[**]

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly, активной относительно доброкачественной гиперплазии предстательной железы, её применению для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и способу лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Композиция обладает выраженным эффектом, который значительно превосходит α ₁ -адреноблокаторы и ингибиторы 5 α-редуктазы. Обнаруженный эффект позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly, активной относительно доброкачественной гиперплазии предстательной железы, её применению для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и способу лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Композиция обладает выраженным эффектом, который значительно превосходит α ₁ -адреноблокаторы и ингибиторы 5 α-редуктазы. Обнаруженный эффект позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

---

Евразийское (21) 201201417 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.09.30
(22) Дата подачи заявки 2012.11.15
(51) Int. Cl.
A61K38/04 (2006.01) A61K38/06 (2006.01) A61P13/08 (2006.01)
(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРПЛАЗИИ
ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ЕЁ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРПЛАЗИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРПЛАЗИИ
ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
(71) Заявитель:
ЗАМЕРТОН ХОЛДИНГС ЛИМИТЕД (CY)
(72) Изобретатель:
Овчинников Михаил Владимирович, Черторижский Евгений Александрович, Белый Петр Александрович (RU)
(74) Представитель:
Баландина Л.А. (RU) (57) Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly, активной относительно доброкачественной гиперплазии предстательной железы, её применению для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и способу лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Композиция обладает выраженным эффектом, который значительно превосходит ai-адреноблока-торы и ингибиторы 5 a-редуктазы. Обнаруженный эффект позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Фармацевтическая композиция для лечения гиперплазии предстательной железы, её применение для лечения гиперплазии предстательной железы и способ лечения гиперплазии предстательной
железы
Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей трипептиды, её применения для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и способа лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Уровень техники
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) -заболевание, возникающее вследствие разрастания периуретрального отдела предстательной железы, приводящего к обструкции нижних мочевых путей. ДГПЖ является одним из наиболее распространенных заболеваний у мужчин старшего возраста, встречаемость которого увеличивается с возрастом. Причем к 50 годам от 13% до 50% мужчин страдает этим заболеванием, а к 80-летнему возрасту примерно у 90%" мужчин имеются морфологические изменения, свойственные для ДГПЖ (О.Б.Лоран, И.В.Лукьянов, Практическая урология: что нового в лечении ДГПЖ - взгляд эксперта. Русский медицинский журнал, 2008, № 29, стр. 1988-1990; О.Б.Лоран, Наумов А.В., Верткин А.Л. и др. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы и ее осложнения в общемедицинской практике. Справочник поликлинического врача. 2009, №11, стр. 3-7; О.И.Братчиков, Амбарян А.А., Шумакова Е.А. и др. Этиологические и прогностические аспекты почечной недостаточности у больных аденомой предстательной железы. Урология, 2010, №1, стр. 38-43; Elterman D.S., Barkin J., Kaplan SA. Optimizing the management of benign prostatic hyperplasia. Ther. Adv. Urol., 2012, Vol. 4, No 2, p. 77-83). В среднем у половины таких пациентов происходит макроскопическое увеличение железы, а у 25% больных развиваются клинические симптомы патологии простаты, требующие лечения. Социальная значимость и актуальность этой проблемы подчеркивается демографическими исследованиями Всемирной организации здравоохранения,
свидетельствующими о росте населения планеты в возрасте старше 60 лет, темпы которого существенно опережают рост численности населения в целом. Указанная закономерность характерна и для нашей страны.
Лекарственная терапия дает возможность значительно уменьшить жалобы пациента, улучшить нарушенное мочеиспускание, создать условия для нормализации качества жизни, хотя и не позволяет излечить ДГПЖ. Медикаментозное лечение не показано пациентам с осложненным течением ДГПЖ.
Основными лекарственными средствами, применяемыми в настоящее время для лечения ДГПЖ являются а i-адреноблокаторы (доксазозин), ингибиторы 5 а-редуктазы (финастерид и дутастерид), а также экстракты Serenoa repens (пальмы ползучей) и Pygeum afhcanum (сливы африканской), которые показаны только при начальных и умеренных симптомах ДГПЖ (Е.И.Велиев, Богданов А.Б., Лукьянов И.В. Эффективность и безопасность комбинированного применения доксазозина и финастерида при лечении аденомы предстательной железы. Урология, 2008, № 6, стр. 44^8; О.Б.Лоран, И.В.Лукьянов, Практическая урология: что нового в лечении ДГПЖ - взгляд эксперта. Русский медицинский журнал, 2008, № 29, стр. 1988-1990; Н.И.Тарасов, Р.И.Измайлов, Тарасов Н.И., Измайлов Р.И. Возможности комбинированной терапии доксазозином и финастеридом в лечении больных с аденомой простаты больших размеров. Урология, 2009, № 5, стр. 40^15; Ткачук В.Н., Аль-Шукри С.Х., Ткачук И.Н., Мосоян М.С. Эффективность и безопасность комбинированного применения ингибиторов 5а-редуктазы и а-адреноблокаторов у больных аденомой предстательной железы, Урология, 2009, № 6, стр. 25-27; О.И.Аполихин, Сивков А.В., Бешлиев Д.А., Абдуллин И.И. Современные возможности медикаментозного лечения аденомы предстательной железы, Урология, 2010, №2, стр. 55-61; В.Б.Борисов. К лечению аденомы предстательной железы, Урология, 2010, №4, стр. А2-АА; Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система), Выпуск XII. Под редакцией А.Г.Чучалина, Ю.Б.Белоусова, В.В.Яснецова-М.: "Эхо", 2011, стр. 956; Cohen,
Parsons, Combination pharmacological therapies for the management of benign prostatic hyperplasia, Drugs Aging, 2012, Vol. 29, No 4, p. 275-284; Elterman D.S., Barkin J., Kaplan SA. Optimizing the management of benign prostatic hyperplasia, Ther. Adv. Urol, 2012, Vol. 4, No 2, p. 77-83; Goldfischer E, Kowalczyk J.J, Clark W.R. Hemodynamic Effects of Once-daily Tadalafil in Men With Signs and Symptoms of Benign Prostatic Hyperplasia on Concomitant a(l)-Adrenergic Antagonist Therapy: Results of a Multicenter Randomized, Double-Blind, Placebo-controlled Trial // Urology, 2012, Vol. 79, No 4, p. 875-882; Yoo Т.К., Cho H.J. Benign prostatic hyperplasia: from bench to clinic // Korean J. Urol, 2012, Vol. 53, No 3, p. 139-148). Альфа 1 -адреноблокаторы алфузозин, доксазозин, тамсулозин, теразозин и силодозин имеют сходную эффективность. Их применение целесообразно при симптомах нарушения мочеиспускания вследствие ДГПЖ при отсутствии абсолютных показаний к операции: хронической ретенции мочевых путей, рецидивирующей инфекции мочевых путей, гематурии и др. Эффект развивается после первых 2-3 недель приема.
Финастерид (ингибирует 5 альфа-редуктазу преимущественно 2-го типа) влияет на гормональный статус, приводит к уменьшению размеров простаты, но только после 6 месяцев непрерывного лечения. Наиболее эффективен при больших объемах ДГПЖ. Дутастерид - ингибитор изоферментов 5 альфа-редуктазы 1-го и 2-го типов, в связи с чем отмечается более быстрый эффект лечения: уменьшение размеров простаты (более 20%) через 1-3 мес. Основные побочные эффекты ингибиторов 5 альфа-редуктазы: снижение либидо и эректильная дисфункция.
Поиск новых безопасных и эффективных лекарственных методов лечения ДГПЖ - актуальная проблема современной фармакологии и урологии.
Известен пептид Ala-Asp-Glu и его влияние на вкусовые свойства (Maechashi, Kenji et.al. "Isolation of peptides from enzymic hydtolyzate of food proteins and characterization of their taste properrties". Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 1999, 63 (3), 555-559) и пептид Asp-Glu-Gly (Ji Jian Guo et.al. "Isolation and purification of a series of peptides from Panax notoginseng". Peptide:
Biology and Chemistry. Proceedings of Chinese Peptides Symposium, 5 , Lanzhou, China, 1998, July 14-17, 102-103), однако даже не предполагалось их использование для лечения заболеваний предстательной железы.
Раскрытие изобретения
Авторами настоящего изобретения впервые предложена фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах. Фармацевтическая композиция, предлагаемая в соответствии с настоящим изобретением, оказывает выраженное действие по отношению к доброкачественной гиперплазии предстательной железы и пригодна в лечении указанного заболевания, при этом фармацевтическая композиция согласно изобретению по выраженности действия превосходит rii-адреноблокаторы, ингибиторы 5 а-редуктазы и гомеопатическое средство простатин (ООО "Гомеофарма", Россия, содержит Pulsatilla СЗ, Serenoa (Sabal) СЗ, Staphisagria СЗ, Thuya СЗ, Zingiber СЗ).
Следовательно, одним из аспектов изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах.
В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно предложенному изобретению содержит активные компоненты в соотношении (1-8):(1-8):(1-8).
Другим аспектом изобретения является применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp Glu-OH, H-Lys-Asp Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах.
Ещё одним аспектом изобретения является способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, предусматривающия введение фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных
компонентов пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-ОН в терапевтически эффективных количествах, пациенту
Краткое описание чертежей.
Фиг. 1. Предстательная железа интактных крыс после опыта. Фиг. 2. Светооптические изменения в предстательной железе крыс контрольной группы, получавших тестостерона пропионата в дозе 10 мг/кг подкожно в течение 21 суток.
Фиг. 3. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших композицию согласно изобретению в дозе 150 мкг/кг/сут внутримышечно в течение 18 суток.
Фиг. 4. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших композицию согласно изобретению в дозе 600 мкг/кг/сут внутримышечно в течение 18 суток.
Фиг. 5. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших доксазозин в дозе 1 мг/кг/сут в желудок в течение 18 суток. Фиг. 6. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших финастерид в дозе 10 мг/кг/сут в желудок в течение 18 суток. Фиг. 7. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших простатин по 5 гранул/сут в желудок в течение 18 суток.
Осуществление изобретения Настоящее изобретение впервые обеспечивает фармацевтическую композицию, эффективную по отношению к доброкачественной гиперплазии предстательной железы и содержащую в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах. Композиция обладает выраженным эффектом, который значительно превосходит oti-адреноблокаторы и ингибиторы 5 ос-редуктазы. Обнаруженный эффект позволяет использовать фармацевтическую композицию, содержащую пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
В одном из аспектов изобретение направлено на фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах.
В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно предложенному изобретению содержит активные компоненты в соотношении (1-8):(1-8):(1-8).
Другим аспектом изобретения является применение фармацевтической композиции, содержащей пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и Н-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Ещё одним аспектом изобретения является способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, предусматривающий введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей в качестве активных компонентов пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и Н-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах.
Эффективность фармацевтической композиции согласно предложенному изобретению оценивали на животных - модель доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной тестостерона пропионатом (Пример 1).
Результаты сравнительного исследования эффективности фармацевтической композиции, содержащей пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH, а i-адреноблокатора (доксазозин), ингибитора 5 а-редуктазы 2-го типа (финастерид) и простатина, проведённые на крысах с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ), представлены в табл. 1. Из данных, представленных в табл. 1, видно, что масса ПЖ и коэффициент массы ПЖ (КМ, мг/100 г массы крысы) у интактных крыс до (102±7 мг и 39±3 соответственно) и после опыта (110±7 мг и 33+2 соответственно) достоверно не различались.
У контрольных крыс тестостерона пропионат (10 мг/кг/сут п/к) в течение 21 суток по сравнению с интактными крысами вызывал значимое (р <0,001) увеличение массы ПЖ в 2,6 раза (с 110+7 до 281±20 мг) и КМ ПЖ в 2,4 раза (с 33±2 до 80+5).
*-р <0,05, 00 или **-р <0,01, 000 или ***-р <0,001; 11 или -р <0,05, 11 или1 ! -р <0,01 -значимость различий по сравнению с доксазозином и финастеридом, соответственно.
Композиция в дозе 150 мкг/кг/сут в/м в течение 18 сут (начиная с 4-х суток
эксперимента) значимо (р <0,05) уменьшала массу ПЖ в 1,3 раза (до 214±17 мг), но КМ ПЖ достоверно не отличался от контрольного. Композиция в дозе 600 мкг/кг/сут в/м в течение 18 сут давала более выраженный эффект - значимо (р <0,001) уменьшала массу ПЖ в 1,8 раза (до 157+12 мг) и КМ ПЖ в 1,6 раза (до 49±4).
Доксазозин в дозе 1 мг/кг/сут в желудок в течение 18 сут по сравнению с контролем значимо не изменял ни массу ПЖ (уменьшалась лишь до 238±18 мг), ни КМ ПЖ (практически не уменьшался). Кроме того, у животных наблюдались такие побочные эффекты, как диарея и вялость (обусловленная, по всей вероятности, снижением системного артериального давления).
Финастерид в дозе 10 мг/кг/сут в желудок в течение 18 сут по сравнению с контролем значимо (р <0,05) уменьшал массу ПЖ в 1,4 раза (до 199+14 мг) и КМ ПЖв 1,2 раза (до 65+5).
Гомеопатическое средство простатин по 5 гранул/сут в желудок в течение 18 сут по сравнению с контролем практически не влияло ни на массу ПЖ (незначительное уменьшение с 281 ±20 до 269+21 мг), ни на КМ ПЖ (увеличение с 80±5 до 83±7).
По выраженности действия в отношении уменьшения массы ПЖ композиция пептидов (600 мкг/кг/сут) значимо (р <0,01) превосходил доксазозин в 1,5 раза и финастерид в 1,3 раза. По выраженности влияния на КМ ПЖ композиция пептидов (600 мкг/кг/сут) также значимо (р <0,05) превосходил доксазозин и финастерид в 1,6 и 1,3 раза соответственно.
Таким образом, тестостерона пропионат вызывает у крыс увеличение массы ПЖ и КМ ПЖ по сравнению с интактными животными (развитие ДГПЖ). Композиция пептидов (600 мкг/кг/сут) и финастерид (10 мг/кг/сут) по сравнению с контролем уменьшают массу ПЖ и КМ ПЖ, при этом композиция
пептидов по выраженности действия превосходит препараты доксазозин и финастерид.
Результаты морфологического подтверждения влияния фармацевтической композиции согласно изобретению на предстательную железу крыс на модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной тестостерона пропионатом, представлены в табл. 4-8.
Материал подвергали стандартной гистологической обработке в соответствии с Примером 2. Срезы окрашивали по ван Гизону, а также гематоксилином и эозином. Кроме морфологического описания препаратов, для объективной оценки динамики морфологических изменений был проведен количественный учет важнейших морфологических параметров ПЖ (табл. 2). Индексы эпителий/строма и эпителий/проток позволяют оценить функциональное состояние простаты (фиброз, гиперплазия эпителия, застой секрета в ацинусах).
Морфометрическое исследование проводили на микроскопе Leica DM2500 с цифровой фотокамерой. На оцифрованных изображениях оценивали структурные изменения тканей ПЖ. Объемную долю ацинусов, стромы и эпителия определяли методом точечного счета. Поскольку процентная доля коллагеновых волокон была невелика (примерно 1-2%), для более точной оценки его количества применяли балльную оценку (табл. 3).
Тонкие ориентированные пучки
Плотные прослойки
Участки фиброза
В результате сравнения групп по различным параметрам с помощью рангового дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса, теста Дана и рангового теста Уилкоксона-Манна-Уитни были получены данные о межгрупповых различиях при заданном уровне значимости р < 0,05.
ПЖ интактных животных характеризуется однорядным кубическим или высоким цилиндрическим эпителием. Ацинусы частично заполнены светлым секретом и иногда слущенным эпителием. Строма умеренно рыхлая, иногда отечная. Коллагеновые волокна организованы в тонкие пучки. Патологических изменений эпителия и стромы не выявлено (рис. 1).
Практически по всем исследованным морфометрическим параметрам (за
исключением содержания коллагена) ПЖ контрольных животных, получавших
тестостерона пропионат (10 мг/кг/сут п/к) в течение 21 суток, существенно
отличалась от интактных (табл. 4).
соотношение эпителий/строма. Наблюдается также очаговый фиброз стромы, который не мог быть учтен из-за незначительного размера очажков.
Таким образом, контрольные животные демонстрируют признаки ДГПЖ (гиперандрогенемии), к которым прежде всего относится гиперплазия эпителия (рис. 2).
В группе животных, получавших фармацевтическую композицию согласно
изобретению в дозе 150 мкг/кг/сут в/м в течение 18 сут, доля эпителия была
достоверно меньше, чем в контроле, и не отличалась от доли у интактных
животных (табл. 5).
Таблица 5. Изменение под влиянием композиции согласно изобретению в дозе 50 и 150 мкг/кг/сут (внутримышечно в течение 18 суток) морфометрических параметров предстательной железы крыс с ДГПЖ
Морфологически эпителий не демонстрирует признаков патологии и его интенсивное слущивание может указывать на процессы его нормализации после гиперплазии, вызванной гиперандрогенемией. Доля просвета ацинусов значимо больше, чем в контроле, что указывает на расширение ацинусов. Доля стромы и содержание коллагена в этой группе достоверно меньше, чем у интактных и контрольных животных, хотя в некоторых случаях отмечены признаки ее воспаления (расширенные полнокровные кровеносные сосуды, отек стромы), но воспалительный инфильтрат отсутствует. Из-за компактности стромы соотношение эпителий/строма в этой группе достоверно больше, чем в данных группах. Достоверно уменьшенный индекс эпителий/просвет ацинусов указывает на расширение ацинусов (рис. 3).
Таким образом, в группе животных, получавших фармацевтическую композицию согласно изобретению (150 мкг/кг/сут), на фоне гиперандрогенемии отмечена нормализация строения эпителия, отсутствие фиброза и расширение просвета ацинусов с возможным застоем секрета.
В группе животных, получавших фармацевтическую композицию согласно изобретению в дозе 600 мкг/кг/сут в/м в течение 18 сут, доля эпителия была достоверно меньше, чем в контроле, и не отличалась от доли у интактных животных (табл. 6).
Композиция
(при соотношени и пептидов 2:5:3) (600 мкг/кг/сут)
22,22 ±0,51*
53,05 ±0,51°*
24,85 ±0,21°*
93,01 ±0,15
42,85 ± 0,83°*
Контроль
29,66± 1,11°
37,70 ± 1,18°
32,64 ± 1,14°
90,88 ±0,89°
78,67 ± 1,03°
Интактные
22,36 ± 1,01
40,06± 1,19
37,58 ± 1,18
59,5 ± 1,54
55,82 ± 1,56
Морфологически эпителий ПЖ в этой группе не отличается от нормального, а некоторые ацинусы по строению такие же, как в интактном органе. Внешний вид секрета также не отличается от нормального. То, что доля просвета ацинусов значимо больше, чем в упомянутых группах, объясняется гетерогенностью их размеров, возможно, отражающих еще не завершенный процесс нормализации строения органа. Об этом свидетельствуют и массы слущенного эпителия в просветах ацинусов на фоне его морфологии, не отличающейся от интактной. Доля стромы в этой группе достоверно меньше, чем у интактных и контрольных животных. Коллагеновая сеть развита меньше, чем в контроле. Соотношение эпителий/строма и эпителий/просвет ацинусов в этой группе достоверно больше, чем у интактных и контрольных животных, а эпителий/просвет ацинуса меньше, что указывает на расширение просвета ацинусов (рис. 4).
В целом морфология ПЖ в этой группе ближе всего к интактной, однако из-за больших различий в размерах ацинусов статистические показатели различаются с этой группой.
В группе животных, получавших доксазозин в дозе 1 мг/кг/сут в желудок в
течение 18 сут, суммарный показатель доли эпителия значимо не отличался от
интактной нормы (табл. 7).
В группе доксазозина доля эпителия достоверно меньше, чем в контроле, и не отличается от доли у интактных животных, а доля просвета ацинусов статистически значимо превышает показатели в упомянутых группах, что указывает на расширение ацинусов. Доля стромы в группе доксазозина напротив, достоверно меньше, чем у интактных и контрольных животных, хотя содержание коллагена во всех трех группах значимо не различается, причем в строме отсутствуют признаки отека и воспаления. Соотношение эпителий/строма и эпителий/просвет ацинусов в этой группе достоверно больше, чем у интактных животных, и меньше, чем у контрольных. Видимо, это связано с фармакологической активностью доксазозина - селективной блокадой альфаг адренорецепторов подтипа 1А (70% всех подтипов, представленных в ПЖ) (Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система), Выпуск XII. Под редакцией А.Г.Чучалина, Ю.Б.Белоусова, В.В.Яснецова-М.: "Эхо", 2011, стр. 956; Cohen, Parsons, Combination pharmacological therapies for the management of benign prostatic hyperplasia, Drugs Aging, 2012, Vol. 29, No 4, p. 275-284; Goldfischer E., Kowalczyk J. J., Clark W.R. Hemodynamic Effects of Once-daily Tadalafil in Men With Signs and Symptoms of Benign Prostatic Hyperplasia on Concomitant a(l)-Adrenergic Antagonist Therapy: Results of a Multicenter Randomized, Double-Blind, Placebo-controlled Trial // Urology, 2012, Vol. 79, No 4, p. 875-882), что подавляет гормональные влияния на ПЖ и замедляет ее рост (рис. 5).
Тем не менее для морфологической картины ПЖ после воздействия доксазозина характерна гетерогенность: большие участки ткани с признаками ДГПЖ чередуются с расширенными ацинусами, выстланными эпителием со строением, не отличающимся от нормального. Положительным влиянием доксазозина можно объяснить отсутствие отека и воспаления в строме.
В группе животных, получавших финастерид в дозе 10 мг/кг/сут в желудок в течение 18 сут, морфометрические параметры были более сходны с интактными животными, чем в контрольной группе (табл. 8).
Так, объемная доля эпителия значимо меньше, чем в контроле, и значимо не отличается от интактной, что указывает на снижение его пролиферации под действием финастерида на фоне гиперандрогенемии. Это объясняется тем, что финастерид ингибирует фермент 5 альфа-редуктазу преимущественно 2-го типа и тем самым блокирует действие андрогенов на ПЖ (Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система), Выпуск XII. Под редакцией А.Г.Чучалина, Ю.Б.Белоусова, В.В.Яснецова - М.: "Эхо", 2011, стр. 956; Cohen, Parsons. Combination pharmacological therapies for the management of benign prostatic hyperplasia. Drugs Aging, 2012, Vol. 29, No 4, p. 275-284). Однако морфология эпителия отличается от нормальной (пикноз и лизис многих эпителиоцитов, их вакуолизация, возможно, являющаяся признаком апоптоза), что указывает на его гипоплазию и, по-видимому, атрофию. На изменение функции эпителия указывает характер секрета. Хотя доля просвета ацинусов достоверно не отличается от контроля и интактной, обильная вакуолизаия и измененная окраска секрета косвенно свидетельствует об увеличении его вязкости и застое в ацинусах. Отношения эпителий/строма и эпителий/просвет ацинусов в этой значимо меньше, чем в контроле и у интактных животных. Доля стромы значимо превышает контрольную. Поскольку содержание коллагена в строме достоверно меньше, чем в контроле, увеличение доли стромы можно отнести за счет отека интерстициальной ткани (рис. 6).
Морфологические изменения по сравнению с контролем наблюдали не во всех ацинусах.
Таким образом, морфологическая картина ПЖ после воздействия финастерида представляет собой как бы мозаику из участков с признаками ДГПЖ и отечной ткани с атрофичным эпителием и ацинусами, заполненными секретом с повышенной вязкостью.
Было обнаружено, что простатин благоприятно влияет на морфологию ПЖ у 70% (7 из 10) животных. При этом объемная доля эпителия не отличалась от интактной и была достоверно меньше, чем в контроле (табл. 9). По строению эпителий был близок к нормальному, хотя ацинусы с нормальным и разросшимся эпителием нередко располагались мозаично. Доля просвета ацинусов резко превышала таковую в интактной и контрольной группах, что указывает на расширение протоков, имелись морфологически признаки повышенной вязкости секрета.
Доля стромы меньше, чем в контроле и в интактной группе. Строма рыхлая, отечная, иногда содержит небольшое количество инфильтрата. Содержание коллагена также ниже, чем в указанных группах. Вследствие этого соотношение эпителий/строма значимо больше, а индекс эпителий/просвет ацинусов -достоверно меньше, чем в контрольной и интактной группах (рис. 7).
Таким образом, для простаты группы животных с ДГПЖ, получавших простатин, характерна частичная нормализация строения эпителия наряду с признаками застоя секрета и воспалительных явлений в строме.
Суммируя полученные результаты, следует отметить, что в контрольной группе эпителий был гиперплазирован, что характерно для ДГПЖ. Во всех исследованных опытных группах доля эпителия была меньше, чем в
контрольной группе, достоверно не отличаясь от доли в группе интактных животных (табл. 10).
Морфология эпителия во всех этих группах была различной. Хуже всего состояние эпителия было в группе финастерида, где воздействие этого препарата вызвало повреждение и гибель эпителиоцитов. В группах простатина и доксазозина ацинусы, выстланные эпителием с нормальной морфологией, чередовались с таковыми, где эпителий был гиперплазирован. В группах композиция согласно изобретению (150 мкг/кг/сут и 600 мкг/кг/сут) строение эпителия не отличалось от нормального.
Во всех группах, кроме финастерида, объемная доля просвета ацинусов значимо больше, чем у интактных и контрольных животных, и составляла 5159%, что указывает на расширение просвета ацинусов и возможный застой секрета (табл. 10). Однако в группах простатина, доксазозина и композиции согласно изобретению (150 мкг/кг/сут) обнаружены морфологические признаки увеличенной вязкости секрета разной степени выраженности (вакуолизация, изменение цвета), тогда как в группе композиции согласно изобретению (600 мкг/кг/сут) даже расширенные ацинусы содержали секрет, морфологически сходный с таковым у интактных животных, что говорит о возможном отсутствии его застоя.
Во всех группах, кроме финастерида, объемная доля стромы была значимо больше, чем у интактных и контрольных животных, и составляла 22-25% (табл. 10). Тем не менее морфологическая картина стромы заметно различалась в различных группах. В группе финастерида строма была сильно отечной, в группе простатина отек и признаки воспаления были меньше. В группе доксазозина воспление и отек полностью отсутствовали, но наблюдались участки фиброза. В группе композиции согласно изобретению (150 мкг/кг/сут) фиброз отсутствовал, но налицо были признаки отека стромы. В группе композиции согласно изобретению (600 мкг/кг/сут) строма местами была несколько отечной, и в некоторых участках присутствовал в небольших количествах воспалительный инфильтрат.
Количество коллагена достоверно меньше, чем в контроле, в группах простатина, финастерида, композиции согласно изобретению (150 мкг/кг/сут и 600 мкг/кг/сут) (но не доксазозина), что указывает на уменьшение или отсутствие фиброза после воздействия этих препаратов.
Таким образом, по совокупности морфологических и морфометрических показателей, восстановление структуры и функции ПЖ происходит под влиянием композиции согласно изобретению в дозе предпочтительно 150 мкг/кг/сут и наиболее предпочтительно в дозе 600 мкг/кг/сут.
Простатин благоприятно влияет на морфологию ПЖ у 70%, но его действие распространяется не на все ацинусы, что не может не сказаться на функции органа.
Доксазозин также частично нормализовал строение эпителия, в строме отсутствовали признаки воспаления, но после его применения были отмечены очаги фиброза.
Финастерид, устраняя гиперплазию эпителия ПЖ, оказывал на него повреждающее действие, что заметно ухудшало функционирование органа.
Таким образом, у крыс на модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ), вызванной тестостерона пропионатом (в дозе 10 мг/кг подкожно в течение 21 суток), композиция в дозе 50 мкг/кг/сут, 150 мкг/кг/сут и 600 мкг/кг/сут внутримышечно в течение 18 суток, уменьшает массу предстательной железы (ПЖ) и коэффициент массы ПЖ. При этом композиция согласно изобретению по выраженности действия превосходит альфа]-адреноблокатор доксазозин и финастерид. Известное гомеопатическое средство простатин (по 5 гранул/сут в желудок) практически не влияет ни на массу ПЖ, ни на коэффициент массы ПЖ.
Эффективность композиции согласно изобретению у крыс на названной модели ДГПЖ также подтверждается морфологическими исследованиями: композиция (50 мкг/кг/сут, 150 мкг/кг/сут и 600 мкг/кг/сут) по совокупности морфологических и морфометрических показателей дает наилучшее восстановление структуры и функции по сравнению с известными препаратами. Так, доксазозин частично нормализует строение эпителия ПЖ, в строме отсутствуют признаки воспаления, но после его применения отмечаются очаги фиброза. Финастерид, устраняя гиперплазию эпителия, оказывает на него повреждающее действие, что заметно ухудшает функционирование органа. Простатин благоприятно влияет на морфологию ПЖ у 70% крыс, но его действие распространяется не на все ацинусы.
Композиция согласно изобретению в дозе 6 мг/кг (однократно внутрибрюшинно) не вызывает в течение 14 сут существенных токсических реакций у мышей.
Композиция, в соответствии с настоящим изобретением, может быть выполнена в виде таблеток, капсул с использованием фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и приемов, традиционных для данной области техники, а также может быть выполнено в виде раствора для инъекций. Кроме того, средство может быть выполнено в виде капель или раствора для приема внутрь, или в виде спрея назального или капель назальных, аэрозоля подъязычного или орального, или в виде порошка, или в виде лиофилизата для приготовления раствора. Перечисленые формы фармацевтической композиции получают известными методами. Композицию согласно изобретению вводят перорально или парентерально (например, внутривенно, внутримышечно, подкожно). Для получения фармацевтической композиции согласно изобретению используют любые фармацевтически приемлемые носители или растворители. Для перорального введения фармацевтическая композиция может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и тому подобного. Таблетки, содержащие различные наполнители, например, цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция или любые другие фармацевтически приемлемые наполнители, применяются вместе с различными дезинтеграторами, например, крахмалом, предпочтительно картофельным крахмалом или тапиокой, сложными силикатами или любыми другими фармацевтически приемлемыми дезинтеграторами, вместе со связывающими веществами, например, поливинилпирролидоном, сахарозой, желатином, аравийской камедью любыми другими фармацевтически приемлемыми связывающими веществами. Кроме того, часто применяются скользящие вещества, например, стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк для таблетирования или любые другие фармацевтически приемлемые вещества. Композиции согласно изобретению также применяются в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах; предпочтительные в этом случае материалы включают, например, лактозу или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высоким молекулярным весом.
Если для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, соединения этого изобретения могут сочетаться с различными подслащивающими средствами, улучшающими вкус и запах, подкрашивающими веществами, эмульгирующими веществами и/или суспендирующими средствами, а также растворителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различные подобные их комбинации. Для парентерального введения могут использоваться растворы в кунжутном или арахисовом масле или в водном пропиленгликоле, так же как и стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. Такие водные растворы могут быть соответственно буферными, если необходимо, и водный растворитель сначала изотонируют с помощью достаточного количества раствора соли или глюкозы. Эти водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В этой связи используемые водные среды легко можно получить с помощью стандартных методик, хорошо известных специалистам.
Способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы включает назначение пациенту фармацевтической композиции, содержащей пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в терапевтически эффективных количествах.
В предпочтительном воплощении способа назначают композицию, содержащую пептиды H-Ala-Asp-Glu-OH, H-Lys-Asp-Glu-OH и H-Asp-Glu-Gly-OH в соотношении (1-8):(1-8):(1-8).
Режим и дозы введения фармацевтической композиции согласно изобретению, а также длительность применения зависят от стадии заболевания и состояния пациента.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1.
Влияние новой смеси пептидов на массу предстательной железы крыс на модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной тестостерона пропионатом изучалось на на 98 белых нелинейных крысах-самцах (масса 220-280 г на начало эксперимента), а также на 10 белых нелинейных
мышах-самцах массой 22-26 г (в отдельной серии экспериментов у этих животных оценивали острую токсичность).
У подопытных крыс моделировали ДГПЖ в течение 21 суток введением тестостерона пропионата (ОАО "Дальхимфарм", Россия) в дозе 10 мг/кг подкожно (п/к); эта модель рекомендована как отечественными, так и зарубежными исследователями (Фролов Н.Ю., Бурякина А.В., Мельникова Т.И. и др. "Методические подходы к экспериментальному изучению фармакологических веществ для профилактики и лечения заболеваний предстательной железы". Экспер. и клин. Фармакол. 2010, 73, № 6, стр. 41-44; Bisson J.F., Hidalgo S., Rozan P., Messaoudi M. Therapeutic effect of ACTICOA powder, a cocoa polyphenolic extract, on experimentally induced prostate hyperplasia in Wistar-Unilever rats. J. Med. Food., 2007, Vol. 10, No 4, p. 628-635; Liu H.P., Chen G.L., Liu P., Xu X.P. "Amlodipine alone or combined with terazosin improves lower urinary tract disorder in rat models of benign prostatic hyperplasia or detrusor instability: focus on detrusor overactivity". BJU Int., 2009, Vol. 104, No 11, p. 17521757).
В подопытных группах животным вводили внутримышечно (в/м) смесь пептидов в дозах 50, 150 и 600 мкг/кг/сут, альфа]-адреноблокатор доксазозин (зоксон, Zentiva a.s., Чешская Республика/) в дозе 1 мг/кг/сут и ингибитор 5 альфа-редуктазы 2-го типа финастерид (проскар, Merck Sharp & Dohme, Нидерланды) в дозе 10 мг/кг/сут в желудок (с помощью интрагастрального зонда) в течение 18 сут (с 4-х суток), а также известное гомеопатическое средство простатин (ООО "Гомеофарма", Россия) по 5 гранул в желудок в течение 18 сут. В контрольной группе крысы получали в/м только изотонический раствор натрия хлорида (NaCl) в эквиобъемном количестве.
Забор предстательной железы (ПЖ) для морфологического (светооптического) исследования производили как до, так и после воспроизведения ДГПЖ (на 22-е и 23-и сутки). Крыс декапитировали под общей анестезией эфиром, после чего извлекали предстательную железу и
взвешивали ее (аналитические весы "Сартогосм ЛВ 120-А", Россия, погрешность - 0,5 мг).
Пример 2. Морфологическое подтверждение влияния композиции согласно изобретению на предстательную железу крыс на модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной тестостерона пропионатом
Материал подвергали стандартной гистологической обработке. Для светооптического исследования кусочки ПЖ фиксировали 10% нейтральным формалином, затем осуществляли приготовление гистологических срезов. Срезы окрашивали по ван Гизону, а также гематоксилином и эозином. Кроме морфологического описания микропрепаратов, для объективной оценки динамики морфологических изменений был проведен количественный учет важнейших морфологических параметров ПЖ. Морфометрическое исследование проводили на микроскопе Leica DM2500 с цифровой фотокамерой. На оцифрованных изображениях оценивали структурные изменения тканей ПЖ.
Пример 3. Определение острой токсичности композиции согласно изобретению
В отдельной серии экспериментов оценивали острую токсичность у 10 белых нелинейных мышей-самцов массой 22-26 г. Композицию согласно изобретению вводили в/б в дозе 6 мг/кг (эта доза в 10 раз превышает максимально эффективную). Было обнаружено, что в течение 14 сут после однократного в/б введения композиция согласноизобретению не вызывает ни гибели животных, ни существенных токсических реакций.
Определение острой токсичности композиции пептидов проводили на белых нелинейных мышах-самцах (в течение 14 сут) с регистрацией их гибели (через 14 сут после однократного внутрибрюшинного /в/б/ введения НСП №5).
Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием программы StatPlus 2009 Professional с применением параметрических и непараметрических критериев.
Таким образом, результаты исследований свидетельствуют, что фармацевтическая композиция, предлагаемая в соответствии с настоящим изобретением, обладает выраженным эффектом по отношению к доброкачественной гиперплазии предстательной железы, который значительно превосходит известные лекарственные средства, такие как ai-адреноблокаторы, ингибиторы 5 ос-редуктазы и гомеопатическое средство простатин, и не имеет побочных эффектов.
Формула изобретения.
1. Фармацевтическая композиция, эффективная относительно доброкачественной гиперплазии предстательной железы, отличающаяся тем, что в качестве активных компонентов содержит пептиды Ala-Asp-Glu, Lys-Asp-Glu и Asp-Glu-Gly в терапевтически эффективных количествах.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит пептиды Lys-Asp-Glu, Ala-Asp-Glu и Asp- Glu-Gly в массовом отношении (1-8):(1-8):(1-8).
3. Способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, отличающийся тем, что назначают пациенту фармацевтическую композицию по п.1 в эффективном количестве.
4. Применение фармацевтической композиции по п. 1 для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы
5. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что выполнена в виде таблеток, капсул, спрея назального или капель назальных, аэрозоля подъязычного или орального, капель для приема внутрь, порошка, или в виде раствора для инъекций, или в виде лиофилизата для приготовления раствора.
Рис. 2. Светооптические изменения в предстательной железе крыс контрольной группы, получавших тестостерона пропионата в дозе 10 мг/кг подкожно в течение 21 суток.
Рис. 3. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших композицию в дозе 150 мкг/кг/сут внутримышечно в течение 18 суток.
Рис. 4. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших композицию в дозе 600 мкг/кг/сут внутримышечно в течение 18 суток.
Рис. 5. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших доксазозин в дозе 1 мг/кг/сут в желудок в течение 18 суток.
Рис. 6. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших финастерид в дозе 10 мг/кг/сут в желудок в течение 18 суток.
Рис. 7. Светооптические изменения в предстательной железе крыс с ДГПЖ, получавших простатин по 5 гранул/сут в желудок в течение 18 суток.
ОТЧЕТ О ПАТЕНТНОМ ПОИСКЕ
(статья 15(3) ЕАПК и правило 42
Номер евразийской заявки: 201201417
Дата подачи: 15 ноября 2012 (15.11.2012) Дата испрашиваемого приоритета:
Название изобретения: Фармацевтическая композиция для лечения гиперплазии предстательной железы
Заявитель: 3AMEPTOH ХОЛДИНГС ЛИМИТЕД
I I Некоторые пункты формулы не подлежат поиску (см. раздел I дополнительного листа) I | Единство изобретения не соблюдено (см. раздел II дополнительного листа)
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ:
Л61К 38/04 (2006.01) А61К 38/06 (2006.01) А61Р13/08 (2006.01)
Согласно Международной патентной классификации (МПК) или национальной классификации и МПК
Б. ОБЛАСТЬ ПОИСКА:
Минимум просмотренной документации (система классификации и индексы МПК)
А61К 38/04, 38/06, А61Р 13/08
Другая проверенная документация в той мере, в какой она включена в область поиска:
В. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
А А А А
С. X. АЛЬ-ШУКРИ и др. Результаты длительного лечения простатиленом больных доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Простатилен в урологической практике, Санкт-Петербург, 2010, с. 27-31
В. H. КОМАРЕВЦЕВ и др. Витапрост в лечении пациентов с хроническим простатитом и ранними стадиями доброкачественной гиперплазии предстательной железы.Украшський журнал кшшчтм та лабораторно1 медицини,2008, том 3, № 2, с.27-30
RU 2002128721 А (МИКРОМЕТ АГ) 27.04.2004
RU 2173191 С1 (САНАМЯНЦ ВЛАДИМИР АРЦВИКОВИЧ) 10.09.2001 US 2006/0105949 Al (SEEMA GARDE et al.) 18.05.2006 UA 62941 С2(ЦЕНТАРИС АГ) 15.01.2004
1-5
1-5
1-5 1-5 1-5 1-5
более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания изобретения "X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень, взятый в отдельности
"Y" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с другими документами той же категории
" &" документ, являющийся патентом-аналогом
"L" документ, приведенный в других целях
Дата действительного завершения патентного поиска:
23 января 2013 (23.01.2013)
Наименование и адрес Международного поискового органа: Федеральный институт промышленной собственности
РФ, 123995,Москва, Г-59, ГСП-5, Бережковская наб., д. 30-1.Факс: (499) 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
Уполномоченное лицо
Телефон № (499) 240-25-91
О.Шанова
(19)
(19)
(19)