83 %) масла 38. TLC (ЕЮАс:МеОН, 95:5 v/v): Rf = 0.24; *НЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.48 (s, Ш), 5.08 (br s, 2Н), 4.39 (t, J= 4.8 Гц, 2H), 3.83 (s, ЗН), 3.79 (t, J= 4.8 Гц, 2H), 3.60-3.73 (m, 12Н), 3.21 (br s, 1H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.6, 172.0, 162.4, 80.2, 72.8, 70.86, 70.80, 70.77, 70.57, 69.7, 65.6, 61.8, 53.9; MS (m/z): [M+H]+ 318.1.
[00300] (39) - 2-(2-(2-(2-(2-фтор-6-метоксипиримидин-4-
илокси)этокси)этокси)этокси) этанол
1.55 г (4.88 ммоль) 38 добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0 °С. Затем добавляли раствор HF/пиридин (1.22 мл, 48.8 ммоль). Через несколько минут добавляли порциями 0.505 г (7.32 ммоль) NaNC> 2 в течение 20 минут при помешивании. Интенсивно перемешивали в течение ещё 70 минут при температуре 0 °С и при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли 15 мл CH2CI2 и 4.88 г СаС03 (48.8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Затем фильтровали над спечённой круглой воронкой и промывали твёрдое вещество ЕЮАс (4 х 25 мл). Объединённый фильтрат фильтровали через целит, концентрировали при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (ЕЮАс:МеОН, 100:0 to 95:5) с получением 0.65 г (42 %) масла 39. TLC (ЕЮАс): Rf = 0.19; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.99 (s, Ш), 4.48-4.50 (m, 2Н), 3.95 (s, ЗН), 3.80-3.84 (m, 2Н), 3.58-3.75 (m, 12Н), 2.56 (br s, Ш); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 173.7 (d, J= 15.7 Гц), 173.0 (d, J= 15.7 Гц), 161.6 (d, J = 215.9 Гц), 88.0 (d, J = 6.8 Гц), 72.5, 70.70, 70.68, 70.57, 70.37, 69.2, 66.6, 61.8, 54.7; MS (m/z): [M+H]+321.2.
[00301] (40) 2-(2-(2-(2-(6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-
илокси)этокси) этокси) этокси)этанол
0.55 г (1.72 ммоль) 39 растворяли в 40 мл ДМФ и добавляли 1.72 г (17.2 ммоль) 1-метилпиперазина и нагревали при температуре 90 °С в течение 1 часа. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ГчНз (7N), 20:1) с получением 0.63 г
(91 %) масла 40. TLC (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1 v/v): Rf = 0.24; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.40 (s, 1H), 4.42 (t, J= 5.0 Гц, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (t, J= 5.1 Гц, 4H), 3.65-3.73 (m, 12H), 3.60 (t, J= 4.5 Гц, 2H), 2.44 (t, J= 5.1 Гц, 4H), 2.33 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.0, 171.3, 160.7, 78.5, 72.6, 71.8, 70.64, 70.55, 70.33, 69.5, 65.1, 61.7, 54.9, 53.5, 46.2, 43.7; MS (m/z): [M+H]+ 401.3.
[00302] (41) 2-(2-(2-(2-(5-йод-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-
илокси) этокси) этокси) этокси)этанол
К 0.600 г (1.50 ммоль) 40 растворённого в 20 мл CH3CN добавляли 0.581 г (2.58 ммоль) N-йодсукцинимид и перемешивали раствор в течение 1.5 часов при комнатной температуре. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH:Et3N, 90:10:2) с получением 0.670 г (85 %) масла 41. TLC (CHCl3:MeOH:Et3N, 90:10:2 v/v/v): Rf = 0.29; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 4.46 (t, J= 4.7 Гц, 2Н), 3.92 (s, ЗН), 3.86 (m, 4Н), 3.57-3.83 (m, 14Н), 2.46 (m, 4Н), 2.33 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 527.2.
[00303] (42) - 2-(2-(2-(2-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-6-метокси-2-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этанол
0.620 г (1.18 ммоль) 41, 0.501 г (2.36 ммоль) К3РО4, 0.053 г (0.236 ммоль) неокупроина, 0.045 г (0.236 ммоль) йодида меди, и 0.184 г (1.30 ммоль) 4,6-диамино- 2-меркаптопиримидина в 14 мл ДМСО нагревали при температуре 150 °С в течение 2.5 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CHCl3:MeOH:Et3N, 99:1:2 to 95:5:2) с получением 0.465 г (73 %) 42. TLC (CHCl3:MeOH:Et3N, 85:15:2 v/v/v): Rf = 0.35; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.18 (s, Ш), 4.94 (br s, 4Н), 4.45 (t, J= 4.2 Гц, 2H), 3.87 (s, ЗН), 3.80-3.86 (br s, 4H), 3.74 (t, J = 4.2 Гц, 2H), 3.69 (t, J= 4.7 Гц, 2H), 3.51-3.63 (m, ЮН), 2.46 (t, J= 4.6 Гц, 4H), 2.35 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 541.4.
[00304] (43) - 2-(2-(2-(2-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-6-
метокси-2-(4-метил пиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этил акрилат
К 0.100 г (0.185 ммоль) 42 в 2 мл СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 0.037 г (51 мкл, 0.370 ммоль) Et3N. Затем добавляли 0.117 г (105 мкл, 1.30 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 5 минут ледяную баню удаляли и продолжали перемешивать при комнатной температуре. Через 2 часа добавляли дополнительно 0.037 г (51 мкл, 0.370
ммоль) E13N и 0.050 г (45 мкл, 0.555 ммоль) акрилоил хлорида и продолжали перемешивать в течение ещё 6 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН-NH3 (7N), 12:1) с выходом 0.049 г (38 %) 43. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.16 (br s, Ш), 7.06 (s, Ш), 6.39-6.42 (m, 2Н), 6.10-6.27 (m, 2Н), 5.76-5.83 (m, 2Н), 4.92 (s, 2Н), 4.49 (br s, 2Н), 4.29 (br s, 2H), 3.89 (s, ЗН), 3.86 (s, 4H), 3.51-3.74 (m, 12H), 2.48 (s, 4H), 2.37 (s, 3H); MS (m/z): [M+H]+ 649.4.
[00305] YK57 (11) - N-(6-aMHHO-2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этокси)-6-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К 0.042 г (0.0647 ммоль) 43 растворённого в 0.8 мл ТГФ добавляли 0.2 мл 0.5 N NaOH при комнатной температуре и перемешивали в течение 6 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 0.020 г (52 %) 11. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 8.38 (s, Ш), 7.07 (s, Ш), 6.42 (d, J= 16.7 Гц, Ш), 6.24 (dd, J= 16.7, 10.3 Гц, Ш), 5.77 (d, J= 10.3 Гц, Ш), 4.95 (br s, 2Н), 4.49 (br s, 2Н), 3.90 (s, ЗН), 3.86 (br s, 4H), 3.51-3.74 (m, 14H), 2.47 (br s, 4H), 2.36 (s, 3H); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C25H39N807S, 595.2662; получено, 595.2658; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 5.05 минут.
[00306] YK56 (10) - 2-(2-(2-(2-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-6-
метокси-2-(4-метил пиперазин-1-ил)пиримидин-4-илокси)этокси)этокси)этокси)этил 5-((3aS,4S,6aR)-2-oiccoreKca гидро-Ш-тиено[3,4-д]имидазол-4-ил)пентаноат
5.0 мг (0.0084 ммоль) 11, 7.0 мг (0.0287 ммоль) Б-(+)-биотин, 1.0 мг (0.0084 ммоль) DMAP, 14.0 мг (0.0679 ммоль) DCC в 2 мл СН2С12 обрабатывали ультразвуком в течение 8 часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНС1з:МеОН-Гч[Нз (7N), 10:1) с выходом 5.0 мг (72 %) 10. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.58 (s, Ш), 7.15 (s, Ш), 6.41-6.43 (m, 2Н), 6.19 (br s, Ш), 5.77 (br s, Ш), 5.73 (dd, J= 7.3, 4.3 Гц, Ш), 5.31 (br s, 2Н), 4.5-4.6 (т, 2Н), 4.41-4.47 (т, Ш), 4.35- 4.4 (т, Ш), 4.15-4.25 (т, 2Н), 3.85-3.93 (br s, 7Н), 3.5-3.75 (т, 12Н), 3.14-3.19 (т, Ш), 2.93 (dd, J= 12.9, 4.9 Гц, Ш), 2.84 (d, J= 12.7 Гц, Ш), 2.56 (br s, 4Н), 2.41 (s, 2Н), 2.28 (t, J= 7.5 Гц, ЗН), 1.37-1.78 (т, 6Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 = 173.2, 170.7, 170.2, 169.4, 164.6, 164.3, 163.7, 159.5, 156.6, 130.6, 128.3, 88.3, 77.2, 70.5, 70.2, 70.1, 69.3, 68.8, 65.8, 63.1, 61.8, 59.9, 55.2, 54.2, 53.8, 45.4, 42.9, 40.1, 33.4, 29.3, 27.9,
27.8, 24.4; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C35H53N10O9S2, 821.3438; получено, 821.3439; ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 7.10 минут.
Схема синтеза 4
[00307] В схеме синтеза 4 приведены примеры синтеза соединений 45-50, YK54
(12), и YK55 (9).
Реагенты и условия: (a) TsCl, NatOH, ТГФ, Н20, 0°С, 2 ч. 78%; (б), (Ь) пиперпзин, CH3CN, 75°С, 12 ч, 66%; (с) ДМФ, 90°С, 2 ч, 79%; NaOH, МеОН, Н20, 60°С? 3 х? 57%; (g) D-биотин, DCC, DMAP, СН2С12, ультразвук, 13ч, 85%; (h) акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С, 6ч, 41%
[00308] (45) - 2-(2-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил 4-
метилбензолсульфонат
2.0 г (10.3 ммоль) тетраэтилен гликоля в 10 мЛ ТГФ охлаждали до темпетаруры 0 °С. Добавляли 0.200 г (5 ммоль) NaOH в 2 мл дистиллированной воды и перемешивали в течение 30 минут. Затем медленно добавляли 0.491 г (2.58 ммоль) р-толуолсульфонилхлорид и продолжали перемешивать при температуре 0 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 50:50 до 10:90) с получением 0.705 г (78 %) масла 45. TLC (гексан:ЕЮАс, 10:90 v/v): Rt = 0.26; 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.80 (d, J = 8.1 Гц, 2Н), 7.34 (d, J= 8.1 Гц, 2Н), 4.16 (t, J= 4.9 Гц, 2Н), 3.59-3.74 (m, 14Н), 2.45 (s, ЗН); MS (m/z): [M+Na]+ 371.3.
[00309] (46) - 2-(2-(2-(2-(пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этанол
0.705 г (2.02 ммоль) 45 и 0.697 г (8.09 ммоль) пиперазина в 45 мл CH3CN нагревали при температуре 75 °С в течение 12 часов. Растворитель и избыток реагента удаляли при пониженном давлении и очищали маслянистый осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH:MeOH-NH3 (7N), 90:5:5 до 90:0:10) с получением 0.350 г (66 %) масла 46. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 3.72 (m, 2Н), 3.58-3.70 (m, 12Н), 2.91 (m, 4Н), 2.59 (br m, 2H), 2.49 (m, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 263.3.
[00310] (47) - N,N'-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К 0.430 г (1.12 ммоль) 24 в 27 мл ДМФ добавляли 0.310 г (1.18 ммоль) 46 и нагревали при температуре 90 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 10:1) с получением 0.552 г (79 %) 47. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.38 (br s, 2Н), 8.13 (s, Ш), 3.88 (br s, ЮН), 3.57-3.74 (m, 14H), 2.66 (br s, 2H), 2.58 (br s, 4H), 2.15 (s, 6H); MS (m/z): [M+H]+ 625.5.
[00311] (48) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил) пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этанол
К 0.520 г (0.832 ммоль) 47 добавляли 25 мл МеОН и 7 мл 10% NaOH (aq.) и перемешивали суспензию при температуре 60 °С а течение 2 часов. Удаляли растворитель при
пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 15:1) с получением 0.440 г (98 %) 48. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.17 (s, Ш), 4.60 (br s, 4Н), 3.88 (br s, ЮН), 3.57-3.77 (m, 14H), 2.67 (br s, 2H), 2.59 (br s, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 541.4.
[00312] (49) 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметокси пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил акрилат
К 22.6 мг (0.042 ммоль) 48 в 3 мЛ СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 83.6 мг (116 мкл, 0.836 ммоль) Et3N. Добавляли 11.4 мг (10.2 мкл, 0.126 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 1 час дополнительно добавляли 11.4 мг (10.2 мкл, 0.126 ммоль) акрилоил хлорида. Эту процедуру повторяли ещё пять раз доведя полное время реакции до 7 часов (совокупное количество акрилоил хлорида, 79.8 мг, 71.7 мкл, 0.882 ммоль). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН, 10:1) с выходом 9.8 мг (36 %) 49. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 8.10 (br s, Ш), 7.05 (s, Ш), 6.35-6.45 (m, 2Н), 6.10-6.20 (m, 2Н), 5.73-5.85 (m, 2Н), 4.90 (br s, 2Н), 4.32 (br s, 2H), 3.89 (br s, ЮН), 3.60-3.70 (m, 12H), 2.69 (br s, 2H), 2.61 (br s, 4H); MS (m/z): [M+H]+ 649.5.
[00313] YK54 (12) N-(6-aMHHO-2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил) пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К 8.0 мг (0.012 ммоль) 49 растворённого в 1.6 мл ТГФ добавляли 0.4 мл 0.5 N NaOH при комнатной температуре и перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН, 10:1) с выходом 5.5 мг (75 %) 12. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.65 (s, Ш), 7.03 (s, Ш), 6.36 (d, J= 16.2 Гц, Ш), 6.11 (m, Ш), 5.70 (d, J= 10.1 Гц, Ш), 5.14 (br s, 2Н), 3.88 (br s, 4Н), 3.85 (s, 6Н), 3.57-3.75 (т, 15Н), 2.70 (br s, 2Н), 2.62 (br s, 4Н); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C25H39N807S, 595.2662; получено, 595.2684. ЖХВД: (а) Н20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.05 минут.
[00314] (50) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил) пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-
((За8,48,6аК)-2-оксогексагидро-1Нтиено[3,4-с1]имидазол-4-ил)пентаноат
50.0 мг (0.0925 ммоль) 48, 90.0 мг (0.37 ммоль) Б-(+)-биотина, 11.3 мг (0.0925 ммоль) DMAP, 153.0 мг (0.74 ммоль) DCC в 15 мл СН2С12 обрабатывали ультразвуком в течение
13 часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и осадок очищали методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ГчНз (7N), 20:1 до 10:1) с получением неочищенного 50 который очищали методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 60.0 мг (85 %) 50. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.27 (br s, Ш), 5.18 (s, Ш), 4.82 (br s, Ш), 4.59 (br s, 4H), 4.49 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 3.88 (br s, 10H), 3.60-3.75 (m, 12H), 3.15 (m, 1H), 2.92 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.60 (m, 4H), 2.34 (t, J = 5.9 Гц, 2H), 1.37-1.78 (m, 6H); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C^HsiNioOsSi, 767.3333; получено 767.3361.
[00315] YK55 (9) - 2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-
4,6-диметокси пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-((За8,48,6аК)-2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-с1]имидазол-4-ил)пентаноат
К 50.0 мг (0.065 ммоль) 50 в 10 мЛ CH2CI2 при температуре 0 °С добавляли 195.4 мг (271 мкл, 1.953 ммоль) Et3N. Затем добавляли 17.7 мг (15.9 мкл, 0.196 ммоль) акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Через 1 час дополнительно добавляли 17.7 мг (15.9 мкл, 0.196 ммоль) акрилоил хлорид. Эту процедуру повторяли ещё четыре раза, доведя полное время реакции до 6 часов (совокупное количество акрилоил хлорида , 106.2 мг, 95.4 мкл, 1.17 ммоль). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CHCl3:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с выходом 22.0 мг (41 %) 9. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.99 (s, Ш), 7.09 (s, Ш), 6.40 (d, J= 16.8 Гц, Ш), 6.31 (dd, J= 16.7, 9.9 Гц, Ш), 5.79 (br s, Ш), 5.74 (d, J= 10.8 Гц, Ш), 5.09 (s, 2Н), 5.08 (s, Ш), 4.50 (m, Ш), 4.36 (m, Ш), 4.21 (t, J = 6.8 Гц, 2H), 3.87 (s, ЮН), 3.6-3.75 (m, 12Н), 3.16 (m, Ш), 2.91 (dd, J= 12.8, 5.0 Гц, Ш), 2.74 (d, J= 12.8 Гц, Ш), 2.70 (t, J= 5.4 Гц, 2H), 2.61 (t, J= 4.8 Гц, 4H), 2.31 (t, J= 7.6 Гц, 2H), 1.37-1.8 (m, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 172.9, 170.4, 169.5, 164.1, 164.0, 163.2, 159.3, 156.3, 130.3, 127.9, 88.1, 78.9, 69.9, 69.8, 69.7, 68.5, 68.0, 62.8, 61.4, 59.6, 57.7, 57.1, 54.9, 53.5, 52.5, 42.9, 39.9, 33.1, 27.8, 27.6, 24.0; HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C35H53Nio09S2, 821.3438; получено 821.3455; ЖХВД: (a) H20 + 0.1 % TFA (b) ACN + 0.1% TFA (5 до 95% ACN за 10 минут) Кт = 6.98 минут.
NVsynY"'
F^N О N-
' ^NH
'Ac
^NH
NVsynY^,
HNO 1 T
-N^ 1 NH *
-N^l ' NH2
^N^N^O *у f
-N^l ' NH2
M^J ' NH2
H,N
YK91 53
Boc^
Boc^
-N^l 1 NH2
NH,
H,N
СуЗВ.
Схема 5: приготовление Cy3B-YK5 (57)
Реагенты и условия: (а) пиперазин, ДМФ, 90°С, 1 ч; (Ь) М(4-бромбутил)фениламид, ДМФ, 80°С, 1 ч; (с) гидразин, ТГФ, кт, 16 ч, d. NaOH, матенол, 60°С, 1 ч; е. ди-1-бутилдикарбонат, Et3N, СН2С12, к.т., 2ч, f. акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С, g. ТФА- СН2С12 (1:4), к.т., 1ч, h. Cy3B-YK5Su, ДМФ, кт, 12 ч.
ил)тио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 24 (100 мг, 0.26 ммоль) и пиперазина (45 мг, 0.52 ммоль) в 5mL ДМФ нагревали до 90 °С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2CI2: MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 84 мг (72%) 51. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13) 5 8.20 (s, Ш), 8.03 (s, 2Н), 3.87 (s, 6Н), 3.80 (m, 4Н), 3.45 (m, 4Н), 2.08 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 449.1.
[00317] (52) N,N'-(2-((2-(4-(4-(l,3-диoкcoиндoлин-2-ил)бyтил)пипepaзин-l-ил)-
4,6-диметоксипиримидин-5-ил)тио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
Раствор 51 (50 мг, 0.111 ммоль) и Тч[-(4-бромбутил)фталимида (125 мг, 0.446 ммоль) в 5 мл ДМФ нагревали до 80°С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении. Очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2CI2: MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 61 мг (86%) 52. MS (m/z): [М+Н]+ 650.1.
[00318] (53) 2-((2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
ил)тио)пиримидин-4,6-диамин [YK91]
К раствору 52 (61 мг, 0.095 ммоль) в 3 мЛ ТГФ добавляли гидразин (100 мкл). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре, затем растворитель испаряли при пониженном давлении. К осадку добавляли метанол (10 мл), гидроксид натрия (500 мг) и нагревали смесь до 60°С в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12: MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 25 мг (60%) 53. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13) 5 5.16 (s, Ш), 4.58 (s, 4Н), 3.87 (s, 6Н), 3.71 (m, 4Н), 2.75 (m, 2Н), 2.50 (m, 4Н), 2.36 (m, 2Н), 1.68 (m, 2Н), 1.60 (m, 2Н); MS (m/z): [М+Н]+ 436.1.
[00319] (54) трет-бутил 4-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутилкарбамат
К раствору 53 (80 мг, 0.18 ммоль) и Et3N (100 мкл) в 3 мЛ СН2С12 добавляли ди-да-бутилдикарбонат (39 мг, 0.18 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель испаряли при пониженном давлении, очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12: MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 95 мг (95%) 54 который использовали в следующей реакции.
[00320] (55) трет-бутнл (4-(4-(5-((4,6-диаминопиримидин-2-ил)тио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутил)карбамат
К раствору 54 (95 мг, 0.18 ммоль) и Et3N (94 мкл) в 5 мл СН2С12 добавляли акрилоил хлорид порциями. Состав реакционной смеси отслеживали методом ТЖХ, when SM disappeared, Реакционную смесь гасили добавлением метанола в условиях охлаждения. Продукт очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 48 мг (46%) 55. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCb) 5 8.21 (s, Ш), 7.05 (s, Ш), 6.42 (m, Ш), 6.32 (m, Ш), 5.79 (ш, Ш), 3.88 (s, 6Н), 3.87 (m, 4Н), 3.15 (m, 2Н), 2.49 (m, 4Н), 2.39 (ш, 4Н), 1.59 (ш,4Н), 1.44 (s, 9Н); MS (m/z): [М+Н]+ 590.4.
[00321] (56) ^(6-амино-2-((2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-ил)тио)пиримидин-4-ил)акриламид
Раствор 55 (48 мг, 17 ммоль) в 20% TFA-CH2C12 перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Удаляли растворитель при пониженном давлении и Сушили осадок в условиях высокого вакуума с получением 31 мг (80%) 56 который
использовали без дальнейшей очистки. ХН ЯМР (500 МГц, CDCb) 8 7.01 (s, Ш), 6.40 (т, Ш), 6.29 (т, Ш), 5.80 (т, Ш), 3.88 (s, 6Н), 3.86 (т, 4Н), 2.75 (t, J= 7.5, 2Н), 2.54 (т, 4Н), 2.45 (т, 2Н), 1.59 (т, 4Н); MS (m/z): [М+Н]+ 490.2.
[00322] (57) Cy3B-YK5
Раствор СуЗВ-OSu (1 мг, 0.00178 ммоль) и 56 (1.74 мг, 0.0035 ммоль) в 100 мкл ДМФ перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Продукт очищали методом ЖХВД с получением 57 (0.54 мг, yield 30%). MS (m/z): [М+Н]+ 1312.4.
Схема 6: приготовление гранул с YK5 (59)
Реагенты и условия: (а) 1-ВОС-пиперазин, Nail, К2СОз, ацетон, нагревание с обратным холодильником, 22ч; Ь. ТФА-СН2С12 (1:4), к.т., 1ч: с. К2С03, 90°С, 1.5ч; d гидразина гидрат, МеОН, кт 2 ч, затем 1М NaOH, 55°С, 2ч, е. ди-t-бутилдикарбонат, Et3N, СН2С12, к.т., 20 ч; f. акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С, 2 ч.; g. ТФА- СН2С12 (1:4), к.т. 45 мин; h. Affi-gel 10 гранул, DIEA, DMAP, DMF, Зч.
[00323] (58) трет-Ъутпл 4-(4-(1,3-диоксоиндолин-2-ил)бутил)пиперазин-1-
карбоксилат
Тч[-(4-Бромбутил)фталимид (1.95 г, 6.89 ммоль) и йодид натрия (81 мг, 0.537 ммоль) добавляли к суспензии К2СО3 (1.64 г, 11.88 ммоль) и 1-Трет-бутоксикарбонил-пиперазина (1.00 г, 5.37 ммоль) в ацетоне (25 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Реакционную смесь фильтровали и промывали полученное твёрдое вещество ацетоном (3 х 50 мл). Фильтрат концентрировали и очищали осадок методом колоночной
хроматографии (гексан:ЕЮАс, 7:3 to 0:1) с получением 2.08 г (100%) 58. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.84 (dd, 7= 3.0, 5.4 Гц, 2Н), 7.71 (dd, 7= 3.0, 5.4 Гц, 2Н), 3.71 (t, 7= 7.1 Гц, 2Н), 3.38-3.43 (m, 4Н), 2.32-2.40 (т, 6Н), 1.70 (т, 2Н), 1.53 (т, 2Н), 1.45 (s, 9Н); MS (m/z): [М+Н]+388.4.
[00324] (52) N,N'-(2-(2-(4-(4-(l,3-диoкcoиндoлин-2-ил)бyтил)пипepaзин-l-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К 58 (429.7 мг, 1.11 ммоль) в СН2С12 (12 мл) добавляли TFA (3 мл) по капле и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и удаляли TFA методом совместного выпаривания с МеОН несколько раз и сушки в условиях высокого вакуума в течение ночи. К этому добавляли К2СО3 (384 мг, 2.78 ммоль) и ДМФ (21 мл) и перемешивали полученную суспензию при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем 24 (424 мг, 1.11 ммоль) добавляли и нагревали суспензию при температуре 90°С в течение 90 минут. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 100:1 to 40:1) с получением 0.355 г (49%) 52. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.35 (br s, Ш), 7.82-7.88 (m, 4Н), 7.72 (dd, 7= 3.1, 5.5 Гц, 2Н), 3.88 (s, 6Н), 3.84 (m, 4Н), 3.74 (t, 7= 7.2 Гц, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.43 (t, 7= 7.4 Гц, 2Н), 2.16 (s, 6Н), 1.74 (т, 2Н), 1.59 (т, 2Н); MS (m/z): [М+Н]+ 650.5.
[00325] YK91 (53) 2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
К 52 (0.355 г, 0.546 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли гидразин гидрат (797 мкл, 0.820 г, 16.4 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре а течение 2 часов. Затем добавляли 5 мл 1М NaOH и нагревали реакционную смесь при температуре 55°С а течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1 до 5:1) с получением 0.228 г (96%) 53. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 5.22 (s, Ш), 3.88 (s, ЮН), 2.72 (t, 7= 7.1 Гц, 2Н), 2.53 (m, 4Н), 2.42 (t, 7= 7.2 Гц, 2Н), 1.46-1.62 (т, 4Н); MS (m/z): [М+Н]+ 436.4.
[00326] (54) трет-бутнл 4-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутилкарбамат
К 53 (0.221 г, 0.507 ммоль) в СН2С12 (6 мл) добавляли EbN (107 мкл, 77 мг, 0.761 ммоль) и ди-да-бутилдикарбонат (0.133 г, 0.611 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре
в течение 20 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 100:1 до 30:1) с получением 0.254 г (93%) 54. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.19 (s, Ш), 4.41 (s, 4Н), 3.89 (m, ЮН), 3.14 (m, 2Н), 2.50 (m, 4Н), 2.40 (t, J= 6.8 Гц, 2Н), 1.54-1.63 (m, 4Н), 1.44 (s, 9Н); MS (m/z): [М+Н]+ 536.5.
[00327] (55) трет-бутил 4-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутилкарбамат
К 80 мг (0.149 ммоль) 54 в 8 мл CH2CI2 при температуре 0 °С добавляли 414 мкл (298 мг, 2.98 ммоль) E13N. Затем добавляли 14.5 мкл (16.2 мг, 0.179 ммоль) акрилоил хлорида. Через 30 минут дополнительно добавляли 14.5 мкл акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Эту процедуру повторяли ещё два раза, доведя полное время реакции до 2 часов (совокупное количество акрилоил хлорида , 58 мкл, 64.8 мг, 0.716 ммоль). Реакционную смесь гасили добавлением 1 мл МеОН и затем концентрировали при пониженном давлении. Очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с выходом 42.5 мг (48%) 55. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.78 (s, Ш), 7.05 (s, Ш), 6.42 (d, J= 16.9 Гц, Ш), 6.18 (dd, J= 10.4, 16.9 Гц, Ш), 5.80 (d, J= 10.2, Ш), 5.15 (br s, Ш), 4.80 (br s, 2H), 3.89 (s, ЮН), 3.14 (m, 2H), 2.54 (m, 6H), 1.58 (m, 4H), 1.44 (s, 9H); MS (m/z): [M+H]+ 590.5.
[00328] (59) YK5 Гранулы
Раствор 55 (45 мг, 0.076 ммоль) в 3 мЛ CH2CI2 добавляли 0.75 мл TFA по капле при комнатной температуре. После перемешивания в течение 45 минут, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. TFA удаляли методом совместного выпаривания с МеОН несколько раз и сушки в условиях высокого вакуума в течение ночи с выходом осадка который растворяли в ДМФ (2 мл) и добавляли к 4.2 мл (0.0636 ммоль) 10 гранулам Affi-Gel(r) (предварительно промытым, 3 х 6 мл ДМФ) в сосуде для твердофазного пептидного синтеза. Добавляли 100 мкл Тч^ТЧ-диизопропилэтиламина и несколько кристаллов DMAP и встряхивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем удаляли растворитель и промывали гранулы в течение 10 минут каждый раз с CH2CI2 (4x10 мл), ДМФ (4x10 мл), и /-РгОН (3x10 мл). Гранулы YK5 (59) хранили в /'-РгОН при температуре -80°С.
Схема 7: приготовление гранул с YK71 (65)
Реагенты и условия: а. СН2С12- ТФА (4:1), к.т., 1ч; Ь. М-(2-(2-фторо-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио-ил)ацетамид, К2С03, 90°С, 1.5 ч; с. гидразин гидрат, МеОН, к.т. 20ч, затем 50°С, Зч; d. ди-1-бутиддикарбонат, Et3N, СН2С12, к.т., 20ч.; е. акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С, 1.5 ч; f. СН2С12- ТФА (4:1), к.т., 45 мин., g. 10 гранул Affi-gel(R), DIEA, DMAP, ДМФ, Зч
[00329] (60) ^(2-(2-(4-(4-(1,3-диоксоиндолин-2-ил)бутил)пиперазин-1-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид
К 58 (402.4 мг, 1.04 ммоль) в CH2CI2 (12 мл) добавляли TFA (3 мл) по капле и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и удаляли TFA методом совместного выпаривания с МеОН несколько раз и сушки в условиях высокого вакуума в течение ночи. К этому добавляли К2СО3 (359 мг, 2.6 ммоль) и ДМФ (20 мл) и перемешивали полученную суспензию при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли М-(2-(2-фтор-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)ацетамид (338 мг, 1.04 ммоль) и нагревали суспензию при температуре 90°С в течение 90 минут. Удаляли
растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН, 100:1 to 40:1) с получением 0.60 г (97%) 60. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.34 (d, 7 = 5.7 Гц, Ш), 7.85 (dd, 7= 3.0, 5.4 Гц, 2Н), 7.81 (br s, Ш), 7.597.71 (m, ЗН), 3.88 (s, 6Н), 3.85 (m, 4Н), 3.74 (t, 7= 7.1 Гц, 2Н), 2.49 (m, 4Н), 2.43 (t, 7= 7.5 Гц, 2Н), 2.18 (s, ЗН), 1.75 (т, 2Н), 1.60 (т, 2Н); MS (m/z): [М+Н]+ 593.4.
[00330] YK93 (61) 2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-амин
К 60 (0.600 г, 1.01 ммоль) в МеОН (28 мл) добавляли гидразин гидрат (813 мкл, 0.836 г, 16.7 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Затем дополнительно добавляли гидразин гидрат (813 мкл, 0.836 г, 16.7 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 50°С в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 80:1 to 10:1) с получением 0.370 г (87%) 61. *Н ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 7.85 (d, 7= 5.9 Гц, Ш), 6.11 (d, 7= 5.9 Гц, Ш), 3.88 (s, ЮН), 2.71 (t, 7= 7.1 Гц, 2Н), 2.53 (m, 4Н), 2.42 (t, 7= 7.4 Гц, 2Н), 1.47-1.63 (т, 4Н); MS (m/z): [М+Н]+421.3.
[00331] (62) трет-бутил 4-(4-(5-(4-аминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутилкарбамат
К 61 (0.370 г, 0.880 ммоль) в СН2С12 (10 мл) добавляли Et3N (186 мкл, 134 мг, 1.32 ммоль) и ди-т-бутилдикарбонат (0.230 г, 1.06 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH:MeOH-NH3 (7N), 100:1:0 to 50:0:1) с получением 0.44 г (96%) 62. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.97 (d, 7 = 5.8 Гц, Ш), 6.05 (d, 7= 5.8 Гц, Ш), 5.21 (br s, Ш), 4.76 (br s, 2Н), 3.89 (s, 6Н), 3.87 (m, 4Н), 3.15 (m, 2Н), 2.49 (m, 4Н), 2.40 (t, 7= 6.8 Гц, 2Н), 1.54-1.63 (m, 4Н), 1.44 (s, 9Н); MS (m/z): [М+Н]+ 521.3.
[00332] (63) трет-бутил 4-(4-(5-(4-акриламидопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)бутилкарбамат
К 100 мг (0.192 ммоль) 62 в 10 мЛ СН2С12 при температуре 0 °С добавляли 533 мкл (384 мг, 3.84 ммоль) Et3N. Затем добавляли 19 мкл (21 мг, 0.23 ммоль) акрилоил хлорида. Через 30 минут дополнительно добавляли 19 мкл акрилоил хлорида при температуре 0 °С. Эту процедуру повторяли ещё раз доведя полное время реакции до 1.5 часов
(совокупное количество акрилоил хлорида , 57 мкл, 63 мг, 0.69 ммоль). Реакционную смесь гасили добавлением 2 мл МеОН и затем концентрировали при пониженном давлении. Очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с выходом 72 мг (65%) 63. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.83 (br s, Ш), 8.36 (d, J= 5.2 Гц, Ш), 7.85 (d, J= 5.2 Гц, Ш), 6.46 (d, J= 16.9 Гц, Ш), 6.28 (dd, J= 10.2, 16.9 Гц, Ш), 5.81 (d, J= 10.2 Гц, Ш), 5.23 (br s, Ш), 3.87 (s, 6H), 3.85 (m, 4H), 3.16 (m, 2H), 2.48 (m, 4H), 2.40 (m, 2H), 1.57 (m, 4H), 1.44 (s, 9H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 171.4, 171.0, 164.4, 160.1, 158.9, 157.4, 156.1, 130.4, 129.7, 106.0, 79.1, 78.9, 58.2, 53.4, 52.9, 43.6, 40.5, 28.5, 28.0, 24.3; MS (m/z): [M+H]+ 575.3.
[00333] YK94 (64) ]Ч-(2-(2-(4-(4-аминобутил)пиперазин-1-ил)-4,6-
диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид
К 70 мг (0.122 ммоль) 63 в 4 мл CH2CI2 добавляли 1 мл TFA по капле при комнатной температуре. После перемешивания в течение 45 минут, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. TFA удаляли методом совместного выпаривания с МеОН несколько раз и сушки в условиях высокого вакуума в течение ночи с выходом 64 в форме соли TFA и использовали без дальнейшей очистки. *Н ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.33 (d, J= 5.9 Гц, Ш), 8.19 (br s, Ш), 8.03 (d, J= 6.1 Гц, Ш), 6.51 (d, J= 16.9 Гц, Ш), 6.40 (dd, J= 10.6, 16.9 Гц, Ш), 5.88 (d, J= 10.6 Гц, Ш), 3.90 (s, 6Н), 3.55-3.72 (m, 2Н), 3.38-3.54 (m, 2Н), 3.19 (t, J= 7.7 Гц, 2H), 2.94-3.13 (m, 4Н), 1.86-1.95 (m, 2Н), 1.73-1.82 (m, 2Н); 13С ЯМР (166 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 171.4, 170.2, 165.4, 159.9, 158.9, 155.7, 130.5, 129.9, 106.2, 79.2, 56.2, 54.4, 51.5, 40.7, 38.6, 24.1, 20.6; MS (m/z): [М+Н]+475.4.
[00334] (65) YK71 Гранулы
Раствор 64 (~ 0.122 ммоль) в ДМФ (4 мл) добавляли к 6.8 мл (0.102 ммоль) 10 гранулам Affi-Gel(r) (предварительно промытым, 3 х 10 мл ДМФ) в сосуде для твердофазного пептидного синтеза. Добавляли 100 мкл Тч^ТЧ-диизопропилэтиламина и несколько кристаллов DMAP и встряхивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем уаляли растворитель и промывали гранулы в течение 10 минут каждый раз с СН2С12 (4x10 мл), ДМФ (4x10 мл), и /-РгОН (3x10 мл). Гранулы YK71 (65) хранили в /'-РгОН при температуре -80°С.
ТТ-6 72 H2N^^NA^
Схема 8: cbyntp гранул с ТТ6 (72)
Реагенты и условия: (а) фталимид калия, ДМФ НОС, 18 ч; Ь. п-тосил хлорид, Et3N, СН2С12, 5°С до к.т., 24 ч., с. 1-ВОС-пиперазин, К2С03, диоксан, 80°С 22ч, d ТФА- СН2С12 (1:4), к.т., 1ч; 24 К2С03, ДМФ 90°С, 1.5ч; NH2NH2, МеОН, ктб 2ч, затем 1М NaOH (вод) 50°С, 1.5 ч, g. В-биотин, EDCI, DMAP, СН2С12> ультразвук, 2ч, h. акрилоил хлорид, Et3N, СН2С12, 0°С,
[00335] (66) 2-(2-(2-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)изоиндолин-1,3-
дион
45 (1.22 г, 3.5 ммоль) и калия фталимид (0.713 г, 3.85 ммоль) суспендировали в безводном ДМФ (10 мл) и нагревали при температуре 110°С в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворяли осадок в CH2CI2 (50 мл) и промывали 1М НС1 (2 х 20 мл), рассолом (2 х 20 мл), сушили над MgSC> 4, и фильтровали. Удаляли растворитель при пониженном давлении с получением масла которое очищали
методом колоночной хроматографии (ЕЮАс) с получением 0.95 г (84%) 66. ХН ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.85 (dd, 7 = 3.1, 5.4 Гц, 2Н), 7.72 (dd, 7= 3.0, 5.5 Гц, 2Н), 3.91 (t, 7= 5.9 Гц, 2Н), 3.75 (t, 7= 5.8 Гц, 2Н), 3.55-3.73 (m, 12Н); MS (m/z): [M+Na]+ 346.1.
[00336] (67) 2-(2-(2-(2-(1,3-ДИОКСОИНДОЛИН-2-ИЛ)ЭТОКСИ)ЭТОКСИ)ЭТОКСИ)ЭТИЛ 4-
метилбензолсульфонат
Раствор 66 (0.95 г, 2.7 ммоль), Et3N (395 мкл, 0.287 г, 2.8 ммоль) и DMAP (33 мг, 0.27 ммоль) в CH2CI2 (30 мл) охлаждали до темпетаруры 5°С при помощи ледяной бани. Добавляли тозил хлорид (0.515 г, 2.7 ммоль) порциями при температуре 5°С и и через 30 минут удаляли ледяную баню и продолжали перемешивать при комнатной температуре в течение 24 часов. Реакционную смесь добавляли в делительную воронку и промывали 1N НС1 (2 х 25 мл), водой (25 мл), и рассолом (2 х 25 мл). Органический слой сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла которое очищали методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 6:4 to 4:6) с получением 1.12 г (87%) 67. ХН ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.84 (dd, 7= 3.1, 5.4 Гц, 2Н), 7.79 (d, 7= 8.3 Гц, 2Н), 7.72 (dd, 7 = 3.0, 5.5 Гц, 2Н), 7.34 (d, 7= 8.4 Гц, 2Н), 4.14 (t, 7= 4.8 Гц, 2Н), 3.89 (t, 7= 5.9 Гц, 2Н), 3.73 (t, 7= 5.8 Гц, 2Н), 3.48-3.68 (m, ЮН), 2.44 (s, ЗН); MS (m/z): [M+Na]+ 500.0.
[00337] (68) трет-бутил 4-(2-(2-(2-(2-(1,3-диоксоиндолин-2-
ил)этокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-карбоксилат
К 67 (1.10 г, 0.0023 моль) в диоксане (25 мл) добавляли 1-Трет-бутоксикарбонил-пиперазин (1.07 г, 0.0058 моль) и К2СО3 (1.37 г, 0.0099 моль) и нагревали при температуре 80°С в течение 22 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и обрабатывали осадок CH2CI2 (100 мл) и промывали водой (2 х 50 мл) и рассолом (2 х 50 мл). Органический слой сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла которое очищали методом колоночной хроматографии (СН2СЬ:МеОН-NH3 (7N), 1:0 to 30:1) с получением 0.819 (72%) 68. 1ЯЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.84 (dd, 7= 3.1, 5.4 Гц, 2Н), 7.71 (dd, 7= 3.0, 5.5 Гц, 2Н), 3.90 (t, 7= 5.9 Гц, 2Н), 3.74 (t, 7= 5.9 Гц, 2Н), 3.52-3.67 (т, ЮН), 3.43 (т, 4Н), 2.57 (t, 7= 6.0 Гц, 2Н), 2.43 (т, 4Н), 1.45 (т, 9Н); MS (m/z): [М+Н]+492.1.
[00338] (69) N,N,-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-(l,3-диoкcoиндoлин-2-
ил)этокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)пиримидин-4,6-диил)диацетамид
К 68 (542 мг, 1.10 ммоль) в CH2CI2 (28 мл) добавляли TFA (7 мл) по капле и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и удаляли TFA методом совместного выпаривания с МеОН несколько раз и сушки в условиях высокого вакуума в течение ночи. К этому добавляли К2СО3 (381 мг, 2.76 ммоль) и ДМФ (20 мл) и перемешивали полученную суспензию при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем добавляли 24 (421 мг, 1.1 ммоль) и нагревали суспензию при температуре 90°С в течение 90 минут. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН, 100:1 to 25:1) с получением 0.537 г (65%) 69. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.35 (s, Ш), 7.84 (dd, J= 3.1, 5.5 Гц, 2Н), 7.81 (bs, 2Н), 7.71 (dd, J= 3.1, 5.5 Гц, 2Н), 3.83-3.92 (m, 12Н), 3.74 (t, J= 5.8 Гц, 2Н), 3.55-3.67 (т, ЮН), 2.64 (t, J= 5.7 Гц, 2Н), 2.56 (т, 4Н), 2.15 (s, 6Н); MS (m/z): [М+Н]+ 754.2.
[00339] (70) 2-(2-(4-(2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)-
4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)пиримидин-4,6-диамин
К 69 (300 мг, 0.398 ммоль) в МеОН (9 мл) добавляли гидразин гидрат (580 мкл, 598 мг, 11.9 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли 1М NaOH (4.5 мл) и нагревали реакционную смесь при температуре 50°С в течение 1.5 часов. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН, 60:1 to 10:1) с получением 0.214 г (93%) 70. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 5.16 (s, Ш), 4.56 (s, 4Н), 3.84-3.91 (m, ЮН), 3.61-3.69 (т, ЮН), 3.51 (t, J= 5.2 Гц, 2Н), 2.86 (t, J= 5.2 Гц, 2Н), 2.66 (t, J= 5.7 Гц, 2Н), 2.57 (т, 4Н); MS (m/z): [М+Н]+ 540.1.
[00340] (71) ^(2-(2-(2-(2-(4-(5-(4,6-диаминопиримидин-2-илтио)-4,6-
диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил)-5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено [3,4-d] имид азол-4-ил)пентанамид
20.0 мг (0.0371 ммоль) 70, 18.1 мг (0.0741 ммоль) Б-(+)-биотина, DMAP (cat.), 14.2 мг (0.0741 ммоль) EDCI в 1 мл CH2CI2 обрабатывали ультразвуком а течение 2 часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 10:1) с получением 15.6 мг (55%) 71. 11 ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 5.23 (s, Ш), 4.49 (m, Ш), 4.30 (m, Ш), 3.86-3.91 (m, ЮН), 3.60-3.72 (m, 12Н), 3.40 (m, 2Н), 3.12-3.18 (m, Ш), 2.91 (dd, J= 5.0, 12.9 Гц, Ш), 2.72 (d, J= 12.9 Гц, Ш), 2.68 (t, J= 5.6 Гц, 2H), 2.60 (m, 4Н), 2.19 (dd, J= 2.1, 7.7 Гц, 2H), 1.38-1.76 (m, 6Н); MS (m/z): [M+H]+ 766.25.
[00341] ТТ-6 (72) ^(2-(2-(2-(2-(4-(5-(4-акриламидо-6-аминопиримидин-2-илтио)-
4,6-диметоксипиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил)-5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено [3,4-d] имид азол-4-ил)пентанамид
К 15 мг (0.020 ммоль) 71 в 2 мл CH2CI2 при температуре 0 °С добавляли 83 мкл (60 мг, 0.6 ммоль) E13N. Затем добавляли 3.3 мкл (3.6 мг, 0.04 ммоль) акрилоил хлорида в CH2CI2 (0.5 мл) по капле при температуре 0 °С. Через 1 час, дополнительно добавляли 3.3 мкл акрилоил хлорид в CH2CI2 (0.5 мл) по капле. Эту процедуру повторяли ещё четыре раза с интервалами по 30 минут, доведя полное время реакции до 3.5 часов (совокупное количество акрилоил хлорида , 19.8 мкл, 21.6 мг, 0.24 ммоль). Реакционную смесь гасили добавлением 1 мл МеОН и затем концентрировали при пониженном давлении. Очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ТЧНз (7N), 10:1) с выходом 6.0 мг (37%) 72. 11 ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 9.57 (s, Ш), 7.13 (s, Ш), 6.94 (br s, Ш), 6.53 (br s, Ш), 6.32-6.45 (m, 2Н), 5.72 (dd, J= 2.4, 9.0 Гц, Ш), 5.58 (br s, 2H), 5.19 (br s, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 3.82-3.93 (m, 10H), 3.55-3.77 (m, 12H), 3.39 (m, 2H), 3.08-3.15 (m, 1H), 2.89 (dd, J= 5.1, 12.9 Гц, 1H), 2.81 (m, 2H), 2.72 (d, J= 12.9 Гц, 1H), 2.70 (m, 4H), 2.19 (m, 2H), 1.38-1.76 (m, 6H); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 173.6, 171.0, 170.3, 165.1, 164.8, 163.8, 159.8, 157.1, 130.9, 128.8, 88.7, 79.5, 71.0, 70.4, 70.3, 70.2, 69.5, 62.3, 59.9, 57.3, 56.0, 54.2, 53.4, 52.5, 43.6, 40.7, 39.2, 35.4, 28.5, 28.0, 25.7; MS (m/z): [M+H]+ 820.3.
[00342] (73) 5-(3-аминофенилтио)-4,6-диметокси-]Ч,]Ч-бис(4-
метоксибензил)пиримидин-2-амин
Смесь 20 (0.521 г, 1.0 ммоль), 3-аминобензолетиола (106 мкл, 0.125 г, 1.0 ммоль), неокупроина (42 мг, 0.2 ммоль), йодида меди (38 мг, 0.2 ммоль), и карбоната калия (0.415 г, 3.0 ммоль) в ДМФ (10 мл) перемешивали при температуре 125°С в течение 20 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 75:25) с получением 0.183 г (35%) 73. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.23 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 7.00 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.87 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 6.54 (d, J = 8.5 Гц, Ш), 6.44 (s, Ш), 6.41 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 4.76 (s, 4Н), 3.89 (s, 6Н), 3.81 (s, 6Н), 3.59 (br s, 2Н); MS (m/z): [M+H]+ 519.0.
[00343] (74) ^(3-(2-(бис(4-метоксибензил)амино)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)фенил)пропионамид
К 183 мг (0.353 ммоль) 73 в 10 мЛ CH2CI2 добавляли Et3N (492 мкл, 357 мг, 3.53 ммоль) и охлаждали до 0°С на ледяной бане. Раствор пропионил хлорида (168 мкл, 179 мг, 1.765 мг) в CH2CI2 (5 мл) добавляли по капле и перемешивали реакционную смесь. Через 20 минут ледяную баню удаляли и продолжали перемешивать в течение ещё 40 минут. 2 мл МеОН добавляли чтобы погасить реакционную смесь и удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 70:30 to 60:40) с получением 0.188 г (93%) 74. 1И ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.47 (d, J= 1.1 Гц, Ш), 7.24 (d, J= 8.5 Гц, 4Н), 7.17 (t, J= 1.9 Гц, Ш), 7.08 (s, Ш), 7.01 (s, Ш), 6.87 (d, J= 8.6 Гц, 4Н), 6.83 (d, J= 7.6 Гц, Ш), 4.77 (s, 4Н), 3.89 (s, 6Н), 3.81 (s, 6Н), 2.36 (q, J= 7.5 Гц, 2Н), 1.26 (t, J= 7.5 Гц, ЗН); MS (m/z): [M+Na]+ 597.1.
[00344] YK140 (75) ЩЗ-(2-амино-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)фенил)пропионамид
188 мг (0.327 ммоль) 74 в 5 мл СНС1з:ТТА (1:1) нагревали при температуре 62°С в течение 22 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (гексан:ЕЮАс, 1:1 to 4:6) с получением 90 мг (83%) 75. 1Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.43 (d,J= 1.1 Гц, Ш), 7.15 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.95-7.06 (т, ЗН), 6.74-6.85 (т, 2Н), 3.90 (s, 6Н), 2.36 (q, J= 7.6 Гц, 2Н), 1.26 (t, J= 7.6 Гц, ЗН); HRMS (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C15H19N4O3S, 335.1178; получено, 335.1183.
[00345] (76) ^(3-(2-фтор-4,6-диметоксипиримидин-5-илтио)фенил)пропионамид
60 мг (0.178 ммоль) 75 и пиридин (250 мкл) добавляли в пластиковую тубу оборудованную магнитным устройством для помешивания и охлаждали до 0 °С. Затем pacTBopHF/пиридин (300 мкл, 12 ммоль) добавляли. Через несколько минут добавляли 20 мг (0.290 ммоль) NaN02 и Интенсивно перемешивали в течение ещё 90 минут при температуре 0 °С и при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем добавляли 5 мл CH2CI2 и 100 мг СаСОз и перемешивали смесь в течение 5 часов при комнатной температуре. Затем фильтровали над спечённой круглой воронкой и промывали твёрдое вещество ЕЮАс. Фильтрат фильтровали через целит, концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (гексан:ЕЮАс, 60:40) с получением 35 мг (58%) 76. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.35 (d, J= 1.1 Гц, Ш), 7.17 (t, J = 1.9 Гц, Ш), 6.96-7.05 (m, Ш), 6.75-6.90 (т, 2Н), 4.01 (s, 6Н), 2.36 (q, J= 7.5 Гц, 2Н), 1.23 (t, J= 7.5 Гц, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 338.2.
[00346] YK141 (77) N-(3-(2-(4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)-4,6-диметоксипиримидин-5-
илтио)фенил)пропионамид
К 35 мг (0.104 ммоль) 76 в 2 мл ДМФ добавляли 30 мг (0.114 ммоль) 46 и нагревали при температуре 90 °С в течение 75 минут. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 44.2 мг (74%) 77. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 8 7.51 (d, J= 7.2 Гц, Ш), 7.22 (s, Ш), 7.14 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.95 (s, Ш), 6.80 (d, J= 7.5 Гц, Ш), 3.94 (s, 4Н), 3.89 (s, 6Н), 3.60-3.80 (m, 15Н), 2.60-2.82 (m, 6Н), 2.35 (q, J= 7.2 Гц, 2H), 1.21 (t, J= 7.4 Гц, ЗН); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C27H42N507S, 580.2805; получено, 580.2806.
[00347] YK142 (78) 2-(2-(2-(2-(4-(4,6-диметокси-5-(3-
пропионамидофенилтио)пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)этокси)этокси)этокси)этил 5-(2-оксогексагидро-1Н-тиено [3,4-d] имид азол-4-ил)пентаноат
29 мг (0.050 ммоль) 77, 36 мг (0.147 ммоль) Б-(+)-биотин, DMAP (4.5 мг, 0.037 ммоль), 61 мг (0.296 ммоль) DCC в 5 мл CH2CI2 обрабатывали ультразвуком в течение часов в запечатанной тубе. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cb:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 36 мг (90%) 78. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.45-7.53 (m, 2Н), 7.13 (t, J= 6.6 Гц, Ш), 7.05 (s, Ш), 6.77 (d, J= 6.5 Гц, Ш), 5.90 (s, Ш), 5.35 (s, Ш), 4.46-4.53 (m, Ш), 4.27-4.33 (m, Ш), 4.18-4.26 (m, 2Н), 3.85-4.00 (m, ЮН), 3.63-3.74 (m, 12Н), 3.10-3.18 (m, Ш), 2.90 (dd, J=4.5, 10.7 Гц, Ш), 2.74 (d, J= 10.7 Гц, Ш), 2.61 (m, 4Н), 2.42 (t, J= 7.2 Гц, 2H), 2.36 (m, 4Н), 1.10-1.82 (m, 9Н); HRMS (m/z): [M+H]+ рассчитано для C^HseNvC^, 806.3581; получено, 806.3566.
[00348] (80) 4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидине
5 г (0.0286 моль) 2-хлор-4,6-диметоксипиримидина (79) и 7.93 мл (7.16 г, 0.0715 моль) N-метилпиперазина в 22 мл ДМФ нагревали при температуре 90°С в течение 2.5 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и обрабатывали осадок 200 мл CH2CI2. Полулченное соединение промывали рассолом (3 х 50 мл), сушили над MgSC> 4, фильтровали и концентрировали с получением 6.51 г (95%) 80. ХН ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 5.37 (s, Ш), 3.85 (s, 6Н), 3.82 (m, 4Н), 2.44 (т, 4Н), 2.33 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDCb): 5 172.0, 160.8, 77.8, 55.0, 53.4, 46.3, 43.7; MS (m/z): [М+Н]+ 239.2.
[00349] (81) 5-йод-4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин
К 1.59 г (6.67 ммоль) 80 в 40 мЛ ацетонитрила добавляли 1.80 г (8.01 ммоль) N-йодсукцинимида, 0.771 мл (1.14 г, 10.0 ммоль) TFA и перемешивали при комнатной
температуре в течение 1.5 часов. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния и обрабатывали осадок 100 мл CH2CI2 и промывали 5% NaHCCb (3 х 50 мл), сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением осадка который очищали методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ЫНЗ (7N), 1:0 to 20:1) с выходом 2.06 г (86%) 81. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 3.93 (s, 6Н), 3.82 (m, 4Н), 2.47 (т, 4Н), 2.36 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 365.1.
[00350] YK133 (82) 3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)анилин
Смесь 81 (0.500 г, 1.37 ммоль), 3-аминобензолетиола (146 мкл, 0.172 г, 1.37 ммоль), неокупроина (86 мг, 0.411 ммоль), йодида меди (78 мг, 0.411 ммоль), и фосфата калия (0.582 г, 2.74 ммоль) в ДМФ (15 мл) перемешивали при температуре 125°С в течение 17 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 100:1 to 30:1) с получением 0.253 г (51%) 82. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 6.97 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.46-6.51 (m, Ш), 6.36-6.40 (т, 2Н), 3.88-4.03 (т, ЮН), 2.52 (т, 4Н), 2.38 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 171.8, 160.1, 146.9, 139.5, 129.6, 116.2, 112.2, 112.1, 81.1, 55.0, 54.6, 46.3, 43.8; HRMS (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C17H24N5O2S, 362.1651; получено, 362.1649.
[00351] YK129 (83) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)акриламид
К раствору 82 (10 мг, 0.027 ммоль) и E13N (50 мкл, 36 мг, 0.36 ммоль) в 1 мл CH2CI2 добавляли акрилоил хлорид (22 мкл, 24.4 мг, 0.27 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов, затем гасили добавлением холодного МеОН. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 6.0 мг (54%) 83. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCb) 5 7.49 (m, Ш), 7.36 (т, Ш), 7.14 (т, 2Н), 6.84 (d, J= 7.5 Гц, Ш), 6.36 (т, Ш), 6.22 (т, Ш), 5.73 (т, Ш), 4.02 (т, 4Н), 3.90 (s, 6Н), 2.70 (т, 4Н), 2.50 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 416.4.
[00352] YK130 (84) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)пропионамид
К раствору 82 (10 мг, 0.027 ммоль) и E13N (50 мкл, 36 мг, 0.36 ммоль) в 1 мл CH2CI2 добавляли пропионил хлорид (22 мкл, 24.4 мг, 0.27 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов, затем гасили добавлением
холодного МеОН. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 20:1) с получением 7.3 мг (65%) 84. 1Я ЯМР (500МГц, CDC13) 5 7.44 (d, J= 7.5 Гц, Ш), 7.13 (m, 2Н), 7.04 (s, Ш), 6.78 (d, J = 7.5 Гц, Ш), 3.93 (m, 4Н), 3.90 (s, 6Н), 2.55 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН), 2.33 (q, J= 7.2 Гц, 2Н), 1.21 (t, J = 7.2 Гц, ЗН); HRMS (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C20H28N5O3S, 418.1913; получено, 418.1910.
[00353] YK139 (85) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)циклопропанкарбоксамид
К раствору 82 (10.9 мг, 0.0302 ммоль) и Et3N (21 мкл, 15.3 мг, 0.151 ммоль) в СН2С12 (1 мл) добавляли циклопропанкарбонил хлорид (14 мкл, 15.8 мг, 0.1508 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 20:1) с получением 7.9 мг (61%) 85. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.49 (m, Ш), 7.29 (s, Ш), 7.13 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.97 (s, Ш), 6.78 (d, J= 7.6 Гц, Ш), 3.88-3.95 (т, ЮН), 2.48 (т, 4Н), 2.36 (s, ЗН), 1.05-1.13 (т, Ш), 0.74-0.96 (т, 4Н); HRMS (m/z): [М+Н]+ рассчитано для C2iH28N503S, 430.1913; получено, 430.1897.
[00354] YK149 (86) 2-амино-^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К раствору 82 (20 мг, 0.0552 ммоль) в ТГФ (1 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (9.7 мг, 0.0552 ммоль) и DCC (12 мг, 0.058 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (ЕЮАс:МеОН-Гч[Нз (7N), 20:1) с получением твёрдого вещества которое растворяли в 2 мл СНгС^ТТА (4:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 13.9 мг (60%) 86. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 7.38 (d, J= 8.2 Гц, Ш), 7.26 (s, Ш), 7.15 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 6.79 (d, J = 7.6 Гц, Ш), 3.86-3.97 (m, ЮН), 3.52 (s, 2Н), 2.58 (m, 4Н), 2.41 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 419.1.
[00355] ТТ-2 (87) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)циклобутанкарбоксамид
82 (10 мг, 0.028 ммоль), E13N (19.5 мкл, 14.2 мг, 0.14 ммоль) и циклобутанкарбонил хлорид (9.6 мкл, 10.0 мг, 0.084 ммоль) в CH2CI2 (1 мл) перемешивали при комнатной температуре а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 4.1 мг (33%) 87. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.50 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 7.14 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 7.00 (s, Ш), 6.94 (br s, Ш), 6.77 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 3.90 (br s, ЮН), 3.07 (m, Ш), 2.50 (m, 14Н), 2.14-2.42 (m, 7Н), 1.82-2.02 (m, 2Н); MS (m/z): [M+H]+ 444.1.
[00356] TT-3 (88) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)циклогексанкарбоксамид
82 (10 мг, 0.028 ммоль), E13N (19.5 мкл, 14.2 мг, 0.14 ммоль) и циклогексанкарбонил хлорид (11.4 мкл, 12.3 мг, 0.084 ммоль) в CH2CI2 (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 12 мг (91%) 88. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.50 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 7.18 (s, Ш), 7.13 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 7.02 (s, Ш), 6.76 (d, J= 1.1 Гц, Ш), 3.90 (br s, ЮН), 2.51 (m, 4Н), 2.38 (s, ЗН), 2.11-2.22 (m, Ш), 1.19-1.96 (m, ЮН); MS (m/z): [М+Н]+ 472.0.
[00357] ТТ-4 (89) ^(3-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)бензамид
82 (10 мг, 0.028 ммоль), E13N (19.5 мкл, 14.2 мг, 0.14 ммоль) и бензоил хлорид (9.8 мкл, 11.8 мг, 0.084 ммоль) в CH2CI2 (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 8.6 мг (66%) 89. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 7.83 (d, J= 1.1 Гц, 2Н), 7.74 (br s, Ш), 7.59 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 7.54 (t, J= 6.4 Гц, Ш), 7.47 (t, J= 7.8 Гц, 2Н), 7.20 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 7.13 (s, Ш), 6.86 (d, J = 1.9 Гц, Ш), 3.87-3.93 (m, ЮН), 2.50 (m, 4Н), 2.37 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 466.1.
Схема 11: Синтез ТТ-5 (95)
Реагенты и условия: (a) PhB(OH)2, Na2C03, Na2C03, Pd(OAc)2, ДМЭ, 95°C, 15-20ч.; b. N-метилпиперазин, ДМФ, 90°C, 1.5 ч; c.NIS, ТФА, CH3CN, с. N-аминобенщолтиол, неокупроин, Cul, К3Р04, ДМФ, 125°С, 17 ч; е. Вос-глицин, ДХХ, ТГФ, кт, 12 ч; f ТФА- СН2С12 (1:4), к.т.
[00358] (91) 2-хлор-4-фенилпиримидин
К смеси 2,4-дихлорпиримидина (90) (50 мг, 0.336 ммоль), фенилборной кислоты (41 мг, 0.336 ммоль), карбоната натрия (110 мг в 0.5 мЛ водой) и DME (2.5 мл) добавляли ацетат палладия (3.8 мг, 0.0168 ммоль) и трифенилфосфин (8.8 мг, 0.0336 ммоль). Нагревали реакционную смесь при температуре 95°С в течение 20 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и обрабатывали осадок дихлорметаном (20 мл), промывали водой (3x5 мл), сушили над MgSC^, и концентрировали с получением осадка который очищали методом препаративной ТЖХ (гексан:ЕЮАс, 8:2) с выходом 41 мг (64%) 91. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.63 (d, J= 5.2 Гц, Ш), 8.06-8.11 (m, 2Н), 7.64 (d, J= 5.3 Гц, Ш), 7.477.57 (m, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDCb): 5 167.2, 161.9, 159.8, 135.1, 131.9, 129.1, 127.4, 115.2.
[00359] (92) 2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенилпиримидин
К раствору 91 (38 мг, 0.201 ммоль) в 0.5 мЛ ДМФ добавляли 1-метилпиперазине (56 мкл, 50 мг, 0.31 ммоль) и нагревали при температуре 90°С в течение 1.5 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с выходом 49 мг (95%) 92. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5
8.36 (d, J= 5.2 Гц, Ш), 8.01-8.09 (m, 2H), 7.43-7.50 (m, ЗН), 6.92 (d, J= 5.2 Гц, Ш), 3.96 (m, 4H), 2.50 (m, 4H), 2.34 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 164.4, 162.1, 158.4, 137.8, 130.6, 128.8, 127.1, 105.8, 55.2, 46.4, 43.9; MS (m/z): [M+H]+ 255.1.
[00360] (93) 5-йод-2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенилпиримидин
К 92 (49 мг, 0.193 ммоль) в ацетонитриле (1.4 мл) добавляли TFA (59 мкл, 88 мг, 0.772 ммоль), N-йодсукцинимид (43 мг, 0.193 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель испаряли и обрабатывали осадок дихлорметаном (15 мл), промывали 10% Na2C03 (2x5 мл), водой (5 мл), сушили над MgSC> 4, и концентрировали с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (СН2С12:МеОН, 10:1) с выходом 67 мг (92%) 93. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.60 (s, Ш), 7.65-7.73 (m, 2Н), 7.42-7.49 (m, ЗН), 3.86 (m, 4Н), 2.45 (m, 4Н), 2.33 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 167.5, 165.8, 160.9, 140.3, 129.7, 129.3, 128.1, 76.2, 55.0, 46.4, 43.9; MS (m/z): [М+Н]+ 380.9.
[00361] (94) 3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенилпиримидин-5-илтио)анилин
Смесь 93 (37.6 мг, 0.099 ммоль), 3-аминобензолетиола (12 мкл, 13.6 мг, 0.109 ммоль), неокупроина (6.2 мг, 0.0297 ммоль), йодида меди (5.7 мг, 0.0297 ммоль), и карбоната калия (42 мг, 0.198 ммоль) в ДМФ (1.4 мл) перемешивали при температуре 110°С в течение 12 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 10 мг (27%) 94. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.45 (s, Ш), 7.71 (d, J= 6.6 Гц, 2Н), 7.32-7.42 (m, ЗН), 6.99 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 6.47 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 6.43 (dd, J= 2.0, 6.4 Гц, Ш), 6.36 (d, J= 1.8 Гц, Ш), 3.97 (m, 4Н), 3.60 (br s, 2Н), 2.52 (m, 4Н), 2.37 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 378.1.
[00362] ТТ-5 (95) 2-амино-^(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-фенилпиримидин-
5-илтио)фенил)ацетамид
К раствору 94 (5 мг, 0.0133 ммоль) в ТГФ (0.5 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (2.3 мг, 0.0133 ммоль) и DCC (3 мг, 0.0146 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре, ТГФ выпаривали и добавляли 0.5 мл CH2C12:TFA (4:1). Перемешивали раствор в течение 45 минут, затем концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 10:1) с получением 2 мг (35%) 95. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.45 (s, Ш), 7.69 (d, J= 8.2 Гц, 2Н), 7.35-7.45 (m,
4Н), 7.31 (m, Ш), 7.17 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.76 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 3.96 (m, 4Н), 3.36 (s, 2Н), 2.56 (m, 4Н), 2.38 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 435.0.
[00363] (96) 4-(бензилокси)-2-хлорпиримидин
К раствору 2,4-дихлорпиримидина (90) (2.0 г, 0.0134 ммоль) в толуоле (20 мл) добавляли бензиловый спирт (1.53 мл, 1.59 г, 0.0147 моль), КОН (0.82 г, 0.0147 моль) и 18-краун-6 (0.177 г, 0.00067 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (400 мл) и промывали водой (3 х 50 мл), сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением белого твёрдого вещества которое очищали методом хроматографии (гексашСНгСЬ, 1:1 to 3:7) с получением 2.09 г (71%) смеси 96 с региоизомерным 2-(бензилокси)-4-хлорпиримидином (в соотношении 75:25 by ^-ЯМР, соответственно); MS (m/z): [M+Na]+ 243.1.
[00364] (97) 4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин
К раствору 96 (2.09, 0.00947 моль; содержащему региоизомеры) в ДМФ (34 мл) добавляли 1-метилпиперазин (3.15 мл, 2.85 г, 0.0284 моль) и нагревали при температуре 80°С в течение 1.75 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и обрабатывали осадок ЕЮАс (350 мл) и промывали рассолом (3 х 50 мл). Водный слой экстрагировали экстрагировали с ЕЮАс (2 х 50 мл) и объединённые органические слои сушили над MgSC> 4, фильтровали и концентрировали с получением масла, которое очищали методом колоночной хроматографии (EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 1:0 to 25:1) с получением 1.88 г (70%) 97. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.06 (d, J= 5.6 Гц, Ш), 7.41 (d, J= 7.0 Гц, 2Н), 7.35 (t, J= 7.0 Гц, 2Н), 7.32 (d, J= 7.0 Гц, Ш), 6.03 (d, J= 5.6 Гц, Ш), 5.35 (s, 2Н), 3.83 (m, 4Н), 2.45 (m, 4Н), 2.33 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 284.9.
[00365] (98) 4-(бензилокси)-5-йод-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин
К 97 (0.937 г, 0.0033 моль) в ацетонитриле (16 мл) добавляли TFA (1.02 мл, 1.51 г, 0.0132 моль) и N-йодсукцинимид (0.965 г, 0.0043 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли 7 мл 10% №гС03 (0.70 г, 0.066 моль) и перемешивали в течение 2 минут. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния и обрабатывали осадок CH2CI2 (200 мл) и промывали 10% Na2C03 (2 х 50 мл), 10% тиосульфатом натрия (50 мл) и рассолом (50 мл). Органический слой сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла которое очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 50:1) с выходом 1.31 г (97%) 98. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.27 (s, Ш), 7.44 (d, J= 7.4 Гц, 2Н), 7.37 (t, J= 7.2 Гц, 2Н), 7.32 (d, J= 7.3 Гц, Ш), 5.40 (s, 2Н), 3.79 (m, 4Н), 2.42 (m, 4Н), 2.32 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 411.0.
[00366] (99) 3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)анилин
Смесь 98 (0.985 г, 2.40 ммоль), 3-аминобензолетиол (255 мкл, 300.5 мг, 2.40 ммоль), неокупроина (150 мг, 0.72 ммоль), йод ид а меди (137 мг, 0.72 ммоль), и карбоната калия (0.663 г, 4.80 ммоль) в ДМФ (25 мл) перемешивали при температуре 120°С в течение 18 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 50:1 до 20:1) с получением 0.75 г (77%) 99. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.24 (s, Ш), 7.16-7.30 (m, 5Н), 6.99 (t, J= 7.3 Гц, Ш), 6.56 (d, J= 7.6 Гц, Ш), 6.38-6.46 (m, 2Н), 5.38 (s, 2Н), 3.84 (m, 4Н), 3.56 (br s, 2Н), 2.45 (br s, 4H), 2.33 (s, ЗН); 13C ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 169.3, 164.5, 161.4, 158.1, 146.9, 138.5,
136.8, 129.6, 128.3, 127.7, 127.4, 117.6, 113.6, 112.6, 67.6, 54.8, 46.2, 43.9; MS (m/z): [M+H]+ 408.1.
[00367] TT-7 (100) ^(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
К 99 (5.2 мг, 0.013 ммоль) в CH2CI2 (0.2 мл) добавляли ацетон ангидрид (1.5 мкл, 1.6 мг, 0.0156 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Затем концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 20:1) с получением 4.5 мг (79%) 100. 11 ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.24 (s, Ш), 7.54 (d, J= 7.7 Гц, Ш), 7.22-7.27 (m, ЗН), 7.13-7.20 (m, ЗН), 7.09 (s, Ш), 6.87 (d, J= 7.7 Гц, Ш), 5.36 (s, 2Н), 3.85 (m, 4Н), 2.49 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.10 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 450.1.
[00368] ТТ-8 (101) ^(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)бензамид
99 (14 мг, 0.034 ммоль), E13N (24 мкл, 17.2 мг, 0.17 ммоль) и бензоил хлорид (12 мкл, 14.3 мг, 0.102 ммоль) в CH2CI2 (1 мл) перемешивали при комнатной температуре а течение 2 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 25:1) с получением 13.6 мг (78%) 101. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.26 (s, Ш), 7.84 (d, J= 7.4 Гц, 2Н), 7.69 (dd, J= 1.4, 8.2 Гц, Ш), 7.54 (t, J= 7.3 Гц, Ш), 7.47 (t, J= 7.9 Гц, 2Н), 7.14-7.27 (m, 7Н), 6.93 (dd, J = 0.9, 7.9 Гц, Ш), 5.37 (s, 2Н), 3.85 (m, 4Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 168.6, 166.3, 164.2, 161.3, 138.6, 138.3, 136.4, 134.8, 131.8, 129.3, 128.6, 128.3, 127.7, 127.5, 127.2, 123.4, 118.8, 117.9, 100.1, 67.8, 54.6, 45.9, 43.6; MS (m/z): [М+Н]+ 512.1.
[00369] ТТ-9 (102) 2-амино-ЩЗ-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К 99 (30 мг, 0.0736 ммоль) в ТГФ (3 мл) добавляли трет-бутоксикарбонил-глицин (14.2 мг, 0.081 ммоль), DCC (16.7 мг, 0.081 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 25:1) с получением масла которое растворяли в 2.5 мл СНгС^ТТА (4:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгС^МеОН-
NH3 (7N), 15:1) с получением 24.6 мг (72%) 102. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.24 (s, Ш), 7.50 (dd, J= 1.2, 8.1 Гц, Ш), 7.31 (m, Ш), 7.22-7.27 (m, ЗН), 7.13-7.20 (m, ЗН), 6.86 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 5.37 (s, 2Н), 3.85 (m, 4Н), 3.39 (s, 2Н), 2.49 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 171.4, 168.5, 164.1, 161.2, 138.2, 138.1, 136.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.2, 123.0, 118.2, 117.0, 67.7, 54.5,45.8, 44.6, 43.5; MS (m/z): [М+Н]+465.3.
[00370] ТТ-20 (105) ^(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-
5-илтио)фенил)пирролидин-2-карбоксамид
К 99 (8.6 мг, 0.0211 ммоль) в ТГФ (0.5 мл) добавляли трет-бутоксикарбонил-Ь-пролин (5 мг, 0.0232 ммоль), DCC (5 мг, 0.0232 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворяли осадок в 0.35 мл СНгС^ТТА (4:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ГчНз (7N), 15:1) с получением 6.0 мг (57%) 105. ХН ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.63 (s, Ш), 8.26 (s, Ш), 7.58 (dd, J= 1.2, 8.1 Гц, Ш), 7.31 (t, J= 1.9 Гц, Ш), 7.12-7.17 (m, ЗН), 7.22-7.26 (m, ЗН), 6.83 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 5.36 (s, 2Н), 3.80-3.91 (m, 5Н), 3.04-3.11 (m, Ш), 2.94-3.00 (m, Ш), 2.47 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.15-2.25 (m, Ш), 1.98-2.06 (m, Ш), 1.70-1.81 (m, Ш); MS (m/z): [М+Н]+ 505.2.
Схема 13: TT-12(115t. ТТ-1Э (Ив). TT-14(117t.TT-15 (118). TT-1G(1iet.TT-17(120V
Реагенты и условия: (а) п-метоксиметиловый спирт, КОН, 18-краун-6, толуол, к.т; Ь. N-метилпиперазин, ДМФ, 80°С, 1.54;c.NIS,TOA,CH3CN, к.т., 1 ч; d. 3-аминобензолтиол, медь(1)тиофен-2-карбокислат, К2СОЗ, ДМФ, 120°С, 25 ч; е.Ас20, СН2С12,к.т., 3 ч; f. СН2С12:ТФА (1:1), к.т., 4 ч; g. POC13,60°C,24;h.ROH,NaH,/]M(r),80oC,1.54;i.BF3-МеОН, reflux,
54;j.RCOOH,DCC,TT(r),K.T.,12 ч;к. СН2С12:ТФА (4:1), к.т. или СН2С12:пиперидин (9:1)
[00371] (Ю6) 2-хлор-4-(4-метоксибензилокси)пиримидин
К 2,4-дихлорпиримидину (90) (2.0 г, 0.0134 ммоль) в толуоле (20 мл) добавляли р-метоксибензиловый спирт (1.84 мл, 2.04 г, 0.0147 моль), КОН (0.825 г, 0.0147 моль) и 18-краун-6 (0.177 г, 0.00067 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (350 мл), промывали водой (2 х 50 мл), сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла, которое очищали методом колоночной хроматографии (гекса^СНгСЬ, 1:1 to 3:7) с получением 2.39 г (71%) смеси 106 с региоизомерным 4-хлор-2-(4-метоксибензилокси)пиримидином (в соотношении 78:22 by ^-ЯМР, соответственно).
[00372] (Ю7) 4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидине
К раствору 106 (2.39, 0.0095 моль; содежит региоизомеры) в ДМФ (34 мл) добавляли 1-метилпиперазине (3.16 мл, 2.85 г, 0.0285 моль) и нагревали при температуре 80°С в течение 1.5 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и обрабатывали осадок ЕЮАс (350 мл) и промывали рассолом (3 х 50 мл). Водный слой экстрагировали exctracted ЕЮАс (2 х 50 мл) и объединённые органические слои сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла, которое очищали методом колоночной хроматографии (ЕЮАс:/-РгОН:Et3N, 40:1:1% до 20:1:1%) с получением 2.10 г (70%) 107. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.05 (d, J= 5.6 Гц, Ш), 7.35 (d, J= 8.5 Гц, 2Н), 6.90 (d, J= 8.5 Гц, 2Н), 6.00 (d, J= 5.6 Гц, Ш), 5.27 (s, 2Н), 3.84 (m, 4Н), 3.81 (s, ЗН), 2.46 (m, 4Н), 2.34 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 315.2.
[00373] (108) 5-йод-4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин
К 107 (1.16 г, 3.69 ммоль) в ацетонитриле (18 мл) добавляли N-йодсукцинимид (1.08 г, 4.80 ммоль), TFA (1.14 мл, 1.68 г, 14.76 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли 15.6 мл 10% №гС03 (1.56 г, 14.76 ммоль) и перемешивали в течение 2 минут. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния и обрабатывали осадок CH2CI2 (200 мл) и промывали 10% №гС03 (2 х 50 мл), 10% тиосульфатом натрия (50 мл) и рассолом (50 мл). Органический слой сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали с получением масла которое очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 50:1) с выходом 1.44 г (85%) 108. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.26 (s, Ш), 7.37 (d, J= 8.5 Гц, 2Н), 6.90 (d, J= 8.5 Гц, 2Н), 5.33 (s, 2Н), 3.81 (s, ЗН), 3.80 (m, 4Н), 2.44 (m, 4Н), 2.33 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 441.0.
[00374] (109) 3-(4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-
5-илтио)анилин
Смесь 108 (1.14 г, 2.59 ммоль) и карбоната калия (0.716 г, 5.18 ммоль) в ДМФ (37 мл) откачивали и наполняли аргоном три раза. Добавляли медь(1)тиофен-2-карбоксилат (0.198 г, 1.04 ммоль) и откачивали и наполняли аргоном два раза. Добавляли 3-аминотиофенол (330 мкл, 0.389 г, 3.11 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 120°С в течение 25 часов. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-ГчЕЬ (7N), 200:1 to 40:1) с получением 0.933 г (82%) 109. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.23 (s, Ш), 7.14 (d, J= 8.7 Гц, 2Н), 6.98 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.80 (d, J= 8.7 Гц, 2Н), 6.54 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 6.44 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 6.40 (t, J= 1.9 Гц, Ш), 5.30 (s, 2Н), 3.86 (m, 4Н), 3.79 (s, ЗН), 3.55 (br s, 2Н), 2.47 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН); 13С ЯМР (166 МГц, CDC13): 5 168.6, 164.4, 161.4, 159.2, 146.8, 138.6, 129.5, 129.3, 128.8, 117.6, 113.7, 113.6, 112.5, 100.1, 67.4, 55.3, 54.8, 46.2, 43.9; MS (m/z): [М+Н]+ 438.3.
[00375] ТТ-11 (НО) ^(3-(4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К раствору 109 (0.933 г, 2.13 ммоль) в CH2CI2 (6 мл) добавляли ацетон ангидрид (242 мкл, 261 мг, 2.56 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли CH2CI2 (90 мл) и промывали 10% Na2C03 (2 х 25 мл), сушили над MgSC> 4, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 200:1 to 50:1) с получением 0.895 г (88%) 110. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.24 (s, Ш), 7.55 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 7.16 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 7.11 (d,J= 8.6 Гц, 2Н), 6.85-6.93 (т, ЗН), 6.78 (d, J= 8.6 Гц, 2Н), 5.31 (s, 2Н), 3.88 (т, 4Н), 3.78 (s, ЗН), 2.48 (т, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.12 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 480.1.
[00376] (111) ^(3-(4-гидрокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
К раствору 110 (0.872 г, 1.82 ммоль) в CH2CI2 (4 мл) добавляли TFA (4 мл) по капле в течение 5 минут и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сушили в условиях высокого вакуума в течение ночи с получением 111 который использовали без дальнейшей очистки. MS (m/z): [М+ЯУ 360.2.
[00377] (112) ^(3-(4-хлор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)фенил)ацетамид
111 (-1.82 ммоль) и РОСЬ (5 мл) нагревали при температуре 65°С а течение 2 часов. Охлаждали комнатной температуры, добавляли реакционную смесь в химический стакан содержащий ледяную стружку. После полного гашения РОСЬ, аккуратно добавляли твёрдый №гСОз до уровня рН ~ 9. Полученное соединение переновили в делительную воронку и экстрагировали CH2CI2 (4 х 60 мл), сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали до получения твёрдого вещества которое очищали методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН-М1з (7N), 200:1 to 50:1) с получением 0.215 г (31%) 112. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.37 (s, Ш), 7.40 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.16-7.25 (m, 2Н), 6.89 (d, J= 7.7 Гц, Ш), 3.88 (т, 4Н), 2.47 (т, 4Н), 2.34 (s, ЗН), 2.14 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 378.2.
[00378] (113А) ^(3-(4-(циклопентилметокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К циклопентанметанолу (21.3 мкл, 19.9 мг, 0.198 ммоль) растворённму в ДМФ (250 мкл) добавляли NaH (4.3 мг, 0.179 ммоль) и полученную суспензию перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляли 112 (15 мг, 0.0397 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 80°С в течение 1.5 часов, добавляли МеОН (1 мл) и перемешивали в течение 5 минут, затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 13.9 мг (79%) 113А. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.23 (s, Ш), 7.42 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.10-7.22 (т, ЗН), 6.86 (d, J= 1.1 Гц, Ш), 4.16 (d, J= 6.7 Гц, 2Н), 3.86 (т, 4Н), 2.48 (т, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.19 (т, Ш), 2.09 (s, ЗН), 1.56-1.67 (т, 2Н), 1.40-1.55 (т, 4Н), 1.10-1.20 (т, 2Н); MS (m/z): [М+Н]+442.1.
[00379] (114А) 3-(4-(циклопентилметокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)анилин
К 113А (13.9 мг, 0.0315 ммоль) в метаноле (1 мл) добавляли BF3-MeOH (47 мкл, 53.6 мг, 0.378 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Добавляли E13N, затем реакционную смесь концентрировали с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 11 мг (87%) 114А. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.22 (s, Ш), 6.98 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.55 (d, J= 1.1 Гц, Ш), 6.45 (s, Ш), 6.43 (d, J= 1.9 Гц, Ш), 4.17 (d, J= 6.7 Гц, 2Н), 3.86 (m, 4Н), 3.58 (br s,
2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.23 (m, Ш), 1.59-1.68 (m, 2Н), 1.43-1.58 (m, 4Н), 1.13-1.23 (m, 2Н); MS (m/z): [M+H]+ 400.3.
[00380] TT-12 (115) 2-амино-^(3-(4-(циклопентилметокси)-2-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К 114А (11 мг, 0.0275 ммоль) в ТГФ (1 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (5.3 мг, 0.030 ммоль), DCC (6.2 мг, 0.030 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ЫНз (7N), 20:1) с получением осадка который растворяли в 1.25 мл СНгСЬ^ТТА (4:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгС^МеОН-NH3 (7N), 10:1) с получением 10.3 мг (82%) 115. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.21 (s, Ш), 7.44 (d, J =8.0 Гц, Ш), 7.34 (s, Ш), 7.17 (t, J = 8.0 Гц, Ш), 6.86 (d, J =7.1 Гц, Ш), 4.17 (d, J= 6.8 Гц, 2Н), 3.84 (m, 4Н), 3.41 (s, 2Н), 2.51 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН), 2.21 (m, Ш), 1.57-1.67 (m, 2Н), 1.42-1.57 (m, 4Н), 1.10-1.22 (m, 2Н); MS (m/z): [М+Н]+ 457.4.
[003 81] (113В) ^(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-феноксипиримид ин-5-
илтио)фенил)ацетамид
К фенолу (19 мг, 0.198 ммоль) растворённому в ДМФ (250 мкл) добавляли NaH (4.3 мг, 0.179 ммоль) и полученный раствор перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляли 112 (15 мг, 0.0397 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 80°С в течение 1.5 часов. Добавляли МеОН (1 мл) и перемешивали в течение 5 минут, затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 20:1) с получением 16.2 мг (94%) 113В. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.35 (s, Ш), 7.40 (d, J= 7.7 Гц, Ш), 7.30-7.36 (m, ЗН), 7.28 (br s, Ш), 7.15-7.23 (m, 2Н), 7.02 (d, J= 8.0 Гц, 2H), 6.96 (d, J= 7.6 Гц, Ш), 3.65 (m, 4Н), 2.36 (m, 4Н), 2.28 (s, ЗН), 2.13 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 436.2.
[00382] (114В) 3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-феноксипиримидин-5-
илтио)анилин
К 113В (16.2 мг, 0.037 ммоль) в метаноле (1 мл) добавляли BF3-MeOH (55 мкл, 63.3 мг, 0.446 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Et3N добавляли затем реакционную смесь концентрировали с получением осадка, который очищали
методом препаративной ТЖХ (reKcaH:CH2Cl2:EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 2:2:1:0.5) с получением 6.5 мг (45%) 114В. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.34 (s, Ш), 7.33 (t, J= 7.7 Гц, 2Н), 7.18 (t, J= 7.4 Гц, Ш), 7.01-7.07 (m, ЗН), 6.63 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 6.56 (t, J= 2.0 Гц, Ш), 6.47 (dd, J= 2.2, 8.0 Гц, Ш), 3.63 (m, 6Н), 2.37 (m, 4Н), 2.30 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 394.3.
[00383] ТТ-13 (116) 2-амино-^(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-
феноксипиримидин-5-илтио)фенил) ацетамид
К 114В (6.5 мг, 0.0165 ммоль) в ТГФ (0.65 мл) добавляли 9-флуоренилметоксикарбонил-глицин (5.4 мг, 0.018 ммоль), DCC (3.8 мг, 0.018 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (гексан:СН2С12:ЕЮАс:МеОН-NH3 (7N), 2:2:1:0.5) с получением осадка который растворяли в СН2С12 (0.9 мл) и пиперидин (0.1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 3.5 мг (47%) 116. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.34 (br s, Ш), 8.36 (s, Ш), 7.50 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.47 (s, Ш), 7.33 (t, J= 8.2 Гц, 2H), 7.22 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 7.18 (t, J= 1.4 Гц, Ш), 7.03 (d, J= 1.1 Гц, 2H), 6.96 (d, J= 1.9 Гц, Ш), 3.68 (m, 4Н), 3.46 (s, 2Н), 2.40 (m, 4Н), 2.31 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+451.1.
[00384] (113C) ^(3-(4-(циклопентилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К циклопентанолу (11.8 мкл, 11.2 мг, 0.13 ммоль) растворённому в ДМФ (200 мкл) добавляли NaH (2.8 мг, 0.117 ммоль) и перемешивали полученную суспензию в течение 10 минут, при комнатной температуре. Затем добавляли 112 (10 мг, 0.026 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 80°С а течение 2 часов. МеОН (1 мл) добавляли и перемешивали в течение 5 минут затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 8.5 мг (77%) 113С. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.21 (s, Ш), 7.41 (d,/=7.9Гц, Ш), 7.10-7.19 (т, ЗН), 6.86 (d, J = 7.8 Гц, Ш), 5.39 (т, Ш), 3.86 (т, 4Н), 2.48 (т, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 2.14 (s, ЗН), 1.63-1.86 (т, 4Н), 1.45-1.56 (т, 4Н); MS (m/z): [М+Н]+ 428.2.
[00385] (114С) 3-(4-(циклопентилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)анилин
К 113С (8.5 мг, 0.020 ммоль) в метаноле (0.75 мл) добавляли BF3-MeOH (30 мкл, 34.1 мг, 0.24 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Добавляли Et3N, затем реакционную смесь концентрировали с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 7.2 мг (94%) 114С. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.20 (s, Ш), 6.98 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.55 (d, J= 7.0 Гц, Ш), 6.46 (t, J= 2.0 Гц, Ш), 6.43 (dd, J= 2.0, 7.9 Гц, Ш), 5.40 (m, Ш), 3.86 (m, 4Н), 3.58 (br s, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 1.67-1.87 (m, 4Н), 1.51-1.62 (m, 4Н); MS (m/z): [M+H]+ 386.2.
[00386] TT-14 (117) 2-амино-^(3-(4-(циклопентилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К раствору 114С (7.2 мг, 0.0187 ммоль) в ТГФ (0.5 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (3.6 мг, 0.0206 ммоль) и DCC (4.3 мг, 0.0206 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, ТГФ выпаривали и добавляли 0.5 мл CH2C12:TFA (4:1). Перемешивали раствор в течение 45 минут, затем концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 7.4 мг (89%) 117. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.29 (br s, Ш), 8.22 (s, Ш), 7.52 (d, J= 7.7 Гц, Ш), 7.30 (s, Ш), 7.16 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.86 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 5.40 (m, Ш), 3.86 (m, 4Н), 3.45 (s, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 1.61-1.86 (m, 4Н), 1.44-1.57 (m, 4Н); MS (m/z): [M+H]+ 443.2.
[00387] (113D) ^(3-(4-(циклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид
К циклогексанолу (14 мкл, 13.0 мг, 0.13 ммоль) растворённому в ДМФ (200 мкл) добавляли NaH (2.8 мг, 0.117 ммоль) и полученную суспензию перемешивали в течение 10 минут, при комнатной температуре. Затем добавляли 112 (10 мг, 0.026 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 80°С а течение 2 часов. Добавляли МеОН (1 мл) и перемешивали в течение 5 минут, затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (reKcaH:CH2Cl2:EtOAc:MeOH-NH3 (7N), 2:2:1:0.5) с получением 2.9 мг (25%) 113D. 1Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.23 (s, Ш), 7.43 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 7.12-7.19 (m, 2Н), 7.06 (br s, Ш), 6.88 (d, J= 7.6 Гц, Ш), 5.05 (m, Ш), 3.85 (m, 4Н), 2.50 (m, 4Н), 2.36 (m, ЗН), 2.14 (s, ЗН), 1.22-1.80 (m, ЮН); MS (m/z): [M+H]+ 442.2.
[00388] (114D) 3-(4-(циклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-
илтио)анилин
К 113D (2.9 мг, 0.0066 ммоль) в метаноле (0.5 мл) добавляли BF3-MeOH (10 мкл, 11.2 мг, 0.079 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Добавляли E13N затем реакционную смесь концентрировали с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 2.4 мг (92%) 114D. 11 ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 8.22 (s, Ш), 6.98 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 6.57 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 6.48 (t, J= 2.0 Гц, Ш), 6.43 (dd, J= 2.0, 8.0 Гц, Ш), 5.05 (m, Ш), 3.86 (т, 4Н), 3.58 (br s, 2Н), 2.51 (т, 4Н), 2.37 (s, ЗН), 1.22-1.80 (т, ЮН); MS (m/z): [М+Н]+ 400.2.
[00389] ТТ-15 (118) 2-амино-^(3-(4-(циклогексилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиримидин-5-илтио) фенил)ацетамид
К раствору 114D (2.4 мг, 0.006 ммоль) в ТГФ (0.25 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (1.2 мг, 0.0066 ммоль) и DCC (1.4 мг, 0.0066 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, ТГФ выпаривали и добавляли 0.25 мл CH2C12:TFA (4:1). Перемешивали раствор в течение 45 минут, затем концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 2.5 мг (93%) 118. 11 ЯМР (500 МГц, CDCI3): 5 9.28 (br s, Ш), 8.24 (s, Ш), 7.54 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 7.30 (s, Ш), 7.17 (t, J= 7.9 Гц, Ш), 6.88 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 5.06 (m, Ш), 3.84 (m, 4Н), 3.45 (s, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН), 1.22-1.80 (m, ЮН); MS (m/z): [М+Н]+ 457.1.
[00390] (113Е) ЩЗ-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3-
илметокси)пиримидин-5-илтио) фенил)ацетамид
К 3-пиридилкарбинолу (15.5 мкл, 17.4 мг, 0.159 ммоль) растворённому в ДМФ (200 мкл) добавляли NaH (3.4 мг, 0.143 ммоль) и перемешивали полученную суспензию в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляли 112 (12 мг, 0.0318 ммоль) и нагревали реакционную смесь при температуре 80°С в течение 1.5 часов. Добавляли МеОН (1 мл) и перемешивали в течение 5 минут, затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (гексан:СН2С12:ЕЮАс:МеОН-М1з (7N), 2:2:1:0.5) с получением 11.8 мг (83%) 113Е. MS (m/z): [М+Н]+451.3.
[00391] (114Е) 3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3-
илметокси)пиримидин-5-илтио)анилин
К 113Е (11.8 мг, 0.026 ммоль) в метаноле (1 мл) добавляли BF3-MeOH (39 мкл, 44.3 мг, 0.312 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Добавляли Et3N , затем реакционную смесь концентрировали с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (СНгСЬМеОН-ГчНз (7N), 15:1) с получением 7 мг (66%) 114Е. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 8.45 (d, J= 4.9 Гц, Ш), 8.43 (s, Ш), 8.25 (s, Ш), 7.50 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 7.27 (dd, 7= 5.0, 7.8 Гц, Ш), 7.01 (t, J= 7.8 Гц, Ш), 6.47-6.55 (т, ЗН), 5.39 (s, 2Н), 3.88 (т, 4Н), 2.52 (т, 4Н), 2.37 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 409.3.
[00392] ТТ-16 (119) 2-амино-]Ч-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3-
илметокси)пиримидин-5-илтио) фенил)ацетамид
К раствору 114Е (6 мг, 0.015 ммоль) в ТГФ (0.5 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (3 мг, 0.016 ммоль) и DCC (3.3 мг, 0.016 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, ТГФ выпаривали и добавляли 0.35 мл CR^CbiTFA (4:1). Перемешивали раствор в течение 45 минут, затем концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением осадка, который очищали методом препаративной ТЖХ (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 15:1) с получением 6.1 мг (88%) 119. 1Я ЯМР (500 МГц, CDCl3/MeOH-d4): 5 9.31 (br s, Ш), 8.50 (m, 2Н), 8.28 (s, Ш), 7.50 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 7.42 (m, Ш), 7.33 (s, Ш), 7.11-7.25 (m, 2Н), 6.86 (d, J= 7.9 Гц, Ш), 5.40 (s, 2Н), 3.87 (m, 4Н), 3.46 (s, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 466.2.
TT-10 121
Схема 14: Синтез TT-10 (121)
Реагенты и условия: а. Fmoc-глицин, ДХХ, ТГФ, к.т. 12 ч. b. СН2С12-пиперидин (9:1), к.т., 2 ч.
[00393] ТТ-10 (121) 2-амино-^(3-(4-(4-метоксибензилокси)-2-(4-
метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио) фенил)ацетамид
К 109 (10 мг, 0.0228 ммоль) в ТГФ (1 мл) добавляли 9-флуоренилметоксикарбонил-глицин (7.5 мг, 0.0251 ммоль), DCC (5.2 мг, 0.0251 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворяли осадок в CH2CI2 (0.9 мл) и пиперидине (0.1 мл) и перемешивали при комнатной температуре а течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали осадок методом препаративной ТЖХ (СНгС^МеОН-NH3 (7N), 15:1) с получением 8.2 мг (73%) 121. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 9.20 (br s, Ш), 8.25 (s, Ш), 7.60 (d, J= 7.8 Гц, Ш), 7.17-7.20 (m, 2Н), 7.09 (d, J= 8.5 Гц, 2Н), 6.85 (d, J = 7.1 Гц, Ш), 6.77 (d, J= 8.6 Гц, 2Н), 5.30 (s, 2Н), 3.88 (m, 4Н), 3.78 (s, ЗН), 3.44 (s, 2Н), 2.48 (m, 4Н), 2.35 (s, ЗН); MS (m/z): [М+Н]+ 495.2.
Схема 15: Синтез YK171 (126), YK172 (127), YK173 (129), YK174 (130), YK175 (131). Реагенты и условия: (а) N-метилпиперазин, К2С03, ДМФ, 130°С, 16 ч.; (b) NIS, CH3CN, к.т., 2 ч.; (с) 3-аминобензолтиол, неокупроин, Cul, К2С03, ДМФ, 130°С, 16 ч.; (d) RCOC1, Et3N; (е) RCOOH, EDCL, ТГФ, к.т.; (f) СН2С12: ТГФ (4:1), к.т.
[00394] (123) 1-(6-метоксипиридин-2-ил)-4-метилпиперазин
К раствору 2-бром-6-метоксипиридина (122) (150 мг, 0.8 ммоль) и 1-метил пиперазина (240 мг, 2.4 ммоль) в 2 мл ДМФ добавляли К2СО3 (220 мг, 1.6 ммоль) и нагревали полученную смесь до 130°С в течение 16 ч. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (5-10% МеОН в CH2CI2) с получением 145 мг (88%) 123. 1Я ЯМР (500МГц, CDC13): 5 7.41 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.16 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.08 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3,87 (s, ЗН), 3.54 (m, 4Н), 2.51 (т, 4Н), 2.54 (s, ЗН); 13С ЯМР (125 МГц, CDC13): 5 163.1, 158.3, 140.1, 98.2, 98.1, 54.8, 52.9, 46.2, 45.1; MS (m/z): [М+Н]+ 208.4.
[00395] (124) 1-(5-йод-6-метоксипиридин-2-ил)-4-метилпиперазин
К раствору 123 (124 мг, 0.6 ммоль) в 5 мл ацетонитрила добавляли N-йодсукцинимид (203 мг, 0.9 ммоль) и перемешивали полученную смесь при комнатной температуре в течение 2
часов. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии с (СНгСЬМеОН-ГчНз (7N), 1:0 to 85:15) с получением 190 мг (95%) 124. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.70 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.02 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3.90 (s, ЗН), 3.60 (m, 4Н), 2.62 (m, 4Н), 2.39 (s, ЗН); 13С ЯМР (125МГц, CDC13): 5 177.7, 160.5, 157.8, 148.6, 100.7, 61.7, 54.2, 45.5, 44.5; MS (m/z): [М+Н]+ 334.1.
[00396] (125) 2-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-
ил)тио)пиримидин-4-амин
Смесь 124 (100 мг, 0.3 ммоль), 4-аминопиримидин-2-тиола (39 мг, О.Зтмоль), КгС03 (83 мг, 0.6 ммоль), неокупроина (11 мг, 0.05 ммоль), и Cul (10 мг, 0.05тмоль) в ДМФ (3 мл) нагревали до 130 °С в течение 16 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cl2:MeOH-NH3 (7N), 1:0 до 85:15) с получением 60 мг (60%) 125. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.95 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.59 (d, J= 8.5 Гц, Ш), 6.20 (d, J= 8.5 Гц, Ш), 6.05 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 5.01 (s, 2Н), 3.87 (s, ЗН), 3.62 (m, 4Н), 2.54 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН); 13С ЯМР (125 МГц, CDC13): 5 171.9, 162.9,
162.5, 158.6, 156.2, 147.8, 101.1, 98.6, 97.6, 54.6, 53.6, 46.0, 44.6; MS (m/z): [М+Н]+ 333.5.
[00397] YK171 (126) ^(2-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-
ил)тио)пиримидин-4-ил) пропионамид
К раствору 125 (20 мг, 0.06 ммоль) в 1.5 мл CH2CI2 и Et3N (100 мкл) добавляли пропионил хлорид в CH2CI2 по капле. После завершения (согласно результатам ТЖХ) реакции, реакционную смесь гасили добавлением холодного МеОН. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии с (МеОН-NH3 (7N) 2-10% в СН2С12 с получением 18 мг (80%) 126. 11 ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.53 (bs, Ш), 8.34 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.79 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.58 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.21 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3.86 (s, ЗН), 3.63 (m, 4H), 2.52 (m, 4H), 2.41 (q, J= 7.2 Гц, 2H), 2.36 (s, ЗН), 1.08 (t, J= 7.2 Гц, ЗН); 13C ЯМР (125МГц, CDC13): 5 173.4, 172.2, 171.7, 162.9, 158.8, 157.3,
147.6, 105.6, 98.7, 96.7, 54.6, 53.7, 46.0, 44.6, 30.6, 8.96; MS (m/z): [M+H]+ 389.3.
[00398] YK172 (127) ^(2-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-
ил)тио)пиримидин-4-ил) циклопропанкарбоксамид
К раствору 125 (20 мг, 0.06 ммоль) в 1.5 мл СН2С1г и Et3N (100 мкл) добавляли циклопропанкарбонил хлорид в CH2CI2 по капле. После завершения (согласно результатам ТЖХ) реакции, реакционную смесь гасили добавлением холодного МеОН. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной
хроматографии (MeOH-NH3 (7N) 2-10% в СН2С12) с получением (21 мг (90%) 127. *Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 8.87 (br s, Ш), 8.31 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.75 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.57 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.20 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3.87 (s, ЗН), 3.62 (m, 4Н), 2.52 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН), 1.61 (m, Ш), 1.08 (m, 2Н), 0.88 (m, 2Н); 13С ЯМР (125МГц, CDCb): 5 176.4, 173.5, 171.7, 162.9, 158.8, 157.2, 147.6, 105.7, 98.6, 96.7, 54.7, 53.6, 46.1, 44.6, 14.0, 7.7; MS (m/z): [М+Н]+401.3.
[00399] (128) 3-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)тио)анилин
Смесь 124 (100 мг, 0.3 ммоль), 3-аминобензолетиола (37 мг, 0.3 ммоль), К2СОз (83 мг, 0.6 ммоль), неокупроина (11 мг, 0.05 ммоль) и Cul (10 мг, 0.05 ммоль) в ДМФ (3 мл) нагревали до 130°С в течение 16 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СН2С12:МеОН-Гч[Нз (7N), 1:0 to 85:15) с получением 60 мг (60%) 128. 1Я ЯМР (500МГц, CDCb): 5 7.54 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.96 (m, Ш), 6.51 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.41 (m, 2Н), 6.19 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3.88 (s, ЗН), 3.62 (m, 4Н), 2.54 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН); 13С ЯМР (125 МГц, CDC13): 5 162.7, 158.4, 147.5, 146.8, 139.5, 129.5, 117.1, 113.0, 112.2, 99.8, 98.9, 54.6, 53.7, 46.1, 44.8; MS (m/z): [М+Н]+331.2.
[00400] YK173 (129) ^(3-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-
ил)тио)фенил)пропионамид
К раствору 128 (20 мг, 0.06 ммоль) и EbN (100 мкл) в 1.5 мл СН2С12 добавляли пропионил хлорид в СН2С12 по капле. После завершения (согласно результатам ТЖХ) реакции, реакционную смесь гасили добавлением холодного МеОН. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии с (МеОН-NH3 (7N) 2-10% в СН2С12) с получением 15 мг (70%) 129. 1Я ЯМР (500 МГц, CDC13): 5 7.55 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.45 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.22 (br s, Ш), 7.14 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 7.08 (s, Ш), 6.81 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 6.20 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 3.88 (s, ЗН), 3.47 (m, 4Н), 2.57 (m, 4Н), 2.36 (s, ЗН), 2.33 (q, J= 7.2 Гц, 2H), 1.19 (t, J= 7.2 Гц, ЗН); MS (m/z): [M+H]+ 387.2.
[00401] YK174 ^(3-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-
ил)тио)фенил) циклопропанкарбоксамид
К раствору 128 (20 мг, 0.06 ммоль) и E13N (100 мкл) в 1.5 мл СН2С12 добавляли циклопропанкарбонил хлорид в СН2С12 по капле. После завершения (согласно результатам ТЖХ) реакции, реакционную смесь гасили добавлением холодного МеОН. Удаляли растворитель при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (MeOH-NH3 (7N) 2-10% в СН2С12) с получением 16 мг (70%) 130. 11 ЯМР
(500 МГц, CDCb) 5 7.61 (s, Ш), 7.31 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.20 (br s, 1H), 6.88 (m, 2H), 6.55 (m, 1H), 5.95 (d, J= 8.0 Гц, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.37 (m, 4H), 2.29 (m, 4H), 2.09 (s, 3H), 1.25 (m, 1H), 0.78 (m, 2H), 0.57 (m, 2H); 13C ЯМР (125 МГц, CDCb) 5 176.4, 172.1, 162.7, 158.4, 147.5, 139.3, 138.7, 129.2, 122.2, 117.5, 116.8, 99.0, 54.6, 53.6, 46.1, 44.7, 13.9, 7.9; MS (m/z): [M+H]+398.3.
[00402] YK175 (131) 2-амино-]Ч-(3-((2-метокси-6-(4-метилпиперазин-1-
ил)пиридин-3-ил)тио)фенил)ацетамид
К раствору 128 (20 мг, 0.06 ммоль) в CH2CI2 (1 мл) добавляли Трет-бутоксикарбонил-глицин (10.6 мг, 0.06 ммоль), DMAP (1.0 мг), Et3N (10 мкл) и EDCI (11 мг, 0.06 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (СНгСЬМеОН-МЬ (7N), 1:0 to 85:15) с получением 26 мг (90%) осадка. К нему добавляли 5 мл 10% TFA-CH2CI2 и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель испаряли при пониженном давлении и очищали осадок методом колоночной хроматографии (CH2Cb:MeOH-NH3 (7N), 1:0 to 85:15) с получением 16 мг (85%) 131. 1Я ЯМР (500МГц, CDCb): 5 9.26 (br s, Ш), 7.55 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.47 (d, J= 8.0 Гц, Ш), 7.28 (s,lH), 7.15 (t, J= 8.0 Гц, Ш), 6.82 (d, J= 8.0, 1H), 6.21 (d, J= 8.0 Гц, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.62 (m, 4H), 3.42 (s, 2H), 2.54 (m, 4H), 2.36 (s, ЗН); 13C ЯМР (125 МГц, CDCb): 5 170.6, 162.7, 158.4, 147.5, 139.4, 138.0, 129.3, 122.5, 117.5, 116.5, 99.4, 98.9, 54.6, 53.6, 46.0, 45.1, 44.7; MS (m/z): [M+H]+ 388.3.
Пример 2: Создание гомологичной модели Hsp70 человека (hHsp70) и конструирование YK5
[00403] Для конструирования ингибиторов/модуляторов Hsp70 применяли
различные вычислительные подходы, такие как гомологичное моделирование, картирование сайтов и получение укороченных вариантов белка для определения трёхмерной модели Hsp70 человека (hHsp70), идентификации возможных сайтов связывания и оценки взаимодействия белок/лиганд, соответственно. Информация по кристаллической структуре полноразмерного белка hHsp70 отсутствует, а теоретическую трёхмерную структуру (гомологичную модель) hHsp70 планировалось создать. Как описано Wallner и др., наиболее важным фактором в создании гомологичной модели является правильность выравнивания и выбор наилучшей структурной матрицы. Три матричных кристаллических структуры, обладающие высокой индентичностью последовательностей (более чем 50%) с исследуемым рецептором, были выбрвны для построения гомологичной модели белка hHsp70. N-Концевая кристаллическая структура
белка hHsp70 (PDB ID: 1S3X) была наилучшей доступной матрицей для N-концевых аминокислот (Metl-Gly382, hHsp70). Кристаллическая структура для субстрат-связывающего домена (SBD) hHsp70 отсутствует, поэтому структура Hsp70 (DNAK) из Е. coli (PDB ID: 2КНО), обладающая 62% сходством с hHsp70, была выбрана в качестве матрицы для моделирования сегмента SBD (Asp385-Gln538, Е. coli.; Asp383-Ala541, hHsp70). Наконец, кристаллическая структура Hsp70 из С. elegans (PDB ID: 2Р32) была использована в качестве матрицы для С-концевых аминокислот (Leu543-Ser614, С. elegans; Leu542-Gly613, hHsp70). Для С-концевых аминокислот (614-641) hHsp70 нет матричной структуры, поэтому их не моделировали. Как было предложено Chothia и Lesk, после выбора матрицы, выравнивание матрицы и способность к обнаружению структурных сходств на основе последовательности аминокислот определяют общее качество модели. Остатки аминокислот hHsp70 были выравнены. Wallner и др сообщил, что для последовательностей близкородственных белков с высоким сходством выравнивание зачастую является оптимальным. В нашем исследовании, 606 из 613 остатков аминокислот были идентичны трём выбранным матрицам (PDB Ш: 1S3X, PDB Ш: 2КНО, PDB Ш: 2Р32), что указывало на оптимальное выравнивание. После выравнивания боковых цепей остатков, аминокислоты, отсутствующие в матричной структуре (PDB ID: 2КНО), такие как Lys384, Ser385, Glu386, Asn387 и Arg509 (hHsp70), успешно добавили с использованием автоматической или полуавтоматической процедуры "in Prime". Полученная таким образом гомологичная модель содержала внутриклеточные и внеклеточные петли, базирующиеся на структуре матрицы (за исключением концевых участков). Все участки петель (33 петли) оптимизировали с использованием инструмента для улучшения структуры петли "in Рпте" для получения устойчивых конформаций петель. В конце концов, полученную модель белка подвергали обработке с помощью мастер-программы для получения белка с последующей тщательной минимизацией энергии для уменьшения нежелательных контактов.
[00404] Ранее Wallner и др. показали, что среднеквадратичное отклонение между
матрицей и смоделированным белком является хорошим методом оценки. Суперпозиция атомов скелета в NBD гомологичной модели и структуре матрицы (PDB Ш: 1S3X) давало среднеквадратичное отклонение в 1.01 А и хороший индекс выравнивания 0.05, что подтверждало нашу модель.
[00405] Указанная гомологичная модель, полученная таким образом, содержит 613
остатков аминрокислот и имеет два главных домена, NBD и SBD, соединённых вместе с помощью гибкого линкера (Фиг. 2а). N-концевой домен АТФазы обнаруживает актиноподобную складку гексоеиназы и обладает двумя глобулярными выступами, I
(субдомены IA и Ш) и II (субдомены ПА и ПВ). Двенадцать а-спиралей и шестнадцать Р-складчатых слоев составляют NBD, что соответствует кристаллическим структурам NBD. С-концевой SBD может быть также разделён на два функционально значимых субдомена: сэндвич из двух четырёхцепочечных Р-складчатых слоя содержащий пептид-связывающий субдомен (SBD-P) и субдомен их четырёх а-спиралей (SBD-a), также называемый крышечный домен. При отсутствии полноразмерной кристаллической структурыэтого терапевтически важного шаперона, эта гомологичная модель является полезной для определения участков связывания для создания ингибиторов Hsp70 с помощью таких методов, как дизайн на основе структуры и виртуальный скрининг, но не ограничивается ими.
[00406] Предсказание участков: для стратегии, основанной на структуре,
потенциальные участки связывания hHsp70, доступные для взаимодействия с малыми молекулами ингибиторов, были идентфицированы с помощью прогаммы SiteMap. SiteMap принимает во внимание нескоько физических параметров, таких как размер, степень закрытости/открытости, плотности, силы Ван дер Ваальса, характеристики гиброфобности/гидрофильности, и возможность образования водородных связей, для определения потенциального участка. Она делает это, объединяя вместе характерные черты, которые наиболее вероятно вносят вклад во взаимодействия белок/лиганд или белок/белок.
[00407] Программа SiteMap проверяет всю структуру и классифицирует участки.
Значительный вклад в ранжирование вносят размер указанного участка (измеренный по вычисленному значению показателя участка), относительная открытость участка (измеренная на основании свойств экспонированности и замкнутости) и компактность участка (измеренная в терминах контактов, и гидрофобного и гидрофильного характера участка). Для эффективного обнаружения доступных участков для связывания в Hsp70, программу SiteMap сконфигурировали для выдачидесяти участков. Было отмечено, что участки с низким рейтингом, такие как участки 6-10, располагались на поверхности (не показаны на Фиг. 2). Артефактом рассчётной модели является то, что были найдены участки, соответствующие внешней поверхности и имеющие при этом низкий S- рейтинг. Поэтому программу SiteMap сконфигурировали для выдачи пяти наилучших возможных участков связывания в белке hHsp70, полученном в гомологичной модели. Эти пять участков имели S-рейтинг 0.80 или выше, в соответствии с рекомендациями Т. A Halgreen для обнаружения вероятных участков связывания.
[00408] Другим важным критерием для определения участка связывания
способность участка связываться с лекарственным средством, как описано с помощью D
рейтинга в программе SiteMap. Это включает показатели, которые способствуют связыванию с лигандом, такие как отвечающий требованиям участок и выделение из растворителей, но исключает их по показателям, которые не поддерживают повышение гидрофильности. В соответствии с Т. A. Halgreen, участки подразделяют на неподвержденные действию лекарственного средства, плохо подвергающиеся действию лекарственного средства и подвергающиеся действияю лекарственного средства. Участки, неподвержденные действию лекарственного средства, являются сильно гидрофильными, обладают сравнительно малым размером, с небольшой характеристикой гидрофобности или с её отстутсвием, и характеризуются значением D-рейтига ниже 0.83. Участки, плохо подвергающиеся действию лекарственного средства, в значительной степени являются гидрофильными для того, чтобы требовалось назначение предшественника лекарственного средства, но они менее гидрофобные, чем типичные участки связывания, и определются значением D-рейтинга между 0.83 и 0.98. Участки, подвергающиеся действия лекарственного средства, обладают рациональным размером, закрытостью и гидрофобностью, обычной гидрофильностью и характеризуются значением D-рейтинга выше 0.98.
[00409] Среди пяти участков (участки 1-5), предсказанных программой SiteMap
(Фиг. 2), у участков 3, 4 и 5 было малое значение показателя участка, углубление было маленьким, а сами участки - не внушающими доверие. В результате сложно получить достаточную связывающую аффинность для этих участков. Участок 2, включающий жёлоб, занятый эндогенными лигандами АТФ и АДФ, обладает подходящим размером (значение показателя участка: 178), и достаточно высокий S-рейтинг. При визуальном изучении участок 2 характеризуется относительно малым жёлобом, и главным образом состоит из гидрофильных аминокислот. В отсутствие подходящих участков для гидрофобных взаимодействий, его потенциально труднее подвергнуть воздействию, что иллюстрируется относительно низким D-рейтингом (0.91). Участок 1, расположенный в расселине вне домена, связывающего АТФ/АДФ, и окружённый субучастками lb и ПЬ, больше по размеру (значение показателя участка: 385), обладает большим жёлобом и состоит из гидрофильных и гидрофобных аминокислот, что делает его участком, более подверженным действию лекарственного средства (D-рейтинг: 1.00). Учитывая совместно S- и D-рейтинги, размер, сбалансированные гидрообные и гидрофильные характеристики, свойства экспонированности и закрытости было предсказанно, что участок 1 является наиболее подверженной действию лекарственнго средства полостью, и поэтому внимание было обращено на этот новый аллостерический участок 1 для дальнейшего конструирования ингибиторов Hsp70.
[00410] Для определения свойств всего участка были получены гидрофобные и
гидрофильные карты участков 1 и 2. Эти карты принимают во внимание участок целиком, в отличие от поверхностной модели, когда принимаются во внимание только самые близкие атомы рецептора. Эти карты показывают форму этого участка в деталях и предлагают информацию о протяжённости гидрофобных и гидрофильных участков. Участок 2 главным образом гидрофильный с небольшими гидрофобными характеристиками. В отличие от него, у участка 1 сбалансированные характеристики, в нём присутствуют как гидрофобные, так и гидрофильные участки. Эти результаты также подтверждают большую подверженность участка 1 действию лекарственного средства.
Взаимодействия белок/лиганд и конструирование ингибиторов:
[00411] К настоящему времени известно всего несколько молекул, модулирующих
активность Hsp70. Идентифицировано значительное количество молекул, воздействующих на SBD, включая 15-дезоксиспергуалин и ацилбензамиды жирных кислот. Пептид с малым молекулярным весом, сконструированный для связывания с SBD ьактериального Hsp70, стимулировал его активность АТФазы. Среди агентов, оказывающих воздействие на NBD, присутствуют дигидропиримидины и миметики нуклеотидов. Дигидропиримидигы были обнаружены при скрининге по измерению активности АТФазы в Hsp70 из дрожжей. Идентификация конкурентных ингибиторов АТФ подтверждалась довольно сложно. Williamson и др. описали аналоги, созданные на основе аденозина для связывания в "кармане" АТФазы. Hsp70 принадлежит к актиноподобному семейству АТФаз, между белками которых существует высокая структурная гомология, в особенности в их домене АТФазы. В результате, связав эти данные вместе с плохими характристиками участка в отношении лекарственного средства, определёнными как описано выше, остаётся неясным, является ли получение прямых конкурентов АТФ наиболее предпочтительным подходом для Hsp70. Поэтому был выбран участок 1 для воздействия.
[00412] Фигура 21: Выравнивание последовательности полноразмерного белка
hHsp70 (номер доступа: Р08107), N-конца белка hHsp70 (PDB ID: 1S3X), структурной части Е. coli Hsp70 (DNAK) (PDB ID: 2KHO) и С. elegans (PDB ID: 2P32). Аннотированные остатки подчёркнуты, а консервативные остатки обозначены одинаковым цветом. Последовательности, определяющие аллостерический карман участка 1, показаны в клетках. Важные аминокислоты в этих последовательностях взаимодействуют с лигандами, сконструированными в настоящем изобретении.
[00413] Для идентификации ингибиторов Hsp70 специфичного участка 1 были
сконструированы и синиезированы несколько химических библиотек неисследованного химического набора, подходящих для взаимодействия с его структурными бороздками. Участок 1 также содержит потенциально реакционноспособный цистеин, Cys267, и для получения преимущества от потенциального ковалентного взаимодействия, акриламидная функциональная группа (NH-C (=0)-СН=СН2) была введена в сконструированную химическую библиотеку. Успешным образом взаимосвязанные дизайн и проверка, как показано на Фиг. 3, привели к идентификации YK5 (Фиг. 2). Для подтверждения связывания YK5 с участком 1 и для изучения потенциальных взаимодействий лиганд/белок, соединение YK5 присоединяли к каждому из пяти предсказанных участков с помощью программы SiteMap. Изучение взаимодействий связывания, ориентация соединения и значения параметра Glidescore позволили заключить, что YK5 наиболее предпочтительно связывается с участком 1. Наилучшый вариант связывания, полученный путём присоединения YK5 в участки 1 показан на Фиг. 2с.
[00414] Для дальнейшего подтверждения предложенных взаимодействий
связывания, YK20, для которго была предсказана низкая афиинность к Hsp70, присоединяли к аллостерическлму участку связывания 1. В отличие от YK5, все положения при присоединении YK20 были ориентированны вовне от связывающего кармана и имели более плохой G-рейтинг. Для определения потенциальной причины такой ориентации, YK20 накладывали на YK5, связанный с hHsp70 в гомологичной модели, для того, чтобы показать, что у YK20 наблюдается потенциальное стерическое затрудстолкновение, ответственное за его более слабую ингибиторную активность. Пример 3: Характеристика новых модуляторов.
[00415] Для идентификации ингибиторов Hsp70 синтезировали несколько
химических библиотек неисследованного химического ряда, сконструированного для взаимодействия со структурными бороздками N-концевого участка (Фиг. 2, секция а). Этот домен содержит два участка, потенциально способных к воздействию лекарственным средством. Одним из них является участок связывания нуклеотида (показан как участок 2 на Фиг. 2, секция а), имеющий главным образом гидрофильный характер, и поэтому потенциально более трудный для воздействия. Второй участок больше и является потенциально более способной к связыванию с лекарственным средством борозкой, расположенной в участке расщелины вне нуклеотид-связывающего домена и фланкированной субучастками lb и ПЬ (показан как участок 1 на Фиг. 2, секция a). Hsp70s также содержит несколько потенциально реакционноспособных цистеинов, два из которых расположены в окрестностях двух участков, потенциально способных к воздействию лекарственным средством (Фиг. 2, секция а). Для получения преимущества от этих остатков, акриламидная функциональная группа была введена в несколько сконструированных производных с целью проверки возможного образования ковалентной связи между ингибитором и остатками цистеина при связывани с белком (Фиг. 2, секция
a) . Существует прецедент использования акриламидной "боеголовки" при разработке необратимых ингибиторов EGFR и HER2, таких как CI-1033 (Канертиниб) (Фиг. 2, секция
b) и ЕКВ-569 (Пелитиниб), соединений, проходящих клинические испытания против рака. EGFR и HER2, подобно Hsp70s, содержат реакционноспособный цистеин в их регуляторном участке.
[00416] В соответствии с одной рабочей гипотезой в отношении раковых клеток о
том, что ингибиторы Hsp70 будут давать фенотипический результат ингибиторов Hsp90 при оттсутствии обратной индукции Hsp70, эти агенты были проверены в фенотипической методике, разработанной ранее в лаборатории Chiosis для ракового Hsp90. Эти методики были сконструированы для чтения клеточных отпечатков при ингибировании Hsp90, таких как деградация онкоклиента Hsp90 в релевантном генетическом фоне и ассоциированное ингибирование роста клеток опухоли. Индукцию Hsp70 анализировали для того, чтобы исключить те соединения, которые активировали HSF-1. Для того, чтобы удостовериться, что при фармацевтически релевантных концентрациях соединения вероятно селективно действуют через Нзр70-опосредованый механизм, отбирали только те соединения, которые были активными при сходных концентрациях во всех методиках. Связывание с Hsp90 также проверялидля того, чтобы исключить прямые ингибиторы Hsp90.
[00417] Несколько объектов из новой группы, 2,5'-тиодипиримидины, являющиеся
частью большей группы, обозначенной здесь как YK, были активными на основании этих критериев (Фиг. 2, секция а). Методология синтеза, использовавшаяся для создания группы YK представлена на схемах Примера 1..
[00418] Одним из производных, идентифицированных в нашей модели с помощью
поисковой стратегии, был YK5 (Фиг. 2, секция Ь), синтез которого описан в этом документе.
[00419] Как было доказано на клетках рака молочной железы SKBr3, YK5, но не
контрольное производное YK20 (20 мкМ), которое связывается с мишенью с меньшей
аффинностью, индуцировало деградацию киназ HER2, Raf-1 и Akt, при этом про все три
известно, что они являются белками Hsp90 онкологических клиентов в этом клеточном
контексте (Фиг. 3, секция а). Более того, неонкогенная тирозиновая протеинкиназа CSK,
родственная c-Src тирозиновая киназа, не подвергалась действию агентами YK и прямого
ингибитора Hsp90 PU-H71 (Фиг. 3, секция a). YK5 также индуцировал апоптоз в этих
клетках, что доказано по расщеплению PARP (Фиг. 3, секция а). В согласии с
предыдущими сообщениями о прямых ингибиторах Hsp90 и наблюдениями в настоящем
эксперименте с PU-H71 (Фиг. 3, секция а), Р-актин и совместный с Hsp90 шаперон р23,
белки, чьи уровни активности не чувствительны к ингибированию Hsp90, оставались
неизменными при добавлении к клеткам соединений YK (Фиг. 3, секция а).
[00420] Индукция Hsp70 по принципу обратной связи была недетектируемой с YK5
при концентрациях, при которых он разрушал механизм Hsp90 онкологичнского клиента (Фиг. 3, секции а и Ь). В то же время, в этих клетках прямые ингибиторы Hsp90 эффективно активировали ответ на тепловой шок, что доказано индукцией Hsp70 (Фиг. 3, PU-H71 в секции а, и PU24FC1 в секции Ь). В отличие от прямых ингибиторов Hsp90 PU-Н71 и PU24FC1, производные YK оказались неспособны конкурировать с флюоресцентно меченым производным гелданамицина, GM-СуЗВ, за связывание с Hsp90 (Фиг. 3, секция с).
[00421] В клетках рака молочной железы SKBr3 деградация белков онкоклиентов
Hsp90 под действием YK5 происходила при повышающихся низких микромолекулярных
концнтрациях (Фиг. 3, секция а), что также приводило к ингибированию пролиферации
клеток (Фиг. 3, секция d), намекая на то, что в этом диапазоне концентраций
биологическая активность YK5 вероятно проявлялась через ингибирование
фнукционального механизма Hsp90, потенциально через механизм связывания с Hsp70.
[00422] YK5 селективно связывается с Hsp70 в раковых клетках. Для
подтверждения того, что Hsp70 отвечает за активность f YK5 было создано биотинилированное производное YK5, YK55 (Фиг. 4, панель а). Синтез YK55 раскрыт в
данном описании. В других вариантах осуществления предусмотрено биотинилирование других соединений и применение указанных биотинилированных соединений в соответствии с описанными здесь способами.
[00423] Добавление YK55, но не D-биотина, к клеткам, выделенным с
использованием страптавидиновых гранул, приведо к идентификации основной полосы 70 КДа (Фиг. 4, панель Ь), с которой дозозависимым образом конкурировал растворимый YK5 (Фиг. 4, панель с). Анализ продуктов расщепления пептида, полученных из этой полосы, тандемным методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC/MS/MS) подтвердил присутствие двух индуцибельных изоформ Hsp70 (Hsp70-1 и Hsp70-6), а также Hsc70, конститутивной формы Hsp70. Затем их идентичность исследовали методом Вестерн-блот, который показал присутствие Hsp70s, но не Hsp90, в изолятах, полученных с использованием YK55 (Фиг. 4, панель d).
[00424] Для определения того, какая из стадий цикла Hsp70 наиболее чувствительна
к действию YK5, исследовали комплексы коОщаперонов, полученные с использованием УК55-гранул, и сравнивали с идентифицированными с использованием aHTH-Hsp70s антитела (Фиг. 4, панель е, слева). YK55-гранулы предпочтительно захватывали Hsp70 в комплексе с его активированными ко-гаперонами Hsp40 и Hsp 110, в то время как изоляты, полученные с использованием антител, не содержали фактора обмена нуклеотидами Hsp 110. Поскольку антитело ВВ70 к белкам Hsp70 способно истощать клеточные уровни Hsp70 и Hsc70, но слабо захватывает белки Hsp70, связанные с ко-шаперонами (т.е. HspllO, было возможно дополнительно исследовать специфичность УК55-гранул в отношении белков Hsp70 (Фиг. 4, панель е, справа). Конкретно, при инкубировании с экстрактами, истощенными по Hsp70 с использованием ВВ70, но не с экстрактами, истощение Hsp70 в которых осуществляли с использованием обычного IgG, YK55-гранулы не продемонстрировали значительного взаимодействия с HspllO, подтверждая, что взаимодействие YK55 с HspllO происходит через опосредуемый белками Hsp70 комплекс. Растворимый YK5 дозозависимым образом конкурировал с YK55-гранулами за связывание с комплексами Hsp70 с (Фиг. 4, панель f).
[00425] После инкубации клеток с YK55, наблюдали сильное и селективное
взаимодействие, не поддающееся разрушению промывками растворами с высоким содержанием соли (1М NaCl), между агентом и Hsp70s (Фиг. 4, панель b). YK5 содержит акриламидную функциональную группу, которая может образовывать ковалентную связь после связывания белка. Для соединений, для которых важно необратимое связывание, значение 50% ингибирующего связывания (IC50) состоит из двух компонентов, один из которых отражает обратимое связывание, а второй последующее образование
ковалентной связи, и зависит от степени этого ковалентного взаимодействия. В самом деле, инкубация клеток в течение 1 -4 часов с YK55, привела к существенному увеличению количества иммобилизованной полосы 70 КДа (Фиг. 5, панель а), которая, как предположили по результатом блотирования с антителами к биотину и Hsp70, содержит YK55-Hsp70 (Фиг. 5, панель Ь). В этих условиях не наблюдали взаимодействия или наблюдали лишь слабое взаимодействие YK55 с Grp75 и Grp78, являющимися членами семейств Hsp70 митохондрий и эндоплазматического ретикулума, соответственно (Фиг. 5, панель Ь).
[00426] Элюирование белковых комплексов с УК55-стрептавидиновых гранул в
условиях, достаточно жестких для разрушения самых прочных известных нековалентных связей, подтвердило, что действительно при инкубировании клеток с YK55образовывались ковалентно связанные YK55-Hsp70 (Фиг. 5, панель с). Расщепление трипсином связанных с YK55 форм Hsp70, но не изолятов с антителом к Hsp70 ВВ70, выявило два пика m/z при значениях 1867.915 и 1372.649 единиц атомной массы (Фиг. 5, панель d). Эти пики соответствуют YK55 (820.34 Да), присоединенному к LRTAC267ERAK, и YK55 бел биотина (YK55 - биотин) (594.26 Да), присоединенному к ТАС ERAK, соответственно. При восстановлении и алкилировании изолятов YK55-Hsp70No с использованием бета-меркаптоэтола и акриламида, соответственно, не наблюдали мечения этих пептидов. Провели секвенирование LRTAC267(YK55)ERAK методом масс-спектрометрии для подтверждения идентичности последовательности (данные не показаны).
[00427] Последовательность TACERAK консервативна в цитолитических Hsp70
человека, но разходится в Grp75 и Grp78, что согласуется с отсутствием у них способности к взаимодействию с YK55 в аналогичных условиях (Фиг. 5, панель Ь). Совместно эти данные указывают на специфическую дериватизацию белков Hsp70 под действием YK55.
[00428] YK5 ингибирует биохимические функции белков Hsp70. Затем
исследовали связывание YK5 с белками Hsp70 для того чтобы определить, влияет ли он на основные виды биохимической активности, в частности на повторную укладку денатурированных белков-клиентов и его АТФазную активность. Активность Hsp70 стимулируется белками Hsp40 и факторами обмена нуклеотидами, такими как HspllO. У человека несколько цитолитических Hsp40s, в том числе Hdjl, DJA1, DJA2 и DJA4, и недавно появились сообщения, что DJA1 обеспечивает наиболее выраженную стимуляцию АТФазной активности Hsc70, в то время как DJA2 наиболее эффективен в стимуляции повторной укладки пептидного субстрата Hsc70 - люциферазы светлячка.
YK5 дозозависимым образом ингибировал повторную укладку люциферазы очищенными Hsc70 и DJA2 (Фиг. 6, панель а) и частично ингибировал стимулированную АТФ-азную активность Hsc70 (Фиг. 6, панель Ь). Поскольку связывание YK5 с N-концевым доменом Hsp70 не блокирует АТФазный сайт, его влияние вероятно обусловлено нарушением необходимой координации между N- и С-концевым доменами. YK5 ингибировал основные биохимические функции Hsp70 в условиях анализа, которые не способствуют образованию ковалентной связи, что позволяет предположить, что помимо возможности ковалентного взаимодействия YK5 структурно соответствует активному сайту этой мишени.
[00429] YK5 ингибирует образование активных комплексов
Н8р70/Н8р90/онкобелок. Предположили, что Hsp70 способствует функционированию мульти-шаперонного комплекса Hsp90 и действует на начальных этапах образования этого комплекса, "загружая" белок-клиент в комплекс Hsp90 через промежуточный белок НОР. Клиентами Hsp90 являются несколько участвующих в развитии и поддержании злокачественности белков, которые играют важные роли в развитии и прогрессировании патогенной трансформации клеток. Помимо онкобелков Hsp90 регулирует фактор трансрипции теплового шока -1 (HSF-1), являющийся основным регулятором реакии теплового шока на повреждения клетки. Hsp90 связывается с HSF-1 и поддерживает этот фактор транскрипции в мономерном состоянии. После обработки клеток ингибитором Hsp90 или элементами, вызывающими клеточный стресс, шаперон диссациирует от HSF-1, благодаря чему последний получает способности тримеризоваться, проникать в ядро и связывать компоненты реакции теплового шока, присутствующие в промоторах белков теплового шока, включая Hsp70 и его активтор Hsp40.
[00430] YK5 дозозависимым образом нарушает формирование комплексов Hsp90
(Фиг. 6, панель с, левый и средний рисунки), не влияя на экспрессию комплексных шаперонов (Фиг. 6, панель с, справа). Ингибирование формирования комплекса Hsp90 под действием YK5 приводило к высвобождению и дестабилизации онкобелков (Фиг. 6, панель d), но не оказывало влияния на активацию HSF-1 (Фиг. 6, панель е). В соответствии с тем, что не наблюдали дестабилизации комплекса Hsp90/HSF-1 при воздействии YK5, только ингибиторы теплового шока или прямые ингибиторы Hsp90, но не YK5, вызывают образование триммеров HSF-1 (Фиг. 6, панель е). Эти результаты обеспечивают дополнительное подтверждение того, что транскрипционная компетентность HSF-1 подавляется при связывании с Hsp90, но не с комплексами, содержащими белки Hsp70. Они также демонстрируют, что регуляторную активность аппарата Hsp90 в отношении онкобелков можно отличить от его влияния на по HSF-1
ингибированию Hsp70 ближе к началу каскада. Соответственно, YK5 становится химическим инструментом для изучения биологического влияния ингибирования аппарата Hsp90 в условиях химического выключения HSF-1. Очевидны преимущества такого вмешательства над генетическими манипуляциями с HSF-1, поскольку оно обеспечивает возможность временного и пространственного анализа клеточного окружения. Изменения комплексов Hsp90 под воздействием YK5 происходят при возрастающих низких микромолярных концентрациях (Фиг. 6с, в середине), при которых также происходит разрушение онкобелков - клиентов (Фиг. За). В совокупности YK5 ингибировал рост клеток SKBr3 и разрушал онкобелок HER2, являющийся клиентом Hsp70/Hsp90, в концентрациях, в которых он разрушал формирование комплексов Hsp70/Hsp90, что указывает на то, что в этом диапазоне концентраций биологическая активность YK5 частично опосредовалась разрушением функционального аппарата Hsp90. Разрушение комплекса аппарат Hsp90 /онкобелок под действием YK5 было связано с дестабилизацией онкобелка и ускорению его выведения из клетки, на что указывало снижение времени полужизни белка (Фиг. 7Ь) и последующее снижение равновесных уровней этого онкобелка в клетке (Фиг. 7а). Дополнительно подтверждая опосредуемый аппаратом Hsp90 эффект и в согласии с представлении о разрушении белков-клиентов аппарата Hsp90 по протеасомному пути после ингибирования шаперонов ингибиторы протеасом эффективно восстанавливали устраняли разрушение онкобелков под действием YK5, в то время как для других протеолитических белков, такой эффект обнаружен не был (Фиг. 7с).
[00431] В совокупности эти результаты демонстрируют, что биологическая
активность YK5 и других родственных соединений согласно настоящему изобретению в отношении белков-онкоклиентов по меньшей мере частично обусловлена способностью этих соединений влиять на формирование промежуточного комплекса аппарата Hsp90, приводя к неправильной обработке белков-онкоклиентов Hsp90 в клетке и приводя к их последующему разрушению главным образом протеасомами [00432]
Пример 4: Связь структура-активность в группе YK.
[00433] Для дальнейшего подтверждения того, что абсолютная зависимость
значения IC50 от реакционной способности ингибитора-YK5 на может быть полностью отнесена на счет компонента IC50, отражающего обратимое (нековалентное) связывание, было проведено исследование связи структура-активность. В самом деле, при
восстановлении акриламида, как вУКЗО, до этиламида, как в YK31 (Фиг. 8а) сохраняется обусловленный Hsp70 -механизм действия, и биологическая активность снижается всего в 30-раз (Фиг. 8а и не показанные данные). Дополнительно, сохранение акриламида при переносе цепи этиленгликоля из положения R1, как в YK54 и его биотинилированном варианте YK55, в полжение R2, как в YK57 и его биотинилированном варианте YK56, приводят к снижению биологической активности примерно в 20-25 раз (Фиг. 8Ь и с). В некоторых вариантах осуществления активность соединений согласно настоящему изобретению, обладающих более низкой биологической активностью, чем у других соединений согласно настоящему изобретению, может все же быть достаточной для достижения ингибирования или связывания выбранных ферментов или белков с пригодными концентрациями IC50 или константами связывания.
[00434] В совокупности эти данные указывают на то, что взаимодействие YK5 и
других родственных соединений согласно настоящему изобретению с белками Hsp70 состоит из двух компонентов, один из которых отражает обратимое связывание, а другой последующую ковалентную модификацию цистеина.
[00435] Хотя существуют сомнения, связанные с тем, что акриламидная группа
может неселективно реагировать с нецелевыми белками, что обуславливает плейотропный эффект, инкубация клеток с YK55 приводила к селективному образованию комплексов YK55-Hsp70 (Фиг. 4 и 5). Дополнительно, известно, что агенты, вызывающие неспецифическое окисление цистеинов, повышают степень неправильной укладки белка, что приводит к последующей защитной активации реакции теплового шока. Этот феномен не наблюдался для YK5. В физилогических концентрациях порядкаЮ мкМ YK5 также были инертным в тесте с 359 киназами (Фиг. 6f). Эти результаты подтверждают, что в исследованных концентрациях YK5 является специфическим модулятором Hsp70 и, соответственно, подходящим средством для исследования фармакологического ингибирования белков Hsp70 в биологичесикх системах in vitro.
[00436] Исследования, направленные на обнаружение лекарственны средств,
обычно не используют молекулы, проявляющие неконкурентную кинетику, что является понятной мерой предосторожности с учетом того, что с необратимым ингибированием связаны возможные токсические события. Тем не менее, по меньшей мере 25 агентов, проходящих клинические испытания в качестве противораковых и антимикробных агентов, являются ковалентными модификаторами белков. Можно возразить, что в случае необратимо связывающихся агентов не так необходимо поддержание концентрация лекарственного средства в системном кровотоке, и, соответственно, после достижения ингибирования мишени эффект будет сохраняться, пока не синтезируется новый белок
мишень. Кроме того, в случае белков с относительно низкой аффинностью к АТФ, таких как белки Hsp70, можно утверждать, что в присутствии высоких клеточных концентраций АТФ необратимой ингибирование мишени является терапевтическим преимуществом. В совокупности эти наблюдения позволяют предположить, что если баланс между пресистемным метаболизмом и достаточной направленной доставкой и ингибированием достигается за счет ограниченной токсичности, необратимые ингибиторы могут играть заметную роль с противораковой терапии.
[00437] В случае YK5 наши данные демонстрируют, что обратимые ингибиторы
сохраняют опосредуемый Hsp70 механизм, что указывает на то, что акриламидная группа
может быть удалена полностью, и что эффективные обратимые ингибиторы могут быть
идентифицированы по повышению энтальпии связывания. В самом деле, другие варианты
настоящего изобретения обеспечивают соединения согласно настоящему изобретению,
взаимодействующие с Hsp70 в обратимом режиме (Фиг. 9, Фиг. 10 и Фиг. 11).
Добавление этих соединений согласно настоящему изобретению к некоторым раковым
клеткам привело к разрушению соответствющих белковых онкоклиентов и вызывало
апоптоз, аналогично действию YK5. Соответственно, эти варианты осуществления,
демонстрируют, что важная активность, описанная в настоящем тексте, может быть
достигнут с использованием соединений согласно настоящему изобретению, которые
взаимодействуют с Hsp70 по обратимому или необратимом типу. В одном варианте
осуществления эти соединения взаимодействуют с описанным выше сайтом 1.
[00438] Также сообщалось об исследованиях, направленных на выяснение
биологического значения ингибирования Hsp70 низкомолекулярными соединениям. Результаты указывают на то, что белки Hsp70 не являются такими легкими мишенями для направленного воздействия, как Hsp90. За последнее время было раскрыто несколько модуляторов Hsp70, но эти соединения имеют низкую эффективность и их плейотропное влияние на физиологию клетки не явно. Об их взаимодействии с изоформами Hsp70 известно мало, кроме того, эти соединения основаны на остовах, имеющие ограниченные лекарство-подобные характеристики. Далее, удивительно, но для этих ингибиторов наблюдали очень низкий апоптотический ответ, либо вообще не наблюдали апоптотического ответа Hsp70, что парадоксально, если учесть, что Hsp70 был описан как белок, обладающий мощной антиапоптотической активностью.
[00439] Дополнительно, генетические манипуляции с Hsp70 дают противоречивые
результаты. Havik с соавт. сообщали о снижение экспрессии одного или обоих из Hsp70 и Hsc70 в двух линиях клеток рака груди, SKBr3 и MCF-7, снижая жизнеспособности клеток, не демонстрировало способности к снижению активности шаперонного комплекса
Hsp90/Hsp70. С другой стороны, одновременная направленная трансфекция hsc70 и hsp70 ингибировала функции Hsp90 в клетках рака толстой кишки НСТ116. Nylansted с соавт. обнаружили, что истощение только Hsp70 приводило к уничтожению ксенографтов глиобластомы и карцином толстой кишки и груди, тогда как в клетках рака предстательной железы другие авторы наблюдали только сенсибилизацию к противораковым агентам.
[00440] В отличие от указанных выше стратегий, описанное здесь исследование
обеспечивает YK5 - двойной селективный модулятор Hsp70 и Hsc70, разработанный на остове, потенциально пригодном для применения в качестве лекарственного средства, который пригоден для широкого спектра медицинских приложений с использованием химических веществ. Далее, в отличие от описанных выше стратегий YK5 и родственные соединения согласно настоящему изобретению продемонстрировали выраженные антипролифератичные свойства, на что указывают многие описанные здесь количественные показатели, и при этом нетоксичны для нормальных клеток..
Пример 5: Фармакологическое модулирование Hsp70 затрудняет проявление основных признаков злокачественности.
[00441] Трансформация нормальных клеток в злокачественные представляет собой
многостадийный процесс, требующий накопления ряда генетических изменений, влияющих на ключевые регуляторные процессы в клетке. Hanahan и Weinberg описали шесть основных фенотипических признаков, необходимых для развития полностью злокачественного фенотипа, называемых "шестью отличительными признаками" рака. Для каждого отличительного признака был идентифицирован по меньшей мере один белок-клиент механизма Hsp90, обладающий способностью регулировать этот процесс, и прямые ингибиторы Hsp90 обладают способностью влиять на все шесть указанных признаков. После разработки регулятора Hsp70 была исследована роль Hsp70 в механизме Hsp90 в отношении отличительных признаков рака.
[00442] Раковые клетки характеризуются аберантной пролиферацией. Некоторые
клиенты механизма Hsp90, такие как Akt и Raf-1, являются основными компонентами пути, необходимого для роста и выживания опухолей, и в большинстве опухолей Hsp90 является их регулятором. Дозозависимое разрушение и инактивацию этих универсальных молекул, направляющих развитие опухоли, наблюдали после добавления YK5 и родственных соединений к раковым клеткам, включая клетки рака груди SKBr3 и MDA-МВ-468, мелкоклеточной карциному легкого NCI-H526 и остого миелоидного лейкоза MOLM-13 (Фиг. 3, 7-10 и Таблица 1), что согласуется с участием белков Hsp70 в этих
функциях Hsp90. Другие онко-клиенты Hsp90, специфичные для конкретного злокачественного фенотип, также чувствительны к YK5. В случае линии клеток рака SKBr3, трансформацию обуславливает повышенная экспрессия тирозинкиназы HER2, которая активирует сигнальные пути, стимулирующие рост и выживание клеток. Стабильность HER2 в этих клетках регулируется Hsp90, и ингибирование шаперонов прямыми ингибиторами Hsp90 приводит к разрушению HER2 (Фиг. 3). Мутантный рецептор андрогенов (AR), экспрессируемый в клетках рака предстательной железы LNCaP, и мутантная киназа FLT-3, характерная для острого миелоидного лейкоза и экспрессирующаяся в клетках MOLM-13, являющиеся клиентами механизма Hsp90, также были чувствительны к YK5 и родственным соединениям согласно настоящему изобретению, описанным в данном тексте (Фиг. 10а and 15d). STAT3 и PDK1, активированные при трижды отрицательных опухолях, и STAT5, активированный при лейкозах, также чувствительны к к YK5 и родственным белкам согласно настоящему изобретению, описанным в данном тексте (Фиг. 9-11,15d).
[00443] В соответствии с общим механизмом действия через ингибирование
патогенного комплекса Hsp70/Hsp90 прямые ингибиторы Hsp90: PU-H71 и PU24FC1, так
же как YK5 ингибировали рост всех исследованных раковых клеток, вне зависимости от
происхождения и генетического фона (Фиг. 12а и Таблица 1). Исследовали трижды
отрицательные клетки рака груди MDA-MB-468, SKBr3 HER2+ клетки рака груди, LNCaP
mAR+ клетки рака предстательной железы, клетки острого миелолейкоза MOLM-13 и
Kasumi-1, клетки диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы OCI-Ly7 и клетки
гепатоцеллюлярной карциномы HuH7. YK5 также ингибировал рост ксенографтных
опухолей MDA-MB-468 (Фиг. 12Ь). Концентрации, обеспечивающие ингибирование
роста наполовину (GI50S), полученные для YK5 в раковых клетках were, сильно
коррелировали со способностью этого соединения к разрушению онко-клиентов Hsp90.
Совместно эти результаты дополнительно свидетельствуют о том, что в физиологической
дозе биологическая активность YK5 соответствует ингибированию его мишени, Hsp70.
[00444] Аберрантная пролиферация раковых клеток связана с нарушением
регуляции клеточного цикла, и некоторые молекулярные компоненты перехода по клеточному циклу находятся под контролем механизма Hsp90. Прямые ингибиторы Hsp90 вызывают блокировку клеточного цикла в зависимости от типа клеток, в некоторых клетках, таких как SKBr3, происходит блокировка на стадии Go/Gi, в других, таких как MDA-MB-468, на стадии G2/M. В соответствии с механизмом начеливания аппарата Hsp90, YK5 оказывал в этих клетках аналогичное влияние на клеточный цикл (Фиг. 12с, слева). Эти эффекты были связаны с истощением зависимых от аппарата Hsp90 белков
клеточного цикла, таких как регулирующий переход G2/M белок CDK1 в MDA-MB-468, и
регулирующий Gi -белок циклин D1 в SKBr3 (Фиг. 12с, справа). Более того, эти белки
были обнаружены с Hsp70, изолированным с использованием YK5 (Фиг. 12d).
[00445] Инвазия в прилегающие ткани и метастазирования в отдаленные участки
являются основными признаками злокачественных раковых клеток и являются причиной 90% смертей от рака и человека. Инвазия и метастазирования являются сложными процессами и требуют координированных действий большого количества генов, включая многие киназы. Некоторые белки, участвующие в повышении метастатического потенциала раковых клеток регулируются белком Hsp90, включая путь PI3K/Akt, ключевой сигнальный путь, который направляет инвазию раковых клеток. В обладающих высокой способностью к метастаз ированию клетках рака груди MDA-MB-231, ингибирования этого пути достаточно для снижения инвазивного потенциала клеток. Соответственно, YK5, который снижал клеточные уровни активированной Akt, на что указывало снижение количества Akt, фосфорилированной по Ser473 (Фиг. 12е, вверху), ингибировал способность клеток MDA-MB-231 проникать через матригель (Фиг. 12е, внизу). Совместно эти факты демонстрируют, что фармакологическое модулирование Hsp70 опосредуемого YK5 механизма частично копирует действие прямых ингибиторов Hsp90 в отношении разрушения онкобелков, ингибирования аберрантных пролиферации и клеточного цикла снижения инвазивного потенциала.
[00446] Уклонение от апоптоза является другим важным отличительным признаком
рака. Обработка YK5 вызывает значительную смертность среди раковых клеток, и для определенных линий раковых клеток этот эффект был гораздо выше, чем эффект прямого ингибирования Hsp90 (Фиг. За и 13). В то время как в некоторых клетках , таких как MDA-MB-468, OCI-Ly7 и MOLM-13, значительная и равная по масштабу гибель наблюдается при ингибировании Hsp90 под действием PU24FC1 и ингибировании Hsp70 вод действием YK5, другие, такие как LNCaP, SKBr3 и HuH7, по-видимому являются более селективными в отношении ингибирования appear Hsp70 (Фиг. 12а). в этих клетках наблюдали пониженный эффект гибели клеток при воздействии другими ингибиторами Hsp90 1различных химических типов, что позволяет предположить, что он является специфичным последствием, связанным с мишенью, а не неспецифическим событием, таким как возможный метаболизм ингибитора.
[00447] Чтобы определить, происходит ли гибель клеток под действием YK5 по
механизму апоптоза, клетки обрабатывали YK5 и анализировали влияние на морфологию, а также на некоторые эффекторы и медиаторы апоптоза. (Фиг. 13). Для определения числа клеток, подвергающихся апоптозу, клетки окрашивали акридиновым
оранжевым/бромидом этидия (АО/ЕВ) и под флюоресцентным микроскопом исследовали процент живых, апоптотических (на ранней и поздней стадии) и некротических клеток. Культуры обработанных YK5 клеток демонстрировали значительное и предпочтительное дозозависимое увеличение количества клеток, проявляющих морфологические призначи апоптоза, такие как сморщивание и фрагментация ядра (Фиг. 13а, левая часть и Фиг. 13Ь). Количественный анализ результатов этого эксперимента через 24 часа после обработки показал, что в культуре клеток острого миелоидного Kasumi-1 лейкоза приблизительно 5% клеток испытывали апоптоз и это число увеличивалось до 70% при обработке 10 мкМ YK5 (Фиг. 13а, справа). В идентичных условиях с PU24FC1 наблюдали только 9% апоптотических клеторк (Фиг. 13а, справа). Повышенный по сравнению с прямыми ингибиторами Hsp90 апоптотический эффект YK5 наблюдали в других раковых клетках, таких как клетки рака груди и предстательной железы (на показано). Наиболее чувствительными к YK5 были клетки рака поджелудочной железы . При исследовании в панели, состоящей из клеток Mia-PaCa2, AsPC-1, ВхРСЗ и PL45, YK5 (10 мкМ) вызывал значительный апоптоз после всего 24-48 ч обработки (Фиг. 13Ь и непоказанные данные), что является замечательной находкой, учитывая, высокий анти-апоптотический порог рака поджелудочной железы и его устойчивость к лечению.
[00448] На молекулярном уровне апоптоз под действием YK5 и родственных
соединений согласно настоящему изобретению в раковых клетках демонстрировали по увеличению количества PARP (Фиг. 13с), а также расщепления и активации каспазы-3 (Фигуры 9,10,14). Такое влияния на маркеры апоптоза возникали при концентрациях YK5, что соответствует его антипролиферативной активности и его способности разрушать зависимые от аппарата Hsp90 онкобелки, что указывает на существование общего опосредуемого Hsp70 механизма воздействия YK5 на отличительные признаки рака.
[00449] Пример 6. YK5 индуцирует апоптоз через пути, опосредуемые Hsp70 и
Hsp90. Существуют сведения, что и Hsp70, и Hsp90 ингибируют апоптоз. Hsp70 защищает клетки от большого количества апоптотических и некротизирующих воздействий, и счтитеют, что повышенный уровень Hsp70 способствует выживанию клеток. Вкратце, сообщалось, что Hsp70 индуцирует исчезновение потенциала на митохондриальной мембране, которое предшествует высвобождению из митохондрий цитохромов и фактора индукции апоптоза (AIF). Также было отмечено прямое влияние Hsp70 на цитохром с, Apaf-1 и AIF. Также было зарегистрировано участие Hsp70 в ранней стадии передачи сигнала апоптоза путем подавления стресс-активируемой киназы JNK. Кроме того, было обнаружено, что Hsp70 опосредует защиту от цитотоксичности ФНО, связывает и
модулирует активность и локализацию анти-апоптотических факторов, таких как Вс12, и стимулирует разрушение и инактивацию проапоптотических вакторов, таких как р53 и с-тус. Таким образом, Hsp70 ингибирует апоптоз путем регулирования ряда ключевых элементов внутренних и внешних механизмов апоптоза. Напротив, регуляция апоптоза под действием Hsp90 более ограничена и основными анти-апоптотическими молекулами, регулируемыми Hsp90, являются Akt и Bcl-xL. Несмотря на то, что эти два шаперона регулируют несколько апоптотических молекул, Hsp90 Hsp70 не являются универсальными ингибиторами апоптоза в раковых опухолях. Их действие специфично в отношении трансформации и зависит от связей клетки и функционирования апоптотических путей.
[00450] С этими выводами согласуются недавно опубликованные сведения о том,
что в инактивация Hsp90 клетках SKBr3 блокирует их рост и приводит к разрушению Akt, но не вызывает заметного апоптоза. И наоборот, эти агенты вызывают массовый апоптоз в клетках мелкоклеточной карциномы легкого NCI-H526. Обработка клеток соединением MAL3-101, агентом, который нарушает активацию Hsp70 J-белками, или кверцетином и KNK437, каждый из которых является индуцируемым ингибитором экспрессии Hsp70, совсем наоборот привела к значительной гибели клеток по механизму апоптоза в клетках SKBr3, но не в NCI-H526. Снижение экспрессии Hsp70 антисмысловями последовательностями также вызывало значительную гибель клеток среди клеток SKBr3. Совместно эти результаты исследований указывают на то, что Hsp70 является важным регулятором пути апоптоза, но не в NCI-H526, на то, что Hsp90, наоборот, является основным регулятором апоптоза в NCI-H526, но не в SKBr3. Воздействуя одновременно на пути Hsp90 и Hsp70, YK5 и родственные соединения согласно настоящему изобретению вызывают значительный апоптоза как в клетках SKBr3 (Фиг. 13с), так и в клетках NCI-H526 (Фиг. 14 и не показанные данные).
[00451] Сообщалось, что в дополнение к ингибированию автономного выживания
клеток индукция экспрессии Hsp70 придает клеткам некоторую устойчивость к гибели, индуцируемой фактором некроза опухолей (ФНО), окислительным стрессом, УФ-облучением, повышенной экспрессией каспазы-3 и некоторыми химиотерапевтическими средствами. В соответствии с описанным влиянием на Hsp70, YK5 повышал апоптотическое действие ФНОа в MDA-MB-468, трижды отрицательных клетках рака груди (Фиг. 13е).
[00452] Совместно, эти находки указывают на то, что двойное ингибирование Hsp70
и Hsc70 вызывает апоптоз в более широком ряде опухолей, чем ингибирование Hsp90 или Hsp70 отдельно, что указывает на потенциально более высокую терапевтическую
эффективность этих ингибиторов при раке. Они также показывают, что соединения согласно настоящему изобретению, описанные в данном тексте, возможно усиливают терапевтический эффект других средств.
[00453] Повышенную степень апоптоза, наблюдаемую при воздействии YK5, по
сравнению с прямыми ингибиторами Hsp90 также можно частично объяснить его неспособностью индуцировать реакцию теплового шока по принципу обратной связи. Хотя было показано, что некоторые клетки становятся чувствительны к апоптозу после прямого ингибирования Hsp90, индукция обратной связи Hsp70 после прямого ингибирования Hsp90 ограничивает цитотоксичность этих агентов во многих типах опухолей. На уровне белка индукция синтеза белка Hsp70 была показана для всех известных ингибиторов Hsp90 и наблюдалась как в доклинических, так и в клинических экспериментах. Прямые ингибиторы Hsp90 проявляют предпочтительную цитотоксичность в отношении клеток с нокаутированным HSF-1, и даже кратковременное понижение активности Hsp70 в некоторых ракоывх клетках с использованием миРНК и антисмысловых подходов делает их более чувствительными к ингибиторам Hsp90. В этих линиях низкомолеклярные соединения, которые ослабляют активацию HSF-1 также повышают чувствительность клеток к ингибированию Hsp90. Далее, некоторые опухолевые клетки, не способные к повышению уровней Hsp70, по-видимому особенно чувствительны в ингибированию Hsp90. Существуют данные, что индукция Hsp70 в результате других вмешательств приводит к эффекту цитопротекции. Экспериментальные данные указывают на то, что клеточный уровень Hsp70 является критичным для чувствительности к апоптозу. С учетом этих основных видов противораковй активности, неспособность YK5 стимулировать Hsp70 и активировать HSF-1 (Фиг. 3) по меньшей амере частично обуславливает его повышенную цитотоксичность (Фиг. 12а) и апоптотическую реакцию (Фиг. 13) по сравнению с прамыми ингибиторами Hsp90. С этими наблюдениями также согласуется то, ингибиторы Hsp90 были более токсичными в отношении клеток, предварительно обработанных YK5, или при совместно добавлении агентов, ингибирующих Hsp90 и Hsp70.
[00454] Совместно, эти находки указывают на то, что двойное фармакологическое
ингибирование Hsp70 и Hsc70 способно влиять на выраженность отличительных признаков рака, что обеспечивает всестороннюю атаку на злокачественны фенотип и приводит к гибели раковых клеток.
[00455] Дополнительно, наши данные демонстрируют, что ингибирование Hsp70
оказывает более глубокое действие на апоптоз, чем инактивация Hsp90, указывая на возможное увеличение терапевтической эффективности этих ингибиторов при раке.
Пример 7: Фармакологическое ингибирование Hsp70 обладает селективной
[00456] Поскольку Hsp70 способствует осуществлению функций домашнего
хозяйства в нормальных клетках, таких как укладка вновьсинтезированных полипептидов, повторная укладка неправильно сложенных белков и перемещение белков через биологические мембраны, остается неясным, не будут ли фармакологические вмешательства, воздействующие на обе изоформы Hsp70 и Hsc70, такие как YK5, токсичными для клетки. Для того, чтобы это выяснить, исследовали цитотоксический эффект YK5 в панели нормальных клеток, а именно, лейкоцитов периферической крови, полученных от здоровых доноров, и нормальных культивируемых фибробластов, таких как клетки толстой кишки CCDI8C0 и легкого MRC-5 (Фиг. 14а-с). Гибель клеток после фармакологической инактивации Hsp70 под действием YK5, определенная по метаболической активности (Фиг. 14а, вверху), активации апоптоза (Фиг. 14Ь,с) и по результатам визуального анализа морфологии клеток (Фиг. 14с, внизу), был минимальна. В первичных образцах ОМЛ YK5 вызывал существенную гибель клеток в бластной популяции, в то время как в неопухолевых клетках, обнаруженных в образце, взятом у того же пациента, эффект обработки был существенно более низким. Кроме того, когда полученную при хирургической операции у пациента с низкодифференцированной инфильтрующей протоковой карциномой (статус ER,PR,HER2-) свежую ткань ex vivo обрабатывали YK5 (5 мкМ), в строе и нормальных кровеносных сосудах не наблюдали никаких изменений, связанных с лечением, но был обнаружен массовый апоптох опухолевых клеток (60% опухолевых клеток были мёртвыми или умирающими через 24 ч после добавления YK5) (данные на показаны). Совместно эти результаты указывают на то, что YK5 и родственные соединения согласно настоящему изобретению являются селективно токсичными в отношении раковых клеток.
[00457] Совместно с результатами генетических манипуляций с Hsp70, в которых
"выключаение "тзоформ Hsp70 было менее токсичным в нетуморогенных линиях клеток, более высокая селективность в отношении инактивации экспрессии и функции Hsp70 может быть объяснена моделью близкой к модели "онкогенной зависимости", предложенной Вайнштайном (Weinstein). Согласно этой модели разрушение конкретного клиента Hsp70 при соответствующих генетических условиях (например, HER2 в клетках с повышенной экспрессией тирозинкиназы) под действием YK5 приведет к апоптозу и/или дифференцировки, тогда как разрушение в нормальных клетках вызывает лишь слабый эффект или вообще не оказывает никакого действия. Эту модель использовали для обоснования клинического использования прямых ингибиторов Hsp90 в широком
диапазоне типов опухолей.
[00458] Однако, нельзя исключать и более сложную роль белков Hsp70 в раковых
клетках, на которые можно селективно воздействовать низкомолекулярным соединением YK5, аналогично тому, как некоторые ингибиторы Hsp90 выбирают опухолевые формы Hsp90. Для исследования этой возможности измеряли взаимодействие YK5 5-гранул с экстрактами нормальных и раковых клеток. В первом эксперименте осуществляли химическую преципитацию из нормальных клеток MRC-5 и раковых клеток SKBr3 с увеличивающимися концентрациями УК55-гранул (Фиг. 14d, верхний рисунок). YK55-гранулы прочно взаимодействовали со связанными с Hsp40 видами Hsc/p70 в SKBr3. В клетках MRC-5 взаимодействие было более слабым и Hsp40 не были идентифицированы в изолированной с использованием YK55 фракции. Для повышения уровней Hsp в клетках MRC-5, эти клетки подвергали тепловому шоку перед этапом химической преципитации. Тепловой шок вызывал повышение уровня экспрессии форм Hsp70 и Hsp40, но не изменял селективность и аффинность YK55 (Фиг. 14d, средний рисунок). Аналогичные результаты были получены в экстрактах мозга. Хотя эта ткань характеризуется высоким уровнем экспрессии Hsc70, сравнимым с раковыми клетками, Hsp70 в экстракте мозга слабо взаимодействовали с YK55 (Фиг. 14d, нижний рисунок).
[00459] Во втором эксперименте исследовали способность растворимого YK5
конкурировать с YK55 за связывание с нормальными и раковыми формами Hsp70 (Фиг. 14е). Интересно, что связывание УК55-гранул с формами Hsp70 из экстрактов раковых клеток SKBr3 происходило при низких микромолярных концентрациях YK5, а для вытеснения Hsp70, экспрессируемых в клетках MRC-5, были необходимы концентрации YK5 выше 200 мкм (Фиг. 14е). Взаимодействие YK5 с рекомбинантным человеческим Hsp70 было еще слабее (Фиг. 14е).
[00460] Hsp70 в раковых клетках существуют в виде гетерогенных комплексов, в
которых белки-онкоклиенты и ко-шапероны связаны с молекулами Hsp70, которые вероятно постоянно сосуществуют со свободным Hsp70 и связанным с ко-шаперонами Hsp70. В этом контексте анализ фактов, изложенных на Фиг. 15, указывает на то, что молекулы Hsp70, которые связаны с онкобелками, наиболее чувствительны к конкурированию с растворимым YK5, что указывает на более высокую аффинность YK5 к этим видам Hsp70.
[00461] При совместном рассмотрении эти результаты указывают на то, что
соединения согласно настоящему изобретению, такие как YK5, возможно обладают более высокой аффинностью к видам Hsp70, экспрессируемым в злокачественных клетках и, дополнительно, они возможно предпочитают те виды Hsp70, которые связываются с
онкобелками и ко-шаперонами, что является возможным объяснением наболюдаемой селективной чувствительности раковых клеток к соединениям согласно настоящему изобретению, таким как YK5, и повышенной чувствительности онкобелков к ингибированию, вызываемому соединениями согласно настоящему изобретению.
Пример 8. Конкурентный анализ Hsp70 СуЗВ-К5 методом поляризации флюоресценции
[00462] Поскольку YK5 и родственные соединения согласно настоящему
изобретению связываются с комплексами Hsp/c70, обнаруживаемыми в раковых клетках, с более высокой аффинностьючем с рекомбинантным белком (Фиг. 14d,e), был разработан флюоресцентно-поляризационный анализ (FP), позволяющий измерять конкурентное связывание YK5, меченого суЗВ, или родственных соединений согласно настоящему изобретению с комплексами Hsp из лизата раковых клеток /с70. Принципиально, клеточные лизаты предварительно инкубировали с соединением согласно настоящему изобретению, описанным в настоящем тексте, и после добавления YK5-cy3B и установления равновесия считывали сигнал на планшетном анализаторе Analyst GT. Тест был разработан для формата на основе 96-луночного бланшета и обеспечивает быстрое исследование соединений (Фиг. 16).
[00463] Приготовление лизатов раковых клеток человека. Линию клеток рака груди
человека MDA-MB-468 получили из Амерканской Коллекции типовых Культур (Manassas, Вирджиния, США) и культивировали согласно указаниям поставщика. Клетки собирали и замораживали для разрушения мембран, а затем растворяли в связывающем буфере с добавлением ингибиторов протеаз и фосфатаз. В результате получали лизат. Лизаты хранили при-80 °С до использования. Общее содержание белка определяли с использованием аналитического набора с бицинхониновой кислотой (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) в соответствии с инструкциями изготовителя.
[00464] Конкурентный флюоресцентно-поляризационный анализ Hsp70 СуЗВ-К5:
Измерения поляризации флюоресценции осуществляли с использованием 96-луночных микротитрационных планшетов (Corning # 3650), при этом и возбуждение и испускание происходили в верхней части лунки. Связывающий буфер для ФП-анализа Hsp70 состоял из следующих компонентов: 25 мМ HEPES-K, рН=7.2, 20 мМ NaCl, 200 мкМ СаС12, ПО мМ КО Ас, 2 мМ Mg(OAc)2, 0.01% NP40. Каждая аналитическая лунка содержала 20 мкг лизата клеток YK-ингибитор в 75 мкл буфера. Смесь выдерживали на шейкере в течение 10 мин, затем инкубировали при 37 °С в течение 2 ч. В каждую лунку добавляли метку с получением конечной концентрации 3 нМ Cy3B-YK5 и конечного объема 100 мкл. Затем
осуществляли измерения на планшетном анализаторе Analyst GT (Molecular Devices, Sunnyvale, Калифорния, США). Использовали время интеграции 100 мс, высоту Z устанавливали на 3 мМ (середина). Задавали статическую поляризацию возбуждения и динамическую поляризацию испускания. В случае cy3B-YK5, использовали фильтр возбуждения на 530 нМ и фильтр испускания на 580 нМ с дихроическим зеркалом 561 нм. Все значения поляризации флюоресценции выражали в миллиединицах поляризации (шР). Значения шР рассчитывали по уравнению шР = 1000 х [(/S - ISB) -(IP- IPB)]/[(IS - ISB) + (IP - iPB)], где IS - это измеренное значение интенсивности параллельного испускания, a /SB и 7SP представляют соответствующие измеренные значения для фона (буфер). Общую флуоресценцию определяли как 2 > [00465] Как видно на Фиг. 16, возрастающие концентрации указанного ингибитора
добавляли в трипликатах в аналитический планшет и профодили ФП анализ, как описано выше. Конкурентный эффект выражали в виде процентной доли от контроля и рассчитывали путем деления значения миллиполяризации (шР; за вычетом свободного cy3B-YK5) в лунках с ингибитором на среднее значение шР (за вычетом свободного суЗВ-YK5) в контрорльтных лунках (cy3B-YK5 и клеточные лизаты со средой ДМСО) в каждом планшете. Строили график связывания лиганда от десятичного логарифма концентрации ингибитора, и рассчитывали значения ЕС50 с использованием программы нелинейного метода наименьших квадратов в 4.0. Точки, среднее, столбцы, стд. откл. Фиг. 16 показывает, что добавление указанных соединений согласно настоящему изобретению дозозависимо конкурировало за связывание YK5-cy3B cHsp70 в лизатах клеток.
Пример 9. YK5 фиксирует Hsp70 в связанной конформации клиент-белок. Применение иммобилизованного на твердой подложке immobilized YK5 для идентификации специфичных раковх онкобелков: STAT1
[00466] YK5 5-гранулы лучше изолируют Hsp70 в комплексе с несколькими
опухоль-специфичными онкобелками (Фиг. 15a-d). Предварительная инкубация лизатов клеток с YK5 дозозависимым образом снижала способность YK5 5-гранул взаимодействовать с Hsp70, что приводило к вытеснению онкобелков (Фиг. 15с). Поскольку aHTH-Hsp70s антитело ВВ70 способно истощать уровни Hsp70 и Hsc70 в клетке, но плохо захватывает молекулы Hsp70 в конформации, связанной с кошаперонами (т.е. HspllO) и онкобелками, исследовали специфичность УК55-гранул в отношении Hsp70s. Конкретно, при инкубировании инкубировали с ВВ70, но не с экстрактами, истощенными по Hsp70 с использованием нерелевантного IgG, YK5 5-гранулы не показали значительного взаимодействия с HspllO и Raf-1, что подтверждает, что взаимодействие
YK55 с HspllO и Raf-1 происходит через опосредуемы молекулами Hsp70 (Фиг. 15а, справа).
[00467] Рассматриваемые совместно, эти данные указывают на то, что YK5
выделяет Hsp70 в конформации онкоклиента, что указывает на возможность применения
гранул с YK55 или родственными соединениями согласно настоящему изобретению для
зависящих от типа опухоли клиентов Hsp70, что дает беспрецедентную возможность
исследовать систему взаимодействий раковых Hsp70 во внутренней среде клетки. Эти
исследования очень важны для понимания механизмов, связанных с чувствительностью
опухоли к Hsp70, для разработки рациональных средств комбинированной терапии,
включающих соединения согласно настоящему изобретению, описанные в данном тексте,
и ингибиторов активированных онкобелков, изолируемых с использованием YK-гранул
для рационального применения соединений согласно настоящему изобретению,
описанных в данном тексте, и других ингибиторов Hsp70 в лечении рака.
[00468] Для подтверждения пригодности УК55-гранул вначале показали, что пул
Hsp70, изолированных с использованием YK55, но не биотина, содержит установленные клиенты Hsp70, такие как серин-треонин киназа Raf-1 (Фиг. 15а, слева). УК55-гранулы не продемонстрировали значительного взаимодействия с онкогенной киназой Raf-в клетках, истощенных по Hsp70, что подтверждает, что взаимодействие YK55 с онкогенным продуктом происходит через комплекс, опосредуемый Hsp70 (Фиг. 15а, справа).
[00469] Кроме того, исследовали, обладают ли Hsp70, аналогично Hsp90,
способностью взаимодействовать с онкобелками, специфичными по отношению к
генетическому фону. Было обнаружено несколько онкобелков, участвующих в комплексе
с белками Hsp70 либо в усиленной передаче сигнала по патогенному пути, либо в
аберрантном течении клеточного цикла. Эти белки, также известные по своему
взаимодействию с Hsp90, включают Cyclin D1 и киназу HER2 в экспрессирующих на
повышенном уровне HER2 клетках рака груди SKBr3, циклин-зависимая киназа 1 (CDK1)
и фосфоинозитид-зависимая киназа -1 (PDK1) в клетках рака груди MDA-MB-468 и
мутантный рецептор андрогенов в (AR) клетках рака предстательной железы LNCaP
клетки рака предстательной железы (Фиг. 15Ь,с). Предварительная инкубация лизатов
клеток с YK5 дозозависимым образом снижала способность YK5 5-гранул
взаимодействовать с белками Hsp70 и приводила к вытеснению онкобелков (Фиг. 15с).
[00470] Рассматриваемые вместе, эти данные демонстрируют, что YK5-гранулы
обеспечивают выделение нескольких онкогенных продуктов, регулируемых Hsp70, которые участвуют в осуществлении клеточноспецифичной аберрантной передачи
сигнала. Ингибирование этих онкогенных продуктов в соответствующем генетическом контексте приводит а ингибированию опухоли и апоптозу и, соответственно, их разрушение может использоваться в качестве функционального теста (т.е. биомеркера ответа) для оценки клинического ответа на описанные в настоящем тексте соединения согласно настоящему изобретению. Ингибирование этих онкогенных продуктов также можно применять в комбинации с соединениям согласно настоящему изобретению, описанными в настоящем тексте, для разработки индивидуальной терапии с улучшенным результатом. Также предусмотрено применение УК55-гранул для идентификации соответствующих онкогенных продуктов, чувствительных к ингибированию Hsp70 описанными в данном тексте и родственными соединениями.
Исследование системы взаимодействий Hsp 70s в опухолях груди
[00471] Белки теплового шока (HSP) являются повсеместно экспрессируемыми
делами с разнообразными функциями в скручивании и транслокации различных клеточных белков. Хотя эти функции, связанные с "ведением домашнего хозяйства" клеток хорошо известны и интенсивно исследуются, в настоящее время выясняется, что шапероны также функционируют в патогенных клетках, выполняя различные специализированные болезнь-специфичные роли.
[00472] В случае шаперона Hsp90 эти функции в развитии злокачественности были
в основном расшифрованы благодаря открытию низкомолекулярного ингибитора гелданамицина. И наоборот, отсутствие низкомолекулярных соединений, селективно модулирующих белки Hsp70 в этом контексте и несколько противоречивые данные, полученные при использовании генетических манипуляция с Hsp70 и Hsc70, затрудняют возможность полного понимания роли Hsp70 и Hsc70 в злокачественной трансформации, поскольку YK5 и родственные соединения согласно настоящему изобретению являются модуляторами белков Hsp70 с новым механизмом действия, блокирующими Hsp70 в комплексе с белками - онкоклиентами и регуляторными молекулами апоптоза, что дает уникальную возможность объективного исследования системы взаимодействий Hsp70 в раковых клетках.
Последовательность
SEQ ID NO
MDA-MD-468 Контрольные
гранулы, интенсивность
MDA-MB-468 YK55-гранулы, интенсивность
SKBr3 Контрольные гранулы
SKBr3 YK55-гранулы
интенсивность
интенсивность
(R)FHDLLSQLDDQYSR(F)
SEQ ID
N0:5
9.51E+07
5.32E+07
(R)FNQ AQ SGNIQ STVMLDK(Q)
SEQ ID
N0:6
5.44E+07
(R)FNQAQSGNIQSTVmLDK(Q)
SEQ ID
N0:7
5.50E+07
(R)GLNVDQLNMLGEK(L)
SEQ ID
N0:8
2.58E+08
1.60E+08
(K)LLGPNASPDGLIPWTR(F)
SEQ ID
N0:9
1.34E+08
(K)SLEDLQDEYDFK(C)
SEQ ID
N0:10
8.30E+07
(K)TELISVSEVHPSR(L)
SEQ ID
N0:11
3.97E+08
(K)VMAAENIPENPLK(Y)
SEQ ID
N0:12
6.39E+07
[00473] Таблица 14. Иммобилизованного на твердой подложке YK5
идентифицирует STAT1 как соединение, взаимодействующее с Hsp70 в клетках рака груди. Белковые комплексы, выделенные с использованием контрольных гранул с присоединенным D-биотином, и УК55-гранул в лизатах клеток человека MDA-MB-468 и клеток рака груди человека SKBr3, разделяли на полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, вырезали полосу 90КДА и экстрагированные белки расщепляли и анализировали методом ЖХ/МС/МС как описано в разделе Методы. Аминокислоты, указанные в скобках, отщеплялись от основной последовательности в ходе экстракции. Анализ последовательности показал, что эта полоса представляет собой STAT1.
[00474] Для проведения объективного анализа всей системы взаимодействий белков
Hsp70, проводили протеомный анализ на выделенным с использованием контрольных гранул и УК55-гранул компонентов клеток рака груди SKBr3 и MDA-MB-468. Среди идентифицированных (Таблица14) и подтвержденных (Фиг. 17, Фиг. 18) транспортных белков были белок, учтатвующий в передаче сигнала, и активаторы трансрипции 1 и 3 (STAT1 и STAT3). YK55 не взаимодейтствовал с STAT в клетках с иммуноистощением Hsp70s (Фиг. 18Ь), что указывает на то, что связывание YK55 с различными STAT было Нзр70-опосредованным и Нзр70-спрцифичным. Антересно, что в отличие от Raf-1 и других онкобелков добавление YK5 к клеткам не привело к снижению равновесных уровней STAT1 (Фиг. 17а, справа). С другой стороны, наблюдали снижение активности STAT3, но не STAT1, на что указывало существенное снижение уровней p-STAT3, после обработки YK5 (Фиг. 17а, справа).
[00475] STAT представляют собой семейство факторов транскрипции, ингрющих
ключевую роль в интеграции различных внеклеточных стимулов. Хотя большинство членов семейства STAT, такие как STAT3 и STAT5 было показано, что они стимулируют онкогенез, STAT1 подавляет онкогенез, что указывает на то, что для выживания раковым клетками необходимо разрабатывать противоположные механизм для одновременного поддержания повышенной экспрессии p-STAT3 и p-STAT5 и подавления уровней р-STAT1. Действительно, в клетках рака груди обнаруживаются большие количества р-STAT3 (Фигуры 8-11, Фиг. 17), но уровни активированного STAT1 были почти недетектируемыми (Фигуры17,18, см. уровни p-STATl в клетках, стимулированных эндогенными вариантами ИФНу). Соответственно, мы задались вопросом, не влияют ли ли Hsp70 на тонкую настройку уровней p-STATl и p-STAT3. Так как известно, что активация STAT1 может стимулировать гибель клеток и поскольку клетки рака груди экспрессируют STAT1, предположили, что связывания белков Hsp70 со STAT1 в этих клетках возможно участвует в ингибировании его про-апоптотический функции, что дает возможеый механизм, который клетки используют для защиты от ИФНу и иммунной системы.
[00476] Было обнаружено, что в этих линиях ИФНу увеличивает клеточные уровни
p-STATl (Фиг. 18c,d) и индуцирует апоптоз в клетках MDA-MB-468 (Фиг. 18с). Влияние ИФНу на p-STATl увеличивалось при действии YK5 (Фиг. 18с). Сравнение уровней STAT1 и p-STATl с этих клетках с отделенными с использованиему УК55-гранул указывает на то, что большая часть активированного STAT1 находилось в комплексе с YK5/Hsp70, что указывает на то, что захват p-STATl белками Hsp70 участвует в ингибировании пути ИФНу-STATl.
[00477] STAT1 вляется основным эффектором в пути передачи сигнала через
интерферон-у. ИФНу - это цитокин, продуцируемый Т-клеткаи и естественными киллерами, обладающий природной иммуностимулирующей функцией, которая обеспечивает защиту против патогенов и развития опухолей. ИФНу может осуществлять антипролиферативное воздействие на разнообразные опухолевые клетки, включая клетки опухоли груди, и это влияние осуществляется через STAT1. ИФНу обладает экзогенным эффектом иммунологического надзора в отношении клеток опухоли в имму некомпетентных мышах, и для этой активности необходима целостность пути передачи сигнала JAK (Janus Kinase)-STAT. В частности, ИФНу вызывает фосфорилирование8ТАТ1 по остатку тирозина 701 и остатку серина 727, что приводит к гомодимеризации, связыванию ДНК и активации транскрипции этих генов-мишеней, некоторые из готорых играбт роль в апоптозе. Апоптоз и активация каспез в ответ на ИФНу не возникают в клетках, лишенных функционального STAT1. Аналогично, STAT1-отрицательные клетки демонстрируют пониженные экспрессию и и индуцированный фактором некроза опухолей (ФНОа) апоптоз по сравнению с аналогичными клетками, экспрессирующим функциональный 1 STAT1. Эти находки указывают на то, что активация STAT1 играет ключевую роль в индукции апоптоза в ответ на регуляторные цитокины, такие как ИФНу и ФНОа. Далее, недавнее исследование показало, что мыши, лишенные и STAT1, и RAG2 - белка, необходимого для рекомбинации V(D)J, были предрасположены к спонтанному развитию карцином мололчной железы. Также были представлены свидетельства того, что STAT1 является отрицательным регулятором ангиогенеза, роста и метастазирования опухолей.
[00478] Эти результаты указывают на то, что применение средств комбинированной
терапии, включающих соединения согласно настоящему изобретению, описанные в настоящем тексте, обладают потенциалом стимуляции эффекта интерферона и позволяют иммунным процессам значительно более эффективно уничтожать опухоли путем блокирования опухолевого механизма амортизации. Это является многообещающей находкой для испытаний вакцинации, указывающей на то, что совместное введение биологически активного интерферона с соединением согласно настоящему изобретению может повысить эффективность вакцины и обеспечить возможность применения более низких доз вакцин. Поскольку другие патогенные трансформации зависят от передачи сигнала чрез путь цитокин/STATl, например, микробиологические и вирусные инфекции и поздние осложнения диабета 2 типа, наша работа указывает на то, что терапевтические средства, включающие ингибиторы белков Hsp70, в дополнение к противораковым средствам, также могут оказывать усиливающее действие при лечении этих заболеваний.
Связывание Hsp70 представляет собой новый механизм ингибирования активности опухолевых супрессоров.
[00479] Для уточнения механизма ингибирования STAT1 под действием белков
Hsp70, обработанные интерфероном-у клетки MDA-MB-468 анализировали в разнеые моменты времени в присутствии и в отсутствие YK5 и ингибиторов фосфорилирования и дефосфорилирования с целью измерения зависящего от времени фосфорилирования тирозина в STAT1 по остатку Туг701 (Фиг. 18e,f). В то время как в присутствии YK5 STAT 1-фосфорилирование быстро достигает максимальных уровней, в отсутствие ингибиторов, в отсутствие ингибитора Hsp70 его активация замедляется и не достигает такого же уровня.
[00480] Поскольку общий уровень p-STATl определяется по балансу событий
фосфорилирования и дефосфорилирования, продолжительное фосфорилирование тирозина STAT1 клеток, ингибированных Hsp70, приводи либо к повышению активности киназы JAK, либо к снижению активности протеин-тирозиновой фосфатазы (PTPase) в отношении STAT1.
[00481] Для того, чтобы осуществлять мониторинга скорости дефосфорилирования
STAT1, использовали стратегию вытеснения метки: стауроспорин - ингибитор протеинкиназ добавляли к клеткам, предварительно обработанным интерфероном-у в течение 30 мин, что обеспечивало резкое блокирование непрерывного фосфорилирования STAT1 под действие JAK-киназ (Фиг. 18f, вверху). Затем определяли остаточный уровень фосфорилированного по тирозину STAT1 в нескольких временных точках. В отсутствие YK5 фосфорилирование STAT1 по тирозину сразу снижалось, а в присутствии YK5 уровни p-STATl в клетке сохранялись. Эти результаты указывают на то, что белки Hsp70 обладают способностью ослаблять индукцию фосфорилирования STAT1 под действием интерферона-у в клетках рака груди, и ингибиторы белков Hsp70 способствуют накоплению p-STATl благодаря возможной задержке дефосфорилирования. Соответственно, в присутствии ортовандата (КазУС^) неспецифического протеинтирозинфосфатазы, фосфорилирование STAT1 в клетках, не обработанных YK5, и в обработанных клетках было почти одинаково эффективным (Фиг. 18f, внизу). Блокирование дефосфорилирования STAT1 ортовандатом приводит к накоплении фосфорилированного по тирозину STAT1 и его последующему персистированию. Соответственно, предобработка клеток предварительная обработка клеток MDA-MB-468 соединением YK5 перед стимуляцией интерфероном-у усиливала ядерную транслокацию активированного STAT1 (Фиг. 19а) и повышала эффективность его связывания с ДНК
((Фиг. 19b). Эти результаты согласуются с механизмом, по которому молекулы Hsp70 удерживают p-STATl в конформации, которая изменяет скорость дефосфорилирования протеинтирозинфосфатаз.
Пример 10: Применение иммобилизованного на твердой подложке YK5 для идентификации специфичных для рака онкобелков: STAT3 при раке груди
[00482] Как указано в Примере 9, STAT3 был также идентифицирован в изолятах
УК55-гранул (Фиг. 17с). В отличие от STAT1, конститутивная активность STAT3 часто обнаруживается при раке груди, и опухоли могут становиться зависимыми от STAT3. Было обнаружено, что фосфорилирование по тирозину и связывание с ДНК белка STAT3 повышены в большом числе линий клеток раковых опухолей. Есть сведения, указывающие на то, что STAT3 способен активировать транскрипции нескольких генов, связанных с течением клеточного цикла, выживанием и трансформацией клеток. И наоборот, фармакологическое и доминантно-отрицательное ингибирование активности STAT3 блокировало пролиферацию и выживание клеток рака груди, что в совокупности указывает на то, что активность STAT3 необходима для трансформированного фенотипа при раке груди.
[00483] Используя стратегию эксперимента, разработанну для STAT1, молекулы
Hsp70 оказывают на STAT3 влияние, противоположное влиянию на STAT1. Наши результаты указывают на то, что молекулы Hsp70 способствуют накплению клеточного р-STAT3, облегчая фосфорилирование киназами и/или замедляя дефосфорилирование STAT3 протеинтирозинфосфатазами. Активация STAT3 зависит от фосфорилирования косервативного остатка тирозина (Y705) вышестоящими киназами, такими как киназа Janus 2 (JAK2). Соответственно, был сделан вывод, что молекулы Hsp70s сохраняют р-STAT3 в конформации, трудно доступной для протеинтирозинфосфатаз, но благоприятной для фосфорилирования киназами JAK, что является основным механизмом поддержания повышенного количества p-STAT3 в клетке. Наравне с механизмом регулирования активности STAT3 через Hsp70, соединения согласно настоящему изобретению эффективно инактивируют STAT3 путем снижения фосфорилирования остатков тирозина (Y705) в присутствии описанных соединений (Фигуры 9b, 10а, lib). Таким образом, YK5 и родственные соединения согласно настояему изобретению обращают стимулирующее влияние Hsp70 на p-STAT3. Устойчивая активация сигнального пути STAT3 была зарегистрирована в широком диапазоне солидных опухолей и раковых заболеваний крови, и обычно ее связывают с неблагоприятным прогнозом. Сруди видов активности, стимулирующи развитие рака, которые
приписываются передаче сигнала через STAT3, существуют такие, каоторые участвуют в пролиферации клеток, метастазировании, избегании иммунной системы хозяина и устойчивость к апоптозу. В данной работе мы показали, что воздействие соединением согласно настоящему изобретению на путь передачи сигнала через STAT, описное здесь, обеспечивает новую стратегию ингибирования абберантно активированной передачи сигнала с участием STAT в раковых клетках.
[00484] В заключение, включенные в настоящее описание варианты осуществления
демонстрируют применение YK5 и его биотинилированного производного, YK55, в
исследовании системы взаимодействий цитолитических Hsp70. С использованием этих
гранул было идентифицировано несколько онкогенных продуктов, активированы в
различных типах раковых опухолей. Эти продукты включают, но не ограничиваются
перечисленными: HER2, Циклин Dl, Raf-1, STAT1 и STAT3 в клетках рака груди с
повышенной экспрессией HER2, PDK1, STAT1, STAT3 и CDK1 в трижды отрицательных
клетках рака груди и мутантный AR в клетках рака простаты. Это свидетельствует о том,
что соединения согласно настоящему изобретению, описанные в данном тексте,
комбинаторно воздействуют на несколько активированных онкогенных путей и будут
обладать активностью в широком спектре раковых опухолей. Связывание этих белков
белком Hsp70 необходимо для сохранения их функциональной стабильности, а
ингибирование Hsp70 соединением YK5 и родственными соединениями согласно
настоящему изобретению приводит к дестабилизации онкобелка и последующему
уничтожению по протеасомному механизму, или, альтернативно, к инактивации.
[00485] Существует потребность в лучшем понимании молекулярных нарушений,
приводящих к трансформированному фенотипу. Такое понимание может привести к развитию менее токсичных средств лечения рака на основе ингибиторов молекул, стимулирующих развитие рака. Поскольку большинство раковых заболеваний характеризуется несколькими молекулярными изменениями, в клинических условиях трудно определить точную комбинацию агентов, нацеленных на конкретные молекулы, которая обеспечит наилучший результат. Можно предположить, что использование YK-гранул позволит "выловить" подгруппу абберантных белков для клеток каждого типа рака/ткани опухоли пациента. Информация, полученная в этих экспериментах по "вылавливанию" может быть использована для создания молекулярной карты клетки и рак-специфичных путей трансформации. Создание карт "опухольспецифическоих молекулярных аббераций" в итоге позволит создавать инливидуальную терапию для пациентов. Такая протеомная карта имеет несомненные преимущества перед обычными картами генетических подписей, поскольку многие противораковые агенты являются
низкомолекулярными соединениями, действие которых направлено на белки, а не на гены, и также многие низкомолекулярные соединения, нацеленные на конкретные молекулярные изменения, находятся в стадии разработки. Эти усилия могут обеспечить основу для разработки комбинированных терапевтических средств, обладающих повышенной эффективностью и более низкой токсичностью, и, определяют конкретные молекулярные изменения в конкретных опухолях, способствуя разработке новых средств терапии с направленным на молекулы действием.
[00486] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения обеспечивает
способ мониторинга статуса лечения пациента, получающего лечение от опухоли или пролиферативного заболевания, включающий осуществление ковалентного связывания соединения по пп. 1 - 20 с твердым сусбтратом с получением комплекса субстрат -соединение; получение первого биологического образца у пациента в момент времени до или во время периода лечения; осуществление контакта образца с комплексом субстрат-соединение с обеспечением контакта комплекса субстрат-соединение с комплексом HSP70; измерение и регистрация типа и количества онкобелка, вытесненного из комплекса HSP70 ; получение второго биологического образца у пациента в момент времени после или во время периода лечения и повторение этапа измерения и регистрации типа и количества онкобелка, вытесненного из комплекса HSP70; и измерение уровня и активности указанного Hsp-ассоциированного белка; сравнение результатов с предшествующим измерением и определение того, обеспечивает ли лечение пациента положительный эффект.
[00487] Эти варианты осуществления демонстрируют также, что применение YK5 и
родственных соединений согласно настоящему изобретению обеспечивают новый механизм фосфорилирования белков в клетке. В частности, показано, что белки Hsp70 действуют как клеточный буфер для активности STAT1 и STAT3 в клетках рака груди. Наши данные указывают на механизм, который обеспечивает связывание Hsp70 с STAT1 и STAT3 у удерживание этих белков в конформации, которая облегчает и ускоряет (для STAT1) или которая замедляет (для STAT3) их дефосфорилирование фосфатазами. Благодаря этому механиму Hsp70 снижают уровень эндогенного p-STATl и понижают его про-апоптотическую активность и, наоборот, повышают уровень эндогенного p-STAT3 и усиливают его способность индуцировать пролиферацию.
[00488] Не в последнбб очередь, наши находки указывают на то, что
фармакологическое ингибирование белков Hsp70 по механиму, связанному с YK5, оказывает мультимодальное воздействие в различых раковых клетках и приводит к массированной атаке на основные аспекты рака. Этот эффект в значительной степени
связан со способностью соединений согласно настоящему изобретению, описанных в данному описании, нарушать стабильность и функцию многих онкобелков и восстанавливать опухоль-подавляющую активность. В совокупности отсутствие обратной связи реакции теплового шока, низкое цитотоксическое воздействие на нормальные клетки и высокая активность в различных раковых клетках с различным генетическим фоном согласно нашим результатам обеспчивают двойное фармакологическое ингибирование Hsp70 и Hsc70 как потенциальной новое противораковое вмешательство.
Пример 11. Применение соединений согласно настоящему изобретению для выделения стволовых клеток.
[00489] YK5 эффективно уничтожает раковые стволовые клетки. Растужий
объем свидетельств того, что острый миелогенный лейкоз (ОМЛ) инициирует и поддерживает сравнительно редкая, устойчивая к химиотерапии субпопуляция клеток, звестных как стволовые клетки лейкоза (СКЛ, LSC), которые способны к самообновлению, прлиферации и дифференцировки в лекозные бластные клетки. Паиенты, у которых обнаруживают более высокую долю фенотипически определяемых СКЛ демонстрируют существенно худшее выживание без рецидивов, чем пациенты с низкой долей СКЛ. Также, в диагностике более высокая доля СКЛ указывает на высокую вероятность минимального остаточного заболевания (МОЗ, MRD), что позволяет предположить, что СКЛ вносят значительный вклад в МОЗ. Наконец, было показано, что хотя многие лекарства уничтожают бластные клетки лейкоза, оцень небольшое их число позволяет уничтожает СКЛ.
[00490] В образцах первичной ОМЛ YK5 индуцировал значительную гибель клетко
в популяциях бластных, стволовых клетока и клеток-предшественников (Фиг. 20). Неожиданно обнаружили высокую чувствительность фенотипически определенных стволовых клеток лейкемии и общх лейкозных бластных клеток (Фиг. 20Ь; красные столбики против серых столбиков). Наконец, было обнаружено, что неопухолевые клетки в образце того же пациента были значительно меньше подвержены эффектам обрабтки YK5 (Фиг. 20, белые колонки). Таким образом, соединение, обладающее токсичностью в отношении стволовых раковых клеток, такое как соединения YK, имеют большое значения для усовершеноствования лечения рака.
Пример 12: Методы анализа
[00491] Реагеты. PU24FC1 и PU-H71 синтезировали и исследовали, как описано
ранее. Флуоресцентный зонд GM-суЗВ на основе ингибитора Hsp90 ансамицина
синтезировали, как описано. Синтез и исследование соединений согласно настоящему
изобретению описаны в данном текста. Лейпептин, MG 132, MG 101, PMSF, иодид
пропидия и фактор некроза опухолей -а получили в Sigma-Aldrich; AEBSF -из A.G.
Scientific; Z-VAD-FMK, BOC-D-FMK, ингибитор катепсина 1, кальпептин и ИФНу - в
Calbiochem. Рекомбинантный человеческий белок Hsp70 приобрели в Stressgen.
[00492] Линии клеток. Раковые клетки человека MDA-MB-468, MDA-MB-231,
LNCaP, нормальные фибробласты легких человека MRC5 и нормальные клетки толстого кишечника человек CCDI8C0 были приобретены в Американской Коллекции Стандартных Клеточных Культур were (Manassas, США). Клетки SKBr-З были подарены д-ром Neal Rosen, MSKCC, клетки HuH7 были подарены д-ром Massague, MSKCC, OCI-Ly7, MOLM-13, a Kasumi-1 были подарены д-ром S. Nimer, MSKCC и Mia-PaCa2, AsPC-1, ВхРСЗ и PL45 были подарены д-ром D. Bar-Sagi, NYU. Клетки культивировали обычным способом DME/F12 (MDA-MB-468, MDA-MB-231 и SKBr3) в среде RPMI (LNCaP, MOLM-13, ВхРСЗ, и AsPC-1 и Kasumi-1) или в среде MEM (MRC5 и CCDI8C0), или в EVIDM (OCI-Ly7), или в DMEM (HuH7, Mia-Paca2 и PL45), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% L-глютамина, 1% пенициллина и стрептомицина. ЛПК (человеческие лейкоциты периферической крови) выделяли из крови пациентов, приобретенной в Центре Крови Нью-Йорка. Тридцать пять мл суспензии клеток наслаивали на 15 мл раствора Ficoll-Paque plus (GE Healthcare). Образцы центрифугировали при 2,000 об./мин в течение 40 мин при 4°С и собирали слой лейкоцитов. Клетки высквали в среду RPMI с 10% ФБС и на следующий день обрабатывали соответствующим концентрациями YK5 в течение указанных промежутков времени.
[00493] Выделение и культивирование первичных клеток. Первичные клетки
ОМЛ (острого миелоидного лейкоза) человека были поличены при информированном согласии. Все манипуляции и анализ образце были утверждены наблюдательным советом Медицинского колледжа Вейл Корнелл. Мононуклеары выделяли с использованием разделения в градиенте плотности раствора Ficoll-Plaque (Pharmacia Biotech, Piscataway, NY, США). В некоторых случаях клетки подвергали криоконсервации в среде для замораживания, состоящей из модифицированной по Искову среде Дульбекко (IMDM), 40% фетальной бычьей сыворотки (ФБС) и 10% диметилсульфоксида (ДМСО) или в CryoStor(tm) CS-10 (Biolife).
[00494] Буферы: Для промывки белковых комплексов, выделенных на YK55-
гранулах или AT ВВ70 использовали либ буфер с высоким содержанием соли either (20 мМ Tris рН 7.4, 1М NaCl, 0.1 % NP-40), либо бефер с низким содержанием соли (20 мМ
Tris pH 7.4, 25 мМ NaCl, 0.1 % буфера NP-40), как указано. Для элиюрования белковых комплексов с УК55-гранул, как указано, использовали либо элюирующий буфер А (62.5 мМ TrisHCl рН 6.8, 2% SDS, 10% глицерина, 15.5 мг/мл DTT, бромфенолового синего 0.02 мг/мл) и кипятили образец при 100°С в течение 3 мин, или использовали элюирующий буфер В (2% SDS, 50 мМ фосфата, 100 мМ NaCl, 6 М мочевины и 2 мМ тиомочевины) и инкубировали пробу в течение 15 мин при комнатной температуре, а затем 15 мин при 100°С.
[00495] Вычислительные методы: Данные о последовательности и
кристаллической структуре белка загрузили из баз данных NCBI и RCSB, соответственно.
Гомологичную модель сконструировали с использование Prime v2.0, после чего эту
гомологичную модель уточнили путем минимизации с использованием Macromodel v9.6.
Осуществили анализ полученной гомологичной модели с использованием SiteMap v2.2,
после чего исследовали структуру и "причаливание" YK5 в предсказанном
аллостерическом сайте. Все вычисления осуществляли с использованием рабочей станции
HP xw8200 с операционной системой Ubuntu 8.10 с использованием Maestro v8.5.
[00496] Система нумерации остатков: Положение каждого аминокислотного
остатка в белке Hsp70 соответствует нумерации в последовательности hHsp70 (Номер
доступа: Р08107), предложенной Милнером (Milner) с соавт, если не указано иное.
[00497] Создание гомологичной модели: Гомологичную модель создавали с
использованием Prime v2.0. Для построения модели использовали следующие белковые структуры: N-концевой домен в комплексе с АТФ (PDB ID: 1S3X), hHsp70 бактерии Е. coli Hsp70 (DnaK) в комплексе с АДФ и субстратом (пептид- NRLLLTG) (PDB ID: 2КНО), С-концевой домен Hsp70 микроорганизма С. elegans (PDB ID: 2Р32) и аминокислотная последовательность полноразмерного белка hHsp70 (Номер доступа: Р08107. Для создания модели белковую последовательность hHsp70 (Номер доступа: Р08107) вводили в качестве входного параметра в модуль подготовки структур Prime. Осуществляли поиск гомологичных последовательностей для идентификации шаблонов, демонстрирующих 50% гомологии последовательности. В результате этого поиска было идентифицировано три известные кристаллические структуры (Идентификационные номера в PDB: 1S3X, 2КНО и 2Р32). Последовательность полноразмерного hHsp70 и шаблона выравнивали с использованием набора предустановленных параметров Prime. В опции построения структуры Prime выбрали аминокислоты Metl-Gly382 (hHsp70) из PDB ID: 1S3X, аминокислоты Asp385-Gln538 (Е. coli.) т.е., Asp383.-Ala541 (hHsp70) из PDB ID: 2KHO и, наконец, аминокислоты Leu543- Ser614 (С. elegans), т.е. Leu542-Gly613 (hHsp70) из PDB ID: 2P32. Аминокислотные остатки (614-641, hHsp70) не моделировали, поскольку для
этих С-концевых аминокислот не было шаблона. Затем осуществляли построение структуры с использованием положений атомов из совпавших участков шаблонов. При этом учитывли влияние растворителя, лиганда (АДФ), поля сил и других факторов с использованием набора алгоритмов, реализованных в Prime. Разрывы непрерывности структуры оптимизировали путем вставки шаблонных пробелов для более чем 20 остатков. Все путли уточняли с использованием предустановленных настроек параметров в Prime.
[00498] Получение структуры: Структуру белка hHsp70 согласно гомологичной
модели уточняли для анализа SiteMap и расчета "причаливания" с использованием
модуля конструирования белка, доступного в Maestro 8.5. Частичные атомные заряды
присваивали в соответствии с полем сил OLPS-AA. Для получения более надежной
трехмерной структуры hHsp70 гомологичную модель дополнительно подвергали ряду
этапов минимизации энергии, которые состояли из 5000 итераций кратчайшего спуска и
(SD) сопряженного градиента (CG), которые осуществляли до достижения
среднеквадратичного значения (rms) градиента энергии ниже 0.001 ккал^моль"1 А"1.
[00499] Предсказание сайта связывания: Гомологичную модель hHsp70
исследовали вычислительными методами чтобы определить возможные подверженные
воздействию лекарственных средств сайты с использованием предустановленных
параметров в SiteMap v2.2 пакета Maestro v8.5. Расчет SiteMap состоит из трех этапов, как
описано у Т. Halgren. На первом этапе выбирают подходящие точки сайтов на основании
геометрических и энергетических свойств, и эти точки объединяют в группы,
определяющие сайты. Затем рассчитывают гидрофобные и другие ключевые свойства в
узлах сетки и получают контурные карты. Наконец, вычисляют такие свойства сайта как
оценка Сайта (S-балл), оценка подверженности воздействию лекарственных средств (D-
балл), размер, граница, гидрофильность и гидрофобность. Потенциальные сайты
связывания рецептора ранжируют на основании S-даллов и D-баллов.
[00500] В ходе определения подходящего сайта связывания лекраственного средства
SiteMap распознает сайт, который прочно связывает лиганды (имеет более высокий S-
балл), но не ранжирует его как подверженный воздействию лекарственных средств, если
активные лиганды с самой высокой активностью содержат заряженные структуры,
например как структуры природного фосфатного субстрата, и, соответственно вряд ли
будут подвержены воздействии лекарственных средств (более низки D-балл).
[00501] Получение структуры лиганда: Модулятор hHsp70 (YK5) и
разработанные модуляторы конструировали с использованием словаря фрагментов
Mjraaestro v8.5. Геометрические свойства модуляторов оптимизировали в программе Macromodel v9.6 с использованием поля сил OLPS-AA force field.
[00502] Причаливание лиганда. Расчеты причаливания проводили в режиме
стандартной точности (SP) в Glide v4.0. Сетки строили с использованием инструмента
генерирования реепторной сетки в Glide, выбирая отдельные сайты входа с
использованием SiteMap (Sites 1-5) для ввода лиганда. Сайт связывания, для еоторого
рассчитывали и сохраняли различные энергетические сетки, определяется двумя
концентрическими кубами: бокс связывания, который должен содержать центр всех
приемлемых положений лиганда, и граничны бокс, который должен содержать все атомы
лиганда в приемлемом положении. Бокс связывания и граничный бокс определяются
кубами с длиной ребра 12 А и 30 А, соответственно, которые центрированы в середин
самого длинного расстояния между атомами лиганда. Положения со среднеквадратичным
отклонением меньше 0.5 А и максимальным смещением атомов меньше 1.3 А не
учитывали, чтобы избежать избытчности. Масштабный коэффициент для Ван дер
Ваальсовых радиусов применяли для атомов с абсолбтным частичным зарядом меньше
или равным 0.15 (масштабный коэффициент 0.8) и 0.25 (масштабный коэффициент 1.0)
электров для лиганда и белка, соответственно. Значение переменной тахкеер, которая
задает максимальное число положений, генерируемых в ходе начальной фазы расчета
причаливания устанавливали на 5000, а переменной keep best, которая определяет число
положений на лиганд, которое обеспечивает минимизацию энергии, устанавливали на
1000. Протокол минимизации энергии включает диэлектрическую константу, равную 4.0,
и 1000 шагов сопряженного градиента. После выполнения каждого причаливания
разрешалась генерация максимум 100 для каждого лиганда. Наилучшим образом
стыкующуюся конформацию выбирали с учетом ориентации и оценки Glidescore (G-балл).
[00503] Анализ методом Вестерн-блот. Клетки выращивали до 60-70%
непрерывного слоя и обрабатывали ингибитором или средой ДМСО в течение указанных промежутков времени. Готовили лизаты белков в 50 мМ буфера Tris (рН 7.4) с 150 мМ NaCl и 1% лизирующего буфера NP-40. Концентрации белка измеряли с использованием наборов ВС A (Pierce) в соответствии с инструкциями изготовителя. Белковые лизаты (1050 мкг) разделяли путем электрофореза в ПААГ с додецилсульфатом натрия, переносили на нитроцеллюлозную мембрану и инкубировали с первичными антителами: анти-егЬВ2 кролика (1:250, 28-0004, Zymed), анти-НврЭО мыши (1:500, SPA-830, Stressgen), анти-Hsp40 кролика (1:1000, SPA-400, Stressgen), анти-НОР мыши (1:1000, SRA-1500 Stressgen), aHTH-Hsc70 кролика (1:500, SPA-816, Stressgen), антитела к андрогеновому рецептору мыши (1:500, 554225, Biosciences), aHTH-Flt-З кролика (1:500, sc-480, Santa Cruz), антитела
к биотину мыши (1:250, В7653, Sigma-Aldrich), анти-НврЭО мыши (1:1000, SMC-107, Stressmarq), анти-HSFl кролика (1:500, SPA-901, Stressgen), анти-CDKl мыши (1:1000, 905-777-100, Assay Designs), антитела к циклуну D1 мыши (1:125, 2926, Cell Signaling), антикаспазные антитела 3 кролика (1:500, 9665, Cell Signaling), антифосфо-STATl (Туг 701) кролика (1:250, 9171, Cell Signaling), анти-STATl мыши (1:1000, 610186, BD Biosciences), aHTH-Hsp70 мыши (1:500, SPA-810, Stressgen), анти-Akt кролика (1:500, 9272, Cell Signaling), анти-фосфо-Akt (Ser 473) кролика (1:500, 9271, Cell Signaling), анти-Raf-l кролика (1:500, sc-133, Santa Cruz), анти-PARP (p85 fragment) кролика (1:500, G7341, Promega), анти-CSK кролика (1:1000, sc-13074, Santa Cruz), анти-Р-актин мыши (1:2500, A1978, Sigma-Aldrich) and анти-Р13К (p85) кролика (1:4000, 06-195, Upstate). Затем мембраны инкубировали с коъюгированный с пероксидазой хрена соответствующим вторичным антителом ( разведение 1:3,000). Антитело к р23 (JJ3) было подарено д-ром D. Toft. Анти-HIP, aHTH-Hsp90 (Н9010) и aHTH-Hsp/c70 (ВВ70) антитела были получены, как описано выше.
[00504] Анализ связывания Hsp90. Измерения проводили в черных 96-луночных
миктротитрационных планшетах (Corning #3650) как описано ранее7. Вкратце, каждый 96-луночный планшет содержал 3 нМ СуЗВ-GM, 10 нМ Hsp90 (Stressgen #SPP-770) и исследуемый ингибитор (исходный маточный раствор в ДМСО) в конечном объеме 100 мкл. Планшет оставляли на шейкере при 4 °С в течение 24 ч и регистрировали значения флуоресцентной поляризации (FP) в миллиединицаз поляризации (тР). Значения ЕС50 определяли как концентрации конкурирующих соединений, при которых происходило замещение 50% СуЗВ-GM. Измерения флуоресцентной поляризации (FP) осуществляли на приборе Analyst GT (Molecular Devices).
[00505] АТФазная активность Hsc70 и повторное скручивание люциферазы.
Человеческие Hsc70, DJA1/DNAJA1, DJA2/DNAJA2 и Hspl 10/Hspl05/HSPH1 очищали и подвергали анализу. Для измерения значений АТФазной активности Hsc70 ATP 4 мкМ Hsc70 преинкубировали в аналитическом буфере (100 мМ КО Ас, 20 мМ Hepes-KOH рН 7.5, 5 мМ MgOAc2) при 37 °С ч течение 2 ч с различными концентрациями YK5 или 1% ДМСО в качестве контроля со средой. Добавляли 4 мкМ DJA1 или DJA2, 1 мкМ HspllO, 2мМ ATP и 5 мкКи/мл ц[32Р]-АТФ (Perkin Elmer) и инкубировали реакционные смеси при 30 °С. В анализируемые моменты времени брали образцы, реакцию в которых останавливали путем добавления 37.5 мМ ЭДТА, и анализировали методом тонкослойной хроматографии на целлюлозе с полиэтилен-имином (Mallinckrodt Baker), которую проявляли в 0.5 М LiCl и 0.5 М муравьиной кислоты. Образующийся АДФ определяли путем количественного анализа фосфоресценции. Рассчитывали линейные скорости
ферментативных реакций (Vmax) путем регрессионного анализа. Для исследования
повторного скручивания люциферазы люциферазу светлячка (Sigma) денатурировали в
смеси 6М гуанидин-HCl и 1 мМ дитиотреитола в течение 10 мин. 4 мкМ Hsc70
преинкубировали с лекарственным средством или контрольной средой как описано выше.
Добавляли4 мкМ DJA2 и 2 мМ АТР и быстро разбавляли люциферазу 1:100 до 5.4 нМ в
реакционной смеси, котору. инкубировали при 30 °С. На 60 минуте или в указанный
момент времени образцы разбавляли 2:25 в реагенте для люциферазного анализа
(Promega) и измеряли активность в люминометре Berthold Lumat LB9507.
[00506] Конкрурентный анализ Hsp70 с использованием гранул YK55. Лизаты
белков готовили с использованием 20 мМ буфера Tris с рН 7.4, содержащего 25 мМ NaCl, 0.1% лизирующего буфера NP-40. Экстракты клеток инкубировали в течение 3 ч при 4°С с указанными концентрациями растворимого конкурирующего соединения в 20 мМ буфере Tris с рН 7.4, содержащем 25 мМ NaCl, 0.1 % буфера NP-40 . В это время готовили YK55-гранулы путем инкубации анарозных гранул со стрептавидином (50 мкл) (Thermo Scientific) с YK55 (50 или 100 мкМ, как указано) при 4°С в течение 1 ч. Просле трехкратной промывки гранул буфером указанные лизаты, содержащие растворимое конкурентное соединение инкубировали с полученными УК55-гранулами. Пробы инкубировали при 4°С в течение ночи, промывали пять раз лизирующим буфером и наносили на полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия.
[00507] Конкурентный Поляризационный флуоресцентный анализа Hsp70
СуЗВ-К5: Измерения поляризации флюоресценции проводили с использованием черных 96-луночных микротитрационных планшетов (Corning # 3650), при этом и возбуждение и испускание происходили в верхней части лунки. Буфер для связывания в ФП-анализе Hsp70 FP содержал следующие компоненты: 25 мМ HEPES-K, рН=7.2, 20 мМ NaCl, 200 мкМ СаС12, ПО мМ КОАс, 2 мМ Mg(OAc)2, 0.01% NP40. Каждая лунка, учатствующая в анализе, содержала 20 мкг лизата клеток и YK-ингибитор в 75 мкл буфера. Смесь выдерживали на шейкере на шейкере в течение 10 мин, а затем инкубировали при 37 °С в течение 2 ч. В кажду лунку добавляли метку, получая конечную концентрацию ЗнМ Cy3B-YK5 и конечный объем 100 мкл. Затем осуществляли измерения на планшетном ридере Analyst GT (Molecular Devices, Sunnyvale, Калифорния, США). Использовали время интегрирования 100 мс, задавали высоту Z 3 мМ (середина). Задавали статическую поляризацию возбуждения и динамическую поляризацию испускания. Для суЗВ-GA использовали фильтр возбуждения на530 нМ и фильтр испускаяния на 580 нМ с дихроическим зеркалом 561 нм. Все значения поляризации флюоресценции выражали в миллиединицах поляризации (тР). Значения тР рассчитывали по уравнению тР = 1000 х
[(IS - ISB) - (IP - IPB)]/[(IS - ISB) + (IP - IPB)], где IS - это измеренное значение интенсивности параллельного испускания, a ISB и 7SP представляют соответствующие измеренные значения для фона (буфер). Общую флуоресценцию определяли как 2 х ТР +
[00508] Нативный гель-электрофорез. Клетки подвергали тепловому шоку в
течение 45 мин при 42 °С or treated указанным ингибитором или средой в течение 3 ч , а затем лизировали в 20 мМ буфере Hepes с рН 7.9, сдержащем 0.42 М NaCl, 1.5 мМ MgCb, 0.2 мМ ЭДТА, 25% глицеринового буфера. Семдесят пять мкг образца белка загружали на предварительный цикл с неденатурирующим полиакриламидным гелем (градиент, 4% концентрирующий гель, разделяющий гель от 5 од 20%) и разделяли в 50 мМ буфере Tris с рН 8.0, содержащем 0.38 М глициновый буфер для электрофореза, при 4°С в течение ночи. Гель предварительно уравновешивали с подвижным буфером (SDS-ПААГ) в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем белки электрофоретически переносили в 50 мМ буфере Tris, содержащий 380 мМ глицина, 0.1% SDS, 20% метанолового буфера, при 4°С на нитроцеллюлозную мембрану и блотировали на HSF-1.
[00509] Иммунопреципитация. Клетки собирали и лизировали в 20 мМ буфере Tris
с рН 7.4, содержащем 25 мМ NaCl, 0.1 % буфера NP-40 . Каждый образец содержал 500мкг общего белка. В каждый образец добавляли соответствующее антитело (ВВ70 для Hsp70 и Н9010 для Hsp90) (5 мкл) или нормальный IgG (5 мкл) (в качестве отрицательного контроля), а также агарозные гранулы с G-белком (30 мкл) (Upstate) и инкубировали при 4°С в течение ночи. Образцы промывали пять раз лизирующим буфером и наносили на полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия, после чего следовала стандартная процедура вестерн-блоттинга.
[00510] Химическая преципитация. Лизаты белков готовили с использованием 20
мМ буфера Tris с рН 7.4, содержащего 25 мМ NaCl, 0.1% лизирующего буфера NP-40. агарозные гранулы со стрептавидином (50 мкл) (Thermo Scientific) промывали три раза лизирующим буфером, добавляли YK55 в указанных концентрациях и инкубировали комплексы при 4°С в течение 1 ч. После трехкратной промывки буфером гранулы добавляли к указанному общему клеточному белку в буфере. Образцы инкубировали при 4°С в течение ночи, промывали пять раз лизирующим буфером и наносили на полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия.
[00511] Истощение Hsp70. Четыре мкл анти-Нзр70 антитела ВВ70 или нормального
мышиного IgG и 30 мкл суспензии агарозы с G-белком добавляли к 200 мкг белка лизата клеток MDA-MB-468 в 20 мМ буфере Tris с рН 7.4, содержащем 25 мМ NaCl, 0.1% буфера NP-40 . После инкубации при 4°С в течение 3 ч, образцы центрифугировали, собирали
супернатант, а осадок с гранулами отбрасывали. Эту процедуру повторяли дважды. YK55-
гранулы (100 мкМ YK55 добавляли к 50 мкл гранул со стрептавидином) готовили, как
описано выше, добавляли к супернатантам и и инкубировали при 4°С в течение ночи.
Гранулы промывали пять раз 20 мМ быфером Tris с рН 7.4, содержащим 25 мМ NaCl,
0.1% буфера NP-40, и наносили на полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия.
[00512] Ковалентное связывание. Клетки К562 указанным количеством YK55 в
течение указанного времени. Клетки собирали и лизировали в 20 мМ буфере Tris с рН 7.4, содержащем 25 мМ NaCl, 0.1 % буфера NP-40 . Экстракты клеток (500 мкг) в 100 мкл лизирующего буфера инкубировали с агарозными гранулами со стрептавидином в течение 1 ч при 4°С. Образцы промывали пять раз лизирующим буфером или буфером с высоким содеражнием соли (20 мМ Tris рН 7.4, 1М NaCl, 0.1 % NP-40) и подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Гели окрашивали сереборм в соответствии с процедурой изготовителя (Invitrogen) или переносили белки на нитроцеллюлозную мембрану с последующим иммуноблоттингом.
[00513] Протокол теста на необратимость связывания. Клетки MDA-MB-468
выращивали в 6-луночных планшетах до достижения примерно 80% непрерывности слой. Группы клеток обрабатывали YK5 (10 мкМ) или средой (ДМСО) в течение 2 ч. Одну группу клеток, обработанных YK5, затем стимулировали добавлением 100 нг/мл интерферона-у в течение 30 мин и готовили экстракты для анализа методом вестерн-блот. Другую группу клеток отмывали от соединения подогретой средой, инкубировали в течение 2 ч, снова промывали, инкубировали еще 2 ч, снова промывали и инкубировали в течение еще 4 ч. Затем эту группу клеток стимулировали интерфероном-у и готовили экстракты так же, как и для первой группы клеток.
[00514] Обработки циклогексимидом. Клетки обрабатывали циклогескимидом (в
конечной концентрации 100 мкг/мл) с добавлением среду или соединения согласно
настоящему изобретению в течение указанных промежутков времени. Клетки лизировали
как указано выше и полученные образцы анализировали методом вестерн-блот.
[00515] Клетки лизировали в 50 мМ буфере Tris с рН 7.4, содержащем 150 мМ NaCl
и 1% лизирующего буфера NP-40 . Нерастворимые в NP-40 фракции лизировали в 50 мМ буфере Tris с рН 7.4 и 2 % SDS и кипятили в течение 15 мин. Proteins were separated путем электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, после чего осуществляли стандартную процедуру вестерн-блоттинга. Блоты проявляли путем увторадиографии с истользованием детектирующей системы с усилением хемилюминесценции (GE Healthcare).
[00516] Денситометрия. Гели сканировали в программе Adobe Photoshop 7.0.1 и
проводили количественны денситометрический анализ с использованием программного обеспечения Un-Scan-It 5.1 (Silk Scientific, Orem, шт. Юта, США).
[00517] Скрининг с киназами. Для большинства анализов мученые киназой
штаммы фага Т7 выращивали параллельно в 24-луночных блоках в хозяйских клетках Е. coli, полученных из штамма BL21. E.coli выращивали до логарифмической фазы и инфицировали фагом Т7 из замороженного маточного раствора (кратность инфекции = 0.4) и инкубировали при встряхиваниипри 32°С до лизирования (90-150 мин). Лизаты центрифугировали (6,000 х g) и фильтровали (0.2мкМ) для удаления клеточных остатков. Оставльные киназы продуцировали в клетках НЕК-293 и затем метили ДНК для дкПЦР детектирования. Покрытые стрептавидином магнитные гранулы обрабатывали биотинилированными низкомолекулярными лигандами в течение 30 минут при комнатной температуре с получением смол для анализа с киназами. Покрытые лигандами блокировали избытком биотина и промывали блокирующим буфером (SeaBlock (Pierce), 1% БСА, 0.05 % Tween 20, 1 мМ DTT) хдля удаления несвязанного лиганда и снижения неспецифичного связывания фага. Реакционные смеси для связывания получали путем смешивания киназ, аффинных гранул с лигандами и исследуемых соединений в 1х связывающем буфере (20 % SeaBlock, 0.17х ФБР, 0.05 % Tween 20, 6 мМ DTT). Исследуемые соединения готовли как 40х маточные растворы в 100% ДМСО и разбавляли непосредственно в анализе. Все реакции проводили в полипропиленовых 384-луночных планшетах в конечном объеме 0.04 мл. Аналитические планшеты инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 часа, аффинные гранулы промывали промывочным буфером (1х ФБР, 0.05 % Tween 20). Затем гранулы ресуспендировали в элюционном буфере (1х ФБР, 0.05 % Tween 20, 0.5 мкМ небиотинилированного аффинного лиганда) и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 30 минут. Концентрацию кинах в элюатах измеряли путем количественной ПЦР. Оценка селективности KINOME scan's (S) представляет собой количественную меру селективности соединения. Ее рассчитывают путем деления числа киназ, которые связываются с соединением на общее число различных исследованных киназ за исключением мутантных вариантов. TREEspof(tm) запатентованное программное средство для визуализации данных, разработанное YJNOMEscan. Связывающиеся киназы показаны красными кружками, причем более крупные круги указывают на более высокую аффинность связывания. Дандрограмма киназ модифицирована и использована с разрешения компонии Science and Cell Signaling Technology, Inc.
[00518] Анализ ингибирования роста. Антипролиферативное действие
ингибиторов оценивали с использование красителям Аламар голубой. Этот реагент обесепечивает быстрое объективное измерение жизнеспособности культуры клеток, он задействует индикаторный краситель резазурин, обеспечивая возможность измерения метаболической способности клеток, что является индикатором жизнеспособности клеток. Вкратце, клетки высеваяют на 96-луночные планшеты Costar. В случае прикрепляющихся клеток (таких как SKBr3, MDA-MB-468, LNCaP, MRC5) используют ООО клеток/лунку. Для клеток, растущих в суспензии (таких как MOLM-13, Kasumi-1, OCI-Ly7, PBL) высевали 20000 клеток/лунку. Клетки осталвляли для инкубации в течение 24 ч при 37 °С перед обработкой лекарственным средством. Добавляли лекарственные средства добавляли в трипликатах в указанных концентрациях и инкубировали планшеты в течение 72 ч. Добавляли аламар голубой Alamar Blue (440 мкМ) и через 6 ч считывали планшеты с использованием Analyst GT (режим интенсивности флюоресценции, возбуждение 530нм, испускание 580нм с дихроическим зеркалом 560нм). Результаты анализировали с использование программного обеспечения Softmax Pro. Процент подавления клеточного роста рассчитывали путем сравнения показаний флюоресценции в обработанных клетках с контрольными, в расчете на исходную популяцию клеток (нулевой момент времени). IC50 расчитывали как концентрацию лекарственного средства, которая ингибирует рост клеток на 50%.
[00519] Апоптоз - Акридиновый оранжевый/бромид этидия. Апоптоз определяли
с использованием двойного окрашивания акридиновым оранжевым/бромидом этидия (АО/ЕВ). Акридиновый оранжевый поглощаетя как жинеспособными, так и нежизнеспособными клетками и испускает зеленую флюоресценцию при интеркалировании с двунитиевой нуклеиновой кислотой (ДНК) или красную флюоресценцию при связывании с однонитиевой нуклеиновой кислтой (РНК). Бромид этидия поглощается только неживыми клетками и испускает красную флюоресценцию при интеркалировании в ДНК. (1) Живые клетки имеют однородные зеленые ядра с организованной структурой. (2) Клетки ранней стадии апоптоза (которые еще имеют интактные мембраны, но в которых уже происходит расщепление ДНК) имеют зеленые ядра, но видна перинуклеарная конденсация хроматина в виде ярко-зеленых пятен или фрагментов. (3) Ядра клеток на поздней стадии апоптоза имеют цвет от оранжевого до красного с конденсированным или фрагментированным хроматином. (4) Некротические клетки имеют ядра равномерной окраски от оранжевого до красного цветк с организованной структурой. Вретце, клетки высевали на 20 мм чашки Falcon и инкубировали в течение дополнительных 24 ч. Добавляли лекарственные средства в
указанных концентрациях на 24 или 48 ч, клетки промывали ФРБ и трипсинизировали. После окрашиваниа акридиновым оранжевым и бромидом эридия клетки визуализировали с использованием флюоресцентного микроскопа (Zeiss Axiovert 40 CFL) и подсчитывали. Определяли процент апоптотических клеток по 200-300 клеткам, подсчитанным в каждой группе.
[00520] Окрашивание клеток иодидом пропидия и анализ методом поточной цитометрии. Присутствие клеток с фрагментированной ДНК (индикатор апоптоза) можно также определить как клетки, содержащие меньше 2N ДНК (npe-Gi). Для анализа содержания ДНК клетки промывали ледяным ФБР и фиксировали в 70% этаное в течение 1 ч при 4°С. Фиксированные клетки центрифугировали при 1,200 об./мин в течение 5 минут и окрашивали путем инкубации в ФРР, содержащем 50 мкг/мл иодида пропидия (Sigma-Aldrich) и 50 мкг/мл рибонуклеазы А без примеси ДНКазы (Sigma-Aldrich) в течение 1ч при комнатной температуре. Содержание ДНК анализировали методом поточной цитометрии в FACScan (BD Biosciences). С использованием программы Cell Quest Pro (Becton Dickinson) собирали данные не менее чем по 10000 клеток и анализировали при помощи FlowJo (Ashland, OR).
[00521] Вытеснение метки. Клетки MDA-MB-468 подвергали предварительной
обработке 100 нг/мл ИФНу в течение 30 мин, затем добавляли 10 мкМ YK5 в течение 30 мин, после чего следовала обработка 500 нМ стауроспорина или 1 мМ №зУ04. Клетки собирали в указанные моменты времени и лизировали в 50 мМ буфера Tris с рН 7.4, содержащего 150 мМ NaCl и 1% лизирующего буфера NP-40, и подвергали анализу методом вестерн-блот.
[00522] Анализ связывания ДНК активированным STAT1 DNA. Способность
STAT1 к связыванию ДНК исследовали в тесте, основанном на методе иммуноферментного анализа (TransAM, Active Motif, Carlsbad, CA), в соответствии с инструкциями изготовителя. Вкратце, 5x106 клеток MDA-MB-468 обрабатывали интерфероном-у (100 нг/мл), YK5 (10 мкМ) или комбинацией интерферона-у (100 нг/мл) с YK5 (1, 5 и 10 мкМ). Ten micrograms лизатов клеток добавляли в лунки, содержащие заранее адсорбированные консенсусные олигонуклеотиды STAT (5'-TTCCCGGAA-3'). Для лунок, обработанных интерфероном-у, проводили анализ в присутствии или в отсутствие 20 пмоль конкурентных олигонуклеотидов, включающих либо природный, либо мутантный консенсусный сайт связывания STAT. Обработанные интерфероном клетки HeLa (5 мкг на лунку) использовали в этот анализе в качестве положительного контроля.. После инкубации и промывки в каждую лунку добавляли поликлональное антитело кролика к STATla (1:1000, Active Motif), а затем конъюгированное с
пероксидазой хрен вторичное антитело к AT кролика (1:1000, Active Motif). После добавления субстрата пероксидазы измеряли поглощение при 450 нМ с длиной волны сравнения 655 нМ (Synergy4, Biotek, Winooski, США). В этом тесте поглощение прямо пропорционально количеству ДНК-связанного фактора транскрипции, присутствующему в образце. Эксперименты проводили в четырех повторах. Результаты выражали в виде средних значений поглощения со стандартной ошибкой среднего. Р-значения получали по двустороннему Т-критерию.
[00523] Иммунофлюоресцентная микроскопия. Клетки MDA-MB-468
обрабатывали 100 нг/мл интерферона у. в течение 30 мин, затем добавляли соединение согласно настоящему изобретению еще на 30 мин. Клетки фиксировали в формальдегиде (4%) при комнатной температуре в течение 15 мин, а затем промывали 1 х TBS (3-5 мин). Клетки нейтрализовали в течение 5 минут 0.1% борогидридом натрия в 1 х TBS, споласкивали как описано ранее и инкубировали с блокирующем раствором, содержащим 5.5 % нормальной телячье сыворотки и 0.1% буфера Triton Х-100 при комнатной температуре для уменьшения неспецифического связывания. Затем клеткиинкубировали с перфичным антителом (анти-фосфо-STATl (Y701); Cell Signaling) в течение 1 ч при комнатной температуре с последующими промывками и инкубированием с мечеными FITC вторичными антителами козы к антителам кролика - (Invitrogen, Camarillo, СА, США). Стекла погружали в среду для флуоресценции Vectashield с 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) для ядерного окрашивания (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, СА). Флуоресценциюю регистрировали с использованием инвертирующего микроскопа Zeiss Axiovert 200М с наборами фильтров для DAPI флюоресцин изотиоцианата (FITC) и объективом, установленным на 40х.
[00524] Анализ клеточной инвазии. Способность клеток MDA-MB-231 к инвазии
исследовали с использованием анализа на инвазию матригеля в камере Бойдена MDA-MB-231. Клетки MDA-MB-231 высевали в количестве 5х105 клеток/лунку в 6-луночный планшет (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), сначала обрабатывали в течение 24 ч диметилсульфоксидом и YK5 (1 мкМ). Жизнеспособность клеток оценивали по вытеснению трипанового голубого. В целом, клетки окрашивали трипановым голубым и подсчитывали вручную на гемоцитометре. Живые клетки, представляющие собой клетки, которые вытесняют трипановый голубой, три раза промывали бессывороточной средой DMEM и ресуспендировали в 0.3 мл бессывороточной DMEM. В верхнее камеры Бойдена отделение камеры помещали равные количества (2x105) живых клеток, а в нижнюю часть помещали среду для обработки, содержащую 10% ФБС в DMEM. Камеры Бойдена содержали полиэтиленовые 8 мкМ трековые мембраны, покрытые вкладышами из
матригела (BD Biosciences, San Jose, СА). После инкубации клеток в течение 20 ч при
37°С, клетки, инвазировавшие нижнюю часть мембраны фиксировали 100% метанолом в
течение 2 мин, окрашивали 0.5% кристальном фиолетовом в течение 2 мин, споласкивали
водой и исследовали под светлопольным микроскопом. На каждой мембрани
подсчитывали клетки в десяти полях с использованием 100-кратного объектива.
[00525] Анализа апоптоза с активцией каспазы 3/7. В черные 96-луночные
планшеты (Corning 3603) высевали клетки за исключением ряда для определения фона (без клеток) с 50мкл среды и оставляли в инкубаторе (37С, 5% СОг), чтобы обеспечить уравновешивание и прикрепление клеток. Соединения в 50 мкл среды добавляли на указанные промежутки времени. В каждую лунку добавляли ЮОмкл аналитического буфера (ЮмМ HEPES (рН. 7.5), 2мМ ЭДТА, 0.1% CHAPS, 0.1мг/мл фенилметансульфонилфторида (PMSF), полнуюсмесь ингибиторов протеаз (Complete Protease Inhibitor Mix, Roche 1 697 498)), содержащую Z-DEVD-R110 (Molecular Probes R22120), интенсивность влюоресценции измеряли на приборе Analyst (Испускание 485, возбуждение при 530).
[00526] Химическая преципитация и протеомный анализ. Лизаты белков
готовили с использованием 20 мМ буфера Tris (рН 7.4), содержащего 25 мМ NaCl, 0.1% лизирующего буфера NP-40. Агарозу со страптавидином (Thermo Scientific) трижды промывали лизирующим буфером, добавляли YK55 (100 мкМ) и инкубировали комплексы при 4°С в течение 1 ч. После трехкратной промывки буфером гранулы добавляли к 500мкг клеточного белка в буфере. Образцы инкубировали при 4°С в течение ночи, промывали пять раз лизирующим буфером и наносили на полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Гели окрашивали с использованием набора SilverQuest Silver Staining (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Полосы с белком вырезали и после промывки водой гели нарезали на кусочки размером 1 мм , восстанавливали с использованием 10 мМ DTT в 100 мМ NH4HCO3 при 56°С в течение 30 мин, алкилировали 55 мМ раствором иодацетамида в 100 мМ NH4HCO3 при комнатной температуре в темноте в течение 20 мин, а затем расщепляли трипсином (13 нг/мкл) при 37°С в течение ночи. Белки экстрагировали в 100-200 мкл смеси 66.6% ацетонитрил/5% муравьиная кислота, и уменьшали объем объединенных пептидов до ~10 мкл в концентраторе, после чего проводили масс-спектрометрический анализ. Анализ методом жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS) в лаборатории протеомики медицинского колледжа (Вейл Корнелл, WCMC) проводили с использованием хроматографа 1100 серии, соединенного с масс-спектрометром с ионной ловушкой ЖХ XCT plus (Agilent Technologies, Palo Alto, СА). Система оборудована
интерфейсом Agilent Chip Cube и наборной силиконовой " колонкой-чипом", которая
включает обогащающую колонку С18, разделительнюу колонку С18 и устройство для
нанораспыления. Продукты расщепления белка в геле загружали и обессполивали на
обогащающей колонке при скорости потока 4 мкл/мин, а затем разделяли при сукорости
потока 0.35 мкл/мин на колонке ZORBAX 300 С18 40 размером мМ х 75 мкМ (Agilent).
Градиент для ЖХ составлял от 3 до 45% Растворителя В в течение 25 мин, а затем от 45 до
90% Растворителя В в течение 5 мин. Растворитель А подвижная фаза) состоял из 0.1%
муравьиной кислоты в 3% ацетонириле, а ратворитель В состояит из 0.1% муравьиной
кислоты в 90% ацетонитриле. Масс-спектры снимали в режиме регистрации
положительно заряженных ионов с автоматизированной результат-зависимой тандемной
масс-спектроскопией для четырех ионов с максимальной интенсивностью на
предварительных спектрогрммах. Для обработки данных ЖХ-МС/МС и поиска белков с
базах данных с целью идентификации использовали ПО SPECTRUM MILL (Agilent)
[00527] Химическая преципитации и масс-спектрометрический анализ: 1:
Нано-ЖХ-МС/МС. Клетки К562 обрабатывали в течение 4 ч 100 мкМ YK55 или D-биотина. Клетки собирали и лизировали в 20 мМ буфере Tris (рН 7.4), содержащем 25 мМ NaCl, 0.1 % буфера NP-40 . Обработанные YK55 экстракты клеток (500 мкг) в 100 мкл лизирующего буфера инкубировали с агарозными гранулами со стрептавидином в течение 1 ч при 4°С. Обработанные D-биотином экстракты клеток (500 мкг) инкубировали в течение 1 ч при 4°С с антителом ВВ70 (4 мкл), присоединенным к агарозным гранулам с G-белком (30 мкл) (Upstate). Гранулы промывали буфером с высоким содержанием соли(1 М NaCl), белки элюировали путем кипячения в 2% SDS, разделяли на денатурирующем гели и окрашивали красителем Кумасси в соответствии с процедурой изготовителя (Biorad). Разеделенные в геле белки из фракций, обработанных YK55 и связанных ВВ70 расщепляли трипсином и аклилировали с использованием бета-меркаптоэтанола и акриламида, как опсиано (10). Продукты расщепления трипсином в геле подвергали процедуре микроочистки в объеме слоя 2 мкл Poros 50 R2 (Applied Biosystems - 'AB') обращено-фазовых гренул, упакованных в наконечник эппендорфа для загрузки геля, в кэлюент разбавляли 0.1% муравьиной кислотой. Анализ очищенных совместно объединенных продуктов просодили с использованием масс-спектрометра OrbiTrap (Thermo Scientific LTQ XL Linear Ion Trap), оборудованного устройством для получения ионного нано-спрея. Смеси пептидов (в 20 микролитрах) are loaded onto а захватывающую предколонку (картридж 0.3х5-мм РерМар С18 100 производства LC Packings) с использованием системы nanoMDLC (Eksigent Technologies, Inc) при скорости потока 20 микрол/мин. После промывки поток через предколонку обращали и элюировали
пептиды градиентом 5-45% MeCN (в 0.1% уксусной кислоты) в течение 85 мин при скорости потока 200 нь/мл, на и через капиллярную колонку из кварцевого стекла размером 75 микрон х 15-см РерМар С18 (LC Packings); элиант направляли на 75-микронную (с отверстием 10 микрон) кварцевую иглу для электроспрея (New Objective). Напряжение на игле для ионизации электроспреем (ESI) устанавливали на значение 1800 В. Масс-анализатор работал в автоматическом режиме регистрации МС/МС данных в зависимости от информации. Энергию столкновения амтоматически регулировали в соответствии со значением m/z для ионов-предшественников, выбранных для тандемной масс-спектрометрии. Первоначальную идентификацию белка по данным ЖХ-МС/МС выполняли с использованием поисковой системы Mascot (Matrix Science, версия 2.2.04; www.matrixscience.com) и баз данных NCBI (Национальня медицинская библиотека Национальных институтов здравоохранения США) и IPI (Международный католог белков, EBI, Хинкстон, Великобритания). Допускалось два пропущенных сайта расщепления, допуск по массе иона-предшественника = Юррт, допуск по массе иона = 0.8 Да, допускались модификации белка для Met-оксид, Cys-акриламид и N-концевого ацетилирования. Оценку MudPit обычно проводили с включенной опцией 'require bold red' (требуется жирный красный) и использованием порога значимости р <0.01. Результаты для отдельных белков (или 'спектральные числа') и процентные значения перекрывания последовательностей для всех идентифицированных белков экспортировали в Excel для дальнейшего анализа.
[00528] Рефлектронная время-пролётная тандемная МС с ионизацией лазерной
десорбцией с использованием матрицы (MALDI-reTOF-MS/MS): Полученные пулы пептидо из продуктов расщепления в геле анализировали методом рефлектронной время-пролётной тандемной МС с ионизацией лазерной десорбцией с использованием матрицы (MALDI-reTOF) на приборе BRUKER UltraFlex TOF/TOF (Bruker Daltonics; Bremen, Germany). Выбранные экспериментальныне массы (m/z) использовали для поиска человеческогосегмента в неизбыточнойбазе данных о белках ('NR'; -223,695 записей; Нициональный центр биотехнологической информации, Бефеста, Мерилэнд, США) с использованием программа Mascot Peptide Mass Fingerprint (PMF, версия 2.2.04 для Windows (www.matrixscience.com)), с ограничением точности по массе не менее 35 ррт имаксимальным разрешенныем значением пропущенных сайтов расщепления два на пептид. Эту процедуру использовали для подтверждения идентичности белков и для определения положения различий между трипсиновыми картами белка для модифицированных (дериватизированных цистеинакриламидом) пепридов. Дифференциальные значения пиков m/z совпадали с идентифицированными белками с
учатом допуска на примутствие дериватизирующих групп на 820.34 (плюс лекарственное средство YK55-drug) и 594.26 Дальтонах (плюс YK55 -без биотиновой группы). Для подтверждения наблюдаемых пептидов с расчетными неизотопными фрагментами, совпадающими с экспериментальными значениями, выполняли масс-спектрометрическое секвенирование выбранных пептидов методом анализа MALDI-TOF/TOF (MS/MS) на тех жа образцах с использованием прибора UltraFlex в режиме 'LIFT'. Фрагменты ионного спектра использовали для поиска в NR с использованием программы MASCOT MS/MS Ion Search (Matrix Science) и онлайн пакета для протеомных исследований, доступного по адресу http://db.systemsbiology.net:8080/proteomicsToolkit/FragIonServlet.html. Рещультаты проверяли вручную. Все экспериментальные результаты, полученные таким методом, проверяли путем сравнения сгенерированных на компьютере фрагментов рядов ионов предсказанных пептидов, полученных при расщеплении трипсином, с экспериментальными результатами тандемной масс-спектроскопии.
[00529] Ксенографта опухолей. Самок бестимусных мышей пи/пи athymic в
возрасте шести недель получили в Taconic (Farms INC). Эксперименты проводили по протоколу, одобренному Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных, и при соблюдении руководств по правильному и гуманному использованию животных в исследованиях. MDA-MB-468 (lxlO7 клеток) подкожно имплантировали в правый бок мышей при помощи иглы 20 калибра и оставляли для роста. Перед введением готовили препарат из раствор YK5HC1 в стерильной воде. Мышам делали внутриопухолевые инъекции (в.о.) 20 мкл раствора YK5 в режиме день через день. Концентрацию вводимого YK5 уменьшали пропорционально объёму опухоли, и поддерживали на уровне 10 мкМ до конца экспериментального периода. Во время терапии все мыши с питьевой водой получали аугментин (амоксициллин/клавуланат калия; SmithKline Beecham). Мышей выводили из эксперимента эвтаназией С02. Мышам (п=5) имеющим опухоли MDA-MB-468, достигающие объёма 100-150 мм3, вводили лекраственное средство внутрь опухоли (в.о.) через день. Объём опухоли определяли с помощью штангенциркуля с нониусом, и вычисляли как произведение длина х ширина2 х 0.4. Объём опухоли в определённые дни выражали как срединное значение объёмов опухолей ± среднеквадратичное отклонение, рассчитанное для групп мышей. Процентное (%) значение замедления роста опухоли измеряли в послений день исследования для мышей, получавших лечение активным веществом по сравнению с мышами, получавшими лечение инертным веществом и вычисляли как 100 х {1-[(Получавшие Лечениепоследний день - Получавшие лечениеДеНь 1)/(КонтрольныеПоследний день -
Контрольные День l)]}.
[00530] Статистические данные. Данные анализировали по двухвыборочному t-
критерию для независимых выборок, как реализовано в программе GraphPad Prism (версия 4; GraphPad Software). Р-значение менее 0.05 считали существенным. Если не указано другое, данные представляли как среднее±среднеквадратичное отклонение в двойных или тройных посторностях. Погрешности представляют собой среднеквадратичное отклонение от среднего. Если представлено одно значение, данные представляют два отдельных эксперимента.
Пример 13: Лечение пациента
[00531] Пациент болен раком молочной железы. Пациентке вводят
фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически эффективное количество вещества YK5, или связанного с ним соединения по существу данного изобретения. Ожидается, что у пациентки наступит улучшение состояния или излечение от рака молочной железы, и/или замедление и/или прекращение пролиферации опухоли молочной железы.
Пример 14: Лечение пациента
[00532] Пациент болен лейкемией. Пациенту вводят фармацевтическую
композицию, содержащую фармацевтически эффективное количество вещества YK5, или связанного с ним соединения по существу данного изобретения. Ожидается, что у пациента наступит улучшение состояния или излечение от лейкемии, и/или замедление и/или прекращение пролиферативного процесса лейкемии.
[00533] Ценно, что определённые характерные особенности описанного в
настоящей заявке объекта изобретения, которые для лучшего понимания описаны в контексте различных вариантов осуществления, возможно также комбинировать в одном варианте осуществления. В свою очередь, различные характерные особенности описанного в настоящей заявке объекта изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта осуществления, возможно использовать по отдельности или в любых подходящих комбинациях.
[00534] При таком описании настоящего объекта изобретения, очевидно, что он
может быть модифицирован или изменён различными способами. К таким модификациям или изменениям не следует относиться как к отступлению от сущности и объёма настоящего объекта изобретения, и все такие модификации и изменения предполагаются включёнными в объём описанного далее по существу изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ НУКЛЕОТИДОВ И/ИЛИ АМИНОКИСЛОТ (К ЗАЯВКЕ № 2 012 90062)
<110> МЕМОРИАЛ СЛОУН-КЕТТЕРИНГ КЭНСЭ СЕНТР
<12 0> СОЕДИНЕНИЯ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
<130> 30002-PCT
<150> 61/272,101 <151> 2009-08-17
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 641
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Ala Lys Ala Ala Ala Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser
1 5 10 15
Cys Val Gly Val Phe Gln His Gly Lys Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp
20 25 30
Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu
35 40 45
Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Leu Asn Pro Gln
50 55 60
Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Gly Asp
65 70 75 80
Pro Val Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Gln Val Ile Asn
85 90 95
Asp Gly Asp Lys Pro Lys Val Gln Val Ser Tyr Lys Gly Glu Thr Lys
100 105 110
Ala Phe Tyr Pro Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu Thr Lys Met Lys
115 120 125
Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Tyr Pro Val Thr Asn Ala Val Ile
130 135 140
Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp
145 150 155 160
Ala Gly Val Ile Ala Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro
165 170 175
Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Arg Thr Gly Lys Gly Glu
180 185 190
Arg Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser
195 200 205
Ile Leu Thr Ile Asp Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly
210 215 220
Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Leu Val Asn His
225 230 235 240
Phe Val Glu Glu Phe Lys Arg Lys His Lys Lys Asp Ile Ser Gln Asn
245 250 255
Lys Arg Ala Val Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys Glu Arg Ala Lys Arg
260 265 270
Thr Leu Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ser Leu Glu Ile Asp Ser Leu Phe
275 280 285
Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu
290 295 300
Leu Cys Ser Asp Leu Phe Arg Ser Thr Leu Glu Pro Val Glu Lys Ala
305 310 315 320
Leu Arg Asp Ala Lys Leu Asp Lys Ala Gln Ile His Asp Leu Val Leu
325 330 335
Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Val Gln Lys Leu Leu Gln Asp
340 345 350
Phe Phe Asn Gly Arg Asp Leu Asn Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala
355 360 365
Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Met Gly Asp Lys
370 375 380
Ser Glu Asn Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Ala Pro Leu Ser
385 390 395 400
Leu Gly Leu Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Ala Leu Ile Lys Arg
405 410 415
Asn Ser Thr Ile Pro Thr Lys Gln Thr Gln Ile Phe Thr Thr Tyr Ser
420 425 430
Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu Arg Ala
435 440 445
Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Arg Phe Glu Leu Ser Gly Ile
450 455 460
Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile
465 470 475 480
Asp Ala Asn Gly Ile Leu Asn Val Thr Ala Thr Asp Lys Ser Thr Gly
485 490 495
Lys Ala Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu Ser Lys
500 505 510
Glu Glu Ile Glu Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Lys Ala Glu
515 520 525
Asp Glu Val Gln Arg Glu Arg Val Ser Ala Lys Asn Ala Leu Glu Ser
530 535 540
Tyr Ala Phe Asn Met Lys Ser Ala Val Glu Asp Glu Gly Leu Lys Gly
545 550 555 560
Lys Ile Ser Glu Ala Asp Lys Lys Lys Val Leu Asp Lys Cys Gln Glu
565 570 575
Val Ile Ser Trp Leu Asp Ala Asn Thr Leu Ala Glu Lys Asp Glu Phe
580 585 590
Glu His Lys Arg Lys Glu Leu Glu Gln Val Cys Asn Pro Ile Ile Ser
595 600 605
Gly Leu Tyr Gln Gly Ala Gly Gly Pro Gly Pro Gly Gly Phe Gly Ala
610 615 620
Gln Gly Pro Lys Gly Gly Ser Gly Ser Gly Pro Thr Ile Glu Glu Val
625 630 635 640
Asp
<210> 2
<211> 382
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Ala Lys Ala Ala Ala Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser
1 5 10 15
Cys Ile Gly Val Phe Gln His Gly Lys Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp
20 25 30
Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu
35 40 45
Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Leu Asn Pro Gln
50 55 60
Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Gly Asp
65 70 75 80
Pro Val Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Gln Val Ile Asn
85 90 95
Asp Gly Asp Lys Pro Lys Val Gln Val Ser Tyr Lys Gly Glu Thr Lys
100 105 110
Ala Phe Tyr Pro Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu Thr Lys Met Lys
115 120 125
Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Tyr Pro Val Thr Asn Ala Val Ile
130 135 140
Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp
145 150 155 160
Ala Gly Val Ile Ala Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro
165 170 175
Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Arg Thr Gly Lys Gly Glu
180 185 190
Arg Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser
195 200 205
Ile Leu Thr Ile Asp Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly
210 215 220
Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Leu Val Asn His
225 230 235 240
Phe Val Glu Glu Phe Lys Arg Lys His Lys Lys Asp Ile Ser Gln Asn
245 250 255
Lys Arg Ala Val Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys Glu Arg Ala Lys Arg
260 265 270
Thr Leu Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ser Leu Glu Ile Asp Ser Leu Phe
275 280 285
Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu
290 295 300
Leu Cys Ser Asp Leu Phe Arg Ser Thr Leu Glu Pro Val Glu Lys Ala
305 310 315 320
Leu Arg Asp Ala Lys Leu Asp Lys Ala Gln Ile His Asp Leu Val Leu
325 330 335
Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Val Gln Lys Leu Leu Gln Asp
340 345 350
Phe Phe Asn Gly Arg Asp Leu Asn Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala
355 360 365
Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Met Gly
370 375 380
<210> 3
<211> 605 <212> PRT
<213> Escherichia coli
<400> 3
Met Gly Lys Ile Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys Val
1 5 10 15
Ala Ile Met Asp Gly Thr Thr Pro Arg Val Leu Glu Asn Ala Glu Gly
20 25 30
Asp Arg Thr Thr Pro Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Gln Asp Gly Glu Thr
35 40 45
Leu Val Gly Gln Pro Ala Lys Arg Gln Ala Val Thr Asn Pro Gln Asn
50 55 60
Thr Leu Phe Ala Ile Lys Arg Leu Ile Gly Arg Arg Phe Gln Asp Glu
65 70 75 80
Glu Val Gln Arg Asp Val Ser Ile Met Pro Phe Lys Ile Ile Ala Ala
85 90 95
Asp Asn Gly Asp Ala Trp Val Glu Val Lys Gly Gln Lys Met Ala Pro
100 105 110
Pro Gln Ile Ser Ala Glu Val Leu Lys Lys Met Lys Lys Thr Ala Glu
115 120 125
Asp Tyr Leu Gly Glu Pro Val Thr Glu Ala Val Ile Thr Val Pro Ala
130 135 140
Tyr Phe Asn Asp Ala Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp Ala Gly Arg Ile
145 150 155 160
Ala Gly Leu Glu Val Lys Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala
165 170 175
Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Thr Gly Asn Arg Thr Ile Ala Val
180 185 190
Tyr Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Ile Ser Ile Ile Glu Ile Asp
195 200 205
Glu Val Asp Gly Glu Lys Thr Phe Glu Val Leu Ala Thr Asn Gly Asp
210 215 220
Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Ser Arg Leu Ile Asn Tyr Leu
225 230 235 240
Val Glu Glu Phe Lys Lys Asp Gln Gly Ile Asp Leu Arg Asn Asp Pro
245 250 255
Leu Ala Met Gln Arg Leu Lys Glu Ala Ala Glu Lys Ala Lys Ile Glu
260 265 270
Leu Ser Ser Ala Gln Gln Thr Asp Val Asn Leu Pro Tyr Ile Thr Ala
275 280 285
Asp Ala Thr Gly Pro Lys His Met Asn Ile Lys Val Thr Arg Ala Lys
290 295 300
Leu Glu Ser Leu Val Glu Asp Leu Val Asn Arg Ser Ile Glu Pro Leu
305 310 315 320
Lys Val Ala Leu Gln Asp Ala Gly Leu Ser Val Ser Asp Ile Asp Asp
325 330 335
Val Ile Leu Val Gly Gly Gln Thr Arg Met Pro Met Val Gln Lys Lys
340 345 350
Val Ala Glu Phe Phe Gly Lys Glu Pro Arg Lys Asp Val Asn Pro Asp
355 360 365
Glu Ala Val Ala Ile Gly Ala Ala Val Gln Gly Gly Val Leu Thr Gly
370 375 380
Asp Val Lys Asp Val Leu Leu Leu Asp Val Thr Pro Leu Ser Leu Gly
385 390 395 400
Ile Glu Thr Met Gly Gly Val Met Thr Thr Leu Ile Ala Lys Asn Thr
405 410 415
Thr Ile Pro Thr Lys His Ser Gln Val Phe Ser Thr Ala Glu Asp Asn
420 425 430
Gln Ser Ala Val Thr Ile His Val Leu Gln Gly Glu Arg Lys Arg Ala
435 440 445
Ala Asp Asn Lys Ser Leu Gly Gln Phe Asn Leu Asp Gly Ile Asn Pro
450 455 460
Ala Pro Arg Gly Met Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala
465 470 475 480
Asp Gly Ile Leu His Val Ser Ala Lys Asp Lys Asn Ser Gly Lys Glu
485 490 495
Gln Lys Ile Thr Ile Lys Ala Ser Ser Gly Leu Asn Glu Asp Glu Ile
500 505 510
Gln Lys Met Val Arg Asp Ala Glu Ala Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys
515 520 525
Phe Asp Glu Leu Val Gln Thr Arg Asn Gln Gly Asp His Leu Leu His
530 535 540
Ser Thr Arg Lys Gln Val Glu Glu Ala Gly Asp Lys Leu Pro Ala Asp
545 550 555 560
Asp Lys Thr Ala Ile Glu Ser Ala Leu Thr Ala Leu Glu Thr Ala Leu
565 570 575
Lys Gly Glu Asp Lys Ala Ala Ile Glu Ala Lys Met Gln Glu Leu Ala
580 585 590
Gln Val Ser Gln Lys Leu Met Glu Ile Ala Gln Gln Gln
595 600 605
<210> 4
<211> 120
<212> PRT
<213> Caenorhabditis elegans
<400> 4
Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro
1 5 10 15
Arg Gly Ser His Met Gly Leu Glu Ser Tyr Ala Phe Asn Leu Lys Gln
20 25 30
Thr Ile Glu Asp Glu Lys Leu Lys Asp Lys Ile Ser Pro Glu Asp Lys
35 40 45
Lys Lys Ile Glu Asp Lys Cys Asp Glu Ile Leu Lys Trp Leu Asp Ser
50 55 60
Asn Gln Thr Ala Glu Lys Glu Glu Phe Glu His Gln Gln Lys Asp Leu
65 70 75 80
Glu Gly Leu Ala Asn Pro Ile Ile Ser Lys Leu Tyr Gln Ser Ala Gly
85 90 95
Gly Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Gly Gly Ala Ala Gly Gly Ala Gly
100 105 110
Gly Pro Thr Ile Glu Glu Val Asp 115 120
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Arg Phe His Asp Leu Leu Ser Gln Leu Asp Asp Gln Tyr Ser Arg Phe
1 5 10 15
<210> 6
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Arg Phe Asn Gln Ala Gln Ser Gly Asn Ile Gln Ser Thr Val Met Leu
1 5 10 15
Asp Lys Gln
<210> 7
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Arg Phe Asn Gln Ala Gln Ser Gly Asn Ile Gln Ser Thr Val Met Leu
1 5 10 15
Asp Lys Gln
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Arg Gly Leu Asn Val Asp Gln Leu Asn Met Leu Gly Glu Lys Leu
1 5 10 15
<210> 9
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Lys Leu Leu Gly Pro Asn Ala Ser Pro Asp Gly Leu Ile Pro Trp Thr
1 5 10 15
Arg Phe
<210> 10
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Lys Ser Leu Glu Asp Leu Gln Asp Glu Tyr Asp Phe Lys Cys
1 5 10
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Lys Thr Glu Leu Ile Ser Val Ser Glu Val His Pro Ser Arg Leu
1 5 10 15
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Lys Val Met Ala Ala Glu Asn Ile Pro Glu Asn Pro Leu Lys Tyr
1 5 10 15
Формула 2а
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, №1802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN.
2. Соединение формулы 2а'
Y Y
Y Y
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где:
каждый X и Y независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -NR4R5; группа -С(0)Яб; группа -(этокси)п-Рчб, где п равно 1-12; возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; возможно замещенная амино-группа; нитро-группа; и карбокси-группа;
R4 и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; и -С(О) Re; и
каждый Re независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; и алкилакрилатная группа (такая как этилакрилат).
NR4R5
2а"
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
каждый Ri независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -C(0)R6; и группа -(этокси)п-R6, где п равно 1-12;
R2, R3, R4, и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -C(0)R6; и возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; и
X выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая (например, 4-алкилпиперазин), арильная или гетероарильная группа; галоген; возможно замещенная С2-22 ацильная группа; группа -NR4R5; группа -C(0)R6; группа -(этокси)п-Рч?, где п равно 1-12; возможно замещенная алкоксикарбонильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; возможно замещенная амино-группа; нитро-группа; и карбокси-группа; и
каждый Re независимо выбран из группы, состоящей из следующего: возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; возможно замещенная алкокси-группа; и алкилакрилатная группа (такая как этилакрилат);
при условии, что X не содержит мостиковой системы циклов.
4. Соединение по п. 3, в котором:
каждый Ri независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; и возможно замещенный линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил;
R2, R3, R4 и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из следующего: Н; возможно замещенный линейный или разветвленный С1-С6 алкил; и -С(О) Re, причем R6 представляет собой замещенный линейный или разветвленный С1-С6 алкил , алкенил или алкинил; и
X выбран из группы, состоящей из следующего: an возможно замещенная линейная или разветвленная алкильная, алкенильная или алкинилтная группа; возможно замещенная карбоциклическая, гетероциклическая, арильная или гетероарильная группа; и галоген.
5. Соединение по п. 4 или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
каждый Ri независимо выбран из группы, состоящей из следующего: линейный или разветвленный С1-С6 алкил и замещенный линейный или разветвленный С1-С6 алкил.
6. Соединение по п. 4 или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
каждый Ri независимо выбран из метила и этила; NR2R3 представляет собой NH2;
NR4R5 представляет собой NHC(0)-C1-C6 алкил или NHC(0)-C2-C6 алкенил; и
X представляет собой кольцо пиперазина, связанное по атому азота, и кольцо пиперазина возможно содержит в качестве заместителя галоген, галоалкил или линейный или разветвленный С1-С6 алкил.
7. Соединение по п. 3 или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
все Ri идентичны или различны и представляют собой метил или этил; и R2, R3 и R4 каждый представляет собой Н;
R5 представляет собой -С(0)-метил, -С(0)-этил или -С(0)-этенил;
X представляет собой пиперазин, 4-метилпиперазин-1-ил или 4-(2-(2-(2-(2-
гидроксиэтокси)этокси)этокси)этил)пиперазин-1 -ил.
W-i
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
9. Соединение формулы 4а
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
10. Соединение формулы 5а
Формула 5а
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо,
МН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
Формула 6а
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, CH2, CHR, CRR, CO, O, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, NHS02aлкeнил, -ГЧНСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
12. Соединение формулы 7а
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Х5-Х9 независимо выбраны из следующего: СН, несущий заместители С и несущий заместители N;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино,
диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
13. Соединение формулы 2Ь
Формула 2Ь
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, и при этом R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
14. Соединение формулы ЗЬ
Формула ЗЬ
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, и при этом R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и
незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, МНБ02алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
15. Соединение формулы 4Ь
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
16. Соединение формулы 5Ь
Формула 5b
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, wherein R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧНБОгалкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси,
алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -№НСОалкенил, -№НСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
17. Соединение формулы 6Ь
Формула 6Ь
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Хю т Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, ТЧН802алкенил, -ТЧНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил,
замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -№Н802алкенил, -ТчГНСОалкенил, -ТчГНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
18. Соединение формулы 7Ь
Формула 7Ь
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, в котором:
Хю и Хп независимо выбраны из следующего: СН, СН2, NH, NR', О и S с сохранением ароматичности, причем R' представляет собой цепь алкила или замещенного алкила;
Y представляет собой S, SO, S02, СН2, CHR, CRR, СО, О, NH или NR, причем R представляет собой цепь низшего алкила или алкилокси;
Z выбран из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино,
циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, МНБ02алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, -СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN;
Wi и W2 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или Wi и W2 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца; и
W3 и W4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из следующего: водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, галоген, гидроксил, нитро, циано, арилокси, алкокси, галогенированный алкокси, алкенилокси, гидроксиалкил, амино, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, ариламино, диариламино, ациламино, карбамил, замещенная и незамещенная амидо-группа, алкиламидо, алкилсульфонамидо, сульфонамидо, -МН802алкенил, -МНСОалкенил, -МНСОалкинил, -СОалкенил, СОалкинил, тригалоуглерод, тиоалкил, БОг-алкил, -СОО-алкил, -СОалкил и алкил-CN; или W3 и W4 возможно соединены друг с другом линкером с образованием 5- или 6-членного конденсированного кольца.
19. Соединение по любому из пп. 1 - 20, выбранное из группы, состоящей из соединений, представленный в Таблицах1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11 и 12, приведенных в описании,
или стереоизомер, таутомер или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.
20. Соединение по п. 1 выбранное из группы, состоящей из следующих соединений: М-(6-амино-2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид,
20.
М-(6-амино-2-(4,6-диэтокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид,
М-(2-(4,6-диметокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид,
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид, М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)бензамид, 2-амино-М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-3-илметокси)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-(пиридин-4-илметокси)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(4-(4-хлоробензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-К-(3-(4-(3-аминобензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(4-(2-аминобензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(4-(дифтор(фенил)метокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
2-амино-М-(3-(4-(3,5-дифторбензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)ацетамид,
М-(3-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)фенил)акриламид, М-(2-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид и
М-(6-амино-2-(4-(бензилокси)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пиримидин-5-илтио)пиримидин-4-ил)акриламид.
21. Соединение по любому из пп. 1 - 20, дополнительно дериватизированное меткой.
22. Соединение по п. 21, в котором метка представляет собой флюоресцентный краситель.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп. 1 - 20 и фармацевтически приемлемый носитель.
21.
24. Способ лечения рака или пролиферативного заболевания у животного, включающий
введение терапевтически эффективного количества соединения по пп. 1-20 животному, нуждающемуся в этом; при условии, что указанное соединение демонстрирует значение IC50 ниже 100 мкМ в тесте на ингибирование роста клеток острой миелоидной лейкемии Kasumi-1 или в тесте на ингибирование роста клеток рака груди SKBr3, или в обоих указанных тестах.
25. Способ лечения опухоли или пролиферативного нарушения у животного, включающий: введение терапевтически эффективного количества ингибитора
Hsp70 нуждающемуся в этом животному;
в результате чего указанный ингибитор Hsp70 связывается аллостерическим связывающим доменом, расположенным вне сайта связывания нуклеотидов Hsp70 и Hsc70; и
ингибирует и Hsp70 и Hsc70; что обеспечивает
индуцирование апоптоза в опухолевых клетках, ассоциированных с пролиферативным заболеванием, без индукции апоптоза в нормальных клетках, строме или кровеносных сосудах.
26. Способ по п. 25, в котором ингибитор Hsp70 представляет собой соединение, выбранное из соединений по п.п. 1 - 20.
27. Способ по п. 25, в котором домен аллостерического связывания расположен на последовательности SEQ ID N0:1, и указанный домен определен одним или более остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из: Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций.
28. Способ лечения опухоли или пролиферативного заболевания у животного, включающий
введение терапевтически эффективного количества соединения по п.п. 1-20 нуждающемуся в этом животному, в результате чего указанное соединение связывается с доменом связывания лиганда, расположенном на SEQ ID N0:1, который определен одним
или более остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из: Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций.
29. Способ ингибирования активности Hsp70, причем Hsp70 содержит домен связывания лиганда белка с последовательностью SEQ ID N0:1 или его вариант, который определен одним или более остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций; включающий:
приведение домена связывания лиганда в контакт с лигандом, что обеспечивает ингибирование активности Hsp70.
30. Способ по п. 29, в котором лиганд представляет собой соединение по п.п 1 - 20.
31. Способ модулирования активности Hsp70, причем Hsp70 содержит карман связывания, включающий Сайт 1 (Site 1), расположенный в области области углубления вне домена связывания АТФ/АДФ и фланкированный подобластями lb и ПЬ, причем указанный способ включает осуществление контакта Сайта 1 связывающего кармана с лигандом, который связывается с карманом связывания с модулированием активности Hsp70.
32. Способ модулирования активности Hsp70 по п. 31, в котором Сайт 1содержит первый крупный гидрофильный под-карман, включающий полярные аминокислоты Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264 и Thr265; остаток цистеина (Cys267), находящийся внутри указанного под-кармана; и прилежащий к указанному карману под-карман в Hsp70, сключающий остатки как неполярных, так и полярных аминокислот, такие как Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68 и Tyr41; и Сайт 1 также содержит дополнительный под-карман, содержащие такие остатки аминокислот, как Lys88, His89, Trp90, Рго91 и Phe92.
33. Способ идентификации Н8р70-ассоциированного белка в опухоли или в клетках, ассоциированных с пролиферативным нарушением, включающий:
30.
связывание соединения по любому из п.п. 1 - 20 ч твурдой подложкой напрямую или опосредованно
осуществление контакта биологического образца с соединением, связанным с твердой подложкой, что обеспечивает связывание соединение с каким-либо комплексом Hsp70 в образце;
и идентификацию Hsp-ассоциированного белка, связанного с указанным соединением;
что позволяет идентифицировать Hsp-ассоциированный белок в опухоли или в клетках, ассоциированных с пролиферативным нарушением.
34. Способ мониторинга состояния лечения пациента, проходящего лечение опухоли или пролиферативного нарушения, включающий
получение первого биологического образца у пациента в момент времени до или во время периода лечения и измерение уровня и активности Hsp-ассоциированного белка;
получение второго биологического образца у пациента в момент времени после или во время периода лечения и измерение уровня и активности указанного Hsp-ассоциированного белка;
сравнение уровня и активности Hsp-ассоциированного белка в первом биологическом образце с уровнем и активностью Hsp-ассоциированного белка во втором образце, причем снижение уровня и/или активности Hsp-ассоциированного белка указывает на то, что терапия имеет благоприятный эффект.
35. Компьютеризированная система для получения трехмерной структуры сайта связывания 1 белка Hsp70 или его варианта по 1, причем указанная система включает: (а) машиночитаемый носитель информации, содержащий данные, закодированные в форме машиночитаемых данных, причем указанные данные включают по меньшей мере часть пептидной последовательности SEQ ID NO: 1 и последовательности, обозначенные прямоугольниками на Фигуре 21, (Ь) оперативное запоминающее устройство, хранящее инструкции по обработке указанных машиночитаемых данных; (с) центральный процессор, соединенный с указанным машиночитаемым носителем информации и указанным оперативным запоминающим устройством, для обработки машиночитаемых данных с получением трехмерной структуры; и (d) дисплей, соединенный с указанным центральным процессором, обеспечивающий отображение указанной трехмерной структуры.
35.
36. Трехмерная структура сайта связывания Сайт 1 белка Hsp70 или его варианта, полученная с использованием компьютеризированной системы по п. 35 для скрининга модулятора, который модулирует активность Hsp70 или Hsc70, причем указанный сайт связывания содержит домен связывания лиганда, определяемый остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций.
37. Трехмерная структура сайта связывания Сайт 1 белка Hsp70 или его варианта по п. 36, причем указанный сайт связывания содержит домен связывания лиганда, определенный остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из Thr 13, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций.
38. Способ скрининга модулятора для модулирования активности сайта связывания Сайт 1 белка или его варианта, причем указанный способ включает применение по меньшей мере части SEQ ID NO: 1 и последовательности, обозначенные прямоугольниками на Фигуре 21 для идентификации модулятора Hsp70 или варианта; осуществление контакта указанного модулятора с Hsp70 или вариантом и определение модулирующей активности указанного модулятора.
39. Способ скрининга модулятора по п. 38, причем сайт связывания Сайт 1 белка Hsp70 включает домен связывания лиганда, определнный остатками аминокислот, выбранными из группы, состоящей из Thrl3, Thrl4, Tyrl5, Lys56, Lys271, Arg269, Glu268, Arg264, Thr265, Cys267, Leu237, Val238, Val260, Arg261, Val59, РгобЗ, Thr66, Asn235, Asp234, Glu231, Asp69, Phe68, Tyr41, Lys88, His89, Trp90, Pro91, Phe92 и их комбинаций.
40. Способ скрининга модулятора по п. 38, причем указанный модулятор ассоциирован с предотвращением и/или лечением заболевания или прлиферативного нарушения, связанного с ростом клеток, ассоциируемым с Hsp70, выбранного из группы, состоящей из рака груди, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, рака легкого, лимфом и лейкозов.
35.
41. Способ по любому из пп. 38 to 40, в котором модулятор дополнительно исследуют на ингибирование роста в раковых клетках с использованием одного или более способов анализа ингибирования росто, в которых измеряют раковый фенотип, выбранный из группы, сотсоящей из:
разрушение HER2 или Raf-1 в HER2+ SKBr3 клетках рака груди; инактивация FLT3 или p-STAT5 в клетках острого миелолейкоза MOLM-13; инактивация p-STAT3 или p-PDKl в трижды отрицательных клетках рака груди MDA-MB-468;
разрушение мутантного mutant AR в клетках рака предстательной железы LNCaP; расщепление PARP в панели из одной или более раковых; активация каспазы 3,7 в клетках MOLM-13;
усиление апоптотического эффекта интерферона и ФНО в клетках рака груди; отсутствие индукции Hsp70 в панели из одной или более раковых; любая комбинация указанных эффектов.
42. Способ по п. 41, дополнительно включающий осуществление конкурентного анализа в флюоресцентной поляризацией для тестирования связывания Hsp90 или Hsp70 с модулятором; и вычислительную оценку структурного соответствия модулятора сайту связывания Сайт 1.
42.
Клиент
! •:. i isp4o ADP __.
Ингибитор Hsp 70s (YK5)
Lsp7Q
, II I OP I
Ф \-Ub 5
Pi'
BAG
Клиент
Q l^f> 4(0
APP| | |Sp7t> .'
[JJIEJ
Промежуточный комплекс
--H"ad> 1
l-lspSH) )
Клиент /'CHIP f4
E3 Ikjiist*
2SS протеасома
Разрушенный клиент
Клиент
Зрелый комплекс
ФИГ. 1A
Активный клиент
Основа 2,5'- тиодипирамидина изображена жирным, функциональная группа акриламида обведена
Ингибитор EGFR СИОЗЗ
(катертиниб) г .ш
ФИГ. 2В
ц а н
и о
YK5 мкМ §.
X Q.
HER2
~ Akt - p-Akt
- Raf-1
-CPARP CSK
Hsp70
Hsp90 p23
|3-Актин
-¦-YK5
10 100 1/ХЮ
-B-PU-H71 ¦*-PU24FCI
Концентрация соединения, мкМ
100-
о. 50-
¦Й0-
-¦- Ингибирование роста SKDK3
Разрушение HER2
0.01
0.1
YK5(MKM)
100
YK55
YK5(MKM)
IP: стрептавидин-гранулы
Промывка: буфер с высоким содержанием соли
ФИГ. 4А
ФИГ. 4В
ФИГ. 4С
ФИГ. 4D
го § 8
YK55(MKM)
5> ^ #
15 f = WHspHC
CP:YK55- гранулы (100 мкМ)
ФИГ. 4F
ФИГ. 4E
* YK25 (мкМ)
4? 1ч 2ч 4ч
150 кДа ЧЦ
Ь D-биотин YK5(MKM)
50 мкМ -тг---
100 кДа
HspTOs >
5 0 кДа
Тубулин
IP:стрептавидин-гранулы Промывка: буфер с высоким содержанием соли 50 мкМ 50 мкМ 50 мкМ . ;п.р~п
IP: ВВ 70 IP: стрептавидин-гранулы гранулы
Промывка: буфер с высоким
содержанием соли
- < О" О
* 5 1
Ol о
Ol н
ФИГ. 5В
70 кДа
: IB: биотин
Стрепгавидин
А \ ? g IP: ST-гранулы Ковалентная связь элюирование
1300 1400 1500 1600 1700 1300 1900 2000
ФИГ. 5D
ФИГ. 6В
> z
m х
5 Е 10
? среда
? 100 (мкМ) YK5
0J >
о к-1
NJ UD О О СГ> NJ п ч
Hdjf*-1
ь - О
н ш (НерТО
¦ "НОР
Y 'l^ HER2 ^ cPARP
Лизат
YK510(MKM) Я §
Ч о га ^" LL 5
Оч 6ч 10ч 16ч 24ч 0) & $ ^| *
Hsp90 - Ц^К-И ^тРимеР
й 4-Димер
^Мономер
Р-Актин
ФИГ. 6D ФИГ. 6Е
% контроля
0 1%
U 1-Г" ^ < " - -
ФИГ. 6F
ФИГ. 7А
YK5 (10 мкМ)
a 3c NP40 растворимый 10и
^ii 1 i
+ + + + -+ + YK5
5 I BB9
NP40 нерастворимый.; H '
.:at
1 i HER.2 NP40 нерастворимый |iy ^" р-Актин
ФИГ. 8А
ФИГ. 8С
УКЭЭ
Х=Н; УК57 Х=биотин; УК56
ФИГ. 8D
Х=Н; УК54 Х=биотин; УК55
-о-
VK3I
ФИГ. 9
~ .11 и
( N N Јj> ^
УК(мкМ)
О 1- (J 1-
YK149
HER2 * Raf-1 cPARP
г ] pi
YK17S
yMv .х--4-.
МП(tm) N"3
ТТ-5
[¦AN N ^ °
SKBr3
УК149 75(мкМ)
Р-5ТАТЗ
р-Актин
MDA-MB-463
А-*
YK174 0
M0LM13
I 1500-1
MOLM13
I 3000-
e 2500-s
I 2000-
1000-
IbOO-
" ЪОО-ы
o> T
SO 100
[УК ]5(мкМ)
150
? /к
YK139
YK172
YK174
YK172
YK174
YK139
TT-2
TT-4
ФИГ. 9C
о о
жхкь
ЭКБгЗ
тт-э
MQLM13
ФИГ. 12В
4ca
now -
4W -
ЯМ-
DMSO
%G1=41,1
%S=20.2
%G2/M=22
YK5 1мкм
%G 1=56.7
%S=8.9
%G2WI=19.3
I [La
iO№0
> z
bo 5 E
- <
сл сл
¦а ш
<
ф / ** CDK1
^ - Hsp70
p-Akt
(З-Актин
> bo СП
m n
4 о
"D CD
YK5
^ <ъ > $> (мкМ)
UHKTMHDI '(З-Акгин
Cyclin D1 Hsp70
750
500-
250^
DMSO УК5 (1 мкМ))
Р - О.00О4
о i-1
NJ UD О О СГ> NJ
ФИГ. 12C
ФИГ. 12D
24 часа
х 48 часа
bo 5 Е
Kasumi-1
п ч
0J > bo
NJ О
§ ФИГ. 13А
75-1
50-
25-
111
I |Контроль io PU24FCI YK5
1 2.5S10
ппППП
24 4 & Период лечения (дни)
150
FU24FC о
YK5
Ш PU5
100
a ^
VK5 (10 мкМ)
FU-H71 (1 мкМ)
^ ^ ^ #v f
n УК5 (мкМ)
Mia-PaCa2
р-Актин
U V 5
z I z - < ¦n s "n ^
? 300
S 200 o\
Пизат
to Ш H
р-Актин
ОМЫ Tkf" VKS iKS-^rNfu
ФИГ.14А
Лейкоциты переферической крови (ЛПК)
10D'
~ """" "CPARP
ill:
-U- J? ч
.5D| -^7?ч
лвй +
Jo О -м
HTKSJMKM
[YKJJMKM
111
ФИГ.14С
Лизат
ФИГ.140
_ s s
YK5S
10 25 75
УК55
10 25 75 MKM
HSC7Q
1; MRC-5 2;SK6r3
Hsp40
1: HS MRC-5 2:HЈSKBr3
Hsc70 Hsp40 Hsp70
1:мозг 2: MDA-MB-466
YK5(MKM)
О Ю 50 100 200
'.Н &рГО > Hac70
X X
75-
50-
100
YK5(MKM)
200
ФИГ.14Е
OJ > bo
NJ О I-1 NJ UD О О СГ> NJ
> z
bo 5 В
8 9 8 ^
I Raf-1
CP: УК-55 гранулы (100 мкМ)
tfa^;-. Hsp7o
BB7D истощен*, м IgG исгоща+ьм
YK5 (мкМ)
Raf-1
CP: УК-55 гранулы (100 мкМ)
YK5
5? 1ч т7 (МКМ) _ _ mAR
р-Актин
ИВ**
Лизат
УК5
(мкМ) Цикпин D1
" - р-Актин
YK5
^ 'о ь?> (мкМ) *Ч" ^ ^ P-PDK1 - ¦ - p-AXl
CDK1 р-Актин
УК 5 (мкМ)
mFlt-3 р-Актин
OJ NJ
YK71
YK5 9Ме н
MDA-MB-46B Лизат
Q. Н X О
110100 9080706050403020
1од^р[ингибитор] мкМ
ФИГ. 16
О 1
YK5 5(мкМ)
ТТ-Й - 25(мкМ) ?
YK17S 25(мкМ)
2 3 4 h - - ' p-STAT3
| р-Актин
- - р^ТАТЗ р-Актин
> STAT3 ' р-Актин
IFNy стимулированный
ФИГ. 17
- < СЛ
¦О -D
01 OJ
X X
"5 "5
г г
m*f : p-STATl -
IHspTQ
cPARP р-Актин p-STATl STAT1
Hgp70 IFNy 2dh
10,
cPARP
р-Актин
INF 7 (мин)
IMF v (мин)
Сгауроспорин
Сгауроспорин
p-STAT 1
р-Актин УК5
ФИГ. 19В
p AWL 1
ё 2
О н
Е ° о я
3 ю ш
AML2
1D0. 90
10 5 2.5 10 5 2 5
5 2 5 12 5 2.5 1.2
Властные Нормальные Концентрация YK5 (мкМ)
Властные Нормальные Концентрация YK5 (мкМ)
AML3
С AML4
Ф л
О н
Е ° о я х ,9?
"l3 Z 2,5 1.25 Концентрация YK5 (мкМ)
Актин
?0| 60 SO <0
Необработанные 10
УК5 (мкМ)
ФИГ. 20
Р0 810 7 1 МАКААА IGIDLG ITYSCVGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSp^AFTDT . ERLIGDA.fiKNQVALK PQNTVFDAKR
1S3X_A 1 maKAAA IGIDLGTTYSCIGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSYVAFTDT.ERLIGDAAKNQVALNPQNTVFDAKR
2P32_A 1 mgsshhhhhhss
2KH0_A 1 mgk IIGIDLGTTNSCVAIMDGTTPRVLENAEGDRTTPSIIAYTQDGETLVGQPAKRQAVTNPQNTLFAIKR
P08107 73 LIGRKFGDPVVQSDNKHWPEQVINDG.DKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFN
1S3X_A 73 LIGRKFGDPVVQSDMKHWPFQVINDG.DKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFN
2P32_A 13
2KH0_A 72 LIGRRFQDEEVQRDVSIMPFKIIAADNGDAWVEVK....GQKMAPPQISAEVLKKMKKTAEDYLGEPVTEAVITVPAYFN
P08107 152 DSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDG....IFEVKATAGDTH
1S3X_A 152 DSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDG....IFEVKATAGDTH
2P32_A 13
2KH0_A 148 DAQRQATKDAGRIAGLEVKRIINEPTAAALAYGLDKGTG.NRTIAVYDLGGGTFDISIIEIDEVDGEKTFEVLATNGDTH
P08107 228 LGG EDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAFRTLSSSTQASLEIDSLFEG. . . .IDFYTSITRARFE
1S3X_A 228 LGGEDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAKRTLSSSTQASLEIDSLFEG....IDFYTSITRARFE
2P32_A 13
2KH0_A 22 7 LGGEDFDSRLINYLVEEFKKDQGIDLRNDPLAMQRLKEAAEKAKIELSSAQQTDVNLPYITADATGPKHMNIKVTRAKLE
P08107 304 ELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMGD
1S3X_A 304 ELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMG
2P32_A 13
2KHO_A 307 SLVEDLVNRSIEPLKVALQDAGLSVSDIDDVILVGGQTRMPMVQKKVAEFFG.KEPRKDVNPDEAVAIGAAVQGGVLTGD
P08107 384 KSENVQDLLLLDVAPLSLGLETAGGVMTALIKRNSTIPTKQTQIFTTYSDNQPGVLIQVYEGERAMTKDNNLLGRFELSG
1S3X_A
2P32_A 13
2KHO_A 386 . . . .VKDVLLLDVTPLSLGIETMGGVMTTLIAKNTTIPTKHSQVFSTAEDNQSAVTIHVLQGERKRAADNKSLGQFNLDG
P08107 464 IPPAPRGVPQIEVTFDIDANGILNVTATDKSTGKANKITITNDKGRLSKEEIERMVQEAEKYKAEDEVQRERVSAKNALE
1S3X_A
2P32_A 13 GL.VPRGSHMGLE
2KHO_A 4 62 INPAPRGMPQIEVTFDIDADGILHVSAKDKNSGKEQKITIKASSG.LNEDEIQKMVRDAEANAEADRKFDELVQTRNQGD
P08107 544 SYAFNMKSAVEDEGLKGKISEADKKKVLDKCQEVISWLDANTLAEKDEF.EHKRKELEQVCNPIISGLYQGAGGPGPGGF
1S3X_A
2P32_A 25 SYAFNLKQTIEDEKLKDKISPEDKKKIEDKCDEILKWLDSNQTAEKEEF.EHQQKDLEGLANPIISKLYQSaggappg..
2KHO_A 541 HLLHSTRKQVEE..AGDKLPADDKTAIESALTALETALK....GEDKAAIEAKMQELAQVS.QKLMEIAQqq
P08107 623 GAQGPKGGSGSGPTIEEVD
1S3X_A
2P32_A 102 aapggaaggaggptieevd
2KHO A
ФИГ. 21
(19)
109
112
112
134
134
134
134
134
134
134
134
142
145
145
148
148
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
159
159
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
159
159
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
159
159
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
159
159
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
160
160
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
168
168
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
169
169
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
170
170
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
171
171
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
257
1. Соединение формулы 2а
257
1. Соединение формулы 2а
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
259
5 5
Соединение формулы 2а
258
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
259
5 5
Соединение формулы 2а
258
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
259
5 5
Соединение формулы 2а
258
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
261
Соединение формулы За
261
Соединение формулы За
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
261
Соединение формулы За
261
Соединение формулы За
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
262
262
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
265
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
268
268
К заявке № 201290062
К заявке № 201290062
2/32
2/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
3/32
3/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
3/32
3/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
3/32
3/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
3/32
3/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
5/32
5/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
5/32
5/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
6/32
6/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
6/32
6/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
6/32
6/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
10/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
10/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
10/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
12/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
12/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
12/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
12/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
12/32
ФИГ. 6C
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
ФИГ. 7C
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
15/32
15/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
16/32
16/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
16/32
16/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
16/32
16/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ФИГ. 12А
ФИГ. 12А
20/32
20/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ФИГ. 12C
ФИГ. 12C
ФИГ. 12C
ФИГ. 12C
ФИГ. 12Е
ФИГ. 12Е
ФИГ. 12Е
ФИГ. 12Е
ФИГ. 12Е
ФИГ. 12Е
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
ФИГ. 13
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
25/32
25/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
26/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
26/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
26/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
26/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
28/32
ФИГ. 15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ФИГ. 18
ФИГ. 18
ФИГ. 18
ФИГ. 18
ФИГ. 18
ФИГ. 18
30/32
30/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
31/32
31/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
31/32
31/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
31/32
31/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
31/32
31/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
32/32
32/32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ
К ЗАЯВКЕ № 201290062
|
