(57) Реферат / Формула:
Описаны мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды и способы изготовления и применения мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
(19)
Евразийское (21) 201201471 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.04.30
(22) Дата подачи заявки 2011.04.27
(51) Int. Cl.
A01H 5/00 (2006.01) C12N15/82 (2006.01) C12N15/29 (2006.01)
(54) МОДИФИЦИРОВАННЫЕ PYR/PYL-РЕЦЕПТОРЫ, АКТИВИРОВАННЫЕ ОРТОГОНАЛЬНЫМИ ЛИГАНДАМИ
(31) 61/328,999; 61/434,407
(32) 2010.04.28; 2011.01.19
(33) US
(86) PCT/US2011/034202
(87) WO 2011/139798 2011.11.10
(88) 2012.04.05
(71) Заявитель:
ТЕ РИДЖЕНТС ОФ ТЕ ЮНИВЕРСИТИ ОФ КАЛИФОРНИЯ (US)
(72) Изобретатель:
Катлер Шон Р., Парк Сан-Юл (US)
(74) Представитель:
Воробьева Е.В. (RU)
(57) Описаны мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды и способы изготовления и применения мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
0 20 40 60 80
Время (мин)
1211609
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ PYR/PYL РЕЦЕПТОРЫ, АКТИВИРОВАННЫЕ ОРТОГОНАЛЬНЫМИ ЛИГАНДАМИ
Перекрестная ссылка на родственные заявки Настоящая заявка на патент испрашивает приоритет по предварительной заявки на патент США № 61/328,999, поданной 28 апреля 2010 года, и предварительной заявки на патент США № 61/434,407, поданной 19 января 2011 года, содержание каждой из который включено сюда посредством ссылки для всех целей.
Заявление относительно прав на изобретения, сделанное в соответствии с федеральной
поддержкой исследований и разработок Настоящее изобретение было сделано при поддержке Правительства в рамках гранта № IOS0820508, присужденного Национальным научным фондом. Правительство имеет определенные права на данное изобретение.
Уровень техники
Растущие температуры и уменьшение запасов пресной воды представляют собой две формы экологического стресса, называемого также абиотическим стрессом, которые снижают количество продовольствия, производимого в сельском хозяйстве. Ключевым регулятором устойчивости к абиотическому стрессу является гормон растений абсцизовая кислота (abscisic acid (ABA)), который синтезируется растениями в ответ на различные абиотические стрессы и управляет адаптивными реакциями, которые увеличивают выживаемость растений (Cutler, S. et al., Annual Review of Plant Biology (2009); Nambara, E. et al., Annual Review of Plant Biology 56:165-185 (2005)). Сельскохозяйственные культуры, выведенные с тем, чтобы они имели повышенную чувствительность к ABA, демонстрируют улучшенную урожайность в условиях засухи (Wang, Y. et al., Plant J 43:413-424 (2005)). Более того, было показано, что непосредственное применение ABA или аналогов ABA улучшает эффективность использования воды у растений в поле (Hawkins, A.F. et al., Plant Growth Regulators for Agricultural and Amenity Use (British Crop Protection Council) (1987); Kreeb, K.H. et al., Structural and Functional Responses to Environmental Stresses (Balogh Scientific Books) (1989)); однако, ABA не была успешно использована в коммерческих целях в силу сложных путей ее производства и высокой стоимости.
Интересно, что многочисленные фунгициды и инсектициды, показавшие, в
качестве "побочного эффекта", механизм которого остался неизвестным, способность повышать устойчивость к стрессу, коммерциализировались как препараты для повышения устойчивости к стрессу, что свидетельствует о сильной заинтересованности и признанной необходимости в химических способах контроля устойчивости к стрессу (Asrar, J. et al., In US 2009/0270254 Al (USA, Monsanto Technology) (2003); Beckers, G.J.M. et al., Current Opinion in Plant Biology 10:425-431 (2007); Schulz, A. et al., In US 2007/0124839 Al (USA, Bayer Crop Sciences) (2006)). Важной движущей силой данной заинтересованности стало осознание того, что резкий рост урожайности кукурузы, достигнутый за последние 100 лет, был в значительной степени обусловлен улучшениями в устойчивости к абиотическому стрессу новых высокоурожайных сортов кукурузы (Duvick, D.N. et al., Crop Science 39:1622-1630 (1999); Tollenaar, M. et al., Field Crops Research 75:161-169 (2002); Tollenaar, M. et al., Crop Sci 39:1597-1604 (1999)). Из-за того что ABA признана критическим гормональным регулятором физиологии стресса растений, существует повышенный интерес к модулированию сигнального пути ABA в сельскохозяйственных культурах. Одним из возможных пунктов управления сигнальным путем ABA служат рецепторные белки, которые, в принципе, могут служить объектом как химической, так и генетической модуляции сигнального пути ABA и устойчивости к стрессу.
Недавно новое семейство АВА-рецепторов, а именно, семейство "пирабактин-устойчивых/РУЯ-подобных" (Pyrabactin resistance/PYR-like) ("PYR/PYL") рецепторов, было идентифицировано в качестве модулятора сигнального пути ABA (Park, S.Y. et al., Science 324:1068-1071 (2009)). Гиперэкспрессия АВА-рецептора PYL5 придает засухоустойчивость растениям Arabidopsis (Santiago, J. et al., The Plant Journal 9999 (2009)), что определяет данное новое семейство рецепторов как ключевую цель для контроля устойчивости к стрессу растений. Однако гиперэкспрессия гена может иметь неблагоприятные последствия для урожайности, которые называют "связанное с генами падение урожайности" (yield drag). Полагают, что это падение урожайности происходит потому, что нерегулируемая активация путей устойчивости к стрессу, что сопряжено с замедленным ростом, происходит в нормальных условиях (т. е. в отсутствии засухи или других факторов стресса). Один из способов достижения регулируемого контроля над сигнальным путем ABA заключается в разработке химических агентов, которые активируют АВА-рецепторы (то есть агонистов). Данные агенты могут быть применены к растениям в случае засухи или в условиях иного стресса, что позволяет осуществить селективную защиту в неблагоприятных условиях. Это позволяет реализовать преимущества устойчивости к стрессу без снижения урожайности при идеальных условиях роста.
В принципе, ABA может быть использована в качестве агониста для реализации данных преимуществ. Однако ABA представляет собой натуральный продукт, который является дорогостоящим для производства и быстро деградирует под действием УФ-фотоизомеризации и метаболической инактивации. ABA также оказывает физиологическое воздействие на организмы млекопитающих, что может предположительно влиять на ее пригодность в агрохимии (Guri, A.J. et al., Clin Nutr. (2010)). Таким образом, дешевая, экологически стабильная и нетоксичная молекула была бы идеальным реагентом для контроля сигнального пути ABA.
Краткая сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к растениям (или к растительной клетке, семени, цветку, листу, фрукту или другой части растения из таких растений или обработанным пищевым продуктам или пищевому ингредиенту из таких растений), содержащим гетерологичную экспрессионную кассету, причем экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и в котором химический агент не вызывает выраженной активации у PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления химический агент содержит фунгицид, гербицид, пестицид, нематоцид, активатор роста, синергист, гербицидное средство защиты, регулятор роста растений, репеллент от насекомых или удобрение.
В некоторых вариантах осуществления химический агент выбран из группы, состоящей из бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-Б-метила).
В некоторых вариантах осуществления аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 (лизин-59) из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан.
В некоторых вариантах осуществления аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту,
глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и химический агент представляет собой бромоксинил, хлороксинил, иоксинил, дихлобенил, беноксакор или фенгексамид.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 21, 41, 50, 57, 60, 82, 92, 102, 116, 125, 141, и/или 151 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из H21Y, P41L, R50G, Т57А, H60R, I82N, S92T, E102G, Rl 16К, Т125А, E141Q, E141D, N151D или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из R10Q, E12G, Е12К, L25R, P27L, S29N, L33F, P42S, E43G, L44F, S47P, V49I, R74C, V75I, V81M, D97N, I110S, Y120C, Y120H, V123I, Т124М, N133D, V138M, V139I, V144A, E154G, M158I, V163I, А172Т, Т173А, V174I, А177Т или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR'PYL-рецепторным полипептидом, мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутации аминокислот,
соответствующих позициям 59, 120 и 158 в PYR1 (SEQ ID N0:1), где мутации представляют собой K59R, Y120H, и Ml581. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит остатки изолейцина в позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и ПО в PYR1 (SEQ ID N0:1).
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID NO::l, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 27 и/или 63 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из P27L, K63N или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR'PYL-рецепторным полипептидом, мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 26, 37, 71 и/или 94 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из D26G, R37Q, F71S, E94D или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позиции 119 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация представляет собой N119Y.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, мутантный
PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям ПО, 114 и/или 138 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из II ЮТ, El 14D, V138M или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН, когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 24, 82, 159 и/или 161 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из Q24R, I82T, F159L, D161G или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления, в которых мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН, когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 115 и/или 159 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из HI 15Y, F159S, F159L или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичным) любой из SEQ ID N0:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, ПО, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118 или 119 и содержит одну или более мутаций, как описано здесь.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей
мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:131-139 (то есть, любой из SEQ ID N0:131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138 или 139), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%) или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:124-130 или 165-178 (т. е. любой из SEQ ID N0:124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177 или 178), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:140-144 (то есть, любой из SEQ ID N0:140, 141, 142, 143 или 144), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%), по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей
мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:145, 146, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID NO: 147, 148 или 164, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-S-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию в аминокислотном остатке, содержащем лиганд-связывающий карман PYR/PYL-рецепторного полипептида.
В некоторых вариантах осуществления растение обладает улучшенной устойчивостью к абиотическому стрессу при контакте с химический агентом, по сравнению с растением, не имеющим экспрессионной кассеты.
Настоящее изобретение также относится к способам улучшения устойчивости к абиотическому стрессу в таких растениях, как описано выше, контактированием растения с химический агентом, выбранным из группы, состоящей из бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-S-метила).
Настоящее изобретение также относится к полипептидам, содержащим мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды по изобретению (например, как описано здесь). В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%), по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентичен) любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178 (т. е. любой из SEQ ID N0:124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177 или 178).
Настоящее изобретение дополнительно относится к полинуклеотидам, кодирующим один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов по изобретению (например, как описано здесь). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид кодирует один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%), по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 91%", по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%> , по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178 (т. е. любой из SEQ ID N0:124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177 или 178). Настоящее изобретение дополнительно относится к изолированной нуклеиновой кислоте, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов по изобретению (например, как описано здесь).
Настоящее изобретение также относится к способам получения мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, который активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, где химический агент не вызывает выраженной активации у PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа, причем данный способ включает
(a) мутагенез PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа;
(b) контактирование одного или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с химический агентом и
(c) определение, активирует ли химический агент один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, причем активация определяет один или более мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, как активирующийся в ответ на воздействие химического агента.
В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно содержит до стадии (Ь) скрининг химического агента для определения, связывается ли химический агент с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа, до контактирования одного или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с химический агентом.
В некоторых вариантах осуществления стадия определения (с) способа содержит контактирование химического агента с клеткой, содержащей двухгибридную систему,
причем двухгибридная система детектирует взаимодействие мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида с протеинфосфатазой 2-го типа (РР2С), и в котором химико-специфическое взаимодействие мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида с РР2С определяет мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, как активирующийся в ответ на воздействие химического агента.
В некоторых вариантах осуществления химический агент по изобретению содержит фунгицид, гербицид, пестицид, нематоцид, активатор роста, синергист, гербицидное средство защиты, регулятор роста растений, репеллент от насекомых или удобрение.
В некоторых вариантах осуществления химический агент по изобретению выбран из группы, состоящей из бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-Б-метила).
Настоящее изобретение также относится к экспрессионным кассетам, содержащим промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и где химический агент не вызывает выраженной активации у PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, в котором аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан. В некоторых вариантах осуществления аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и химический агент представляет собой бромоксинил, хлороксинил, иоксинил, дихлобенил, беноксакор или фенгексамид.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный
PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 21, 41, 50, 57, 60, 82, 92, 102, 116, 125, 141 и/или 151 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из H21Y, P41L, R50G, Т57А, H60R, I82N, S92T, E102G, R116K, Т125А, E141Q, E141D, N151D или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174, и/или 177 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из R10Q, E12G, Е12К, L25R, P27L, S29N, L33F, P42S, E43G, L44F, S47P, V49I, R74C, V75I, V81M, D97N, I110S, Y120C, Y120H, V123I, Т124М, N133D, V138M, V139I, V144A, E154G, M158L V163I, А172Т, Т173А, V174I, А177Т или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутации аминокислот, соответствующих
позициям 59, 120 и 158 в PYR1 (SEQ ID N0:1), где мутации представляют собой K59R, Y120H, и Ml581. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит остатки изолейцина в позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и 110 в PYR1 (SEQ ID N0:1).
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 27 и/или 63 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из P27L, K63N или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 26, 37, 71 и/или 94 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из D26G, R37Q, F71S, E94D или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит мутацию
аминокислоты, соответствующей позиции 119 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация представляет собой N119Y.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям ПО, 114 и/или 138 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из II ЮТ, El 14D, V138M или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН, когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 24, 82, 159 и/или 161 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из Q24R, I82T, F159L, D161G или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН, когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 115 и/или 159 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из H115Y, F159S, F159L или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей
мере на 85%, по меньшей мере на 90%", по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%), по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%), по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:131-139 (то есть, любой из SEQ ID N0:131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138 или 139), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%> , по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%> , по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%), по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:124-130 или 165-178 (т. е. любой из SEQ ID N0:124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177 или 178), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%", по меньшей мере на 85%> , по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%о, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%о, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:140-144 (то есть, любой из SEQ ID N0:140, 141, 142, 143 или 144), и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный
PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%> , по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%> , по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%", по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%", по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%> , по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%> или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:145, 146, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%), по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%> , по меньшей мере на 91%> , по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%> , по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:147, 148 или 164, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-S-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислотного остатка, содержащего лиганд-связывающий карман PYR/PYL-рецепторного полипептида.
Настоящее изобретение также относится к векторам экспрессии, содержащим экспрессионную кассету по изобретению (например, как описано здесь).
Настоящее изобретение дополнительно относится к полинуклеотидным последовательностям, содержащим экспрессионную кассету по изобретению (например, как описано здесь).
Настоящее изобретение дополнительно относится к способам получения растений, обладающих повышенной устойчивость к стрессую. В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по
существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%о, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%о, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178 (т. е. любой из SEQ ID N0:124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177 или 178), в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%> , по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:131-139, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере, 75 %, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%", по меньшей мере 93%), по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере, 97 %, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:124-130 или 165-178, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид и мутантный рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание
трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%), по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%", по меньшей мере на 95%> , по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:140-144, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным лолипептидом.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%), по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%> , по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%", по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%), по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:145-146, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который имеет последовательность или является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%), по меньшей мере на 91%), по меньшей мере на 92%), по меньшей мере на 93%", по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:147-148 или 164, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-Б-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным
полипептидом.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%> , по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%), по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%> , по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%> , по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID NO:l-119 (то есть, любой из SEQ ID N0:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, ПО, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118 или 119) и содержит аминокислоту X в позиции, соответствующей позиции К59 из SEQ ID N0:1, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан; в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 21, 41, 50, 57, 60, 82, 92, 102, 116, 125, 141, и/или 151 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из H21Y, P41L, R50G, Т57А, H60R, I82N, S92T, E102G, R116K, Т125А, E141Q, E141D, N151D или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33,42, 43,44,47,49, 74, 75,81,97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из R10Q, E12G, Е12К, L25R, P27L, S29N, L33F, P42S, E43G, L44F, S47P, V49I, R74C, V75I, V81M, D97N, I110S, Y120C, Y120H, V123I, Т124М, N133D, V138M, V139I, V144A, E154G, M158I, V163I, А172Т, Т173А, VI741, А177Т или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 27 и/или 63 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из P27L, K63N или их комбинаций. В
некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позицию 119 в SEQ ID N0:1, причем мутация представляет собой N119Y. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 24, 82, 159 и/или 161 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из Q24R, I82T, F159L, D161G или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%), по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%> , по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:1-119 и содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 26, 37, 71 и/или 94 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из R37Q, F71S, E94D или их комбинаций; в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%), по меньшей мере на 95%> , по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%), по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:1-119 и содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям ПО, 114 и/или 138 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из II ЮТ, E114D, V138M или их комбинаций; в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по
меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%> , по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%), по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%), по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%> , по меньшей мере на 98%> или по меньшей мере на 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:1-119, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 115 и/или 159 в SEQ ID N0:1, причем мутация выбирается из H115Y, F159S, F159L или их комбинаций; в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид.
В некоторых вариантах осуществления способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным (например, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%> , по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%> , по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%) или по меньшей мере на 99%о идентичен) любой из SEQ ID N0:1-119, и мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутации в аминокислоте, соответствующей позициям 59, 120 и 158 в SEQ ID N0:1, причем мутации представляют собой K59R, Y120H, и Ml581, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит остатки изолейцина в позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и 110 в SEQ ID N0:1.
Краткое описание чертежей
Фигура 1. PYR1 мутант 27-18 придает чувствительность к фенгексамиду, но не к ABA. Репрезентативный PYRl-мутант 27-18 (содержащий мутации замещения S47P, K59R и Y120H) был протестирован на чувствительность к возрастающим концентрациям абсцизовой кислоты ("ABA") (А) и фенгексамида (В) в сравнении с использовавшимся в качестве контроля PYR1 дикого типа и с измерением in vitro активности фосфатазы РР2С.
Фигура 2. Идентификация аминокислотных остатков, существенных для чувствительности к фенгексамиду в мутанте 27С-2. А. Мутанты (перечислены на левой стороне панели) были сконструированы в pBD-PYRl и трансформированы в pAD-HABl клетки дрожжей Y190. Трансформанты были затем выращены на повышенных
концентрациях фенгексамида и оценены на чувствительность с использованием окрашивания X-Gal, проводимого, как описано у Park et al, 2009. Как показано, мутации K59R, Y120H, и Ml581 являются необходимыми для реакции на фенгексамид у мутанта 27С-2. В. In vitro характеристика мутантов PYR1 K59R, Y120H, Ml581. Рекомбинантные белки PYR1 дикого типа и рекомбинантные мутантные белки PYR1 получали, как описано ранее, и применяли для измерения РР2С, как описано ранее (Park et al, 2009), с тем исключением, что использовали соотношение рецептора к фосфатазе, равное 2:1.
Фигура 3. Конструирование мутаций, вызывающих чувствительность к фенгексамиду у PYL2. А. Мутации, гомологичные тем, которые являются достаточными для чувствительности к фенгексамиду в PYR1 (K59R, Y120H, Ml581), были введены в PYL2 (K64R, Y124H, Ml641). Кроме того, были введены мутации аминокислотных остатков кармана VI141 и/или V67I. Мутанты (перечислены на левой стороне панели) были сконструированы в PBD-PYL2 и трансформированы в клетки дрожжей штамма Y190, содержащие pAD-HABl. Трансформанты были затем выращены при повышенных концентрациях фенгексамида и оценены на чувствительность с использованием окрашивания X-gal, проводимого, как описано у Park et al, 2009. Как видно, чувствительность к фенгексамиду может быть достигнута комбинацией данных мутаций. В. In vitro характеристика мутанта PYL2 с мутантными остатками K64R, Y124H, Ml641, V67I, VI141. Рекомбинантные белки PYR1 дикого типа и рекомбинантные мутантные белки PYR1 получали, как описано ранее, и применяли в анализах РР2С, как описано ранее (Park et al, 2009), с тем исключением, что использовали соотношение рецептора к фосфатазе, равное 2:1.
Фигура 4. Характеристика ответов проростков на фенгексамид в трансгенных растениях 35S::GFP-PYL2 с мутантными остатками K64R, Y124H, M164I, V67I, VI141. Трансгенные растения, экспрессирующие рецепторные белки дикого типа и мутантные рецепторные белки, были созданы Agrobacterium-опосредованной трансформацией для исследования чувствительности реагирующих на фенгексамид рецепторов PYL2 in vivo. Показаны сегрегирующие экспрессирующийся GFP (Green Fluorescent Protein, зеленый флуоресцирующий белок) проростки Т2 из первичных трансгенных растений (Tl). Columbia представляет собой использованный для сравнения дикий тип и не является трансгенным растением. В дополнение к линии дикого типа с гиперэкспрессируемым PYL2 были охарактеризованы две независимые трансгенные линии PYL2 с мутантными аминокислотными остатками K64R, Y124H, Ml641, V67I, VI141 ("PYL2 MUT"). Семена соответствующих линий были проращены в темноте на среде, содержащей 100 мкМ фенгексамида, и оценены через два дня после набухания. Как
видно, две трансгенные линии показывают сильную задержку после прорастания, в то время как контрольные линии не показывают такой задержки. На верхней панели показаны изображения репрезентативных проростков в проходящем свете, и на нижней панели показана эпифлуоресценция, подтверждающая экспрессию GFP линиями и показывающая, что уровни экспрессии у данных линий являются сходными. Приведенные данные показывают, что рецепторный белок с мутантными аминокислотными остатками K64R PYL2, Y124H, M164I, V67I, VI141 демонстрирует хорошо охарактеризованную АВА-индуцируемую реакцию (ингибирование роста) в ответ на воздействие фенгексамида.
Фигура 5. Характеристика ответов проростков на фенгексамид в трансгенных растениях 35S : GFP-PYL2 с мутантными остатками K64R, Y124H, M164I, V67I,
VI141. GFP-экспрессирующие проростки Т2 из соответствующих линий были изолированы после прорастания на чашках Петри и предварительно скринированы эпи-флуоресцентной микроскопией, а затем выращены в жидкой питательной среде в течение 7 дней, после чего проростки подвергались либо обработке 100 мкМ фенгексамида либо контрольной обработке (0,1% ДМСО) в течение 6 часов. Затем РНК была изолирована из образцов и использована в количественных экспериментах по способу ОТ-ПЦР (способ полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией) (reverse transcription polymerase chain reaction method, RT-PCR) с использованием трех хорошо охарактеризованных, реагирующих на ABA транскриптов (как было описано ранее, Park et al, 2009). Праймерные последовательности, используемые для ОТ-ПЦР-анализа, были получены от Roche и синтезированы Invitrogen. Количественный ОТ-ПЦР-анализ был осуществлен с использованием SybrGreen на приборе ПЦР BioRad CFX 96 в режиме реального времени. Число копий мРНК выражалось как число копий на нанограмм общей РНК. Данные были нормированы с использованием гена АСТ2. Число копий устанавливалось с использованием стандартной кривой известной концентрации генов-мишеней. Полученные данные показывают, что рецепторный белок с мутантными остатками K64R PYL2, Y124H, M164I, V67I, VI141 позволяет активировать сигнальный путь ABA в ответ на фенгексамид. Приведенные данные представляют собой среднее значение трех технических повторов, и столбики ошибок показывают стандартное отклонение.
Фигура 6. Фенгексамид уменьшает потерю воды в трансгенных растениях, экспрессирующих PYL2K64R' Y124H' М1641, V671' V1141. Показаны три независимых эксперимента по потери воды (А-С), проведенные на трансгенных растениях, обработанных растворами, содержащими контроль, 100 мкМ фенгексамида или 100 мкМ ABA. Растения были обработаны, как описано в разделе примеров ниже, и потеря воды из
воздушных розеток была измерена после их отделения. Во всех экспериментах трансгенная линия PYL2 показывала уменьшение потери воды в ответ на обработку фенгексамидом.
Фигура 7. Предварительная обработка фенгексамидом не уменьшает потерю воды в растениях дикого типа Columbia. Растения Columbia были обработаны контрольным раствором и растворами, содержащими 100 мкМ фенгексамида или 100 мкМ ABA. Растения были обработаны, как описано в разделе примеров ниже, и потеря воды из воздушных розеток была измерена после их отделения.
Определения
Термин "PYR/PYL-рецепторный полипептид" относится к белку, характеризующемуся, в частности, наличием одного или более или всех доменов из домена 2 поликетидной циклазы (PF10604), домена 1 поликетидной циклазы (PF03364) и домена Bet V 1 (PF03364), который в форме дикого типа опосредует передачу сигнала, вызываемого абсцизовой кислотой (ABA) и ее аналогами. Известно большое разнообразие полипептидных последовательностей PYR/PYL рецепторов в данной области. В некоторых вариантах осуществления PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит полипептид, который является по существу идентичным PYR1 (SEQ ID N0:1), PYL1 (SEQ ID N0:2), PYL2 (SEQ ID N0:3), PYL3 (SEQ ID N0:4), PYL4 (SEQ ID N0:5), PYL5 (SEQ ID N0:6), PYL6 (SEQ ID N0:7), PYL7 (SEQ ID N0:8), PYL8 (SEQ ID N0:9), PYL9 (SEQ ID N0:10), PYL10 (SEQ ID N0:11), PYL11 (SEQ ID N0:12), PYL12 (SEQ ID N0:13) или PYL13 (SEQ ID N0:14) или любой из SEQ ID N0:15-119.
"PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа" относится к природному PYR/PYL-рецепторному полипептиду, который выступает посредником в передаче сигнала, вызываемого абсцизовой кислотой (ABA) и ее аналогами.
"Мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид" или "модифицированный PYR/PYL-рецепторный полипептид" относится к PYR/PYL-рецепторному полипептиду, который является вариантом природного (например, дикого типа) PYR/PYL-рецепторного полипептида. Для целей настоящего изобретения мутантный или модифицированный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит одну или более аминокислотных замен по сравнению с соответствующим PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа. В данном контексте "мутантный" полипептид или "модифицированный" полипептид может быть произведен любым способом получения нуклеотидных последовательностей не дикого типа. Мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид может или может не быть посредником в передаче сигнала, вызываемого абсцизовой кислотой (ABA) и ее
аналогами.
Аминокислота, "соответствующая позиции [X] из [определенной последовательности]" относится к аминокислоте в полипептиде, представляющем интерес, которая совпадает с эквивалентной аминокислотой указанной последовательности. Как правило, как описано здесь, аминокислота, соответствующая позиции в PYR/PYL-рецепторном полипептиде, может быть определена с использованием алгоритма выравнивания, такого как BLAST. В типичных вариантах осуществления настоящего изобретения "соответствие" позиций аминокислот определяется выравниванием с областью PYR/PYL-рецепторного полипептида, содержащей SEQ ID N0:1, как обсуждается далее в настоящем документе. Если последовательность PYR/PYL-рецепторного полипептида отличается от SEQ ID N0:1 (например, изменениями в аминокислотах или добавлениями или делециями аминокислот), то может быть, что определенная мутация, связанная с воздействием химиката, который не воздействует на дикий тип PYR/PYL, не будет находиться в позиции с тем же номером, что и в SEQ ID N0:1. Например, позицие аминокислоты К86 из PYL1 (SEQ ID N0:2) совпадает с позицием аминокислоты К59 в SEQ ID N0:1, что может быть легко проиллюстрировано на выравнивании двух данных последовательностей. В данном примере мутация в позиции 86 аминокислоты в SEQ ID N0:2 соответствует позиции 59 в SEQ ID N0:1.
Говорят, что две последовательности нуклеиновых кислот или два полипептида являются "идентичными", если последовательность нуклеотидов или аминокислотных остатков, соответственно, в данных двух последовательностях является одинаковой при выравнивании для максимального соответствия, как описано ниже. Термины "идентичный" или процент "идентичности" в контексте двух или более нуклеиново-кислотных или полипептидных последовательностей, относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют определенный процент аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми, при сравнении и выравнивании для максимального соответствия в окне сравнения, измеряемыми с помощью одного из последующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем выравнивания вручную и зрительного наблюдения. Если процент идентичности последовательности используется со ссылкой на белки или пептиды, то учитывается, что позиции остатков, которые не являются идентичными, часто отличаются замещениями консервативных аминокислот, где аминокислотные остатки замещены на другие аминокислотные остатки со сходными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью) и, следовательно, не изменяют функциональные свойства молекул. Если последовательности отличаются
консервативными замещениями, то процент идентичности последовательности может быть скорректирован в сторону повышения с учетом консервативного характера замещения. Средства для такого корректирования хорошо известны специалистам в данной области. Обычно такое корректирование включает в себя оценку консервативного замещения как частичное, а не полное несоответствие, тем самым увеличивая процент идентичности последовательности. Так, например, если идентичной аминокислоте присваивают 1 балл и неконсервативному замещению присваивают нуль баллов, то консервативному замещению присваивают от нуля до 1 балла. Оценка консервативных замещений рассчитывается в соответствии с, например, алгоритмом Meyers & Miller, Computer Applic. Biol. Sci. 4:11-17 (1988), например, как это реализовано в программе PC/GENE (Intelligenetics, Mountain View, California, USA).
Фраза "являются по существу идентичнымий", используемая в контексте двух нуклеиновых кислот или полипептидов, относится к последовательности, которая имеет по меньшей мере 60% идентичности последовательности с эталонной последовательностью. Альтернативно, процент идентичности может быть любым целым числом от 60% до 100%). Некоторые варианты осуществления включают в себя по меньшей мере: 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, по сравнению с эталонной последовательностью с помощью программ, описанных здесь, предпочтительно с помощью BLAST с использованием стандартных параметров, как описано ниже. Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к нуклеиновым кислотам, кодирующим полипептиды, которые являются по существу идентичными любой из SEQ ID NO : 1-119.
При сравнения последовательностей обычно одна последовательность играет роль эталонной последовательности, с которой сравнивают тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тестируемые последовательности и эталонную последовательность вводят в компьютер, задают, если необходимо, координаты подпоследовательностей и задают программные параметры алгоритма для последовательностей. Могут быть использованы программные параметры по умолчанию или могут быть заданы альтернативные параметры. Затем на основании программных параметров алгоритм сравнения последовательностей вычисляет процент идентичности последовательностей для тестируемых последовательностей относительно эталонной последовательности.
"Окно сравнения" для целей настоящего изобретения подразумевает сегмент из некоторого количества следующих друг за другом позиций, выбранный из группы, состоящей из от 20 до 600, обычно от около 50 до около 200, более обычно от около 100
до около 150, в котором последовательность может быть сравнена с эталонной последовательностью из того же числа следующих друг за другом позиций, после того как две последовательности оптимально выравнены. Способы выравнивания последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, по алгоритму локальной гомологии Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), no алгоритму выравнивания областей гомологии Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), по способу поиска сходства Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), по компьютеризованным воплощениям данных алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программ Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или с помощью выравнивания вручную и зрительного контроля.
Алгоритмы, которые являются подходящими для определения процента идентичности последовательности и подобия последовательностей, представляют собой алгоритмы BLAST и BLAST 2,0, которые описаны в Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, соответственно. Программное обеспечение для проведения анализов BLAST является общедоступным через интернет-сайт Национального центра биотехнологической информации (National Center for Biotechnology Information (NCBI)). Данный алгоритм включает, в первую очередь, выявление пар последовательностей с большим весом (high scoring sequence pairs, HSPs) путем выявления коротких слов длины W в последовательности-запросе, вес которых либо соответствуют, либо удовлетворяют некоторому положительному пороговому значению Т при выравнивании со словом той же длины в последовательности из базы данных. Т называют весовым пороговым значением соседних слов (Altschul et al, выше). Такие первоначальные совпадения соседних слов играют роль затравок для начала поисков с целью обнаружения более длинных HSP, содержащих их. Совпадения слов затем продлевают в обоих направлениях вдоль каждой последовательности до тех пор, пока суммарный вес выравнивания продолжает увеличиваться. Суммарные веса вычисляют, используя для нуклеотидных последовательностей параметры М (премия за пару совпадающих остатков, всегда больше нуля) и N (штраф за несовпадающие остатки; всегда меньше нуля). Для аминокислотных последовательностей матрицу подсчета весов используют для вычисления суммарного значения. Совпадения слов прекращают продлевать в каждом направлении, если: суммарный вес выравнивания снижается на величину X от максимальной достигнутой им величины; суммарный вес опускается до нуля или ниже из-за накопления одного или более выравниваний остатков с
отрицательным весом; или достигается конец любой последовательности. Параметры W, Т и X алгоритма BLAST определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) в качестве параметров по умолчанию используются длина слова (W), равная 28, Е-значение (ожидаемое число выравниваний с весом не менее этого значения), равное 10, М, равное 1, N, равное -2, и проведение сравнения для обоих нитей. Для аминокислотных последовательностей в программе BLA.STP в качестве параметров по умолчанию используются длина слова (W), равная 3, ожидание (Е), равное 10, и матрица замен BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)).
Алгоритм BLAST также выполняет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). Один критерий сходства, предоставляемый алгоритмом BLAST, представляет собой вероятность наименьшей суммы (P(N)), который является показателем вероятности, с которой совпадение между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями произошло бы случайно. Например, нуклеиновую кислоту считают схожей с эталонной последовательностью, если вероятность наименьшей суммы при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет менее чем примерно 0,01, более предпочтительно менее чем примерно 10~5 и наиболее предпочтительно менее чем примерно 10"20.
Термин "консервативно модифицированные варианты" относится как к аминокислотным последовательностям, так и к последовательностям нуклеиновой кислоты. В отношении определенных последовательностей нуклеиновой кислоты консервативно модифицированные варианты относятся к тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или по существу идентичные аминокислотные последовательности, или, если нуклеиновая кислота не кодирует аминокислотную последовательность, относятся к по существу идентичным последовательностям. Вследствие вырожденности генетического кода любой белок может кодироваться большим количеством функционально идентичных последовательностей нуклеиновых кислот. Например, все кодоны GCA, GCC, GCG и GCU кодируют аминокислоту аланин. Так, в каждой позиции, где кодоном определен аланин, кодон может быть изменен на другой из соответствующих описанных кодонов, без изменения кодируемого полипептида. Такие варианты нуклеиновых кислот представляют собой "молчащие варианты", которые являются одним из видов консервативно модифицированных вариантов. Каждая последовательность нуклеиновой кислоты в данном документе, которая кодирует полипептид, также описывает все возможные молчащие варианты
нуклеиновой кислоты. Специалисту в данной области очевидно, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (кроме AUG, который обычно является единственным кодоном для метионина) может модифицироваться, давая функционально идентичную молекулу. Соответственно, все молчащие варианты нуклеиновой кислоты, которые кодируют данный полипептид, подразумеваются в каждой описываемой последовательности. Что касается аминокислотных последовательностей, то специалисту в данной области очевидно, что индивидуальные замещения в последовательности нуклеиновой кислоты, пептидной, полипептидной или белковой последовательности, которые изменяют единственную аминокислоту или малый процент аминокислот в кодируемой последовательности, представляют собой "консервативно модифицированный вариант", в том случае, когда изменение приводит к замене аминокислоты на химически сходную аминокислоту. Таблицы консервативных замещений, содержащие данные о функционально сходных аминокислотах, хорошо известны в данной области.
Каждая из последующих шести групп содержит аминокислоты, которые являются консервативными замещениями друг для друга:
1) аланин (А), серии (S), треонин (Т);
2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е);
3) аспарагин (N), глютамин (Q);
4) аргинин (R), лизин (К);
5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V) и
6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W). (см., например, Creighton, Proteins (1984)).
Предполагается, что мутация замещения в мутантном PYR/PYL-рецепторном полипептиде включает в себя не только те конкретные аминокислотные замещения, которые названы в описании, например, в разделе примеров или в любой из фигур или таблиц описания, но также включает в себя аминокислоты, которые представляют собой консервативные замещения для данных конкретных аминокислот, за вычетом случаев, когда консервативно замещенная аминокислота является аминокислотой, встречающейся у дикого типа. В качестве неограничивающего примера, когда мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит замещение серии на треонин, предполагается, что мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид может альтернативно содержать замещение серина на аланин, так как треонин и аланин являются консервативными замещениями друг для друга, но мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид не будет содержать замещение серии на серии, так как серии является аминокислотой, которая присутствует в PYR/PYL-полипептиде дикого типа.
Для целей настоящего изобретения термин "агонист" или "агонисты" относится к молекуле, определяемой с помощью in vitro и in vivo анализов активности описанного белка-мишени, как описано здесь в другом месте. Агонисты представляют собой агенты, которые, например, вызывают или активируют экспрессию описанного белка-мишени или связываются с, стимулируют, увеличивают, открывают, активируют, способствуют, повышают активацию, сенсибилизируют или до-регулируют активность описанного белка-мишени (или кодирующего полинуклеотида). Агонисты включают в себя природные и синтетические молекулы. В некоторых вариантах осуществления агонисты представляют собой агрохимический агенты, например, фунгициды, гербициды, пестициды и/или удобрения. Анализы определения того, "воздействует" или "не воздействует" агонист на белок-мишень, включают в себя, например, контактирование предполагаемых агонистов с очищенным белком(ми)-мишенью(ми) с последующим определением функционального воздействия на активность описанного белка-мишени, как описано выше, или контактирование предполагаемых агонистов с клетками, экспрессирующими белок(ки)-мишень(и) с последующим определением функционального воздействия на активность описанного белка-мишени, как описано выше. Специалист в данной области сможет определить, является ли анализ подходящим для определения того, воздействует или не воздействует агонист на белок-мишень. Образцы или анализы, содержащие описанный белок-мишень, которые обрабатываются предполагаемым агонистом, сравниваются с контрольными образцами, не подвергавшимся воздействию агониста с целью изучения величины оказывемого агонистом эффекта. Контрольным образцам (необработанным агонистами) присваивается величина относительной активности, составляющая 100%. Агонизм описанного белка-мишени достигается, когда величина активности по сравнению с контрольной составляет 110%", необязательно 150%> , необязательно 200%, 300%, 400%, 500% или 1000-3000% и намного выше.
Для целей настоящего изобретения термин "ортогональный рецептор" относится к рецептору, который был модифицирован, для того чтобы выборочно распознавать новые лиганды ("ортогональные лиганды"). Для целей настоящего изобретения термин "ортогональный лиганд" относится к агенту, который активирует мутантный или модифицированный PYR/PYL-рецепторный полипептид, но не активирует PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа. В некоторых вариантах осуществления ортогональные лиганды представляют собой агрохимический агенты, например, фунгициды, гербициды, пестициды нематоциды, активаторы роста, синергисты, гербицидные средства защиты, регуляторы роста растений, репелленты от насекомых и/или удобрения.
Термин "растение" включает в себя целые растения, вегетативные органы и/или структуры побегов (например, листья, стебли и клубни), корни, цветы и цветочные органы (например, прицветники, чашелистики, лепестки, тычинки, плодолистики, пыльники), семяпочки (включая яйца и центральные клетки), семя (включая зиготу, эмбрион, эндосперму и оболочку семени), плод (например, зрелую завязь), проростки, растительную ткань (например, сосудистую ткань, основную ткань и т.п.), клетки (например, клетки устьиц, клетки завязи, трихомы и т.п.) и их потомство. Класс растений, которые могут быть использованы в способе по изобретению, как правило, настолько же широк, что и класс высших и низших растений, подходящих для технологий трансформации, включая покрытосеменные (однодольные и двудольные растения), голосеменные, папоротники и многоклеточные водоросли. Данный класс включает в себя растения с множеством уровней плоидности, включая анеуплоидные, полиплоидные, диплоидные, гаплоидные и гемизиготные состояния.
Для целей настоящего изобретения термин "промотор" относится к полинуклеотидной последовательности, способной вызывать транскрипцию кодирующей последовательности в клетке. Таким образом, промоторы, используемые в полинуклеотидных конструкциях по данному изобретению, включают цис-действующие регуляторные элементы контроля транскрипции и регулирующие последовательности, которые вовлечены в регуляцию или модуляцию времени и/или скорости транскрипции гена. Например, промотор может представлять собой цис-регуляторный элемент контроля транскрипции, включающий энхансер, промотор, терминатор транскрипции, точку начала репликации, последовательность интеграции в хромосому, 5'- и З'-нетранслируемые области или последовательность интрона, которые вовлечены в регуляцию транскрипции. Такие цис-регуляторные последовательности, как правило, взаимодействуют с белками или другими биологическими молекулами для осуществления (запуск/завершение, регуляция, модулирование и т.д.) транскрипции гена. "Промотор растения" представляет собой промотор, способный инициировать транскрипцию в клетках растений. "Конститутивный промотор" представляет собой промотор, который способен инициировать транскрипцию почти во всех типах ткани, в то время как "тканеспецифичный промотор" инициирует транскрипцию только в одном или нескольких определенных типах тканей.
Полинуклеотидная последовательность является "гетерологичной" для организма или для второй полинуклеотидной последовательности, если она происходит из чужеродного вида, или, если она происходит из того же вида, то она является модифицированной по сравнению со своей первоначальной формой. Например, если
говорят, что промотор является функционально связанным с гетерологичной кодирующей последовательностью, то это означает, что кодирующая последовательность происходит из одного вида, в то время как промоторная последовательность происходит из другого, отличного вида, или, если обе последовательности происходят из одного вида, то кодирующая последовательность в естественных условиях не связана с промотором (например, является кодирующей последовательностью, полученной генно-инженерным способом, например, из другого гена того же вида или аллели из другого экотипа или сорта).
Термин "экспрессионная кассета" относится к конструкции нуклеиновой кислоты, которая при введении в клетку-хозяина приводит к транскрипции и/или трансляции РНК или полипептида, соответственно. Антисмысловые или смысловые конструкции, которые не транслируются или не могут быть транслированы, прямо включены в данное определение. Как в случае экспрессии трансгенов, так и в случае супрессии эндогенных генов (например, антисмысловой или смысловой супрессии), специалисту в данной области очевидно, что вставленная полинуклеотидная последовательность не обязательно должна быть идентичной, но может быть только по существу идентичной последовательности гена, из которого она происходит. Как объясняется в настоящем документе, данные по существу идентичные варианты подпадают под действие ссылки на конкретную последовательность нуклеиновой кислоты.
Для целей настоящего изобретения термины "абиотический стресс", "стресс" или "стрессовое состояние" относятся к воздействию на растение, растительную клетку или подобное неживого ("абиотического") физического или химического агента, который оказывает неблагоприятное влияние на метаболизм, рост, развитие, размножение или выживание растения (в совокупности, "рост"). Растение может подвергаться стрессу, вызванному, например, фактором окружающей среды, таким как вода (например, наводнение, засуха или обезвоживание), анаэробные условия (например, более низкий уровень кислорода или высокий уровень СОг), нарушение осмотических условий, солености или температуры (например, жарко/тепло, холод, замораживание или мороз), недостаток питательных веществ или воздействие загрязняющих веществ, или вызванному гормоном, вторичным мессенджером или другой молекулой. Анаэробный стресс, например, обусловлен снижением уровней кислорода (гипоксия или аноксия), достаточного для получения стрессового ответа. Стресс, обусловленный наводнением, может быть связан с длительным или временным погружением растения, части растения, ткани или изолированной клетки в жидкую среду, как это происходит во время муссонов, сезона дождей, паводков или чрезмерного орошения растений и тому подобного.
Холодовый стресс или тепловой стресс может произойти из-за отклонения температур от оптимального диапазона температур роста в сторону уменьшения или увеличения, соответственно, для конкретного вида растений. Такие оптимальные температурные диапазоны роста легко определяются или известны специалистам в данной области. Стресс обезвоживания может быть вызван потерей воды, сниженным тургором или сниженным содержанием воды клетки, ткани, органа или всего растения. Стресс, обусловленный засухой может быть вызван или связан с лишением воды или уменьшением подачи воды в клетку, ткань, орган или организм. Стресс, вызванный соленостью (солевой стресс) может быть связан с или вызван нарушением в осмотическом потенциале внутриклеточной и внеклеточной среды клетки. Для целей настоящего изобретения термин "устойчивость к абиотическому стрессу" или "устойчивость к стрессу" относится к повышенной устойчивости или толерантности к абиотическому стрессу растений по сравнению с растениями в нормальных условиях и относительно хорошей дееспособности в условиях абиотического стресса. Для целей настоящего изобретения термин "засухоустойчивость" и "выносливость к засухе" используется для обозначения повышенной устойчивости или толерантности растений к стрессу, вызванному уменьшением доступности воды, по сравнению с нормальными обстоятельствами, и к способности растения функционировать и выжить в средах с малым содержанием воды с относительно хорошей дееспособностью.
Подробное описание изобретения
I. Введение
Удивительно, что белки, принадлежащие к семейству рецепторов абсцизовой кислоты (ABA), семейство PYR/PYL-рецепторов, могут быть мутированы для связывания с химического агентами и реагирования на химический агенты иные, чем ABA. Было обнаружено, что некоторые агрохимический агенты при контакте с PYR/PYL-рецепторными полипептидами дикого типа в присутствии ABA снижали уровень активации PYR/PYL-рецепторов, происходящей под действием ABA. Дополнительным удивительным обнаружением явилось открытие того, что аминокислота, соответствующая остатку К59 из PYR1, являющемуся консервативным остатком лиганд-связывающего кармана PYR/PYL-рецепторов, который контактирует с ABA в PYR/PYL-рецепторах дикого типа, может быть мутирована с образованием многих вариантов, что делает возможным создание ортогональных рецепторов для многочисленных ортогональных лигандов.
Когда PYR/PYL-рецепторные полипептиды были затем подвергнуты мутагенезу и
скринингу, чтобы установить, может ли быть улучшено связывание PYR/PYL-рецепторов с данными новыми химическими агонистами, то было неожиданно обнаружено, что некоторые мутации в PYR/PYL-рецепторных полипептидах приводят к активации мутантного PYR/PYL-полипептида не встречающимися в природе лигандами (ортогональные лиганды). Более того, в некоторых случаях мутации реструктуризовали лиганд-связывающий карман PYR/PYL-рецепторов и, таким образом, одновременно лишали природныйо лиганд (ABA) возможности активировать мутантный PYR/PYL-полипептид.
Таким образом, возможно так изменить АВА-рецепторы, такие как PYR/PYL-рецепторные полипептиды, что для их выборочной активации могут быть использованы соединения помимо ABA. Более того, поскольку мутантный PYR/PYL-рецептор (ортогональный рецептор) может быть избирательно активирован путем применения ортогонального лиганда (например, в рамках программы по улучшению ответа растений на водный дефицит), то проблему обусловленного сцеплением генов падения урожайности " можно избежать. Обусловленное сцеплением генов падение урожайности традиционно связывается с гиперэкспрессией рецептора, при которой гиперэкспрессия гена при нормальных или оптимальных условиях роста (т.е. в отсутствии засухи или других факторов стресса) связана с замедленным ростом.
П. Мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды
Настоящее изобретение относится к мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидам, активирующимся в ответ на воздействие химических агентов, которые не акивируют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа, а также к полинуклеотидам, кодирующим мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, активирующиеся в ответ на воздействие химических агентов, которые не активируют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа; к экспрессионным кассетам и векторам экспрессии, содержащим полинуклеотиды, кодирующие мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, активирующиеся в ответ на воздействие химических агентов, которые не активируют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа; к растениям, содержащим мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, активирующиеся в ответ на воздействие химических агентов, которые не активируют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа; к способам получения растений, содержащих мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, активирующиеся в ответ на воздействие химических агентов, которые не активируют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа; а также к способам получения мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный
полипептид, но не PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа активируется в ответ на воздействие химического агента бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора или ВТН (ацибензолар-Б-метил), когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом. В другом варианте осуществления настоящего изобретения мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды активируются в ответ на воздействие химических агентов, которые не активриуют PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа, и также активируются в ответ на воздействие ABA, соединения, которое на самом деле активирует PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа.
Широкое разнообразие последовательностей PYR/PYL-полипептидов дикого типа (природных) известно в данной области. Хотя PYR1 первоначально был идентифицирован как рецептор абсцизовой кислоты (ABA) в Arabidopsis, на самом деле, PYR1 является членом группы по меньшей мере 14 белков (белков PYR/PYL), относящихся к тому же семейству белков Arabidopsis, что и посредники сигнального пути ABA. Данное семейство белков присутствует также и в других растениях (см., например, ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ) и характеризуется, в частности, наличием одного или более или всех доменов из списка, включающего домен 2 поликетидной циклазы (PF10604), домен 1 поликетидной циклазы (PF03364) и домен Bet V 1 (PF03364). Домены надсемейства START/ Bet V 1 описаны, например, у Radauer, BMCEvol. Biol. 8:286 (2008). В некоторых вариантах осуществления PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа содержит любую из SEQ ID N0:1-119. В некоторых вариантах осуществления PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа является по существу идентичным (например, по меньшей мере, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%) идентичности) любой из SEQ ID N0:1-119.
Мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды представляют собой варианты природных (например, дикого типа) PYR/PYL-рецепторных полипептидов. Варианты включают в себя, например, слитые белки, делеции, инсерции или мутации, не приводящие к потере активности. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным (например, по меньшей мере, на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 95%, 96 %, 97%, 98% или 99% идентичен) любой из SEQ ID N0:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, ПО, 111, 112, 113, 114,
115, 116, 117, 118 или 119 и содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более мутаций, как описано выше, по сравнению с соответствующим PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит слияние амино- и/или карбокси-конца с гетерологичной аминокислотной последовательностью.
Авторы нашли ряд мутаций, которые воздействуют на ответ на химический агенты. Некоторые мутации встречаются при испытании различных химический агентов и, по всей видимости, позволяют в некоторых случаях модифицированному PYR/PYL-рецепторному белку функционировать в ответ на разнообразные химический агенты. Это не всегда так; некоторые мутации, видимо, являются избирательными для одного химического агента и, по всей видимости, не способствуют активации модифицированного PYR/PYL-рецепторного белка другими химическими агентами. В некоторых случаях одной мутации достаточно для того, чтобы модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок активировался в ответ на воздействие химического агониста. В других случаях множественные мутации дают возможность химическому агонисту активировать модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок содержит две, три, четыре, пять, шесть или больше мутаций, необходимых для того чтобы белок активировался в ответ на воздействие химического агониста.
Модифицированные PYR/PYL-рецепторные белки могут быть мутированы в любом месте последовательности PYR/PYL-рецепторного полипептида. В некоторых случаях и, как обсуждалось здесь, мутация может произойти в лиганд-связывающем кармане PYR/PYL-полипептида. Однако мутация в лиганд-связывающем кармане PYR/PYL-полипептида не обязательно является условием активации ортогональным лигандом. Без привязки к конкретной теории можно предположить, что мутации вне лиганд-связывающего кармана, которые приводят к активации PYR/PYL-рецепторного белка ортогональным лигандом, оказывают косвенное влияние на архитектуру связывания лиганда, что приводит к способности рецептора активироваться ортогональным лигандом. Дополнительно предполагается, что специфические мутации в позиции, соответствующей аминокислоте К59 в PYR1 (SEQ ID N0:1), делают возможной более легкую активацию ортогональными лигандами мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, чем PYR/PYL-рецепторных полипептидов дикого типа, что является желательным качеством для конструированных ортогональных рецепторов.
Любые мутации, описанные здесь, могут быть осуществлены в полипептидах любой из SEQ ID N0:1-119 или в полипептидах, являющихся по существу идентичными
любой из SEQ ID N0:1-119. Альтернативно, любая из описанных выше мутаций могут быть осуществлена в полипептиде, содержащем любую из консенсусных последовательностей, которые идентифицируют PYR/PYL-белки, например, как изложено ниже.
Консенсусные последовательности
PYR/PYL-рецепторные белки могут быть описаны со ссылкой на выравнивания последовательностей, которые определяют консервативные аминокислоты или мотивы (то есть где изменения в последовательностях могут изменить функцию белка), и области, где изменение происходит в выравнивании последовательностей (то есть там, где изменение последовательности вряд ли существенно повлияет на активность белка). SEQ ID N0:120-123 предоставляют консенсусные последовательности, применимые для определения PYR/PYL-рецепторных полипептидов дикого типа. Консенсусные последовательности SEQ ID N0:120-123 были получены выравниванием всех 14 членов семейства PYR/PYL-рецепторных белков Arabidopsis. В консенсусных последовательностях SEQ ID N0:120-123 прописная буква представляет аминокислотный остаток, который является абсолютно консервативным у всех 14 членов семейства PYR/PYL-рецепторных белков Arabidopsis, в то время как "х" представляет аминокислотный остаток, который не является абсолютно консервативным у всех 14 членов семейства и который может представлять собой любую аминокислоту. Следует иметь в виду, что при выборе аминокислот для инсерции в позиции, отмеченном "х", в некоторых вариантах осуществления аминокислота выбирается из тех аминокислот, которые найдены в соответствующем позиции в PYR/PYL-белке дикого типа или в мутантном PYR/PYL-белке. От PYR1 до PYL13
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxxxxFxxxC (SEQ ID N0:120) GxxRxVxxxSxxPAxxSxExLxxxD (SEQ ID N0:121) GGxHRLxNYxS (SEQ ID N0:122)
ESxxVDxPxGxxxxxTxxFxxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:123)
Консенсусная последовательность CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxxxxFxxxC (SEQ ID N0:120) содержит области, соответствующие аминокислотам от 30 до 65 из PYR1 (SEQ ID N0:1). Консенсусная последовательность GxxRxVxxxSxxPAxxSxExLxxxD (SEQ ID N0:121) содержит области, соответствующие аминокислотам от 76 до 100 из PYR1 (SEQ ID N0:1). Консенсусная последовательность GGxHRLxNYxS (SEQ ID N0:122) содержит области, соответствующие аминокислотам от 112 до 122 из PYR1 (SEQ ID N0:1). ESxxVDxPxGxxxxxTxxFxxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:123) содержит области,
соответствующие аминокислотам от 141 до 171 из PYR1 (SEQ ID N0:1).
В некоторых случаях PYR/PYL-мутация происходит в остатке в консенсусной последовательности из SEQ ID N0:120-123. В некоторых случаях мутация происходит в остатке, который является абсолютно консервативным у всех 14 членов семейства PYR/PYL-рецепторных белков. В некоторых случаях мутация происходит в остатке, который не является абсолютно консервативным. Как здесь описано, мутация замещения в остатке в пределах консенсусной последовательности изображена в виде скобки на месте аминокислоты консенсусной последовательности. Когда более одной аминокислоты окружено упомянутой скобкой, это означает, что любая из аминокислот, окруженных упомянутой скобкой, может быть замещена на аминокислоту дикого типа в данном остатке консенсусной последовательности.
Дополнительно, модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок может содержать более одной мутации внутри консенсусной последовательности или может содержать по меньшей мере две или более консенсусных последовательностей, причем каждая консенсусная последовательность имеет по меньшей мере одну мутацию.
К59. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149).
Y120. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность GGxHRLxN[HC]xS(SEQ ID N0:150).
1110. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность [STCAYWJxGGxHRLxNYxS (SEQ ID N0:151).
Р42. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность CxSxxxxxxxAP[ST] xxxWxxxxxFxxPxxxxxFxxxC (SEQ ID N0:152).
S47. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность CxSxxxxxxxAPxxxxW[PRA]xxxxFxxPxxxxxFxxxC (SEQ ID N0:153).
К59 и Y120. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и GGxHRLxN[HC]Xs (SEQ ID N0:150).
K59 и 1110. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и [STCAYWJxGGxHRLxNYxS (SEQ ID N0:151).
K59 и P42. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность
CxSxxxxxxxAP[ST]xxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:154).
К59 и S47. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность
CxSxxxxxxxAPxxxxW[PRA]xxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:155).
Н60. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxxx[R]FxxxC (SEQ ID N0:156).
S92. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность GxxRxVxxxSxxPAxx[T]xExLxxxD (SEQ ID N0:157).
Е140. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность [GQDJSxxVDxPxGNxxxxTxxFxxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:158).
К59 и Н60. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW][R]FxxxC (SEQ ID N0:159).
К59 и S92. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и GxxRxVxxxSxxPAxx[T]xExLxxxD (SEQ ID N0:157).
K59 и E140. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и [GQD]SxxVDxPxGNxxxxTxxFxxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:158).
E94. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность GxxRxVxxxSxxPAxxSx[D]xLxxxD (SEQ ID N0:160).
К59 и Е94. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149)
и GxxRxVxxxSxxPAxxSx[D]xLxxxD (SEQ ID N0:160).
N119. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность GGxHRLx[Y]YXS (SEQ ID N0:161).
К59 и N119. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и GGxHRLx[Y]YXS (SEQ ID N0:161).
HI 15. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность GGX[Y]RLxNYxS (SEQ ID N0:162).
F159. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусную последовательность ESxxVDxPxGNxxxxTxx[SL]xxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:163).
К59 и F159. В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецептор содержит консенсусные последовательности
CxSxxxxxxxAPxxxxWxxxxxFxxPxxx[ACDEFGHLMNQRSTVYW]xFxxxC (SEQ ID N0:149) и ESxxVDxPxGNxxxxTxx[SL]xxxxxxxNLxxL (SEQ ID N0:163).
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды по изобретению содержат одну или более из описанных выше консенсусных последовательностей (SEQ ID N0: 149-163) или их консервативные варианты. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, содержащих одну или более из описанных выше консенсусных последовательностей (SEQ ID N0: 149-163) или их консервативные варианты.
Модифицированные PYR/PYL-рецепторные белки альтернативно могут быть описаны со ссылкой на идентификаторы последовательностей ("SEQ идентификаторы") для PYR/PYL-полипептидов. Модифицированные PYR/PYL-рецепторы могут содержать SEQ ID, перечисленную здесь, и дополнительно содержать по меньшей мере одну (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, и т.д.) мутацию в позиции аминокислоты (например, мутацию замещения, делеции или инсерции), как описано здесь. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит любую из SEQ ID N0:1-119 и дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию в любом позиции аминокислоты.
Альтернативно, модифицированные PYR/PYL-рецепторы могут быть существенно идентичны SEQ ID, перечисленной здесь, и дополнительно содержать по меньшей мере одну (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, и т.д.) мутацию в позиции аминокислоты. В
некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:1-119 и дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию в любой позиции аминокислоты.
В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок был модифицирован в остатке, соответствующем аминокислоте в позиции 59 в PYR1 (SEQ ID N0:1). Мутация в данном остатке, называемая также "К59", нарушает чувствительность к ABA у модифицированного PYR/PYL-рецепторного белка.
В некоторых случаях мутация К59 является не только достаточной, чтобы отменить чувствительность к ABA у модифицированного PYR/PYL-рецепторного белка, но и достаточной для придания модифицированному PYR/PYL-рецепторному белку чувствительности к новому химическому агонисту ("ортогональному лиганду"). В некоторых случаях мутацией К59, которая приводит к активации рецептора ортогональным лигандом, является замена остатка дикого типа на аланин, замена остатка дикого типа на цистеин, замена остатка дикого на аспарагиновой кислоты, замена остатка дикого типа на глутаминовую кислоту, замена остатка дикого типа на фенилаланин, замена остатка дикого типа на глицин, замена остатка дикого типа на гистидин, замена остатка дикого типа на лейцин, замена остатка дикого типа на метионин, замена остатка дикого типа на аспарагин, замена остатка дикого типа на глутамин, замена остатка дикого типа на аргинин, замена остатка дикого типа на серии, замена остатка дикого типа на треонин, замена остатка дикого типа на валин, замена остатка дикого типа на тирозин или замена остатка дикого типа на триптофан.
Дополнительно, модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок может содержать по меньшей мере еще одну мутацию в дополнение к мутации К.59. Было установлено, что многочисленные химические агонисты активируют модифицированные PYR/PYL-рецепторные белки, когда модификации включают в себя мутацию К59 и одну, две, три, четыре или пять дополнительных мутаций в других остатках в белке, как показано ниже в таблицах 1-5. Неограничивающий перечень примеров комбинаций мутаций, для которых К59 является сайтом одной мутации, и для которых модифицированный PYR/PYL-рецептор не подвергается воздействию ABA, но подвергается воздействию ортогонального лиганда, включает в себя: S47, К59 и Y120 К59, Y120 и V144 Р42, К59 и Y120 Р42, К59, Y120 и Т124 Р42, К59, Y120 и Е154
Е12, Е43, К59,1110 и N133
Е12, L25, Е43, К59,1110 и N133
Р27, К59 и К63
Т57 и К59
R50, К59 и Е141
К59, Н60 и N151
К59, Н60, Е102, Т125 и Е141
К59 и 182
К59 и S92
Н21, К59, Н60, S92 и R116 Р41, К59 и Н60 К59 и N119
Q24, К59,182, F159 и D161
К59, Y120 и М158
Р42, К59, Y120 и М158
Р42, К59, D97, Y120, V163 и А172
Р42, L44, К59, Y120, V138 и М158
Р42, К59, Y120, V123, V139 и М158
S47, V49, К59, Y120, М158 и А177
К59, V81, Y120, М158 и V163
Р27, Р42, К59, D97, Y120, М158 и Т173
Р42, К59, R74, Y120 и М158
S29, К59, D97, Y120, V163 и А172
Р42, К59, Y120, V123, V139, М158 и V163
К59, V81, Y120, М158 и V163
Е12, К59, V75, D97, Y120, V163 и А172
L33, Р42, К59, Y120, V123 и М158
Р42, К59, Y120, М158, V163 и V174
RIO, Р42, К59, D97, Y120, V163 и А172
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, аспарагин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин или триптофан.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный
полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в PYR1 (SEQ ГО N0:1) с заменой природного остатка на неприродный остаток. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в PYR1 (SEQ ID N0:1), с заменой природного остатка на остаток аланина, остаток цистеина, остаток аспарагиновой кислоты, остаток глутаминовой кислоты, остаток фенилаланина, остаток глицина, остаток гистидина, остаток изолейцина, остаток лизина, остаток лейцина, остаток метионина, остаток аспарагина, остаток пролина, остаток глутамина, остаток аргинина, остаток серина, остаток треонина, остаток валина, остаток триптофана или остаток тирозина. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из R10Q, E12G, Е12К, L25R, P27L, S29N, L33F, P42S, E43G, L44F, S47P, V49I, R74C, V75I, V81M, D97N, I110S, Y120C, Y120H, V123I, Т124М, N133D, V138M, V139I, V144A, E154G, M158I, V163I, А172Т, Т173А, V174I, А177Т или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид еще дополнительно содержит остаток изолейцина в одной или более позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и 110 в PYR1 (SEQ ID N0:1). В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутацию с заменой валина на изолейцин в одной или более позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и 110 в PYR1 (SEQ ID N0:1). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок был модифицирован по остатку, отличающемуся от остатка К59. Неограничивающий перечень примеров мутаций, кроме К59, которые отменяют воздействие ABA, но способствуют активации модифицированного PYR/PYL-рецепторного белка ортогональным лигандом, включает в себя: D26 Е94
F159
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позицию аминокислоты 26 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация представляет собой D26G. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позицию аминокислоты 94 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация представляет собой E94D. В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позицию аминокислоты 159 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация представляет собой F159L. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
В некоторых случаях модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок был модифицирован по меньшей мере по двум остаткам, помимо остатка К59. Неограничивающий перечень примеров комбинаций мутаций, которые не включают в себя мутацию К59 и отменяют воздействие ABA, но способствуют активации модифицированного PYR/PYL-рецепторного белка ортогональным лигандом, включает в себя:
R37 и F71
1110, Е114, V138 и
Н115 и F159
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере две мутации аминокислот, соответствующих позициям 37, 71, ПО, 114, 115, 138 и/или 159 в PYR1 (SEQ ID N0:1), в котором мутации выбраны из R37Q, F71S, II ЮТ, E114D, H115Y, V138M, F159S или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
В некоторых вариантах осуществления мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит любую из SEQ ID N0:124-148 или 164-178. Лиганд-связыеающий карман PYR/PYL
PYR/PYL-рецепторные белки имеют консервативный лиганд-связывающий карман в START-домене, фланкированный двумя петлями, называемыми "ворота" и "защелка" (Melcher, К. et al., Nature 462 (2009)). ABA связывается с PYR/PYL-рецепторным белком в лиганд-связывающем кармане, и связывание ABA вызывает закрытие петли, для
запирания ABA внутри лиганд-связывающего кармана. В PYR/PYL-рецепторных белках дикого типа остатки, образующие лиганд-связывающий карман, представляют собой те остатки, боковые цепи которых находятся в пределах 4 Ангстрем от ABA или молекул воды, окружающих ABA при связывании ABA в кармане PYR/PYL-рецепторного белка. Например, остатки, образующие лиганд-связывающий карман PYR1 (SEQ ID N0:1), представляют собой: Р55, К59, F61, 162, R79, V81, V83, Р88, А89, S92, Е94, F108, 1110, HI 15, L117, Y120, Е141, F159, V163 и N167.
В некоторых вариантах осуществления PYR/PYL-рецепторные полипептиды мутированы по меньшей мере по одному аминокислотному остатку, образующему лиганд-связывающий карман PYR/PYL-рецепторного белка. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления мутантный PYH/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позиции 55, 59, 61, 62, 79, 81, 83, 88, 89, 92, 94, 108, ПО, 115, 117, 120, 141, 159, 163 и/или 167 в PYR1 (SEQ ID N0:1), причем мутация выбирается из Р55, К59, F61, 162, R79, V81, V83, Р88, А89, S92, Е94, F108, 1110, HI 15, L117, Y120, Е141, F159, V163, N167 или их комбинациям. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к применению вышеупомянутых белков и/или последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих такие полипептиды, в способах и композициях (например, экспрессионных кассетах, растениях и т.д.) по настоящему изобретению. Изолирование полинуклеотидной последовательности, кодирующей растительный PYR/PYL-рецептор дикого типа (например из растений, в которых PYR/PYL-последовательности до сих пор не определены), может быть осуществлено рядом способов. Например, олигонуклеотидные зонды на основе PYR/PYL-кодирующих последовательностей, раскрытых (например, перечисленных в перечне последовательностей) здесь, могут быть применены для определения желаемого PYR/PYL-гена дикого типа в кДНК или библиотеке геномной ДНК. Для построения геномных библиотек крупные сегменты геномной ДНК получаются случайной фрагментацией, например, с помощью рестрикционных эндонуклеаз и лигируются с векторной ДНК с образованием конкатамеров, которые могут быть упакованы в соответствующий вектор. Чтобы подготовить библиотеку кДНК, мРНК выделяют из желаемой ткани, такой как лист определенного вида растения, и из мРНК получают библиотеку кДНК, содержащую генный транскрипт, представляющий интерес. Альтернативно, кДНК может быть получена из мРНК, экстрагированной из других
тканей, в которых экспрессируется ген PYR/PYL.
кДНК или геномная библиотека могут быть затем подвергнуты скринингу с помощью зонда на основе последовательности PYR/PYL-гена, раскрытого здесь. Зонды могут быть применены для гибридизации с последовательностями геномной ДНК или кДНК, чтобы изолировать гомологичные гены в том же или другом виде растений. Альтернативно, антитела, полученные против полипептида, могут быть применены для скрининга библиотеки экспрессии мРНК.
Альтернативно, нуклеиновые кислоты, кодирующие PYR/PYL, могут быть амплифицированы из образцов нуклеиновых кислот с использованием методик амплификации. Например, технология полимеразной цепной реакции (ПЦР) может быть использована для амплификации кодирующих последовательностей PYR/PYL непосредственно из геномной ДНК, из кДНК, из геномных библиотек или библиотек кДНК. ПЦР и другие in vitro способы амплификации также могут быть применимы, например, для клонирования полинуклеотидных последовательностей, кодирующих PYR/PYL, которые нужно экспрессировать, чтобы получить нуклеиновые кислоты для применения в качестве зондов для обнаружения присутствия желаемой мРНК в образцах, для секвенирования нуклеиновой кислоты или для других целей. Для общего обзора ПЦР см. PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. (Innis, M., Gelfand, D., Sninsky, J. and White, Т., eds.), Academic Press, San Diego (1990). Соответствующие праймеры и зонды для идентификации последовательностей из тканей растений генерируются из сравнений последовательностей, представленных здесь, с другими родственными генами.
В некоторых вариантах осуществления был секвенирован частичный или полный геном ряда растений и определены открытые рамки считывания. Поиском посредством BLAST можно идентифицировать кодирующую последовательность для PYR/PYL дикого типа в различных растениях.
III. Химические агонисты и препараты агонистов
Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к сельскохозяйственным химическим препаратам, разработанным для контактирования с мутантными PYR/PYL-рецепторными полипептидами и/или растениями, содержащими мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, причем препарат содержит агонист мутантного PYR/PYL-полипептида по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственный химический агонист содержит фунгицид, гербицид, пестицид, нематоцид, активатор роста, синергист, гербицидное средство защиты, регулятор роста растений, репеллент от насекомых или удобрение. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственный химический агонист выбран из группы,
состоящей из бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-8-метила).
Агрохимический агенты часто готовят и наносят на растения в виде сложных эфиров или солей, которые могут улучшить поглощение и эффективность. Под действием повсеместно встречающихся клеточных эстераз сложные эфиры (или гомологичные соединения, таких как S-метилпроизводные ацибензолара) могут быть преобразованы в свободные кислоты или спирты, которые являются биологически активными формами. Например, бромоксинил бутират, бромоксинил гептаноат, бромоксинил октаноат и бромоксинил-калий являются альтернативными препаратами бромоксинила. После абсорбции данные соединения превращаются в одну и ту же биологически активную форму (бромоксинил) в растениях. Могут быть произведены подобные варианты хлороксинила и иоксинила, и они известны (например, иоксинил-литий, иоксинил октаноат, иоксинил-натрий и др.). ВТН представляет собой S-метилпроизводное ацибензолара, активную форму ВТН в растениях. Фенгексамид
Было установлено, что мутация аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, наряду с мутацией по меньшей мере еще одной аминокислоты в PYR/PYL-рецепторном полипептиде, приводит к активации модифицированного рецептора фенгексамидом (таблицы 1, 7 и 8). Неограничивающий перечень примеров комбинаций мутаций, в результате которых модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие фенгексамида, включает в себя: S47P, K59R и Y120H K59R, Y120H и V144A P42S, K59R и Y120C P42S, K59R, Y120C и Т124М P42S, K59R, Y120C и E154G E12G, E43G, K59R, I110S и N133D E12G, L25R, E43G, K59R, I110S и N133D K59R, Y120H и M158I P42S, K59R, Y120H и M158I P42S, K59R, D97N, Y120H, V163I и А172Т P42S, L44F, K59R, Y120H, V138M и M158I P42S, K59R, Y120H, V123I, V139I и M158I S47P, V49I, K59R, Y120H, M158I и А177Т K59R, V81M, Y120C, M158I и V163I
P27L, P42S, K59R, D97N, Y120H, M158I и Т173А P42S, K59R, R74C, Y120H и M158I S29N, K59R, D97N, Y120H, V163I и А172Т P42S, K59R, Y120H, V123I, V139I, M158I и V163I K59R, V81M, Y120H, M158I и V163I Е12К, K59R, V75I, D97N, Y120H, V163I и А172Т L33F, P42S, K59R, Y120H, V123I и M158I P42S, K59R, Y120H, M158I, V163I и V174I R10Q, P42S, K59R, D97N, Y120H, V163I и А172Т
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие фенгексамида. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-белок содержит один или более наборов мутаций, соответствующих тем, которые изложены выше. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок, содержащий любой из наборов мутаций, соответствующих изложенным выше, дополнительно содержит остаток изолейцина в одной или более позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и ПО в PYR1 (SEQ ID N0:1). В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецепторный белок содержит мутацию с заменой валина на изолейцин в одной или более позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и ПО в PYR1 (SEQ ID N0:1). (например, мутации с заменой валина на изолейцин в позициях аминокислот 64 и/или 114 в PYL2 (SEQ ID N0:3), которые соответствуют позициям 62 и ПО, соответственно, в PYR1). В некоторых вариантах осуществления модифицированные PYR/PYL-рецепторные белки являются являются по существу идентичнымими любой из SEQ ID N0:1-119 и/или содержат одну или более консенсусную последовательность, выбранную из SEQ ID N0:149-163. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Дополнительно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ скрининга модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов включает в себя скрининг модифицированного полипептида с целью определения, демонстрирует ли он реакцию в ответ на воздействие фенгексамида. Бромоксинил
Было также обнаружено, что мутация аминокислоты, соответствующей К.59 в SEQ ID N0:1, наряду с мутацией по меньшей мере еще одной аминокислоты в PYR/PYL-рецепторном полипептиде, приводит к активации модифицированного рецептора
бромоксинилом (таблица 2). Неограничивающий перечень примеров комбинаций
мутаций, в результате которых модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в
ответ на воздействие бромоксинила, включает в себя:
Т57А и K59R
R50G, K59R, и E141Q
К59, H60R, и N151D
K59R, H60R, E102G, Т125А, и E141D
K59R и I82N
K59R и S92T
H21Y, K59R, H60R, S92T, и R116K P41L, K59R и H60R
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецептор по настоящему изобретению активируется в ответ на воздействие бромоксинила или аналогов бромоксинила - хлороксинила и иоксинила. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-белок содержит один или более наборов мутаций, соответствующих тем, которые изложены выше. В некоторых вариантах осуществления такие белки являются являются по существу идентичнымими любой из SEQ ID N0:1-119 и/или содержат одну или более консенсусную последовательность, выбранную из SEQ ID N0:149-163. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, способ скрининга модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов включает в себя скрининг модифицированного полипептида с целью определения, активируется ли он в ответ на воздействие бромоксинила или аналогов бромоксинила - хлороксинила и иоксинила. Дихлобенил
В некоторых случаях мутация одной аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, приводит к активации модифицированного рецептора дихлобенилом (таблица 3). В некоторых случаях мутация одной аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, наряду с мутацией по меньшей мере еще одной аминокислоты в PYR/PYL-рецепторном полипептиде, приводит к активации модифицированного рецептора дихлобенилом. В некоторых случаях, чтобы активировать рецептор дихлобенилом, мутация аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, не требуется в модифицированном PYR/PYL-рецепторном полипептиде до тех пор, пока в PYR/PYL
рецепторном полипептиде имеется хотя бы одна мутация другой аминокислоты.
Неограничивающий перечень примеров мутаций и комбинаций мутаций, в результате
которых модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие
дихлобенила, включает в себя:
K59R
D26G
E94D
R37Q и F71S P27L, K59R и K63N
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие дихлобенила. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-белок содержит один или более наборов мутаций, соответствующих тем, которые изложены выше. В некоторых вариантах осуществления такие белки являются являются по существу идентичнымими любой из SEQ ID N0:1-119 и/или содержат одну или более консенсусную последовательность, выбранную из SEQ ID N0:149-163. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ скрининга модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов включает в себя скрининг модифицированного полипептида с целью определения, активируется ли он в ответ на воздействие дихлобенила. Беноксакор
В некоторых случаях мутация одной аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, приводит к активации модифицированного рецептора беноксакором (таблица 4). В некоторых случаях, чтобы активировать рецептор беноксакором, мутация аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, не требуется в модифицированном PYR/PYL-рецепторном полипептиде до тех пор, пока в PYR/PYL-рецепторном полипептиде имеется хотя бы одна мутация другой аминокислоты. Неограничивающий перечень примеров мутаций и комбинаций мутаций, в результате которых модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие беноксакора, включает в себя: K59RHN119Y ШОТ, E114D и V138M
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модифицированный
PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие беноксакора. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-белок содержит один или более наборов мутаций, соответствующих тем, которые изложены выше. В некоторых вариантах осуществления такие белки являются являются по существу идентичнымими любой из SEQ ID N0:1-119 и/или содержат одну или более консенсусную последовательность, выбранную из SEQ ID N0:149-163. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ скрининга модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов включает в себя скрининг модифицированного полипептида с целью определения, активируется ли он в ответ на воздействие беноксакора. ВТН
В некоторых случаях мутация одной аминокислоты, соответствующей К59 в SEQ ID N0:1, приводит к активации модифицированного рецептора посредством ВТН (таблица 5). В некоторых случаях мутация двух или более аминокислот в PYR/PYL-рецепторном полипептиде приводит к активации модифицированного рецептора посредством ВТН. Неограничивающий перечень примеров мутаций и комбинаций мутаций, в результате которых модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие ВТН, включает в себя: Q24R, K59R, I82T, F159L и D161G H115Y и F159S F159L
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-рецептор активируется в ответ на воздействие ВТН. В некоторых вариантах осуществления модифицированный PYR/PYL-белок содержит один или более наборов мутаций, соответствующих тем, которые изложены выше. В некоторых вариантах осуществления такие белки являются являются по существу идентичнымими любой из SEQ ID N0:1-119 и/или содержат одну или более консенсусную последовательность, выбранную из SEQ ID N0:149-163. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему один или более упомянутых модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов.
Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ скрининга модифицированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов включает в себя скрининг модифицированного полипептида с целью определения, активируется ли он в
ответ на воздействие ВТН.
Химические агонисты могут быть изготовлены различными способами, известными специалисту в данной области, например, описанными в Comprehensive Organic Transformations, 2d ed., Richard С. Larock, 1999. Исходные материалы для способов, описанных выше, являются коммерчески доступными (фирма Sigma-Aldrich) или могут быть изготовлены способами, известными специалисту в данной области.
В некоторых вариантах осуществления предусмотренные сельскохозяйственные химические препараты сформулированы для контактирования с растениями. Препараты могут являться подходящими для обработки растений или материала для размножения растений, такого как семена, в соответствии с настоящим изобретением, например, с использованием носителя. Подходящие добавки включают в себя буферные агенты, увлажняющие средства, средства для покрытия, полисахариды и абразивные средства. Примеры носителей включают в себя воду, водные растворы, суспензии, твердые вещества и сухие порошки (например, торф, пшеница, отруби, вермикулит, глины, пастеризованная почва, многие формы карбоната кальция, доломит, различные сорта гипса, бентонита и других глинистых минералов, скальные фосфаты и другие соединения фосфора, диоксид титана, перегной, тальк, альгинат и активированный уголь). Любой сельскохозяйственно подходящий носитель, известный специалисту в данной области, будет приемлем и предусмотривается для применения в настоящем изобретении. Необязательно, препараты могут также включать в себя по меньшей мере один сурфактант, гербицид, фунгицид, пестицид или удобрение.
Контактирование сельскохозяйственного химического препарата с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом может быть осуществлено in vitro (например, когда мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид существует в очищенном виде или экспрессируется в дрожжевых клетках) или in vivo (например, когда мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид экспрессируется растением). Контактирование сельскохозяйственного химического препарата с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом in vitro может быть осуществлено с помощью различных известных способов, например, применяя препарат в анализах связывания с белками, анализах в двухгибридной системе на основе клеток млекопитающих или двухгибридной дрожжевой системе, конкурентных анализах или анализах на основе клеток с использованием других организмов.
Контактирование сельскохозяйственного химического препарата с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом in vivo (например, с растением) может быть осуществлено с использованием различных известных способов, например,
разбрызгиванием, распылением, напылением или рассеянием препаратов над материалом для размножения или с помощью щетки или обливанием или контактированием препаратов иным путем с растением или, в случае семени, покрытием, инкапсуляцией или иной обработкой семени. В качестве альтернативы непосредственной обработке растения или семени перед посадкой, препараты по данному изобретению могут быть также внесены в почву или другую среду, в которую должны быть посажены семена. В некоторых вариантах осуществления также используется носитель в данном варианте осуществления. Носитель может быть твердым или жидким, как отмечалось выше. В некоторых вариантах осуществления в качестве носителя химического агониста в воде суспендирован торф, и эта смесь распыляется в почву или среду посадки и/или на семя после посадки.
IV. Способы изготовления мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов
Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способам изготовления мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, которые подвергаются воздействию химического агониста, который не активирует PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа. В некоторых вариантах осуществления способ включает в себя мутагенез PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа, контактирование одного или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с предполагаемым химическим агонистом и определение того, активирует ли химический агент один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, где активация определяет один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, как активирующихся в ответ на воздействие химического агента.
Мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды могут быть созданы мутациями в последовательностях ДНК, которые кодируют соответствующий PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа (например, PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа любой из SEQ ID N0:1-119 или соответствующий вариант, из которого мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид по данному изобретению является производным), например, с помощью способов, обычно относящихся к сайт-направленному мутагенезу. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, могут быть мутированы с помощью различных технологий полимеразной цепной реакции (ПЦР), хорошо известных специалистам в данной области. (См., например, PCR Strategies (М. A. Irmis, D. Н. Gelfand, and J. J. Sninsky eds., 1995, Academic Press, San Diego, CA) в главе 14; PCR Protocols : A Guide to Methods and Applications (M. A. Innis, D. H. Gelfand, J. J. Sninsky, and T. J. White eds., Academic Press, NY, 1990).
В качестве неограничивающего примера, мутагенез может быть осуществлен с
помощью подверженной ошибкам ПЦР-амплификации (error-prone PCR amplification (ePCR)), которая изменяет условия ПЦР-реакции (например, с использованием допускающих ошибки полимераз, различной концентрации магния или марганца или предоставляя несбалансированные соотношения дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (дНТФ)) в целях стимулирования повышения вероятности ошибки в ходе репликации ДНК. Наборы для ePCR-мутагенеза являются коммерчески доступными, например, комплекты GeneMorph(r) PCR Mutagenesis kit (Stratagene) и Diversify(r) PCR Random Mutagenesis Kit (Clontech). Коротко, ДНК-полимеразу (например, Taq-полимеразу), соль (например, MgCb, MgSCU или MnSCU), дНТФ в несбалансированных соотношениях, реакционный буфер и ДНК-матрицу объединяют и подвергают стандартной ПЦР-амплификации в соответствии с инструкциями производителя. После ePCR-амплификации продукты реакции клонируют в подходящий вектор, чтобы построить библиотеку мутагенизированных последовательностей, которая затем может быть трансформирована в подходящие клетки (например, клетки дрожжей) для последующего скрининга (например, через двухгибридный скрининг), как описано ниже.
Альтернативно, мутагенез может быть осуществлен рекомбинацией (то есть перетасовкой ДНК). Коротко, библиотека перетасованных мутантных последовательностей создается за счет перетасовки ДНК с помощью in vitro гомологичной рекомбинации посредством случайной фрагментации родительской ДНК с последующей сборкой с использованием ПЦР, в результате чего получают случайно введенные точечные мутации. Способы выполнения перетасовки ДНК известны в данной области (см., например, Stebel, S.C. et al., Methods Mol Biol 352:167-190 (2007)).
При необходимости, может быть осуществлено несколько раундов мутагенеза в целях повышения эффективности изолированных мутантных белков. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления PYR/PYL-мутанты, изолированные после ePCR и последующего скрининга, могут быть объединены и использованы в качестве шаблонов для последующих раундов мутагенеза.
V. Скрининг на агонизм мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов
Варианты осуществления настоящего изобретения также относятся к способам скрининга предполагаемых химических агонистов для определения, воздействует ли предполагаемый агонист на мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, при этом не активируя PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, когда предполагаемый агонист контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом. Для целей настоящего изобретения агент активирует PYR/PYL-рецепторный белок, если присутствие данного агента приводит к активации или положительной регуляции активности рецептора,
например, усилению передачи сигнала от PYR/PYL-рецептора на последующих стадиях сигнального каскада. Для настоящего изобретения агент активирует PYR/PYL-рецептор, если в присутствии агента в концентрации, составляющей не более 200 мкМ, контактирование агента с PYR/PYL-рецептором приводит к активации или положительной регуляции активности PYR/PYL-рецептора. Если агент не вызывает активацию или положительную регуляцию активности PYR/PYL-рецепторного белка в присутствии данного агента в концентрации, составляющей не более 200 мкМ, тогда данный агент не вызывает выраженной активации у PYR/PYL-рецептора. Для целей настоящего изобретения "активация" предполагает наличие минимального порога активности, индуцируемой данным агентом. Определение того, был ли достигнут данный минимальный порог активности, может быть осуществлено, например, с помощью анализа ферментативной активности фосфатазы, который устанавливает минимальную величину уровня ферментативной активности, которая должна быть индуцирована, либо с помощью анализа ферментативной активности фосфатазы в присутствии колориметрического реагента обнаружения (например, пара-нитрофенилфосфата), при применении которого минимальный порог активности считался достигнутым достигнут, если наблюдалось изменение цвета.
Множество различных протоколов скрининга может быть использовано для выявления химических агентов, которые активируют мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, но не PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа. Скрининг может происходить с использованием изолированных, очищенных или частично очищенных реагентов. В некоторых вариантах осуществления может быть применен очищенный или частично очищенный PYR/PYL-полипептид,
Альтернативно, могут быть использованы способы скрининга на основе клеток или растений. Например, могут быть применены клетки, которые экспрессируют в природных условиях PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа или которые экспрессируют полученный рекомбинантным путем PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа или мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид. В некоторых вариантах осуществления применяемые клетки представляют собой растительные клетки, клетки животных, клетки бактерий, клетки грибов, включая, но не ограничиваясь ими, клетки дрожжей, клетки насекомых или клетки млекопитающих. В общем, способы скрининга включают в себя скрининг одного или нескольких химических агентов для выявления агента, который воздействует на активность мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида (например, активирование мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида или увеличение экспрессии мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида или транскрипта,
кодирующего мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид), но который не воздействует на активность PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа. Необязательно, способ скрининга может включать в себя два способа скрининга: во-первых, скрининг множества предполагаемых агонистов для идентификации соединений, которые слабо взаимодействуют с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа ("слабые лиганды"), затем скрининг таких слабых лигандов против PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа и множества мутагенизированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, чтобы определить, на какие мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды воздействуют слабые лиганды, и какие слабые лиганды селективно воздействуют только на мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, а не на PYR/PYL-рецепторные полипептиды дикого типа. Анализы связывания
Необязательно, предварительные скрининги могут быть проведены скринингом на агенты, способные связываться с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа. Предварительный отбор слабо связывающих лигандов повышает частоту изолирования мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, которые активируются в ответ на воздействие агента, предположительно потому, что для достижения молекулярного распознавания требуется меньше изменений лиганд-связывающего сайта.
Анализы связывания могут включать в себя контактирование PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа с одним или более химическими агентами и предоставление достаточного времени для того, чтобы белок и химические агенты образовали связывающий комплекс. Любые связывающие комплексы, которые образовались, могут быть обнаружены с помощью любого из числа общепризнанных аналитических способов. Анализы связывания с белками включают, но не ограничиваются ими, способы, которые измеряют соосаждение или комиграцию в SDS-полиакриламидном геле в неденатурирующих условиях, а также комиграцию способом Вестерн-блота (см., например, Bennet, J.P. and Yamamura, H.I. (1985) "Neurotransmitter, Hormone or Drug Receptor Binding Methods," в Neurotransmitter Receptor Binding (Yamamura, H. I., et al., eds.), pp. 61-89). Другие анализы связывания включают в себя применение масс-спектрометрии и способов ЯМР для выявления молекул, связанных с PYR/PYL-полипептидом, или изучение перемещения меченых субстратов (например, меченого агрохимического агента). Белок PYR/PYL-полипептид, используемый в таких анализах, может быть экспрессирован естественным путем, клонирован или синтезирован. Анализы агонистов
Анализы агонистов могут включать в себя скрининг предполагаемых химических
агонистов (которые могли быть или могли не быть предварительно выбраны в качестве слабо связывающих лигандов), чтобы определить, какие предполагаемые агонисты активируют по меньшей мере один мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, но не у PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, и/или скрининг мутагенизированных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с предполагаемыми химическими агонистами (которые могли быть или могли не быть предварительно выбраны в качестве слабо связывающих лигандов), чтобы определить, какие мутагенизированные PYR/PYL-рецепторные полипептиды активируется в ответ на воздействие предполагаемого агониста.
Любое число анализов может быть использовано для скрининга на агонисты мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов. Один анализ активности включает в себя проверку того, может ли предполагаемый агонист вызывать связывание мутантного PYR/PYL-белка с полипептидом протеинфосфатазой 2-го типа (РР2С) агонист-специфическим образом. Подходы с использованием двухгибридной системы млекопитающих или дрожжей (см., например, Battel, P.L. et. al. Methods Enzymol, 254:241 (1995)) могут быть применены для идентификации полипептидов или других молекул, которые взаимодействуют или связываются при совместной экспрессии в клетке. В некоторых вариантах осуществления агенты, которые актьивируют мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, но не PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, определяются в двухгибридном анализе между PYR/PYL-полипептидом и полипептидом протеинфосфатазой 2-го типа (РР2С), в котором агонист определяется как агент, который активирует или допускает связывание PYR/PYL-полипептида и РР2С-полипептида. Таким образом, данные два полипептида связываются в присутствии, но не в отсутствие агента. При необходимости, в двухгибридном анализе могут быть применены схемы как положительного, так и отрицательного отбора. Например, в анализе с помощью дрожжевой двухгибридной системы для проведения как положительного, так и отрицательного отбора может применяться репортерный штамм с маркером URA3; рост URA-штамма в отсутствие экзогенного источника урацила делает возможным положительную селекцию мутантов, которые улучшают чувствительность к агонисту (то есть промотируемое агонистом белок-белковое взаимодействие), в то время как рост на FOA (5-фтор-оротовой кислоте, которая метаболизируется посредством URA3 до токсичного метаболита) позволяет провести селекцию против мутантов, которые содействуют ответу на агонист (например, для удаления мутантов, которые приводят к конститутивным, то есть без участия лигандов, взаимодействиям).
Также предлагается скрининг для выявления соединения, которое увеличивает
экспрессию мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, но не PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа. Способы скрининга, как правило, включают в себя проведение анализов на основе клеток или растений, в которых испытываемые соединения контактируют с одной или более клетками, экспрессирующими PYR/PYL-полипептид, а затем выявление увеличения экспрессии PYR/PYL (либо транскрипта либо продукта трансляции). Анализы могут быть выполнены с клетками, которые экспрессируют PYR/PYL дикого типа естественным путем или в клетках, рекомбинантно измененных, чтобы экспрессировать мутантный PYR/PYL или PYR/PYL дикого типа. Чтобы убедиться, что наблюдаемая активность является аутентичной, могут быть выполнены различные контроли, включая параллельно идущие реакции с клетками, в которых отсутствует репортерная конструкция, или неконтактированием клетки, несущей репортерную конструкцию, с испытываемым соединением.
Агенты и мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, которые первоначально определяются любым из вышеупомянутых способов скрининга, могут быть дополнительно протестированы для подтверждения очевидной активности и/или определения других биологических эффектов агента и/или мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида. В некоторых случаях выявленный агент и/или мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид испытывается на способность воздействовать на стресс растений (например, засухоустойчивость), прорастание семян или другой фенотип, на который действует ABA. Множество подобных анализов и фенотипов известно в данной области и может быть применено в соответствии со способами по изобретению. VI. Рекомбинантные векторы экспрессии
После получения полинуклеотидной последовательности, кодирующей мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, данную последовательность также можно применять для получения экспрессионной кассеты для экспрессии мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида в трансгенном растении, направляемой гетерологичным промотором. Повышенная экспрессия мутантного PYR/PYL-полинуклеотида применима, например, для получения растений, которые будут в состоянии реагировать на химический агонист, который не воздействует на эндогенный PYR/PYL-рецепторный белок, повышая тем самым устойчивость к абиотическому стрессу.
Любой из способов, хорошо известных в данной области, может быть применен для вызыва активности или экспрессии мутантного PYR/PYL в растениях. Действие может быть направлено на любой орган, например, на вегетативные органы и/или структуры побегов (например, листья, стебли и клубни), корни, цветы и цветочные органы/структуры (например, прицветники, чашелистики, лепестки, тычинки,
плодолистики, пыльники и семяпочки), семя (в том числе зиготу, эмбрион, эндосперму и оболочку семени) и плод. Альтернативно, мутантный PYR/PYL-полинуклеотид может быть экспрессирован конститутивно (например, с помощью промотора CaMV 35S).
Для применения полинуклеотидной последовательности для мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида в приведенных выше способах готовят рекомбинантные векторы ДНК, подходящие для трансформации растительных клеток. Способы трансформации разнообразных видов высших растений хорошо известны и описаны в технической и научной литературе. См., например, Weising et al. Ann. Rev. Genet. 22:421477 (1988). Последовательность ДНК, кодирующая мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, предпочтительно будет объединяться с регуляторными последовательностями инициации транскрипции и трансляции, которые будут управлять транскрипцией последовательности гена в желаемых тканях трансформированного растения.
Например, может быть использован фрагмент промотора растения, который будет направлять экспрессию мутантного PYR/PYL-полинуклеотида во всех тканях регенерированного растения. Такие промоторы называются здесь "конститутивными" промоторами, и они активны при большинстве условий окружающей среды и стадий развития и дифференциации клеток. Примеры конститутивных промоторов включают в себя область инициации транскрипции 35S вируса мозаики цветной капусты (CaMV), Гили 2'-промотор, происходящий из Т-ДНК Agrobacterium tumafaciens, и другие области инициации транскрипции из различных генов растений, известных специалистам в данной области.
Альтернативно, промотор растения может обеспечивать экспрессию мутантного PYR/PYL-рецепторного белка в специфической ткани (тканеспецифичные промоторы) или, в другом случае, при определенных условиях окружающей среды (индуцируемые промоторы). Примеры тканеспецифичных промоторов, находящихся под управлением развития, включают в себя промоторы, которые инициируют транскрипцию только в определенных тканях, таких как листья или устьичные клетки (включая, но не ограничиваясь ими, описанные в WO/2005/085449, патент США № 6653535; Li et al, Sci China С Life Sci. 2005 Apr;48(2): 181-6; Husebye, et al, Plant Physiol, April 2002, Vol. 128, pp. 1180-1188; и Plesch, et al, Gene, Volume 249, Number 1, 16 May 2000, pp. 83-89(7)). Примеры условий окружающей среды, которые могут воздействовать на транскрипцию с помощью индуцируемых промоторов, включают в себя анаэробные условия, повышенную температуру или наличие освещения.
Если желательна правильная экспрессия соответствующего белка, должна быть
включена область полиаденилирования на 3'-конце кодирующей области. Область полиаденилирования может быть получена из природного PYR/PYL-гена, из ряда других генов растений или из Т-ДНК.
Вектор, содержащий данные последовательности (например, промоторы или PYR/PYL-кодирующие области), будет обычно содержать маркерный ген, который придает селективный фенотип растительным клеткам. Например, маркер может кодировать биоцидную устойчивость, в частности устойчивость к антибиотикам, такую как устойчивость к канамицину, G418, блеомицину, гигромицину, или гербицидную устойчивость, такую как устойчивость к хлорослюфорону или Баста.
В некоторых вариантах осуществления мутантная последовательность нуклеиновой кислоты PYR/PYL экспрессируется рекомбинантно в клетках растений. Может быть изготовлено множество различных экспрессионных конструкций, таких, как экспрессионные кассеты и векторы, подходящие для трансформации растительных клеток. Методики трансформации широкого спектра видов высших растений хорошо известны и описаны в технической и научной литературе. См., например, Weising et al. Ann. Rev. Genet. 22:421-477 (1988). Последовательность ДНК, кодирующая PYR/PYL-белок, может быть объединены с цис-действующей (промотор) и транс-действующей (энхансер) регулирующими последовательностями контроля транскрипции для управления временем вызыва, типом ткани и уровнями транскрипции в предназначенных тканях трансформированного растения. Также могут быть использованы элементы контроля трансляции.
Варианты осуществления настоящего изобретения также относятся к мутантной PYR/PYL-нуклеиновой кислоте, функционально связанной с промотором, который, в некоторых вариантах осуществления, способен вызывать транскрипцию PYR/PYL-кодирующей последовательности в растениях. Промотор может быть, например, получен из растительных или вирусных источников. Промотор может быть, например, конститутивно активным, индуцируемым или тканеспецифичным. В конструкции рекомбинантных экспрессионных кассет, векторов, трансгенов по изобретению различные промоторы могут быть выбраны и использованы для дифференциального управления экспрессией генов, например, в некоторых или во всех тканях растения или животного. Конститутивные промоторы
Фрагмент промотора может быть использован, чтобы управлять экспрессией мутантной PYR/PYL-нуклеиновой кислоты во всех трансформированных клетках или тканях, например, таковых из регенерированного растения. Термин "конститутивный регуляторный элемент" означает регуляторный элемент, который придает уровень
экспрессии функционально связанной нуклеиновой молекуле, которая является относительно независимой от клетки или типа ткани, в которой экспрессируется конститутивный регуляторный элемент. Конститутивный регуляторный элемент, который экспрессируется в растении, как правило, широко экспрессируется в большом количестве клеток и типов тканей. Промоторы, которые вызывают непрерывную экспрессию в физиологических условиях, называются "конститутивными" промоторами, и они являются активными при большинстве условий окружающей среды и состояний развития или дифференциации клеток.
Многие конститутивные регуляторные элементы, применимые для эктопической экспрессии в трансгенном растении, хорошо известны в данной области. Промотор вируса мозаики цветной капусты 35S (CaMV 35S), например, является хорошо охарактеризованным конститутивным регуляторным элементом, который производит высокий уровень экспрессии во всех тканях растений (Odell et al, Nature 313:810-812 (1985)). Промотор CaMV 35S может быть особенно применим в связи с его активностью в многочисленных разнообразных видах растений (Benfey and Chua, Science 250:959-966 (1990); Futterer et al., Physiol. Plant 79:154 (1990); Odell et al., выше, 1985). Тандемный промотор 35S, в котором внутренний элемент промотора был дублирован, придает более высокие уровни экспрессии по сравнению с немодифицированным промотором 35S (Кау et al., Science 236:1299 (1987)). Другие применимые конститутивные регуляторные элементы включают в себя, например, промотор вируса мозаики цветной капусты 19S, промотор вируса мозаики норичника шишковатого и промотор гена нопалинсинтазы (NOS) (Singer et al., Plant Mol. Biol. 14:433 (1990); An, Plant Physiol. 81:86 (1986)).
Дополнительные конститутивные регуляторные элементы, включающие таковые для эффективной экспрессии в однодольных, также известны в данной области, например, промотор pEmu и промоторы на основе 5'-области гена актина 1 риса (Last et al, Theor. Appl Genet. 81:581 (1991); Mcelroy et al, Mol. Gen. Genet. 231:150 (1991); Mcelroy et al, Plant Cell 2:163 (1990)). Химерные регуляторные элементы, которые объединяют в себе элементы из различных генов, также могут быть применимы для эктопической экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей мутантный PYR/PYL-рецепторный белок (Comai et al, Plant Mol. Biol. 15:373 (1990)).
Другие примеры конститутивных промоторов включают в себя Г- или 2-промотор, полученный из Т-ДНК Agrobacterium tumafaciens (см., например, Mengiste (1997) выше; O'Grady (1995) Plant Mol. Biol. 29: 99-108); промоторы актина, такие как промотора гена актина Arabidopsis (см., например, Huang (1997) Plant Mol. Biol. 1997 33:125-139); промоторы гена алкогольдегидрогеназы (АДГ) (см., например, Millar (1996) Plant Mol.
Biol. 31:897-904); ACT11 из Arabidopsis (Huang et al. Plant Mol. Biol. 33:125-139 (1996)), Cat3 из Arabidopsis (GenBank No. U43147, Zhong et al., Mol. Gen. Genet. 251:196-203 (1996)), ген, кодирующий стеароил-[ацил-переносящий белок]-десатуразу из Brassica napus (GenbankNo. X74782, Solocombe et al. Plant Physiol. 104:1167-1176 (1994)), GPcl из кукурузы (GenBank No. XI5596, Martinez et al. J. Mol. Biol 208:551-565 (1989)), Gpc2 из кукурузы (GenBank No. U45855, Manjunath et al, Plant Mol. Biol. 33:97-112 (1997)), другие области инициации транскрипции из различных генов растений, известных специалистам в данной области. См. также Holtorf Plant Mol. Biol. 29:637-646 (1995). Индуцируемые промоторы
Альтернативно, промотор растения может управлять экспрессией мутантного PYR/PYL-полинуклеотида под влиянием меняющихся условий окружающей среды или условий развития. Примеры условий окружающей среды, которые могут воздействовать на транскрипцию индуцируемыми промоторами, включают в себя анаэробные условия, повышенную температуру, засуху или наличие освещенности. Такие промоторы называются здесь "индуцируемыми" промоторами. Например, изобретение может включать в себя специфический промотор, реагирующий на засуху, такой как промотор кукурузы, индуцируемый засухой (например, индуцируемый засухой промотор гена гаЬ17 кукурузы (Vilardell et al. (1991) Plant Mol. Biol. 17:985-993; Vilardell et al. (1994) Plant Mol Biol. 24:561-569)); или же индуцируемый холодом, засухой и высокой концентрации соли промотор из картофеля (Kirch (1997) Plant Mol. Biol. 33:897-909).
Альтернативно, промоторы растений, которые индуцируются под воздействием растительных гормонов, таких как ауксины, применяются для экспрессии мутантного PYR/PYL-полинуклеотида. Например, настоящее изобретение может применять чувствительные к ауксинам элементы фрагмента промотора El (AuxREs) в сое (Glycine Max L.) (Liu (1997) Plant Physiol. 115:397-407); чувствительный к ауксинам промотор GST6 Arabidopsis (также чувствительный к салициловой кислоте и перекиси водорода) (Chen (1996) Plant J. 10: 955-966); индуцируемый ауксинами промотор рагС из табака (Sakai (1996) 37:906-913); чувствительный к биотину элемент растений (Streit (1997) Mol. Plant Microbe Interact. 10:933-937); и промотор, чувствительный к гормону стресса абсцизовой кислоте (Sheen (1996) Science 274:1900-1902).
Промоторы растений, индуцируемые под воздействием химических реагентов, которые могут наноситься на растение, таких как гербициды или антибиотики, также являются применимыми для экспрессии мутантного PYR/PYL-полинуклеотида. Например, может быть использован промотор 1п2-2 кукурузы, активируемый гербицидными средствами защиты на основе бензолсульфонамида (De Veylder (1997)
Plant Cell Physiol. 38:568-577); нанесение различных гербицидных средств защиты индуцирует различные паттерны экспрессии генов, включая экспрессию в корнях, гидатодах и верхушечной меристеме всходов. PYR/PYL-кодирующая последовательность может также находиться под контролем, например, тетрациклин-индуцируемого промотора, например, как описано для трансгенных растений табака, содержащих ген аргининдекарбоксилазы Avena sativa L. (овса) (Masgrau (1997) Plant J. 11:465-473); или элемента, чувствительного к салициловой кислоте (Stange (1997) Plant J. 11:1315-1324; Uknes et al, Plant Cell 5:159-169 (1993); Bi et al, Plant J. 8:235-245 (1995)).
Примеры применимых индуцируемых регуляторных элементов включают в себя индуцируемые медью регуляторные элементы (Mett et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA 90:4567-4571 (1993); Furst et al, Cell 55:705-717 (1988)); регуляторные элементы, индуцируемые тетрациклином и хлортетрациклином (Gatz et al, Plant J. 2:397-404 (1992); Roder et al, Mol Gen. Genet. 243:32-38 (1994); Gatz, Meth. Cell Biol. 50:411-424 (1995)); регуляторные элементы, индуцируемые экдизоном (Christopherson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6314-6318 (1992); Kreutzweiser et al, Ecotoxicol. Environ. Safety 28:14-24 (1994)); регуляторные элементы, индуцируемые тепловым шоком (Takahashi et al, Plant Physiol. 99:383-390 (1992); Yabe et al, Plant Cell Physiol. 35:1207-1219 (1994); Ueda et al, Mol. Gen. Genet. 250:533-539 (1996)); и элементы lac оперона, которые используются в сочетании с конститутивно экспрессируемым lac репрессором для придания, например, IPTG-индуцируемой экспрессии (Wilde et al, EMBO J. 11:1251-1259 (1992)). Индуцируемый регуляторный элемент, применимый в трансгенных растениях по изобретению, также может представлять собой, например, индуцируемый нитратом промотор, полученный из гена нитритредуктазы шпината (Back et al, Plant Mol. Biol. 17:9 (1991)), или индуцируемый светом промотор, такой как промотор, ассоциированный с малой субъединицей карбоксилазы RuBP или семейства генов LHCP (Feinbaum et al, Mol Gen. Genet. 226:449 (1991); Lam and Chua, Science 248:471 (1990)). Тканеспецифичные промоторы
Альтернативно, промотор растения может управлять экспрессией мутантного PYR/PYL-полинуклеотида в определенной ткани (тканеспецифичные промоторы). Тканеспецифичные промоторы представляют собой элементы контроля транскрипции, которые активны только в определенных клеток или тканях, таких как растительных тканях или репродуктивных тканях, в определенные моменты времени развития растений.
Примеры тканеспецифичных промоторов, контролируемых развитием, включают в себя промоторы, которые инициируют транскрипцию только (или в основном только) в определенных тканях, таких как растительные ткани, например, корни или листья или
репродуктивные ткани, такие как плод, семяпочки, семена, пыльца, пестики, цветы или любая эмбриональная ткань или эпидермис или или мезофильная ткань. Промоторы, специфичные для репродуктивной ткани, могут представлять собой, например, промоторы, специфичные для семяпочки, специфичные для эмбриона, специфичные для эндосперма, специфичные для оболочки, специфичные для семени и семенной оболочки, специфичные для пыльцы, специфичные для лепестка, специфичные для чашелистика или некоторых их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления промотор является специфичным для типа клетки, например, специфичным для замыкающих клеток устьиц.
Другие тканеспецифичные промоторы включают промоторы семени. Подходящие семяспецифичные промоторы получены из следующих генов: МАС1 из кукурузы (Sheridan (1996) Genetics 142:1009-1020); Cat3 из кукурузы (GenBank No. L05934, Abler (1993) Plant Mol. Biol. 22:10131-1038); vivparous-1 из Arabidopsis (Genbank No. U93215); atmycl из Arabidopsis (Urao (1996) Plant Mol. Biol. 32:571-57; Conceicao (1994) Plant 5:493505); napA из Brassica napus (GenBank No. J02798, Josefsson (1987) JBL 26:12196-1301); and семейство генов napin из Brassica napus (Sjodahl (1995) Planta 197:264-271).
Различные промоторы, специфически активные в вегетативных тканях, таких как листья, стебли, корни и клубни, также могут быть использованы для экспрессии полинуклеотидов, кодирующих мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды. Например, могут быть использованы промоторы, контролирующие пататин, основной запасающий белок клубней картофеля, см., например, Kim (1994) Plant Mol. Biol. 26:603-615; Martin (1997) Plant J. 11:53-62. Также может быть использован промотор ORF13H3 Agrobacterium rhizogenes, который проявляет высокую активность в корнях (Hansen (1997) Mol. Gen. Genet. 254:337-343). Другие подходящие промоторы, специфичные для вегетативных тканей, включают в себя: промотор гена тарина, кодирующего глобулин тарин (Bezerra (1995) Plant Mol. Biol. 28:137-144) из белков крупного таро (Colocasia esculenta L. Schott) семейства клубнелуковичных; промотор куркулина, активный во время развития клубнелуковицы таро (de Castro (1992) Plant Cell 4:1549-1559) и промотор гена TobRB7, специфичного для табачного корня, экспрессия которого локализована в корневой меристеме и незрелых областях центрального цилиндра (Yamamoto (1991) Plant Cell 3:371-382).
Могут быть использованы промоторы, специфичные для листьев, такие как промоторы рибулозобифосфаткарбоксилазы (RBCS). Например, гены RBCS1, RBCS2 и RBCS3A томатов экспрессируются в листьях и рассаде, выращиваемой при освещении, только RBCS1 и RBCS2 экспрессируются в развивающихся плодах томатов (Мейер (1997) FEBS Lett. 415:91 95). Могут быть использованы промоторы
рибулозобифосфаткарбоксилазы, обеспечивающие высокие уровни экспрессии почти исключительно в клетках мезофильной ткани в листовых пластинках и влагалищах листьев, как описано у Matsuoka (1994) Plant J. 6:311-319. Другим промотором, специфичным для листьев, является промотор гена хлорофилл а/в содержащего светособирающего белка, см., например, Shiina (1997) Plant Physiol. 115:477-483; Casal (1998) Plant Physiol. 116:1533-1538. Промотор гена, родственного myb (Atmyb5) Arabidopsis thaliana, описанный у Li (1996) FEBS Lett. 379:117-121, является промотором, специфичным для листьев. Промотор Atmyb5 экспрессируется в развивающихся трихомах листьев, прилистниках и клетках эпидермиса на краях молодых розеток и стеблевых листьев и в незрелых семенах. мРНК Atmyb5 появляется между оплодотворением и 16-клеточной стадией развития эмбриона и сохраняется после сердцевидной стадии . Также может быть использован промотор листьев, выявленный в кукурузе Busk (1997) Plant J. 11:1285-1295.
Еще один класс применимых промоторов, специфичных для вегетативных тканей, представляет собой меристематические (кончика корня и верхушки побега) промоторы. Например, могут быть использованы промоторы "SHOOTMERISTEMLESS" и "SCARECROW1', которые являются активными в развивающихся апикальных меристемах побегов или корней, описанные у Di Laurenzio (1996) Cell 86:423-433; и Long (1996) Nature 379:66-69. Еще один применимый промотор представляет собой промотор, который контролирует экспрессию гена З-гидрокси-З-метилглутарил-коэнзим А-редуктазы (HMG2), экспрессия которого ограничена меристематическими и цветочными (секреторная зона стигмы, зрелые пыльцевые зерна, сосудистая ткань гинецея и оплодотворенные яйцеклетки) тканями (см., например, Enjuto (1995) Plant Cell. 7:517-527). Также применимыми являются knl-родственные гены из кукурузы и других видов, которые проявляют экспрессию, специфическую для меристемы, см., например, Granger (1996) Plant Mol. Biol. 31:373-378; Kerstetter (1994) Plant Cell 6:1877-1887; Hake (1995) Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 350:45-51. Например, промотор KNAT1 из Arabidopsis thaliana (см., например, Lincoln (1994) Plant Cell 6:1859-1876).
Специалисту в данной области очевидно, что тканеспецифичный промотор может вызывать экспрессию функционально связанных последовательностей в тканях, отличных от ткани-мишени. Таким образом, для целей данного изобретения тканеспецифичный промотор представляет собой промотор, который вызывает экспрессию преимущественно в ткани-мишени, но также может привести и к экспрессии в других тканях.
В другом варианте осуществления мутантный PYR/PYL-полинуклеотид экспрессируется через транспонируемый элемент. Это позволяет конститутивную, но
периодическую и нечастую экспрессию конститутивно активного полипептида. Настоящее изобретение также относится к применению тканеспецифичных промоторов, полученных из вирусов, включая, например, субгеномный промотор тобамовируса (Kumagai (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1679-1683); палочковидный вирус риса тунгро (RTBV), который реплицируется только в клетках флоэмы в пораженных растениях риса, с его промотором, который вызывает сильную экспрессию репортерного гена, специфическую для флоэмы, промотор вируса мозаики жилок маниоки (CVMV), с наибольшей активностью в сосудистых элементах, в клетках мезофилла листа и в кончиках корней (Verdaguer (1996) Plant Mol. Biol. 31:1129 1139). VII. Получение трансгенных растений
Как указано в настоящем документе, варианты осуществления настоящего изобретения относятся к трансгенным растениям, содержащим рекомбинантные экспрессионные кассеты для экспрессии мутантного PYR/PYL-рецепторного белка, как описано здесь, в растении. В некоторых вариантах осуществления создается трансгенное растение, которое содержит полную или частичную последовательность полинуклеотида, которая происходит из вида, отличающегося от вида трансгенного растения. Следует понимать, что трансгенные растения охватывают растение или растительную клетку, в которое(ую) вводят экспрессионную кассету, а также потомство таких растений или растительных клеток, которые содержат экспрессионную кассету, в том числе потомство, которое обладает экспрессионной кассетой, стабильно интегрированной в хромосоме.
Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий PYR/PYL-кодирующую последовательность, вызываемую гетерологичным промотором, может быть введен в геном желаемого растения-хозяина с помощью различных общепринятых способов. Например, ДНК-конструкция может быть введена непосредственно в геномную ДНК клетки растения с использованием таких способов, как электропорация и микроинъекция протопластов растительных клеток, или ДНК-конструкция может быть введена непосредственно в ткани растений с использованием баллистических способов, таких как бомбардировка частицами ДНК. Альтернативно, ДНК-конструкция может быть объединена с подходящими фланкирующими областями Т-ДНК и введена в обычный вектор-хозяин Agrobacterium tumefaciens. Функции вирулентности хозяина Agrobacterium tumefaciens направят инсерцию конструкции и прилегающего маркера в ДНК растительной клетки, при заражении клетки бактериями. В то время как временная экспрессия мутантного PYR/PYL охватывается изобретением, обычная экспрессия конструкции по изобретению будет происходить от инсерции экспрессионной кассеты в геном растения, например так, что потомство, по меньшей мере, некоторых растений
также содержит интегрированную экспрессионную кассету.
Способы на основе микроинъекции также применимы для этой цели. Такие способы хорошо известны в данной области и подробно описаны в литературе. Введение ДНК-конструкций с использованием осаждения полиэтиленгликолем описано у Paszkowski et al. EMBOJ. 3:2717-2722 (1984). Способы на основе электропорации описаны у Fromm et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:5824 (1985). Способы баллистической трансформации описаны у Klein et al. Nature 327:70-73 (1987).
Способы трансформации, опосредуемой Agrobacterium tumefaciens, включая нейтрализованные гены и применение бинарных векторов, хорошо описаны в научной литературе. См., например, Horsch et al. Science 233:496-498 (1984) и Fraley et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4803 (1983).
Трансформированные растительные клетки, полученные любым из вышеперечисленных способов трансформации, можно культивировать с целью регенерации целого растения, которое обладает трансформированным генотипом, и, таким образом, желаемым фенотипом, таким как улучшенное сопротивление абиотическому стрессу. Такие способы регенерации основываются на манипуляции некоторыми фитогормонами в среде роста культуры тканей, как правило, полагаясь на биоцидный и/или гербицидный маркер, который был введен вместе с желаемой нуклеотидной последовательностью. Регенерация растений из культивированных протопластов описана у Evans et al., Protoplasts Isolation and Culture, Handbook of Plant Cell Culture, pp. 124-176, MacMillilan Publishing Company, New York, 1983; и Binding, Regeneration of Plants, Plant Protoplasts, pp. 21-73, CRC Press, Boca Raton, 1985. Регенерация может быть также проведена из растительного каллуса, эксплантов, органов или их частей. Такие способы регенерации описаны в целом у Klee et al. Ann. Rev. of Plant Phys. 38:467-486 (1987).
Специалисту в данной области очевидно, что после того, как экспрессионная кассета стабильно включена в трансгенные растения и подтверждено, что она работает, ее можно перенести в другие растения путем полового скрещивания. Можно использовать любую из ряда стандартных методик, в зависимости от подлежащих скрещиванию видов.
Экспрессионные кассеты по изобретению могут быть применены для придания сопротивления абиотическому стрессу практически любому растению. Таким образом, изобретение имеет применение для широкого диапазона растений, включая виды из родов Asparagus, Atropa, Avena, Brassica, Citrus, Citrullus, Capsicum, Cucumis, Cucurbita, Daucus, Fragaria, Glycine, Gossypium, Helianthus, Heterocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lycopersicon, Malus, Manihot, Majorana, Medicago, Nicotiana, Oryza,
Panieum, Pannesetum, Persea, Pisum, Pyrus, Prunus, Raphanus, Secale, Senecio, Sinapis, Solarium, Sorghum, Trigonella, Triticum, Vitis, Vigna и Zea. В некоторых вариантах осуществления растение выбрано из группы, состоящей из риса, кукурузы, пшеницы, сои, хлопка, рапса, газонной травы и люцерны. В некоторых вариантах осуществления растение представляет собой декоративное растение. В некоторых вариантах осуществления растение представляет собой растение, производящее овощи или фрукты.
Специалистам в данной области очевидно, что ряд видов растений может быть применен в качестве моделей для прогнозирования фенотипических эффектов экспрессии трансгенов в других растениях. Например, хорошо известно, что и табак (Nicotiana) и растения Arabidopsis представляют собой применимые модели экспрессии трансгенов, особенно в других двудольных.
В некоторых вариантах осуществления растения по изобретению обладают повышенной чувствительностью к некоторым химическим агонистам по сравнению с растениями, которые в остальном являются идентичными, за исключением экспрессии мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида. Чувствительность к агонистам, которые воздействуют на PYR/PYL-семейство рецепторов ABA, может отслеживать путем наблюдения или измерения любого фенотипа, опосредованного ABA. Специалистам в данной области очевидно, что ABA является хорошо изученным гормоном растений и что ABA опосредует многие изменения в характеристиках, любое из которых можно отслеживать, чтобы определить, была ли модулирована чувствительность к ABA. В некоторых вариантах осуществления модулированная чувствительность к ABA проявляется в измененных сроках прорастания семян или измененной толерантности к стрессу (например, к засухе).
Сопротивление абиотическому стрессу может быть проанализировано в соответствии с любой из многих хорошо известных методик. Например, для толерантности к засухе, растения могут быть выращены в условиях, в которых на растение подается меньше оптимального количества воды. Засухоустойчивость может быть определена по любому из многих стандартных измеряемых параметров, включая тургорное давление, рост, урожайность и тому подобное.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры предлагаются для иллюстрации, но не для ограничения изобретения.
Пример 1: Изолирование ортогональных PYRl-рецепторов
Для изолирования мутантных (ортогональных) PYR/PYL-рецепторов сначала выявляется подходящий лиганд-мишень. Далее, применяются мутагенез рецепторов и
селекционные эксперименты для определения ортогональных рецепторов, которые реагируют на ортогональный лиганд-мишень. В общем, чем выше исходное сродство лиганда-мишени для рецептора до мутагенеза, тем меньше количество мутаций, которые будут необходимы для достижения поставленной цели. Белки с неизбирательными лиганд-связывающими карманами являются по своей сути лучшими отправными точками для биоинженерных усилий, чем белки с очень избирательными лиганд-связывающими карманами, так как неизбирательные лиганд-связывающие карманыи, вероятно, способны слабо контактировать с большим количеством лигандов, чем высокоселективный связывающий карман. Дополнительно, рецепторный белок, функция которого может быть измерена в гетерологичном хозяине, таком как S.cerevisiae, является предпочтительной мишенью для конструирования рецепторов, так как возможности подобного анализапозволяют быстро провести скрининг большого числа различных рецепторов. Способы и результаты
Для изолирования ортогональных PYR1-рецепторов был использован двухстадийный процесс. Во-первых, большая коллекция соединений была проскринирована для идентификации соединений, которые слабо взаимодействуют с рецепторами, что определялось по их способности вытеснять ABA, связанную с рецептором, в конкурентных экспериментах. После выявления слабо связывающих соединений, такие соединения с наиболее желаемыми свойствами с точки зрения конечного применения были использованы в качестве мишеней для итерационных раундов мутагенеза и схем отбора. Предварительный отбор слабо связывающих лигандов повышает частоту изолирования новых рецепторных белков, так как требуется меньше изменений лиганд-связывающего сайта для достижения молекулярного распознавания. Тем не менее, предварительный отбор не является залогом успеха.
Предварительный отбор лигандов. Было получено 74 агрохимический агента с различной структурой, выбранных из большого набора, включавшего приблизительно около 1500 коммерчески доступных агрохимический агентов. Данные 74 соединения были протестированы на их способность снижать промотируемые ABA белок-белковые взаимодействия PYR/PYL-PP2C в подходящих штаммах дрожжей при добавлении в 1000-кратном превышении по отношению к ABA (например, 100 нМ ABA и 100 мкМ испытываемого химического агента). Данный пилотный скрининг показал, что тесно родственные гербициды бромоксинил и его хлорный аналог хлороксинил, родентицид куматетралил, гербицид дихлобенил и фунгицид фенгексамид - все конкурируют за ABA. Подобная наблюдаемая частота успешных находок, равная 5 из 74 скринированных соединений, показывает, что слабое связывание с лиганд-связывающим карманом
PYR/PYL представляет собой обычное явление, что соответствует наблюдениям, согласно которым у белков START имеются неизбирательные лиганд-связывающие карманы (Mogensen, J.E. et al., Journal of Biological Chemistry 277:23684-23692 (2002)).
Мутагенез PYR1 на основе ПЦР. Чтобы определить PYR/PYL мутации, которые изменяют чувствительность к агонисту, кодирующая последовательность для PYR1 была мутирована посредством подверженной ошибкам ПЦР, используя установленные протоколы (Lin-Goerke et al., Biotechniques 23:409-412 (1997)), и клонирована в дрожжевом двухгибридном векторе PBD-GAL4 с получением библиотеки, составляющей приблизительно 70000 мутантов (названной ePCRl-библиотекой). Данная плазмидная библиотека была амплифицирована в E.coli и затем трансформирована в штамм S. cerevisiae MAV99, ^трансформированный белком слияния домена активации (AD) Gal4 с РР2С, кодируемым плазмидой pAD-HABl, как описано ранее (Park et al., Science 324:10681071 (2009)). MAV99 (Vidal et al., Proc Natl Acad Sci USA 93:10315-10320 (1996)) является обратным двухгибридным штаммом, который содержит активируемый Gal4 репортерный ген URA3. Данный штамм не будет расти в отсутствие экзогенного источника урацила. Однако, если штамм экспрессирует PYR1 -мутант, который позволяет белок-белковое взаимодействие между PYR.1 и НАВ1, то активируется репортерный ген URA3, что позволяет рост штамма и последующее образование колонии. Таким образом, коэкспрессия BD-PYR1 и AD-HAB1 в штамме MAV99 делает возможной схему положительного отбора для PYR1-мутаций, которые позволяют неприродным агонистам содействовать взаимодействию PYR1-HAB1, которое можно наблюдать как рост, содействуемый агонистом, в отсутствие добавленного урацила. В дополнение, включение соединения 5-фтор-оротовой кислоты (FOA, которая метаболизируется посредством URA3 до токсичного метаболита) в питательную среду вместо урацила позволяет провести отбор против мутаций, которые обеспечивают взаимодействия BD-PYR1 с AD-НАВ1 независимо от агониста ("конститутивные мутации"). Конститутивные мутации не желательны в данной стратегии отбора, потому что агрохимическая молекула-мишень не будет регулировать активность конститутивного мутанта. Поскольку как регулируемый, так и конститутивный PYR1 -мутанты позволят рост штамма MAV99, экспрессирующего HAB1-AD, в отсутствие экзогенного источника урацила, является выгодным использовать схемы как положительного, так и отрицательного отбора.
Изолирование мутантов, чувствительных к агрохимическим агентам. Чтобы определить мутации PYR1, которые придают чувствительность к неприродным агрохимическим агонистам, библиотека ePCRl был трансформирована в штамм MAV99/pAD-HABl, чтобы создать библиотеку под названием "А". Библиотека А была
затем выращена на средах, содержащих 0,15% FOA. Таким образом была получена библиотека мутантов под названием "А", которая представляет собой библиотеку PYR1-мутантов со сниженным количеством конститутивных мутаций.
Библиотека А была затем применена для разнообразных экспериментов отбора с использованием различных агрохимический агентов. Например, для изолирования мутаций, чувствительных к фенгексамиду, приблизительно 300,000 клеток "А" высевали на питательные среды без урацила, содержащие 200 мкМ фенгексамида. После нескольких дней инкубации появилось приблизительно 80 колоний, и они были индивидуально собраны и повторно протестированы на среде роста, содержащей или не содержащей фенгексамид. Колонии, которые росли на чашках с отсутствием фенгексамида, содержали конститутивные мутации, которые не были устранены в ходе подготовки библиотеки "А" и были отброшены. PYR1-кодирующие последовательности оставшихся приблизительно 30 мутаций были секвенированы, что выявило, что были изолированы 7 различных мутантных последовательностей (таблица1): 27-18: S47P, K59R, Y120H 27-24: K59R, Y120H, V144A 27-31: P42S, K59R, Y120C 27-28: P42S, K59R, Y120C, Т124М 27-9: P42S, K59R, Y120C, El 54G 27-36: E12G, E43G, K59R, II10S, N133D 27-14: E12G, L25R, E43G, K59R, II10S, N133D
Таблица 1. Чувствительные к фенгексамиду мутанты PYR/PYL-рецепторного полипептида
Клон
Имеющиеся мутации
Источник
Рост*
SEQ ID NO
[фенгексамиде]
0 мкМ
200 мкМ
27-18
S47P, K.59R, Y120H
ePCRl
+++
124
27-24
K59R, Y120H, V144A
ePCRl
+++
125
27-31
P42S, K59R, Y120C
ePCRl
+++
126
27-28
P42S, K59R, Y120C, Т124М
ePCRl
+++
127
27-9
P42S, K59R, Y120C, E154G
ePCRl
+++
128
27-36
E12G, E43G, K59R, 1110S, N133D
ePCRl
+++
129
27-14
E12G, L25R, E43G, K59R, I110S, N133D
ePCRl
+++
130
ePCRl = PYR1-библиотека мутагенеза на основе подверженной ошибкам ПЦР, начальный размер составляет 70000 клонов.
* Рост был отмечен на средах без урацила и с использованием репортерного штамма
MAV99, который растет только тогда, когда промотируемое агонистом белок-белковое взаимодействие между PYR1-GAL4 BD и HAB1-GAL4 AD воссоздает ОАЬ4-активность и позволяет экспрессию гена URA3 данного штамма.
Чувствительность PYR1 -мутантов к фенгексамиду была подтверждена двухгибридной системой дрожжей для репрезентативных мутантов. Плазмиды для трех репрезентативных мутантных клонов (27-9, 27-18 и 27-36) были изолированы из первичных клеток дрожжей и трансформированы в репортерный штамм YRG-2, экспрессирующий pAD-HABl (Park et al., Science 324:1068-1071 (2009)), в котором Gal4 вызывает экспрессию репортерного гена LacZ, которая позволяет колориметрическую индикацию ответа агониста. Фенгексамид был применен при концентрациях, равных 1,5, 10, 25 и 50 мкМ. Мутант 27-18 показывал сильный ответ на фенгексамид при всех испытанных концентрациях, как это определено сильным синим (LacZ-положительным) окрашиванием. Мутант 27-9 сильно отвечал на фенгексамид при концентрациях, равных 5, 10, 25 и 50 мкМ, и был слабо положительным при 1 мкМ. Мутант 27-36 был чувствителен к фенгексамиду при концентрациях, равных 25 и 50 мкМ.
Чтобы дополнительно исследовать взаимодействия ортогонального рецептора с лигандом, рекомбинантный белок была экспрессирован для чувствительного к фенгексамиду мутанта 27-18, который имеет три мутации в PYR1. Белок 6X-His-PYR1 (27-18) был экспрессирован и очищен вместе с белком PYR1 дикого типа. Оба белка были протестированы на их способность ингибировать РР2С-активность в ответ на повышение концентраций либо ABA либо фенгексамида, используя анализы активности фосфатазы, в которых активация PYR/PYL-рецептора отслеживается ингибированием РР2С-активности (фигура 1). Анализы активности фосфатазы проводили, как описано у Park et al., Science 324:1068-1071 (2009), с незначительной модификацией, заключающейся в том, что буфер для анализа содержал 10 мМ Мп++ вместо Mg++; было установлено, что данная модификация увеличивала удельную активность НАВ1 приблизительно в 10 раз. Было обнаружено, что ABA не удавалось активировать мутант 27-18, но удавалось эффективно активировать PYR1-белок дикого типа (фигура 1А), таким образом демонстрируя, что мутант 27-18 нечувствителен к ABA. Дополнительно, мутант 27-18 активировался фенгексамидом, в то время как PYR1-белок дикого типа не активировался фенгексамидом (фигура 1В), таким образом демонстрируя, что мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды могут быть использованы для контроля РР2С-активности в ответ на фенгексамид.
Скрининги чувствительных к бромоксинилу (таблица 2), дихлобенилу (таблица 3) и беноксакору (таблица 4) PYR1-мутантов проводили, как описано выше для
фенгексамида, причем в каждом скрининге использовали 200 мкМ тестируемого соединения и библиотеки "А", созданной, как описано выше. Дрожжевой двухгибридный анализ подтвердил чувствительность к бромоксинилу для репрезентативных клонов мутантов 74А-1 и 74А-2. Бромоксинил был применен при концентрациях, равных 5, 10, 25 и 50 мкМ. Оба мутанта 74А.-1 и 74А-2 проявляли чувствительность к бромоксинилу в концентрации, равной 10, 25 и 50 мкМ.
Таблица 2. Чувствительные к бромоксинилу мутанты PYR/PYL-рецепторного
полипептида
Клон
Имеющиеся мутации
Источник
Рост* на [бромоксиниле]
SEQ ID NO
мкМ
0.5 мкМ
200 мкМ
74А-12
Т57А, K59R
ePCRl
131
74А-24
R50G, K59R, E141Q
ePCRl
132
74 А-1
K59R,H60R,N151D
ePCRl
133
74А-4
K59R, H60R, E102G, T125A,E141D
ePCRl
134
74А-13
K59R, I82N
ePCRl
135
74А-2
K59R, S92T
ePCRl
136
74А-15
K59R, S92T
ePCRl
137
74В-1
H21Y, K59R, H60R, S92T,R116K
Перетасованные Первый раунд
138
74В-7
P41L, K59R, H60R
Перетасованные Первый раунд
139
ePCRl = Библиотека мутагенеза PYR1 на основе подверженной ошибкам ПЦР, начальный
размер составляет 70000 клонов; перетасованные первого раунда = библиотека перетасованных мутантов PYR1, изготовленная с использованием изолированных ePCR-мутантов.
* Рост был отмечен на средах без урацила и с использованием репортерного штамма MAV99, который растет только тогда, когда промотируемое агонистом белок-белковое взаимодействие между PYR1-GAL4 BD и HAB1-GAL4 AD воссоздает GAL4-aKTHBH0CTb и позволяет экспрессию гена URA3 данного штамма.
Таблица 3. Чувствительные к дихлобенилу мутанты PYR/PYL-рецепторного
полипептида
Клон
Имеющиеся мутации
Источник
Рост* на [дихлобениле]
SEQ ID NO
0 мкМ
200 мкМ
68-1
E94D
ePCRl
140
68-2
R37Q, F71S
ePCRl
141
68-8
D26G
ePCRl
142
68-3
P27L, K59R, K63N
ePCRl
143
68-17
K59R
ePCRl
144
ePCRl = Библиотека мутагенеза PYR1 на основе подверженной ошибкам ПЦР, начальный
размер составляет 70000 клонов
* Рост был отмечен на средах без урацила и с использованием репортерного штамма MAV99, который растет только тогда, когда промотируемое агонистом белок-белковое взаимодействие между PYR1-GAL4 BD и HAB1-GAL4 AD воссоздает GAL4-aKTHBH0CTb и позволяет экспрессию гена URA3 данного штамма.
Таблица 4. Чувствительные к беноксакору мутанты PYR/PYL-рецепторного полипептида
Клон
Имеющиеся мутации
Источник
Рост*
SEQ ID NO
[беноксакоре]
0 мкМ
200 мкМ
129-2
I110T, E114D, V138M
ePCRl
145
127-1
K59R,N119Y
ePCRl
146
ePCRl = Библиотека мутагенеза PYR1 на основе подверженной ошибкам ПЦР, начальный размер составляет 70000 клонов
* Рост был отмечен на средах без урацила и с использованием репортерного штамма MAV99, который растет только тогда, когда промотируемое агонистом белок-белковое взаимодействие между PYR1-GAL4 BD и HAB1-GAL4 AD воссоздает GAL4-aKTHBHOCTb и позволяет экспрессию гена URA3 данного штамма.
Улучшение первичных мутантов с использованием перетасовки ДНК. Рекомбинирование существующих мутаций или вариантов с использованием перетасовки ДНК представляет собой проверенный способ быстрого улучшения функции и активности белка (Stemmer, Nature 370:389-391 (1994)). Для улучшения изолированных PYR1-мутантов, чувствительных к бромоксинилу, плазмидные ДНК для 7 мутантных последовательностей, идентифицированных скринингом библиотеки "А" (74А-12, 74А-24, 74А-1, 74А-4, 74А-13, 74А-2 и 74А-15), были объединены с эквимолярным количеством плазмиды оригинальной ePCRl-библиотеки PYR-мутантов. Добавление ePCRl-ДНК к реакции перетасовки дало возможность ввести новые мутации в существующие мутации
и, следовательно, увеличивает потенциальное разнообразие последовательностей. Смешанные ДНК были перетасованы с использованием установленного протокола (Muller et al., Nucleic Acids Res 33:ell7 (2005)), и перемешанная ДНК продукта ПНР была клонирована в pBD-GAL4, чтобы генерировать приблизительно 50000 клонов, которые были собраны и названы библиотекой "В", которая амплифицировалась в E.coli и была введена в штамм дрожжей MAV99, будучи котрансформированной с pAD-HAB 1. Данные клетки затем были выращены на 0,15% FOA, чтобы удалить конститутивные мутанты, произведя библиотеку "В". Библиотека "В" была затем выращена на чашках без добавленного урацила и содержащих 0,5 мкМ бромоксинила. Были изолированы два уникальных, неконститутивных клона (74В-1 и 74В-7) (таблица 2).
С учетом пластичности PYR1, показанной данными экспериментами, авторы стремились установить, можно ли выделить ортогональный рецептор для лиганда-мишени, который не был предварительно проскринирован на слабое связывание с помощью конкурентных анализов в дрожжевой системе, описанных выше. Та же методология отбора, как описано выше, был применена для выявления мутантов, которые реагируют на ВТН (ацибензолар-8-метил). Данный скрининг привел к успешному изолированию трех различных PYR1-мутантов, которые реагируют на ВТН (таблица 5). Дрожжевой двухгибридный анализ подтвердил чувствительность к ВТН для репрезентативного мутантного клона ВТН-9. ВТН был применен в концентрациях, равных 25, 50, 100 и 200 мкМ, и мутантный ВТН-9 был чувствителен к ВТН в концентрациях, равных 50, 100 и 200 мкМ. Таким образом, пластичность PYR1 позволяет изолировать многие варианты ортогональных рецепторов.
Таблица 5. Чувствительные к ВТН мутанты PYR/PYL-рецепторного полипептида
Клон
Имеющиеся мутации
Источник
Рост* на [ВТН]
SEQ ID NO
0 мкМ
200 мкМ
втн-1
H115Y,F159S
ePCRl
147
втн-
F159L
ePCRl
148
ВТН-Ап7
Q24R, K59R, I82T, F159L, D161G
ePCRl
164
ePCRl = Библиотека мутагенеза PYR1 на основе подверженной ошибкам ПЦР, начальный размер составляет 70000 клонов
* Рост был отмечен на средах без урацила и с использованием репортерного штамма MAV99, который растет только тогда, когда промотируемое агонистом белок-белковое
взаимодействие между PYR1-GAL4 BD и HAB1-GAL4 AD воссоздает ОАЬ4-активность и позволяет экспрессию гена URA3 данного штамма.
Пример 2: Мутации в позиции К59 сенсибилизируют PYR по отношению к различным ортогональным лигандам
Инспекция данных скрининга в таблицах 1-5 показала, что рецепторы, содержащие мутацию в позиции К59, были изолированы по меньшей мере один раз для всех химический агентов, подвергшихся скринингу. В большинстве случаев мутация K59R присутствовала в большинстве ортогональных рецепторов, изолированных для каждого химического агента, подвергшегося скринингу. Такое удивительное наблюдение предполагает, что К59 представляет собой контрольную точку, на которую можно успешно нацеливаться при конструировании эффективных ортогональных рецепторов. Две правдоподобные гипотезы частой встречаемости мутации в позиции, соответствующей аминокислоте К59 из PYR1, представляют собой гипотезу "тормоза" и гипотезу "формы кармана". Гипотеза тормоза предполагает, что остаток К59 функционирует как часть механизма "ингибирования", чтобы помочь сохранить рецепторы в "выключенном" состоянии в отсутствие связанной ABA, поэтому мутации в К59 могут нарушить механизм контроля, который сохраняет активацию рецептора, связанную со связыванием ABA, и предотвращает рецепторы от активации неприродными лигандами. Гипотеза формы кармана предполагает, что мутации в позиции, соответствующей К59, изменяют связывающий карман рецептора PYR/PYL, создавая новую поверхность кармана, что облегчает взаимодействия между PYR/PYL и ортогональными лигандами с улучшением сродства связывания.
Чтобы проверить данные две гипотезы, серии мутантов К59 были встроены в PYR1 и исследованы на их чувствительность к нативному лиганду ABA и ортогональному лиганду дихлобенилу (таблица 6). Дихлобенил был выбран в качестве модели ортогонального лиганда для данных исследований, поскольку было обнаружено, что он является слабым PYR/PYL-агонистом (например, дихлобенил может слабо активировать рецепторы в концентрации, составляющей 200 мкМ или выше). Дихлобенил, следовательно, может служить подходящей тестовой молекулой, с помощью которой возможно исследовать чувствительность мутантов к ортогональному лиганду.
Таблица 6. Чувствительность мутаций К59 к ортогональному лиганду дихлобенилу
Мутация
ABA [10 мкМ]
Дихлобенил [50 мкМ]
Д.Т.
Мутация
ABA [10 мкМ1
Дихлобенил [50 мкМ]
К59А
К59С
K59F
K59G
К59Н
K59I
K59L
К59М
К59Р
K59R
K59S
К59Т
K59V
K59Y
K59N
K59W
Как показано в таблице 6, PYR1 дикого типа не активировался 50 мкМ дихлобенила. Тем не менее, 14 из 16 сконструированных мутантов замещения К59 активировались 50 мкМ дихлобенила. Таким образом, большинство мутаций в позиции К59 повышает чувствительность к дихлобенилу. Данные результаты, наряду с распространенностью мутаций K59R, изолированных в скринингах, описанных здесь (например, в примере 1 и в таблицах 1-5), говорят о том, что многие мутации в позиции К59 являются выгодными для создания рецепторов, которые активируются ненативными (то есть ортогональными) лигандами, и дополнительно свидетельствуют о том, что К59 скорее всего действует в соответствии с гипотезой тормоза, чем с гипотезой формы кармана, так как гипотеза формы кармана предсказывает, что измененная поверхность кармана, которая облегчает связывание одного ортогонального лиганда, вряд ли также представляет собой форму, которая облегчает связывание другого ортогонального лиганда. Обсуждение
Мутации рецептора, изолированные в коллекции мутантов, преимущественно локализуются в остатках, чьи боковые цепи направлены в лиганд-связывающий карман PYR1. Это не удивительно, так как поверхность лиганд-связывающего кармана PYR1 должны быть преобразована, чтобы быть способной вступать в контакт с новыми лигандами. Дополнительно, мутации, изолированные в ортогональных рецепторах (то есть K59R, S92T), затрагивают инвариантные позиции в PYR/PYL-семействе рецепторов ABA. Данные позиции являются инвариантными, потому что они участвуют в распознавании ABA и находятся под сильным естественным отбором для обеспечивания
правильного связывания с ABA. Поскольку мутации в консервативных, связывающих ABA остатках, как известно, уменьшают чувствительность к ABA, можно ожидать, что ортогональные рецепторы будут нечувствительными к ABA, будучи экспрессированными в клетках растений. Преимуществом данного признака является то, что гиперэкспрессия ортогональных рецепторов не должна приводить к активации сигнального пути ABA в отсутствии контролирующего ортогонального лиганда.
Биохимическая функция белков PYR1 и PYR/PYL, в общем, заключается в ингибировании РР2С-активности. Ингибирование может быть измерено в живых клетках с использованием дрожжевого двухгибридного способа или других способов на основе клеток. Ингибирование также может быть измерено in vitro с помощью анализов ферментативной активности фосфатазы в присутствии реагента для колориметрического определения (например, пара-нитрофенилфосфата). Отметим, что анализ на основе дрожжей, применимый выше, предоставляет косвенный показатель связывания лиганда. Вполне возможно, что некоторые соединения, которые были подвергнуты скринингу, могут уменьшать чувствительность к ABA у штаммов дрожжей без прямого связывания в центральном кармане. Для снятия данного потенциального ограничения можно использовать параллельные анализы in vitro или анализы на основе клеток с использованием других организмов в качестве альтернативного подхода к идентификации соединений-мишеней со слабым связыванием.
Пример 3: Улучшение чувствительности рецепторов к фенгексамиду Создание вариантов PYR1, чувствительных к фенгексамиду
Как подробно описано в примере 1, скрининг ePCRl-библиотеки мутантов для выявления мутантов, чувствительных к фенгексамиду, привел к изолированию нескольких мутантных PYR1 -рецепторов, которые реагируют на фенгексамид (таблица 1). Для повышения чувствительности рецепторов к фенгексамиду была проведена перетасовка ДНК с использованием той же общей экспериментальной схемы, изложенной выше. Коротко, эквимолярные количества плазмидной ДНК рецепторов, чувствительных к фенгексамиду, показанных в таблице 1, были собраны и объединены с эквимолярными количествами ДНК ePCR-библиотеки. Объединенные шаблоны были использованы для перетасовки ДНК, которая была проведена, как описано в примере 1. Была подготовлена библиотека (под названием "27В"), содержащая приблизительно 400,000 перетасованных вариантов. ДНК для этой библиотеки была введена в штамм дрожжей MAV99, несущий плазмиду pAD-HABl, как описано выше, и полученные клетки дрожжей были собраны и выращены на чашках, содержащих FOA, для уменьшения конститутивных мутантов в библиотеке, произведя библиотеку 27В. Библиотека "27В" была посеяна на средах без
урацила, но содержащих 20 мкМ фенгексамида. Приблизительно 50 положительных результатов было отобрано из данных чашек и затем протестировано повторно на средах без урацила, чтобы отличить конститутивные мутанты (например, ложные срабатывания) от тех мутантов, которые растут специфически в ответ на фенгексамид (т. е. истинно положительных). PYR1 -кодирующие последовательности для истинно положительных результатов секвенировали с получением следующих серий вариантов PYR1, чувствительных к фенгексамиду (таблица 7):
Таблица 7. Чувствительные к фенгексамиду мутанты PYR/PYL-рецепторного полипептида, идентифицированные из второго раунда перетасовки
Клон #
Имеющиеся мутации
SEQ ID NO
27В-1
P42S, K59R, D97N, Y120H, VI631, А172Т
165
27В-2
P42S, L44F, K59R, Y120H, V138M, M158I
166
27В-3
P42S, K59R, Y120H, V123I, V139I, M158I
167
27В-4
S47P, V49I, K59R, Y120H, M158I, А177Т
168
27В-7
K59R, V81M, Y120C, M158I, V163I
169
27В-8
P42S, K59R, D97N, Y120H, V163I, А172Т
165
Третий раунд перестановки был проведен комбинированием ДНК для мутантов "27В", представленных в таблице 7, и ePCRl-библиотеки с созданием библиотеки, составляющей приблизительно 150000 клонов, которая затем была трансформирована в PAD-HAB1-MAV99. Конститутивные мутанты были затем обеднены ростом на FOA, после чего чувствительные к фенгексамиду мутанты были отобраны ростом на средах без урацила, но содержащих 1,5 мкМ фенгексамида, применяя способы, описанные выше. Данные усилия дали следующие варианты, чувствительные к фенгексамиду (таблица 8):
Таблица 8. Чувствительные к фенгексамиду мутанты PYR/PYL-рецепторного полипептида, идентифицированные из третьего раунда перетасовки
Клон #
Имеющиеся мутации
SEQ ID NO
27С-1
P27L, P42S, K59R, D97N, Y120H, M158I, Т173А
170
27С-2
P42S, K59R, R74C, Y120H, M158I
171
27С-3
S29N, K59R, D97N, Y120H, V163I, А72Т
172
27С-5
P42S, K59R, Y120H, V123I, V139I, M158I, V163I
173
27С-16
K59R, V81M, Y120H, M158I, V163I
174
27С-18
Е12К, K59R, V75I, D97N, Y120H, V163L А172Т
175
27С-19
L33F, P42S, K59R, Y120H, V123I, M158I
176
27С-20
P42S, K59R, Y120H, M158I, V163L V174I
177
27С-21
R10Q, P42S, K59R, D97N, Y120H, VI631, А172Т
178
Установление роли специфических мутаций в чувствительном к фенгексамиду мутанте 27С-2
Протоколы мутагенеза часто приводят к появлению ложных мутаций, которые не влияют на желаемую функциональность. Для определения важности остатков, идентифицированных нашими скринингами, авторы сосредоточились на идентифицированном, отвечающем с высокой чувствительностью на фенгексамид мутанте 27С-2, который содержит 5 мутаций (P42S, K59R, R74C, Y120H и Ml581; SEQ ID N0:171; см. таблицу 8) по сравнению с последовательностью PYR1 дикого типа. Наличие K59R, Y120H и Ml581 во многих других изолированных мутантах свидетельствует о том, что они, вероятно, представляют собой мутации, вносящих вклад в чувствительность к фенгексамиду. Чтобы исследовать роль данных 5 мутаций в ответе на фенгексамид, каждый из данных остатков реверсировали в остаток дикого типа с использованием сайт-направленного мутагенеза. Полученные клоны были затем трансформированы в репортерный штамм дрожжей Y190, несущий плазмиду pAD-HABl, и протестированы на чувствительность к фенгексамиду в диапазоне концентраций. Как показано на фигуре 2А, данная попытка определила, что K59R, Y120H и Ml581 являются достаточными для чувствительности к фенгексамиду, и установила, что мутации P42S и R74C не являются достаточными, чтобы вносить вклад в чувствительность к фенгексамиду в клоне 27С-2. В дополнение, рецепторные анализы in vitro показали, что тройной мутант PYR1K59R'Y120H'M1581 чувствителен к фенгексамиду (величина IC50 составляет приблизительно 0,4 мкМ) (фигура 2В), что демонстрирует, что наблюдаемая чувствительность тройного мутанта PYRIK59r,y120H'M1581 к фенгексамиду не является артефактом дрожжевой системы анализа, применяемой для идентификации тройного мутанта.
Конструирование чувствительности к фенгексамиду в PYL2
[PYR1 является членом семейства белков PYR/PYL-рецепторов, которое содержит 14 членов в Arabidopsis. Более того, мутации, достаточные для чувствительности к фенгексамиду в 27С-2, локализованы в инвариантных или консервативных остатках внутри лиганд-связывающего кармана (K59R, Y120H) или на интерфейсе PYR/PYL-PP2C (Ml581). Учитывая консервативный характер данных остатков, авторы предположили, что чувствительность к фенгексамиду может быть придана и другим членом семейства рецепторов путем мутирования гомологичных остатков в других PYR/PYL-рецепторах. Чтобы проверить данное предположение, авторы ввели гомологичные мутации в PYL2 (K64R, соответствующая K59R в PYR1; Y124H, соответствующая Y120H в PYR1 и M164I, соответствующая M158I в PYR1), создав мутант PYL2K64R,Y124H'M1641. Как показано на
фигуре ЗА, данный мутант не проявляет чувствительности к фенгексамиду при тестировании с использованием дрожжевого двухгибридного анализа (штамм Y190 pAD-НАВ1). Недавняя работа (Peterson et al, Nat Struct Mol Biol 17:1109-1113 (2010)) показала, что незначительные вариации последовательностей между членами семейства рецепторов влияют на чувствительность рецепторов к селективному агонисту пирабактину. В частности, PYR1 и PYL1 показывают сильную реакцию на пирабактин, тогда как PYL2 (и другие члены семейства) не показывают такую реакцию. Генетические, биохимические и структурные исследования показали, что два ключевых остатка в лиганд-связывающем кармане PYR1 определяют различие в агонистической активности пирабактина между PYR1 и PYL2. В PYR1 данные остатки представляют собой изолейцины 162 и 1110, тогда как в PYL2 гомологичные остатки (позиция аминокислот 64 и 114, соответственно) замещены на менее объемистые валины V67 и VI14. Базируясь на известной роли данных двух остатков в имеющих значение различиях в чувствительности к лигандам между рецепторами, авторы предположили, что 162 и 1110 могут играть важную роль в ответе на фенгексамид. Поэтому авторы ввели мутации V67I и VI141 (отдельно или в комбинации) в рецептор PYL2K64r'y124H'M1641. Добавление мутаций V67I и VI141 вместе позволило получить ответ получившегося мутантного рецептора pYL2K64R'Y124H,M164I'V67I,vl]41 на фенгексамид в анализах в дрожжевой системе (фигура ЗА) и в анализах РР2С-ингибирования (фигура ЗВ).
Эффективность ортогональных рецепторов в растениях
Чтобы исследовать, будет ли функционировать в растениях ответ на фенгексамид, наблюдаемый в дрожжах и в экспериментах in vitro, трансгенные растения 35S:GFP-PYL2 и 35S;GFP-PYL2K64R'Y124H,M164I'V67I'V,14I были получены с использованием стандартных способов молекулярного клонирования в модифицированную версию pEGAD (Cutler et al, Proc Natl Acad Sci USA 97:3718-3723 (2000)), в которой 6Х-гистидиновый тег был добавлен к N-концу GFP. Трансгенные растения были получены с использованием способа floral-dip, и первичные трансгены (Т1) идентифицировали скринингом саженцев в режиме эпифлуоресценции с помощью микроскопа Leica с отсекающим GFP фильтром (Leica GFP dissecting microscope). Трансгенные растения GFP+ были выращены до зрелости, и семена Т2 собрали для дополнительных анализов.
Чтобы установить, функционирует ли чувствительный к фенгексамиду мутант PYL2K64R'Y124H'M164I'V67I'V1141 в растениях, сегреганты Т2 и соответствующий контроль дикого типа были протестированы на их способность расти на 100 мкМ фенгексамиде, так как активация рецепторов должна была ингибировать прорастание. Растения, экспрессирующие мутантные рецепторы, показывают сильное ингибирование роста, что
дает основания предполагать, что сигнальный путь ABA активируется фенгексамидом в растениях, экспрессирующих мутантный рецептор, но не рецептор дикого типа (фигура 4). Для дополнительного исследования активации ответа на ABA авторы испытали в следующий раз трансгены GFP+ (сегреганты Т2) и соответствующие контроли на активацию трех АВА-репортерных генов (P5CS1, RD29A и NCED3) в ответ на воздействие фенгексамида в жидкой культуре с использованием количественных способов RT-PCR. Как показано на фигуре 5, все три гена показывают существенную индукцию фенгексамидом в двух независимых трансгенных линиях pYL2K64R,Yi24H,Mi64i,v67i> vii4i ггаким образом, гены, которые в норме регулируются in vivo
посредством ABA, могут быть активированы фенгексамидом с помощью мутантного
"AL"M___DVT 0K64R,Y124H,M164I,V67I,V114I
рецептора PYL2 .
Чтобы дополнительно установить, функционирует ли чувствительный к фенгексамиду мутант PYL2K64R'Y124H'M164I'V67I'V1141 в растениях, авторы исследовали способность фенгексамида уменьшать потерю воды в отдельных листьях растений дикого типа или растений с гиперэкспрессией pYL2K64R'Y124H'M!64I'v67I'v1141. Трансгенные или контрольные (дикого типа) растения были выращены в условиях 16 часов света/8 часов темноты в течение 3 недель и затем обработаны либо 100 мкМ (+)-АВА, 100 мкМ фенгексамида или контролем (содержащим 0,1% Tween-20, 0,1% ДМСО). Обработки посредством ABA были проведены в качестве положительного контроля. Растения были опрысканы в вечернее время до проведения экспериментов потери воды. На следующее утро, приблизительно через 16 часов после обработки, надземные розетки экспериментальных образцов были собраны и перенесены в чашки для взвешивания, 8 растений в измеряемом образце, и поддерживались при освещении флуоресцентным светом приблизительно 90-100 мкЭйнштейн/м . Четыре группы из восьми растений измерялись во временной точке, с интервалами в 20 мин. Опыты повторяли три раза в течение восьминедельного интервала. Во всех экспериментах предварительной обработки фенгексамидом было достаточно, чтобы уменьшить потерю воды из трансгенных растений PYL2K64R'Y124H'M164I> V67I'V1141 (фигура 6А-С), хотя и с меньшей эффективностью, чем в случае использования ABA. Следует отметить, однако, что ABA может активировать все PYR/PYL-рецепторы в геноме растения (по меньшей мере 13 в Arabidopsis), тогда как фенгексамид избирательно активирует один сконструированный рецептор, pYL2K64R'Y124H'M164['V67I'V1141. В качестве контроля воздействия фенгексамида, авторы подвергли растения дикого типа обработкам либо 100 мкМ (+)-АВА, 100 мкМ фенгексамида или контрольным раствором (содержащим 0,1% Твин-20, 0,1% ДМСО) по той же методике, что описана выше для трансгенных растений. Данные эксперименты
показали, что фенгексамид не влияет на потерю воды в растениях дикого типа (фигура 7). Таким образом, экспрессия чувствительного к фенгексамиду мутанта PYL2K64R'Y124H'M164I'V67I'V1141 в трансгенных растениях позволяет фенгексамиду активировать сигнальный путь ABA и физиологическую реакцию.
Следует понимать, что примеры и варианты осуществления, описанные здесь, служат только для иллюстрации, и что различные модификации или изменения в свете их предложены специалистам в данной области и должны быть включены в сущность и область действия данной заявки и в объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые здесь, включены сюда посредством ссылки во всей своей полноте для любых целей.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Cutler, Sean R. Park, Sang-Youl
The Regents of the university of California
<120> Modified PYR/PYL Receptors Activated by Orthogonal Ligands
<130> 81906-804547
<140> wo Not yet assigned <141> Not yet assigned
<150> US 61/328,999 <151> 2010-04-28
<150> US 61/434,407 <151> 2011-01-19
<160> 179
<170> FastSEQ for windows version 4.0
<210> 1 <211> 191 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, Pyrabactin resistance 1,
abscisic acid receptor PYRl (PYRl), ABll-binding protein 6 (ABIP6), regulatory components of ABA receptor 11 (RCARll), At4gl7870, T6K21.50
<400> 1
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
Hi s
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
Val
тгр
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
1.55
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 2 <211> 221 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
Страница 1
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYLl, PYRl-like protein 1 (PYLI), ABil-binding protein 6 (ABIP6), regulatory components of ABA receptor 9 (RCAR12), At5g46790, MZA15.21
<400> 2
Met
Ala
Asn
ser
Glu
Ser
Ser
Ser
Ser
Pro
Val
Asn
Glu
Glu
Glu
Asn
ser
Gin
Arg
Ser
Thr
Leu
His
His
Gin
Thr
Met
Pro
Ser
Asp
Leu
Thr
Gin
Asp 35
Glu
Phe
Thr
Gin
Leu 40
Ser
Gin
Ser
Ala 45
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Gly
Asn
Gly
Arg
Cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Thr
val
тгр
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Arg
Pro
Gin
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Ser
cys
Asn
val
Ser
Glu
Asp
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
Asn
val
Ser
100
105
110
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Leu
Asp
Asp
115
120
125
Asp
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
Thr
Gly Gly
Glu
His
Arg
Leu
130
135
140
Arg
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
Phe
Glu
Lys
Glu
Glu
145
150
155
160
Glu
Glu
Glu
Arg
тгр
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
165
170
175
val
Pro
Glu
Gly Asn
ser
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
Asp
Thr
180
185
190
val
Arg 195
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys 200
Leu
Ala
Ser
Thr 205
Glu
Ala
Met
Asn
Arg
Asn
Asn
Asn
Asn
Asn
Asn
Ser
Ser
Gin
Val
Arg
210 215 220
<210> 3 <211> 190 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL2, PYRl-like protein 2 (PYL2), ABil-binding protein 6 (ABIP6), regulatory components of ABA receptor 14 (RCAR14), Bet v I allergen family protein, At2g26040, T19L18.15
<400> 3
Met
ser
Ser
Ser
Pro
Ala
val
Lys
Gly
Leu
Thr
Asp
Glu
Glu
Gin
Lys
Thr
Leu
Glu
Pro
Val
Lys
Thr
Tyr
Hi s
Gin
Phe
Glu
Pro
Asp
Pro
Thr
Thr
cys
Thr
Ser
Leu
lie
Thr
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ala
Ser
val
val 50
тгр
Pro
Leu
Arg 55
Arg
Phe
Asp
Asn
Pro 60
Glu
Arg
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Arg
cys
Arg
Leu
Ser
Gly Asp
Gly
Asp
val
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Thr
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Phe
val
Asp
Asp
Asp
His
Arg
val
Leu
Ser
Phe
100
105
110
Arg
Val
val
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Lys
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
115
120
125
Ser
val
Asn
Glu
Phe
Leu
Asn
Gin
Asp
Ser
Gly
Lys
Val
Tyr
Thr
val
130
135
140
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Thr
val
Asp
lie
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
Glu
Glu
145 150 155 160
Страница 2
Asp Thr Lys Met Phe val Asp Thr val val Lys Leu Asn Leu Gin Lys
165 170 175
Leu Gly val Ala Ala Thr Ser Ala Pro Met His Asp Asp Glu 180 185 190
<210> 4 <211> 209 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL3, PYRl-like protein 3 (PYL3), regulatory components of ABA receptor 13 (RCAR13), Atlg73000, F3N23.20
<400> 4
Met
Asn
Leu
Ala
Pro
His
Asp
Pro
Ser
ser
Ser
ser
Thr
Thr
Thr
Thr
Ser
Ser
Ser
Thr
Pro
Tyr
Gly
Leu
Thr
Lys
Asp
Glu
Phe
Ser
Thr
Leu
Asp
Ser
Arg
Thr
Hi s
Hi s
Thr
Phe
Pro
Arg
Ser
Pro
Asn
Thr
Cys
Thr
Ser
Leu
Ala
His
Arg
val
ASP
Ala
Pro
Ala
Hi s
Ala
Trp
Arg
Phe
val
Arg
Asp
Phe
Ala
Asn
Pro
Asn
Lys
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
Ser
Cys
Thr
Arg
val
Asn
Gly
ASn
Gly
Lys
Glu
Lys
val
Gly Thr
Arg
Glu
val
Ser
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
100
105
110
Ala
Ser
Thr
Ser
val
Glu
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Glu
Glu
Lys
Arg
115
120
125
Leu
Ser
Phe
Arg
val
Leu
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Asn
ASn
Tyr
130
135
140
Arg
ser
val
Thr
Ser
val
Asn
Glu
Phe
val
val
Leu
Glu
Lys
Asp
Lys
145
150
155
160
Lys
Lys
Arg
val
Tyr
Ser
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
Asp
165
170
175
Pro
Gin
Gly
Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
val
Asp
Thr
val
180
185
190
val
Lys
Ser
Asn
Leu
Gin
Asn
Leu
Ala
val
ser
Thr
Ala
Ser
Pro
195 200 205
Thr
<210> 5 <211> 207 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL4, PYRl-like protein 4 (PYL4), ABil-binding protein 2 (ABIP2), regulatory components of ABA receptor 10 (RCAR10), At2g38310, T19C21.20
<400> 5
Met Leu Ala val His Arg pro Ser Ser Ala val Ser Asp Gly Asp Ser
15 10 15
val Gin lie Pro Met Met lie Ala Ser Phe Gin Lys Arg Phe Pro Ser
20 25 30
Leu Ser Arg Asp Ser Thr Ala Ala Arg Phe His Thr His Glu val Gly
35 40 45
Pro Asn Gin Cys Cys ser Ala val lie Gin Glu lie Ser Ala Pro lie
50 55 60
Ser Thr val Trp Ser val val Arg Arg Phe Asp Asn Pro Gin Ala Tyr 65 70 75 80
Страница 3
Lys
His
Phe
Leu
Lys
Ser
cys
Ser
Val
He 90
Gly
Gly
Asp
Gly
Asp 95
Asn
val
Gly
Ser
Leu
Arg
Gin
val
Hi s
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
100
105
110
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Hi s
Val
115
120
125
Ser
Phe
Ser
val
Val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Ser
Asn
Tyr
Arg
Ser
130
135
140
val
Thr
Thr
Leu
His
Pro
Ser
Pro
Ser
Gly
Thr
val
val
val
Glu
145
150
155
160
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly
Asn
Thr
Lys
Glu
Glu
Thr
Cys
165
170
175
Asp
Phe
val
Asp
val
val
Arg
Cys
Asn
Leu
Gin
ser
Leu
Ala
Lys
180
185
190
Ala
Glu
Asn
Thr
Ala
Ala
Glu
Ser
Lys
Lys
Lys
Met
Ser
Leu
195 200 205
<210> б <211> 203 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL5, PYRl-like protein 5 (PYL5), ABll-binding protein 3 (ABIP3), regulatory components of ABA receptor 8 (RCAR8), Bet v I allergen family protein, At5g05440, K18I23.25
<400> 6
Met
Arg
ser
Pro
val
Gin
Leu
Gin
Hi s
Gly
Ser
Asp
Ala
Thr
Asn Gly
Phe
His
Thr
Leu
Gin
Pro
His
Asp
Gin
Thr
Asp
Gly
Pro
lie
Lys
Arg
val
Cys
Leu
Thr
Arg
Gly
Met
His
val
pro
Glu
Hi s
val
Ala
Met
Hi s
His
Thr
His
Asp
val
Gly
Pro
Asp
Gin
cys
Cys
Ser
Ser
val
val
Gin
Met
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Ser
Val
тгр
Ala
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Asn
Pro
Lys
val
Tyr
Lys
А5П
Phe
Arg
Gin
Cys
Arg
val
Gin
Gly
Asp
Gly
Leu
Hi s
val
Gly
Asp
Leu
Arg
Glu
val
Met
val
val
100
105
110
ser Gly
Leu
Pro
Ala
val
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
115
120
125
Glu
Glu
Arg
Hi s
val
ser
Phe
Ser
val
Val
Gly Gly
Asp
Hi s
Arg
130
135
140
Leu
Lys
Asn
Tyr
Arg
Ser
Val
Thr
Thr
Leu
Hi s
Ala
ser
Asp
Asp
Glu
145
150
155
160
Gly Thr
val
val
val
Glu
Ser
Tyr
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly Asn
165
170
175
Thr
Glu
Glu
Glu
Thr
Leu
ser
Phe
val
Asp
Thr
val
Arg
Cys
Asn
180
185
190
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Arg
ser
Thr
Asn
Arg
Gin
195 200
<210> 7 <211> 215 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL6, PYRl-like protein 6 (PYL6), ABil-binding protein 5 (ABIP5), regulatory components of ABA receptor 9 (RCAR9), Bet v I allergen family protein, At2g40330, T7M7.15
Страница 4
<400> 7
Met
Pro
Thr
Ser
Gin
Phe
Gin
Arg
Ser
Ser
Thr
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala
Asn
Ala
Thr
val
Arg
Asn
Tyr
Pro
His
Hi s
His
Gin
Lys
Gin
val
Gin
Lys
val
Ser
Leu
Thr
Arg
Gly
Met
Ala
Asp
Val
Pro
Glu
Hi s
val
Glu
Leu
Ser
His
Thr
His
val
val
Gly
Pro
Ser
Gin
cys
Phe
Ser
val
val
val
Gin
Asp
val
Glu
Ala
Pro
val
Ser
Thr
Val
Trp
Ser
lie
Leu
Ser
Arg
Phe
Glu
His
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Ser
Cys
Hi s
val
val
He 100
Gly
Asp
Gly
Arg
Glu 105
val
Gly
Ser
val
Arg 110
Glu
val
Arg
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Phe
Ser
Leu
Glu
Arg
Leu
Glu
115
120
125
Met
Asp
Asp
Asp
Arg
His
val
Ser
Phe
Ser
Val
val
Gly Gly
130
135
140
Asp
His
Arg
Leu
Met
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
Val
His
Glu
Ser
145
150
155
160
Glu
Glu
Asp
Ser
Asp 165
Gly
Lys
Lys
Arg
Thr 170
Arg
Val
val
Glu
Ser 175
туг
Val
val
Asp
Val
Pro
Ala
Gly
Asn
Asp
Lys
Glu
Glu
Thr
Cys
Ser
Phe
180
185
190
Ala
Asp
Thr
lie
val
Arg
Cys
Asn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Lys
Leu
Ala
195
200
205
Glu
Asn
Thr
ser
Lys
Phe
ser
210 215
<210> 8 <211> 211 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL7, PYRl-like protein 7 (PYL7), ABil-binding protein 7 (ABIP7), regulatory components of ABA receptor 2 (RCAR2), At4g01026
<400> 8
Met
Glu
Met
Gly
Gly
Asp
Asp
Thr
Asp
Thr
Glu
Met
Tyr
Gly Ala
Leu
val
Thr
Ala
Gin
Ser
Leu
Arg
Leu
Arg
Hi s
Leu
His
Hi s
cys
Arg
Glu
Asn
Gin
Cys
Thr
Ser
val
Leu
Val
Lys
Tyr
Gin
Ala
pro
val
His
Leu
val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
lie
Ser
Arg
Cys
Thr
val
Asn
Gly Asp
Pro
Glu
lie Gly
Cys
Leu
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Gin
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu
His
lie
Leu
Gly lie
100
105
110
Asn
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Lys
Asn
туг
Ser
Ser
Leu
115
120
125
Thr
val
His
Pro
Glu
Met
lie
Asp
Gly Arg
Ser Gly
Thr
Met
val
Met
130
135
140
Glu
Ser
Phe
Val
val
Asp
val
Pro
Gin
Gly
Asn
Thr
Lys
Asp
Asp
Thr
145
150
155
160
cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ser
Leu
Lys
cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
165
170
175
cys
val
Ser
Glu
Arg
Leu
Ala
Ala
Gin
Asp
Thr
Asn
Ser
Ala
180
185
190
Thr
Phe
cys
Asn
Ala
Ser
Asn
Gly
Tyr
Arg
Glu
Lys
Asn
His
Thr
Glu
Страница 5
195
Thr Asn Leu 210
200
205
<210> 9 <211> 188 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL8, PYRl-like protein 8 (PYL8), ABil-binding protein 1 (ABIP1), regulatory components of ABA receptor 3 (RCAR3), At5g53160,
MFH8.10 <400> 9
Met
Glu
Ala
Asn
Gly
Glu
ASn
Leu
Thr
Asn
Pro
Asn
Gin
Glu
Arg
Glu
Phe
Arg
Arg
Hi s
His
Lys
His
Glu
Leu
val
Asp
ASn
Gin
Cys
Ser
Ser
Thr
Leu
val
Lys
His
Asn
Ala
Pro
val
His
val
тгр
ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
ser
Arg
Cys
val
val
Lys
Gly
ASn
Met
Glu
lie Gly
Thr
val
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
Leu
Ser
Arg
val
Gly
100
105
110
Gly Asp
His
Arg
Leu
Lys
Asn
Tyr
Ser
Ser
ser
Leu
His
Pro
115
120
125
Glu
Thr
lie
Glu
Gly
Arg
Gly Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
130
135
140
val
Asp
Val
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
val
145
150
155
160
Glu
Ala
Leu
Lys
Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
Ser
Glu
165
170
175
Arg
Leu
Ala
val
Gin
Asp
Thr
Thr
Glu
ser
Arg
val
180 185
<210> 10 <211> 187 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL9, PYRl-like protein 9 (PYL9), ABil-binding protein 4 (ABIP4), regulatory components of ABA receptor 1 (RCARl), Atlg01360,
F6F3.16
<400> 10
Met Met Asp Gly val Glu Gly Gly Thr Ala Met Tyr Gly Gly Leu Glu
15 10 15
Thr Val Gin Tyr val Arg Thr His His Gin His Leu Cys Arg Glu Asn
20 25 30
Gin Cys Thr Ser Ala Leu Val Lys His lie Lys Ala Pro Leu His Leu
35 40 45
Val Trp Ser Leu val Arg Arg Phe Asp Gin Pro Gin Lys Tyr Lys Pro
50 55 60
Phe val Ser Arg Cys Thr Val lie Gly Asp Pro Glu lie Gly Ser Leu 65 70 75 80
Arg Glu val Asn Val Lys Ser Gly Leu Pro Ala Thr Thr ser Thr Glu
85 90 95
Arg Leu Glu Leu Leu Asp Asp Glu Glu His lie Leu Gly lie Lys lie
Страница 6
100 105 110
lie Gly Gly Asp His Arg Leu Lys Asn Tyr ser Ser lie Leu Thr val
115 120 125
His Pro Glu lie lie Glu Gly Arg Ala Gly Thr Met val lie Glu Ser
130 135 140
Phe Val val Asp val Pro Gin Gly Asn Thr Lys Asp Glu Thr Cys Tyr 145 150 155 160
Phe Val Glu Ala Leu lie Arg cys Asn Leu Lys Ser Leu Ala Asp Val
165 170 175
Ser Glu Arg Leu Ala Ser Gin Asp lie Thr Gin 180 185
<210> 11 <211> 183 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL10,
PYRl-like protein 10 (PYL10), ABil-binding protein 8 (ABIP8), regulatory components of ABA receptor 4 (RCAR4), At4g27920, T13J8.30
<400> 11
Met Asn Gly
Asp
Glu
Thr
Lys
Lys
val
Glu
Ser
Glu
Tyr
Lys
Lys
Hi s
His
Arg
His
Glu
Leu
val
Glu
Ser
Gin
Cys
Ser
Ser
Thr
Leu
val
Lys
His
Lys
Ala
Pro
Leu
His
Leu
Val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp 50
Glu
pro
Gin
Lys
Tyr 55
Lys
Pro
Phe
Ser 60
Arg
cys
Val
val
Gin
Gly
Lys
Lys
Leu
Glu
val
Gly Ser
val
Arg
Glu
val
Asp
Leu
Lys
Ser Gly
Leu
pro
Ala
Thr
Lys
Ser
Thr
Glu
Val
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
His 100
Leu
Gly
lie
Arg 105
Val
Gly
Gly
Asp 110
Hi s
Arg
Leu
Lys
ASn
Tyr
Ser
ser
Thr
Ser
Leu
His
Ser
Glu
Thr
Asp
115
120
125
Gly
Lys
Thr
Gly
Thr
Leu
Ala
Glu
Ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
130
135
140
Glu
Gly ASn
Thr
Lys
Glu
Glu
Thr
cys
Phe
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
145
150
155
160
Gin
Cys
ASn
Leu
ASn
Ser
Leu
Ala
Asp
Val
Thr
Glu
Arg
Leu
Gin
Ala
165
170
175
Glu
Ser
Met
Glu
Lys
Lys
180
<210> 12 <211> 161 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYLll, PYRl-like protein 11 (PYLll), regulatory components of ABA receptor 5 (RCAR5), Bet v I allergen family protein, At5g45860, K15I22.6
<400> 12
Met Glu Thr Ser Gin Lys Tyr His Thr cys Gly ser Thr Leu val Gin
15 10 15
Thr lie Asp Ala Pro Leu Ser Leu Val Trp ser lie Leu Arg Arg Phe
20 25 30
Asp Asn Pro Gin Ala Tyr Lys Gin Phe val Lys Thr Cys Asn Leu Ser
Страница 7
35 40 45
Ser Gly Asp Gly Gly Glu Gly Ser val Arg Glu val Thr Val Val Ser
50 55 60
Gly Leu Pro Ala Glu Phe Ser Arg Glu Arg Leu Asp Glu Leu Asp Asp 65 70 75 80
Glu Ser His val Met Met lie ser lie lie Gly Gly Asp His Arg Leu
85 '90 95
val Asn Tyr Arg ser Lys Thr Met Ala Phe Val Ala Ala Asp Thr Glu
100 105 110
Glu Lys Thr val Val val Glu Ser Tyr val val Asp val Pro Glu Gly
115 120 125
Asn Ser Glu Glu Glu Thr Thr ser Phe Ala Asp Thr lie Val Gly Phe
130 135 140
Asn Leu Lys Ser Leu Ala Lys Leu ser Glu Arg val Ala His Leu Lys 145 150 155 160
Leu
<210> 13 <211> 159 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL12, PYRl-like protein 12 (PYL12), regulatory components of ABA receptor 6 (RCAR6), Bet v I allergen family protein, At5g45870, K15I22.7
<400> 13
Met
Lys
Thr
Ser
Gin
Glu
Gin
His
val
Cys
Gly ser Thr val
Val
Gin
Thr
ASn
Ala
Pro
Leu
Pro
Leu
val
тгр
ser
Leu
Arg
Arg
Phe
Asp
Asn
Pro 35
Lys
Thr
Phe
Lys
His 40
Phe
Val
Lys
Thr
Cys 45
Lys
Leu
Arg
ser Gly Asp
Gly Gly Glu
Gly Ser
Val
Arg
Glu
Val
Thr
val
Val
Ser
Asp
Leu
Pro
Ala
Ser
Phe
Ser
Leu
Glu
Arg
Leu
Asp
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Ser
Hi s
val
Met
val
lie
Ser
lie
Gly Gly Asp His Arg
Leu
val
Asn
Tyr
Gin
Ser
Lys
Thr
Thr
val
Phe
Val
Ala
Ala
Glu
Glu
Glu
100
105
110
Lys
Thr
val
Val
Val
Glu
ser
Tyr
Val
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly Asn
115
120
125
Thr
Glu
Glu
Glu
Thr
Thr
Leu
Phe
Ala
Asp
Thr
lie
val
Gly Cys ASn
130
135
140
Leu
Arg
Ser
Leu
Ala
Lys
Leu
Ser
Glu
Lys
Met
Met
Glu
Leu
Thr
145
150
155
<210> 14 <211> 164 <212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana <220>
<223> thale cress PYR/PYL receptor, abscisic acid receptor PYL13, PYRl-like protein 13 (PYL13), regulatory components of ABA receptor 7 (RCAR7), At4gl8620, F28A21.30
<400> 14
Met Glu Ser ser Lys Gin Lys Arg Cys Arg Ser Ser val val Glu Thr
15 10 15
lie Glu Ala Pro Leu Pro Leu val Trp ser lie Leu Arg Ser Phe Asp
20 25 30
Lys Pro Gin Ala Tyr Gin Arg Phe val Lys Ser Cys Thr Met Arg Ser
Страница 8
Gly Gly Gly Gly Gly
Lys
Gly
Gly
Glu
Gly
Lys
Gly
Ser
val
Arg
Asp
val Thr
Leu
val
Ser Gly
Phe
Pro
Ala
Asp
Phe
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Ser
His
val
Met
Val
val
Ser lie lie Gly
Gly Asn
His
Arg
Leu
val
Asn
Tyr
Lys
Ser
Lys
Thr
Lys
val
val
Ala
100
105
110
Ser Pro
Glu
Asp
Met
Ala
Lys
Lys
Thr
val
val
val
Glu
Ser
Tyr
val
115
120
125
val Asp
Val
Pro
Glu
Gly
Thr
Ser
Glu
Glu
Asp
Thr
Phe
Phe
val
130
135
140
Asp ASn
Arg
Tyr
Asn
Leu
Thr
Ser
Leu
Ala
Lys
Leu
Thr
Lys
145 150 155 160
Lys Met Met Lys
<210> 15 <211> 191 <212> PRT
<213> Brassica oleracea <220>
<223> wild cabbage Streptomyces cyclase/dehydrase family protein, locus tag 40.t00062, GenBank Accession No. ABD65175.1
<400> 15
Met
Pro
Ser
Gin
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Ala
Gin
Ser
Ala
Glu
Phe
Hi s
Thr
Tyr
His
Leu
Gly
Pro
Gly
ser
cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
val
тгр
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
ser
cys
Ser
val
Glu
Asp
Gly
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Ala
val
Asn
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Arg
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Thr
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ala
Gly
Asp
Gly
Ser
Gly
Ala
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 16 <211> 281 <212> PRT
<213> Brassica oleracea <220>
<223> wild cabbage streptomyces cyclase/dehydrase family protein, locus tag 23.t00047, GenBank Accession No. ABD65631.1
<400> 16
Met Pro ser Glu Leu Thr Gin Glu Glu Arg Ser Lys Leu Thr Gin Ser
15 10 15
lie Ser Glu Phe His Thr Tyr His Leu Gly Pro Gly Ser cys Ser ser 20 25 30
Страница 9
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
val
Trp
Ser
Val
val
Arg
Gin
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Glu
Gly
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Met
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Lys
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Arg
Glu
Arg
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Thr
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ala
Gly Asp
Gly
Arg
Gly
ser
Arg
Glu
Thr
Thr
180
185
190
Cys
Arg
Glu
Ser
Phe
His
Leu
Thr
Ala
Phe
Glu
Lys
Gin
Arg
Gin
195
200
205
Thr
Glu
Pro
Thr
val
Tyr
Gin
ASn
Pro
Pro
Tyr
His
Thr
Gly Met
210
215
220
Thr
Pro
Glu
Pro
Arg
Thr
Ser
Thr
Val
Phe
lie
Glu
Leu
Glu
Asp
His
225
230
235
240
Arg
Thr
Leu
pro
Gly
Asn
Leu
Thr
Pro
Thr
Thr
Gl u
Glu
His
Leu
Gin
245
250
255
Arg
Met
Tyr
Gin
Arg
Phe
тгр Gly
Arg
Gin
Leu
Gin
Arg
Pro
Arg
260
265
270
Gin
ser
Phe
Gly
Glu
Arg
Gin
Ser
275 280
<210> 17 <211> 453 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00015766001, GenBank Accession No. CAO63410.1
<400> 17
Met
Gin
Met
Lys
Tyr
Leu
Glu
Gly
Lys
Gin
ASn
Leu
Met
Glu
Glu
Lys
Gly Glu
Lys
Gin
cys
Pro
Met
Asp
Leu
Ala
val
Arg
Glu
Ala
Gin
Phe
Lys
Gly
Ser
Leu
Leu
Asp
Arg
Thr
тгр
Leu
Glu
Gin
Arg
Leu
Hi s
Lys
Leu
Ser
Leu
Gin
Leu
Glu
Thr
Arg
Ser
Lys
Gin
Gin
Pro
His
Pro
Ser
Arg
Met
Gin
Thr
Ala
Gly
Glu
Thr
Ser
Ser
Arg
His
Gly
Pro
Lys
Lys
Glu
Leu
Ser
Cys
Ser
Phe
Pro
val
Phe
Ser
Thr
Arg
ASn
His
ASn
His
Gly
His
Lys
Gin
Thr
Ser
Gin
Phe
His
val
Pro
Arg
Phe
Glu
100
105
110
Tyr
Gin
Glu
Gly
Gly
Arg
Glu
Asn
Pro
Ala
Val
val
Thr
Lys
Leu
115
120
125
Thr
Pro
Phe
Hi s
His
Pro
Lys
Thr
lie
Leu
Phe
pro
Ser
130
135
140
Asn
Tyr
Phe
lie
Phe
Phe
Phe
Leu
Thr
Phe
Asp
Thr
Lys
Lys
Gin
145
150
155
160
Tyr
Pro
Leu
Leu
Phe
Pro
Leu
Pro
ser
Arg
Phe
Leu
pro
lie
Ser
165
170
175
His
Leu
Thr
Gin
Glu
Glu
Lys
Tyr
Lys
Thr
Ser
Ser
His
Phe
180
185
190
Страница 10
ser ser
Pro
Ala
Ser
Leu
Phe
Ala
Ala
Met
Asn
Lys
Ala
Glu
Thr
Ser
195
200
205
ser Met
Ala
Glu
Ala
Glu
Ser
Glu
Asp
ser
Glu
Thr
Thr
Thr
Pro
Thr
210
215
220
Thr His
His
Leu
Thr
Pro
Pro
Gly
Leu
Thr
Gin
Pro
Glu
Phe
Gin
225
230
235
240
Glu Leu
Ala
His
ser
ser
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
val
Gly
Pro
245
250
255
Gly Gin
Cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
val
His
Ala
Pro
Leu
Pro
260
265
270
Thr Val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
275
280
285
His Phe
Lys
ser
Cys
His
val
Glu
Asp
Gly
Phe
Glu
Met
Arg
Val
290
295
300
Gly Cys
Leu
Arg
Asp
val
ASn
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Glu
Thr
305
310
315
320
Ser Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
His
Val
Thr Gly
325
330
335
Phe Ser
lie
Gly
Gly
Glu
His
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
340
345
350
Thr Thr
ASn
His
Gly
Gly
Glu
Trp
Thr
Val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
355
360
365
val val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
370
375
380
Ala Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ser
val
Thr
385
390
395
400
Glu val
ser
Gin
ser
Cys
Asn
туг
Pro
Cys
Gin
Phe
Hi s
Glu
405
410
415
Asn Glu
Asp
Gin
Pro
Glu
Glu
Met
ASn
Leu
Gly
Val
Leu
Thr
Thr
420
425
430
Ser lie
Glu 435
Glu
Gin
Arg
Lys
Lys 440
Lys
Arg
Val
Val
Ala 445
Met
Lys
Asp
Gly Ser
Thr
Ser
Ser
450
<210> 18 <211> 195 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pi not Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_033963, GenBank Accession No. CAN64657.1
<220>
<221> VARIANT <222> (193)...(193) <223> xaa = any amino acid
<400> 18
Met Ala Glu Ala Glu ser Glu
1 5 His His Leu Thr lie Pro Pro 20
Leu Ala His ser lie ser Glu 35
Gin Cys Ser ser Leu Leu Ala
50 55 val Trp ser val val Arg Arg 65 70 Phe lie Lys ser Cys His val 85
Cys Leu Arg Asp val Asn val 100
Thr Glu Arg Leu Asp lie Leu 115
Asp Ser Glu Thr Thr Thr Pro Thr Thr
10 15 Gly Leu Thr Gin Pro Glu Phe Gin Glu
25 30 Phe His Thr Tyr Gin val Gly Pro Gly 40 45 Gin Arg Val His Ala Pro Leu Pro Thr 60
Phe Asp Lys Pro Gin Thr Tyr Lys His 75 80 Glu Asp Gly Phe Glu Met Arg Val Gly
90 95 lie ser Gly Leu Pro Ala Glu Thr Ser
105 110 Asp Asp Glu Arg His val Thr Gly Phe 120 125
Страница 11
Ser lie lie Gly Gly Glu His Arg Leu Arg Asn Tyr Arg Ser val Thr
130 135 140
Thr val His Glu Tyr Gin Asn His Gly Gly Glu lie Trp Thr val Val 145 150 155 160
Leu Glu Ser Tyr val Val Asp Met Pro Glu Gly Asn Thr Glu Glu Asp
165 170 175
Thr Arg Leu Phe Ala Asp Thr Val val Lys Leu Asn Leu Ser Glu Ala 180 185 190
xaa Arg Arg 195
<210> 19 <211> 217 <212> PRT
<213> Medicago truncatula <220>
<223> barrel medic unknown protein, clone MTYFD_FE_FF_FGlG-N-24, GenBank Accession No. ACJ85026.1
<400> 19
Met
Glu
Lys
Ala
Glu
Ser
Ser
Thr
Ala
Ser
Thr
Ser
Asp
Gin
Asp
Ser
Asp
Glu
Asn
Hi s
Arg
Thr
Gin
His
Hi s
Leu
Thr
Leu
Pro
Ser
Gly
Leu
Arg
Gin
His
Glu
Phe
Asp
Ser
Leu
Pro
Phe
lie
Asn
Ser
His
His
Thr
Tyr
Leu
Gly
Pro
Asn
Gin
cys
Ser
Thr
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Gin
Thr
val
тгр
Ser
val
val
Arg
Ser
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Tyr
Lys
His
Lys
Ser
Cys
ser
Leu
Lys
Glu
Gly
Phe
Gin
Met
Lys
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
Asn
val
Ser
100
105
110
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
val
Leu
Asp
Asp
115
120
125
Glu
Arg
Arg
val
Thr Gly
Phe
Ser
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
130
135
140
Lys
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
Hi s
Gly
Phe
Gly
Asp
Gly Asp
145
150
155
160
Asn
Gly
Gly
Glu
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
165
170
175
val
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
Asp
Thr
180
185
190
val
val
Lys
195
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys 200
Leu
Ala
Ser
val
Thr 205
Glu
Gly
Lys
Asn
Arg
Asp
Gly
Asp Gly
Lys
Ser
His
210 215
<210> 20
<211> 212
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, conserved
hypothetical protein Osl0g0573400, GenBank Accession No. NP_00106570.1
<400> 20
Met Glu Gin Gin Glu Glu Val Pro Pro Pro Pro Ala Gly Leu Gly Leu
15 10 15
Thr Ala Glu Glu туг Ala Gin val Arg Ala Thr val Glu Ala His His
20 25 30
Arg Tyr Ala val Gly Pro Gly Gin Cys Ser ser Leu Leu Ala Gin Arg
Страница 12
His
Ala
Pro
cys
Pro
Gin
val
Asp
Pro
His
His
Arg
Glu
val
Ser
100
Arg
Leu
Asp
Leu
115
Thr Gly
Gly
Glu
130
Ser
Gin
Leu
Asp
145
Asp
val
Pro
Asp
Thr
val
Arg
180
ASn
Ala
Asn
Ala
195
Ala
Ala
Ala
Glu
210
Pro
Ala
Ala
val
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Asp
Asp
Asn
Gly
val
lie
Ser
Gly
Leu
Asp
Asp
Ala
120
His
Arg
Leu
Arg
135
Glu
cys
Thr
150
Gly
ASn
Thr
Glu
165
Leu
ASn
Leu
Gin
Ala
Ala
Ala
Ala
200
Trp
Ala
val
val
Arg
Ser
Cys
Asn
Asp
Leu
Arg
Leu
Pro
Ala
Ser
105
His
Arg
Val
Phe
Asn
Tyr
Arg
Ser
140
Leu
val
Leu
Glu
155
Asp
Asp
Thr
Arg
170
Lys
Leu
Lys
Ser
185
Ala
Ala
pro
Pro
Arg
Arg
Phe
Asp
val
Leu
Arg
Pro
Pro
Gly
Arg
Leu
Thr
Ser
Thr
Glu
110
Gly
Phe
Thr
125
val
Thr
Thr
val
Ser
Tyr
lie
val
160
Leu
Phe
Ala
Asp
175
val
Ser
Glu
Ala
190
Pro
Pro
Pro
Pro
205
<210> 21 <211> 212 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize cyclase/dehydrase family protein, clone 306819, GenBank Accession No. ACG40002.1
<400> 21
Met
Asp
Gin
Gin
Gly
Ala
Gly
Gly
Asp
Ala
Glu
val
Pro
Ala
Gly
Leu
Gly
Leu
Thr
Ala
Ala
Glu
Tyr
Glu
Gin
Leu
Arg
Ser
Thr
val
Asp
Ala
His
His
Arg
Tyr
Ala
Val
Gly
Glu
Gly
Gin
Cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Ala
val
Trp
Ala
Val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
cys
Pro
Gin
val
Tyr
Lys
His
Phe
Arg
ser
Cys
Ala
Leu
Arg
Pro
Asp
Pro
Glu
Ala
Gly
Asp
Ala
Leu
Cys
Pro
Gly
Arg
Leu
Arg
Glu
val
Ser
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
100
105
110
Leu
Asp
Leu
Leu
Asp
Asp
Ala
Ala
Arg
val
Phe
Gly
Phe
Ser
Thr
115
120
125
Gly Gly
Glu
His
Arg
Leu
Arg
ASn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
Ser
130
135
140
Glu
Leu
Ala
Val
Pro
Ala
cys
Thr
Val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
Val
145
150
155
160
Val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
165
170
175
Asp
Thr
val
Arg
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Lys
Ser
val
Ala
Glu
180
185
190
Ala
ASn
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala
Ala
Thr
Thr
Asn
Ser
val
Leu
Leu
Pro
195 200 205
Arg Pro Ala Glu 210
<210> 22 <211> 212 <212> PRT
Страница 13
<213> Zea mays <220>
<223> maize cyclase/dehydrase family protein, clone 241996, GenBank Accession No. ACG34473.1
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)...(11)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 22
Met
Asp
Gin
Gin
Gly Ala
Gly Gly
Asp
Ala
xaa
val
Pro
Ala
Gly
Leu
Gly
Leu
Thr
Ala
Ala
Glu
Tyr Glu
Gin
Leu
Arg
Ser
Thr
Val
Asp
Ala
Hi s
His
Arg
Tyr
Ala
Val
Gly Glu
Gly
Gin
cys
Ser
ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro Glu
Ala
val
тгр
Ala
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Cys
Pro
Gin
val
Tyr Lys
Hi s
Phe
lie
Arg
Ser
Cys
Ala
Leu
Arg
Pro
Asp
Pro
Glu
Ala
Gly Asp
Ala
Leu
Cys
Pro
Gly
Arg
Leu
Arg
Glu
val
Ser
val
Ser
Gly Leu
Pro
Ala
ser
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
100
105
110
Leu
Asp
Leu
Leu
Asp
Asp
Ala Ala
Arg
val
Phe
Gly
Phe
Ser
Thr
115
120
125
Gly Gly
Glu
His
Arg
Leu
Arg Asn
Tyr
Arg
ser
val
Thr
Thr
val
Ser
130
135
140
Glu
Leu
Ala
Asp
Pro
Ala
lie Cys
Thr
Val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
145
150
155
160
Val
Asp
val
РГО ASP Gly
Asn Thr
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
165
170
175
Asp
Thr
Val
lie
Arg
Leu
Asn Leu
Gin
Lys
Leu
Lys
Ser
val
Thr
Glu
180
185
190
Ala
ASn
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala Ala
Thr
Thr
Asn
Ser
val
Leu
Leu
Pro
195
200
205
Arg
Pro
Ala
Glu
210
<210> 23 <211> 233 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00032173001, GenBank Accession No. CAO43790.1
<400> 23
Met Asp Pro His His His His Gly Leu Thr Glu Glu Glu Phe Arg Ala
15 10 15
Leu Glu Pro lie lie Gin Asn Tyr His Thr Phe Glu Pro Ser Pro Asn
20 25 30
Thr Cys Thr Ser Leu lie Thr Gin Lys lie Asp Ala Pro Ala Gin Val
35 40 45
val Trp Pro Phe val Arg Ser Phe Glu Asn Pro Gin Lys Tyr Lys His
50 55 60
Phe lie Lys Asp Cys Thr Met Arg Gly Asp Gly Gly val Gly Ser lie 65 70 75 80
Arg Glu Val Thr val val Ser Gly Leu Pro Ala Ser Thr Ser Thr Glu
85 90 95
Arg Leu Glu lie Leu Asp Asp Glu Lys His lie Leu Ser Phe Arg val
100 105 110
val Gly Gly Glu His Arg Leu Asn Asn Tyr Arg ser val Thr ser val 115 120 125
Страница 14
ASn Asp
Phe
ser
Lys
Glu
Gly Lys
Asp
Tyr Thr
val
Leu
Glu
ser
130
135
140
Tyr lie
val
Asp
Pro
Glu Gly Asn Thr Gly Glu
Asp
Thr
Lys
Met
145
150
155
160
Phe Val
Asp
Thr
val
val
Lys Leu
Asn
Leu Gin
Lys
Leu
Ala
val
val
165
170
175
Ala He
Thr
Ser
Leu
His
Glu Asn
Glu
Glu lie
Ala
Asp
Asn
Glu
Gly
180
185
190
Pro Ser
Arg
Glu
Ser
Leu Gin
Ser
Glu Thr
Glu
Ser
Ala
Glu
Arg
195
200
205
Gly Asp Glu Arg Arg
Asp
Gly Asp Gly
Pro Ser
Lys
Ala
Cys
Asn
Arg
210
215
220
Asn Glu
Trp
Hi s
cys
Thr
Thr Lys
Glu
225
230
<210> 24
<211> 207
<212> PRT
<213> Oryza
sativa
<220>
<223> rice Japonica
Group, cultivar
Ni pponbare,
Bet
V I
al1ergen-1i ke
protein, clone I
'0495C02.
.29,
GenBank
Accessi on
NO.
BAD25659.1
<400> 24
Met Glu
Pro
His
Met
Glu
Arg Ala
Leu
Arg Glu
Ala
val
Ala
Ser
Glu
Ala Glu
Arg
Arg
Glu
Leu
Glu Gly
Val
val Arg
Ala
His
His
Thr
Phe
Pro Ala
Ala
Glu
Arg
Ala Ala Gly
Pro Gly Arg
Arg
Pro
Thr
Cys
Thr
Ser Leu
Val
Ala
Gin
Arg
val Asp
Ala
Pro Leu
Ala
Ala
val
тгр
Pro
lie val
Arg
Gly
Phe
Ala
Asn Pro
Gin
Arg Tyr
Lys
His
Phe
lie
Lys
Ser Cys
Glu
Leu
Ala
Ala Gly Asp
Gly Ala Thr
val
Gly
Ser
val
Arg
Glu val
Ala
Val
val
Ser Gly Leu
Pro
Ala Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
100
105
110
Leu Glu
Leu
Asp
Asp
Asp Arg
His
val Leu
ser
Phe
Arg
val
Val
115
120
125
Gly Gly
Asp
His
Arg
Leu
Arg Asn
Tyr
Arg Ser
val
Thr
Ser
val
Thr
130
135
140
Glu Phe
Ser
Ser
Pro
Ser
Ser pro
Pro
Arg Pro
Tyr
Cys
val
val
Val
145
150
155
160
Glu Ser
Tyr
Val
val
Asp
val Pro
Glu
Gly Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
165
170
175
Arg Met
Phe
Thr
Asp
Thr
val val
Lys
Leu Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
180
185
190
Ala val
Ala
Thr
Ser
Ser
Ser Pro
Pro
Ala Ala
Gly
Asn
His
His
195
200
205
<210> 25 <211> 210 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein Osl_06433, GenBank Accession No. EAY85077.1
<400> 25
Met Glu Pro His Met Glu Arg Ala Leu Arg Glu Ala val Ala Ser Glu
15 10 15
Ala Glu Arg Arg Glu Leu Glu Gly val val Arg Ala His His Thr Phe
Страница 15
20 25 30
Pro
Ala
Ala
Glu
Arg
Ala Ala
Gly Pro Gly
Arg
Arg
Pro
Thr
cys
Thr
ser
Leu
val
Ala
Gin
Arg Val
Asp
Ala
Pro
Leu
Ala
Ala
val
Trp
Pro
lie
val
Arg
Gly
Phe
Ala Asn
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
Ser
Cys
Glu
Leu
Ala Ala Gly
Asp Gly Ala
Thr
Val
Gly
ser
val
Arg
Glu
val
Ala
val
Val
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
100
105
110
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp Asp
Arg
His
val
Leu
Ser
Phe
Arg
Val
Val
115
120
125
Gly Gly
Asp
His
Arg
Leu Arg
ASn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
Thr
130
135
140
Glu
Phe
Ser
Ser
Pro
Ser Ser
Pro
Pro
Ser
Pro
Pro
Arg
Pro
Tyr
cys
145
150
155
160
val
val
val
Glu
Ser
Tyr Val
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
Glu
165
170
175
Glu
Asp
Thr
Arg
Met
Phe Thr
Asp
Thr
Val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
180
185
190
Lys
Leu
Ala
Ala
val
Ala Thr
ser
Ser
Ser
Pro
Pro
Ala
Ala
Gly Asn
195
200
205
His His 210
<210> 26 <211> 200 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize strain B73 unknown protein, clone ZM"BFb015lH07, GenBank Accession No. ACF82013.1
<400> 26
Met
pro
Tyr
Thr
Ala
Pro
Arg
Pro
ser
Pro
Gin
Gin His
Ser
Arg
val
Leu
ser
Gly
Gly
Gly
Ala
Lys
Ala
Ala
Ser
His
Gly Ala
Ser
Cys
Ala
Ala
val
Pro
Ala
Glu
val
Ala
Arg
Hi s
Hi s
Glu
His Ala
Ala
Arg
Ala
Gly Gin
cys
Cys
Ser
Ala
val
val
Gin
Ala
lie
Ala Ala
Pro
val
Gly
Ala
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Arg
Pro Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
Arg
Ser
cys
Arg
Leu
val
Gly
Gly
Gly Asp
val
Ala
val
Gly Ser
val
Arg
Glu
val
Arg
val
val
Ser
Gly
Leu Pro
Ala
Thr
Ser
100
105
110
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg Arg
val
Leu
Ser
115
120
125
Phe
Arg 130
val
val
Gly
Gly
Glu 135
His
Arg
Leu
Ala
Asn Tyr 140
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Glu
Ala
Gly
Ala
Gly
Ala
Gly
Thr Gly
Thr
val
val
145
150
155
160
Val
Glu
ser
Tyr
Val
Val
Asp
val
Pro
Hi s
Gly
Asn Thr
Ala
Asp
Glu
165
170
175
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
Val
Arg
Cys
Asn Leu
Gin
Ser
Leu
180
185
190
Ala
Arg
Thr
Ala
Glu
Arg
Leu
Ala
195 200
<210> 27 <211> 215 <212> PRT
Страница 16
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00037390001, GenBank Accession No. CA048777.1
<400> 27
Met
pro
Ser
ASn
Pro
Pro
Lys
ser
Ser
Leu
val
val
His
Arg
Asn
Ser
Pro
Asn
Ser 20
lie
Thr
Thr
Ala
Thr 25
Thr
Ala
Ser
Ala
Ala 30
Ala
Asn
Asn
His
Asn
Thr
Ser
Thr
Met
Pro
Pro
His
Lys
Gin
val
Pro
Asp
Ala
val
Ser
Arg
Hi s
His
Thr
His
val
val
Gly
Pro
Asn
Gin
cys
cys
Ser
Ala
Val
val
Gin
Gin
Ala
Ala
Pro
val
Ser
Thr
val
тгр
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
ASn
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Ser
Cys
Hi s
val
val
val
Gly
Asp Gly
Asp
val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
100
105
110
His
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Asn
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
115
120
125
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Hi s
val
Leu
Ser
Phe
ser
val
Gly Gly
130
135
140
Asp
His
Arg
Leu
Ser
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Pro
Ser
145
150
155
160
Pro
ser
Ser
Thr
Gly
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
165
170
175
pro
Pro
Gly
Asn
Thr
Lys
Glu
Asp
Thr
Cys
val
Phe
val
Asp
Thr
180
185
190
val
Arg
Cys
Asn
Leu
Gin
ser
Leu
Ala
Gin
Ala
Glu
Asn
Ala
Ala
195
200
205
Gly Cys
Lys
Arg
Ser
Ser
ser
210 215
<210> 28 <211> 213 <212> PRT
<213> Nicotiana tabacum <220>
<223> tobacco hypothetical protein, gene cl7, GenBank Accession NO. CAI84653.1
<400> 28
Met
Pro
Pro
Ser
Ser
Pro
ASP
Ser
Ser
val
Leu
Leu
Gin
Arg
lie
ser
ser
Asn
Thr
Thr
Pro
Asp
Phe
Ala
cys
Lys
Gin
Ser
Gin
Gin
Leu
Gin
Arg
Arg
Thr
Met
Pro
Pro
cys
Thr
Thr
Gin
val
Pro
Asp
Ser
val
val
Arg
Phe
His
Thr
His
Pro
val
Gly
Pro
Asn
Gin
Cys
Cys
ser
Ala
Val
Gin
Arg
Ser
Ala
Pro
val
ser
Thr
val
тгр
ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
ASn
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
ser
cys
Hi s
val
val
Gly
Asp
Gly Asp
val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
Arg
100
105
110
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
115
120
125
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
His
Val
Ser
Phe
Ser
val
val
Gly
Gly Asp
130
135
140
His
Arg
Leu
Ala
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Pro
Glu
Pro
145
150
155
160
Ser Gly Asp
Gly
Thr
Thr
val
val
Glu
ser
Tyr
val
val
Asp
Val
Страница 17
165 170 175
Pro Pro Gly Asn Thr Arg Asp Glu Thr Cys val Phe Val Asp Thr lie
180 185 190
val Lys Cys Asn Leu Thr Ser Leu ser Gin lie Ala val Asn val Asn
195 200 205
Arg Arg Lys Asp Ser 210
<210> 29
<211> 208
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein Osl_04285, GenBank Accession No. EAY76350.1
<400> 29
Met
Pro
Tyr
Ala
Ala
val
Arg Pro
Ser
Pro
Pro
Pro
Gin
Leu
Ser
Arg
Pro
lie
Gly
Ser Gly
Ala Gly Gly
Gly
Lys
Ala
Cys
Pro
Ala
Val
Pro
cys
Glu
val
Ala
Arg
Tyr
His Glu
Hi s
Ala
val
Gly Ala
Gly
Gin
Cys
cys
Ser
Thr
val
val
Gin
Ala lie
Ala
Ala
Pro
Ala
Asp
Ala
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp Arg
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Lys
Phe
Lys
Ser
Cys
Arg
Leu
val
Asp Gly
Asp
Gly
Gly
Glu
val
Gly
Ser
Val
Arg
Glu
val
Arg
val
val
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Ser
ser
Arg
Glu
100
105
110
Arg
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Asp Asp
Arg
Arg
val
Leu
ser
Phe
Arg
115
120
125
val
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu Ala
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
130
135
140
His
Glu
Ala
Ala
Ala
pro
Ala Met
Ala
Val
val
Val
Glu
Ser
Tyr
val
145
150
155
160
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly Asn Thr
Trp
Glu
Gl U
Thr
Arg
Val
Phe
val
165
170
175
Asp
Thr
val
Arg
cys
Asn Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Arg
Thr
val
Glu
180
185
190
Arg
Leu
Ala
Pro
Glu
Ala
Pro Arg
Ala
Asn
Gly
Ser
Asp
Hi s
Ala
195 200 205
<210> 30 <211> 208 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, Bet v I
allergen-like protein, gene Bl088c09.ll, clone B1088C09, GenBank Accession No. BAB68102.1
<400> 30
Met Pro Tyr Ala Ala val Arg Pro ser Pro Pro Pro Gin Leu Ser Arg
15 10 15
Pro He Gly ser Gly Ala Gly Gly Gly Lys Ala cys Pro Ala val Pro
20 25 30
Cys Glu Val Ala Arg Tyr His Glu His Ala val Gly Ala Gly Gin Cys
35 40 45
Phe Ser Thr val val Gin Ala lie Ala Ala Pro Ala Asp Ala val Trp
50 55 60
Ser val val Arg Arg Phe Asp Arg Pro Gin Ala Tyr Lys Lys Phe lie 65 70 75 80
Страница 18
Lys
Ser
cys
Arg
Leu
Val
Asp
Gly
Asp
Gly Gly Glu val
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Arg
Val
val
Ser
Gly
Leu
Pro Ala Thr ser
Ser
Arg
Glu
100
105
110
Arg
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Asp
Asp
Arg
Arg Val Leu Ser
Phe
Arg
115
120
125
val
Gly Gly
Glu
His
Arg
Leu
Ala
Asn
Tyr Arg Ser val
Thr
Thr
val
130
135
140
Hi s
Glu
Ala
Ala
Ala
Pro
Ala
Met
Ala
Val val val Glu
Ser
Tyr
val
145
150
155
160
val
Asp
val
Pro
Pro Gly Asn
Thr
Trp
Glu Glu Thr Arg
val
Phe
val
165
170
175
Asp
Thr
val
Arg
cys
Asn
Leu
Gin
Ser Leu Ala Arg
Thr
val
Glu
180
185
190
Arg
Leu
Ala
Pro
Glu
Ala
Pro
Arg
Ala
Asn Gly ser lie Asp
His
Ala
195
200
205
<210> 31 <211> 213 <212> PRT
<213> Picea sitchensis <220>
<223> Sitka spruce cultivar FB3-425, unknown protein,
clone WS0276_P02, GenBank Accession NO. ABK22940.1
<400> 31
Met
Asp
Ala
Gly
Phe
Asp
Gin
Leu
Ser
Phe
Arg
Leu
ser
Gly
Ala
Ser
Lys
Gin 20
Thr
Lys
Thr
Gly 25
Ala
val
Gin
туг
Leu 30
Lys
Gly
Glu
Glu
Gly 35
Tyr
Gly
Glu
Trp
Leu 40
Lys
Glu
Val
Met
Gly 45
Arg
Tyr
His
Tyr
Hi s 50
Ser
Hi s
Asp
Gly
Ala 55
Arg
Glu
cys
Arg
cys 60
Ser
ser
val
Val
val
Gin
Gin
val
Glu
Ala
Pro
val
Ser
val
Val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
val
Tyr
Lys
Hi s
Phe
val
Ser
ASn
cys
Phe
Met
Arg
Gly
Asp 100
Leu
Lys
val
Gly
cys 105
Leu
Arg
Glu
val
Arg 110
val
Val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
115
120
125
Glu
Glu
Arg
His
lie
Leu
Ser
Phe
Ser
Val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
130
135
140
Leu
ASn
Asn
Tyr
Arg
Ser
Thr
Thr
Leu
His
Glu
Thr
Leu
Asn
145
150
155
160
Gly
LyS
Pro
Gly
Thr
val
Glu
Ser
Tyr
val
Leu
Asp
val
Pro
165
170
175
Hi s
Gly
Asn
Thr
Lys
Glu
Glu
Thr
cys
Leu
Phe
val
Asp
Thr
Val
180
185
190
Lys
cys
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
His
Val
Ser
Asn
His
Leu
Asn
Ser
195
200
205
Thr
His
Arg
Cys
Leu
210
<210> 32 <211> 207 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein Os06g0562200, Bet v I allergen family protein, GenBank Accession No. NP_001057874.1
Страница 19
<400> 32
Met
Glu
Ala
His
val
Glu
Arg
Ala
Leu
Arg
Glu
Gly
Leu
Thr
Glu
Glu
Glu
Arg
Ala
Ala
Leu
Glu
Pro
Ala
val
Met
Ala
His
His
Thr
Phe
Pro
Pro
ser
Thr
Thr
Thr
Ala
Thr
Thr
Ala
Ala
Ala
Thr
cys
Thr
Ser
Leu
val
Thr
Gin
Arg
val
Ala
Ala
Pro
val
Arg
Ala
val
тгр
pro
val
Arg
Ser
Phe
Gly
Asn
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Hi s
Phe
val
Arg
Thr
cys
Ala
Leu
Ala
Ala
Gly Asp
Gly Ala
ser
val
Gly
ser
val
Arg
Glu
val
Thr
Val
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
100
105
110
Met
Leu
Asp
Asp
Asp
Arg
His
lie
Ser
Phe
Arg
val
Val
Gly
Gly
115
120
125
Gin
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
Thr
Glu
Phe
130
135
140
Gin
Pro
Pro
Ala
Ala Gly
Pro Gly
Pro
Ala
Pro
Pro
Tyr
Cys
val
val
145
150
155
160
val
Glu
Ser
Tyr
Val
val
Asp
Val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Ala
Glu
Asp
165
170
175
Thr
Arg
Met
Phe
Thr
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Met
Leu
180
185
190
Ala
Ala
val
Ala
Glu
Asp
ser
Ser
Ser
Ala
Ser
Arg
Arg
Arg
Asp
195 200 205
<210> 33
<211> 216
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical
protein Os05g0473000, Streptomyces cyclase/dehydrase family protein, GenBank Accession No. NP_001055819.1
<400> 33
Met
Pro
Tyr
Thr
Ala
Pro
Arg
Pro
Ser
Pro
Pro
Gin
His
Ser
Arg
Gly Gly
cys
Gly
Gly
Gly
Gly
val
Leu
Lys
Ala
Ala
Gly
Ala
Ala
Gly
His
Ala
Ala
Ser
Cys
val
Ala
val
Pro
Ala
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
His
Ala
Ala
Gly
val
Gly
Gin
cys
cys
Ser
Ala
val
val
Gin
Ala
Ala
Ala
Pro
val
Asp
Ala
Val
тгр
ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Arg
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Arg
ser
cys
Arg
Leu
Leu
Asp
Gly Asp
Gly
Asp
Gly
Gly
Ala
val
Ala
Val
Gly
ser
Val
Arg
Glu
val
100
105
110
Arg
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Ser
ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
115
120
125
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Leu
Ser
Phe
Arg
val
Val
Gly
Gly
130
135
140
Glu
His
Arg
Leu
Ser
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Glu
Thr
145
150
155
160
Ala
Ala
Gly
Ala
Ala
Ala
Ala
val
val
val
Glu
ser
Tyr
val
val
Asp
165
170
175
val
Pro
His
Gly
ASn
Thr
Ala
Asp
Glu
Thr
Arg
Met
Phe
val
Asp
Thr
180
185
190
val
Arg
cys
ASn
Leu
Gin
ser
Leu
Ala
Arg
Thr
Ala
Glu
Gin
Leu
195
200
205
Ala
Leu
Ala
Ala
Pro
Arg
Ala
Ala
210 215
Страница 20
<210> 34 <211> 212 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00029365001, GenBank Accession No. CA041436.1
<400> 34
Met
Pro
Ser
Ser
Leu
Gin
Leu
His
Arg
Asn
ASn
lie
Asp
Pro
Thr
Thr
val
Ala
val
Ala
Ala
Thr
Ala
Ala
val
Asn
cys
His
Lys
Gin
Ser
Arg
Thr
Pro
Leu
Arg
cys
Ala
Thr
Pro
val
Pro
Asp
Ala
val
Ala
ser
Tyr
His
Ala
Hi s
Ala
val
Gly
Pro
His
Gin
Cys
Cys
Ser
Met
val
val
Gin
Thr
Thr
Ala
Ala
Ala
Leu
Pro
Thr
val
тгр
ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Asn
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
Leu
Lys
ser
cys
Hi s
val
Phe
Gly
Asp
Gly
Asp
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
His
val
val
100
105
110
ser Gly
Leu
Pro
Ala
Glu
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
115
120
125
Asp
Glu
Arg
His
val
Leu
Ser
Phe
Ser
val
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
130
135
140
Leu
Cys
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Pro
Ser
Pro
Thr Gly
145
150
155
160
Thr Gly
Thr
val
Val
val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
Pro
Pro Gly
165
170
175
Asn
Thr
Lys
Glu
Asp
Thr
Cys
val
Phe
val
Asp
Thr
val
Lys
Cys
180
185
190
Asn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Gin
Met
Ser
Glu
Lys
Leu
Thr
ASn
ASn
ASn
195 200 205
Arg Asn Ser ser 210
<210> 35 <211> 218 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize cyclase/dehydrase family protein, clone 1678999, GenBank Accession No. ACG30334.1
<400> 35
Met Pro Cys Leu Gin Ala Ser Ser Pro Gly Ser Met Pro Tyr Gin His
15 10 15
His Gly Arg Gly val Gly Cys Ala Ala Glu Ala Gly Ala Ala Val Gly
20 25 30
Ala Ser Ala Gly Thr Gly Thr Arg Cys Gly Ala His Asp Gly Glu Val
35 40 45
Pro Ala Glu Ala Ala Arg His His Glu His Ala Ala Pro Gly Pro Gly
50 55 60
Arg cys Cys ser Ala val val Gin Arg val Ala Ala Pro Ala Glu Ala 65 70 75 80
val Trp ser val val Arg Arg Phe Asp Gin Pro Gin Ala Tyr Lys Arg
85 90 95
Phe val Arg Ser Cys Ala Leu Leu Ala Gly Asp Gly Gly val Gly Thr
100 105 110
Leu Arg Glu val Arg val val Ser Gly Leu Pro Ala Ala Ser Ser Arg 115 120 125
Страница 21
Glu
Arg
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Asp
Glu
Ser
His
val
Leu
Ser
Phe
Arg
130
135
140
val
val
Gly Gly Glu
His
Arg
Leu
Gin
Asn
Tyr
Leu
Ser
val
Thr
Thr
145
150
155
160
Val
His
Pro
Ser
Pro
Ala
Ala
Pro
Asp
Ala
Ala
Thr
val
val
val
Glu
165
170
175
Ser
Tyr
val
val
Asp
Val
Pro
Pro Gly Asn Thr
Pro
Glu
Asp
Thr
Arg
180
185
190
val
Phe
val
Asp
Thr
val
Lys
cys
Asn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Thr
195
200
205
Thr
Ala
Glu
Lys
Leu
Ala
Leu
Ala
Ala
val
210 215
<210> 36 <211> 179 <212> PRT
<213> Physcomitrel1 a patens <220>
<223> Physcomitrella patens subsp. patens moss, ecotype Gransden 2004, hypothetical protein, predicted protein, locus tag PHYPADRAFT_222359, GenBank Accession No. XP_001778048.1
<400> 36
Met
Gin
Thr
Lys
Gly
Arg
Gin
Ala
Asp
Phe
Gin Thr
Leu
Leu
Glu
Gly
Gin
Gin
Asp
Leu
Cys
Arg
Phe
His
Arg
His Glu
Leu
Gin
Pro
His
Gin
Cys
Gly
Ser
Leu
Leu
Gin
Leu
Lys Ala
Pro
val
Glu
Thr
val
Trp
Ser
val
Ala
Arg
Ser
Phe
Asp
Lys
Pro Gin
val
Tyr
Lys
Arg
Phe
Gin
Thr
cys
Glu
Glu
Gly Asp Gly Gly
val
Gly Ser
Arg
Glu
val
Arg
Leu
val
Ser
Ser
Pro Ala
Thr
Ser
Ser
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu
His lie
Ser
Phe
Arg
100
105
110
val
Leu
Gly 115
Gly
Gly
His
Arg
Leu 120
Gin
Asn
Tyr Trp
ser 125
val
Thr
Ser
Leu
His
Ser
Hi s
Glu
Asp
Gly
Gin
Met Gly Thr
Leu
val
Leu
Glu
130
135
140
Ser
Tyr
val
val
Asp
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr Arg
Glu
Glu
Thr
His
145
150
155
160
Met
Phe
val
Asp
Thr
val
val
Arg
Cys
Asn
Leu Lys
Ala
Leu
Ala
Gin
165
170
175
val ser Glu
<210> 37 <211> 229 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein osl_11160, GenBank Accession No. EAY89631.1
<400> 37
Met Pro Cys lie Pro Ala Ser Ser Pro Gly lie Pro His Gin His Gin
15 10 15
His Gin His His Arg Ala Leu Ala Gly Val Gly Met Ala val Gly Cys
20 25 30
Ala Ala Glu Ala Ala val Ala Ala Ala Gly val Ala Gly Thr Arg Cys
35 40 45
Gly Ala His Asp Gly Glu Val Pro Met Glu val Ala Arg His His Glu 50 55 60
Страница 22
His
Ala
Glu
Pro
Gly
Ser
Gly Arg cys Cys
Ser
Ala
val
Val
Gin His
val
Ala
Ala
Pro
Ala
Pro
Ala
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe Asp
Gin
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Ser
cys
Ala
Leu
Leu Ala
100
105
110
Gly Asp Gly
Gly
val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
Arg
val
val
Ser Gly
115
120
125
Leu
Pro
Ala
Ala
ser
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp Glu
130
135
140
Ser
His
val
Leu
ser
Phe
Arg
val
Val
Gly Gly Glu
His
Arg
Leu Lys
145
150
155
160
Asn
Tyr
Leu
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Pro
Ser
Pro
Ser
Ala
Pro Thr
165
170
175
Ala
Ala
Thr
Val
val
val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Pro Gly
180
185
190
Asn
Thr
Pro
Glu
Asp
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
val
Lys cys
195
200
205
Asn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Lys
Thr
Ala
Glu
Lys
Leu
Ala Ala Gly Ala
210
215
220
Arg
Ala
Ala
Gly
Ser
225
<210> 38 <211> 229 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical
protein Os03g0297600, Streptomyces cyclase/dehydrase family protein, GenBank Accession No. NP_001049838.1
<400> 38
Met
Pro
cys
Pro
Ala
Ser
ser
Pro
Gly
pro
His
Gin
His
Gin
His
Gin
His
His
Arg
Ala
Leu
Ala
Gly
val
Gly
Met
Ala
val
Gly
cys
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala
val
Ala
Ala
Ala
Gly
val
Ala
Gly
Thr
Arg
cys
Gly Ala
Hi s
Asp
Gly
Glu
val
Pro
Met
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
His
Ala
Glu
Pro
Gly
ser
Gly Arg
Cys
cys
Ser
Ala
Val
val
Gin
His
val
Ala
Ala
Pro
Ala
Ala
Ala
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Ala
туг
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Ser
cys
Ala
Leu
Leu
Ala
100
105
110
Gly Asp
Gly
Gly
val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
Arg
Val
val
ser
Gly
115
120
125
Leu
Pro
Ala
Ala
ser
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
130
135
140
Ser
His
Val
Leu
ser
Phe
Arg
val
val
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Lys
145
150
155
160
ASn
Tyr
Leu
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Pro
Ser
Pro
Ser
Ala
Pro
Thr
165
170
175
Ala
Ala
Thr
Val
val
val
Glu
ser
Tyr
Val
val
Asp
Val
Pro
pro
Gly
180
185
190
Asn
Thr
Pro
Glu
Asp
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
Val
Lys
Cys
195
200
205
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Lys
Thr
Ala
Glu
Lys
Leu
Ala
Ala
Gly
Ala
210 215 220
Arg Ala Ala Gly Ser 225
<210> 39
Страница 23
<211> 205 <212> PRT
<213> Medicago truncatula <220>
<223> barrel medic unknown protein, clone MTYFP_FQ_FR_FS1G-H-19, GenBank Accession No. ACJ85898.1
<400> 39
Met
Pro
Ser
Pro
val
Gin
Phe
Gin
Arg
Phe
Asp
Ser
Asn
Thr
Ala
Thr
ASn
Gly
val
Asn
Cys
Pro
Lys
Gin
Gin
Ala
Cys
Arg
Tyr
Ala
Leu
ser
Ser
Leu
Lys
Pro
Thr
val
Ser
val
Pro
Glu
Thr
val
val
Asp
His
His
Met
His
val
val
Gly
Gin
Asn
Gin
Cys
Tyr
Ser
val
val
Gin
Thr
Asn
Ala
Ser
val
ser
Thr
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Tyr
Pro
Gin
Gly Tyr
Lys
His
Phe
Val
Lys
Ser
cys
Asn
val
val
Ala
ser
Gly Asp Gly lie
Arg
val
Gly
Ala
Leu
Arg
Glu
val
Arg
100
105
110
Leu
Val
Ser
Gly
Leu
pro
Ala
Val
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
115
120
125
Leu
Asp
Glu
Glu
Arg
His
val
lie
ser
Phe
ser
val
val
Gly
Gly val
130
135
140
Hi s
Arg
Cys
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Gly
Asp Gly
145
150
155
160
Asn Gly
Gly
Thr
val
val
lie
Glu
ser
туг
val
val
Asp
val
Pro
Gin
165
170
175
Gly Asn
Thr
Lys
Glu
Glu
Thr
Cys
ser
Phe
Ala
Asp
Thr
val
Arg
180
185
190
cys
А5П
Leu
Gin
Ser
Leu
val
Gin
Ala
Glu
Lys
Leu
195 200 205
<210> 40 <211> 212 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize AT-rich element binding factor 3, clone 1458362, GenBank Accession No. ACG26321.1
<400> 40
Met
Pro
Phe
Ala
Ala
ser
Arg
Thr
Ser
Gin
Gin Gin
His
Ser
Arg Val
Ala
Thr
Asn
Gly
Arg
Ala
val
Ala
val
Cys
Ala Gly
His
Ala
Gly val
Pro
Asp
Glu
val
Ala
Arg
Hi s
Hi s
Glu
Hi s
Ala Val
Ala
Ala
Gly Gin
cys
cys
Ala
Ala
Met
val
Gin
ser
Ala
Ala Pro
val
Asp
Ala val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin Arg
Tyr
Lys
Arg Phe
Arg
Ser
Cys
His
Leu
val
Asp
Gly
Asp
Gly Ala
Glu
val
Gly Ser
val
Arg
Glu
Leu
Leu
Leu
val
Ser
Gly
Leu
Pro Ala
Glu
ser
Ser Arg
100
105
110
Glu
Arg
Leu
Glu
Arg
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg Val
ser
Phe Arg
115
120
125
val
Leu
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Ala
Asn
Tyr Arg
Ser
val
Thr Thr
130
135
140
val
His
Glu
Ala
Ala
Pro
Ser
Gin
Asp
Gly
Arg Pro
Leu
Thr
Met val
145
150
155
160
val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly Asn
Thr
val
Glu Glu
Страница 24
165 170 175
Thr Arg lie Phe Val Asp Thr lie Val Arg cys Asn Leu Gin ser Leu
180 185 190
Glu Gly Thr val lie Arg Gin Leu Glu lie Ala Ala Met Pro His Asp
195 200 205
Asp Asn Gin Asn 210
<210> 41 <211> 233 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize strain B73 unknown protein, clone ZM_BFb0105ol8, GenBank Accession No. ACF87013.1
<400> 41
Met
Arg
Glu
Arg
Asn
Ser
Ser
Asp
Gin
Glu
His
Gin
Arg
Gly ser
ser
Ser
Arg
Ser
Thr
Met
Pro
Phe
Ala
Ala
Ser
Arg
Thr
ser
Gin Gin
Gin
Hi s
Ser
Arg
Val
Ala
Thr
Asn
Gly
Arg
Ala
val
Ala
val
cys Ala
Gly His
Ala
Gly
val
Pro
Asp
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
His Ala
val
Ala
Ala
Gly
Gin
cys
Cys
Ala
Ala
Met
val
Gin
ser
Ala Ala
Pro
val
Asp
Ala
val 85
Trp
Ser
Leu
val
Arg 90
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro Gin 95
Arg
Tyr
Lys
Arg 100
Phe
lie
Arg
Ser
cys 105
His
Leu
val
Asp
Gly 110
Asp Gly
Ala
Glu
val
Gly
Ser
val
Arg
Glu
Leu
Leu
Leu
val
ser
Gly
Leu Pro
115
120
125
Ala
Glu
Ser
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
lie
Arg
Asp
Asp
Glu
Arg Arg
130
13 5
140
Val
lie
Ser
Phe
Arg
val
Leu
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Ala
Asn Tyr
145
150
155
160
Arg
Ser
Val
Thr
Thr
Val
His
Glu
Ala
Ala
Pro
Ser
Gin
Asp
Gly Arg
165
170
175
Pro
Leu
Thr
Met
val
Val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
pro
РГО Gly
180
185
190
ASn
Thr
val
Glu
Glu
Thr
Arg
Phe
val
Asp
Thr
val
Arg Cys
195
200
205
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
Glu
Gly
Thr
val
Arg
Gin
Leu
Glu
lie Ala
210
215
220
Ala
Met
Pro
Hi s
Asp
Asp
ASn
Gin
Asn
225 230
<210> 42 <211> 194 <212> PRT
<213> Physcomitrella patens <220>
<223> Physcomitrella patens subsp. patens moss, ecotype Gransden 2004, hypothetical protein, predicted protein, locus tag PHYPADRAFT_209242, GenBank Accession No. XP_001762113.1
<400> 42
Met Met Gin Glu Lys Gin Gly Arg Pro Asp Phe Gin Phe Leu Leu Glu
15 10 15
Gly Gin Gin Asp Leu lie Cys Arg Phe His Lys His Glu Leu Leu Pro
20 25 30
His Gin cys Gly Ser lie Leu Leu Gin Gin lie Lys Ala Pro val Gin 35 40 45
Страница 25
Thr
val
Trp
Leu
val
Arg
Arg
Phe Asp Glu Pro Gin val
Tyr
Lys
Arg
Phe
Gin
Arg
Cys
Asp
Val Glu Gly Asp Gly Val
val
Gly
Ser
Arg
Glu
val
Gin
Leu
val
Ser Ser lie Pro Ala Thr
Ser
ser
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp Glu Glu His He lie
Ser
Phe
100
105 110
Arg
val
Leu
Gly Gly Gly
Hi s
Arg
Leu Gin Asn Tyr Trp Ser
Val
Thr
115
120
125
Ser
Leu
Hi s
Arg
His
Glu
Gin
Gly Gin Met Gly Thr Leu
val
Leu
130
135
140
Glu
ser
Tyr
val
val
Asp
Pro Asp Gly Asn Thr Arg Glu Glu Thr
145
150
155
160
His
Thr
Phe
Val
Asp
Thr
Val
Val
Arg cys Asn Leu Lys Ala
Leu
Ala
165
170
175
Gin
val
Ser
Glu
Gin
Lys
His
Leu
Leu Asn Ser Asn Glu Lys
Pro
Ala
180
185 190
Ala
Pro
<210> 43 <211> 191 <212> PRT
<213> Vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00035869001, GenBank Accession No. CAO48052.1
<400> 43
Met
Lys
val
Tyr
Ser
pro
Ser
Gin
Leu
Ala Glu Arg Gly
Pro
Arg
Ala
Gin
Ala
Met
Gly
ASn
Leu
Tyr
His
Thr
His
His Leu Leu
Pro
Asn
Gin
Cys
ser
Ser
Leu
val
val
Gin
Thr
Thr
Asp
Ala Pro Leu
Pro
Gin
val
Trp
Ser
Met
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Arg
Pro
Gin Ser Tyr
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Gly
Cys
Thr
Leu
Arg
Arg Gly
Lys Gly Gly val
Gly
Ser
Val
Arg
Glu
Val
Asn
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala Glu lie
Ser
Leu
Glu
Arg
Leu
Asp
Lys
Leu
Asp
Asp
Asp
Leu
His
val Met Arg
Phe
Thr
100
105
110
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Ala
Asn
Tyr
His Ser Thr
Leu
Thr
115
120
125
Leu
His
Glu
Asp
Glu
Glu
Asp
Gly
val
Arg
Lys
Thr val val
Met
Glu
130
135
140
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Gly
Gly Asn
Ser
Ala Gly Glu
Thr
cys
145
150
155
160
туг
Phe
Ala
Asn
Thr
Gly
Phe
Asn
Leu
Lys Ala Leu
Ala
Ala
165
170
175
val
Thr
Glu
Thr
Met
Ala
Leu
Lys
Ala
ASn
Pro Ser Gly
Phe
180
185
190
<210> 44 <211> 217 <212> PRT
<213> Physcomitrella patens <220>
<223> Physcomitrella patens subsp. patens moss, ecotype Gransden 2004, hypothetical protein, predicted protein, locus tag PHYPADRAFT_132509, GenBank Accession No. XP_001767821.1
<400> 44
Страница 26
Met
Gin
Gin
val
Lys
Gly
Arg
Gin
Asp
Phe
Gin
Arg
Leu
Leu
Glu
Ala
Gin
Gin
Asp
Leu
cys
Arg
Tyr
His
Thr
His
Glu
Leu
Lys
Ala
Hi s
Gin
Cys
Gly
Ser
Leu
Leu
Gin
Gin
Lys
Val
Pro
Leu
Pro
val
тгр
Ala
val
Arg
Ser
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
val
Tyr
Lys
Arg
Phe
Gin
Thr
Cys
Lys
Thr
Glu
Gly
Asp
Gly
Gly
val
Gly Ser
Arg
Glu
val
His
Leu
val
Ser
Ser
val
Pro
Ala
Thr
Cys
ser
Glu
Arg
Leu
Glu 100
Leu
Asp
Asp
Glu 105
Lys
Hi s
Ser 110
Phe
Arg
val
Leu
Gly
Gly
Gly
His
Arg
Leu
Gin
Asn
Tyr
Ser
Ser
val
Ser
Ser
115
120
125
Leu
His
Glu
Leu
Glu
val
Glu
Gly
His
Pro
cys
Thr
Leu
val
Leu
Glu
130
135
140
Ser
Tyr
Met
Val
Asp
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Arg
Glu
Glu
Thr
His
145
150
155
160
Met
Phe
val
Asp
Thr
Val
val
Arg
Cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Gin
165
170
175
Ser
Glu
Gin 180
Gin
Tyr
Asn
Lys
Asp 185
cys
Leu
Gin
Gin
Lys
190
Gin
His
Asp
Gin
Gin
Gin
Met
Tyr
Gin
Gin
Arg
Hi s
Pro
Pro
Leu
Pro
Pro
195
200
205
Pro
Thr
Asp
Lys
Asn
Met
Glu
Arg
210 215
<210> 45 <211> 195 <212> PRT
<213> Physcomitrella patens <220>
<223> Physcomitrella patens subsp. patens moss, ecotype Gransden 2004, hypothetical protein, predicted protein, locus tag PHYPADRAFT_213389, GenBank Accession No. XP_001767012.1
<400> 45
Met
Arg
Phe
Asp
Gly
His
Asn
Asp
val
Arg
Gly
Phe
Phe
Thr
cys
Glu
Glu
Glu
His
Ala
Tyr
Ala
Leu
His
Ser
Gin
Thr
val
Glu
Leu
ASn
Gin
cys
Gly
Ser
Leu
Met
Gin
Gin
Hi s
Ala
Pro
Glu
val
val
Trp 50
Ser
Val
Arg
Ser 55
Phe
Gly
Ser
Pro
Gin 60
lie
Tyr
Lys
Lys
Phe
Gin
Ala
Cys
Leu
Thr
val
Gly
Asp
Gly
Gly
val
Gly
ser
lie
Arg
Glu
val
Phe
Leu
Val
Ser
Gly
val
Pro
Ala
Thr
Ser
Ser
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Lys
Hi s
val
Phe
Ser
Phe
Arg
100
105
110
val
Leu
Lys
Gly
Gly
His
Arg
Leu
Gin
ASn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
115
120
125
Leu
His
Glu
Gin
Glu
val
Asn
Gly
Arg
Gin
Thr
Thr
Thr
val
Leu
Glu
130
135
140
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
Asn
Thr
Arg
Glu
Glu
Thr
His
145
150
155
160
Met
Phe
Ala
Asp
Thr
val
Val
Met
Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Gin
165
170
175
val
Ala
Glu
тгр
Arg
Ala
Met
Gin
Gly
lie
Thr
Gin
Gl n
Leu
ser
Thr
180 185 190
Ser Ser Leu 195
Страница 27
<210> 46 <211> 172 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pinot Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_004947, GenBank Accession No. CAN72620.1
<400> 46
Met Gly Asn
Leu
Tyr
His Thr
His
His Leu
Leu
Pro
Asn
Gin
Cys
Ser
Ser Leu
val
val
Gin
Thr Thr
Asp
Ala Pro
Leu
Pro
Gin
Val
Trp
Ser
Met val
Arg
Arg
Phe
Asp Arg
Pro
Gin Ser
Tyr
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Gly Cys
Thr
Leu
Arg
Arg Gly Lys
Gly Gly
val
Gly
ser
val
Arg
Glu
Val Asn
val
Ser
Gly Leu
Pro
Ala Glu
ser
Leu
Glu
Arg
Leu
Asp Lys
Leu
Asp
Asp
Asp Leu
His
Val Met
Arg
Phe
Thr
val
He Gly
Gly Asp
His
Arg
Leu
Ala Asn
Tyr
His Ser
Thr
Leu
Thr
Leu
His
Glu
100
105
110
Asp Glu
Glu 115
Asp
Gly
val Arg
Lys 120
Thr val
val
Met
Glu
125
ser
Tyr
val
val Asp
val
Pro
Gly
Gly Asn
Ser
Ala Gly
Glu
Thr
Cys
туг
Phe
Ala
130
135
140
Asn Thr
Gly
Phe Asn
Leu
Lys Ala
Leu
Ala
Ala
val
Thr
Glu
145
150
155
160
Thr Met
Ala
Leu
Lys
Ala Asn
Pro Ser
Gly
Phe
165 170
<210> 47 <211> 196 <212> PRT
<213> Picea sitchensis <220>
<223> Sitka spruce cultivar FB3-425, unknown protein,
clone WS0281_l24, GenBank Accession No. ABK23752.1
<400> 47
Met
Glu
Asp
Leu
Ser
Ser
Trp
Arg
Glu
Gly
Arg
Ala
Met
Trp
Leu Gly
ASn
Pro
Pro
Ser
Glu
Ser
Glu
Leu
val
cys
Arg
Hi s
His
Arg
His
Glu
Leu
Gin
Gly
ASn
Gin
Cys
Ser
Ser
Phe
Leu
val
Lys
His
Arg
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Thr
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
His
Ser
Cys
ser
val
Arg
Gly
Gly He Thr
Val
Gly Ser
lie
Arg
ASn
val
Asn
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Ala
Ser
Glu
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
Hi s
val
Phe
100
105
110
Ser
Lys 115
Leu
Gly
Gly
Asp 120
His
Arg
Leu
Gin
ASn
125
Tyr
Ser
Ser
Thr
val
His
Pro
Glu
Asp
Gly Arg
Pro
Gly Thr
Leu
130
135
140
Val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
ASn
Thr
Arg
Glu
145
150
155
160
Glu
Thr
Arg
Phe
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
val
Lys
cys
ASn
Leu
Lys
Ser
165 170 175
Страница 28
Leu Ala Asp val Ser Glu Arg Leu Ala ser Gin His His Thr Glu Leu
180 185 190
Leu Glu Arg Thr 195
<210> 48 <211> 185 <212> PRT
<213> Solanum tuberosum <220>
<223> potato cultivar Kuras, CAPlPl-like protein, clone 153D02, similar to casicum annuum CAPIPI, GenBank Accession NO. ABB29920.1
<400> 48
Met
Asn
Ala
ASn
Gly
Phe
Cys
Gly
Val
Glu
Lys
Glu
Tyr
Arg
Lys
Hi s
His
Leu
His
Glu
Pro
Lys
Glu
Asn
Gin
Cys
Ser
Ser
Phe
Leu
Val
Lys
His
Arg
Ala
Pro
val
Hi s
Leu
val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
туг
Lys
Pro
Phe
Ser
Arg
Cys
val
Gin
Gly
Asp
Leu
Glu
Gly ser
Leu
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu
His
Leu
Ser
val
Arg
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
100
105
110
Arg
Asn
Tyr
Ser
Ser
val
ser
Val
Hi s
Pro
Glu
val
lie
Asp Gly
115
120
125
Arg
Pro
Gly
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Phe
Val
val
Asp
val
Pro
Glu
130
135
140
Gly Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
Asn
145
150
155
160
Cys
Asn
Leu
Lys
ser
Leu
Ala
Asp
Ser
Gl u
Arg
val
Ala
val
Gin
165
170
175
Asp
Arg
Thr
Glu
Pro
Asp
Gin
val
180
185
<210> 49 <211> 190 <212> PRT
<213> Medicago truncatula <220>
<223> barrel medic unknown protein, clone MTYFP_FQ_FR_FS1G-E-17, GenBank Accession No. ACJ85952.1
<400> 49
Met Asn Asn Gly Cys Glu Gin Gin Gin Tyr Ser val lie Glu Thr Gin
15 10 15
Tyr lie Arg Arg His His Lys His Asp Leu Arg Asp Asn Gin Cys Ser
20 25 30
Ser Ala Leu val Lys His lie Lys Ala Pro val His Leu val Trp Ser
35 40 45
Leu val Arg Arg Phe Asp Gin Pro Gin Lys Tyr Lys Pro Phe lie Ser
50 55 60
Arg Cys lie Met Gin Gly Asp Leu Ser lie Gly Ser val Arg Glu val 65 70 75 80
Asn Val Lys Ser Gly Leu Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu
85 90 95
Gin Leu Asp Asp Glu Glu His lie Leu Gly lie Arg lie Val Gly Gly
100 105 110
Asp His Arg Leu Arg Asn Tyr Ser Ser lie lie Thr Val His Pro Gly
Страница 29
115 120 125
val lie Asp Gly Arg pro Gly Thr Met val lie Glu Ser Phe val Val
130 135 140
Asp val Pro Glu Gly Asn Thr Lys Asp Glu Thr Cys Tyr Phe val Glu 145 150 155 160
Ala Leu lie Arg Tyr Asn Leu Ser ser Leu Ala Asp val Ser Glu Arg
165 170 175
Met Ala val Gin Gly Arg Thr Asp Pro lie Asn lie Asn Pro 180 185 190
<210> 50 <211> 185 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00002440001, GenBank Accession No. CA065816.1
<400> 50
Met
Ser
Gly
Tyr Gly
cys
Lys
Met
Glu
Asp
Glu
Tyr
Arg
Arg
His
Hi s
Arg
Hi s
Glu
lie
Arg
Asp
Asn
Gin
Cys
Ser
Ser
ser
Leu
Val
Lys
His
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Ser
Phe
Asp 50
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr 55
Lys
Pro
Phe
val
Ser 60
Arg
Cys
val
Gin
Gly
Asp
Leu
Glu
Gly ser val
Arg
Glu
Val
Asn
val
Lys
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu
Hi s
Phe
Gly
Met
Arg
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
100
105
110
Lys
Asn
Tyr
ser
Ser
Val
Thr
val
His
Pro
Glu
Asp Gly
115
120
125
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
Asp
130
135
140
Gly Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
Lys
145
150
155
160
Cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
ser
Glu
Arg
Leu
Ala
Gin
165
170
175
Asp
Arg
Thr
Glu 180
Pro
lie
Asp
Arg
Met 185
<210> 51 <211> 185 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00006507001, GenBank Accession No. CA069376.1
<400> 51
Met Asn Gly Asn Gly Leu Ser Ser Met Glu Ser Glu Tyr lie Arg Arg
15 10 15
His His Arg His Glu Pro Ala Glu Asn Gin Cys Ser Ser Ala Leu Val
20 25 30
Lys His lie Lys Ala Pro Val Pro Leu val Trp ser Leu val Arg Arg
35 40 45
Phe Asp Gin pro Gin Lys Tyr Lys Pro Phe lie ser Arg cys Val val
50 55 60
Gin Gly Asn Leu Glu lie Gly Ser Leu Arg Glu val Asp val Lys ser 65 70 75 80
Gly Leu Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu Leu Leu Asp Asp
Страница 30
85 90 95
Asp Glu His lie Leu Ser Met Arg lie lie Gly Gly Asp His Arg Leu
100 105 110
Arg Asn Tyr Ser Ser lie lie Ser Leu His Pro Glu lie lie Asp Gly
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Met val lie Glu Ser Tyr Val Val Asp val Pro Glu
130 135 140
Gly Asn Thr Lys Asp Glu Thr Cys Tyr Phe Val Glu Ala Leu lie Lys 145 150 155 160
Cys Asn Leu Lys ser Leu Ala Asp Val Ser Glu Arg Leu Ala Val Gin
165 170 175
Asp Arg Thr Glu Pro lie Asp Arg Met 180 185
<210> 52 <211> 208 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein Osj_21703, GenBank Accession No. EAZ37364.1
<400> 52
Met
Glu
Ala
His
val
Glu
Arg
Ala
Leu
Arg
Glu Gly Leu
Thr
Glu
Glu
Glu
Arg
Ala
Ala
Leu
Glu
Pro
Ala
val
Met
Ala His His
Thr
Phe
Pro
Pro
Ser
Thr 35
Thr
Thr
Ala
Thr
Thr 40
Ala
Ala
Ala Thr Cys 45
Thr
Ser
Leu
val
Thr
Gin
Arg
val
Ala
Ala
Pro
val
Arg
Ala Val Trp
Pro
lie
Val
Arg
Ser
Phe
Gly
Asn
Pro
Gin
Arg
туг
Lys
His Phe val
Arg
Thr
Cys
Ala
Leu
Ala
Ala
Gly
Asn
Gly Pro Ser
Phe Gly Ser val
Arg
Glu
val
Thr
val
Val
ser
Gly
Pro
Ser
Arg
Leu
Pro
Pro Gly Thr
Glu
Arg
Leu
100
105
110
Glu
Met
Leu
Asp
Asp
Asp
Arg
His
lie
Ser Phe Arg
val
val
Gly
115
120
125
Gly Gin
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
Val Thr ser
val
Thr
Glu
130
135
140
Phe
Gin
Pro
Pro
Ala
Ala
Gly
РГО Gly
pro
Ala Pro Pro
Tyr
cys
val
145
150
155
160
val
val
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
РГО Asp Gly ASn
Thr
Ala
Glu
165
170
175
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Thr
Asp
Thr
Val
val
Lys Leu Asn
Leu
Gin
Met
180
185
190
Leu
Ala
Ala
val
Ala
Glu
Asp
Ser
Ser
Ser
Ala Ser Arg
Arg
Arg
Asp
195
200
205
<210> 53 <211> 186 <212> PRT
<213> Capsicum annuum <220>
<223> pepper cultivar hanbyul, CAPIP1 protein, GenBank Accession No. AAT35532.1
<400> 53
Met Met Asn Ala Asn Gly Phe Ser Gly val Glu Lys Glu Tyr lie Arg
15 10 15
Lys His His Leu His Gin Pro Lys Glu Asn Gin Cys Ser Ser Phe Leu
20 25 30
Val Lys His lie Arg Ala Pro val His Leu val Trp Ser Leu val Arg
Страница 31
35 40 45
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
Ala Gin
Gly
Asp
Leu
Glu
lie
Gly Ser
Leu
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp Glu
Glu
His
Leu
Ser
Phe
Arg
lie Gly
Gly Asp His Arg
100
105
110
Leu Arg
ASn
Tyr
Ser
Ser
Ser
Leu
His
Pro
Glu
val
Asp
115
120
125
Gly Arg
Pro
Gly Thr
Leu
val
Glu
ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
130
135
140
Gin Gly Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
145
150
155
160
Asn Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Arg
Leu
Ala
Val
165
170
175
Gin Asp
Arg
Thr
Glu
Pro
Asp
Gin
val
180
185
<210> 54 <211> 186 <212> PRT
<213> Populus trichocarpa <220>
<223> California poplar (western balsam poplar, black cottonwood) cultivar 383-2499 (Nisqually-1), unknown protein, clone PX0011_1113, GenBank Accession No. ABK92491.1
<400> 54
Met Asn
Gly
Ser
Asp
Ala
Tyr
Ser
Ala
Thr
Glu
Ala
Gin
Tyr
val
Arg
Arg His
His
Lys
His
Glu
Pro
Arg
Glu
Asn
Gin
cys
Thr
Ser
Ala
Leu
val Lys
His
Lys
Ala
Pro
Ala
His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
val
Met Asn
Gly
Glu
Leu
Gly
lie Gly Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp Glu
Glu
His
lie
Leu
Gly val
Gin
lie
val
Gly Gly Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Lys
ASn
Tyr
Ser
Ser
lie
Met
Thr
val
His
Pro
Glu
Phe
Asp
115
120
125
Gly Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
Asp
val
Pro
130
135
140
Asp Gly
Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
145
150
155
160
Arg Cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Arg
Met
Ala
val
165
170
175
Gin Asp
Arg
val
Glu
Pro
val
Asn
Gin
Phe
180 185
<210> 5 5 <211> 185 <212> PRT
<213> Capsicum annuum <220>
<223> pepper cultivar hanbyul, PIP1 protein, GenBank Accession No. ABF72432.1
<400> 55
Страница 32
Met
Asn
Ala
Asn
Gly
Phe
Ser Gly
val
Glu
Lys
Glu
Tyr
Arg
Lys
His
Hi S
Leu
His
Gin
pro
Lys
Glu
Asn
Gin
Cys
Ser
Ser
Phe
Leu
val
Lys
His
Arg
Ala
pro
val
Hi s
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
Ala
Gin
Gly
Asp
Leu
Glu
Gly Ser
Leu
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu
His
Leu
ser
Phe
Arg
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
100
105
110
Arg
Asn
Tyr
Ser
Ser
ser
Leu
Hi s
Pro
Glu
Val
Asp
Gly
115
120
125
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Gin
130
135
140
Gly Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
Asn
145
150
155
160
cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Arg
Leu
Ala
val
Gin
165
170
175
Asp
Arg
Thr
Glu
pro
Asp
Gin
val
180 185
<210> 56 <211> 186 <212> PRT
<213> Populus trichocarpa x Populus deltoides <220>
<223> California poplar (western balsam poplar, black cottonwood) x Eastern cottonwood, cultivar Hll-11, unknown protein, clone WS0133_I04, GenBank Accession No. ABK96505.1
<400> 56
Met Asn
Gly
Ser
Asp
Ala
Tyr
Ser
Ala
Thr
Glu
Ala
Gin
Tyr
val
Arg
Arg His
His
Lys
His
Glu
Pro
Arg
Glu
Asn
Gin
Cys
Thr
ser
Ala
Leu
val Lys
His
Lys
Ala
Pro
Ala
His
Leu
val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
ser
Arg
cys
val
Met Asn
Gly
Glu
Leu
Gly
Gly
ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp Glu
Glu
His
Leu
Gly
val
Gin
Val
Gly Gly
Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Lys
ASn
Tyr
Ser
Ser
lie
Met
Thr
val
His
Pro
Glu
Phe
Asp
115
120
125
Gly Arg
pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
ser
Phe
val
Asp
val
Pro
130
135
140
Asp Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
Val
Lys
Ala
Leu
145
150
155
160
Arg Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
ser
Glu
Arg
Met
Ala
val
165
170
175
Gin Asp
Arg
Val
Glu
Pro
val
Asn
Gin
Phe
180 185
<210> 57 <211> 188 <212> PRT
<213> Pi sum sativum
Страница 33
<220>
<223> pea AT-rich element binding factor 3 (PSATF, ATF3),
potential transcription factor, GenBank Accession No. AAV85853.1
<400> 57
Met
Asn
Asn
Gly Gly
Glu
Gin
Tyr
Ser
Ala
lie
Glu
Thr
Gin
Tyr
Arg
Arg
Arg
His Lys 20
Hi s
Asp
Leu
Arg 25
Asp
Asn
Gin
Cys
Ser 30
Ser
Ala
Leu
Val
Lys
His lie
Lys
Ala
Pro
val
Hi s
Leu
Val
Trp
ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
Val
ser
Arg
cys
lie
Met
Gin
Gly Asp
Leu
Gly lie Gly
ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
ser
Gly
Leu Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Gin
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu His
Leu Gly lie
Arg
val
Gly
Gly
Asp
His
100
105
110
Arg
Leu
Arg
Asn Tyr
Ser
Ser
val
Thr
Val
His
Pro
Glu
val
115
120
125
Asp Gly
Arg
Pro Gly
Thr
Met
Val
lie
Glu
Ser
Phe
Val
val
Asp
val
130
135
140
Pro
Glu
Gly
Asn Thr
Arg
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
145
150
155
160
Arg
Gly
Asn Leu
Ser
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Arg
Met
Ala
165
170
175
val
Gin
Gly
Arg Thr
Asp
Pro
Asn
Val
Asn
Pro
180 185
<210> 58 <211> 177 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar PN40024 unnamed protein product, locus tag GSVIVT00027009001, GenBank Accession No. CA039744.1
<400> 58
Met
Glu
Ala
Gin
Val
cys
Arg
His
His
Ala
His
Glu
Pro
Arg
Glu
Asn
Gin
Cys
Ser
Ser
Val
Leu
val
Arg
His
val
Lys
Ala
Pro
Ala
Asn
Leu
val
Trp
Ser
Leu
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gl n
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
Val
Ser
Arg
cys
Val
val
Gin
Gly
Asp
Leu
Arg
Gly Ser
Val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Thr
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Phe
Asp
Asp
Asp
Glu
Hi s
val
Leu
Gly
Lys
Leu
Asp
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Arg
ASn
Tyr
ser
Ser
val
Thr
100
105
110
val
His
Pro
Glu
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
115
120
125
Ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Asp
Thr
Cys
130
135
140
Tyr
Phe
Val
Arg
Ala
Leu
ASn
cys
ASn
Leu
Lys
Cys
Leu
Ala
Glu
145
150
155
160
val
Ser
Glu
Arg
Met
Ala
Met
Leu
Gly
Arg
val
Glu
Pro
Ala
Asn
Ala
165 170 175
Val
Страница 34
<210> 59 <211> 178 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pi not Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_004915, GenBank Accession No. CAN82501.1
<400> 59
Met
Met
Glu
Ala
Gin
val
cys
Arg His
His
Ala
His
Glu
Pro
Arg
Glu
Asn
Gin
Cys
Ser
ser
val
Leu
val Arg
Hi s
val
Lys
Ala
Pro
Ala
ASn
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro 50
Phe
val
Ser
Arg
cys 55
val
Val Gin
Gly
Asp 60
Leu
Arg
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Thr Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Phe
Asp
Asp Asp
Glu
His
Val
Leu
Gly lie
Lys
Leu
Asp 100
Gly
Asp
His
Arg
Leu Arg 105
Asn
Tyr
Ser
Ser 110
Val
lie
Thr
val
Hi s
Pro
Glu
lie
lie
Asp
Gly Arg
Pro
Gly Thr
Leu
Val
115
120
125
Glu
ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
Glu Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Asp
Thr
130
135
140
Cys
Tyr
Phe
val
Arg
Ala
Leu
Asn Cys
ASn
Leu
Lys
Cys
Leu
Ala
145
150
155
160
Glu
val
Ser
Glu
Arg
Met
Ala
Met
Leu Gly
Arg
Val
Glu
Pro
Ala
ASn
165 170 175
Ala Val
<210> 60 <211> 193 <212> PRT
<213> Arachis hypogaea <220>
<223> peanut pathogenesis-induced protein (PIP), GenBank Accession No. ACG76109.1
<220>
<221> VARIANT
<222> (162)...(162)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 60
Met
Met
Asn
Gly
Ser cys Gly
Gly
Gly
Gly Gly Gly Glu Ala Tyr Gly
Ala
Glu
Ala
Gin Tyr
Arg
Arg
His
His Arg His Glu Pro Arg
Asp
ASn
Gin
Cys
Thr Ser
Ala
Leu
Val
Lys
His lie Arg Ala Pro val
Hi s
Leu
val
Trp
Ser Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp Gin РГО Gin Lys Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser Arg
cys
Met
Gin
Gly Asp Leu Gly lie Gly
75 80
Ser
val
Arg
Glu
val Asn
val
Lys
Ser
Gly
Leu Pro Ala Thr Thr ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu Gin
Leu
Asp
Asp
Glu
Glu His lie Leu Gly lie
100
105
110
Arg
val
Gly
Gly Asp
His
Arg
Leu
Arg
Asn Tyr Ser Ser lie lie
115
120
125
Thr
val
Hi s
Pro
Glu val
Glu
Gly
Arg
Pro Gly Thr Met Val lie
Страница 35
130 135 140
Glu Ser Phe val val Asp val Pro Asp Gly Asn Thr Lys Asp Glu Thr 145 150 155 160
Cys xaa Phe Val Glu Ala Leu lie Arg Cys Asn Leu Ser ser Leu Ala
165 170 175
Asp val ser Glu Arg Met Ala val Gin Gly Arg Thr Asp Pro lie Asn 180 185 190
Gin
<210> 61 <211> 217 <212> PRT <213> Zea mays
<220>
<223> maize AT-rich element binding factor 3, clone 300908, GenBank Accession No. ACG39386.1
<400> 61
Met val
val
Glu
Met Asp Gly
Gly
val
Gly val
Ala
Ala
Gly
Gly Gly
Gly Gly
Ala
Gin
Thr
Pro
Ala
Pro
Ala
Pro
Pro
Arg
Arg
Trp
Arg
Leu
Ala Asp
Glu
Arg
cys
Asp
Leu
Arg
Ala
Met
Glu
Thr
Asp
Tyr
Val
Arg
Arg Phe
His
Arg
Hi s
Glu
Pro
Arg
Asp
His
Gin
Cys
Ser
Ser
Ala
val
Ala Lys
His
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Glu
Met Lys
Gly
Asn
Glu
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
Val
Lys
100
105
110
ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
115
120
125
Asp Asp
Glu
Arg
Leu
Ser
Val
Arg
Phe
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
130
135
140
Leu Gin
Asn
Tyr
ser
Ser
Leu
Thr
val
His
Pro
Glu
val
Asp
145
150
155
160
Gly Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
Val
lie
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
val
pro
165
170
175
Asp Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
Leu
180
185
190
Lys Cys
Asn
Leu
Arg
Ser
Leu
Ala
Glu
val
ser
Glu
Gly
Gin
val
195
200
205
Met Asp
Gin
Thr
Glu
Pro
Leu
Asp
Arg
210 215
<210> 62 <211> 217 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize strain B73, unknown protein, clone ZM_BFb0036A01, GenBank Accession No. ACF80077.1
<400> 62
Met val val Glu Met Asp Gly Gly Val Gly val Ala Ala Ala Gly Gly
15 10 15
Gly Gly Ala Gin Thr Pro Ala Pro Pro Pro Pro Arg Arg Trp Arg Leu
20 25 30
Ala Asp Glu Arg Cys Asp Leu Arg Ala Met Glu Thr Asp Tyr val Arg
35 40 45
Arg Phe His Arg His Glu Pro Arg Asp His Gin Cys Ser Ser Ala val 50 55 60
Страница 36
Ala Lys
Hi s
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser Leu val
Arg
Arg Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
ser Arg Cys
Glu
Met Lys
Gly
Asn
Glu
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val Asn val
Lys
100
105
110
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu Leu Leu
Asp
115
120
125
Asp Asp
Glu
Arg
Leu
Ser
Val
Arg
Phe
Val
Gly
Gly Asp His Arg
130
135
140
Leu Gin
ASn
Tyr
Ser
Ser
Leu
Thr
val
His
Pro
Glu val lie
Asp
145
150
155
160
Gly Arg
Pro
Gly Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
val Asp val
Pro
165
170
175
Asp Gly ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
val
Glu Ala Leu
Leu
180
185
190
Lys cys
Asn
Leu
Arg
Ser
Leu
Ala
Glu
val
Ser
Glu
Gly Gin val
195
200
205
Met Asp
Gin
Thr
Glu
Pro
Leu
Asp
Arg
210 215
<210> 63
<211> 206
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical
protein Os06g0528300, GenBank Accession No. NP_001057772.1
<400> 63
Met
Asn
Gly
val
Gly
Gly Ala Gly
Gly
Ala
Ala
Ala
Gly
Lys
Leu
Pro
Met
val
Ser
His
Arg
Arg
val
Gin
Trp
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
Cys
Glu
Leu
Arg
Glu
Glu
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Arg
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Ser
Ser
ASn
Gin
cys
Thr
ser
Phe
Ala
Ala
Lys
His
Lys
Ala
Pro
Leu
Hi s
Thr
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Arg
Asn
cys
val
Met
Arg
Glu
Asn
lie
Ala
Thr
Gly
Cys
Arg
Glu
val
Asn
val
Gin
Ser
Gly
Leu
Pro
100
105
110
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
His
115
120
125
Leu
Lys
val
Asn
Phe
lie Gly
Gly
Asp
His
Met
Leu
Lys
ASn
Tyr
130
135
140
Ser
Ser
Leu
Thr
val
His
Ser
Glu
Val
Asp
Gly
Gin
Leu
Gly
145
150
155
160
Thr
Leu
val
val
Glu
Ser
Phe
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
165
170
175
Lys
Asp
Asp
Ser
Tyr
Phe
Glu
ASn
val
Leu
Arg
cys
Asn
Leu
180
185
190
Arg
Thr
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Glu
Arg
Leu
Ala
Asn
Pro
195 200 205
<210> 64 <211> 206 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein 0sl_23215, GenBank Accession No. EAZ01188.1
Страница 37
<400> 64
Met
ASn
Gly
Ala
Gly
Gly Ala Gly
Gly
Ala
Ala
Ala
Gly
Lys
Leu
Pro
Met
val
Ser
Hi s
Arg
Gin
Val
Gin
Trp
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
cys
Glu
Leu
Arg
Glu
Glu
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Gin
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Ser
Ser
ASn
Gin
Cys
Thr
Ser
Phe
val
Ala
Lys
His
Lys
Ala
Pro
Leu
Gin
Thr
Val
Trp
Ser
Leu
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Arg
Lys
Cys
Val
Met
Arg
Glu
Asn
Ala
Thr
Gly
Cys
Val
Arg
Glu
val
Asn
Val
Gin
Ser
Gly
Leu
Pro
100
105
110
Ala
Thr
Arg
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
Hi s
115
120
125
Leu
Lys
val
Lys
Phe
lie Gly
Gly
Asp
Hi s
Met
Leu
LyS
ASn
Tyr
130
135
140
Ser
Ser
Leu
Thr
His
Ser
Glu
val
Asp
Gly
Gin
Leu Gly
145
150
155
160
Thr
Leu
val
val
Glu
Ser
Phe
Val
val
Asp
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
165
170
175
Lys
Asp
Asp
Cys
Tyr
Phe
Glu
ASn
Leu
Arg
cys
Asn
Leu
180
185
190
Met
Thr
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Glu
Arg
Leu
Ala
ASn
Pro
195
200
205
<210> 65 <211> 205 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Daponica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein Os3_06125, GenBank Accession No. EAZ22456.1
<400> 65
Met
val
Glu
val
Gly
Gly
Gly
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala
Ala
Gly
Arg
Arg
Trp
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
Cys
Asp
Leu
Arg
Ala
Ala
Glu
Thr
Glu
Tyr
val
Arg
Arg
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Arg
Asp
His
Gin
cys
Ser
Ser
Ala
val
Ala
Lys
Hi s
lie
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
тгр
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Glu
Met
Lys
Gly
Asn
lie
Glu
Gly
Ser
val
Arg
Glu
Val
Asn
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
100
105
110
Leu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
lie
Leu
Ser
Val
Arg
Phe
val
Gly Gly
115
120
125
Asp
His
Arg
Leu
Lys
ASn
Tyr
Ser
ser
Leu
Thr
val
His
Pro
Glu
130
135
140
Val
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
val
145
150
155
160
Asp
val
Pro
Glu
Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
val
Glu
165
170
175
Ala
Leu
Leu
Lys
Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Glu
val
Ser
Glu
Arg
180
185
190
Leu
val
Cys
Gin
Gly
Pro
Asn
Arg
Ala
Pro
Ser
Thr
Arg
195 200 205
Страница 38
<210> 66 <211> 204 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein Os02g0255500, similar to extensin (fragment), GenBank Accession No. NP_001046464.1
<400> 66
Met
Val
Glu
val
Gly
Gly
Gly
Ala
Ala
Glu
Ala
Ala
Ala
Gly
Arg
Arg
Trp
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
Cys
Asp
Leu
Arg
Ala
Ala
Glu
Thr
Glu
туг
val
Arg
Arg
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Arg
Asp
His
Gin
Cys
Ser
Ser
Ala
val
Ala
Lys
Hi s
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
Glu
Met
Lys
Gly
Asn
lie
Glu
Gly
Ser
Val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
100
105
110
Leu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
lie
Leu
Ser
Val
Arg
Phe
Val
Gly Gly
115
120
125
Asp
His
Arg
Leu
Lys
ASn
Tyr
Ser
ser
Leu
Thr
val
Hi s
Pro
Glu
130
135
140
val
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
Val
lie
Glu
Ser
Phe
val
val
145
150
155
160
Asp
val
Pro
Glu
Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
Tyr
Phe
val
Glu
165
170
175
Ala
Leu
Leu
Lys
Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Glu
val
ser
Glu
Arg
180
185
190
Leu
val
Val
Lys
Asp
Gin
Thr
Glu
Pro
Leu
Asp
Arg
195 200
<210> 67 <211> 199 <212> PRT
<213> Medicago truncatula <220>
<223> barrel medic unknown protein, clone MTYFP_> Q_FR_FSlG-G-ll, GenBank Accession No. ACJ86004.1
<400> 67
Met
Glu
Lys
Met
ASn
Gly
Thr Glu
Asn Asn
Gly val
Phe
Asn
ser
Thr
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Arg His
His Asn
Gl n
Gin
Pro
Gly
Glu
ASn
Gin
Cys
Ser
Ser
Ala
Leu
val Lys
His lie
Arg
Ala
Pro
val
Pro
Leu
Val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg Phe
Asp Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
val
val Arg
Gly Asn
Leu
Glu
Gly
Ser
Leu
Arg
Glu
Val
Asp
val
Lys
Ser Gly
Leu Pro
Ala
Thr
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Asp Asn
Glu His
Leu
Ser
Arg
100
105
110
lie Gly Gly
Asp
His
Arg
Leu Arg
ASn Tyr
Ser
Ser
Met
ser
Leu
115
120
125
Hi s
Pro
Glu
Asp
Gly Arg
Pro Gly
Thr
Leu
Val
Glu
Ser
130
135
140
Phe
Val
val
Asp
val
Pro
Glu Gly
Asn Thr
LyS
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Страница 39
145 150 155 160
Phe val Glu Ala Leu lie Lys cys Asn Leu Lys ser Leu Ser Asp val
165 170 175
Ser Glu Gly His Ala val Gin Asp Leu Thr Glu Pro Leu Asp Arg Val
180 185 190
His Glu Leu Leu lie Ser Gly 195
<210> 68 <211> 199 <212> PRT
<213> Medicago truncatula <220>
<223> barrel medic unknown protein, clone MTYFl_F2_F3_FYlG-K-4, GenBank Accession No. ACJ83958.1
<400> 68
Met
Glu
Lys
Met
Asn
Gly
Thr
Glu
ASn
ASn
Gly
val
Phe
Asn
Ser
Thr
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Arg
His
His
Asn
Gin
Gin
Pro
Gly
Glu
Asn
Gin
cys
Ser
Ser
Ala
Leu
Val
Lys
His
Arg
Ala
Pro
val
Pro
Leu
val
тгр 50
Ser
Leu
Val
Arg
Arg 55
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin 60
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
Val
Ser
Arg
Cys
val
val
Arg
Gly
ASn
Leu
Glu
Gly
Ser
Leu
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Val
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
Leu
Ser
Arg
100
105
110
lie Gly
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Ser
ser
Met
Ser
Leu
115
120
125
Hi s
Pro
Glu
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
130
135
140
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
145
150
155
160
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
Lys
cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ser
Asp
val
165
170
175
Ser
Glu
Gly
Hi s
Ala
Ala
Gin
Asp
Leu
Thr
Glu
Pro
Leu
Asp
Arg
Met
180
185
190
His
Glu
Leu
Leu
lie
Ser
Gly
195
<210> 69 <211> 197 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize CAPiPl protein, clone 244179, GenBank Accession No. ACG34726.1
<400> 69
Met val Gly Leu val Gly Gly Ser Thr Ala Arg Ala Glu His val val
15 10 15
Ala Asn Ala Gly Gly Glu Ala Glu Tyr val Arg Arg Met His Arg His
20 25 30
Ala Pro Thr Glu His Gin Cys Thr ser Thr Leu val Lys His lie Lys
35 40 45
Ala Pro Val His Leu val Trp Gin Leu val Arg Arg Phe Asp Gin Pro
50 55 60
Gin Arg Tyr Lys Pro Phe val Arg Asn Cys val val Arg Gly Asp Gin 65 70 75 80
Leu Glu val Gly ser Leu Arg Asp val Asn val Lys Thr Gly Leu Pro
Страница 40
85 90 95
Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu Gin Leu Asp Asp Asp Leu His
100 105 110
lie Leu Gly Val Lys Phe Val Gly Gly Asp His Arg Leu Gin Asn Tyr
115 120 125
Ser ser lie lie Thr val His Pro Glu Ser lie Asp Gly Arg Pro Gly
130 135 140
Thr Leu val lie Glu Ser Phe val Val Asp val Pro Asp Gly Asn Thr 145 150 155 160
Lys Asp Glu Thr Cys Tyr Phe val Glu Ala val lie Lys Cys Asn Leu
165 170 175
Asn Ser Leu Ala Glu val Ser Glu Gin Leu Ala val Glu Ser Pro Thr
180 185 190
Ser Leu lie Asp Gin 195
<210> 70 <211> 197 <212> PRT <213> Zea mays
<220>
<223> maize CAPlPl protein, clone 1448906, GenBank Accession No. ACG26022.1
<400> 70
Met
val
Gly
Leu
val
Gly
Gly
ser
Thr
Ala
Arg
Ala
Glu
Hi s
Val
Val
Ala
Asn
Ala
Gly
Gly
Glu
Ala
Glu
Tyr
Val
Arg
Arg
Met
His
Arg
Hi s
Ala
Pro
Thr
Glu
His
Gin
cys
Thr
Ser
Thr
Leu
val
Lys
His
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Glu
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Pro
Phe
Val
Arg
Asn
cys
val
Val
Arg
Gly
Asp
Gin
Leu
Glu
val
Gly
Ser
Leu
Arg
Asp
val
ASn
Val
Lys
Thr
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Gin
Leu
Asp
Asp
Asp
Leu
His
100
105
110
Leu
Gly
Val
Lys
Phe
Val
Gly
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Gin
Asn
туг
115
120
125
Ser
Ser
Thr
val
His
Pro
Glu
ser
Asp
Gly
Arg
Pro Gly
130
135
140
Thr
Leu
val
Glu
ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
Asn
Thr
145
150
155
160
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
туг
Phe
val
Glu
Ala
val
Lys
Cys
ASn
Leu
165
170
175
ASn
Ser
Leu
Ala
Glu
val
Ser
Glu
Gin
Leu
Ala
val
Glu
Ser
Pro
Thr
180
185
190
ser
Leu
Asp
Gin
195
<210> 71 <211> 212 <212> PRT <213> Zea mays
<220>
<223> maize strain B73 unknown protein, clone ZM_bfc0183d21, GenBank Accession No. ACF86162.1
<400> 71
Met val Met Val Glu Met Asp Gly Gly Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly
15 10 15
Gly Gin Thr Pro Ala Pro Arg Arg Trp Arg Leu Ala Asp Glu Arg Cys
Страница 41
20 25 30
Asp
Leu
Arg
Ala
Met
Glu
Thr
Asp
Tyr
val
Arg
Arg
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Arg
Glu
Hi s
Gin
Cys
Ser
Ser
Ala
val
Ala
Lys
Hi s
lie
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
Val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Glu
Met
Lys
Gly
Asn
lie
Glu
Gly
ser
Val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
100
105
110
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
His
115
120
125
Leu
Ser
val
Arg
Phe
val
Gly Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Gin
ASn
Tyr
Ser
130
135
140
Ser
Leu
Thr
val
His
Pro
Glu
val
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly Thr
145
150
155
160
Leu
Val
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Lys
165
170
175
Asp
Glu
Thr
Cys 180
Tyr
Phe
val
Glu
Ala 185
Leu
Leu
Lys
cys
ASn
190
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Glu
Val
Ser
Glu
Arg
Gin
val
val
Lys
Asp
Gin
Thr
Glu
195 200 205
Pro Leu Asp Arg
210
<210> 72
<211> 205
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, conserved
hypothetical protein Os06g0527800, GenBank Accession No. NP_001057771.1
<400> 72
Met
Asn
Gly
Ala
Gly
Gly
Ala
Gly
Gly
Ala
Ala
Ala
Gly
Lys
Leu
Pro
Met
val
Ser
Hi s
Arg
Arg
val
Gin
Cys
Arg
Leu
Ala
Asp
Lys
Arg
cys
Glu
Leu
Arg
Glu
Glu
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Gin
Phe
His
Arg
Hi s
Glu
Pro
Ser
ser
Asn
Gin
cys
Thr
Ser
Phe
val
Ala
Lys
Hi s
Lys
Ala
Pro
Leu
Gin
Thr
Val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Arg
Lys
cys
val
Met
Arg
Glu
Asn
lie
val
Thr
Gly
cys
Val
Arg
Glu
val
Asn
val
Gin
Ser
Gly
Leu
Pro
100
105
110
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
115
120
125
Leu
Lys
val
Lys
Phe
lie
Gly
Gly
Asp
His
Met
Leu
Lys
ASn
Tyr
130
135
140
ser
Ser
Leu
Thr
His
Ser
Glu
val
Asp
Gly
Gin
Leu Gly
145
150
155
160
Thr
Leu
val
val
Glu
Ser
Phe
Val
val
Asp
Pro
Asp
Gly
Asn
Thr
165
170
175
Lys
Asp
Asp
Cys
Tyr
Phe
Glu
Asn
val
Leu
Arg
Cys
ASn
Leu
180
185
190
Met
Thr
Leu
Ala
Asp
val
ser
Glu
Glu
Arg
Leu
Ala
ASn
195 200 205
<210> 73 <211> 197
Страница 42
<212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize strain B73 unknown protein, clone ZM_BFc0063El7, GenBank Accession No. ACF85073.1
<400> 73
Met
val
Gly
Leu
val
Gly
Gly
Ser
Thr
Ala
Arg
Ala
Glu
Hi s
val
Val
Ala
Asn
Ala
Gly
Gly
Glu
Thr
Glu
Tyr
Val
Arg
Arg
Leu
His
Arg
His
Ala
Pro
Ala
Glu
His
Gin
Cys
Thr
Ser
Thr
Leu
val
Lys
His
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Glu
Leu
val
Arg
Ser
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Arg
Asn
cys
Val
val
Arg
Gly
Asp
Gin
Leu
Glu
val
Gly
Ser
Leu
Arg
Asp
Val
Asn
val
Lys
Thr
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Gin
Leu
Asp
Asp
Asp
Leu
His
100
105
110
lie
Leu
Gly
val
Lys
Phe
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Gin
Asn
Tyr
115
120
125
Ser
Ser
Thr
val
His
Pro
Glu
Ser
Asp
Gly
Arg
Pro Gly
130
135
140
Thr
Leu
Val
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
145
150
155
160
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
val
Lys
cys
ASn
Leu
165
170
175
Lys
Ser
Leu
Ala
Glu
val
Ser
Glu
Gin
Leu
Ala
Val
Glu
Ser
Pro
Thr
180
185
190
Ser
Pro
Asp
Gin
195
<210> 74 <211> 206 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein Osl_23218, GenBank Accession No. EAZ01191.1
<400> 74
Met
Asn
Gly
val
Gly
Gly
Ala
Gly
Gly
Ala
Ala
Ala Gly
Lys
Leu
Pro
Met
Val
Ser
His
Arg
Arg
Val
Gin
тгр
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
cys
Glu
Leu
Arg 35
Glu
Glu
Glu
Met
Glu 40
Tyr
Arg
Arg
Phe 45
His
Arg
His
Glu
Pro 50
Ser
Ser
ASn
Gin
cys 55
Thr
Ser
Phe
Ala
Ala 60
Lys
His
Lys
Ala
Pro
Leu
His
Thr
Val
Trp
Ser
Leu
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Arg
Asn
cys
val
Met
Arg
Glu
Asn
Ala
Thr
Gly cys
Arg
Glu
val
Asn
val
Gin
Ser
Gly
Leu
Pro
100
105
110
Ala
Thr
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
His
115
120
125
Leu
Lys
val
Lys
Phe
Gly
Gly
Asp
His
Met
Leu
LyS
Asn
Tyr
130
135
140
Ser
Ser
Leu
Thr
val
His
Ser
Glu
val
Asp Gly
Gin
Leu Gly
145
150
155
160
Thr
Leu
Val
Val
Glu
Ser
Phe
val
Asp
val
Leu
Glu
Gly
Asn
Thr
165 170 175
Страница 43
Lys Asp Asp lie Ser Tyr Phe lie Glu Asn Val Leu Arg cys Asn Leu
180 185 190
Arg Thr Leu Ala Asp val Ser Glu Glu Arg Leu Ala Asn Pro 195 200 205
<210> 75 <211> 209 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, conserved
hypothetical protein Os05g0213500, GenBank Accession No. NP_001054923.1
<400> 75
Met
val
Gly
Leu
val
Gly
Gly Gly
Gly
Trp
Arg
val
Gly
Asp
Asp
Ala
Ala Gly
Gly
Gly
Gly Gly
Gly Ala
Val
Ala
Ala
Gly
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Glu
Ala
Glu
His
Met
Arg
Arg
Leu
His
Ser
Hi s
Ala
Pro
Gly Glu
His
Gin
Cys
Ser
Ser
Ala
Leu
val
Lys
His
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Ser
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
Tyr
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
val
val
Arg
Gly
Gly
Asp
Leu
Glu
lie Gly
ser
Val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Thr
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
100
105
110
Thr
Glu
Arg 115
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp 120
Asp
Asp
Glu
His
He 125
Leu
Ser
val
LyS
Phe
val
Gly
Gly Asp
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Ser
Ser
lie
val
130
135
140
Thr
val
Hi s
Pro
Glu
Ser
lie
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
145
150
155
160
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
Val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
165
170
175
cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
Val
Lys
Cys
ASn
Leu
Thr
Ser
Leu
Ala
180
185
190
Glu
val
Ser
Glu
Arg
Leu
Ala
Val
Gin
Ser
Pro
Thr
Ser
Pro
Leu
Glu
195
200
205
Gin
<210> 76 <211> 180 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, Bet v I allergen-like protein, clone OSJNBa0052Kl5, gene OSJNBa0052Kl5.17, GenBank Accession No. BAD29692.1
<400> 76
Met val Glu Met Asp Ala Gly Gly Arg Pro Glu Pro Ser Pro Pro Ser
15 10 15
Gly Gin Cys Ser Ser Ala val Thr Met Arg He Asn Ala Pro val His
20 25 30
Leu val Trp Ser lie val Arg Arg Phe Glu Glu Pro His lie Phe Gin
35 40 45
Pro Phe Val Arg Gly Cys Thr Met Arg Gly Ser Thr Ser Leu Ala val
50 55 60
Gly Cys Val Arg Glu val Asp Phe Lys ser Gly Phe Pro Ala Lys Ser 65 70 75 80
Ser val Glu Arg Leu Glu lie Leu Asp Asp Lys Glu His val Phe Gly
Страница 44
85 90 95
Val Arg lie lie Gly Gly Asp His Arg Leu Lys Asn Tyr Ser Ser Val
100 105 110
Leu Thr Ala Lys Pro Glu Val lie Asp Gly Glu Pro Ala Thr Leu Val
115 120 125
Ser Glu Ser Phe val Val Asp Val Pro Glu Gly Asn Thr Ala Asp Glu
130 135 140
Thr Arg His Phe val Glu Phe Leu lie Arg Cys Asn Leu Arg Ser Leu 145 150 155 160
Ala Met val Ser Gin Arg Leu Leu Leu Ala Gin Gly Asp Leu Ala Glu 165 170 175
Pro Pro Ala Gin 180
<210> 77 <211> 176 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pi not Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_029498, GenBank Accession No. CAN64668.1
<400> 77
Met
Asn Gly
Asn
Gly
Leu Ser
Ser
Met
Glu
Ser
Glu
Tyr
Arg
Arg
Hi s
His Arg
His
Glu
Pro Ala
Glu
Asn
Gin
Cys
Ser
ser
Ala
Leu
Val
Lys
His lie
LyS
Ala
Pro val
Pro
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp Gin
Pro
Gin
Lys Tyr
Lys
Pro
Phe
Ser
Arg
cys
val
Val
Gin
Gly Asn
Leu
Glu
He Gly
Ser
Leu
Arg
Glu
Val
Asp
val
Lys
ser
Gly
Leu Pro
Ala
Thr
Thr Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Asp
Glu His
lie
Leu
Ser Met
Arg
lie
lie Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
100
105
110
Arg
Asn Tyr
Ser
Ser
lie lie
Ser
Leu
His
Pro
Glu
Asp Gly
115
120
125
Arg
Pro Gly
Thr
Met
Val lie
Glu
Ser
Tyr
Val
val
Asp
val
Pro
Glu
130
135
140
Gly Asn Thr
Lys
Asp
Glu Thr
cys
Tyr
Phe
Ser
Leu
Ala
Asp
Val
Ser
145
150
155
160
Glu
Arg Leu
Ala
Val
Ala Gly
Thr
val
Thr
Glu
Pro
Asp
Arg
Met
165 170 175
<210> 78 <211> 180 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice indica Group, cultivar 93-11, hypothetical protein, locus tag Osl_06615, GenBank Accession No. EEC72859.1
<400> 78
Met val Glu Met Asp Ala Gly Gly Arg Pro Glu Pro Ser Pro Pro Ser
15 10 15
Gly Gin Cys Ser ser Ala val Thr Met Arg lie Asn Ala Pro val His
20 25 30
Leu Val Trp ser lie Val Arg Arg Phe Glu Glu Pro His lie Phe Gin
35 40 45
Pro Phe Val Arg Gly Cys Thr Met Arg Gly Ser Thr ser Leu Ala val 50 55 60
Страница 45
Gly Cys val
Arg
Gl u
val
Asp
Phe
Lys
ser Gly
Phe
Ser
Ala
Lys
Ser
Ser
val
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp Lys
Glu
His
val
Phe Gly
val
Arg
lie Gly
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu Lys
Asn
Tyr
Ser
Ser
val
100
105
110
Leu
Thr
Ala
Lys
Pro
Glu
Val
Asp
Gly Glu
Pro
Ala
Thr
Leu
val
115
120
125
ser
Glu
Ser
Phe
Val
lie
Asp
Val
Pro
Glu Gly Asn
Thr
Ala
Asp
Glu
130
135
140
Thr
Arg
His
Phe
val
Glu
Phe
Leu
lie
Arg Cys
ASn
Leu
Arg
Ser
Leu
145
150
155
160
Ala
Met
val
Ser
Gl n
Arg
Leu
Leu
Leu
Ala Gin
Gly
Asp
Leu
Ala
Glu
165
170
175
Pro Pro Ala Gin 180
<210> 79 <211> 215 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag OsJ_10498, GenBank Accession No. EAZ26598.1
<400> 79
Met Pro
Cys
lie
Pro
Ala
Ser
Ser
Pro
Gly
Pro
Hi s
Gin
His
Gin
His Gin
Hi s
His
Arg
Ala
Leu
Ala
Gly
Val
Gly
Met
Ala
val
Gly Cys
Ala Ala
Glu
Ala
Ala
Val
Ala
Ala
Ala
Gly
val
Ala
Gly
Thr
Arg
cys
Gly Ala
His
Asp
Gly
Glu
val
Pro
Met
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
His Ala
Glu
Pro
Gly
Ser
Gly
Arg
cys
cys
ser
Ala
val
val
Gin
Hi s
val Ala
Ala
Pro
Ala
Ala
Ala
Val
Trp
Ser
Val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Ser
cys
Ala
Leu
Leu
Ala
100
105
110
Gly Asp
Gly 115
Gly
Leu
Gly
Lys
val 120
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu 125
Leu
Asp
Asp Glu
Ser
His
val
Leu
Ser
Phe
Arg
val
val
Gly
Gly
Glu
His
Arg
130
135
140
Leu Lys
Asn
Tyr
Leu
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Pro
Ser
Pro
Ser
Ala
145
150
155
160
Pro Thr
Ala
Ala
Thr
Val
val
val
Glu
Ser
туг
val
val
Asp
val
Pro
165
170
175
Pro Gly
Asn
Thr
Pro
Glu
Asp
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
val
180
185
190
Lys cys
Asn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Lys
Thr
Ala
Glu
Lys
Leu
Ala
Ala
195
200
205
Gly Ala
Arg
Ala
Ala
Gly
Ser
210 215
<210> 80 <211> 186 <212> PRT
<213> Rheum australe <220>
<223> Himalayan rhubarb pathogen-induced protein-like protein, GenBank Accession No. ACH63237.1
Страница 46
<400> 80
Met Asn
Gly
Asp
Gly Tyr
Gly Gly ser Glu
Glu
Glu
Phe
val
Lys
Arg
Туг His
Glu
His
val
Leu
Ala Asp
His
Gin
cys
Ser
Ser
val
Leu
val
Glu His
ASn
Ala
Pro
Leu His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Ser
Phe Asp
Gin
Pro
Gin
Lys
Tyr Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
cys
val
val
Gin Gly
Gly
Asp
Leu
Glu
lie Gly
Ser
val
Arg
Glu
Val
Asp
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr Ser
Met
Glu
Glu
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp Lys
Glu
His
val
Leu
Arg Val
Lys
Phe
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Lys
Asn
Tyr
ser
Ser
lie val
Ser
Leu
His
Pro
Glu
lie
lie Gly
115
120
125
Gly Arg
ser
Gly
Thr
Met
Val lie
Glu
Ser
Phe
lie
val
Asp
lie
Ala
130
135
140
Asp Gly
Asn
Thr
Lys
Glu
Glu Thr
cys
Tyr
Phe
lie
Glu
Ser
Leu
145
150
155
160
Asn Cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu Ser
cys
val
Ser
Glu
Arg
Leu
Ala
val
165
170
175
Glu Asp
lie
Ala
Glu
Arg
lie Ala
Gin
Met
180 185
<210> 81 <211> 254 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag OsD_016770, GenBank Accession No. EAZ33287.1
<400> 81
Met
val
Gly
Leu
val
Gly
Gly
Gly
Gly
Trp
Arg
val
Gly
Asp
Asp
Ala
Ala Gly
Gly
Gly
Gly
Gly
Gly
Ala
val
Ala
Ala
Gly
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Glu
Ala 35
Glu
Hi s
Met
Arg
Arg 40
Leu
His
ser
Gin
Gly 45
Pro
Arg
Arg
Ala
Pro
val
Gin
Leu
Arg
Ala
Arg
Gin
Ala
His
Gin
Gly
ser
Cys
Ser
Pro
Pro
Arg
lie
Glu
cys
Ala
Asn
Phe
Ala
val
Phe
Leu
Ala
Ala
Arg
Asp
Pro
Lys
Val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Ser
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Arg
туг
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Val
Val
Arg
Gly
Gly
Asp
Leu
100
105
110
Glu
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
Thr
Gly
Leu
Pro
Ala
115
120
125
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Asp
Glu
His
130
135
140
Leu
Ser
val
Lys
Phe
val
Gly
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Ser
145
150
155
160
Ser
val
Thr
Val
His
Pro
Glu
Ser
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly Thr
165
170
175
Leu
val
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
Asn
Thr
Lys
180
185
190
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
val
Lys
Cys
Asn
Leu
Thr
195
200
205
Ser
Leu 210
Ala
Glu
Met
val
Arg 215
Met
Ser
Leu
val 220
Leu
Pro
Phe
Met
Leu
val
Asp
Arg
Met
Ser
Gly
Thr
cys
Glu
Ser
Hi s
Leu
Glu
Thr
225 230 235 240
Страница 47
Thr Leu val Arg Cys Gly Glu Tyr Ala val Leu Ala His Val 245 250
<210> 82
<211> 186
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag OsJ_005784, GenBank Accession No. EAZ22301.1
<400> 82
Met
Glu
Pro
His
Met
Glu
Arg
Ala
Leu
Arg
Glu
Ala
val
Ala
Ser
Glu
Ala
Glu
Arg
Arg
Glu
Leu
Glu
Gly
val
val
Arg
Ala
Hi s
His
Thr Gly
Trp
Asn
Ala
Pro
Leu
Ala
Ala
val
Trp
Pro
His
Arg
Ala
Arg
Val
Arg
pro
Thr
Arg
Ser
Gly Thr
Ser
Thr
Ser
Ser
Ser
Arg
Ala
Ser
Ser
Pro
pro Gly
Asp
Gly
Ala
Thr
Val
Gly
Ser
val
Arg 75
Glu
val
Ala
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Asp
Arg
His 100
Val
Leu
Ser
Phe
Arg 105
val
Val
Gly
Gly
Asp 110
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
Val
Thr
Ser
val
Thr
Glu
Phe
ser
Ser
Pro
115
120
125
Ser
Ser
Pro
Pro
Arg
Pro
Tyr
Cys
val
val
val
Glu
ser
Tyr
Val
val
130
135
140
Asp
val
Pro
Glu
Gly Asn Thr Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Thr
Asp
145
150
155
160
Thr
val
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ala
val
Ala
Thr
Ser
165
170
175
Ser
ser
Pro
Pro
Ala Ala Gly Asn
His
Hi s
180
185
<210> 83 <211> 150 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag osJ_005938, GenBank Accession No. EAZ22455.1
<400> 83
Met Glu Val Val Trp Ser lie val Arg Arg Phe Glu Glu Pro His He
15 10 15
Phe Gin Pro Phe Val Arg Gly Cys Thr Met Arg Gly Ser Thr Ser Leu
20 25 30
Ala val Gly Cys val Arg Glu val Asp Phe Lys Ser Gly Phe Pro Ala
35 40 45
Lys Ser Ser val Glu Arg Leu Glu lie Leu Asp Asp Lys Glu His val
50 55 60
Phe Gly Val Arg lie lie Gly Gly Asp His Arg Leu Lys Asn Tyr Ser 65 70 75 80
Ser val Leu Thr Ala Lys Pro Glu val lie Asp Gly Glu Pro Ala Thr
85 90 95
Leu val ser Glu Ser phe Val val Asp val Pro Glu Gly Asn Thr Ala
100 105 110
Asp Glu Thr Arg His Phe Val Glu Phe Leu lie Arg cys Asn Leu Arg 115 120 125
Страница 48
Ser Leu Ala Met val Ser Gin Arg Leu Leu Leu Ala Gin Gly Asp Leu
130 135 140
Ala Glu Pro Pro Gly Gin 145 150
<210> 84
<211> 206
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag OsJ_018129, GenBank Accession No. EAZ34646.1
<400> 84
Met
Pro
Tyr
Thr
Ala
Pro
Arg
Pro
Ser
Pro
Pro
Gin
His
Ser
Arg
Gly Gly
cys
Gly Gly
Gly
Gly val
Leu
Lys
Ala
Ala
Gly
Ala
Ala Gly
Hi s
Ala
Ala
ser
Cys
val
Ala
val
Pro
Ala
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
Hi s
Ala
Ala Gly
Val
Gly Gin
Cys
Cys
Ser
Ala
Val
val
Gin
Ala
Ala
Ala
Pro
val
Asp
Ala
Val
Trp
Arg
Thr
Ser
Thr
ser
Ser Gly
Ala
Ala
Ala
Ser
Trp
Thr
Ala
Thr
Ala
Thr
Ala
Gly
Pro
Leu
Pro
val
Gly
ser
val
Arg
Glu
Phe
Arg
val
Leu
Ser
Gly
Leu
Pro
Gly
Thr
ser
100
105
110
Ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Leu
Ser
115
120
125
Phe
Arg
val
val
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Ser
Asn
Tyr
Arg
ser
val
130
135
140
Thr
Thr
val
Hi s
Glu
Thr
Ala
Ala
Gly Ala
Ala
Ala
Ala
val
val
val
145
150
155
160
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
Val
Pro
Hi s
Gly
ASn
Thr
Ala
Asp
Glu
Thr
165
170
175
Arg
Met
Phe
val
Asp
Thr
val
Arg
cys
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
180
185
190
Arg
Thr
Ala
Glu
Gin
Leu
Ala
Leu
Ala
Ala
Pro
Arg
Ala
Ala
195 200 205
<210> 85 <211> 396 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pinot Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_001710, GenBank Accession No. CAN76441.1
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(396)
<223> xaa = any amino acid
<400> 85
Met Pro lie Ser Ser Leu Pro Phe Ser Leu Tyr Thr val Thr Pro Asn
15 10 15
Pro Leu Lys Leu lie Thr Thr His Ala His Ala Phe Thr Pro His Thr
20 25 30
His lie Phe Thr Leu Lys Phe Met Ser His Thr Tyr cys Pro His lie
35 40 45
His His lie Thr Ser lie His Tyr Thr His Leu Leu xaa Pro lie Pro
Страница 49
50 55 60
His
Met
Pro
Leu
Gin
Pro
Pro
Leu
pro
Pro
Hi s
Pro
Leu
Pro
Ser
Met
Pro
Ala
Phe
Gl n
His
Leu
Tyr
ser
Thr
ASn
Gin
His
Leu
Gin
val
Ala
Leu
Phe
Ser
Ala
Arg
Gly
Pro
Asn
Arg
Asp
Phe
Asn
Phe
Gin
100
105
110
Asp
Ala
Asp
Leu
Leu
Lys
Leu
Asp
Leu
Ala
Pro
Gly
Ser
Leu
115
120
125
тгр
Ala 130
Ala
Trp
Ser
Pro
ASn
135
Gly
Thr
Asp
Glu
Ala 140
А5П
Tyr
Val
Gly
Glu
Gly
Ser
Pro
Thr
Val
Ala
Met
Ala
Lys
Arg
Gly
Pro
Arg
His
145
150
155
160
Gly
Lys
Tyr
Met
Ala
Phe
Cys
xaa
Met
Tyr
Arg
Asp
ASn
val
Ala
Pro
165
170
175
Lys Gly
val
ASn
Xaa
Ala
val
Ala
Thr
Val
Lys
Thr
Lys
Arg
Thr
180
185
190
Gin
Leu
Lys
Thr
Ser
Leu
Glu
Ala
cys
His
Tyr
Ala
Gly
ASn
195
200
205
lie
ser
Gly
Asn
Gly
Glu
Val
Met
Pro
Gly
Gin
тгр
Glu
Tyr
Gin
210
215
220
val
Gly
Pro
Gly Gin
cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
val
Hi s
Val
225
230
235
240
Pro
Leu
Ser
Ala
val
Gly
Ser
val
val
His
Arg
Phe
Asp
Lys
pro
Gin
245
250
255
Arg
Tyr
Gin
His
val
Lys
ser
cys
Arg
Glu
Asp
Gly
Phe
Glu
260
265
270
Met
Arg
Met
Gly Xaa
Leu
Arg
Asp
val
Asn
Ser
Gly
Leu
Pro
275
280
285
Thr
Ala 290
Thr
Asn
Thr
Gly
Arg 295
Leu
Asp
Met
Gin
Asp 300
Asp
Glu
Arg
His
val
Thr
Arg
cys
Pro
Hi s
Gin
Arg
Gin
ser
Glu
Ser
Lys
Tyr
Thr
Glu
305
310
315
320
Asn
Asn
Asn
ser
Asp 325
Ala
Ser
ser
Lys 330
Ser
Pro
lie
Asn
Gly 335
Pro
Ser
Glu
His
Leu
Lys
Thr
Ala
Ala
Ser
Pro
Lys
Thr
Glu
Ser
340
345
350
val
lie
Asp
Thr
Ser
Lys
Phe
Leu
ASn
Glu
Glu
Asp
Phe
Glu
Gly
Lys
355
360
365
Asp
Glu
Thr
Ser
Ser
Ser
Asn
Gin
val
Gin
Glu
Asp
Glu
ASn
Trp
370
375
380
Glu
Thr
Arg
Phe
Pro
Asn
Thr
Asp
Ala
Gly
Trp
385 390 395
<210> 86 <211> 443 <212> PRT
<213> vitis vinifera <220>
<223> wine grape cultivar Pinot Noir hypothetical protein, clone ENTAV 115, locus tag VITISV_014403, GenBank Accession No. CAN9881.1
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(443)
<223> xaa = any amino acid
<400> 86
Met Pro Ser Ala xaa Lys Ser Ser Thr val Pro Leu ser Leu xaa Gin
15 10 15
Phe Lys Leu Gly Leu Arg His Gly His Arg Val He Pro Trp Gly Asp
20 25 30
Leu Asp Ser Leu Ala Met Leu Gin Arg Gin Leu Asp val Asp lie Leu
35 40 45
val Thr Gly His Thr His Arg Phe Thr Ala Tyr Lys His Glu Gly Gly
Страница 50
50 55 60
val
val
Asn
Pro
Gly
Ser
Ala
Thr
Gly
Ala
Phe
Gly
Ser
lie
Thr
туг
Asp
val
Asn
Pro
Ser
Phe
val
Leu
Met
Asp
Asp
Gly
Leu
Arg
val
val
val
cys
val
Tyr
Glu
Leu
Asp
Glu
Thr
Ala
Asn
lie
lie
100
105
110
Lys
Glu
Leu
His
Ala
Arg
Lys
lie
ser
Phe
Gly
Thr
Lys
Ser
Met
lie
115
120
125
xaa
Cys
Leu
Leu
Leu
Lys
Arg
Arg
ser
Thr
Pro
Lys
Phe
Arg
Arg
Lys
130
135
140
Lys
Leu
Phe
Leu
Phe
Gin
Cys
Arg
val
Gin
Met
Thr
Leu
Thr
Leu
Thr
145
150
155
160
ASn
Leu
Ala
val
Ser
Gly
Ala
Gin
Thr
Leu
Gin
val
Asp
Gin
Trp
165
170
175
Thr
val
Cys
Ala
Leu
Phe
Met
Thr
Arg
Arg
Asp
His
Leu
Asp
180
185
190
Lys
Ala
Arg
Phe
Leu
Asp
Phe
Lys
Asp
Met
Gly
Lys
Leu
Leu
Ala
Asp
195
200
205
Ala
Ser
Gly
Leu
Arg
LyS
Ala
Leu
Ser
Gly
Gly
xaa
Val
Thr
Ala
Gly
210
215
220
Met
Ala
Phe
Asp
Thr
Met
Arg
His
lie
Arg
Pro
Asp
val
Pro
Thr
225
230
235
240
val
cys
Val
Gly
Leu
Ala
Ala
val
Ala
Met
Ala
Lys
Arg
Gly
Pro
245
250
255
Arg
His
Gly
Lys
Tyr
Met
Ala
Phe
Cys
Pro
Met
Tyr
Arg
Asp
ASn
val
260
265
270
Ala
Pro
Lys
Gly
val
Asn
val
Ala
Val
Val
Thr
val
Lys
Thr
Lys
Arg
275
280
285
Thr
lie
Gin
Leu
Lys
Thr
ser
Leu
Glu
Ala
cys
His
Tyr
Ala
Gly
290
295
300
Asn
lie
Ser
Gly
lie Asn Gly
Glu
val
Met
Pro
Gly
Gin
Trp
Glu
305
310
315
320
Tyr
Gin
val
Gly
Pro
Gly Gin
cys
Ser
ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
val
325
330
335
His
val
Pro
Leu
Ser
Ala
val
Gly
Ser
val
Val
His
Arg
Phe
Asp
Lys
340
345
350
pro
Gin
Arg
Tyr
Gin
Hi s
val
Lys
ser
cys
Arg
Glu
Asp
Gly
355
360
365
Phe
Glu
Met
Arg
Met
Gly Arg
Leu
Arg
Asp
val
Asn
Ser
Gly
370
375
380
Leu
Pro
Thr
Ala
Thr
Asn Thr Gly
Arg
Leu
Asp
Met
Gin
Asp
Asp
Glu
385
390
395
400
xaa
His
val
Thr
Arg
Cys
Pro
His
Gin
Arg
Gin
Ser
Glu
Ser
Lys
Tyr
405
410
415
Thr
Glu
Asn
Asn
Asn
Ser
Asp
Ala
Ser
ser
Val
Lys
Ser
Pro
Asn
420
425
430
Gly
Pro
Ser
Glu
His
Leu
LyS
Thr
Ala
Ala
xaa
435 440
<210> 87
<211> 95
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<223> rice Indica Group, cultivar Pokkali, capipl protein, clone OSR-385-428-D5, GenBank Accession No. ABR25904.1
<400> 87
Glu lie Gly ser Val Arg Glu val Asn val Lys Thr Gly Leu Pro Ala
15 10 15
Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu Leu Leu Asp Asp Asp Glu His lie
20 25 30
Leu Ser val Lys Phe val Gly Gly Asp His Arg Leu Arg Asn Tyr Ser
35 40 45
Ser lie Val Thr val His Pro Glu Ser lie Asp Gly Arg Pro Gly Thr
Страница 51
50 55 60
Leu val lie Glu Ser Phe Val val Asp Val Pro Asp Gly Asn Thr Lys 65 70 75 80
Asp Glu Thr cys Tyr Phe Val Glu Ala Val lie Lys Cys Asn Leu 85 90 95
<210> 88 <211> 191 <212> PRT <213> Zea mays
<220>
<223> maize strain B73 unknown protein, clone ZM_BFc0034o07, GenBank Accession No. ACF84624.1
<400> 88
Met
val
val
Glu
Met
Asp Gly Gly
val
Gly Val
Ala
Ala
Ala
Gly Gly
Gly Gly
Ala
Gin
Thr
Pro
Ala
Pro
Pro
Pro
Pro
Arg
Arg
Trp
Arg
Leu
Ala
Asp
Glu
Arg
Cys
Asp
Leu
Arg
Ala
Met
Glu
Thr
Asp
Tyr
val
Arg
Arg
Phe
His
Arg
His
Glu
Pro
Arg
Asp
Hi s
Gin
cys
ser
Ser
Ala
val
Ala
Lys
His
lie
Lys
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
Ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Glu
Met
Lys
Gly
Asn
Glu
lie Gly
ser
val
Arg
Glu
Val
Asn
val
Lys
100
105
110
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Arg
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
115
120
125
Asp
Asp
Glu
Arg
Leu
Ser
val
Arg
Phe
val
Gly Gly Asp
Hi s
Arg
130
135
140
Leu
Gin
val
Cys
Ser
val
Leu
His
Leu
ser
Phe
Cys
Ala
Ala
His
145
150
155
160
Ala
Arg
Tyr
Phe
Ala
His
His
Leu
Lys
cys
val
Leu
Glu
Phe
Leu
Cys
165
170
175
Gin
Met
Hi s
Leu
Asp
val
Leu
Pro
cys
Asp
Asp
Ala
Leu
Glu
180
185
190
<210> 89 <211> 239 <212> PRT
<213> Oryza sativa <220>
<223> rice Japonica Group, cultivar Nipponbare, hypothetical protein, locus tag Os.l_020681, GenBank Accession No. EAZ37198.1
<400> 89
Met Asn Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly val Ala Ala Gly Arg Leu
15 10 15
Pro Ala val Ser Leu Gin Gin Ala Gin Trp Lys Leu Val Asp Glu Arg
20 25 30
Cys Glu Leu Arg Glu Glu Glu Met Glu Tyr Val Arg Arg Phe His Arg
35 40 45
His Glu lie Gly Ser Asn Gin Cys Asn Ser Phe lie Ala Lys His Val
50 55 60
Arg Ala Pro Leu Gin Asn val Trp ser Leu val Arg Arg Phe Asp Gin 65 70 75 80
Pro Gin lie Tyr Lys Pro Phe val Arg Lys cys val Met Arg Gly Asn
85 90 95
val Glu Thr Gly ser val Arg Glu lie lie val Gin ser Gly Leu Pro 100 105 110
Страница 52
Ala Thr Arg
Ser
Glu
Arg
Leu
Glu
Phe
Leu
Asp
Asp
ASn
Glu
Tyr
115
120
125
lie Leu Arg
Val
Lys
Phe
lie Gly Gly Asp
His
Met
Leu
Lys
Lys
Arg
130
135
140
lie Pro Lys
Lys
Thr
Tyr
Ala
lie
Ser
Ser
Arg
Thr
cys
Ser
Asp
Ser
145
150
155
160
Ala lie He
Ala
val
Gly Gin
Ser
Asn
Cys
Ala
Pro
Glu
Thr
Ala
165
170
175
Met Asn Gly
Gly
val
Ser
Gin
Pro
тгр
Leu
Leu
Leu
Ala
Phe
180
185
190
Phe ser ser
Pro
Ser
Asn
Gin
Thr
Asn
Pro
Asp
ser
Leu
Arg
Asp
Met
195
200
205
His Pro Gly
Ser
Trp
Phe
Gin
Leu
Leu
Val
Leu
Ala
Met
Phe
Thr
210
215
220
Cys ser Lys
Gly
Ser
val
Leu
Pro
Pro
Ser
Glu
Lys
val
Asn
val
225
230
235
<210> 90
<211> 188
<212> PRT
<213> Zea mays
<220>
<223> maize
GRMZM2G154987_P01 protein
<400> 90
Met Glu Pro
Hi s
Met
Glu
Ser
Ala
Leu
Arg
Gin
Gly
Leu
ser
Glu
Ala
Glu Gin Arg
Glu
Leu
Glu
Gly
val
val
Arg
Ala
Hi s
His
Thr
Phe
Pro
Gly Arg Ala
Pro
Gly
Thr
Cys
Thr
ser
Leu
Val
Thr
Gin
Arg
val
Asp
Ala Pro Leu
Ala
Ala
val
Trp
Pro
val
Arg
Gly
Phe
Gly
ser
Pro
Gin Arg Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Ser
Cys
Asp
Leu
Lys
Ala
Gly Asp
Gly Ala Thr
val
Gly
ser
val
Arg
Glu
val
Thr
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro Ala ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
His
Arg
100
105
110
His lie Leu
Ser
Phe
Arg
val
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu
Arg
Asn
115
120
125
Tyr Arg Ser
val
Thr
Ser
val
Thr
Glu
Phe
Gin
Pro
Gly
Pro
Tyr
cys
130
135
140
val val Leu
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
Asn
Thr
Glu
145
150
155
160
Glu Asp Thr
Arg
Met
Phe
Thr
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
165
170
175
Lys Leu Ala
Ala
Ala
Thr
Ser
Ser
Ser
Ala
Asn
180
185
<210> 91
<211> 205
<212> PRT
<213> zea mays
<220>
<223> maize
GRMZM2G134731_PQ1 protein
<400> 91
Met Asp Gin
Gin
Gly Ala Gly Gly Asp val
Glu
val
Pro
Ala
Gly
Leu
Gly Leu Thr
Ala
Ala
Glu
Tyr
Glu
Gin
Leu
Arg
Pro
Thr
val
Asp
Ala
His His Arg
Tyr
Ala
val
Gly Glu
Gly Gin
cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Страница
Gin
Arg
lie
His
Ala Pro Pro Ala Ala
Val
Trp
Ala lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
cys
Pro
Gin Val Tyr Lys His
Phe
Arg ser
Cys
Ala
Val
Arg
Pro
Asp
Pro
Asp Ala Gly Asp Ala 85
Leu 90
Arg
Pro Gly
Arg
Leu 95
Arg
Glu
val
Cys
val
lie Ser Gly Leu Pro
Ala
Ser
Thr Ser
Thr
Glu
Arg
100
105
110
Leu
Asp
His
Leu
Asp Asp Ala Ala Arg
Val
Phe Gly Phe
Ser
lie
Thr
115
120
125
Gly Gly Glu
His
Arg Leu Arg Asn Tyr
Arg
Ser
val Thr
Thr
val
Ser
130
135
140
Glu
Leu
Ala
Gly
Pro Gly lie Cys Thr
val
Val
Leu Glu
Ser
Tyr
Ala
145
150
155
160
val
Asp
val
Pro
Asp Gly ASn Thr Glu
Asp
Asp
Thr Arg
Leu
Phe
Ala
165
170
175
Asp
Thr
val
Arg Leu Asn Leu Gin
Lys
Leu
Lys Ser
val
Ala
Glu
180
185
190
Ala
ser
Thr 195
Ser
Ser Ser Ala Pro Pro 200
Pro
Pro
Ser Glu 205
<210> 92 <211> 220 <212> PRT <213> zea mays
<220>
<223> maize GRMZM2G144224_P01 protein <400> 92
Met Pro
cys
Gin
Ala
Ser
Ser
Pro
Gly
Gly Met Pro
His
Gin
His
Gly Arg
Gly
Arg
Val
Leu Gly
Gly
Gly
val
Gly cys Ala
Ala
Glu
val
Ala Ala
Ala
Val
Ala
Ala
Ser
Ala
Gly
Gly
Met
Arg Cys
Gly
Ala
His
Asp Gly
Glu
val
Pro
Ala
Glu
Ala
Ala
Arg
His
His Glu
His
Ala
Ala
Ala Gly
Pro
Gly
Arg
Cys
Cys
Ser
Ala
val
Val
Gin His
val
Ala
Ala
Pro Ala
Ala
Ala
Val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe Asp
Gin
Pro
Gin
val туг
Lys
Arg
Phe
val
Arg
Ser
cys
Ala
Leu
Leu Ala
Gly
Asp Gly
100
105
110
Gly val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
Arg
val
Val
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
115
120
125
Ala ser
ser
Arg
Glu
Arg
Leu
Glu
Val
Leu
Asp
Asp Glu
Ser
His
Val
130
135
140
Leu Ser
Phe
Arg
val
Val
Gly
Gly
Glu
His
Arg
Leu Arg
Asn
Tyr
Leu
145
150
.155
160
Ser val
Thr
Thr
val
Hi s
Pro
Ser
Pro
Ala
Ala
Pro Asp
Ala
Ala
Thr
165
170
175
val val
val
Glu
ser
Tyr
val
val
Asp
Val
Pro
Pro Gly
Asn
Thr
pro
180
185
190
Glu Asp
Thr
Arg
val
Phe
Val
Asp
Thr
val
Lys Cys
ASn
Leu
Gin
195
200
205
Ser Leu
Ala
Thr
Thr
Ala
Glu
Lys
Leu
Ala
Ala
val
210
215
220
<210> 93 <211> 221 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma01g02290.1 protein
Страница 54
<400> 93
Met Glu
Lys
Ala
Glu
Ser
ser
Ala
Ser
Thr
Ser
Glu
Pro
Asp
Ser
Asp
Glu Asn
His
His
Arg
His
Pro
Thr
Asn
His
His
ASn
Pro
Pro
ser
Gly Leu
Thr
Pro
Leu
Glu
Phe
Ala
Ser
Leu
Pro
Ser
Val
Ala
Glu
His His
Ser
Tyr
Leu
val
Gly Ser Gly Gin
Cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin Arg
val
Gin
Ala
Pro
Pro
Asp
Ala
val
тгр
Ser
val
Val
Arg
Arg
Phe Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
His
Phe
lie
Lys
Ser
cys
Ala
val
Lys Glu
Pro
Phe
His
Met
Ala
val
Gly val
Thr
Arg
Asp
val
Asn
val
100
105
110
lie Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Leu
115
120
125
Asp Asp
Arg
cys
Val
Thr Gly
Phe
ser
Gly
Gly
Glu
His
130
135
140
Arg Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
Val
Thr
Thr
val
Hi s
Ser
Phe
Glu
Asp
145
150
155
160
Asp Ala
Asp
Asp
Gly
Lys
Tyr
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
165
170
175
Val Asp
Val
Pro
Asp
Gly Asn Thr Glu Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
180
185
190
Asp Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ser
Val
Thr
Glu
195
200
205
Gly Thr
ASn
Arg
Asp
Gly Asp Gly
Lys
Ser
His
Ser
Arg
210
215
220
<210> 94
<211> 214
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma01gl2970,
. 1 protein
<400> 94
Met Glu
Lys
Thr
Hi s
Ser
Ser
Ser
Ala
Glu
Glu
Gin
Asp
Pro
Thr
Arg
Arg His
Leu
Asp
Pro
Pro
Pro
Gly
Leu
Thr
Ala
Glu
Glu
Phe
Glu
Asp
Leu Lys
Pro
Ser
val
Leu
Glu
Hi s
His
Thr
Tyr
Ser
Val
Thr
Pro
Thr
Arg Gin
Ser
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
His
Ala val
Trp
ser
val
val
Arg
cys
Phe
Asp
Asn
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His Phe
Lys
ser
cys
Hi s
val
Lys
Glu
Gly
Phe
Gl n
Leu
Ala
val
Gly Ser
Thr
Arg
Asp
val
His
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
100
105
110
Ser Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Leu
Asp
Asp
Asp
Arg
His
val
lie Gly
115
120
125
Phe Thr
val
Gly
Gly
Asp
Hi s
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
130
135
140
Thr Ser
val
Hi s
Gly
Phe
Glu
cys
Asp
Gly
Lys
тгр
Thr
val
val
145
150
155
160
Leu Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
165
170
175
Thr Arg
Leu
Phe
Ala
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
180
185
190
Ala Ser
val
Ser
Glu
Gly
Met
cys
Gly
Asp
Gly Asp
Gly
Asp
Gly Asp
195
200
205
Gly Lys
Gly
ASn
Lys
Ser
Страница 55
210
<210> 95 <211> 216 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma01g31320.1 protein <400> 95
Met
Leu
Gin
Asn
Ser
Ser
Met
Ser
Ser
Leu
Leu
Leu His
Arg
Asn
Gly
Gly
Gly
Gly
Ala
Thr
Thr
Ala
Thr
Asn
cys
His Asp
Thr
Val
Phe
Met
Thr
val
Pro
Asp
Gly val
Ala
Arg
Tyr
His
Thr His
Ala
Val
Ala
Pro
Asn
Gin
cys
cys
Ser
ser
Val
Ala
Gin
Glu
lie Gly
Ala
Ser
val
Ala
Thr
val
Trp
ser
val
Leu
Arg
Arg
Phe
Asp
Asn Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Ser
Cys
His
val
Gly Gly Asp
Gly
Asp
Val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
His
val
Ser
Gly
Leu Pro
Ala
Ala
Arg
100
105
110
Ser
Thr
Gl u
Arg
Leu
Gl u
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg His
Val
Ser
115
120
125
Phe
Ser
Val
Val
Gly
Gly Asp
Hi s
Arg
Leu
Ala
ASn Tyr
Arg
Ser
val
130
135
140
Thr
Thr
Leu
Hi s
Pro
Thr
Ala
Ser
Ser
Ala
Ser
Gly Gly
Cys
Ser
Gly
145
150
155
160
Thr
val
val
val
Glu
ser
Tyr
val
val
Asp
val
Pro Pro
Gly
Asn
Thr
165
170
175
Arg
Glu
Asp
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
val Lys
cys
ASn
Leu
180
185
190
Gin
Ser
Leu
Ala
Gin
Thr
Ala
Glu
ASn
Leu
Thr
Leu Arg
Lys
ASn
Asn
195
200
205
ASn
Asn 210
Asp
Tyr
Lys
cys
cys 215
Ser
<210> 96 <211> 208 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma02g42990.1 protein <400> 96
Met
Thr
Ser
Leu
Gin
Phe
Hi s
Arg
Phe
Asn
Pro
Ala
Thr
Asp
Thr
Ser
Thr
Ala
Ala
Asn
Gly
val
Asn
Cys
Pro
Lys
Pro
pro
ser
Thr
Leu
Arg
Leu
Leu
Ala
LyS
val
Ser
Leu
Ser
val
Pro
Glu
Thr
val
Ala
Arg
His
His
Ala
Hi s
Pro
val
Gly
Pro
Asn
Gin
cys
cys
Ser
val
val
Gin
Ala
Asp
Ala
Pro
val
Ser
Ala
val
Trp
Pro
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
ASn
Pro
Gin
Ala
туг
Lys
Hi s
Phe
Val
Lys
ser
cys
Hi s
val
Val
Ala
Ala
Ala
Gly
Gly
Gly
Glu
Asp
Gly
lie
Arg
val
Gly
Ala
Leu
100
105
110
Arg
Glu
val
Arg
val
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
val
ser
ser
Thr
Glu
115
120
125
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
His
val
Met
ser
Phe
ser
val
Страница 56
130 135 val Gly Gly Asp His Arg Leu Arg Asn Tyr 145 150 His Gly Asp Gly Asn Gly Gly Thr val val 165 170 Asp Val Pro Pro Gly Asn Thr Lys Glu Glu
180 185 Thr lie val Arg Cys Asn Leu Gin ser Leu 195 200
<210> 97 <211> 176 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma04g05380.1 protein <400> 97
Ala
Tyr
Pro
val
Leu
Gly
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu Phe Ser
Glu
Leu
Glu
Ser
lie
Asn
Thr
His
His
Lys
Phe
Glu
Pro Ser Pro
Glu
Cys
Ser
Ser
lie
Ala
Gin
Arg
lie
Asp
Ala
Pro Ala His
Thr
Val
Trp
Pro
Leu
val
Arg
ser
Phe
Glu
ASn
Pro
Gin
Lys Tyr LyS
Hi s
Phe
val
Lys
Ser
Cys
Asn
Met
Arg
Ser Gly
Asp
Gly
Gly Val Gly 75
Ser
Arg
Glu
val
Thr
val
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ser Thr ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu 100
Asp
Asp
Asp
Lys
His 105
Leu
Leu Ser Phe
Arg 110
Val
Val
Gly Gly Glu
His
Arg
Leu
Hi s
ASn
Tyr
Arg
Ser val Thr
Ser
Val
Asn
115
120
125
Glu
Phe
Lys
Asn
Pro
Asp
ASn Gly
Lys
val
Tyr Thr lie
Val
Leu
Glu
130
135
140
Ser
Tyr
val
val
Asp
lie
Pro
Glu
Gly
Asn
Thr Gly val
Asp
Thr
LyS
145
150
155
160
Met
Phe
val
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu Gin Lys
Leu
Gly Glu
165 170 175
<210> 98 <211> 172 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma06g05440.1 protein <400> 98
Glu
Phe
Thr
Glu
Leu
Glu
Ser
Thr
ASn
Thr
Hi s
Hi s
Lys
Phe
Glu
Ala
Ser
Pro
Glu
Cys
Ser
Ser
lie
Ala
Gin
Arg
Asp
Ala
pro
Ala
His
Thr
val
тгр
Pro
Leu
val
Arg
Ser
Phe
Glu
ASn
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Ser
cys
ASn
Met
Arg
Ser
Gly
Asp Gly
Gly val
Gly ser
Arg
Glu
val
Thr
val
val
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Asp
ASn
His
Leu
Leu
Ser
Phe
Arg
Val
val
Gly Gly Glu
His
Arg
Leu
His
ASn
Tyr
Arg
100
105
110
Ser
val
Thr
Ser
Val
Asn
Glu
Phe
Lys
Arg
Pro
Asp
ASn
Gly
Lys
val
Страница 57
140
Arg
Ser
Val
Thr
Thr
Leu
155
160
Glu
ser
Tyr
Val
val
175
Thr
cys
val
Phe
Val
Asp
190
Ala
Gin
He 205
Ala
Glu
Thr
115 120 125
Туг Thr lie val Leu Glu Ser Tyr val Val Asp lie Pro Glu Gly Asn
130 135 140
Thr Gly val Asp Thr Lys Met Phe val Asp Thr val val Lys Leu Asn 145 150 155 160
Leu Gin Lys Leu Gly Glu Val Ala Met Ala Thr Asn 165 170
<210> 99 <211> 191 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma06gl3150.1 protein <400> 99
Met Thr Glu Leu ser ser Arg Glu val Glu Tyr lie Arg Arg His His
15 10 15
Ser Lys Ala Ala Glu Asp Asn Gin cys Ala Ser Ala Leu val Lys His
20 25 30
lie Arg Ala Pro Leu Pro Leu val Trp Ser Leu val Arg Arg Phe Asp
35 40 45
Glu Pro Gin Lys Tyr Lys Pro Phe val Ser Arg Cys Val Val Arg Gly
50 55 60
Asn Leu Glu lie Gly Ser Leu Arg Glu Val Asp Val Lys Ser Gly Leu 65 70 75 80
Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu lie Leu Asp Asp Asn His
85 90 95
His lie Leu Ser val Arg lie lie Gly Gly Asp His Arg Leu Arg Asn
100 105 110
Tyr Ser Ser lie Met ser Leu His Pro Glu lie val Asp Gly Arg Pro
115 120 125
Gly Thr Leu val lie Glu Ser Phe val val Asp lie Pro Glu Gly Asn
130 135 140
Thr Lys Asp Glu Thr cys Tyr Phe val Glu Ala Leu lie Lys Cys Asn 145 150 155 160
Leu Lys Ser Leu Ala Asp Val Ser Glu Gly Leu Thr Leu Gin Asp His
165 170 175
Thr Glu Pro lie Asp Arg Lys Tyr Glu Leu Leu lie Thr Arg Gly 180 185 190
<210> 100 <2U> 185 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma07g06270.1 protein <400> 100
Met Asn Gly Gly Glu Ser Tyr Gly Ala lie Glu Thr Gin Tyr He Arg
15 10 15
Arg His His Lys His Glu Pro Arg Glu Asn Gin Cys Thr Ser Ala Leu
20 25 30
val Lys His He Arg Ala Pro val His Leu Val тгр Ser Leu val Arg
35 40 45
Arg Phe Asp Gin Pro Gin Lys Tyr Lys Pro Phe val Ser Arg Cys lie
50 55 60
Met Gin Gly Asp Leu Gly lie Gly Ser val Arg Glu val Asn val Lys 65 70 75 80
Ser Gly Leu Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu Gin Leu Asp
85 90 95
Asp Glu Glu His lie Leu Gly lie Arg lie val Gly Gly Asp His Arg
100 105 110
Leu Arg Asn Tyr Ser Ser lie lie Thr val His Pro Glu val He Asp
Страница 58
115
120
125
Gly Arg Pro Gly
Thr
Met
val
Glu
Ser
Phe
val
Val
Asp
val
Pro
130
135
140
Asp Gly Asn Thr Arg Asp Glu Thr Cys Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
145
150
155
160
Arg Cys Asn
Leu
ser
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
Glu
Arg
Met
Ala
val
165
170
175
Gin Gly Arg Thr Asn
Pro
Asn
His
180
185
<210> 101
<211> 178
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma07gl9120.1 protein
<400> 101
Met Ser Pro
Asn
ASn
Pro
Ser
Thr
Val
ser
Asp
Ala
val
Ala
Arg
His His Thr
Hi s
val
val
Ser
Pro
Hi s
Gin
cys
cys
Ser
Ala
val
val
Gin Glu lie
Ala
Ala
Pro
val
Ser
Thr
val
тгр
ser
val
val
Arg
Arg
Phe Asp Asn
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
Ser
cys
Hi s
val
lie Leu Gly Asp
Gly
Asp
Val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
Arg
val
Ser Gly Leu
Pro
Ala
Ala
Val
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
val
Leu
Asp
Asp Glu Arg
His
val
lie
Gly Phe
Ser
Met
Val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Ser Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Leu
Hi s
Pro
Arg
ser
Ala
Thr
115
120
125
Asp Thr Val
val
val
Glu
Ser
Tyr
Val
val
Asp
val
Pro
Ala
Gly Asn
130
135
140
Thr Thr Glu
Asp
Thr
Arg
Val
Phe
val
Asp
Thr
Leu
Arg
Cys
Asn
145
150
155
160
Leu Gin Ser
Leu
Ala
Lys
Phe
Ala
Glu
Asn
Leu
Thr
Asn
Lys
Leu
His
165
170
175
Gin Arg
<210> 102
<211> 246
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma08g36770.1 protein
<400> 102
Met ser Arg
Ser
His
Asn
Lys
Arg
Lys
Pro
Phe
Ser
Phe
lie
Phe
Lys
lie Thr Leu
Leu
Glu
Leu
Leu
Ser
ser
Leu
Leu
Ser
Ser
ser
Leu
Arg
Phe Ala Met
Asp
Lys
Thr
His
Ser Gly Glu
Glu
Gin
Asp
Pro
Asn
Pro
Thr His Pro
Thr
Arg
Asn
His
Leu
Asp
pro
pro
Pro
Gly
Leu
Thr
Pro
Glu Glu Phe
Glu
Asp
Leu
Lys
Pro
Ser
val
Leu
Glu
His
His
Thr
Tyr
Ser val Thr
Pro
Thr
Arg
Gin
cys
Ser
ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
His Ala Pro
Pro
His
Thr
val
Trp
Thr
val
val
Arg
Cys
Phe
Asp
А5П
100
105
110
Страница
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
lie
Lys
ser
Cys His Val
Lys Glu Gly
115
120
125
Phe
Gin
Leu
Ala
val
Gly
Ser
Thr
Arg
Asp
Val His val
lie ser Gly
130
135
140
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp Leu Leu
Asp Asp Asp
145
150
155
160
Arg
His
Val
Gly
Phe
Thr
val
Gly
Gly Asp His
Arg Leu Arg
165
170
175
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
His
Gly
Phe Glu Arg
Asp Gly Lys
180
185
190
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
туг
val
Val Asp val
Pro Glu Gly
195
200
205
Asn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
Asp Thr Val
val Lys Leu
210
215
220
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ser
val
Thr
Glu
Gly Met Cys
Gly Asp Ser
225
230
235
240
Asp Gly
Lys
Gly
Asn
ASn
245
<210> 103 <211> 223 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma09g33700.1 protein <400> 103
Met
Glu
Lys
Ala
Glu
Ser
Ser
Ala
Ser
Thr
Ser
Glu
Pro
Asp
Ser
Asp
Asp
Asn
His
His
Arg
His
Pro
Thr
Asn
His
His
Leu
Asn
Pro
Pro
Ser
Gly
Leu
Thr
Pro
Leu
Glu
Phe
Ala
Ser
Leu
val
Pro
Ser
val
Ala
Glu
His
Hi s
Ser
Tyr
Leu
val
Gly
Pro
Gly
Gin
cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
val
His
Ala
pro
Pro
Asp
Ala
Val
Trp
Ser
Phe
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
LyS
His
Phe
Lys
ser
Cys
Ala
Val
Lys
Glu
Pro
Phe
His
Met
Ala
val
Gly
val
Thr
Arg
Asp
val
ASn
val
100
105
110
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ala
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Phe
Leu
115
120
125
Asp
Asp
val
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
Gly Glu
His
130
135
140
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Ser
Phe
Asp
Asp
145
150
155
160
Asp
Asn
Ala
Ser
Ala
Asp Gly
Lys
туг
Thr
Val
Val
Leu
Glu
Ser
165
170
175
Tyr
val
val
Asp
val
Pro
Asp
Gly
ASn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Leu
180
185
190
Phe
Ala
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ser
val
195
200
205
Thr
Glu
Gly
Thr
Asn
Gly Asp
Gly
Asp
Gly
Lys
Pro
His
Ser
Arg
210 215 220
<210> 104 <211> 229 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymallg35670.1 protein <400> 104
Страница 60
Met Pro
Ser
Ser
Leu
His
Phe
Asp
Arg
Phe
Asn
Pro
Thr
His
Ala
Ala Thr
Thr
val
Ala
Ala Asn Gly val
Asn
Cys
Pro
Lys
Gin
Pro
Gin Ala
pro
Pro
Ser
Ser
Thr
Ala
Ala
Arg
Arg
Leu
val
val
Pro
Ser
Leu Ser
Ser
Gly
Arg
Gly
Ala
Ala
Pro
Asp
Thr
val
Ala
Leu
His
His Ala
His
val
val
Asp
Pro
Asn
Gin
Cys
Cys
Ser
val
Thr
Gin
His lie
ASn
Ala
pro
val
Ser
Ala
val
Trp
Ala
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp Asn
Pro
Gin
Gl у
Tyr
Lys
ASn
Phe
Val
Arg
ser
cys
Hi s
val
lie
100
105
110
Thr Gly
Asp
Gly
Arg
val
Gly Ala val
Arg
Glu
val
Arg
val
val
115
120
125
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Glu
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
lie
Leu
Asp
130
135
140
Asp Glu
Arg
His
val
Ser
Phe
Ser
Met
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
145
150
155
160
Leu Arg
Asn
Tyr
Gin
Ser
val
Thr
Thr
Leu
Hi s
Ala
Asn
Gly
Asn Gly
165
170
175
Thr Leu
val
Glu
Ser
Tyr
Val
val
Asp
Val
Pro
Gin
Gly
А5П
Thr
180
185
190
Lys Glu
Glu
Thr
Cys
val
Phe
val
Asp
Thr
val
Arg
cys
ASn
Leu
195
200
205
Gin ser
Leu
Ala
Gl n
lie
Ala
Glu
ASn
Arg
Thr
Asn
ASn
cys
Glu
His
210
215
220
Thr Ala
Gin
Hi s
cys
225
<210> 105
<211> 191
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal3g08120,
.1 protein
<400> 105
Met Asn
Gly
lie
Gly
ASn
Asp
Gly
Gly
Gly
Gly
Leu
ser
ASn
val
Glu
Met Glu
Tyr
Arg
Arg
His
Hi s
Arg
His
Glu
Pro
Gly
Glu
Asn
Gin
Cys Gly
Ser
Ala
Leu
val
Lys
His
Arg
Ala
Pro
val
Pro
Gin
val
Trp ser
Leu
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gl n
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
val ser
Arg
cys
val
val
Arg
Gly
ASn
Leu
Glu
Gly
ser
Leu
Arg
Glu val
Asp
Val
Lys
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu Glu
Leu
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
His
Leu
Leu
Ser
lie
Arg
lie
100
105
110
Gly Gly
Asp
His
Arg
Leu
Arg
ASn
Tyr
ser
Ser
Met
Ser
Leu
Hi s
115
120
125
Pro Glu
Asp
Gly
Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
val
Glu
Ser
Phe
130
135
140
val val
Asp
val
Pro
Glu
Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
145
150
155
160
val Glu
Ala
Leu
Lys
Cys
ASn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
val
Ser
165
170
175
Glu Gly
Ala
Val
Gin
Asp
Arg
Thr
Glu
pro
Asp
Arg
180
185
190
<210> 106
Страница 61
<211> 169 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal4g06100.1 protein <400> 106
Met
val
Ala
Arg
His
His
Ala His
Ala
val
Gly
Pro
ASn
Gin
cys
cys
Ser
Phe
val
Gin
Ala
lie Asp
Ala
Pro
val
Ser
Ala
val
Trp
Pro
val
val
Arg 35
Arg
Phe
Asp
Asn Pro 40
Gin
Ala
Tyr
Lys
His 45
Phe
val
Lys
ser
Cys
His
val
val
Ala
Ala Gly
Gly
Ala
Gly
Gly
Asp
Gly
Gly
His
val
Gly
Ala
Leu
Arg
Glu Val
Arg
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
val
Ser
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu Glu
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
His
val
Met
Ser
Phe
Ser 100
val
val
Gly Gly
Asp 105
His
Arg
Leu
Arg
Asn 110
Tyr
Arg
ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Gly Asp
Gly
Ser
ASn
Gly
Gly
Thr
val
val
115
120
125
Glu
Ser
Tyr
val
val
Asp lie
Pro
Ala
Gly
Asn
Thr
Lys
Glu
Glu
130
135
140
Thr
Cys
val
Phe
val
Asp
Thr He
val
Arg
cys
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
145
150
155
160
Ala
Gin
Met
Ala
Glu
ASn
Met Gly
Ser
165
<210> 107 <211> 210 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal4gl0730.1 protein <400> 107
Met
Thr
Leu
Pro
His
Ser
Asn
Asn
Lys
Ser
Ser
Asn
His
Lys
Phe
Ala
His
Gin
ASn
Tyr
Met
Ala
Ser
Glu
Thr
Hi s
Hi s
His
Val
Gin
Gly Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Leu
Thr
Lys
Leu
Glu
pro
Lys
Lys
Tyr
Hi s
Leu
Phe
Glu
Gin
ser
Pro
Asn
Thr
Cys
Phe
ser
Thr
Tyr
Arg
Glu
Ala
pro
Ala
Lys
Ala
val
Trp
Pro
Phe
Val
Arg
Ser
Phe
Asp
Asn
Pro
Gin
Lys
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Gly
Cys
Asn
Met
Arg
Gly
Asp
Gly
Gly
val
Gly
ser
Arg
Glu
Val
Thr
val
Val
ser
100
105
110
Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
115
120
125
Asp
Lys
His
val
Leu
Ser
Phe
Arg
val
Val
Gly
Gly
Glu
His
Arg
Leu
130
135
140
Lys
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
Asn
Glu
Phe
Asn
Lys
Glu
Gly
145
150
155
160
Lys
Val
Tyr
Thr
lie
Val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
Asp
lie
Pro
Glu
165
170
175
Gly ASn
Thr
Glu
Glu
Asp
Thr
Lys
Met
Phe
val
Asp
Thr
val
Val
Lys
180
185
190
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Gly
Val
Val
Ala
Met
Ala
Ser
Ser
Met
Hi s
195 200 205
Gly Gin
Страница 62
210
<210> 108 <211> 193 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal4g30260.1 protein
<400> 108
Met
Asn
Arg
Gly Asn Gly
Gly Gly
Gly
Gly Gly Gly
Leu
Ser
ASn
val
Glu
Met
Glu
Tyr
Arg
Arg His
His
Arg
Hi s
Glu
Pro
Gly Glu
Asn
Gin
Cys
Gly
Ser
Ala
Leu
Val Lys
His
Arg
Ala
Pro
val
Pro
Gin
val 50
Trp
Ser
Leu
val
Arg 55
Arg Phe
Asp
Gin
Pro 60
Gin
Lys
Tyr
Lys
Pro
Phe
lie
Ser
Arg
cys
Val
Val Arg
Gly
ASn
Leu
Glu
Gly Ser
Leu
Arg
Glu
val
Asp
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Leu
Asp
Asp Asn
Glu
Hi s
Leu
Ser
Arg
100
105
110
lie
Gly
Gly
Asp
His
Arg
Leu Arg
Asn
Tyr
Ser
Ser
Met
Ser
115
120
125
Leu
His
Pro
Glu
Asp
Gly Arg
Pro
Gly Thr
Leu
val
Glu
130
135
140
Ser
Phe
val
val
Asp
val
Pro
Glu Gly
ASn
Thr
Lys
Asp
Glu
Thr
Cys
145
150
155
160
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
Leu
lie
Lys Cys
Asn
Leu
Lys
Ser
Leu
Ala
Asp
165
170
175
val
Ser
Glu
Gly
Leu
Ala
val
Gin Asp
cys
Thr
Glu
Pro
Asp
Arg
180 185 190
<210> 109 <211> 188 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal7g34800.1 protein
<400> 109
Met
Ala
ser
Glu
Thr
His
His
Hi s
Val
Gin
Gly
Leu Thr Pro
Glu
Glu
Leu
Thr
Gin
Leu
Glu
Pro
Lys
Lys
Tyr
His Leu Phe
Glu
Ala
Ser
Ser
Asn
Lys
Cys
Phe
ser
Thr
His
Arg lie Glu
Ala
Pro
Ala
Ser
Ser
val
Trp
Pro
Leu
val
Arg
Asn
Phe
Asp ASn РГО
Gin
Lys
Tyr
Lys
His
Phe
lie
Lys
Gly
Cys
Asn
Met
Lys
Gly Asp Gly
Ser
Val
Gly
Ser
Arg
Glu
val
Thr
val
val
ser
Gly
Leu Pro Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
Asp
Asp
Asp
Lys His val
Leu
Ser
100
105
110
Phe
Arg
val
Val
Gly
Gly
Glu
His
Arg
Leu
Gin
Asn Tyr Arg
Ser
val
115
120
125
Thr
Ser
val
Asn
Glu
Phe
Hi s
Lys
Glu
Gly
Lys
Val Tyr Thr
val
130
135
140
Leu
Glu
Ser
Tyr
lie
val
Asp
Pro
Glu
Gly Asn Thr Glu
Glu
Asp
145
150
155
160
Страница 63
Thr Lys
Met Phe
val
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
165
170
175
Gly val
Val Ala
Met
Ala
ser
Ser
Met
ASn
Gly
Arg
180
185
<210> 110
<211> 177
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal8g43680.
.1 protein
<400> 110
Met Leu
РГО ASn
Asn
pro
ser
Thr
val
pro
Asp
Ala
val
Ala
Arg
His His
Thr His
val
val
ser
Pro
Gin
Gin
cys
Cys
Ser
Ala
Val
val
Gin Glu
lie Ala
Ala
Pro
val
Ser
Thr
val
тгр
Ser
Val
val
Arg
Arg
Phe Asp
ASn РГО
Gin
Ala
Tyr
Lys
His
Phe
val
Lys
ser
cys
His
val
lie Leu
Gly Asp
Gly
Asp
val
Gly
Thr
Leu
Arg
Glu
val
His
Val
Ser Gly
Leu Pro
Ala
Ala
val
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
val
Leu
Asp
Asp Glu
Arg His
val
lie
Gly Phe
Ser
Met
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Phe
Asn Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
Leu
His
Pro
Arg
Ser
Ala
Ala
115
120
125
Gly Thr
val val
val
Glu
Ser
туг
val
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly Asn
130
135
140
Thr Thr
Glu Asp
Thr
Arg
val
Phe
val
Asp
Thr
Leu
Arg
Cys
Asn
145
150
155
160
Leu Gin
Ser Leu
Ala
Lys
Phe
Ala
Glu
Asn
Leu
Thr
Lys
Leu
His
Gin
165
170
175
Arg
<210> 111
<211> 185
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glyma07g06270
.2 protein
<400> 111
Met Asn Gly Gly Glu
Ser
Tyr
Gly
Ala
lie
Glu
Thr
Gin
Tyr
Arg
Arg His
His Lys
His
Glu
pro
Arg
Glu
ASn
Gl n
Cys
Thr
Ser
Ala
Leu
Val Lys
His lie
Arg
Ala
Pro
val
His
Leu
val
Trp
ser
Leu
Val
Arg
Arg Phe
Asp Gin
Pro
Gin
Lys
туг
Lys
Pro
Phe
val
Ser
Arg
Cys
Met Gin
Gly Asp
Leu
Gly
Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
val
Lys
ser Gly
Leu Pro
Ala
Thr
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Gin
Leu
Asp
Asp Glu
Glu His
Leu
Gly
Arg
val
Gly
Gly
Asp
His
Arg
100
105
110
Leu Arg
ASn Tyr
Ser
ser
lie
Thr
Val
Hi s
Pro
Glu
Val
Asp
115
120
125
Gly Arg
Pro Gly Thr
Met
val
lie
Glu
ser
Phe
val
Val
Asp
val
pro
130
135
140
Asp Gly Asn Thr Arg
Asp
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
Val
Glu
Ala
Leu
Страница
145 150 155 160
Arg Cys Asn Leu Ser Ser Leu Ala Asp val Ser Glu Arg Met Ala Val
165 170 175
Gin Gly Arg Thr Asn Pro lie Asn His 180 185
<210> 112 <211> 191 <212> PRT <213> Glycine max
<220>
<223> soybean Glymal6g02910.1 protein <400> 112
Met Gly lie Thr lie Gly lie Gin Cys Leu Glu lie Glu Glu lie ser
15 10 15
lie Cys Asp Gly Met Phe Cys Tyr Leu Val Asp Phe val Asp Val Lys
20 25 30
Glu Lys Met Asn Tyr Cys Leu Met Trp Phe Gly Tyr Phe Pro Ser Gin
35 40 45
val Trp Ser Leu val Arg Arg Phe Asp Gin Pro Gin Lys Tyr Lys Pro
50 55 60
Phe val Ser Arg Cys lie Met Gin Gly Asp Leu Gly lie Gly Ser val 65 70 75 80
Arg Glu val Asn Val Lys Ser Gly Leu Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu
85 90 95
Arg Leu Glu Gin Leu Asp Asp Glu Glu His lie Leu Gly lie Arg lie
100 105 110
val Gly Gly Asp His Arg Leu Arg Asn Tyr ser Ser lie lie Thr val
115 120 125
His Pro Glu val lie Asp Gly Arg Pro Ser Thr Met Val lie Glu Ser
130 135 140
Phe val val Asp Val Pro Asp Gly Asn Thr Arg Asp Glu Thr cys Tyr 145 150 155 160
Phe val Glu Ala Leu lie Arg Cys Asn Leu Ser Ser Leu Ala Asp val
165 170 175
Ser Glu Arg Met Ala val Gin Gly Arg Thr Asp Pro lie Asn His 180 185 190
<210> 113 <211> 185 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic PYR/PYL receptor protein <400> 113
Met Asn Gly Gly Glu Ser Tyr Gly Ala lie Glu Thr Gin Tyr lie Arg
15 10 15
Arg His His Lys His Glu Pro Arg Glu Asn Gin Cys Thr Ser Ala Leu
20 25 30
Val Lys His lie Arg Ala Pro Val His Leu val Trp Ser Leu Val Arg
35 40 45
Arg Phe Asp Gin Pro Gin Lys Tyr Lys Pro Phe val ser Arg Cys lie
50 55 60
Met Gin Gly Asp Leu Gly lie Gly ser val Arg Glu Val Asn val Lys 65 70 75 80
Ser Gly Leu Pro Ala Thr Thr Ser Thr Glu Arg Leu Glu Gin Leu Asp
85 90 95
Asp Glu Glu His lie Leu Gly lie Arg lie Val Gly Gly Asp His Arg
100 105 110
Leu Arg Asn Tyr ser Ser He He Thr val His Pro Glu Val lie Asp
115 120 125
Gly Arg Pro ser Thr Met Val He Glu Ser Phe val val Asp Val Pro
Страница 65
130 135 140
Asp Gly Asn Thr Arg Asp Glu Thr cys Tyr Phe Val Glu Ala Leu lie 145 150 155 160
Arg cys Asn Leu Ser ser Leu Ala Asp val Ser Glu Arg Met Ala val
165 170 175
Gin Gly Arg Thr Asp Pro lie Asn His 180 185
<210> 114 <211> 204 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum SblOg022200 protein <400> 114
Met Glu Thr His val Glu Arg Ala Leu Arg Ala Thr Leu Thr Glu Ala
15 10 15
Glu val Arg Ala Leu Glu Pro Ala val Arg Glu His His Thr Phe Pro
20 25 30
Ala Gly Arg val Ala Ala Gly Thr Thr Thr Pro Thr Pro Thr Thr Cys
35 40 45
Thr ser Leu Val Ala Gin Arg val Ser Ala Pro Val Arg Ala val Trp
50 55 60
Pro lie val Arg ser Phe Gly Asn Pro Gin Arg Tyr Lys His Phe val 65 70 75 80
Arg Thr cys Ala Leu Ala Ala Gly Asp Gly Ala Ser Val Gly Ser Val
85 90 95
Arg Glu val Thr val val Ser Gly Leu Pro Ala Ser Ser Ser Thr Glu
100 105 110
Arg Leu Glu val Leu Asp Asp Asp Arg His lie Leu Ser Phe Arg val
115 120 125
Val Gly Gly Asp His Arg Leu Arg Asn Tyr Arg ser Val Thr Ser val
130 135 140
Thr Glu Phe Gin pro Gly Pro Tyr cys val Val Val Glu Ser Tyr Ala 145 150 155 160
val Asp val Pro Glu Gly Asn Thr Ala Glu Asp Thr Arg Met Phe Thr
165 170 175
Asp Thr val val Arg Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Ala val Ala Glu
180 185 190
Glu Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Asn Arg Arg 195 200
<210> 115 <211> 204 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum Sb04g008040 protein <400> 115
Met Glu Pro His Met Glu Thr Ala Leu Arg Gin Gly Gly Leu Ser Glu
15 10 15
Leu Glu Gin Arg Glu Leu Glu Pro val val Arg Ala His His Thr Phe
20 25 30
Pro Gly Arg ser Pro Gly Thr Thr Cys Thr Ser Leu Val Thr Gin Arg
35 40 45
val Asp Ala Pro Leu ser Ala val Trp Pro lie val Arg Gly Phe Ala
50 55 60
Ala Pro Gin Arg Tyr Lys His Phe lie Lys Ser Cys Asp Leu Arg Ser 65 70 75 80
Gly Asp Gly Ala Thr val Gly Ser val Arg Glu val Thr Val Val Ser
85 90 95
Gly Leu Pro Ala Ser Thr ser Thr Glu Arg Leu Glu lie Leu Asp Asp
Страница 66
100 105 110
Asp
Arg
His
Leu
Ser
Phe
Arg
val
val
Gly
Gly Asp
His
Arg
Leu
115
120
125
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Ser
val
Thr
Glu
Phe
His
His
His
His
130
135
140
Gin Ala Ala Ala Gly Arg
Pro
туг
Cys
val
val
val
Glu
ser
Tyr
val
145
150
155
160
val
Asp
val
Pro
Glu
Gly Asn Thr Glu
Glu
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Thr
165
170
175
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Ala
Ala
Thr
180
185
190
Ser
Ser
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
ser
Asn
Ser
Ser
Thr
195 200
<210> 116 <211> 258 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum Sb01g028330 protein <400> 116
Met
val
Glu
Ser
Pro
ASn
Pro
Asn
Ser
Pro
Ser
Arg
Pro
Leu
Cys
Lys
Tyr
Thr
Arg
Ala
Pro
Ala
Arg
Hi s
Phe
Ser
Pro
Pro
Leu
Pro
Phe
Ser
Ser
Leu 35
Ser
Ala
Asn 40
Pro
Glu
Pro
Lys 45
Ala
Met
Asp
Lys
Gin
Gly Ala
Gly
Gly Asp val
Glu
val
Pro
Ala Gly
Leu
Gly
Leu
Thr
Ala
Ala
Glu
Tyr
Glu
Gin
Leu
Arg
Ser
Thr
val
Asp
Ala
His
Hi s
Arg
Tyr
Ala
val
Gly
Glu
Gly Gin Cys
Ser
Ser
Leu
Leu
Ala
Gin
Arg
Gin
Ala
Pro
Pro
Ala
Ala
val
Trp
Ala
val
Arg
Arg
Phe
Asp
100
105
110
cys
Pro
Gin 115
val
Tyr
Lys
Hi s
Phe 120
lie
Arg
Ser
Cys
Ala 125
Leu
Arg
Pro
Asp
Pro 130
Glu
Ala
Gly
Asp
Ala 135
Leu
Arg
Pro
Gly
Arg 140
Leu
Arg
Glu
val
Ser
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Ser
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
145
150
155
160
Leu
Leu
Asp
Asp
Ala
Ala
Arg
val
Phe
Gly
Phe
Ser
lie
Thr Gly Gly
165
170
175
Glu
His
Arg
Leu
Arg
Asn
Tyr
Arg
Ser
val
Thr
Thr
val
Ser
Glu
Leu
180
185
190
Ala
Asp
Pro Gly
Cys
Thr
val
val
Leu
Gl u
Ser
Tyr
val
val
Asp
195
200
205
val
Pro
Asp Gly
Asn
Thr
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Leu
Phe
Ala
Asp
Thr
210
215
220
val
Arg
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Lys
Ser
val
Ala
Glu
Ala
Asn
225
230
235
240
Ala
Ala
Ala
Ala
Ala
Ser
Phe
val
Ser
val
Val
Pro
Pro
Pro
Glu
Pro
245 250 255
Glu Glu
<210> 117 <211> 222 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum Sb01g038150 protein
Страница 67
<400> 117
Met
Pro
Cys
Leu
Gin
Ala
Ser
Ser
His
His
Gly
Arg 20
val
Leu
Ala
Gly
Ala
Ala
Ala 35
Val
Ala
Ala
Thr
Ser 40
Ala
His
Asp
Gly
Glu
Val
pro
Ala
Ala
Ala
Pro
Gly
Pro
Gly
Arg
Cys
Ala
Ala
Pro
Ala
Ser
Ala
val
тгр
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Arg
Phe
val
100
Asp Gly
Gly
val
Gly
Thr
Leu
Arg
115
120
Pro
Ala
Ala
Ser
Ser
Arg
Glu
Arg
130
135
Hi s
val
Leu
Ser
Phe
Arg
val
val
145
150
Tyr
Leu
Ser
val
Thr
Thr
val
His
165
Ala
Thr
val
val
val
Glu
ser
Tyr
180
Thr
Pro
Glu
Asp
Thr
Arg
val
Phe
195
200
Leu
Gin 210
Ser
Leu
Ala
Thr
Thr 215
Ala
<210> 118 <211> 211 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum Sb04g009280 protei <400> 118
Met
val
Glu
Met
Asp
Gly
Gly
val
Thr
Pro
Ala
Pro
Arg
Arg
Trp
Arg
Leu
Arg
Ala
Met
Glu
Thr
Asp
Tyr
Pro
Arg 50
Asp
His
Gin
Cys
ser 55
ser
Pro
Val
Hi s
Leu
val
Trp
Ser
Leu
Leu
Phe
Lys
Pro
Phe
Val
Ser
Arg
lie Gly
Ser
val
Arg
Glu
val
Asn
100
Arg
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Glu
Leu
115
120
Ser
val 130
Lys
Phe
val
Gly
Gly 135
Asp
Leu
Thr
val
His
Pro
Glu
val
145
150
val
lie
Glu
Ser
Phe
val
val
Asp
165
Glu
Thr
cys
Tyr
Phe
val
Glu
Ala
180
Leu
Ala
Glu
val
Ser
Glu
Arg
Gin
195
200
Leu
Asp 210
Arg
Ser
Pro
Gly
Ser
Met
Pro
His Gin
Val
Gly
cys
Ala
Ala
Glu
val Ala
Pro
Ala
Ala Gly
Met
Arg
Cys Gly
Glu
Ala
Ala
Arg 60
His
His
Glu His
Cys
Ser
Ala
val
val
Gin
His val
Ser
val
Val
Arg
Arg
Phe
Asp Gin
Arg
Ser
Cys
Ala
Leu
Leu
Ala Gly
105
110
Glu
val
Arg
val
val
Ser
Gly Leu
125
Leu
Glu
val
Leu
Asp
Asp
Glu Ser
140
Gly Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Gin Asn
15 5
160
Pro
ser 170
Pro
Ala
Ala
Pro
Asp Ala 175
val
val
Asp
Val
Pro
Pro
Gly ASn
185
190
val
Asp
Thr
lie
val
Lys
Cys Asn
205
Glu
Lys
Leu
Ala
Ala
val
220
Gly val
val
Gly
Gly
Gly
Gin
Gin
Leu
Ala
Asp
Glu
Leu
Arg
cys
Asp
val
Arg
Arg
Phe
His
Arg
Hi s
Glu
Ala
Val
Ala
Lys
His
Lys
Ala
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Gin
Pro
Gin
Cys
Glu
Met
Lys
Gly
Asn
Glu
val
Lys
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
105
110
Leu
Asp
Asp
Asn
Glu
Hi s
lie
Leu
125
His
Arg
Leu
Gin
Asn
Tyr
Ser
Ser
140
lie
Asp
Gly Arg
Pro
Gly
Thr
Leu
155
160
val
Pro
Asp Gly
Asn
Thr
Lys
Asp
170
175
Leu
Leu
Lys
cys
Asn
Leu
Lys
Ser
185
190
Val
lie
Lys
Asp
Gin
Thr
Glu
Pro
205
Страница 68
<210> 119 <211> 216 <212> PRT
<213> Sorghum bicolor <220>
<223> sorghum Sb09g023180 protein
<400> 119
Met
Pro
Tyr
Thr
Ala
Pro
Arg
Pro
Ser
Pro
Gin
Gin
Hi s
Ser
Arg
Val
Thr Gly
Gly
Gly
Ala
Lys
Ala
Ala
val
Ala
Ala
Ser
His
Gly Ala
ser
Cys
Ala
Ala
Val
Pro
Ala
Glu
val
Ala
Arg
His
His
Glu
Hi s
Ala
Ala
Arg
Ala
Gly Gin
cys
cys
Ser
Ala
val
val
Gin
Ala
lie
Ala
Ala
Pro
Val
Gly
Ala
val
Trp
Ser
val
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Arg
Pro
Gin
Ala
Tyr
Lys
Hi s
Phe
lie
Arg
ser
cys
Arg
Leu
Val
Asp
Asp
Gly Gly
Gly Gly
Ala
Gly Ala
Gly
Ala
Gly
Ala
Thr
val
Ala
Val
Gly
Ser
val
100
105
110
Arg
Glu
Val
Arg
Val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Thr
Ser
Ser
Arg
Glu
115
120
125
Arg
Leu
Glu
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Leu
Ser
Phe
Arg
Val
130
135
140
val
Gly
Gly
Glu
Hi s
Arg
Leu
Ala
Asn
Tyr
Arg
ser
val
Thr
Thr
val
145
150
155
160
Hi s
Glu
Ala
Glu
Ala
Gly
Ala
Gly
Gly
Thr
val
val
val
Glu
Ser
Tyr
165
170
175
val
val
Asp
val
Pro
Pro
Gly
Asn
Thr
Ala
Asp
Glu
Thr
Arg
Val
Phe
180
185
190
Val
Asp
Thr
Val
Arg
cys
ASn
Leu
Gin
Ser
Leu
Ala
Arg
Thr
Ala
195
200
205
Glu
Arg 210
Leu
Ala
Leu
Ala
Leu 215
Ala
<210> 120 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic consensus sequence, amino acid residues 30-65 of PYRl
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(36)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 120
Cys xaa Ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa Xaa xaa
15 10 15
тгр xaa xaa xaa xaa xaa Phe xaa xaa Pro xaa Xaa xaa Xaa Xaa Phe
20 25 30
xaa xaa Xaa Cys 35
<210> 121 <211> 25 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
Страница 69
<220>
<223> synthetic consensus sequence, amino acid residues 76-100 of PYRl
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(25)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 121
Gly Xaa Xaa Arg xaa Val Xaa xaa Xaa Ser Xaa xaa Pro Ala Xaa Xaa
15 10 15
Ser Xaa Glu xaa Leu Xaa xaa xaa Asp 20 25
<210> 122 <211> 11 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic consensus sequence, amino acid residues 112-122 of PYRl
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(11)
<223> xaa = any amino acid
<400> 122
Gly Gly xaa His Arg Leu Xaa Asn Tyr Xaa Ser 1 5 10
<210> 123 <211> 31 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic consensus sequence, amino acid residues 141-171 of PYRl
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(31)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 123
Glu Ser xaa xaa val Asp xaa Pro xaa Gly xaa xaa xaa xaa Xaa Thr
15 10 15
xaa xaa Phe xaa xaa Xaa xaa Xaa xaa xaa Asn Leu xaa xaa Leu 20 25 30
<210> 124 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-18
<400> 124
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg ser Glu Leu Lys Asn ser
Страница 70
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
lie
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
Val
Trp
Pro
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
А5П
Arg
тгр
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Gl U
Gly
ASn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly Asp
Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 125 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-24
<400> 125
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s
Phe
Lys
Ser
cys
ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
ASP
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
туг
Ala
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gl n
val
Thr
180 185 190
<210> 126 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant
Страница 71
clone #27-31 <400> 126
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
ser
Glu
Leu
Val
Trp
Ser
lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
ASn
cys
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 127 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-28
<400> 127
Met
pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
Val
тгр
ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
туг
Arg
His
Phe
lie
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly Cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
val
Ser Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
cys
Lys
Ser
Val
Met
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
тгр
Thr
val
Val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 128 <211> 191 <212> PRT
Страница 72
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-9
<400> 128
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
ser
cys
ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
Ser
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
Cys
ser
Val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
He Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Cys
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
ser
Gly
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 129 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-36
<400> 129
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Gly
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Pro
Gly
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
Ser
He Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asp
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly
Asp
Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
Страница 73
<210> 130 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27-14
<400> 130
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Gly
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Arg
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Pro
Gly
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asp
Arg
lie
Trp
Thr
Val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
LyS
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly Asp
Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 131 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxyni1-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-12
<400> 131
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Gl u
Leu
val
Trp
ser
lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Ala
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
Val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly Phe
Ser
He Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
Val
val
Leu
Gly
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
LyS
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
Страница 74
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 132 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-24
<400> 132
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
Hi s
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
lie
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Gly
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
ser
cys
Ser
Val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
Val
val
Leu
Gin
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
LyS
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
Val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 133 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxyni1-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-1
<400> 133
Met Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu Leu Lys
Asn Ser
lie Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro Gly Ser Cys
Ser Ser
Leu His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu Val Trp
ser lie
val Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Arg Phe lie
Lys ser
Cys Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly Cys Thr Arg Asp
val lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser Thr Glu
Arg Leu
Asp lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr Gly
Phe Ser lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr Thr val
His Arg
115
120
125
Phe Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
Val
Val
Leu Glu Ser
Tyr val
Страница 75
130 135 140
Val Asp Met Pro Glu Gly Asp Ser Glu Asp Asp Thr Arg Met Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr val val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Thr val Ala Glu
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 134 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-4
<400> 134
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
тгр
Ser
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Arg
Arg 60
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
Val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Gly
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
ser
val
Thr
Ala
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Asp
ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly Asp
Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 135 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-13
<400> 135
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Pro Gly ser cys Ser ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Pro Pro Glu Leu val Trp Ser lie
35 40 45
Val Arg Arg Phe Asp Lys Pro Gin Thr Tyr Arg His Phe lie Lys Ser
50 55 60
Cys Ser Val Glu Gin Asn Phe Glu Met Arg val Gly Cys Thr Arg Asp 65 70 75 80
val Asn val He Ser Gly Leu Pro Ala Asn Thr Ser Thr Glu Arg Leu
85 90 95
Asp lie Leu Asp Asp Glu Arg Arg val Thr Gly Phe ser lie lie Gly
Страница 76
100 105 110
Gly Glu His Arg Leu Thr Asn Tyr Lys Ser Val Thr Thr Val His Arg
115 120 125
Phe Glu Lys Glu Asn Arg lie Trp Thr val Val Leu Glu Ser Tyr Val
130 135 140
Val Asp Met Pro Glu Gly Asn Ser Glu Asp Asp Thr Arg Met Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr Val Val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Thr val Ala Glu
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 136 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-2
<400> 136
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
тгр
ser
lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
Val
lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Thr
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
lie
Trp
Thr
val
Val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly ASP
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 137 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74A-15
<400> 137
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Pro Gly Ser Cys Ser Ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Pro Pro Glu Leu val Trp ser lie
35 40 45
Val Arg Arg Phe Asp Lys Pro Gin Thr Tyr Arg His Phe lie Lys ser
50 55 60
Cys ser val Glu Gin Asn Phe Glu Met Arg val Gly Cys Thr Arg Asp
Страница 77
65 70 75 80
val lie val lie Ser Gly Leu Pro Ala Asn Thr Thr Thr Glu Arg Leu
85 90 95
Asp lie Leu Asp Asp Glu Arg Arg val Thr Gly Phe Ser lie lie Gly
100 105 110
Gly Glu His Arg Leu Thr Asn Tyr Lys Ser Val Thr Thr val His Arg
115 120 125
Phe Glu Lys Glu Asn Arg lie Trp Thr val Val Leu Glu Ser Tyr Val
130 135 140
val Asp Met Pro Glu Gly Asn ser Glu Asp Asp Thr Arg Met Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr val Val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Thr val Ala Glu
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly ser Gly ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 138 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74B-1
<400> 138
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
Tyr
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Arg
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Thr
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Lys
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
Val
Val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
LyS
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 139 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic bromoxynil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #74B-7
<400> 139
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Pro Gly Ser cys Ser Ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Leu Pro Glu Leu Val Trp Ser He
Страница 78
35 40 45
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Arg
Arg 60
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
ser
Val
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 140 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic dichlobenil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #68-1
<400> 140
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
Hi s
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
Ser
cys
ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
ser
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Lys
His 60
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
Val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
Val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
ser
Thr
Asp
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gl n
val
Thr
180 185 190
<210> 141 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic dichlobenil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #68-2
<400> 141
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
Страница 79
15 10 15
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
ser
Leu
His
Ala
Gin
Gin
lie
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
Val
Glu
Gl П
ASn
Ser
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
Val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
ser
Gly
Asp Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 142 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic dichlobenil-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #68-8
<400> 142
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Gly
Pro
Gly
Ser
Cys
ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
lie
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
LyS
Leu
А5П
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly
Asp Gly
ser
Gly
Ser
Gl n
val
Thr
180 185 190
<210> 143 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic dichlobenil-responsive PYR/PYL receptor mutant
Страница 80
clone #68-3
<400> 143
Met Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
lie Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Leu
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
Val Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Asn
ser
Cys Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val He
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe Glu
Lys
Glu
А5П
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
Val
Ala
Glu
165
170
175
Ala Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 144
<211> 191
<212> PRT
<213> Artificial
1 Sequence
<220>
<223> S}
/nthetic
di chlobeni1 -
-responsive PYR/PYL I
-eceptor
mutant
lone
#68-
¦17
<400> 144
Met Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
lie Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly Ser
cys
Ser
Ser
Leu His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
ser
val Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
ser
Cys Ser
Val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly Cys
Thr
Arg
Asp
val lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp Thr
val
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 145 <211> 191 <212> PRT
Страница 81
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic benoxacor-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #129-2
<400> 145
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
Val
тгр
ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gl n
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Tyr
Tyr
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
Val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
15 5
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 146 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic benoxacor-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #127-1
<400> 146
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
тгр
ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
Ser
Cys
Ser
Val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
Thr
lie Gly
100
105
110
Gly Asp
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
Met
val
Leu
Glu
ser
туг
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly
Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
Страница 82
<210> 147 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic acibenzolar-S-methyl (BTH)-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #BTH-1
<400> 147
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
тгр
Ser
lie
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
Hi s
Phe
Lys
ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Tyr
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
ser
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 148 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic acibenzolar-S-methyl (BTH)-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #втн-9
<400> 148
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
Hi s
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro Gly
Ser
Cys
ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Gl u
Leu
val
тгр
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Lys
His
Phe
Lys
Ser
cys
ser
Val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Leu
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
Страница 83
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn ser Gly Asp Gly ser Gly Ser Gin Val Thr 180 185 190
<210> 149 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence wit K59 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(29)
<223> xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (30)...(30)
<223> Xaa = Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Tyr or Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (31)...(36)
<223> xaa = any amino acid
<400> 149
Cys Xaa ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa xaa Xaa
15 10 15
Trp xaa xaa xaa xaa xaa Phe xaa xaa Pro xaa xaa Xaa xaa Xaa Phe
20 25 30
xaa xaa xaa Cys 35
<210> 150 <211> 11 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence wit Y120 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(8)
<223> Xaa = any amiono acid
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)...(9)
<223> Xaa = His or Cys
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)...(11)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 150
Gly Gly Xaa His Arg Leu xaa Asn xaa xaa Ser 1 5 10
Страница 84
<210> 151 <211> 13 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with 1110 mutation
<220>
<221> VARIANT <222> (1)...(1)
<223> xaa = Ser, Thr, Cys, Ala, Tyr or Trp <220>
<221> VARIANT
<222> (2)...(13)
<223> xaa = any amino acid
<400> 151
xaa xaa Gly Gly xaa His Arg Leu xaa Asn Tyr xaa Ser 1 5 10
<210> 152 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with P42 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(12)
<223> xaa - any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)...(36)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 152
Cys xaa ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa xaa xaa
15 10 15
Trp xaa xaa xaa xaa xaa Phe xaa xaa Pro xaa xaa xaa xaa xaa Phe
20 25 30
xaa xaa xaa cys 35
<210> 153 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with S47 mutation
<220>
<221> VARIANT
Страница 85
<222> (1)...(12)
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)...(18)
<223> Xaa = Pro, Arg or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (19)...(36)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 153
Cys xaa ser xaa Xaa Xaa xaa xaa
1 5 Trp xaa xaa xaa xaa xaa Phe xaa 20
xaa xaa xaa cys 35
xaa xaa Ala Pro xaa xaa xaa xaa
10 15
Xaa Pro Xaa xaa xaa xaa xaa Phe
25 30
<210> 154 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence wit K59 and 1110 mutations
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(12)
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)...(29)
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (30)...(30)
<223> Xaa = Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Tyr or Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (31)...(36)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 154
cys xaa ser xaa xaa Xaa xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa xaa xaa
15 10 15
Trp xaa xaa xaa xaa Xaa Phe xaa xaa Pro Xaa xaa xaa xaa Xaa Phe
20 25 30
Xaa xaa xaa cys 35
<210> 155 <211> 36
Страница 86
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence witl K59 and S47 mutations
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(17)
<223> xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)...(18)
<223> xaa = Pro, Arg or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (19)...(29)
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (30)...(30)
<223> xaa = Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Tyr or Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (31)...(36)
<223> xaa = any amino acid
<400> 155
Cys xaa Ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa xaa xaa
15 10 15
Trp xaa xaa xaa Xaa Xaa Phe xaa xaa Pro xaa xaa xaa xaa xaa Phe
20 25 30
Xaa xaa xaa cys 35
<210> 156 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence wit H60 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(36)
<223> xaa = any amino acid
<400> 156
Cys xaa Ser xaa xaa Xaa Xaa xaa xaa xaa Ala Pro xaa xaa Xaa xaa
15 10 15
Trp Xaa xaa xaa xaa xaa Phe xaa xaa Pro xaa xaa xaa xaa Arg Phe
20 25 30
Xaa xaa xaa Cys 35
<210> 157 <211> 25 <212> PRT
страница 87
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with S92 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(25)
<223> xaa = any amino acid
<400> 157
Gly xaa xaa Arg Xaa val Xaa xaa xaa ser xaa xaa Pro Ala xaa xaa
15 10 15
Thr xaa Glu Xaa Leu Xaa xaa Xaa Asp 20 25
<210> 158 <211> 31 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with E140 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...CI)
<223> Xaa = Gly, Gin or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)...(31)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 158
xaa ser xaa xaa Val Asp xaa Pro xaa Gly Asn xaa xaa xaa xaa Thr
15 10 15
Xaa Xaa Phe Xaa Xaa xaa xaa xaa xaa xaa Asn Leu xaa xaa Leu 20 25 30
<210> 159 <211> 36 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with K59 and H60 mutations
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(29)
<223> xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (30)...(30)
<223> xaa = Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Tyr or Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (31)...(36)
<223> Xaa = any amino acid
Страница 88
<400> 159
Cys xaa Ser xaa xaa xaa Xaa Xaa
1 5 Trp Xaa xaa xaa xaa xaa Phe Xaa 20
Xaa xaa xaa cys 35
xaa xaa Ala Pro xaa Xaa Xaa Xaa
10 15 Xaa Pro xaa Xaa Xaa Xaa Arg Phe 25 30
<210> 160 <211> 25 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with E94 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(25)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 160
Gly xaa xaa Arg xaa Val Xaa Xaa Xaa Ser Xaa xaa Pro Ala Xaa Xaa
15 10 15
Ser Xaa Asp xaa Leu xaa xaa Xaa Asp 20 25
<210> 161 <211> 11 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with K59 and N119 mutations
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(11)
<223> xaa = any amino acid
<400> 161
Gly Gly xaa His Arg Leu Xaa Tyr Tyr xaa Ser 1 5 10
<210> 162 <211> 11 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with H115 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(11)
<223> Xaa = any amino acid
<400> 162
Gly Gly xaa Tyr Arg Leu xaa Asn Tyr xaa Ser 1 5 10
Страница 89
<210> 163 <211> 31 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic modified PYR/PYL receptor consensus sequence with F159 mutation
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(18)
<223> xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT <222> (19)...(19) <223> xaa = Ser or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)...(31)
<223> xaa = any amino acid
<400> 163
Glu Ser xaa xaa Val Asp Xaa Pro
1 5 xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa 20
xaa Gly Asn Xaa Xaa xaa Xaa Thr
10 15
Xaa xaa Asn Leu Xaa Xaa Leu 25 30
<210> 164 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic acibenzolar-s-methyl (BTH)-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #BTH-An7
<400> 164
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Arg
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
LyS
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s 60
Phe
lie
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
Thr
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp 100
Asp
Glu
Arg
Arg
val 105
Thr
Gly
Phe
ser
lie 110
Gly
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
Tyr
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
тгр
Thr
val
val
Leu
Gl u
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Leu
Ala
145
150
155
160
Gly Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg 180
ASn
Ser
Gly
Asp
Gly 185
Ser
Gly
Ser
Gin
val 190
Thr
Страница 90
<210> 165 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clones #27B-1 and #27B-8
<400> 165
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asn
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Thr
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 166 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27B-2
<400> 166
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro Gly
Ser
Cys
Ser
ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ser
Glu
Phe
val
тгр
ser
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
ser
val
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
lie
Trp
Thr
Met
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
А5П
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Страница 91
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly ser Gly ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 167 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27B~3
<400> 167
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
lie
Lys
ser
cys
ser
val
Glu
Gl n
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 168 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27B-4
<400> 168
Met Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
Asn ser
lie Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro Gly
ser
Cys
Ser Ser
Leu His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
тгр
Pro lie
lie Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
туг
Arg
Hi s
Phe
lie
Lys Ser
Cys ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly Cys Thr Arg Asp
val lie
val
ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg Leu
Asp lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr Gly
Phe
Ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
ser
val
Thr
Thr
val
His Arg
115
120
125
Phe Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr val
130
135
140
Страница 92
val Asp Met Pro Glu Gly Asn ser Glu Asp Asp Thr Arg lie Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr Val val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Thr Val Ala Glu
165 170 175
Thr Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin val Thr 180 185 190
<210> 169 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27B-7
<400> 169
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s 60
Phe
Lys
ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
Met
lie
val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
Val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
cys
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
Val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 170 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27c-l
<400> 170
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Leu Gly Ser Cys Ser Ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Pro Ser Glu Leu Val Trp Ser lie
35 40 45
val Arg Arg Phe Asp Lys Pro Gin Thr Tyr Arg His Phe He Lys Ser
50 55 60
Cys ser val Glu Gin Asn Phe Glu Met Arg Val Gly Cys Thr Arg Asp 65 70 75 80
val lie val lie ser Gly Leu Pro Ala Asn Thr ser Thr Glu Arg Leu
85 90 95
Asn lie Leu Asp Asp Glu Arg Arg val Thr Gly Phe Ser lie He Gly 100 105 110
Страница 93
Gly Glu His Arg Leu Thr Asn His Lys ser val Thr Thr Val His Arg
115 120 125
Phe Glu Lys Glu Asn Arg He Trp Thr val val Leu Glu Ser Tyr Val
130 135 140
val Asp Met Pro Glu Gly Asn Ser Glu Asp Asp Thr Arg lie Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr val val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Ala Ala Val Ala Glu
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin Val Thr 180 185 190
<210> 171 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-2
<400> 171
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
тгр
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s
Phe
lie
Lys
ser
cys
ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Cys
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
Val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
ASP
Thr
val
val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly ASP
Gly
ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 172 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-3
<400> 172
Met Pro ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Pro Gly Asn Cys Ser Ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Pro Pro Glu Leu val Trp Ser lie
35 40 45
val Arg Arg Phe Asp Lys Pro Gin Thr Tyr Arg His Phe lie Lys Ser
50 55 60
Cys Ser val Glu Gin Asn Phe Glu Met Arg val Gly Cys Thr Arg Asp 65 70 75 80
Страница 94
Val lie val lie Ser Gly Leu Pro Ala Asn Thr ser Thr Glu Arg Leu
85 90 95
Asn lie Leu Asp Asp Glu Arg Arg val Thr Gly Phe ser lie lie Gly
100 105 110
Gly Glu His Arg Leu Thr Asn His Lys Ser val Thr Thr Val His Arg
115 120 125
Phe Glu Lys Glu Asn Arg lie Trp Thr val val Leu Glu Ser Tyr val
130 135 140
Val Asp Met Pro Glu Gly Asn Ser Glu Asp Asp Thr Arg Met Phe Ala 145 150 155 160
Asp Thr lie Val Lys Leu Asn Leu Gin Lys Leu Thr Thr Val Ala Glu
165 170 175
Ala Met Ala Arg Asn ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gin Val Thr 180 185 190
<210> 173 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-5
<400> 173
Met
pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Glu
Leu
Lys
ASn
Ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
ser
lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
lie
Val
lie
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
lie
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
ser
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
тгр
Thr
val
lie
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
Val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
lie
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180
185
190
<210> 174 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-16
<400> 174
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg Ser Glu Leu Lys Asn Ser
15 10 15
lie Ala Glu Phe His Thr Tyr Gin Leu Asp Pro Gly Ser Cys Ser ser
20 25 30
Leu His Ala Gin Arg lie His Ala Pro Pro Glu Leu val Trp Ser lie 35 40 45
Страница 95
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys РГО
Gin
Thr
Tyr Arg
His Phe lie
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn Phe
Glu
Met
Arg Val
Gly Cys Thr
Arg
Asp
Met
Val
Ser Gly Leu
Pro
Ala
Asn Thr
Ser Thr Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu Arg
Arg
val
Thr Gly
Phe Ser lie
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr Asn
His
Lys
Ser val
Thr Thr val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg lie
тгр
Thr
val val
Leu Glu Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly ASn
Ser
Glu
Asp Asp
Thr Arg lie
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
Val
Lys
Leu Asn
Leu
Gin
Lys Leu
Ala Thr val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
ser Gly
Asp Gly Ser Gly Ser Gin val
Thr
180
185
190
<210> 175 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27c-18
<400> 175
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
ser
Lys
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
lie
Hi s
Ala
Pro
Pro
Glu
Leu
val
Trp
ser
val
Arg 50
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro 55
Gin
Thr
Tyr
Arg
His 60
Phe
lie
Lys
Ser
Cys
Ser
val
Glu
Gin
ASn
Phe
Glu
Met
Arg
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
ASn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asn
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
lie
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
Val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Thr
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
ser
Gly Asp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 176 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27c-19
<400> 176
Met Pro Ser Glu Leu Thr Pro Glu Glu Arg ser Glu Leu Lys Asn ser 15 10 15
Страница 96
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
cys
Ser
Ser
Phe
His
Ala
Gin
Arg
Hi s
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
ser
Val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
His
Phe
Lys
ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
Cys
Thr
Arg
Asp
Val
Val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
Asn
His
Lys
Ser
Thr
Thr
Val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
Val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 177 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-20
<400> 177
Met
Pro
Ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Arg
Ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly
Ser
Cys
Ser
Ser
Leu
His
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
ser
Glu
Leu
val
тгр
ser
lie
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s
Phe
Lys
Ser
cys
Ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly
cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asp
Leu
Asp
Asp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
His
Arg
Leu
Thr
Asn
Hi s
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
His
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
Asn
Arg
Trp
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
Asn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
val
Lys
Leu
Asn
Leu
Gin
Lys
Leu
Ala
Thr
lie
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
Asn
Ser
Gly
Asp Gly
Ser
Gly
Ser
Gl n
val
Thr
180 185 190
<210> 178 <211> 191 <212> PRT
<213> Artificial sequence <220>
<223> synthetic fenhexamid-responsive PYR/PYL receptor mutant clone #27C-21
Страница 97
<400> 178
Met
Pro
ser
Glu
Leu
Thr
Pro
Glu
Glu
Gin
ser
Glu
Leu
Lys
Asn
Ser
lie
Ala
Glu
Phe
His
Thr
Tyr
Gin
Leu
Asp
Pro
Gly Ser
cys
Ser
Ser
Leu
Hi s
Ala
Gin
Arg
His
Ala
Pro
Ser
Glu
Leu
val
Trp
Ser
val
Arg
Arg
Phe
Asp
Lys
Pro
Gin
Thr
Tyr
Arg
Hi s
Phe
Lys
Ser
cys
ser
val
Glu
Gin
Asn
Phe
Glu
Met
Arg
val
Gly Cys
Thr
Arg
Asp
val
val
Ser
Gly
Leu
Pro
Ala
Asn
Thr
Ser
Thr
Glu
Arg
Leu
Asn
Leu
Asp
ASp
Glu
Arg
Arg
val
Thr
Gly
Phe
Ser
lie Gly
100
105
110
Gly Glu
Hi s
Arg
Leu
Thr
ASn
His
Lys
Ser
val
Thr
Thr
val
Hi s
Arg
115
120
125
Phe
Glu
Lys
Glu
ASn
Arg
тгр
Thr
val
val
Leu
Glu
Ser
Tyr
val
130
135
140
val
Asp
Met
Pro
Glu
Gly
ASn
Ser
Glu
Asp
Asp
Thr
Arg
Met
Phe
Ala
145
150
155
160
Asp
Thr
Val
Lys
Leu
ASn
Leu
Gin
Lys
Leu
Thr
Thr
val
Ala
Glu
165
170
175
Ala
Met
Ala
Arg
ASn
Ser
Gly ASp
Gly
Ser
Gly
Ser
Gin
val
Thr
180 185 190
<210> 179 <211> 6 <212> PRT
<213> Artificial Sequence <220>
<223> synthetic N-terminus 6x-histidine tag <400> 179
His His His His His His 1 5
Страница 98
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Растение, содержащее гетерологичную экспрессионную кассету, причем экспрессионная кассета содержит промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, где мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и где химический агент не вызывает выраженной активации при воздействии на PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа.
2. Растение по п. 1, в котором химический агент содержит фунгицид, гербицид, пестицид, нематоцид, активатор роста, синергист, гербицидное средство защиты, регулятор роста растений, репеллент от насекомых или удобрение.
3. Растение по п. 1, в котором химический агент выбран из группы, состоящей из бромоксинила, хлороксинила, иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-8-метила).
4. Растение по п. 1, в котором аминокислота мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, соответствующая позиции К59 из SEQ ID N0:1, представляет собой X, где X представляет собой аланин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, лейцин, метионин, глутамин, аргинин, серии, треонин, валин, тирозин, аспарагин или триптофан.
5. Растение по п. 4, в котором химический агент представляет собой бромоксинил, хлороксинил, иоксинил, дихлобенил, беноксакор или фенгексамид.
6. Растение по п. 4, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 21, 41, 50, 57, 60, 82, 92, 102, 116, 125, 141 и/или 151 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из H21Y, P41L, R50G, Т57А, H60R, I82N, S92T, E102G, R116K, Т125А, E141Q, E141D, N151D или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
7. Растение по п. 4, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию
аминокислоты, соответствующей позициям 10, 12, 25, 27, 29, 33, 42, 43, 44, 47, 49, 74, 75, 81, 97, ПО, 120, 123, 124, 133, 138, 139, 144, 154, 158, 163, 172, 173, 174 и/или 177 в PYR1 (SEQ Ш N0:1), в котором мутация выбирается из R10Q, E12G, Е12К, L25R, P27L, S29N, L33F, P42S, E43G, L44F, S47P, V49I, R74C, V75I, V81M, D97N, I110S, Y120C, Y120H, V123I, Т124М, N133D, V138M, V139I, V144A, E154G, M158I, V163I, А172Т, Т173А, V174I и/или А177Т или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
8. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит мутации аминокислот, соответствующих позициям 59, 120 и 158 в PYRl (SEQ ID N0:1), где мутации представляют собой K59R, Y120H и M158I, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
9. Растение по п. 8, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит остатки изолейцина в позициях аминокислот, соответствующих позициям 62 и 110 в PYRl (SEQ ID N0:1).
10. Растение по п. 4, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 27 и/или 63 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из P27L, K63N или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
11. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 26, 37, 71 и/или 94 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из D26G, R37Q, F71S, E94D или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
12. Растение по п. 4, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит мутацию аминокислоты, соответствующей позиции 119 в PYR1 (SEQ ID N0:1), в котором мутация представляет собой N119Y, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
13. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям
ПО, 114 и/или 138 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из II ЮТ, E114D, V138M или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
14. Растение по п. 4, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 24, 82, 159 и/или 161 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из Q24R, I82T, F159L, D161G или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-Б-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
15. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислоты, соответствующей позициям 115 и/или 159 в PYRl (SEQ ID N0:1), в котором мутация выбирается из H115Y, F159S, F159L или их комбинаций, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-Б-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
16. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:131-139, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие бромоксинила, хлороксинила или иоксинила, когда бромоксинил, хлороксинил или иоксинил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
17. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:124-130 или 165-178, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие фенгексамида, когда фенгексамид контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
18. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:140-144, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие дихлобенила, когда дихлобенил контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
19. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:145-146, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие беноксакора, когда беноксакор контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
20. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:147-148 или 164, и в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие ВТН (ацибензолар-Б-метил), когда ВТН контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом.
21. Растение по п. 1, в котором мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид содержит по меньшей мере одну мутацию аминокислотного остатка, образующего лиганд-связывающий карман PYR/PYL-рецепторного полипептида.
22. Растение по любому из п.п. 1-21, в котором растение обладает повышенной устойчивостью к абиотическому стрессу при контакте с химическим агентом по сравнению с растением, не имеющим такой экспрессионной кассеты.
23. Растительная клетка из растения по любому из п.п. 1-21.
24. Семя, цветок, лист, плод, обработанные пищевые продукты или пищевой ингредиент из растений по любому из п.п. 1-21.
25. Способ повышения устойчивости к абиотическому стрессу в растении по любому из п.п. 1-21 посредством контактирования растения с химическим агентом, выбранным из группы, состоящей из бромоксинила, хлороксинила иоксинила, куматетралила, дихлобенила, фенгексамида, беноксакора и ВТН (ацибензолар-8-метила).
26. Способ изготовления мутантного PYR/PYL-рецепторного полипептида, который активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, в котором химический агент не вызывает выраженной активации при воздействии на PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа, причем данный способ включает:
(a) мутагенез PYR/PYL-рецепторного полипептида дикого типа;
(b) контактирование одного или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с химический агентом; и
(c) определение, активирует ли химический агент один или более мутантные PYR/PYL-рецепторные полипептиды, где активация определяет один или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов, активирующихся в ответ на воздействие химического агента.
27. Способ по п. 26, дополнительно включающий до стадии (Ь) скрининг химического агента для определения, связывается ли химический агент с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа, перед контактированием одного или более мутантных PYR/PYL-рецепторных полипептидов с химический агентом.
28. Экспрессионная кассета, содержащая промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, причем мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид активируется в ответ на воздействие химического агента, когда химический агент контактирует с мутантным PYR/PYL-рецепторным полипептидом, и где химический агент не вызывает выраженной активации при воздействии на PYR/PYL-рецепторный полипептид дикого типа, когда химический агент контактирует с PYR/PYL-рецепторным полипептидом дикого типа.
29. Вектор экспрессии, содержащий экспрессионную кассету по п. 28.
30. Способ получения растения, обладающего повышенной устойчивостью к стрессу, причем данный способ включает выращивание трансгенного растения, содержащего по меньшей мере одну полинуклеотидную последовательность, кодирующую мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178, в результате чего трансгенное растение экспрессирует мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид.
31. Полипептид, содержащий мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178.
32. Полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий мутантный PYR/PYL-рецепторный полипептид, который является по существу идентичным любой из SEQ ID N0:124-148 или 164-178.
1/8
о I ш
6000
5000Ь
40001%**** IX.
зооо| ^
2000f~
1000t~
PYR1
PYR1S47P; K59R; Y120H
20 40 60 Фенгексамид мкМ
100
Фиг
2/8
Д.Т.: PYRl
27С- 2 : PYRl p42s 1(5911 R74c п20н M158I
27C- 2a: PYRl 1(5911 R74c Y120H ML58I
27C- 2b: PYRl p42s R74c П20Н M158I
27C- 2c: PYRl p42s K59R Y120H M158I
27C- 2d: PYRl p42s 1(5911 R74c ML58I
27C-2e: PYRl P42S K59R R74C Y120H
27C-2 : PYRl
K59R
Y120H ML58I
Фенгексамид 0 0.1 0.5 1.0 5.0 мкМ
гм Q_ Q_
О X CD
Фенгексамид мкМ
Фиг. 2
3/8
U (N о.
Q_ JO
О I CD S
<
4000 j- 3500 3000
2500 2000 1500 1000 500 0
-A-PYL2
-о-PYL2 K64K, Y124H, M164I, V67I, V114I |
V s
0--'-•-Ф-$
--1-1--1-1-s
20 30 Фенгексамид мкМ 40 50
Фиг. 3
4/8
Фиг. 4
5/8
о о о
5 т 18
14 12 10 8 6 4 2 0
P5CS1
И Контроль ЕЗФенгексами;
Columbia
35S::GFP-PYL2 35S::GFP-PYL2 MUT1 35S::GFP-PYL2MUT2
^ 50 x 45 g 40 о 35 30 25 20
с * 15
10 5
* 0
RD29A
И Контроль НФенгексамид
Columbia
35S::GFP-PYL2 35S::GFP-PYL2MUT1 35S::GFP-FYL2MUT2
о о о
с о 8 7 6 5 4 3 2 1 0
NCED3
И Контроль ЕЭФенгексамид
Columbia
35S::GFP-PYL2 35S::GFP-PYL2MUT1 35S::GFP-PYL2MUT2
Фиг. 5
6/8
Время (мин)
Фиг. 6А-В
7/8
30 25
Время (мин)
Фиг. 6С
8/8
Время (мин)
Фиг. 7
